KR100992438B1

KR100992438B1 - 항ｈｉｖ제 조성물

Info

Publication number: KR100992438B1
Application number: KR1020080051925A
Authority: KR
Inventors: 고영환; 오현정; 고연주; 강호정; 안효민
Original assignee: 재단법인 제주테크노파크; 제주대학교 산학협력단
Priority date: 2008-06-03
Filing date: 2008-06-03
Publication date: 2010-11-08
Also published as: KR20090125879A

Abstract

본 발명은 항HIV제 조성물을 개시한다. 보다 구체적으로 본 발명은 HIV 역전사효소 및 HIV 프로테아제 억제 활성을 갖는 플라보노이드 계열의 화합물을 이용한 항HIV제 조성물을 개시한다.

HIV, 역전사효소, 프로테아제, 플라보노이드

Description

항ＨＩＶ제 조성물{COMPOSITINO OF ANTI-HIV AGENTS}

본 발명은 항HIV제 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 HIV 역전사효소 및 HIV 프로테아제 억제 활성을 갖는 플라보노이드 계열의 화합물을 이용한 항HIV제 조성물에 관한 것이다.

1980년대 초 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)가 치명적인 후천성 면역 결핍 증후군(AIDS)의 원인 바이러스로 판명된 이후(Barre-Sinoussi, F., Chermann, J.C., Rey, F., Nugeyre, M.T., Chamaret, S., Gruest, J., Dauguet, C., Axler-Blin, C., Vezinet-Brun, F., Rouzinoux C., Rozenbaum W., Montagnier, L. (1983) Science 220, 868-871; Popovic, M., Sarngadharan, M.G., Read, E., Gallo, R.C. (1984) Science 224, 497-500), 1998년 기준 3천 3백만 명이 감염되어 있다는 보고가 있다(Report on the Global HIV/AIDS Epidemic, December 1998).

HIV에는 두 가지의 유형 즉 HIV 1형(HIV-1) 및 HIV 2형(HIV-2)이 존재한다. HIV 1형은 미국, 유럽, 및 중앙 아프리카에서 AIDS의 유발과 관련되어 있는 반면 HIV-2는 주로 서아프리카에서 AIDS의 유발과 관련되어 있다.

HIV는 RNA를 유전 물질로 갖는 레트로바이스 계열에 속하는 바이러스로서, 특히 레트로바이러스의 세 그룹 즉 스푸마바이러스(Spumavirus), 렌티바이러스(Lentivirus) 및 온코바이러스(Oncovirus) 중 렌티바이러스로 분류되는 바이러스이다.

HIV 게놈은 다른 레트로바이러스와 마찬가지로 배수체 RNA로 구성되며, 15개의 단백질을 암호화한다고 알려져 있다.

HIV의 숙주세포 내에서의 복제 주기는 감염 단계(숙주세포로의 유입 단계), 숙주세포의 게놈에 통합된 상태의 휴면 단계, 및 휴면 단계의 유전자가 활성화되어 비리온을 재생함으로써 숙주세포를 파괴하고 방출되는 증식 단계로 구분될 수 있다.

감염 단계에서 HIV는 그 표면 당단백질이 리셉터인 CD4+를 통하여 T-림프구에 결합하는데, 이때 HIV는 숙주세포의 엔도시토시스(endocytosis) 작용에 의해 또는 숙주세포의 세포막과 HIV의 캡시드의 융합에 의해 숙주세포로 들어가게 된다.

숙주세포로 들어간 후에는, RNA-의존 DNA 폴리머라제, 리보뉴클라제 및 DNA-의존 DNA 폴리머라제의 활성을 갖는 HIV의 역전사효소에 의해 HIV의 RNA로부터 이중 가닥의 DNA가 형성되고, 이 이중 가닥의 DNA가 HIV의 인테그라제에 의해 숙주세포의 게놈으로 통합된다. HIV는 이렇게 숙주세포의 게놈으로 통합되어 휴면 상태로 있다가 특정 요인에 의하여 바이러스의 유전자가 활성화되면 전사 및/또는 번역을 통해 게놈 RNA와 폴리단백질의 형태(Gag, Gag-Pol 등)의 HIV 단백질의 전구체가 숙 주세포의 리보솜에서 합성된다. 이 폴리단백질은 HIV의 프로테아제에 의해 활성 형태로 분해되어 게놈 RNA와 함께 감염성 입자를 형성하게 된다.

현재 항HIV제로 이용 또는 연구되는 약물은 HIV 게놈에 의해 암호화되는 15개의 단백질 중 상기 역전사효소(RT)와 인테그라제 그리고 프로테아제를 표적으로 하고 있다.

지도부딘(Zidovudine), 디다노신(didanosine), 스타부딘(starvudine), 라미부딘(lamivudine), 잘시타빈(zalcitabine), 아바카비르 (abacavir), 네바리핀(nevaripine), 델라비르딘 (delavirdine), 에파비렌즈 (efavirenz) 등이 역전사효소 억제제이며, 사퀴나비르 (saquinavir), 인디나비르 (indinavir), 리토나비르 (ritonavir), 넬피나비르 (nelfinavir) 및 암프레나비르 (amprenavir) 등이 프로테아제의 억제제이다. 디케토산 화합물(Hazuda et al. Science 2000, 287, 646), 대한민국 특허 제0665919호 개시하는 4-옥소퀴놀린 화합물, 국제 공개특허 WO 2002/30931가 개시하는 아자- 또는 폴리 아자-나프탈레닐 카복스아미드(Aza- or polyaza-naphthalenyl carboxamides), 국제 공개특허 WO 2005/113562가 개시하는 시클릭 피리미디논 화합물 등이 인테그라제 억제제이다.

본 발명은 역전사효소 및 프로테아제의 억제 활성을 가지는 몇 가지의 플라보노이드 계열의 화합물을 개시한다.

플라보노이드 계열의 화합물로서는 아멘토플라본(amentoflavone)(유럽 특허 제1235230호), 플라본(flavone)(미국 특허 제0655523호), 고시페틴(gossypetin)(미국 특허 제0655523호), 헤스페리딘(hesperidin)(미국 특허 제 0655523호), 하이드록시플라본(hydroxyflavone)(미국 특허 제0655523호), 탄저레틴(tangeretin)(미국 특허 제0655523호), 아피게닌 유사체((apigenin 7-(4'-caffeoyl)-β-D-glucuronide)(대한민국 공개특허 제2005-0001900호) 등이 항HIV 활성을 가진다고 공지되어 있다.

본 발명의 목적은 플라보노이드 계열의 화합물을 이용한 항HIV제 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 플라보노이드 계열의 화합물을 이용한 HIV 역전사효소 억제제 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 플라보노이드 계열의 화합물을 이용한 HIV 프로테아제 억제제 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 기타의 목적이나 구체적인 양태는 이하에서 제시될 것이다.

상기 목적을 위하여, 본 발명자들은 하기 실시예에서 확인되는 바와 같이, 플라보노이드 계열의 화합물 중 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및 미리세틴이 HIV-1의 역전사효소 활성 및 HIV-1 프로테아제 활성을 저해하는 효과를 갖는가를 검증하였다.

그 결과, 위 네 가지 화합물 모두가 HIV-1의 역전사효소 및 HIV-1 프로테아제 모두를 저해하는 활성을 가짐을 확인할 수 있었고, 특히 HIV-1의 역전사효소에 대해서는 위 네 가지 플라보노이드 화합물 모두가 강력한 억제 활성이 있었으며, HIV-1 프로테아제에 대해서는 아피게닌, 스쿠텔라레인 그리고 캠프페롤이 상대적으로 억제 활성이 높았다.

본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것이다.

일 측면에 있어서, 본 발명은 항HIV제 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 항HIV제 조성물은 유효성분으로서 플라보노이드 계열 화합물 중 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴을 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, 상기 "항HIV"의 의미는 HIV의 감염 예방, HIV가 일으키는 AIDS와 같은 병리적 증상의 예방, 개선, 치료, 이러한 병리적 증상의 발병 지연을 포함하는 의미이다.

또한 본 명세서에서, 상기 "HIV"는 HIV 1형과 HIV 2형을 포함하는 의미이며, 바람직하게는 하기 실시예에서 HIV 1형 역전사효소와 HIV 1형 프로테아제가 사용되었다는 점에서 HIV 1형을 의미한다.

또한 본 명세서에서, 상기 "유효성분"의 의미는 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또한 본 명세서에서, 상기 아피게닌(apigenin)이란 5,7-디하이드록시-2-(4-하이드록시페닐)-4H-1-벤조피란-4-온(5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one)를 가리키는데, 식물체로부터 분리된 것 또는 합성된 것을 포함하는 의미이다. 아피게닌을 포함한다고 알려진 식물체로서는 파슬리, 아티초크, 바질, 샐러리, 케모마일, 감귤류 등을 들 수 있다.

또한 본 명세서에서, 상기 스쿠텔라레인(Scutellarein)이란 4',5,6,7-테트라하이드록시플라본(4',5,6,7-tetrahydroxyflavanone)을 가리키는데, 마찬가지로 식 물체로부터 분리된 것 또는 합성된 것을 포함하는 의미이다. 스쿠텔라레인은 한령(Scutellaria baicalensis Georgi.), 골무꽃, 자전초, 쉬땅나무(진주매) 등으로부터 분리될 수 있다.

또한 본 명세서에서, 상기 캠프페롤(Kaempferol)이란 3,4',5,7-테트라하이록시플라본(3,4',5,7-Tetrahydroxyflavone)을 가리키는데, 마찬가지로 식물체로부터 분리된 것 또는 합성된 것을 포함하는 의미이다. 캠프페롤은 사과, 둥굴레, 부추, 진다래, 산마늘, 쑥, 쑥부쟁이, 양파, 포도, 감귤류의 껍질 등으로부터 분리될 수 있다.

또한 본 명세서에서, 상기 미리세틴(Myricetin)은 3,5,7-트리하이드록시-2-(3,4,5-트리하이드록시페닐)-4H-1-벤조피란-4-온(3,5,7-Trihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one)을 가리키는데, 마찬가지로 식물체로부터 분리된 것 및 합성된 것을 포함하는 의미이다. 미리세틴은 포도, 베리류, 과일, 채소, 허브 등으로부터 분리될 수 있다.

한편 본 발명의 항HIV제 조성물은 그 유효성분인 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 항HIV 활성을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 포유동물 또는 사람에서, HIV가 일으키는 AIDS와 같은 병리적 증상의 예방, 개선, 치료, 또는 이러한 병리적 증상의 발병 지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 항HIV제 조성물은 그 유효성분인 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴을 포함하는 이외에, 항HIV 활성을 상승·보강할 수 있도록 항HIV 활성이 있다고 알려진 공지의 화합물, 백신 또는 조성물을 포함할 수 있다.

여기서 항HIV 활성이란 HIV 전사 억제 활성, HIV 인테그라제 억제 활성, HIV 프로테아제 억제 활성, HIV 감염(HIV 인체 유입) 억제 활성 및/또는 HIV에 의한 병리직 증상의 완화, 치료 또는 예방 활성을 의미한다.

상기 화합물, 백신 또는 조성물로서는 앞에서 예시한 바의 화합물 이외에, HIV 감염 억제 활성, 역전사효소 억제 활성, 인테그라제 억제 활성 및 병리적 증상의 완화 활성을 갖는 국제 공개특허 WO 2006/034643가 개시하는 조성물, 인테그라제 억제 활성을 갖는 대한민국 공개특허 제2002-0008944호가 개시하는 누리장나무( Clerodendron trichotomum)의 알콜 추출물, HIV에 의한 병리직 증상의 완화, 치료 또는 예방 활성을 갖는 대한민국 공개특허 제2002-0068299호 개시하는 리간드 분자, HIV 감염 예방 활성을 갖는 국제 공개특허 WO 1997/04005가 개시하는 사이클로스포린 유도체, 국제 공개특허 WO 2000/61067가 개시하는 백신 등을 들 수 있다.

본 발명의 항HIV제 조성물이 적용(처방)될 수 있는 대상은 원숭이, 영장류 등을 포함하는 포유동물 및 사람이며 특히 사람이 바람직하다.

HIV는 혈액 수혈, 체액의 교환, 외과 수술 등에 의해서 감염되는데, 본 발명의 항HIV제 조성물은 HIV의 감염 경로를 불문하고 적용될 수 있다.

다른 측면에 있어서, 본 발명은 유효성분으로서 플라보노이드 계열 화합물 중 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴을 포함하는 HIV의 역전사효소 억제제 조성물에 관한 것이다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 유효성분으로서 플라보노이드 계열 화합물 중 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴을 포함하는 HIV의 프로테아제 억제제 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서, 상기 "HIV의 역전사효소"는 HIV 1형 역전사효소와 HIV 2형 역전사효소를 포함하는 의미이며, 하기 실시예가 HIV 1형 역전사효소를 가지고 이루어졌다는 점에서 바람직하게는 HIV 1형 역전사효소를 의미하는 것으로 이해할 수 있다.

또한 본 명세서에서, 상기 "HIV 프로테아제 효소"는 HIV 1형 프로테아제와 HIV 2형 프로테아제를 포함하는 의미이며, 마찬가지로 바람직하게는 HIV 1형 프로테아제를 의미하는 것으로 이해할 수 있다.

상기에서 "유효성분"의 의미, 그리고 "아피게닌", "스쿠텔라레인", "캠프페롤" 및 "미리세틴"의 의미, 유효량, 적용(처방) 대상 등과 관련하여서는 전술한 바가 그대로 유효하다.

HIV의 역전사효소는 전술하였듯이, 숙주세포의 게놈 속으로 통합될 이중 가닥의 DNA의 제조에 필수적인 효소이다. 따라서 HIV의 역전사효소 활성이 억제되면 결과적으로 HIV의 복제가 억제될 수 있다. HIV의 역전사효소의 억제제로서 앞서 예시한 바의 화합물들은 항HIV제 또는 AIDS 치료제 용도로 승인된 화합물들이다.

HIV의 프로테아제는 HIV의 유전 물질로부터 전사·번역된 전구체인 폴리단백 질을 활성의 단백질로 전환시켜 감염성을 가지는 비리온의 생산에 필수적인 효소이다. HIV의 프로테아제의 활성이 억제되면 마찬가지로 HIV의 복제가 억제될 수 있으며, 결국 항HIV제 또는 AIDS 치료제 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 HIV 역전사효소 억제제 조성물은 유효성분으로서 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴 이외에, 앞서 예시한 바의 항HIV 억제 활성을 가지는 물질을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물(항HIV제 조성물, HIV 역전사효소 억제제 조성물 및 HIV 프로테아제 억제제 조성물)은 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효물질인 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다 의미이다.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등) 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제 (예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 경우에 따라서는 국소적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 껌류, 비타민 복합제, 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등으로 제조될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 유효성분인 아피게닌, 스쿠텔라레인, 캠프페롤 및/또는 미리세틴이 포함되는 것 이외에, 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 감미제, 사과, 레몬, 감귤 등의 과일이나 녹차잎, 둥굴레, 대잎 등의 차류에서 얻어진 풍미제, 카테킨, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤 등의 생리활성 성분, 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물 등의 미네랄 등이 또한 첨가될 수 있으며, 여타의 식품 첨가물이 첨가되어도 무방하다.

전술한 바와 같이 본 발명에 따르면 플라보노이드 계열의 화합물을 이용한 항HIV제 조성물, HIV 역전사효소 억제제 조성물, HIV 프로테아제 억제제 조성물을 제공할 수 있다.

이하 본 발명을 실시예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 아피게닌 , 스쿠텔라레인 , 캠프페롤 및 미리세틴의 HIV -1 역전사효소 활성 억제 실험

역전사효소(RT) 활성 억제 실험에 필요한 EnzChek Reverse Transcriptase Assay Kit E-22064는 모레큘러프로브사(Molecular Probes Inc, USA)로부터 구입하였고, 역전사효소(HIV-1형 역전사효소)는 앰비온사(Ambion, Applied Biosystems, Forster City ,CA, USA)로부터 구입하여 사용하였다.

1 ㎎/㎖ poly(A) ribonucleotide template와 50 ㎍/㎖ oligo d(T)16 primer를 같은 용량비율로 섞고 실온에서 1시간 동안 어닐링(annealing) 시켰다. 이것을 polymerization buffer (60 mM Tris-HCl, 60 mM KCl, 8 mM MgCl₂, 13 mM DTT, 100 μM dTTP, pH 8.1)로 200배 희석하여 역전사 반응용 annealing mixture로 사용하였다. annealing mixture 20㎕, test compound 2 ㎕, AMV RT 0.5 ㎕, 그리고 enzyme dilution buffer (50 mM Tris-HCl, 20% glycerol, 2 mM DTT, pH 7.6) 2.5 ㎕를 모두 microtube (500㎕)에 넣고, 25℃에서 30분 반응 후, 200 mM EDTA를 2 ㎕ 첨가하여 반응을 정지시켰다.

반응액을 전부 96-well microplate에 옮기고, 1 X TE buffer로 345배 희석된 PicoGreen 시약을 173 ㎕씩 첨가하였다. DNA 이중가닥 또는 RNA-DNA 혼성가닥은 PicoGreen 시약에 의해 구분된다. 3분 정도 실온에서 반응시킨 후 Fluorometer(Ex 485㎚, Em 520㎚)로 형광도를 측정하였고, RT 활성 저해율은 다음과 같이 계산하 였다.

저해율(%) = (1-(F_S-F_B)/(F_C-F_B)) X 100

F_B : 역전사효소(RT)를 넣지 않았을 때의 형광도(background 형광도)

F_C : 시료(저해제)가 없을 때의 형광도(정상적인 역전사효소 반응)

F_S : 시료(저해제)를 넣었을 때의 형광도

결과를 아래의 <표 1>에 나타내었다.

[표 1]

역전사효소 활성 저해율

상기 <표 1>은 네 가지 물질 모두 HIV-1의 역전사효소 억제 활성을 지니고 있음을 보여준다. 특히 아피게닌과 미리세틴의 경우가 역전사효소 억제 활성이 높았다.

<실시예 2> 아피게닌 , 스쿠텔라레인 , 캠프페롤 및 미리세틴의 HIV -1 프로테아제 활성 억제 실험

실험에 필요한 HIV-1 프로테아제(protease)는 Calbiochem(EMD Chemicals Inc., Darmstadt, Germany)으로부터 구입하여 사용하였다. 그리고, HIV-1 프로테아제의 활성을 측정하는 기질로는 fluorescence resonance energy transfer (FRET) peptide를 사용하였다. FRET peptide의 아미노산 서열은 전구체 Gag 단백질 상에 있는 HIV-1 프로테아제에 의한 분해부위 p17/p24를 모방해서 만들어진 것이다. FRET peptide는 HIV-1 프로테아제에 의해서 분해되면, 형광을 발산한다(SensoLyte^TM 490 HIV-1 Protease Assay Kit, AnaSpec Corporate, San Jose, CA 95131, USA).

재조합체 HIV-1 프로테아제 희석액 40㎕에 시료인 test compound 10㎕를 첨가하여 37℃에서 15분간 전 배양 시킨 다음, 같은 온도, 같은 시간 동안 전 배양시킨 HIV-1 프로테아제 기질 50㎕를 첨가하고, 30~60초 동안 서서히 완전하게 잘 섞은 후 즉시, Ex/Em=340±30㎚/490±30㎚에서 30분 동안 매 5분 간격으로 형광도를 측정하였다.

HIV-1 프로테아제 효소 활성 억제율은 다음식과 같이 계산하였다.

저해율(%) = (1-(F_S-F_B)/(F_C-F_B)) X 100

F_B : protease 효소를 넣지 않았을 때의 형광도(background 형광도)

F_C : 시료(저해제)가 없을 때의 형광도(정상적인 프로테아제 반응)

F_S : 시료(저해제)를 넣었을 때의 형광도

결과를 아래의 <표 1>에 나타내었다.

[표 2]

프로테아제 활성 저해율

상기 <표 2>는 네 가지 물질 모두 HIV-1의 프로테아제 억제 활성을 지니고 있음을 보여준다. 특히 아피게닌, 스쿠텔라레인 그리고 캠프페롤의 경우가 프로테아제 억제 활성이 높았다.

Claims

유효성분으로서 스쿠텔라레인을 포함하는 항HIV제 약제학적 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서,

상기 HIV는 HIV 1형인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서,

상기 스쿠텔라레인은 식물체로부터 분리된 것이고 그 식물체는 한령, 골무꽃, 자전초 및 쉬땅나무 중 하나인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서,

상기 스쿠텔라레인은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위로 조성물에 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
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