KR101085540B1 - Cosmetic composition containing IgY from egg yolk for improvement of acene - Google Patents
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Abstract
본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 IgY, 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus)에 대한 IgY, 스테필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대한 IgY, 스테필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)에 대한 IgY, 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus)에 대한 IgY 및 악티노마이시즈 이스라엘이(Actinomyces israelii)에 대한 IgY을 함유하는 난황; 연교 추출물, 삼백초 추출물 또는 상백피 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제1차 추출물; 아그리모니 추출물 또는 관중 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제2차 추출물; 민들레 추출물, 자소엽 추출물, 쌀 추출물 또는 대나무 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제3차 추출물; 및 정제수;를 혼합한 수용성 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 여드름을 유발시키는 다양한 원인균에 대한 특이적인 항체를 지닌 난황을 함유함으로써 여드름을 효과적으로 예방 및 개선할 수 있을 뿐만 아니라, 천연재료를 사용함으로써 소비자들의 거부감을 감소시킬 수 있다.IgY for Propionibacterium acnes , IgY for Propionibacterium propionicus , IgY for Propionibacterium propionicus , Staphylococcus aureus , Staphylococcus aureus Egg yolk containing IgY for Staphylococcus epidermidis , IgY for Micrococcus luteus and IgY for Actinomyces israelii ; At least one primary extract selected from pontoon extract, triticale extract or lettuce extract; At least one secondary extract selected from agrimoni extract or spectral extract; Any one or more tertiary extracts selected from dandelion extract, cotyledon extract, rice extract or bamboo extract; And it relates to a cosmetic composition for improving acne characterized in that it comprises a water-soluble mixture of mixed water; by containing egg yolk with a specific antibody to a variety of causative agents causing acne can effectively prevent and improve acne In addition, the use of natural materials can reduce the consumer's rejection.
마이크로코커스 루테우스, 스테필로코커스 아우레우스, 스테필로코커스 에피더미디스, 악티노마이시즈 이스라엘이, 여드름, 염증, 개선, 프로피오니박테리움 아크네스, 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스, 항체, IgYMicrococcus Luteus, Stephylococcus aureus, Staphylococcus epidermis, Actinomysis Israeli, Acne, Inflammation, Improvement, Propionibacterium acnes, Propionibacterium propionicus, Antibodies, IgY
Description
본 발명은 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 여드름 유발균에 대한 특이적인 항체를 함유하는 난황을 포함하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for improving acne, and more particularly to a cosmetic composition for improving acne comprising an egg yolk containing a specific antibody against the acne-inducing bacteria.
여드름의 의학적 명칭은 심상성 좌창으로, 모공에서 피지의 생산이 증가되고 피부상피세포가 비정상적으로 각화되어 모공의 개구부를 막으며 이곳에 여드름 원인 세균이 증식하여 염증을 발생시킴으로써 유발된다. The medical name of acne is vulgar acne, which increases the production of sebum in the pores, abnormally keratinizes the skin epithelial cells and blocks the openings of the pores, and is caused by the growth of acne-causing bacteria and inflammation.
여드름은 특히 2차 성성숙이 있는 청소년기에 주로 발병하는 피부질환으로서 11살에서 30세 사이에 약 80%가 발병하고, 30대 이후에서도 약 6%의 환자가 있는 것으로 보고되어 있으며, 최근 들어 스트레스에 의한 여드름으로 20대 이후 발병하는 경우도 있다. Acne is a skin disease that occurs mainly in adolescents with secondary sexual maturity, and it is reported that about 80% occur between 11 and 30 years of age, and about 6% of patients are in their 30s and later. Acne may occur after 20s.
여드름의 발생 원인을 크게 3가지로 나누어 볼 수 있는데, 첫째는 피지의 과 잉생산이다. 성성숙기에 증가된 호르몬에 의해서 초기여드름은 유발되는데, 특히 테스토스테론이 가장 주요한 호르몬으로 인지되며, 호르몬은 피지선을 자극하여 피지의 생성을 증가하게 만든다. 피지는 초기분비시는 트리글리세롤로 구성되나 점차 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 세포외효소(Extracellular enzyme) 중 하나인 리파아제(lipase)에 의해서 유리지방산과 글리세롤로 분해된다. 피부의 유리지방산 중 이 세균에 의한 것이 95%를 차지하고 미세면포의 형성과 염증반응을 유도한다. 프로피오니박테리움 아크네스의 세포외 효소에는 리파아제(lipase), 프로테아제(protease), 하이아루로니다제(hyaluronidase) 등이 대표적인 것으로 이것은 여드름의 진행에 있어서 중요한 영향을 미친다. The causes of acne can be largely divided into three, the first is the excessive production of sebum. Early acne is triggered by increased hormones in sexual maturation, especially testosterone is the most important hormone, which stimulates sebaceous glands to increase sebum production. Sebum is composed of triglycerols at the time of initial secretion, but gradually the Propionibacterium It is broken down into free fatty acid and glycerol by lipase, one of the extracellular enzymes of acnes ). 95% of the free fatty acids in the skin are caused by this bacterium and induce microvesicle formation and inflammatory reactions. The extracellular enzymes of propionibacterium acnes include lipase, protease, hyaluronidase, etc., which have an important effect on the progression of acne.
둘째는 모공의 폐쇄이다. 프로피오니박테리움 아크네스의 작용으로 생성되는 유리지방산과 호르몬의 영향을 받은 피부의 과각화와 피지의 과잉분비로 인해 누두부가 폐쇄되는데, 이로 인해서 혐기성세균인 프로피오니박테리움 아크네스의 증식이 용이하게 된다. Second is the closure of the pores. The nipple is closed due to the hyperkeratosis of the skin affected by the free fatty acids and hormones produced by the action of propionibacterium acnes and the excessive secretion of sebum, thereby facilitating the propagation of the anaerobic bacterium propionibacterium acnes. do.
셋째는 혐기성 세균인 프로피오니박테리움 아크네스의 수의 증가이다. 피지성분이 하얀덩어리 또는 멜라닌의 접착된 흑색 덩어리로 축적되면 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 증가하게 된다. Third is the increase in the number of anaerobic bacteria, Propionibacterium acnes. If sebum accumulates as a white mass or as a black mass adhered to melanin, Propionibacterium acnes ) is increased.
상기에서 설명한 3가지가 여드름을 유발하는 가장 큰 요인이지만, 이외에도 스트레스로 인한 신경단백체의 작용, 유전적 요인, 화장품, 과각화를 유발하는 열과 습기, 자외선 등의 요인도 여드름 발생과 관련이 깊다. Although the three factors described above are the biggest causes of acne, in addition to the effects of stress caused by neuroproteins, genetic factors, cosmetics, hyperkeratosis, heat and moisture, ultraviolet rays and other factors are also associated with acne.
한편, 여드름을 치료하기 위해 항생제 및 스테로이드를 사용하고 있는데, 이들은 초기치료시에는 치료효과가 뛰어나지만, 오랜 사용시 내성이 생기고 당뇨, 고혈압, 소화성궤양 또는 면역기능 저하등 부작용이 발생하는 문제점이 있다. On the other hand, antibiotics and steroids are used to treat acne, but they have excellent therapeutic effects during the initial treatment, but have problems such as resistance to long-term use and side effects such as diabetes, hypertension, peptic ulcer or lowered immune function.
이에 본 발명은 천연성분으로 구성되어 사람들에게 거부감이 없고, 항생제 내성 및 부작용이 발생하지 않으며 피부가 호흡할 수 있고 모공을 막지 않아 노폐물이 쉽게 빠져나올 수 있는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다. Accordingly, the present invention is composed of natural ingredients, there is no objection to people, antibiotic resistance and side effects do not occur, the skin can breathe and do not block pores, so that the waste can easily come out cosmetic composition for improving acne There is this.
상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 IgY, 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus)에 대한 IgY, 스테필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus)에 대한 IgY, 스테필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)에 대한 IgY, 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus)에 대한 IgY 및 악티노마이시즈 이스라엘이(Actinomyces israelii)에 대한 IgY을 함유하는 난황; 연교 추출물, 삼백초 추출물 또는 상백피 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제1차 추출물; 아그리모니 추출물 또는 관중 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제2차 추출물; 민들레 추출물, 자소엽 추출물, 쌀 추출물 또는 대나무 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제3차 추출물 ; 및 정제수; 를 혼합한 수용성 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention relates to IgY for Propionibacterium acnes , IgY for Propionibacterium propionicus , and Staphylococcus aureus . Egg yolk containing IgY, IgY for Staphylococcus epidermidis , IgY for Micrococcus luteus and IgY for Actinomyces israelii ; At least one primary extract selected from pontoon extract, triticale extract or lettuce extract; At least one secondary extract selected from agrimoni extract or spectral extract; Any one or more tertiary extracts selected from dandelion extract, self-leaving extract, rice extract or bamboo extract; And purified water; It provides a cosmetic composition for improving acne comprising a water-soluble mixture of the mixture.
이하 본 발명의 과제 해결 수단에 대해 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter will be described in detail with respect to the problem solving means of the present invention.
본 발명은 효과적인 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하기 위해 반드시 여드름 발생 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes), 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus), 스테필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스테필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus) 및 악티노마이시즈 이스라엘이(Actinomyces israelii)에 대한 IgY를 함유하는 난황을 포함한다.The present invention is necessarily propionibacterium acnes ( propionibacterium acnes ), propionibacterium propionicus ( propionibacterium propionicus ), Staphylococcus aureus to provide an effective acne improvement cosmetic composition ), Yolk containing IgY against Staphylococcus epidermidis , Micrococcus luteus and Actinomyces israelii .
난황항체는 조류의 면역체계를 이용한 수동면역의 한 형태로, 조류 이하의 난생동물의 경우는 어미 닭이 능동면역으로 획득한 면역항체는 난황 중으로 이행되어 자손에게 면역능이 전해진다. 난황 중의 항체 중 가장 많은 비율을 차지하는 것은 혈중의 IgG와 유사한 IgY이다. 이는 분자량이 약 200∼220kDa으로 포유류의 IgG보다 크며 포유류의 항체보다 장점을 가지고 있기 때문에 이용범위가 넓다. Egg yolk antibodies are a form of passive immunization using the bird's immune system. In the case of sub-avian oval animals, the immune antibodies obtained by active chickens from the mother chicken are transferred to egg yolk and the immune function is transmitted to the offspring. The largest proportion of antibodies in egg yolk is IgY, similar to IgG in the blood. Its molecular weight is about 200-220kDa, which is larger than mammalian IgG and has advantages over mammalian antibodies.
상기 여드름균에 대한 항체 IgY를 함유하는 난황을 생산하기 위해 본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes), 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus), 스테필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 스테필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus) 및 악티노마이시즈 에 이스라엘이(Actinomyces israelii)을 배양하여 백신을 제조한 후, 백신을 일정 기간 간격으로 산란계에 3차 접종까지 실시하였다. 접종 후, 항체역가를 측정한 결과, 3차 접종 후인 4주부터 가장 높은 역가를 나타내었고, 항체역가가 감소하기 시작한 10주에 추가 접종을 실시한 후, 5~14주까지의 항체역가가 높은 계란의 난황만을 수거하여 수득하였다. The present invention to produce egg yolk containing the antibody IgY against the acne bacteria Propionibacterium acnes ), Propionibacterium Propionibacterium propionicus , Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Micrococcus luteus luteus ) and Actinomyces israelii incubated in actinomyces , and then the vaccines were administered to the laying hens at three intervals at regular intervals. After inoculation, the antibody titer was the highest titer from 4 weeks after the 3rd inoculation, and after the inoculation at 10 weeks when the antibody titer began to decrease, the eggs with high antibody titers up to 5-14 weeks Only egg yolk was collected and obtained.
한편, 본 발명은 연교 추출물, 삼백초 추출물 또는 상백피 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제1차 추출물; 아그리모니 추출물 또는 관중 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제2차 추출물; 민들레 추출물, 자소엽 추출물, 쌀 추출물 또는 대나무 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제3차 추출물; 및 정제수;를 혼합한 수용성 혼합물을 반드시 포함하는데, 상기와 같은 추출물들은 여드름 개선용 화장료 조성물에 사용되고 있는 성분들로 여드름 예방에 탁월한 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 천연제제로 소비자들의 거부감을 감소시킬 수 있다. 추출물은 열수 추출물이거나 에탄올 수용액 추출물일 수 있다. On the other hand, the present invention is any one or more of the first extract selected from Yeongyo extract, three hundred seconds extract or lettuce extract; At least one secondary extract selected from agrimoni extract or spectral extract; Any one or more tertiary extracts selected from dandelion extract, cotyledon extract, rice extract or bamboo extract; And a water-soluble mixture of a mixture of purified water; such extracts are components used in the cosmetic composition for improving acne as well as showing an excellent effect on the prevention of acne, and can reduce the consumer's rejection with natural preparations. . The extract may be a hot water extract or an aqueous ethanol extract.
한편, 여드름의 발생기전을 보면 모공에서 피지의 생산이 증가되고 피부상피세포가 비정상적으로 각화되어 모공의 개구부를 막으며 이곳에 여드름 원인 세균이 증식하여 염증을 발생시킨다.On the other hand, if you look at the development of acne, the production of sebum in the pores is increased, the skin epithelial cells are abnormally keratinized to block the opening of the pores, where acne-causing bacteria proliferate and cause inflammation.
또한, 염증반응은 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS), 종양괴사인자(tumor necrosis factor; TNF)-α, 인터류킨(interleukin; IL)-1을 비롯한 광범위한 외부 및 내부 자극에 의해 유도되며, 자극에 의해 손상된 조직을 재생시키려는 기전이지만 지속적인 염증반응은 도리어 점막 손상을 촉진하고, 손상된 조직이 암으로 발전할 가능성이 있기 때문에 염증의 관리는 중요하다.Inflammatory responses are also induced by a wide range of external and internal stimuli, including lipopolysaccharide (LPS), tumor necrosis factor (TNF) -α, interleukin (IL) -1, It is a mechanism to regenerate damaged tissues, but management of inflammation is important because sustained inflammatory reactions promote mucosal damage, and the damaged tissues may develop into cancer.
본 실험예에서는 상기와 같이 여드름 원인 세균으로부터 유발되는 염증 및 기타 원인으로부터 발생되는 염증에 대한 본 발명의 항염증 효과를 확인하기 위해 강력한 발암 촉진제로 알려진 TPA(12-O-tetradecanoylphobol 13-acetate)를 마우스의 귀에 접촉시켜 부종을 유발시킨 후, 본 발명의 여드름 개선용 화장료 조성물을 처리하여 항염증 효과를 확인하였다. 실험결과, TPA처리에 의한 귀 두께 및 무게의 증가를 억제하고, 염증반응을 유발하는 TNF-α 및 IL-1의 함량을 감소시켰으며, 염증의 지표로서 호산구 및 호중구의 과립에 존재하는 과산화 효소인 MPO 활성을 크게 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 본 발명의 여드름 개선용 화장료 조성물의 항염증 효과를 조직학적으로 분석한 결과, TPA처리에 의해 귀 조직의 부종, 표피의 과대 증식, 염증성 세포의 침윤 등의 증상을 억제하는 것을 확인할 수 있었다. In this experimental example, TPA (12-O-tetradecanoylphobol 13-acetate), which is known as a potent carcinogen, is used to confirm the anti-inflammatory effect of the present invention on inflammation caused by acne-causing bacteria and other causes. After inducing edema by contacting the ears of the mouse, the anti-inflammatory effect was confirmed by treating the acne improvement cosmetic composition of the present invention. Experimental results showed that TPA treatment suppressed the increase of ear thickness and weight, decreased the contents of TNF-α and IL-1, which induce inflammatory reactions, and peroxidase in granules of eosinophils and neutrophils as an indicator of inflammation. It was confirmed that phosphorus MPO activity was greatly suppressed. In addition, as a result of histological analysis of the anti-inflammatory effect of the cosmetic composition for improving acne of the present invention, it was confirmed that TPA treatment suppresses symptoms such as edema of the ear tissue, overgrowth of the epidermis and infiltration of inflammatory cells. .
한편, 본 발명의 여드름 개선용 화장료 조성물은 가장 바람직하게 난황 0.10~5.00 중량%; 연교 추출물, 삼백초 추출물 또는 상백피 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제1차 추출물 0.01~5.00 중량%; 아그리모니 추출물 또는 관중뿌리 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제2차 추출물 0.01~5.00 중량%; 민들레 추출물, 자소엽 추출물, 쌀 추출물 또는 대나무 추출물 중 선택되는 어느 하나 이상의 제3차 추출물 0.01~5.00 중량%; 및 나머지의 증류수로 조성되는 것이 좋다. On the other hand, the cosmetic composition for improving acne of the present invention is most preferably 0.10 to 5.00% by weight of yolk; 0.01 to 5.00 wt% of any one or more primary extracts selected from Yeongyo extract, Triticale extract, or Morus alba extract; 0.01 to 5.00 wt% of at least one secondary extract selected from agrimoni extract or crow root extract; 0.01 to 5.00% by weight of any one or more tertiary extracts selected from dandelion extract, cotyledon extract, rice extract or bamboo extract; And remaining distilled water.
상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명의 여드름 개선용 화장료 조성물은 여드름을 유발시키는 다양한 원인균에 대한 특이적인 항체를 지닌 난황을 함유함으로써 여드름을 효과적으로 예방 및 개선할 수 있을 뿐만 아니라, 천연재료를 사용함으로써 소비자들의 거부감을 감소시킬 수 있다.As described above, the cosmetic composition for improving acne of the present invention can effectively prevent and improve acne by containing egg yolks having specific antibodies against various causative agents causing acne, as well as by using natural materials. It can reduce your rejection.
이하, 본 발명의 구성 및 작용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다. Hereinafter, the configuration and operation of the present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the scope of the present invention is not limited to the following examples, and includes modifications of equivalent technical spirit.
실시예Example 1: One: 여드름 균에Acne 대한 항체 Against antibodies IgYIgY 를 함유하는 Containing 난황Egg yolk 제조 Produce
실시예 1은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 IgY, 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus)에 항체 IgY, 스테필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대한 IgY, 스테필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)에 대한 IgY, 마이크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus)에 대한 IgY 및 악티노마이시즈 이스라엘이(Actinomyces israelii)에 대한 IgY를 함유하는 난황을 제조하였다.Example 1 Propionibacterium IgY for acnes), propynyl sludge tumefaciens propynyl sludge kusu (Propionibacterium for antibody IgY, Ste Philo aureus (Staphylococcus aureus) in propionicus) IgY, Ste Philo Caucus epidermidis (Staphylococcus Egg yolk containing IgY for epidermidis , IgY for Micrococcus luteus and IgY for Actinomyces israelii was prepared.
단계 1: 항원생산Stage 1: Antigen Production
프로피오니박테리움 아크네스(KCTC 3320; Propionibacterium acnes), 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(KCTC 5342; Propionibacterium propionicus)를 블러드아가(blood agar)를 이용하여 37℃ 인큐베이터(incubator)에서 1~2일 혐기배양하 였다. 콜로니(colony)를 확인한 후, 준비된 BHI broth에 접종하고 37℃ 쉐이킹인큐베이터(shaking incubator)에서 1~2일 동안 배양하였다. 수득된 배양액을 0.3% 포르말린(formalin)으로 불활화시킨 후, 10000Xg에서 원심분리한 다음 0.1% 포르말린(formalin)으로 다시 불활화를 시켰다. 그리고 스펙트로포토메터(Spectrophotometer)를 이용하여 1012 cell/ml로 농도를 맞췄다. Propionibacterium Acnes (KCTC 3320; Propionibacterium acnes ), Propionibacterium propionicus (KCTC 5342; Propionibacterium propionicus ) was anaerobicly cultured in blood incubator in a 37 ° C. incubator for 1-2 days. After confirming the colonies (colony), inoculated in the prepared BHI broth and incubated for 1 to 2 days in a 37 ℃ shaking incubator (shaking incubator). The obtained culture was inactivated with 0.3% formalin, then centrifuged at 10000 × g, and then inactivated with 0.1% formalin. The concentration was adjusted to 10 12 cells / ml using a Spectrophotometer.
스테필로코커스 아우레우스(KCTC 1621; Staphylococcus aureus), 스테필로코커스 에피더미디스(KTCT 1917; Staphylococcus epidermidis), 마이크로코커스 루테우스(KCTC 1056; Micrococcus luteus), 악티노마이시즈 이스라엘이(KCTC 5559; Actinomyces israelii)를 BHI broth를 이용하여 37℃ 쉐이킹인큐베이터(shaking incubator)에서 24시간 배양하였다. 수득된 배양액을 0.3% 포르말린(formalin)으로 불활화시킨 후, 10000Xg에서 원심분리한 다음 0.1% 포르말린(formalin)으로 다시 불활화시켰다. 그리고 스펙트로포토메터(Spectrophotometer)를 이용하여 1012 cell/ml로 농도를 맞췄다.Staphylococcus aureus (KCTC 1621; Staphylococcus aureus ), Staphylococcus epidermidis (KTCT 1917; Staphylococcus epidermidis ), Micrococcus luteus (KCTC 1056; Micrococcus luteus ), Actinomyces Israeli (KCTC 5559; Actinomyces israelii ) were incubated for 24 hours in a 37 ° C shaking incubator using BHI broth. The obtained culture was inactivated with 0.3% formalin, then centrifuged at 10000 × g and then inactivated again with 0.1% formalin. The concentration was adjusted to 10 12 cells / ml using a Spectrophotometer.
단계 2: 백신 제조Step 2: Vaccine Preparation
상기 단계 1에서 배양된 균주와 미네랄오일(ISA 70)을 3:7 비율로 혼합한 후, 균질기(Hmogenizer)를 이용하여 유화시킨 후, 무균검사와 불활화 확인시험을 거쳤다.After mixing the strain cultured in
단계 3: 여드름균에 대한 특이항체 Step 3: Antibodies Specific to Acne Bacteria 난황의Egg yolk 생산 production
상기 단계 2에서 제조된 백신을 22주령된 Hy-Line Brown 산란계에 1ml씩 2주 간격으로 가슴에 접종하였으며, 항체 역가의 감소시기인 3차 접종 후, 6주 후에 'Boosting'을 실시하였다.The vaccine prepared in
난황 중의 특이항체 난황의 역가는 'Indirect ELISA Method'를 이용하였으며, 측정 샘플은 1차 접종 후부터 추가접종 후 2주까지의 난황을 모아 주별로 측정하였다. 난황항체의 활성은 Mine(1997)가 사용한 ELISA 방법을 응용하여 측정하였다.The titer of yolk yolk was measured by 'Indirect ELISA Method', and the measurement samples were measured weekly by collecting yolk from 1 week after inoculation to 2 weeks after booster vaccination. The yolk antibody activity was measured by applying the ELISA method used by Mine (1997).
항원을 200ng/ml의 농도로 100㎕씩 96 웰 폴리스틸렌 프레이트(well poly styrene plate)에 코팅하여 4℃에서 하룻밤 방치하였다. PBS-T(phosphate buffer saline, 0.05% Tween 20, pH 7.4)로 세척 후, 2% BSA가 함유된 PBS 버퍼로 1h/37℃ 블라킹(Blocking)하며 상기와 같은 방법으로 세척하였다. 음성대조군, 양성대조군 및 샘플을 2X씩 희석하여 웰(well)당 100㎕씩 넣고 37℃에서 1시간 동안 정치시켰다. 적절히 희석된 이차 항체를 샘플처리와 같은 방법으로 반응시키고, 10분간 발색시킨 후, 492mm에서 ELISA Reader를 이용하여 흡광도를 측정하였다.Antigen was coated at a concentration of 200 ng / ml in 96 well polystyrene plate (well poly styrene plate) and left overnight at 4 ℃. After washing with PBS-T (phosphate buffer saline, 0.05% Tween 20, pH 7.4), 1h / 37 ℃ blocking with PBS buffer containing 2% BSA (Blocking) and washed in the same manner as described above. The negative control group, the positive control group and the sample were diluted by 2 ×, and 100 µl of each well was added and allowed to stand at 37 ° C. for 1 hour. The appropriately diluted secondary antibody was reacted in the same manner as the sample treatment and developed for 10 minutes, and then the absorbance was measured at 492 mm using an ELISA Reader.
여드름 유발균으로 면역된 산란계에서 얻은 계란의 IgY항체의 역가를 ELISA로 측정한 결과(도 1), 면역 3주 후에 계란의 IgY 항체역가가 증가하기 시작하였고, 3차 접종 후인 4주부터 가장 높은 역가를 나타냈다. IgY 항체역가가 떨어지기 시작한 10주에 추가접종을 하였으며, 이후에 다시 IgY의 역가가 증가하기시작하였고, 14주부터는 IgY의 역가가 점점 하락하는 경향을 나타냈다. The titer of the IgY antibody titers of eggs obtained from hens immunized with acne-causing bacteria was measured by ELISA (Fig. 1), and the IgY antibody titers of eggs began to increase after 3 weeks of immunization, the highest after 4 weeks after the third inoculation. The titer was shown. Additional vaccination was given at 10 weeks after the IgY antibody titer began to decline, and afterwards, the titer of IgY began to increase, and from 14 weeks, IgY titer gradually decreased.
단계 4: Step 4: 난황분말Egg yolk powder 제조 Produce
IgY의 항체 역가가 음성대조군의 160X 이상이 되는 5주부터 14주까지의 계란 을 집중적으로 집란하여 할란 후 난황만을 수거하였으며 이를 동결건조하여 난황분말을 생산하였다. Eggs collected from 5 to 14 weeks with IgY antibody titer greater than 160X of the negative control were concentrated, and only egg yolks were harvested after freezing and lyophilized to produce egg yolk powder.
실시예Example 2: 앰플 제조 2: ampoule manufacturing
실시예 2에서는 상기 실시예 1에서 수득된 특이항체 난황분말을 이용하여 앰플을 제조하였다. In Example 2, an ampoule was prepared using the specific antibody yolk powder obtained in Example 1 above.
특이항체 난황분말 20g; 연교 추출물 1g, 삼백초 추출물 1g 또는 상백피 추출물 1g; 아그리모니 추출물 5g, 관중뿌리 추출물 5g; 민들레 추출물 2g, 자소엽 추출물 2g, 쌀 추출물 2g, 대나무 추출물 2g; 및 나머지로 정제수를 첨가하여 1000g의 앰플을 제조하였다. Specific antibody yolk powder 20g; 1 g of Yeongyo extract, 1 g of three hundred sec extract or 1 g of lettuce extract; 5 g of agrimoni extract, 5 g of crow root extract; 2 g of dandelion extract, 2 g of self-leaving extract, 2 g of rice extract, 2 g of bamboo extract; And the remainder was added purified water to prepare 1000g of ampoules.
실험예Experimental Example 1: One: 여드름 균에Acne 대한 항체 Against antibodies IgYIgY 를 함유하는 Containing 난황Egg yolk 및 앰플의 효과 측정 The effectiveness of the test and ampoules
TPA(12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate)에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에서 여드름균 특이 항체 난황 및 앰플(Ampoule)의 항염증 효과를 검증하기 위하여 시행되었다.A mouse ear edema model induced by TPA (12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate) was performed to verify the anti-inflammatory effects of acne-specific antibody yolk and ampoule.
본 시험은 TPA의 반복적인 도포에 의한 마우스 귀 부종 모델에 여드름균 특이항체 난황 및 앰플(Ampoule)을 반복적으로 도포함으로써, 이들 시험물질의 항염증 효과를 평가하기 위한 실험으로, 자성 생쥐(female ICR mice)에게 TPA 및 시험물질을 반복적으로 도포한 후, 귀 두께, 귀 무게, 귀 조직 내의 전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokine), 미엘로퍼옥시다제(myeloperoxidase; MPO) 활성, 조직학적 검사를 통해 시험물질의 항염증 효과를 평가하였다. This test is to evaluate the anti-inflammatory effect of these test substances by repeatedly applying acne bacteria-specific antibody yolk and ampoule to the mouse ear edema model by repeated application of TPA. After repeated application of TPA and test substance to the mice, ear thickness, ear weight, pro-inflammatory cytokine in the tissue and myeloperoxidase (MPO) The anti-inflammatory effect of the test substance was evaluated by activity and histological examination.
상기 제조예 1로부터 수득된 여드름균에 대한 특이 항체를 함유하는 난황 분말(이하 '특이항체 난황분말' 또는 '특이항체 난황' 이라고 칭함)을 멸균된 3차 증류수에 20, 50, 100 mg/ml 농도로 만든 후 50 ml/ear 씩 마우스 귀에 도포하였다. 마우스 귀에 도포한 최종 용량은 1, 2.5, 5 mg/ear이었다. Egg yolk powder (hereinafter referred to as 'specific antibody yolk powder' or 'specific antibody yolk') containing the specific antibody against acne bacteria obtained in Preparation Example 1 in 20, 50, 100 mg / ml in sterile tertiary distilled water After concentration, 50 ml / ear was applied to the mouse ears. Final doses applied to mouse ears were 1, 2.5, 5 mg / ear.
앰플(Ampoule)은 희석 없이 앰플(Ampoule) 원액을 귀 조직에 충분히 도포하도록 50 ml/ear 씩 처리하였다.Ampoules were treated in 50 ml / ear increments to allow ampoule stock to be applied sufficiently to ear tissue without dilution.
양성대조군으로 항염증치료제인 덱사메타손(dexamethasone)을 사용하였고, 덱사메타손(dexamethasone)을 70% 에탄올에 녹여 1mg/ml로 만든 후, 50 ml/ear 씩 마우스 귀에 도포하였다. 마우스 귀에 도포한 최종 용량은 0.05 mg/ear이었다. Anti-inflammatory drug dexamethasone (dexamethasone) was used as a positive control, dexamethasone (dexamethasone) was dissolved in 70% ethanol to make 1mg / ml, and then applied to the mouse ears by 50 ml / ear. The final dose applied to mouse ears was 0.05 mg / ear.
실험에 사용한 ICR 마우스는 5주령 암컷 34마리(20~22g), 6주령 암컷 34마리(23~25g)로 (주)오리엔트 바이오로부터 구입하였고, 입수 시 체중 및 귀 두께 측정 순으로 펀치를 이용하여 개체 식별 법에 따라서 귀에 표기하였다. 7일간의 검역 순화기간 중에 매일 1회 일반증상 관찰을 실시하였고, 반입 시 및 검역 순화기간 종료 시 소동물용 저울(BP3100S, Sartorius, Germany)로 체중을 측정하여 시험 실시에 적합한 건강한 동물을 선발하였다. The ICR mice used in the experiment were 34 females (20-22 g) 5 weeks old and 34 females (23-25 g) 6-week old females purchased from Orient Bio Co., Ltd. The ear was marked according to the individual identification method. General symptoms were observed once daily during the 7-day quarantine purifying period, and healthy animals were selected by weighing with small animal scales (BP3100S, Sartorius, Germany) at the time of import and at the end of the quarantine purifying period. .
검역 순화기간 종료 시, 체중증가량 및 일반증상에 이상이 없는 동물을 선별하여 사용하였고, 평균체중 및 표준편차를 계산하여 군간 균등하게 동물을 배치하였으며, 잔여동물은 안락사시켜 군을 분리하였다. 군 분리 종료 후 사육 상자에는 개체식별카드를 부착하였고, 개체식별은 펀치를 이용하여 개체 식별법에 따라 귀에 표시하였다. At the end of the quarantine period, animals without weight gain and general symptoms were selected, and the animals were placed equally among the groups by calculating the average weight and standard deviation, and the animals were euthanized to separate the groups. After the group separation, the breeding box was attached to the individual identification card, individual identification was marked on the ear according to the individual identification method using a punch.
폴리카보네이트 사육 상자(278W * 420D * 200H(mm), 쓰리싸인)에 2~3마리씩 수용하였고, 온도 20.9~22.6℃, 습도 (상대습도) 39.5~66.7%, 환기회수 및 방식 은 10~15 회/시간으로 전배기방식, 조명시간 및 영양주기는 12hr 점등/12hr 소등 (오전 7시~오후 7시 조명), 조도는 150~300Lux으로 유지하였다. 2 ~ 3 animals were housed in polycarbonate breeding box (278W * 420D * 200H (mm), 3 sign), temperature 20.9 ~ 22.6 ℃, humidity (relative humidity) 39.5 ~ 66.7%, ventilation times and
사육 상자는 1회/주, 동물 식수는 매일 교환하여 주었고, 세척은 일반 세제를 이용하여 세척하였으며, 마이크로콰쿼트(주성분: Alkyldimethylbenzyl ammonium chloride 400배, ECOLAB (주)) 희석액에 소독하여 고압증기 멸균기를 이용하여 멸균하여 사용하였다. Breeding box was once / week, animal drinking water was exchanged every day, and washing was done by using general detergent, and it was sterilized in microquat (main ingredient:
동물실의 소독은 매일 작업 종료 후 실시하였으며, 소독액은 매일 마이크로콰쿼트(주성분: Alkyldimethylbenzyl ammonium chloride 400배, ECOLAB (주))를 사용하였다. Disinfection of the animal room was performed after the end of the work every day, the disinfectant solution was used daily microquat (400 times the main ingredient: Alkyldimethylbenzyl ammonium chloride, ECOLAB Co., Ltd.).
사료는 Harlan 실험동물용 멸균 고형사료를 공급하였고, 급여기에 고형사료를 넣고, 자유 섭취시켰다. 음수는 필터와 유수 살균기를 이용하여 여과 살균된 정제수를 사용하였고, 폴리카보네이트제 음수병 (250 ml)에 정제수를 넣어 자유 섭취시켰다.The feed was supplied with sterile solid feed for Harlan experimental animals, and fed to the feeder and fed free. Drinking water was purified water filtered and sterilized using a filter and an oil sterilizer, and purified water was added to a polycarbonate drinking bottle (250 ml).
시험군은 하기 표 1과 같이 구성하였다. The test group was configured as shown in Table 1 below.
(control)Control
(control)
투여경로는 본 시험에 사용된 시험물질의 최종 적용방법이 화장품이므로, 직접 귀 조직에 용량별로 도포하였고, 그룹별 투여용량은 시험물질 제품의 농도에 맞춰 설정하였다. 시험 물질 투여 용량을 산출한 후에 3차 증류수에 희석하여 도포하였고, 매일 새로운 것을 만들어서 귀 조직에 도포하였다. The route of administration was the final application method of the test substance used in this test, so it was directly applied to the ear tissue by dose, and the dose of each group was set according to the concentration of the test substance product. The test substance dose was calculated and then diluted and diluted in tertiary distilled water, and a new one was made daily and applied to the ear tissue.
TPA와 덱사메타손(dexamethasone)은 Sigma Chemical Co.(St Louis, MO, USA)로부터 구입하여 시험에 사용하였다. TPA and dexamethasone were purchased from Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, USA) and used for testing.
TPA에 의한 귀 부종 모델은 TPA(2.5 mg/20 ml acetone/ear)를 귀 안쪽과 바깥쪽에 이틀에 한번 씩 총 6회 동안 마우스의 귀에 도포하였으며, 대조군은 20 ml acetone/ear를 처리하였다. 시험물질 및 덱사메타손(dexamethasone)은 첫 번째 TPA 처리 다음날부터 매일 동일한 시간에 50 ml/ear로 10일 동안 연속적으로 도포하였다. TPA와 시험물질을 같이 처리해야 하는 날에는 TPA 처리 후 30분 뒤에 시험물질을 도포한 뒤 조직에 완전히 흡수되도록 하였다. 마지막 TPA처리 후 6시간 뒤에 귀 두께를 측정하고, 귀 조직을 얻어 분석에 사용하였다(도 2). In the ear edema model by TPA, TPA (2.5 mg / 20 ml acetone / ear) was applied to the ears of the mouse for 6 times, once every two days inside and outside the ear, and the control group was treated with 20 ml acetone / ear. Test substance and dexamethasone were applied continuously for 10 days at 50 ml / ear at the same time every day from the day after the first TPA treatment. On the day when TPA and test substance were to be treated together, the test substance was applied 30 minutes after TPA treatment and completely absorbed by the tissue. Ear thickness was measured 6 hours after the last TPA treatment, ear tissues were obtained and used for analysis (FIG. 2).
결과는 'means±S.E.M'으로 나타냈으며, 자료의 통계처리는 'GraphPad Prism 4.0 software(GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA)'를 이용하여 'ANOVA-test'를 통해 유의성을 검정 하였다.The results were expressed as 'means ± SEM' and statistical significance of the data was tested by 'ANOVA-test' using 'GraphPad Prism 4.0 software (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA)'. .
실험예Experimental Example 1-1: 체중측정 1-1: Weighing
체중은 실험 시작 전과 실험 10일째 해부 전에 측정하여 수학식 1과 같이 계산하였다.Body weight was measured before the start of the experiment and 10 days before the dissection to calculate as shown in
체중을 측정한 결과(도 3), 관찰기간 동안 덱사메타손군은 체중이 감소하였으나, 군 간의 유의적인 차이는 없었으며, 대조군 및 시험 물질 투여군의 체중 변화는 정상적이었다. As a result of measuring the weight (FIG. 3), the dexamethasone group lost weight during the observation period, but there was no significant difference between the groups, and the weight change of the control group and the test substance administration group was normal.
실험예Experimental Example 1-2: 귀 두께 및 귀 무게 측정 1-2: Ear thickness and ear weight measurement
본 실험예 1-2에서는 각각 실험군에 대해 귀 두께 및 귀 무게를 측정하였다. In Experimental Example 1-2, ear thickness and ear weight were measured for each experimental group.
귀 두께는 마이크로메터(micrometer)를 이용해서 마지막 TPA 처리한지 6시간 후에 측정하였고, 귀 무게는 동물을 희생시킨 후, 귀 조직을 5 mm2 diameter ear punch로 잘라낸 후, 정밀저울(Mettlertoledo LTD., Seoul, Korea)을 이용해서 측정하였다. Ear thickness was measured 6 hours after the last TPA treatment using a micrometer, ear weight was measured at 5 mm 2 diameter ear punch after sacrificing the animal, and then precision scales (Mettlertoledo LTD., Seoul, Korea).
마우스 귀에 TPA로 6회에 걸쳐 감작반응을 일으켜 염증 반응을 유도하고, 동시에 여드름 특이항체난황(1, 2.5, 5 mg/ear)과 앰플(Ampoule; 50 ml/ear)를 귀에 도포하여 이들 시험물질의 TPA에 의한 부종 억제효과를 분석한 결과(도 4 및 도 5), 아세톤(acetone)만 처리한 대조군에 비해 TPA를 처리한 특이항체 난황 0mg군에서 귀 두께 및 무게가 유의적으로 증가하였다(p<0.001). 여드름균 특이항체 난황 및 앰플(Ampoule)를 도포한 실험군은 귀 두께 및 무게의 증가가 유의적으로 억제되었으며.05, p<0.01, p<0.001), 특히 5 mg/ear 특이항체 난황을 처리한 군은 염증치료제인 덱사메타손(dexamethasone; 0.05mg/ear)의 수준으로 귀의 두께 및 무게의 증가가 억제되는 것을 확인할 수 있었다. These test substances were induced by sensitizing six times with TPA in the mouse's ear to induce an inflammatory response. As a result of analyzing the edema suppression effect of TPA (FIGS. 4 and 5), the thickness and weight of the ears were significantly increased in the 0 mg group of egg yolk treated with TPA compared to the control group treated with acetone only (acetone) ( p <0.001). The experimental group coated with acne-specific antibody yolk and ampoule significantly inhibited the increase of ear thickness and weight.05, p <0.01, p <0.001), especially 5 mg / ear-specific antibody yolk The group was found to inhibit the increase in the thickness and weight of the ear at the level of dexamethasone (0.05 mg / ear), an inflammation treatment agent.
실험예Experimental Example 1-3: 귀 조직 내 1-3: In Your Tissue 전구염증사이토카인Proinflammatory Cytokines (( propro -- inflammatoryinflammatory cytokinescytokines ) 함량 측정Content measurement
본 실험예 1-3에서는 귀 조직 내 전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokines) 함량을 측정하였다.In Experimental Examples 1-3, the content of pro-inflammatory cytokines in ear tissues was measured.
전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokine)인 IL-6는 모노사이트(Monocytes)나 마크로파지(macrophage)에서 분비되고 염증에서 항상 증가하는 것으로 알려져 있다.IL-6, a pro-inflammatory cytokine, is secreted by monocytes and macrophage and is known to increase in inflammation at all times.
TNF-a는 LPS 반응의 주요 매개체로서 선천면역반응에 있어서 중요한 역할을 하는 사이토카인(cytokine)으로, 만성염증 반응에서 증가하는 것으로 알려져 있다.TNF-a is a cytokine that plays an important role in the innate immune response as a major mediator of the LPS response and is known to increase in chronic inflammatory responses.
마지막 TPA 처리 후 6시간 뒤에 귀 조직을 얻고, 귀 조직을 조직 무게의 3배에 해당하는 50 mM Tris-HCl buffer(pH 7.5, 1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100)로 균질화 시켰다. 4℃에서 10,000×g로 10분 동안 원심분리 후 상층액을 얻어 상층액에 함유된 IL-6와 TNF-a의 함량을 'enzyme-linked immunosorbent assay kit (eBIOSCIENCE, Sandiego, CA, USA)'를 이용하여 분석하였다. IL-6와 TNF-a의 함량은 귀 조직 무게로 보정하였으며, 결과는 대조군(아세톤 처리군)에 대한 상대적인 함량으로 표시하였다.Ear tissue was obtained 6 hours after the last TPA treatment, and the tissue was homogenized with 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5, 1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100) corresponding to three times the tissue weight. After centrifugation at 10,000 × g at 4 ° C. for 10 minutes, the supernatant was obtained, and the concentration of IL-6 and TNF-a contained in the supernatant was determined using an 'enzyme-linked immunosorbent assay kit (eBIOSCIENCE, Sandiego, CA, USA)'. The analysis was carried out. The contents of IL-6 and TNF-a were corrected by ear tissue weight, and the results were expressed as relative to the control group (acetone treatment group).
측정결과(도 6 및 도 7), 귀 조직 내 IL-6의 함량은 TPA만 처리한 군이 대조군보다 증가하였으나 유의적인 차이는 없었다. 특이항체 난황의 처리에 의해 조직 내 IL-6의 함량이 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보였으며, 억제 효과는 특이항체 난황 5 mg/ear를 처리한 군에서 가장 크게 나타났다. 앰플(Ampoule)의 도포에 의해서도 TPA에 의한 IL-6의 생성을 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 이들의 억제 수준은 염증치료제인 덱사메타손(dexamethasone)을 처리한 군과 유사한 수준이었으나, 군 간의 유의적인 차이는 없었다.As a result of the measurement (FIG. 6 and FIG. 7), the IL-6 content in the ear tissue was increased in the TPA-only group than the control group, but there was no significant difference. The concentration of IL-6 in tissues was decreased in a concentration-dependent manner by the treatment of specific antibody yolk, and the inhibitory effect was greatest in the group treated with 5 mg / ear of egg yolk. It was confirmed that the production of IL-6 by TPA was also suppressed by the application of ampoule. Their level of inhibition was similar to that of the dexamethasone treatment group, but there was no significant difference between the groups.
TPA 처리에 의한 귀 부종 모델에서 TNF-a의 경우, IL-6와는 달리 오히려 대조군에서 높은 수준이 나타났으며, TPA의 처리에 의해 귀 조직 내 TNF-a의 함량이 감소하는 것으로 나타났다. 특이항체 난황의 처리에 의해 농도 의존적으로 TNF-a의 함량이 증가했지만 대조군이나 특이항체 난황 0mg 군에 비해 유의적인 차이는 없었다. In the edema model by TPA treatment, TNF-a, unlike IL-6, showed a high level in the control group, and the TNF-a content was decreased by TPA treatment. The concentration of TNF-a was increased by treatment with specific antibody yolk, but there was no significant difference compared with the control or specific antibody yolk 0mg group.
실험예Experimental Example 1-4: 귀 조직 내 1-4: In Your Organization 미엘로퍼옥시다제Myeloperoxidase (( myeloperoxidasemyeloperoxidase ; ; MPOMPO ) 활성 ) activation 측정Measure
본 실험예 1-4에서는 귀 조직 내 미엘로퍼옥시다제(myeloperoxidase; MPO) 활성을 측정하였다. MPO는 호중구와 호산구의 과립에 존재하는 과산화효소로서 염증세포의 침윤정도를 보여주는 지표이다.In Experimental Example 1-4, myeloperoxidase (MPO) activity in ear tissues was observed. Measured. MPO is a peroxidase present in the granules of neutrophils and eosinophils.
마지막 TPA 처리 후 6시간 뒤에 귀 조직에서 MPO 활성을 평가하였다. 조직 무게의 3배에 해당하는 50 mM 포다슘 포스페이트 버퍼(potassium phosphate buffer; pH 6.0, 0.5% 헥사데실트리메틸암모니움 브로마이드(hexadecyltrimethylammonium bromide))로 균질화시키고, 4℃에서 10,000×g로 15분 동안 원심분리 후 상층액을 얻었다. 상층액 50 ml와 포타슘 포스페이트 버퍼(photassium phosphate buffer) 1420 ml, O-디아니시딘 디하이드로클로라이드(dianisidine dihydrocloride(20 mg/ml)) 15 ml과 20 mM H2O2 15 ml를 혼합한 후 460 nm에서 흡광도를 측정하고, 37℃에서 3분간 반응시킨 다음 흡광도의 차이를 이용하여 MPO 활성을 평가하였다. 귀 조직 무게로 보정하였으며, 대조군에 대한 상대적인 함량으로 표시하였다.MPO activity was assessed in your
측정결과(도 8), 아세톤만 처리한 대조군에 비해 TPA의 반복적인 도포에 의해 MPO 활성이 유의적으로 증가하였으며(p<0.01, p<0.001), 5 mg/ear 여드름균 특이항체 난황 처리군에서 TPA에 의해 유도된 MPO 활성이 가장 효과적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다. As a result of measurement (Fig. 8), MPO activity was significantly increased by repeated application of TPA compared to acetone-only control group ( p <0.01, p <0.001), and 5 mg / ear acne-specific antibody yolk treated group It was confirmed that the MPA activity induced by TPA was most effectively inhibited.
실험예Experimental Example 1-5: 귀 조직의 조직학적 검사 1-5: Histological Examination of Your Tissue
실험예 1-5에서는 귀 조직의 조직학적 검사를 하였다. In Experimental Example 1-5, histological examination of the ear tissue was performed.
마지막 TPA 처리 후 6시간 뒤에 귀 조직을 'O.C.T. compound(Sakura Finetechnical Co., LTD., Tokyo, Japan)'로 포매시켜 동결시킨 후 'Cryostat (Thermo SCIENTIFIC, Waldorf, Germany)'를 이용하여 8 mm 두께로 조직절편을 자르고 'hematoxylin & eosin' 염색을 통해 TPA에 의해 유도된 염증 반응에 의한 조직학적인 변화를 평가하였다. Six hours after the last TPA treatment, your tissues were excised to 'O.C.T. compound (Sakura Finetechnical Co., LTD., Tokyo, Japan), frozen, and cut into 8 mm thick tissue sections using 'Cryostat (Thermo SCIENTIFIC, Waldorf, Germany)' and stained with 'hematoxylin & eosin'. We evaluated histological changes due to inflammatory responses induced by TPA.
TPA에 의해 유도된 귀 부종 모델에서 여드름균 특이 항체 난황 및 앰플의 염증 억제 효과를 조직학적 검사로 살펴본 결과(도 9), 마우스 귀 조직에 TPA의 반복적인 도포는 부종, 표피과대증식, 염증세포의 침윤 등과 같은 증상이 발생시켰다. 여드름균에 대한 특이항체 난황이 도포된 실험군은 TPA에 의한 유발된 부종, 표피과대증식 및 염증 세포의 침윤을 효과적으로 억제시켰으며, 특히 5 mg/ear 특이 항체 난황군에서 가장 효과적으로 억제되었고, 이는 항염증치료제인 덱사메타손(dexamethasone)을 처리한 군과 유사한 수준이었다. As a result of histological examination of the inflammation inhibitory effect of acne bacteria-specific antibody yolk and ampoule in the ear edema model induced by TPA (FIG. 9), the repeated application of TPA to mouse ear tissues showed edema, epidermal hyperplasia, and inflammatory cells. Symptoms such as invasion of The experimental group coated with specific antibody yolk against acne bacterium effectively inhibited TPA-induced edema, epidermal hyperplasia and infiltration of inflammatory cells, especially in the 5 mg / ear-specific antibody yolk group. The level was similar to the group treated with dexamethasone, an inflammatory agent.
실시예Example 3: 3: 앰플을Ampoule 함유하는 화장수 제조 Cosmetic lotion containing
95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 실시예 2에서 수득한 앰플 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 화장수를 제조하였다. To 8 g of 95% ethanol, 0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of fragrance, 0.1 g of paraoxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant, and a small amount of pigment were dissolved. . An ampoule was prepared by adding 0.05 g of the ampoule obtained in Example 2 and 5 g of glycerine to 85.33 g of purified water, followed by stirring the mixed solution.
실시예Example 4: 4: 앰플을Ampoule 함유하는 유액 제조 Latex preparation
세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 2에서 수득한 앰플 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다. 1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of vaseline, 0.2 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoesteralide, 1 g of polyoxyethylene (20 mole added) monooleate and 0.1 g of fragrance were mixed and dissolved at 70 ° C. 0.5 g of the ampoule obtained in Example 2, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1500, 0.2 g of triethanolamine, and 76.2 g of purified water were heated to dissolve at 75 ° C. Both were emulsified by mixing, followed by cooling to prepare an oil-in-water (O / W) type emulsion.
실시예Example 5: 5: 앰플을Ampoule 함유하는 Containing 미용액Essence 제조 Produce
95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 2에서 수득한 앰플 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 제조하였다. 5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of kitulose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium licorice, 0.1 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1g of ampoules obtained in Example 2 and an appropriate amount of pigments were mixed to prepare a cosmetic solution.
도 1은 여드름 유발균으로 면역된 산란계에서 수득된 계란 난황의 IgY항체 역가를 ELISA로 측정한 도이다.1 is a diagram measuring the IgY antibody titer of egg yolk obtained from laying hens immunized with acne-inducing bacteria by ELISA.
도 2는 10일 동안 TPA를 처리하고 30분 후에 여드름균에 대한 항체를 지닌 난황(1, 2.5, 5 mg/ear), 앰플(Ampoule ; 50 ml/ear), 덱사메타손(dexamethasone ; 0.05 mg/ear)을 각각 반복적으로 처리한 후, 10일 되는 날 마우스에 TPA를 마지막 처리하고 6시간 후, 쥐를 희생시켜 생체실험을 실시한 실험계획안을 나타낸 도이다. FIG. 2 shows egg yolk (1, 2.5, 5 mg / ear), ampoule (Ampoule; 50 ml / ear), dexamethasone (0.05 mg / ear) with antibodies against acne bacteria 30 minutes after TPA treatment for 10 days ), After repeated treatments, the mice were sacrificed and 6 hours after the last treatment with TPA on the 10th day of the mice.
도 3은 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델을 10일째 되는 날 해부하기 전에 체중의 변화를 측정한 도이다.FIG. 3 is a diagram measuring body weight change before dissecting the mouse ear edema model induced by TPA as shown in FIG. 2 on the 10th day.
도 4는 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에 대해 특이항체 난황, 앰플, 덱사메타손 처리에 의한 귀의 두께 변화를 측정한 도이다. 4 is a diagram measuring the thickness of the ear by the specific antibody yolk, ampoule, dexamethasone treatment for the mouse ear edema model induced by TPA as shown in the experimental design shown in FIG.
도 5는 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에 대해 특이항체 난황, 앰플, 덱사메타손 처리에 의한 귀 무게 변화를 측정한 도이다.FIG. 5 is a diagram measuring ear weight change caused by specific antibody yolk, ampoule, and dexamethasone treatment for a mouse ear edema model induced by TPA as shown in FIG. 2.
도 6은 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에 대해 특이항체 난황, 앰플, 덱사메타손 처리에 의한 전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokines)의 억제효과를 측정한 도로, 전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokines)인 IL-6 의 함량을 나타낸 도이다.6 is a measurement of the inhibitory effect of pro-inflammatory cytokines by the treatment of specific antibody yolk, ampoule, and dexamethasone in the mouse ear edema model induced by TPA as shown in FIG. Road, a diagram showing the content of IL-6, a pro-inflammatory cytokines.
도 7은 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에 대해 특이항체 난황, 앰플, 덱사메타손 처리에 의한 전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokines)의 억제효과를 측정한 도로, 전구염증사이토카인(pro-inflammatory cytokines)인 TNF-α의 함량을 나타낸 도이다. FIG. 7 measures the inhibitory effect of pro-inflammatory cytokines by specific antibody yolk, ampoule, and dexamethasone treatment on a mouse ear edema model induced by TPA as shown in FIG. Fig. Shows the content of TNF-α, a pro-inflammatory cytokines.
도 8은 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에 대해 특이항체 난황, 앰플, 덱사메타손 처리에 의한 MPO 활성억제 효과를 측정한 도이다. FIG. 8 is a diagram measuring the effect of inhibiting MPO activity by specific antibody yolk, ampoule, and dexamethasone treatment in a mouse ear edema model induced by TPA as shown in FIG. 2.
도 9는 상기 도 2에서 도시한 실험계획안과 같이 TPA에 의해 유도된 마우스 귀 부종 모델에 대해 특이항체 난황, 앰플, 덱사메타손 처리에 의한 조직학적 검사를 실시한 도로, 귀 조직을 'hematoxylin'과 'eosin'으로 염색하여 측정하였다(original magnification, ×100). FIG. 9 is a hematoxylin and eosin for histopathological examination of a mouse ear edema model induced by TPA as shown in FIG. Measured by staining with '(original magnification, x100).
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