KR100897778B1 - 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 공액리놀레산을 포함하는 유산균 배양액 - Google Patents
헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 공액리놀레산을 포함하는 유산균 배양액 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100897778B1 KR100897778B1 KR1020070075897A KR20070075897A KR100897778B1 KR 100897778 B1 KR100897778 B1 KR 100897778B1 KR 1020070075897 A KR1020070075897 A KR 1020070075897A KR 20070075897 A KR20070075897 A KR 20070075897A KR 100897778 B1 KR100897778 B1 KR 100897778B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- linoleic acid
- conjugated linoleic
- pylori
- helicobacter pylori
- lactic acid
- Prior art date
Links
- 229940108924 conjugated linoleic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 75
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 58
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 41
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 29
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 title description 7
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims abstract description 91
- JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 9-cis,11-trans-octadecadienoic acid Chemical compound CCCCCC\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 0.000 claims abstract description 71
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 claims abstract description 29
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 19
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 12
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims 7
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims 7
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 claims 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 claims 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 claims 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 abstract description 29
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 25
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 16
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108010014632 NF-kappa B kinase Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 56
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 30
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 102000001284 I-kappa-B kinase Human genes 0.000 description 23
- 108060006678 I-kappa-B kinase Proteins 0.000 description 23
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 20
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 19
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 17
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 16
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 16
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 16
- 108010052419 NF-KappaB Inhibitor alpha Proteins 0.000 description 15
- 102000018745 NF-KappaB Inhibitor alpha Human genes 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 101100508533 Drosophila melanogaster IKKbeta gene Proteins 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 11
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 9
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 5
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 238000002337 electrophoretic mobility shift assay Methods 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 230000004950 I-kappaB phosphorylation Effects 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100022219 NF-kappa-B essential modulator Human genes 0.000 description 2
- 101710090077 NF-kappa-B essential modulator Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 206010013911 Dysgeusia Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 206010064147 Gastrointestinal inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-IMJSIDKUSA-N L-1,4-dithiothreitol Chemical compound SC[C@H](O)[C@@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101100476480 Mus musculus S100a8 gene Proteins 0.000 description 1
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- BFDMCHRDSYTOLE-UHFFFAOYSA-N SC#N.NC(N)=N.ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 Chemical compound SC#N.NC(N)=N.ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 BFDMCHRDSYTOLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KNYAHOBESA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] dihydroxyphosphoryl hydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)O[32P](O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KNYAHOBESA-N 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid trimethyl ester Natural products COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N beta-glycerol phosphate Natural products OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L beta-glycerolphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CC(CO)OOP([O-])([O-])=O GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011490 co-immunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 210000004922 colonic epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002884 effect on inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000003481 heat shock protein 90 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000021995 interleukin-8 production Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N sodium metavanadate Chemical compound [Na+].[O-][V](=O)=O CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019614 sour taste Nutrition 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000004206 stomach function Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000010692 trans-unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 101150080234 vacA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 229910000166 zirconium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
- A23V2250/18—Lipids
- A23V2250/186—Fatty acids
- A23V2250/1866—Conjugated Linoleic acid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
본 발명은 리놀레산을 공액 리놀레산 (conjugated linoleic acids)으로 전환시킬 수 있는 미생물을 리놀레산을 포함한 배지에서 배양하여 얻어지는 공액 리놀레산을 포함하는, 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 유산균 배양액 및 그 제조방법에 관한 것이다.
더 구체적으로, 본 발명은 유산균에 의해 생산되는 공액 리놀레산이 IKKγ와 Hsp90의 결합체의 해리를 촉진하여 염증 사이토카인인 인터루킨-8을 억제함으로써 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 위 상피세포에서 항염증 활성을 가진다는 발견에 기초하여, 이와 같은 공액 리놀레산을 포함하는, 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 유산균 배양액을 제공한다.
공액 리놀레산, NF-κB 키나제
Description
본 발명은 미생물에 의하여 생산된 공액 리놀레산을 포함하는 항염증효과를 갖는 유산균 배양액 및 그 제조방법에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 촉생 미생물로 알려진 유산균인 락토바실라이(Lactobacilli) 또는 비피도박테리아 (Bifidobacteria) 속에 속하는 박테리아를 리놀레산을 포함하는 배지에서 배양하여 생성되는 공액 리놀레산을 포함하는, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 감염에 의한 염증에 대한 항염증효과를 갖는 유산균 배양액 및 그 제조방법에 관한 것이다.
헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)는 만성 위염, 소화궤양, 위샘암종 및 위점막 관련 림프조직 (MALT) 림프종의 발병기전에서 중요한 역할을 하는 병원체이다. 사람 위 안에 H. 파일로리 (H. pylori)가 장기적으로 군체를 형성하면 IL (인터루킨)-8 같은 화학유인물질을 방출한다. 방출된 IL-8은 호중구가 위점막 으로 침투하도록 유도하여 만성 위염을 일으킨다.
한편, 핵인자 카파 비(nuclear factor-kappaB: NF-κB)는 염증, 세포생존 또는 사멸 및 세포주기와 같은 다양한 생물학적 과정 중요한 전사인자이다. NF-κB 이량체는 비활성 상태에서는 IκB라는 저해 단백질에 의하여 세포질 내에 저장된다. IκB 키나제 (IKK)는 IκB를 직접 포스포릴레이션 하는 것으로 알려져 있고, 그것은 유비퀴틴-매개 단백질분해를 수행함으로써 NF-κB 이량체를 방출시켜 핵으로 이동하도록 한다. Karin M 등은 Annu. Rev. Immunol. 2000; 18:621-663에서 IKK 복합체가 촉매 서브유닛인 IKK-α와 IKK-β 및 조절 서브유닛인 IKK-γ (NEMO, NF-κB 필수 조절자로도 알려짐) 세 개의 서브유닛을 함유하는 것을 기재하고 있다. IKK-α와 IKK-β는 IκB의 포스포릴레이션에 필수적이고, IKK-γ는 두 개의 키나제 이량체를 조립하여 트랜스-자기포스포릴레이션을 용이하게 하는 4량체 골격을 형성한다 (Chen ZJ et al., Cell, 1996; 84:853-862). IKK-γ가 키나제 활성에 필요하기는 하지만, 그 자체는 키나제는 아니고, IKK-γ는 아마도 키나제 복합체의 상류 활성인자와 함께 필수적인 단백질-단백질 상호작용을 매개하는 것으로 추측하고 있다. 최근, 히트쇼크 단백질 90 (Hsp90)이 IKK 복합체와 화학양론적으로 결합하는 것으로 알려졌고, 이 결합은 IKK가 안정화되고 활성화되고/또는 세포막으로 셔틀링하는 것에 기여할 것이다. Hsp90은 신호 분자들의 고유 보체의 안정성 및 작용을 조절하기 때문이다. 그러나, H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 반응하여 IKK 단백질과 Hsp90이 어떻게 상호작용하는지에 관한 정확한 기작은 아직 관찰되지 못했다.
본 발명에서 사용되는 용어인 '촉생물', '촉생제' 및 '촉생 미생물' '촉생 박테리아' 등은 잠재적으로 이로운 박테리아 또는 효모를 함유하는 식품 보조제 및 그 미생물 자체를 의미한다. 촉생 미생물로서 가장 일반적으로 사용되는 것은 유산균 (lactic acid bacteria)이다. 유산균은 락토스를 포함하는 당 및 다른 탄수화물을 젖산 ('유산'이라고도 통칭함)으로 전환하는 성질 때문에 식품산업에서 다년간 사용되고 있다. 젖산은 요거트와 같은 발효 유제품 특유의 신맛을 제공할 뿐 아니라 음식의 pH를 낮추어 다른 부패 원인균들이 성장할 수 있는 기회를 줄여 보존제로서의 기능도 한다.
락토바실러스 (Lactobacillus) 종들은 사람의 소화관에서 공생하며, 정상적인 위에서의 농도는 0 내지 103/mL로 다양하다. 내산성 생체이고, 다른 박테리아보다 위에서 더 오래 생존한다. 비피도박테리아 및 락토바실러스의 식이 균주는 위 환경에서 2 시간 동안 높은 비율 (> 80%)로 생존한다. 락토바실러스의 특정 균주는 박테리오신의 분비 또는 유기산의 생산을 통하여/또는 H. 파일로리 (H. pylori)가 위 상피세포에 부착하는 것을 저해하는 기작을 통하여 H. 파일로리 (H. pylori)에 대해 시험관 내 살박테리아 효과을 발휘한다. 또한, 락토바실러스의 몇몇 균주는 H. 파일로리 (H. pylori) 감염 동안 염증촉발성 키모카인 발현을 감소시키는 것으로 보고되어 있다. 그러나, 락토바실러스로부터 유도된, H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 대한 염증 반응을 억제하는 분자생물학적 기작에 관한 증거는 없었다.
락토바실라이(Lactobacilli) 및 비피도박테리아(Bifidobacteria) 종을 포함하여 촉생 효과를 갖는 것으로 생각되는 몇 종류의 박테리아 균주는 리놀레산을 공액 리놀레산 (CLA)으로 전화시킬 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어인 '공액 리놀레산 (Conjugated linoleic acid: CLA)'은 리놀레산의 다수의 이성질체의 부류를 통칭하는 용어이다. 공액 리놀레산은 반추동물의 고기와 유제품에서 주로 발견되는데, 이는 공액 리놀레산이 반추 동물의 앞위 (forestomach) 내의 미생물에 의하여 생산되기 때문이다. 인공적인 트랜스 지방과는 달리 건강에 해롭지 않은 것으로 보고되었다. 공액 리놀레산은 공액 시스템 (conjugated system)이기는 하지만, 미국에서는 공액 리놀레산에서의 공액 시스템은 식품 영양 규제 및 표시 체계에서 트랜스지방으로 간주하지 않는다. 공액 리놀레산은 둘 다 생물학적 활성을 가지는 시스-9, 트랜스-11 (c9,t11) 및 트랜스-10, 시스-12 (t10,c12) 형태로 가장 일반적으로 발견된다.
유산균으로 불리는 촉생 미생물들이 H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 의한 장내 염증 반응을 감소시킨다는 보고가 있어 왔다. 또한, 살아 있는 촉생물을 함유하는 식품과 약품이 종종 사용되고 있지만 그 효과는 미미하고, 연구자에 따라서는 촉생물의 함유가 헬리코박터 파일로리에 의한 염증에 유의한 효과가 없다는 연구 결과도 다수 있다.
대표적인 촉생 미생물인 락토바실라이(Lactobacilli)에 의하여 유도되는 위 염증 감소의 배경이 되는 분자생물학적 기작에 관하여는 알려진 것이 없었다. 따라서, 촉생 미생물에 의하여 위 염증이 분명히 감소하는지 여부와 염증 감소가 사실이라면 그 감소 효과를 갖는 구체적 물질 또는 조건을 확립할 필요가 있다.
본 발명자는 촉생 미생물이 헬리코박터 파일로리의 감염에 의한 염증을 감소시키는 분자생물학적 기작을 밝히고 여기에 직접 관여하는 물질의 검출 및 분석을 통하여 궁극적으로는 헬리코박터 파일로리의 감염에 의한 위 염증을 감소시킬 수 있는 방법을 강구하고자 하였다.
본 발명자는 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)와 같은 촉생 미생물의 배양 배지에 리놀레산을 첨가하여 배양하는 경우에 생산되는 공액 리놀레산이 헬리코박터 파일로리에 의한 염증을 유의하게 감소시킨다는 것을 발견하였다. 특히, 본 발명자는 이 같은 염증 감소의 분자생물학적 기작을 뒷받침하 는 근거를 실험적으로 검증하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다. 놀랍게도, 본 발명자는 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산되는 공액 리놀레산은 H. 파일로리 (H. pylori)에 감염된 사람 위 상피세포에서 IKK와 Hsp90 복합체의 해리를 통하여 NF-κB 활성 및 IL-8 발현을 감소시킨다는 사실을 발견하였다.
더 구체적으로, H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 위 상피세포의 Hsp90-IKK 결합체에 대한 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산되는 공액 리놀레산의 영향을 시험하였다. 공액 리놀레산은 IKKγ와 Hsp90로 이루어지는 결합체의 해리에 의하여 IKK 활성을 유의하게 감소시킨다. 이 현상은 IκBα 포스포릴레이션 및 NF-κB 활성화의 저하 둘 모두와 관련이 있고, 결과적으로 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 위 상피세포에서의 IL-8 발현을 야기한다.
그러므로, 본 발명의 기초가 되는 본 연구는 공액 리놀레산이 IKKγ-Hsp90 결합체의 해리를 통하여 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 위 상피세포에서 IL-8 발현과 NF-κB 활성화를 억제할 수 있다는 점을 포함하며, H. 파일로리 (H. pylori)에 의한 감염에 대한 염증 반응에 대항한 촉생 작용의 새로운 기작을 시사한다.
활성화된 IKK는 IκB 포스포릴레이션을 유도하고, 이는 NF-κB 활성화로 이어진다. 본 발명에서 기재하는 실시예에서는 공액 리놀레산을 함유하는 CM으로 처리하면, H. 파일로리 (H. pylori)에 의하여 유도되는 IKK 활성화를 저지하고, IL-8 발현을 감소시켰다는 것을 나타낸다. 이들 실시예의 실험 결과는 CLA가 H. 파일로리 (H. pylori)에 의한 감염에 의하여 유도된 위 염증의 신호경로에서 IKK 부위에 영향을 준다는 것을 시사한다. IκBα 포스포릴레이션으로 활성화되는 NF-κB 및 이어지는 유전자 발현에 관하여는, IKKα 및 IKKβ가 직접적으로 IκBα 포스포릴레이션에 관여하는 것으로 알려져 있다. IKKβ 녹아웃 세포에 관한 연구는, IKKβ가 염증촉발 자극에 반응한 IκB 포스포릴레이션에 불가결한 것임을 나타내었다 (Li ZW. et al., J Exp Med. 1999;189:1839-1845 참조). 한편, IKKα 녹아웃 세포는 리포폴리사카라이드 또는 시토카인에 대하여 반응하여 정상적인 IκB 포스포릴레이션 및 RelA 핵으로의 이동을 나타낸다 (Hu Y. et al., Science. 1999;284:316-320 참조). 본 발명의 실시예는 H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 의하여 유도되는 IκBα 포스포릴레이션이 IKKβ에 대한 siRNA에 의하여는 유의하게 저해되었지만, IKKα에 대한 siRNA는 κBα 포스포릴레이션에 거의 영향을 주지 않는다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 위 상피세포에서 IKKβ가 IKKα보다 H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 의하여 유도되는 IκBα 포스포릴레이션에 있어서 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다.
Hsp90는 신호전달 네트워크에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있고, IKK 복합체의 구성성분의 생합성을 용이하게 하는 측면과 키나제 복합체의 성숙 형태를 궁극적인 생화학적 작용 및 안정성을 허용하는 입체구조로 유지하는 측면 둘 다에서 핵심적인 역할을 한다. 최근에, 한 연구에서는 IKKγ가 결장 상피 세포에서 Hsp90과 강하게 결합하는 것을 보고하였다. 이 결과와 일치하여, 본 연구는 IKKα와 IKKγ는 Hsp90과 상호작용하지만, IKKβ는 MKN-45 위 상피세포에서 Hsp90과 상호작용하지 않았다. 그러므로 IKKβ는 MKN-45 위 상피세포에서 간접적으로만 결합하는 것으로 추측된다.
이와 궤를 같이하여, 최근의 한 연구에서는 H. 파일로리 (H. pylori)에 의하여 위 상피세포 감염이 Hsp90의 포스포릴레이션을 유도하고, Hsp90 저해제로 처리하면 IL-8 발현이 유의하게 하향조절되는 것을 보고하였다 (Yeo M. et al., Biochem Biophys Res Commun. 2004;320:816-824 참조).
이들 결과는, H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 반응한 염증반응의 신호 기작에 있어 Hsp90가 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다. 이 연구에서, IKKα는 H. 파일로리 (H. pylori) 감염된 HKN-45 세포에서의 IκBα 포스포릴레이션에 거의 영향을 주지 않았지만, IKKα와 IKKγ는 Hsp90과 강하게 상호작용하였다. 이들 결과를 고려하면, H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 위 상피세포에서 Hsp90가 IKKγ와 직접 결합한다는 추론이 가능하다. 이 연구의 실험들은 이 같은 가설을 증명하고 있다; IKKγ와 Hsp90 사이의 상호작용은 CLA를 포함하는 CM을 첨가함에 의하여 감소되었다. 동시에, CLA에 의하여 IKKγ와 Hsp90 사이의 결합이 방해된 결과, IL-8 mRNA 발현이 감소하였다. 이들 결과는, L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산되는 CLA가 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 MKN-45 위 상피세포에서 IKKγ와 Hsp90의 결합체의 해리를 유도한다는 것을 시사한다.
종래 몇몇의 임상적 시험에서 촉생물은 일반적으로 H. 파일로리 (H. pylori)를 박멸하지는 못하는 것으로 나타내지만, 군체의 밀도를 감소시킴으로써, 위 안의 H. 파일로리 (H. pylori) 농도를 낮게 유지시킨다. 한편, 촉생물에 의하여 발휘되는 항산화제 및 항염증 성질은 위벽 기능을 안정화하고 점막 염증을 감소시킨다. 본 발명에 따르면, 촉생물에 의하여 생산된 공액 리놀레산이 헬리코박터 파일로리 (H. pylori) 감염과 관련된 위 염증반응을 감쇠시킬 수 있다는 증거를 제공한다.
따라서, 본 발명은 리놀레산을 공액 리놀레산 (conjugated linoleic acids)으로 전환시킬 수 있는 유산균을 리놀레산을 포함한 배지에서 배양하여 얻어지는 공액 리놀레산을 포함하는, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 감염에 의한 염증을 감소시키는 유산균 배양액 및 그 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 한 양태에서는 리놀레산을 공액 리놀레산으로 전환시킬 수 있는 유산균을 리놀레산을 포함한 배지에서 배양하여 얻어지는 공액 리놀레산을 포함하는, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)에 의하여 유발된 염증을 감소시키는 유산균 배양액을 제공한다.
본 발명에서 사용하는 공액 리놀레산은 당 기술분야에서 통상적으로 사용되는 용어 그대로의 의미로서, 두 개의 이중 결합이 그 사이의 단일 결합과 형성하는 공액 시스템을 갖는 어떤 위치 및 구조 이성질체를 통칭한다. 시스-9, 트랜스-11 (c9,t11) 및 트랜스-10, 시스-12 (t10,c12) 형태가 가장 일반적으로 알려진 형태이지만, 촉생 미생물에 의하여 생산되는 어떠한 형태의 이성질체도 모두 여기에 포함된다.
본 발명에서 사용되는 공액 리놀레산을 리놀레산으로부터 전환하는 유산균은 이와 같은 목적으로 사용될 수 있는, 촉생 미생물로 일반적으로 알려진 어떠한 종도 포함한다. 바람직하게는, 미생물은 락토바실라이(Lactobacilli) 및 비피도박테 리아(Bifidobacteria)에 속하는 종이다.
본 발명의 다른 양태에서 공액 리놀레산은 세포를 제거한 세포 배양 상층액으로부터 얻어진다.
본 발명의 다른 양태에서는 (가) 리놀레산(linoleic acid)을 포함하는 배지에서 유산균을 배양하여 공액 리놀레산 (CLA)를 생산하는 단계; 및 (나) 상기 배양액을 수집하는 단계를 포함하는, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)에 의하여 유발된 염증을 감소시키는 유산균 배양액의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에서는 상기 단계 (나) 다음 단계로서, (다) 수집된 배양액에서 세포를 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 유산균 배양액의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 배지 중의 리놀레산을 공액 리놀레산으로 전환시키는 미생물에 의하여 생산된 공액 리놀레산을 포함하는 유산균 배양액이 헬리코박터 파일로리 감염에 기인하는 위 염증반응을 감쇠시킨다는 직접적 증거를 제공한다. 이와 같은 유산균 배양액을 유산균 발효유 등의 식품에 사용하는 경우 염증반응의 감쇠에 의하여 위벽 기능을 안정화하고 점막 염증을 감소시켜 궁극적으로 위의 기능을 회복시킬 수 있다. 나아가, 촉생물과 함께 사용되는 경우, 촉생물 고유의 항산화 효과 및 헬리코박터 파일로리 군체의 밀도를 감소시키는 효과가 더하여져 효과적인 위 염증의 제어가 가능하다.
재료 및 방법
<세포 배양, H. 파일로리 (H. pylori)균주 및 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산되는 공액 리놀레산의 평가>
MKN-45 위 상피 세포주를 10% 소 태아 혈청 (FBS, Gibco, Grand Island, NY, USA) 및 항생제(페니실린 100 유닛/ml 및 스트렙토마이신 100㎍/ml)로 보충된 RPMI-1640 배지, 37℃에서 5% CO2 하에서 유지하였다. CagA+ H. 파일로리 (H. pylori) 균주 60190 (ATCC 49503, vacA sla/ml)를 5% 말 혈청을 보충한 Brucella 육즙에서 미세호기적 조건 하에서 유지하였다. 박테리아를 3500 x g로 5분 동안 4℃에서 원심분리하고 포스페이트-완충된 식염수 (PBS)로 세척하였다. 560 nm 에서의 광학밀도 (OD 560)를 사용하여 박테리아 농도를 측정하여 4 x 107 CFU/ml H. 파일로리 (H. pylori)를 얻었다.
6-웰 플레이트의 MKN-45 세포를 공액 리놀레산 (CLA)을 함유하는 적응용 배지(CM: conditioned media)로 1 시간 동안 사전처리한 후, H. 파일로리 (H. pylori)를 MOI (multiplicity of infection)로 첨가하였다. 적응용 배지의 제조를 위하여 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)(ATCC 832)를 18 시간 동안 0.5 g/L 리놀레산 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA)을 함유하는 RPMI-1640에서 인큐베이션 하였다.
0.2 μm 주사기 필터를 통과시켜 생존 박테리아를 여과를 통하여 제거하고 적응용 배지 (CM)을 MKN-45 세포 위에 놓았다. CM의 단계적 100 배 희석액을 뇌-심 장 침출배지 상에 놓고 생존 박테리아가 존재하지 않음을 확인하였다.
Ewaschuk JB et al., J Nutr. 2006;136:1483-1487와 Lee HY et al., Biochim Biophys Acta. 2006;1761:736-744에 기재된 바와 같이 공액 리놀레산의 양을 측정하였다. L. 아시도필루스 (L. acidophilus)를 37℃에서 18 시간 동안 10 ml RPMI-1640 또는 Mann-Rogosa-Sharpe (MRS) 육즙에서 0.05% Tween-80 중에 현탁한 0.5 g/L 의 리놀레산의 존재 또는 부재 하에서 인큐베이션 하였다. 샘플을 3,500 x g로 15분 동안 원심분리하여 그것으로부터 상청액을 얻었다. 상청액으로부터 지질을 추출하기 위하여 24 ml의 2:1 의 클로로포름:메탄올 용액 및 8 ml의 0.88% NaCl을 배지 2 ml과 혼합한다. 혼합물의 하층부의 10 ml를 40℃, 질소 하에서 건조하고 헥산에서 재현탁한다. 샘플을 40 ㎕ 메틸 아세테이트 및 80 ㎕ 소듐 메톡시드와 함께 50℃에서 15분 동안 인큐베이션 함으로써 지방산 메틸 에스테르를 생산하였다. 메틸화된 지방산에 대하여, SP2560 컬럼 (Supelco)을 사용하여 Varian 3600 GC 상에서 가스 크로마토그래피를 수행하였다. Class-VP Chromatography Data System (version 4.2, Shimadzu Scientific Instruments)을 사용하여 적분 및 정량을 수행하였다.
<플라스미드 및 작은 간섭 RNA (siRNA)>
HA-태그된 IKK-α, IKK-β, 및 IKK-γ 구성체는 충남대학교 강민헐 박사로부터 제공받았다. 리포터 플라스미드인 pIL8-루시퍼라제, p2x NF-κB-루시퍼라제 및 pβ-액틴-루시퍼라제 전사 리포터는 Kagnoff 박사로부터 (University of California, San Diego) 제공받았다. 각각 IKK-α 및 IKK-β를 사일런싱 하기 위한 RNA 올리고뉴클레오티드 (5'-GCAGGCUCUUUCAGGGACA-3') 및 (5'-GUGAAGAGGUGGUGGUGAGC-3')와 3'-말단에 두개의 티미딘 잔기 (dTdT)를 갖는 사일런싱을 하지 않는 대조구 (5'-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3')를 그것의 대응하는 안티센스 RNA들과 함께 합성하고 어닐하였다 (QIAGEN, Hilden, Germany). Hirata Y. et al., Infect Immun. 2006;74:1452-1461에 기술된 바와 같이 실행하였다.
<트랜스펙션 및 리포터 검정>
RNA 간섭 실험에서, MKN-45 세포를 트랜스펙션 24시간 전에 조직배양 플레이트에 접종하여 30 내지 50% 컨플루언시에 이르도록 성장시킨다. siRNA 올리고뉴클레오티드를 100 nM 농도로 Lipofectamine Plus 시약 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 제조자의 지시에 따라 세포 내에 도입시켰다. siRNA 트랜스펙션 48 시간 후에 세포를 세척하고 실험을 수행하였다.
HA-태그된 IKK 구성체의 트랜스펙션에서는 Lipofectamine Plus 시약을 사용하여 30 ㎍의 플라스미드를 MKN-45 세포 내로 (약 1.8 x 106 개의 세포) 트랜스펙션 시켰다. 리포터 분석에서는, Lipofectamine Plus 시약을 사용하여 6-웰 디쉬의 세포를 1.5㎍의 플라스미드 DNA로 트랜스펙션 시켰다. Kim JM. et al., Eur J Immunol. 2006;36:2446-2456에 기술하는 바와 같이 실행하였다. 트렌스펙션된 세포를 48시간 동안 37℃에서 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 회수하고, 전체 세포 용해물을 생산하였다 (상기 문헌 참조). 제조자의 지시에 따라 (Tropix Inc., Bedford, MA, USA) 루시퍼라제 활성을 측정하였다. 루미노미터 (MicroLumat Plus, Berthold GmbH & Co. KG, Bad Wildbad, Germany)를 사용하여 10 초 동안 방사광을 정량하였다.
<실시간 PCR 및 ELISA 검정>
MKN-45 세포로부터의 전체 세포 RNA를 구아니디늄 티오시아네이트-페놀-클로로포름 방법 (Trizol; GIBCO BRL, Gaithersburg, MD, USA)에 의하여 세포로부터 추출하였다. IL-8 및 β-액틴 mRNA를 검출하기 위하여, ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (Perkin-Elmer Applied Systems, Foster City, CA, USA) 및 SYBR 녹생 형광 염료를 사용하여 실시간 PCR을 수행하였다 (Kim JM. et al., Infect Immun. 2007;75:3373-3381 참조). 제조자 (Applied Biosystems)가 추천하는 바와 같이 프로브, 시약 및 TaqMan 시토카인 유전자 발현 플레이트를 사용하였다.
배양물 상청액의 IL-8를 ELISA 방법에 의하여 검정하였다. IL-8 단백질을 측정하기 전에 상청액을 0.22-μm 필터를 통과하여 여과시켜 어떤 오염물질을 제거하였다. Quantikine immunoassay kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 사람 IL-8을 정량하였다.
<전기영동 이동도 변경 검정 (Electrophoretic mobility shift assay)>
Kim JM. et al., Am J Physiol - Gastrointest Liver. 2003;285:G1171-1180에서 기재하는 바와 같이 세포를 수확하여 핵 추출물을 제조하였다. 추출물 내의 단백질 농도를 Bradford 검정 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)에 의하여 측정하였다. 제조자의 지시에 따라 (Promega, Madison, WI, USA) 전기영동 이동도 변경 검정 (electrophoretic mobility shift assays (EMSA))를 수행하였다. 요약하면, 5 ㎍ 의 핵 추출물을 보존적 NF-κB 결합 부위에 대응하는 γ32P-표지된 올리고뉴클레오티드 프로브와 함께 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 결합한 DNA와 결합하지 않은 DNA 둘 다를 5% 천연 폴리아크릴아미드 겔 상에서 분석하였다 (상기 Kim JM. et al. 참조).
<면역 블롯 (Immunoblots)>
세포를 빙냉 PBS로 세척하고 0.5 ml/웰 용해 완충액 (150 mM NaCl, 20 mM Tris pH 7.5, 0.1% Triton X-100, 1 mM PMSF, 및 10 mg/ml 아프로티닌)에서 용해하였다. 6% 폴리아크릴아미드 미니겔 (Mini-PROTEIN II; Bio-Rad) 상에서 15-50 ㎍/레인으로 사이즈-분별한 후, 니트로셀룰로스 멤브레인 (공극 크기 0.1μm)에 전기영동 방법으로 이동시켰다. 일차 항체로서 마우스 항-인간 IκBα(Santa Cruz Biotechnology), IKK-α, IKK-β, IKK-γ, Hsp90 및 액틴 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) 항체 및 이차 항체로서 페르옥시다제-접합 항-마우스 IgG (Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA)를 사용하여 특이적 단백질을 검출하였다. 특이적으로 결합한 페르옥시다제를 증강 화학발광 (ECL system; Amersham Life Science, Buckinghamshire, England) 및 X-선 필름에 노출함에 의하여 검출하였다.
<면역침강법 (immunoprecipitation)>
면역침강 검정을 수행하기 위하여, 세포를 용해 완충액 (50 mM HEPES, pH 7.6, 150 mM NaCl, 0.1% NP-40, 5 mM EDTA, 0.5 mM 페닐메틸 설포닐 플루오라이드, 1 ㎍/ml 류펩틴, 1 ㎍/ml 아프로티닌 1 ㎍/ml 펩스타틴)에서 수집하였다. 세포 용해물을 적합한 항체 및 단백질 G-세파로스 비드와 함께 혼합하여 하룻밤 동안 4℃에서 인큐베이션하여 침전시켰다. 항-HA 및 항-플래그 항체를 Santa Cruz Biotechnology 및 Sigma로부터 각각 구입하였다. 변형된 IKK-γ 단백질을 검출하기 위하여, MKN-45 세포를 용균 완충액 (20 mM Tris, pH 7.6, 0.5% NP-40, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 3 mM EGTA, 2 mM DTT, 0.5 mM PMSF, 20 mM β-글리세롤 포스페이트, 1 mM 소듐 바나데이트, 1 ㎍/ml 류펩틴 및 10 mM N-에틸말레이미드)에서 용해시킨 후, 세포 용해물을 항-IKK-γ 항체 및 단백질 G-세파로스와 함께 인큐베이션하였다. 모든 면역침강물을 용해 완충액으로 네 차례 세척하였고, 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE) 샘플 완충액에서 끓인 후, 8% 폴리아크릴아미드 겔 상에서 분석하였다.
<시험관내 키나제 검정>
IκBα 포스포릴레이션에 대한 IKK 활성을, Cheon JH. et al., Inflamm Bowel Dis. 2006;12:1152-1161에 기재하는 바에 따라 면역복합체 키나제 검정법을 사용하여 검출하였다. 세포를 프로테아제 및 포르파타제 저해제를 함유하는 Triton 용해 완충액을 사용하여 용해하고, 세포 용해물을 14,000에서 10 분 동안 원심분리하였다. 전체 세포 추출물의 300 ㎍을 항-IKK-γ (Santa Cruz Biotechnology)/단백질-A 비드를 사용하여 면역침가하였고, 20 mmol/L의 Hepes (pH 7.7), 10 mmol/L의 MgCl2, 5 mmol/L의 디티오트레이톨, 50 mmol/L의 ATP 및 5 mCi의 [γ-32P] ATP (Amersham)을 함유하는 키나제 완충액 25 mL를 GST-IκBα 기질 (Upstate Biotechnology Inc., Lake Placid, NY, USA)과 함께 30℃에서 30분 동안 인큐베이션함에 의하여 키나제 반응을 수행하였다. 기질 단백질을 겔 전기영동으로 분별 분석하였고 포스페이트 삽입량을 오토라디오그래피에 의하여 평가하였다.
<통계학적 분석>
데이터는 각 실험의 평균 ± SEM으로서 표시한다. Wilcoxon의 rank sum 테스트가 통계학적 분석에서 사용되었다. 0.05 미만의 p-값은 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 한정하려는 의도는 아니다.
요약하면, 하기 실시예는 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산되는 공액 리놀레산이 IKKγ와 Hsp90의 결합체의 해리를 통하여 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 위 상피세포에서 항염증 활성을 가진다는 것을 증명한다. 이 공액 리놀레산의 활성은 H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 대한 염증반응의 저해에서 새로운 것이며, 이는 촉생물에 의하여 생산되는 공액 리놀레산이 숙주 방어 시스템에서 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다.
(실시예)
실시예
1: L.
아시도필루스
(
L.
acidophilus
)에 의한
공액
리놀레산
(
CLA
) 생산
L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산된 c9,t11 및 t10,c12-CLA의 양을 측정하기 위하여 가스 크로마토그래피를 수행하였다. L. 아시도필루스 (L. acidophilus)에 의하여 생산된 c9,t11 및 t10,c12-CLA의 양은 각각 927.6 ± 51.8 ㎍/mg 및 736.2 ± 32.6 ㎍/mg (평균 ± SEM, n=5)이었다.
실시예
2: L.
아시도필루스
(
L.
acidophilus
)에 의하여 생산된
CLA
를 함유하는 배양물
상청액은
H.
파일로리
(
H.
pylori
)로 감염된 위 상피세포에서
IL
-8 발현 및
NF
-κB 활성을 저해함
H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 MKN-45 세포는 감염되지 않은 세포보다 IL-8을 더 다량 분비하였다. 여기서는 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)-생산 CLA를 함유하는 CM으로 사전처리하면 투여량-의존적인 패턴으로 H. 파일로리에 의하여 유도되는 IL-8 분비가 유의하게 감소하였다 (도 1).
전사인자인 NF-κB는 H. 파일로리 감염에 의하여 유도되는 IL-8 발현을 조절하는 신호경로의 구성성분이다. 그러므로, MKN-45 세포에서 CLA가 과연 H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 의하여 유도되는 NF-κB 전사 활성을 저해할지 여부가 문제가 되었다. 도 2에서 나타나는 바와 같이, H. 파일로리 (H. pylori)는 NF-κB 신호를 자극하였고, CLA를 함유하는 CM의 첨가는 MKN-45 세포에서 NF-κB 활성을 저하시켰다. 동시에, H. 파일로리 (H. pylori)는 MKN-45 세포에서 IκBα 분해를 유도하는데, 이는 CM으로 사전처리된 세포에서는 유의하게 저해된다. 이와 같은 결과를 더욱 확인하기 위하여, NF-κB 및 IL-8 리포터 유전자에 대하여 루시퍼라제 검 정을 수행하였다. 도 3은 CLA를 함유하는 CM으로 사전처리된 경우, H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 MKN-45 세포에서 IL-8 및 NF-κB 전사 리포터의 활성화가 유의하게 저해되었다는 것을 나타낸다. 그러나, 리놀레산이 포함되지 않은 배지에서 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)를 배양하여 얻어진 CM은 IL-8 및 NF-κB 전사 리포터의 활성화를 유의하게 저해하지 않았다. 이들 결과는 L. 아시도필루스 (L. acidophilus)가 생산한 CLA를 함유하는 CM으로 사전처리하는 것은, H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 의하여 유도되는 NF-κB 활성화 및 IL-8 발현 같은 위 상피 염증 신호를 유의하게 저해함을 증명하였다.
실시예
3: H.
파일로리
(
H.
pylori
)는
MKN
-45 위 상피 세포에서
IKK
활성화를 유도하고, L.
아시도필루스
(
L.
acidophilus
)에 의하여 생산되는
공액
리놀레산을
함유하는 배양
상청액은
활성화된
IKK
신호를 저해함
NF-κB 활성화를 위한 주요 경로는 IKK의 활성화를 포함하며, 이는 IκB 분해로 이어진다. IKK에 대한 CM의 작용효과를 측정하기 위하여 IKK에 대한 시험관내 키나제 검정을 수행하였다. 도 4에서 나타내는 바와 같이, H. 파일로리 (H. pylori)로 MKN-45 세포를 감염시키면 IKK 활성이 강하게 증가하고, CLA를 함유하는 CM으로 사전처리하는 경우에는 H. 파일로리 (H. pylori)에 의하여 유도되는 이 같은 IKK 활성화가 유의하게 감소하였다.
IKKα와 IKKβ가 IκBα 포스포릴레이션 및 NF-κB 활성화에 필수적이므로, MKN-45 위 상피 세포가 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염되었을 때 IKK의 어떤 서브유닛이 IκBα 포스포릴레이션에 관여하는지를 알아내는 것이 필요하다. 도 5A에 나타내고 있는 바와 같이, IKKβ에 대한 siRNA는 H. 파일로리 (H. pylori)에 의하여 유도되는 IκBα 포스포릴레이션을 극적으로 감소시켰다. 반면, IKKα에 대한 siRNA는 H. 파일로리 (H. pylori) 감염에 의하여 유도되는 IL-8 생산을 유의하게 감소시키기는 하지만, IKKα에 대한 siRNA는 IκBα 포스포릴레이션에 거의 영향을 주지 않는 것으로 나타났다 (도 5B).
실시예
4:
Hsp90
은
MKN
-45 위 상피세포에서
IKK
단백질과 결합함
H. 파일로리 (H. pylori)는 위 상피세포에서 Hsp90의 포스포릴레이션을 유도하는 것으로 알려져 있다. 또한, Hsp90는 IKKα와 IKKβ의 키나제 도메인과 직접 결합하며, 이 도메인들은 IKK의 안정화, 활성화 및/또는 위치이동에 기여한다. 이들 사실에 기초하여, Hsp90이 CM에 의하여 유도되는 MKN-45 세포에서의 IKK 활성 하향조절을 조절하는데 작용하는지 여부에 관한 문제가 발생한다. 우선, IKKα, IKKβ 및 IKKγ 각각의 단백질을 세포에서 과다발현하였을 때, MKN-45 세포에서 Hsp90과 IKK 단백질 사이의 상호작용을 시험하였다. 흥미롭게도, 이 실험의 결과는 IKKβ는 Hsp90와 직법 상호작용하지 못한다는 결과를 나타내었고 (도 6), 이는 MKN-45 세포에서 IKKβ와 Hsp90 사이의 상호작용은 아마도 간접적임을 나타낸다. 반대로, IKKα 및 IKKγ 각각은 공동-면역침강 검정에서 Hsp90과 강하게 상호작용하였다 (도 6).
실시예
5: (
L.
acidophilus
)에 의하여 생산되는
CLA
를 함유하는 배양물
상청액은
H.
파일로리
(
H.
pylori
)로 감염된
MKN
-45 세포에서
Hsp90
와
IKK
γ 결합체의 해리를 유도함
IKK 단백질과 Hsp90 사이의 상호작용이 CLA를 함유하는 CM으로 처리함에 의하여 변화될 수 있는지에 관하여 알아보기 위하여, CM으로 처리된 H. 파일로리 (H. pylori)로 감염된 MKN-45 세포를 용해시키고 IKKγ를 사용하여 면역침강을 수행한 후, Hsp90 및 IKK 단백질에 대하여 면역블롯 분석을 수행하였다. 도 7A의 상부 패널에서 나타내는 바와 같이, CM으로 처리 30분 후에, IKKγ와 Hsp90 사이의 상호작용이 감소하였다. 도 7A의 나머지 세 개의 하부 패널은 항-IKKα, 항-IKKβ 및 항-IKKγ 항체를 사용하는 경우, 동일한 양의 IKK 단백질이 각 샘플에 대하여 침강한 것을 나타낸다. 이 실험에서는 IL-8 mRNA에 대하여 실시간 PCR을 수행하였다. 이 실험의 결과는, CM을 함유하는 CLA를 첨가하면, IL-8 mRNA의 상향조절된 발현이 유의하게 감소하는 것을 나타내었다 (도 7B).
도 1은 헬리코박터 파일로리로 감염된 MKN-45 위 상피 세포에 의한 IL-8 분비에 대한 공액 리놀레산을 함유하는 적응배지의 영향을 나타내는 그래프이다. MKN-45 위 상피 세포는 공액 리놀레산을 함유하는 적응배지로 1 시간 동안 사전처리된 후 헬리코박터 파일로리와 혼합하여 24 시간 동안 인큐베이션 하였다. 배양 상층액 내의 IL-8 단백질 농도가 ELISA로 측정되었다. 데이터는 평균 ± SEM (n=5)이다. 별모양은 적응 배지 처리하지 않은, 헬리코박터 파일로리로 감염된 세포를 나타내고, 검은 색 원은 헬리코박터 파일로리로 감염된 경우, 흰색 원은 비감염 대조구에서의 IL-8 단백질 농도이다.
도 2는 헬리코박터 파일로리로 감염된 MKN-45 위 상피 세포에서의 NF-κB 활성화 및 IκB 해리를 나타낸다. 공액 리놀레산 (20%)을 포함하는 적응 배지로 1 시간 동안 사전처리된 MKN-45 세포를 1시간 동안 헬리코박터 파일로리와 혼합하였다. NF-κB DNA 결합 활성을 EMSA로 평가하였다. 동일한 조건에서 이와 동시에 존재하는 IκBα 및 액틴의 세포 내 농도에 대한 면역블롯을 각 EMSA 아래에 제시하였다. 결과는 다섯 차례 이상의 실험 결과의 대표적인 예이다.
도 3은 헬리코박터 파일로리로 감염된 MKN-45 위 상피 세포에 의한 리포터 유전자 발현에 대한 공액 리놀레산을 함유하는 적응배지의 영향을 나타내는 막대 그래프이다. MKN-45 세포를 pIL8-, 또는 p2x NF-κB-루시퍼라제 전사 리포터로 트랜스펙션 시켰다. 48시간 후에, 트랜스펙션된 세포를 공액 리놀레산을 함유하는 적응배지 (20%) 또는 공액 리놀레산을 함유하지 않는 적응배지 (20%)로 1 시간 동 안 사전처리한 후, 헬리코박터 파일로리와 혼합하여 2 시간 동안 (NF-κB) 또는 8 시간 동안 (IL8) 인큐베이션하였다. 데이터는 비자극 대조구에 대한 루시퍼라제 활성을 평균 인덕션 배수 ± SEM (n=7)로 나타내었다. 각 실험에 대하여, 자극하지 않은 대조구에 대한 β-액틴 리포터 유전자 활성의 평균 인덕션 배수는 비교적 일정하였다.
* P < 0.05 헬리코박터 파일로리 단독에 비교함.
도 4는 헬리코박터 파일로리로 감염된 MKN-45 위 상피 세포에서 공액 리놀레산에 의하여 IKK 활성이 억제되는 것을 나타낸다. MKN-45 세포를 공액 리놀레산 (20%)을 포함하는 적응 배지로 1 시간 동안 사전처리한 후 30분 동안 헬리코박터 파일로리와 혼합하였다. 전체 세포 추출물을 IKK-γ/단백질-A 비드를 사용하여 면역침전 수행한 후, 기질로서 글루타티온-S-트랜스퍼라제-IκB를 사용하여 키나제 반응을 수행하였다. 기질 단백질을 겔 전기영동으로 분석하고 포스퍼레이트 통합을 오토래디오그래피 및 PhosphorImager 분석을 사용하여 측정하였다. 코마시 블루 염색 결과는, 동일한 양이 로딩되었음을 입증한다(하부 패널). 나타낸 결과는 세 차례의 독립적 실험의 대표적 예이다.
도 5은 IKK가 헬리코박터 파일로리에 의한 IκBα의 포스포릴레이션에 관여함을 나타낸다. MKN-45 세포를 대조군 또는 각각의 IKK에 대한 siRNA로 48 시간 동안 처리하였다. siRNA로 트랜스펙션된 세포를 공액 리놀레산 (20%)을 포함하는 적응 배지로 1 시간 동안 사전처리한 후, 1 시간 동안 헬리코박터 파일로리와 혼합하였다. 도 5a는 표시된 항체로 면역블롯에 의하여 세포 용해물을 분석한 결과를 나타낸다. 결과는 세 차례 실험의 한 대표적 예이다. 도 5b는 헬리코박터 파일로리를 첨가하고 18 시간 경과 후에 얻어진 배양 상층액 내의 IL-8의 단백질 농도를 ELISA에 의하여 측정한 값을 표시한 그래프이다. 데이터는 평균 ± SEM (n=5)이다. 별모양은 트랜스펙션하지 않은, 헬리코박터 파일로리로 감염된 세포와 유의하게 다른 값을 나타낸다. (P < 0.05)
도 6은 MKN-45 위 상피 세포에서 Hsp90이 IKK 복합체와 결합하는 것을 나타낸다. MKN-45 세포를 HA-태그된 IKK-α, IKK-β, 및 IKK-γ 발현 플라스미드와 프래그-태그된 Hsp-90 발현 플라스미드로 트랜스펙션시켰다. Hsp90와 IKK-γ를 포함하는 면역침전물은 항-플래그 및 항-HA 항체를 사용하여 제조하였고, 면역침전물을 항-HA 및 항-플래그 항체를 사용하여 웨스턴 블롯에 의하여 분석하였다. 면역침전의 효율을 항-플래그 및 항-HA 항체 (각각 하부 패널)를 사용하여 측정하였다. 각 샘플로부터 1%의 세포 추출물을 단백질 인풋에 대한 대조구로서 사용한 웨스턴 블롯의 결과는 각 샘플에서 유의한 차이를 보이지 않았다. 결과는 세 차례의 독립적 실험의 대표적 예이다.
도 7은 락토바실러스 아시도필루스에 의하여 생산되는 공액 리놀레산이 헬리코박터 파일로리로 감염된 MKN-45 세포에서 Hsp90과 결합된 IKK-γ를 변화시킨다는 것을 나타낸다. 도 7a에서는 MKN-45 세포를 MKN-45 세포를 공액 리놀레산 (20%)을 포함하는 적응 배지로 1 시간 동안 사전처리한 후 각각 표시된 시간 동안 헬리코박터 파일로리와 혼합하였다. 각 샘플로부터의 세포추출물을 항-IKK-γ 항체를 사용하여 면역침전하였다. 면역침전물을 항-Hsp90, 항-IKK-α, 항-IKK-β, 및 항-IKK- γ 항체를 사용하여 웨스턴 블롯에 의하여 분석하였다. 단백질 인풋에 대한 대조구로서 각 샘플로부터의 세포 추출물 1%를 사용한 웨스턴블롯은 각 샘플에서 유의한 변화를 나타내지 않았다. 나타난 결과는 적어도 세 차례의 독립적인 실험의 대표적인 예이다. 도 7b는 공액 리놀레산 (20%)을 포함하는 적응 배지로의 처리가 헬리코박터 파일로리로 유도되는 IL-8 mRNA 상향조절을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 배양 및 감염 조건은 7a에서와 동일하다. IL-8 농도는 실시간 PCR에 의하여 검출하였다. 데이터는 감염되지 않은 대조구에 비교한 IL-8 mRNA 전사체 농도의 상대적 증가 배수로 나타낸다. (평균 ± SEM, n=5) 각 군에서β-액틴 mRNa 농도는 비교적 일정하였다. * P < 0.05 헬리코박터 파일로리 단독에 비교함.
Claims (7)
- 리놀레산(linoleic acid)을 공액 리놀레산 (conjugated linoleic acids)으로 전환시킬 수 있는 유산균을 리놀레산을 포함한 배지에서 배양하여 얻어지는 공액 리놀레산을 포함하는, 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증 감소를 위한 식품 첨가제로서, 상기 염증 감소는 공액 리놀레산이 IKKγ와 Hsp90의 결합체의 해리를 촉진하여 인터루킨-8을 억제함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 식품 첨가제.
- 제 1 항에 있어서, 유산균은 락토바실라이(Lactobacilli) 또는 비피도박테리아(Bifidobacteria) 속에 속하는 박테리아인 것을 특징으로 하는 식품 첨가제.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 유산균 배양액은 세포를 제거한 것을 특징으로 하는 식품 첨가제.
- 삭제
- (가) 리놀레산을 공액리놀레산으로 전환시킬 수 있는 유산균을 리놀레산을 포함하는 배지에서 배양하여 공액 리놀레산을 생산하는 단계; 및(나) 상기 배양 후 배지를 수집하는 단계를 포함하는, 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증 감소를 위한 식품 첨가제의 제조방법으로서, 상기 염증 감소는 공액 리놀레산이 IKKγ와 Hsp90의 결합체의 해리를 촉진하여 인터루킨-8을 억제함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증 감소를 위한 식품 첨가제의 제조방법.
- 제 5 항에 있어서, (다) 수집된 배양액에서 세포를 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증 감소를 위한 식품 첨가제의 제조방법.
- 제 5 항 또는 제 6 항에 있어서, 유산균은 락토바실라이(Lactobacilli) 또는 비피도박테리아(Bifidobacteria) 속에 속하는 박테리아인 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증 감소를 위한 식품 첨가제의 제조방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070075897A KR100897778B1 (ko) | 2007-07-27 | 2007-07-27 | 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 공액리놀레산을 포함하는 유산균 배양액 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070075897A KR100897778B1 (ko) | 2007-07-27 | 2007-07-27 | 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 공액리놀레산을 포함하는 유산균 배양액 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20090011880A KR20090011880A (ko) | 2009-02-02 |
| KR100897778B1 true KR100897778B1 (ko) | 2009-05-15 |
Family
ID=40682950
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020070075897A KR100897778B1 (ko) | 2007-07-27 | 2007-07-27 | 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 공액리놀레산을 포함하는 유산균 배양액 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100897778B1 (ko) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190037926A (ko) | 2017-09-29 | 2019-04-08 | 서울프로폴리스 주식회사 | 원산지가 다른 프로폴리스 추출물을 혼합 사용하는 프로폴리스의 사용방법 및 프로폴리스를 유효성분으로 하는 건강기능식품용 조성물 |
| KR20190037920A (ko) | 2017-09-29 | 2019-04-08 | 서울프로폴리스 주식회사 | 프로폴리스를 포함하는, 위염 및 헬리코박터 파일로리 억제를 위한 조성물 |
| WO2022070052A1 (en) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | Alma Bio Therapeutics | Nucleic acid therapy for differential modulation of host microflora |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100470460B1 (ko) * | 2003-01-09 | 2005-02-05 | 대한민국 | 씨엘에이를 생산하는 락토바실러스 퍼멘텀 및 이를 이용한다량의 씨엘에이를 함유하는 배양액 제조방법 |
| KR20050109928A (ko) * | 2003-01-30 | 2005-11-22 | 바이오가이아 에이비 | 유산균으로부터 유래된 소염 활성 |
-
2007
- 2007-07-27 KR KR1020070075897A patent/KR100897778B1/ko not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100470460B1 (ko) * | 2003-01-09 | 2005-02-05 | 대한민국 | 씨엘에이를 생산하는 락토바실러스 퍼멘텀 및 이를 이용한다량의 씨엘에이를 함유하는 배양액 제조방법 |
| KR20050109928A (ko) * | 2003-01-30 | 2005-11-22 | 바이오가이아 에이비 | 유산균으로부터 유래된 소염 활성 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190037926A (ko) | 2017-09-29 | 2019-04-08 | 서울프로폴리스 주식회사 | 원산지가 다른 프로폴리스 추출물을 혼합 사용하는 프로폴리스의 사용방법 및 프로폴리스를 유효성분으로 하는 건강기능식품용 조성물 |
| KR20190037920A (ko) | 2017-09-29 | 2019-04-08 | 서울프로폴리스 주식회사 | 프로폴리스를 포함하는, 위염 및 헬리코박터 파일로리 억제를 위한 조성물 |
| WO2022070052A1 (en) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | Alma Bio Therapeutics | Nucleic acid therapy for differential modulation of host microflora |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20090011880A (ko) | 2009-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cox et al. | Nonhuman primates and translational research—cardiovascular disease | |
| Yeo et al. | Influence of gastrointestinal stress on autoinducer-2 activity of two Lactobacillus species | |
| Löhr et al. | Polyphenols from Myrothamnus flabellifolia Welw. inhibit in vitro adhesion of Porphyromonas gingivalis and exert anti‐inflammatory cytoprotective effects in KB cells | |
| KR20190100266A (ko) | Cd8+ t-세포들의 유도를 위한 조성물 및 방법 | |
| Choi et al. | DHA suppresses Prevotella intermedia lipopolysaccharide-induced production of proinflammatory mediators in murine macrophages | |
| Mellits et al. | Activation of the transcription factor NF-κB by Campylobacter jejuni | |
| Narimiya et al. | Nrf2 activation in osteoblasts suppresses osteoclastogenesis via inhibiting IL-6 expression. | |
| Srisukchayakul et al. | Study on the effect of citric acid adaptation toward the subsequent survival of Lactobacillus plantarum NCIMB 8826 in low pH fruit juices during refrigerated storage | |
| Kim | Curcumin suppresses the production of interleukin-6 in Prevotella intermedia lipopolysaccharide-activated RAW 264.7 cells | |
| Matsui et al. | Protective efficacy of a hydroxy fatty acid against gastric Helicobacter infections | |
| Jeon et al. | Bacterial flagellin induces IL-6 expression in human basophils | |
| Hoffmann et al. | Lactobacillus reuteri 100-23 Transiently Activates Intestinal Epithelial Cells of Mice That Have a Complex Microbiota during Early Stages of Colonization13 | |
| KR100897778B1 (ko) | 헬리코박터 파일로리 감염에 의한 염증을 감소시키는 공액리놀레산을 포함하는 유산균 배양액 | |
| Takeda et al. | Lactobacillus paracasei strain 06TCa19 suppresses inflammatory chemokine induced by Helicobacter pylori in human gastric epithelial cells | |
| Kim et al. | Conjugated linoleic acids produced by Lactobacillus dissociates IKK-γ and Hsp90 complex in Helicobacter pylori-infected gastric epithelial cells | |
| Feng et al. | Helicobacter pylori promote inflammation and host defense through the cagA‐dependent activation of mTORC1 | |
| Zhang et al. | Lactobacillus plantarum CQPC06 Activity Prevents Dextran Sulfate Sodium‐Induced Colitis by Regulating the IL‐8 Pathway | |
| Kim et al. | Up‐Regulation of Inducible Nitric Oxide Synthase and Nitric Oxide in Helicobacter pylori‐Infected Human Gastric Epithelial Cells: Possible Role of Interferon‐γ in Polarized Nitric Oxide Secretion | |
| Ghazisaeedi et al. | A virulence factor as a therapeutic: the probiotic Enterococcus faecium SF68 arginine deiminase inhibits innate immune signaling pathways | |
| Gunyakti et al. | Investigation of the potential use of Lactobacillus gasseri originated from human breast milk as food additive | |
| Zhang et al. | Regulatory peptides modulate adhesion of polymorphonuclear leukocytes to bronchial epithelial cells through regulation of interleukins, ICAM-1 and NF-κB/IκB | |
| KR102673448B1 (ko) | 젖산균, 이의 방법 및 용도 | |
| CN114164142A (zh) | 具有缓解高脂膳食引起的非酒精性脂肪肝功能的植物乳杆菌q16 | |
| Corl et al. | Platelet activating factor production and proinflammatory gene expression in endotoxin-challenged bovine mammary endothelial cells | |
| Chen et al. | Regulation of the Lactobacillus strains on HMGCoA reductase gene transcription in human HepG2 cells via nuclear factor-κB |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130410 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140401 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |