KR100880298B1 - ３-β-Ｄ-리보푸라노실티아졸로[４,５-ｄ]피리미딘뉴클레오시드 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘 뉴클레오시드, 및 상기 화합물을 포함하는 면역조절 활성을 갖는 약학적 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 화합물 및 조성물의 치료 또는 예방 용도, 및 유효량의 상기 화합물을 투여하는 본 명세서에서 설명된 질환 및 질병의 치료 방법에 관한 것이다.

3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘 뉴클레오시드, 면역 조절, C형 간염

Description

３-β-Ｄ-리보푸라노실티아졸로[４,５-ｄ]피리미딘 뉴클레오시드 및 이의 용도 {3-β-D-RIBOFURANOSYLTHIAZOLO[4,5-d]PYRIDIMINE NUCLEOSIDES AND USES THEREOF}

본 출원은 미국 시민이면서 거주자인 데브런 알 애버렛, 스티븐 이. 웨버, 조지프 알 레넉스, 에릭 제이 류든 및 데이빗 엘. 클락의 명의로 2004년 6월 7일자로 PCT 국제 특허 출원되었다.

발명의 분야

본 발명은 면역조절 활성을 갖는 3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘 뉴클레오시드 및 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 화합물 및 조성물의 치료적 또는 예방적 용도, 및 유효량의 상기 화합물을 투여하여 본 명세서에 기재된 질환 및 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다.

발명의 배경

최근 수십년간, D- 및 L-푸린 뉴클레오시드 유사체의 가능한 치료적 용도의 연구에 상당한 노력을 기울여 왔었다. 다수의 뉴클레오시드 유사체가 현재 HIV 역전사효소 억제제 (AZT, ddI, ddC, d4T 및 3TC)를 비롯한 항바이러스 약물로서 시판되고 있다.

또한, 다양한 D- 및 L-푸린 뉴클레오시드 유사체가 면역조절제를 찾고자 조사되어 왔었다. 예를 들면 7- 및/또는 8-위치에 치환체를 갖는 구아노신 유사체는 면역계를 자극하는 것으로 밝혀졌다. 문헌[Reitz et al., J. Med. Chem., 37, 3561-78 (1994); Michael et al., J. Med. Chem., 36, 3431-36 (1993)]. 또다른 연구에서, Krenitsky et al.의 미국 특허 제5,821,236호에는 종양 치료에 유용한 아라비노푸라노실 푸린 유도체의 6-알콕시 유도체가 개시되어 있다. 또한, Krenitsky et al.의 미국 특허 제5,539,098호에는 2-아미노-6-메톡시-9-(β-D-아라비노푸라노실)-9H-푸린의 5'-O-프로피오닐 및 5'-O-부티릴 에스테르를 비롯한 대상 포진 바이러스의 억제제가 보고되어 있다. 7-데아자구아노신 및 유사체는 세포 배양액에서의 항바이러스 성질이 결여되어 있기는 하나, 이들 화합물은 마우스에게서 다양한 RNA 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 3-데아자구아닌 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 특정의 DNA 및 RNA 바이러스에 대한 상당한 광범위 항바이러스 활성을 나타낸다. 문헌[Revankar et al., J. Med. Chem., 27, 1489-96 (1984)]. 특정의 7- 및 9-데아자구아닌 C-뉴클레오시드는 Semliki Forest 바이러스의 치사 접종에 대한 보호 효과를 갖는 것으로 나타났다. 문헌[Girgis et al., J. Med. Chem., 33, 2750-55 (1990)]. Robins et al.의 미국 특허 제4,328,336호에는 유의적 항종양 활성을 갖는 것으로 입증된 소정의 6-설펜아미드 및 6-설핀아미드 푸린 뉴클레오시드가 개시되어 있다.

Robins et al.의 미국 특허 제5,041,542호에는 BDF1 마우스에서의 L1210에 대한 치료에 효과적인 특정의 피리미도[4,5-d]피리미딘 뉴클레오시드가 개시되어 있다. 이러한 특정의 뉴클레오시드는 이의 면역조절제로서의 역할의 결과라는 것을 시사한다. 문헌[Bonnet et al., J. Med. Chem., 36, 635-53 (1993)]. 또한, Wang et al.의 국제 특허 출원 공개 공보 제WO98/16184호에는 푸린 L-뉴클레오시드 화합물 및 이의 유사체가 감염, 감염증, 신생물, 자가면역 질환을 치료하거나 또는 면역계의 양상을 조절하는데 사용되는 것으로 개시되어 있다. 또한, Robins et al.의 미국 특허 제5,041,426호 및 제4,880,784호에는 Semliki Forest 바이러스에 대한 생체내 활성 및 생쥐 비장 세포 증식을 비롯한 유의적인 면역활성을 나타내는 3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘이 개시되어 있다.

면역조절의 가능한 표적 중 하나는 Th1 및 Th2 림포킨의 자극 또는 억제를 포함한다. 유형 1 (Th1) 세포는 인터류킨 2 (IL-2), 종양 괴사 인자(TNFα) 및 인터페론 감마(IFNγ)를 생성하며, 이들은 주로 세포 매개 면역, 예컨대 지연형 과민 및 항바이러스 면역에 관여한다. 유형 2 (Th2) 세포는 인터류킨, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 및 IL-13을 생성하며, 체액 면역 반응, 예컨대 알러지항원에 대한 반응에서 나타나는 것을 보조하는데 주로 관여하게 된다. 예를 들면 문헌[Mosmann, Annu. Rev. Immunol, 7, 145-73 (1989)]. D-구아노신 유사체는 림포킨 IL-1, IL-6, INFα 및 TNFα(간접적)에 대해 시험관내(Goodman, Int. J. Immunopharmacol, 10, 579-88 (1988); Goodman의 미국 특허 제4,746,651호) 및 생체내(Smee et al., Antiviral Res., 15, 229 (1991); Smee et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 33, 1487-92 (1989))에서 다양한 효과를 가져오는 것으로 나타났다. 그러나, T 세포에서 유형 1 또는 유형 2 시토킨을 직접적으로 조절 하는 D-구아노신 유사체, 예컨대 7-티오-8-옥소구아노신의 능력은 유효하지 않았거나 설명되지 않았다.

또한, 다수의 푸린 뉴클레오시드 유사체의 경구 투여는 산성 또는 알칼리 조건 또는 효소의 작용의 결과로서 불량한 흡수, 불량한 용해도 또는 소화관에서의 분해 및/또는 이들 현상의 조합으로 인한 곤란을 겪게 되는 것으로 알려졌다. 그래서, 면역계의 양상을 조절하는데 사용되는, 경구 이용율, 용인성 및 투여가 개선된 푸린 뉴클레오시드 유사체에 대한 요구가 존재하고 있다.

발명의 개요

본 발명은 면역조절제로서 유용한 후술하는 3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘 뉴클레오시드, 이의 약학적으로 허용되는 전구약물, 이의 약학적 활성 대사물, 이의 약학적으로 허용되는 염 및 이의 약학적으로 허용되는 용매화물 (이들 화합물, 전구약물, 대사물, 염 및 용매화물을 이하에서는 "약제"로 통칭함)의 발견에 의하여 상기 요구에 부응하였다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 치료 또는 예방 유효량의 3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘 뉴클레오시드를 치료를 요하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.

개괄적으로, 본 발명은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다:

상기 화학식에서,

R^1a, R^1b 및 R^1c는 독립적으로 H, -C(O)R³, 라세미, L- 또는 D-아미노산 기 -C(O)CH₂NHR⁴, -C(O)CH(C_1-6 알킬)NHR⁴이거나, 또는 R^1b 및 R^1c는 총괄적으로 -C(O)-, 이는 산소 원자들과 함께 5-원 카보네이트 고리를 형성하고;

R²는 H, OR⁵ 또는 N(R⁶)₂이며;

R³는 C_1-18 알킬이며;

R⁴는 H, -C(O)CH(C_1-6 알킬)NH₂ 또는 -C(O)CH(CH₂-아릴)NH₂이며;

R⁵는 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_3-7 알케닐, C_3-7 알키닐, -(CR⁷R⁸)_t(C₆-C₁₀ 아릴), -(CR⁷R⁸)_t(C₃-C₁₀ 시클로알킬), -(CR⁷R⁸)_t(C₄-C₁₀ 복소환), -(CR⁷R⁸)_t>1OH, -(CR⁷R⁸)_t>0CO₂C_1-18 알킬 또는 -(CR⁷R⁸)_t>0N(R⁹)CO₂C_1-18 알킬, 또는 SO₂(아릴)이며, 여기서 t는 특별한 언급이 없는 한 0 내지 6의 정수이고, 상기 기의 알킬, 알케닐, 알 키닐, 아릴, 시클로알킬 및 복소환 부분은 할로, 시아노, 니트로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, C₁-C₆ 알킬, C₂-C₆ 알케닐, C₂-C₆ 알키닐, 히드록시, C₁-C₆ 알콕시, -NH₂, -NH-알킬, -N(알킬)₂, -NH-아릴, -N(알킬)(아릴), -N(아릴)₂, -NHCHO, -NHC(O)알킬, -NHC(O)아릴, -N(알킬)C(O)H, -N(알킬)C(O)알킬, -N(아릴)C(O)H, -N(아릴)C(O)알킬, -NHCO₂알킬, -N(알킬)CO₂알킬, -NHC(O)NH₂, -N(알킬)C(O)NH₂, -NHC(O)NH-알킬, -NHC(O)N(알킬)₂, -N(알킬)C(O)NH-알킬, N(알킬)C(O)N(알킬)₂, -NHSO₂-알킬, -N(알킬)SO₂-알킬, -C(O)알킬, -C(O)아릴, -OC(O)알킬, -OC(O)아릴, -CO₂-알킬, -CO₂-아릴, -CO₂H, -C(O)NH₂, -C(O)NH-알킬, -C(O)N(알킬)₂, -C(O)NH-아릴, -C(O)N(아릴)₂, -C(O)N(알킬)(아릴), -S(O)알킬, -S(O)아릴, -SO₂알킬, -SO₂아릴, -SO₂NH_2, -SO₂NH-알킬 및 -SO₂N(알킬)₂로부터 독립적으로 선택된 치환체로 치환될 수 있으며;

R⁶는 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C₃-C₁₀ 시클로알킬이거나 또는 질소와 함께 5- 또는 6-원 복소환 고리를 형성하며;

R⁷ 및 R⁸은 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고;

R⁹은 H, C_1-6 알킬 또는 -CH₂-아릴이다.

한 구체예에서, 본 발명은 R²가 H 또는 OR⁵이며, 단 R⁵는 -CH₃가 아니며, 추가로 R²가 H인 경우, R^1a, R^1b 및 R^1c 중 적어도 하나는 H가 아닌 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 R^1a, R^1b 및 R^1c는 독립적으로 H, -C(O)R³, 라세미, L- 또는 D-아미노산 기 -C(O)CH(C_1-6 알킬)NH₂이고; R²는 OR⁵이고; R³는 C_1-18 알킬이고; R⁵는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_3-7 알케닐, C_3-7 알키닐, -(CR⁷R⁸)_t(C₆-C₁₀ 아릴), -(CR⁷R⁸)_t(C₄-C₁₀ 복소환) 또는 -(CR⁷R⁸)_t>0N(R⁹)CO₂C_1-18 알킬이고, 여기서 t는 특별한 언급이 없는 한 0 내지 4의 정수이고, 상기 기의 알킬, 알케닐, 아릴 및 복소환 부분은 할로, 시아노, 니트로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, C₁-C₆ 알킬, C₂-C₆ 알케닐, C₂-C₆ 알키닐, 히드록시, C₁-C₆ 알콕시, -CO₂-알킬, -CO₂-아릴, -OC(O)알킬 및 -OC(O)아릴로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 치환체로 임의로 치환되며; R⁷ 및 R⁸은 독립적으로 H, C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이고; R⁹은 H, -CH₃ 또는 -CH₂CH₃인 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은

로부터 선택된다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 R²는 H이고, R^1a, R^1b 및 R^1c 중 적어도 하나는 H가 아닌 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 R^1a, R^1b 및 R^1c가 독립적으로 H, -C(O)R³, 라 세미, L- 또는 D-아미노산 기 -C(O)CH(C_1-6 알킬)NH₂이고; R²는 H이며; R³는 C_1-18 알킬이고, 여기서 R^1a, R^1b 및 R^1c 중 적어도 하나는 H가 아닌 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 R^1a, R^1b 및 R^1c가 독립적으로 H, -C(O)R³, 라세미, L- 또는 D-아미노산 기 -C(O)CH(CH(CH₃)₂)NH₂이고; R²는 H이며; R³는 CH₃이고, R^1a, R^1b 및 R^1c 중 적어도 하나는 H가 아닌 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 R^1a, R^1b 및 R^1c가 독립적으로 H 또는 -C(O)R³이고, R²는 H이며; R³는 CH₃이고, R^1a, R^1b 및 R^1c 중 적어도 하나는 H가 아닌 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 R^1a는 H이고, R^1b 및 R^1c는 -C(O)R³이며; R²는 H이고, R³는 CH₃인 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은

으로부터 선택된다.

또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은

이다.

또한, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 전구약물 또는 대사물의 약학적으로 허용되는 전구약물, 약학적 활성 대사물, 약학적으로 허용되는 염 및 약학적으로 허용되는 용매화물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 화학식 I의 화합물의 유리한 제조 방법에 관한 것이다.

화학식 I의 화합물은 면역계 증강제로서 유용하며, 조절, 세포분열촉진성, 증가, 및/또는 강화작용을 비롯한 특정의 면역계 성질을 지니거나 이러한 성질을 갖는 화합물에 대한 중간체이다. 이들 화합물은 적어도 숙주의 면역계의 자연살해세포, 대식세포 및 림프구 세포에 대한 영향을 나타낼 것으로 예상된다. 이러한 성질로 인해서, 이들은 항바이러스 및 항종양제로서, 또는 항바이러스 및 항종양제의 중간체로서 유용하다. 이들은 적절한 약학적 조성물의 활성 성분으로서 작용하여 침해받은 숙주를 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 한 구체예에서, 화학식 I의 화합물은 치료 유효량의 화합물을 사람을 비롯한 포유동물에게 투여하여 포유동물에서의 모든 범위의 바이러스 질환을 치료하는데 사용된다. 화학식 I의 화합물을 사용하여 치료될 것으로 여겨지는 바이러스 질환의 예로는 RNA 및 DNA 바이러스에 의하여 야기되는 급성 및 만성 감염 등이 있다. 치료될 수 있는 바이러스 감염의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하지 않으며, 화학식 I의 화합물은 아데노바이러스, 거대세포바이러스, A형 간염 바이러스 (HAV), B형 간염 바이러스 (HBV), 황열병 바이러스를 비롯한 플라비바이러스 및 C형 간염 바이러스(HCV), 제1형 단순 포진 바이러스 및 제2형 단순 포진 바이러스, 대상 포진, 사람 포진성 바이러스 6, 사람 면역결핍 바이러스 (HIV), 사람 유두종 바이러스 (HPV), 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 홍역, 파라인플루엔자 바이러스, 폴리오바이러스, 폭스바이러스 (천연두 및 원숭이 폭스바이러스 포함), 리노바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV), 아레나바이러스 (LCM, 쥬닌 바이러스, 마첩 바이러스, 구아나리토 바이러스 및 라사열), 분야바이러스 (한타 바이러스 및 리프트 계곡열 바이러스) 및 필로바이러스 (에볼라 및 마르부르그 바이러스)를 비롯한 출혈열을 일으키는 여러 부류의 바이러스, 다양한 바이러스 뇌염, 예컨대 웨스트 나일 바이러스, 라크로스 바이러스, 캘리포니아 뇌염 바이러스, 베네주엘라 말 뇌염 바이러스, 동부 말 뇌염 바이러스, 서부 말 뇌염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 키사누르 포레스트 바이러스 및 진드기 매개 바이러스 예컨대 크리미아-콩고 출혈열 바이러스에 의하여 야기되는 감염의 치료에 특히 유용하다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 화학식 I의 화합물은 치료 유효량의 화합물을 포유동물에게 투여하여 포유동물에서의 세균, 진균 및 원충 감염을 치료하는데 사용된다. 항생제에 대한 내성이 있는 유기체를 비제한적으로 포함하여 모든 범위의 병원성 미생물이 본 발명의 화합물에 의하여 치료 가능한 것으로 여겨진다. 항생제에 대한 감수성을 감소시키는 것으로 흔히 밝혀지는 내성 기전은 면역계의 여러 성분을 활성화시키는 화학식 I의 화합물의 능력 덕분에 문제되지 않으며, 그에 따 라 이러한 내성 미생물에 의해 유발되는 포유동물의 감염증을 화학식 I의 화합물로 치료하는 것이 본 발명의 특별한 효용이다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 화학식 I의 화합물은 치료 유효량의 화합물을 포유동물에게 투여하여 포유동물의 종양을 치료하는데 사용된다. 치료될 것으로 여겨지는 종양 또는 암은 바이러스에 의한 것을 포함하며, 그 효능은 바이러스 감염된 세포가 종양 상태로 전환되는 것의 억제, 전환된 세포로부터 다른 정상 세포로 바이러스가 전이되는 것의 방지, 및/또는 바이러스 전환된 세포의 성장을 정지시키는 것을 포함할 수 있다. 화학식 I의 화합물은 암종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이에 한정되지는 않는 광범위한 종양에 대하여 유용한 것으로 예상된다. 이러한 유형에는 유방, 결장, 신장, 폐, 전립선, 위 및 췌장 암종 및 림프아구 및 골수성 백혈병 등이 포함된다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 포유동물의 치료 방법은 본 발명의 화합물을 포함하는 치료 및/또는 예방 유효량의 약제를 투여하는 것을 포함한다. 이러한 구체예에서, 효능은 포유동물의 면역계의 일부의 조절, 특히 인터류킨과, 예를 들면 IL-1 내지 IL-12 및 기타의 시토킨, 예컨대 TNF 알파, 및 인터페론 α, 인터페론 θ 및 인터페론 γ를 비롯한 인터페론 및 이의 하류 작동세포를 비롯한 Th1 및 Th2의 시토킨 활성의 조절과 관련될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. Th1 및 Th2 시토킨의 조절이 이루어지는 경우, 조절은 Th1 및 Th2 모두의 자극, Th1 및 Th2 모두의 억제, Th1 또는 Th2 중 하나의 자극과 나머지 하나의 억제, 및 Th1/Th2 농도에 대한 하나의 효과(예컨대 전반적인 억제)가 고농도에서 발생하며 다른 효과(Th1 또는 Th2 중 하나의 자극 및 다른 하나의 억제)가 저농도에서 발생하는 이중 조절을 포함할 수 있는 것으로 간주한다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 화학식 I에 포함되지 않은 항감염 약물을 투여받고 있는 포유동물에게 치료 유효량으로 투여한다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 감염원에 직접 작용하여 감염원의 성장을 억제하거나 또는 사멸시키는 항감염 약물(들)과 함께 치료 유효량으로 투여한다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 포유동물, 바람직하게는 사람에서의 C형 간염 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 치료 또는 예방 유효량의 화학식 I의 화합물 및 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 비히클을 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 치료 또는 예방 유효량의 화학식 I의 화합물 및 추가의 치료제, 바람직하게는 추가의 항바이러스제를 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 치료 유효량의 화학식 I에 의한 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 개선된 경구 이용 가능성 및 면역조절제로서의 투여를 제공한다. 본 발명의 또다른 바람직한 구체예에서, 치료 유효량의 화학식 I에 의 한 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 약제가 위 안쪽의 림프양 조직을 통과할 때 활성 구조의 차폐를 제공하여 이러한 조직의 활성화를 최소로 하고, 개선된 경구 용인성을 가능하게 한다.

도면의 간단한 설명

도 1은 마우스에서의 이사토리빈(1) 및 인터페론 알파의 혈장 농도의 그래프를 도시한다.

도 2는 이사토리빈(1)을 수용하는 HCV 감염된 환자에게서의 바이러스 부하 변화의 그래프를 도시한다.

본 발명 및 바람직한 구체예의 상세한 설명

본 명세서에서는 하기와 같은 용어를 사용하였으며, 이들은 하기와 같이 정의한다.

용어 "포함하다" 및 "포함한"이라는 것은 본 명세서에서 개방적이고 비제한적인 의미로 사용하였다.

용어 "뉴클레오시드"라는 것은 복소환의 특정 부분에, 또는 푸린 (9-위치) 또는 피리미딘 (1-위치)의 천연 위치에, 또는 유사체에서의 등가의 위치에 결합된 임의의 펜토스 또는 개질된 펜토스 부분으로 이루어진 화합물을 의미한다.

용어 "푸린"이라는 것은 질소 함유 이중환 복소환을 의미한다.

용어 "피리미딘"이라는 것은 질소 함유 단일환 복소환을 의미한다.

용어 "D-뉴클레오시드"는 D-리보스 당 부분 (예, 아데노신)을 갖는 뉴클레오시드 화합물을 의미한다.

용어 "L-뉴클레오시드"는 L-리보스 당 부분을 포함하는 뉴클레오시드 화합물을 의미한다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "알킬"은 특별한 언급이 없는 한 직쇄형, 분지쇄형 또는 고리형 부분 (융합 및 가교된 이중환 및 스피로고리형 부분 포함) 또는 상기의 부분의 조합을 포함하는 포화 1가 탄화수소 라디칼을 의미한다. 고리형 부분을 포함하는 알킬기의 경우, 기는 3 개 이상의 탄소 원자를 지녀야 한다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "알케닐"은 특별한 언급이 없는 한 1 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 알킬 부분을 포함하며, 상기 알케닐 부분의 E 및 Z 이성체를 포함하며, 여기서 알킬은 상기에서 정의한 바와 같다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "알키닐"은 특별한 언급이 없는 한 1 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬 부분을 포함하며, 여기서 알킬은 상기에서 정의한 바와 같다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "알콕시"는 특별한 언급이 없는 한 O-알킬 기를 포함하며, 여기서 알킬은 상기에서 정의한 바와 같다.

용어 "Me"는 메틸을 의미하며, "Et"는 에틸을 의미하고, "Ac"는 아세틸을 의미한다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "시클로알킬"은 특별한 언급이 없는 한 총 3 내지 10 개의 탄소 원자, 바람직하게는 5 내지 8 개의 고리 탄소 원자를 포함하는 본 명세서에서 지칭한 비방향족, 포화 또는 부분 포화, 단일환 또는 융합 환, 스피로 또는 비융합 이중환 또는 삼중환 탄화수소를 의미한다. 시클로알킬의 예로는 3 내지 7 개, 바람직하게는 3 내지 6 개의 탄소 원자를 포함하는 단일환 고리, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 등이 있다. 시클로알킬의 예로는

등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "아릴"은 특별한 언급이 없는 한 하나의 수소를 제거한 방향족 탄화수소, 예컨대 페닐 또는 나프틸로부터 유도된 유기 라디칼을 포함한다.

본 명세서에서 사용한 바와 같이 용어 "4-10-원 복소환"은 특별한 언급이 없는 한 각각 O, S 및 N으로부터 선택된 1 내지 4 개의 복소원자를 포함하는 방향족 및 비방향족 복소환 기를 포함하며, 여기서 각각의 복소환 기는 이의 고리 시스템에서 4 내지 10 개의 원자를 포함하며, 단, 이들 기의 고리는 2 개의 이웃한 O 또는 S 원자를 포함하지 않는다. 비방향족 복소환 기는 이의 고리 시스템에서 4 개의 원자만을 갖는 기를 포함하지만, 방향족 복소환 기는 이의 고리 시스템에서 5 개 이상의 원자를 포함하여야만 한다. 복소환 기의 예로는 벤조-융합된 고리계가 있다. 4-원 복소환 기의 예로는 아제티디닐(아제티딘로부터의)이 있다. 5-원 복소환 기의 예로는 티아졸릴이 있으며, 10-원 복소환 기의 예로는 퀴놀리닐이 있다. 비방향족 복소환 기의 예로는 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 디히드로푸라닐, 테트라히드로티에닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 피페리디노, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 티옥사닐, 피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 1,2,3,6-테트라히드로피리디닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티오라닐, 디히드로피라닐, 디히드로티에닐, 디히드로푸라닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자비시클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자비시클로[4.1.0]헵타닐, 3H-인돌릴 및 퀴놀리지닐 등이 있다. 방향족 복소환 기의 예로는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이소옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 푸리닐, 옥시디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸르아자닐, 벤조푸르아자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐 및 푸로피리디닐 등이 있다. 상기에 제시된 기로부터 유도된 바와 같은 상기의 기는 가능하다면 C-결합 또는 N-결합될 수 있다. 예를 들면, 피롤로부터 유도된 기는 피롤-1-일 (N-결합됨) 또는 피롤-3-일 (C-결합됨)이 될 수 있다. 또한, 이미다졸로부터 유도된 기는 이 미다졸-1-일 (N-결합됨) 또는 이미다졸-3-일 (C-결합됨)이 될 수 있다. 4-10-원 복소환은 고리당 1 내지 2 개의 옥소에 의하여 임의의 고리 탄소, 황 또는 질소 원자(들)상에 임의로 치환될 수 있다. 2 개의 고리 탄소 원자가 옥소 부분으로 치환된 복소환의 예는 1,1-디옥소-티오모르폴리닐이다. 4-10-원 복소환의 기타의 예는

으로부터 유도되나, 이에 한정되지 않는다.

(CR⁷R⁸)_t와 같은 용어를 사용하는 화학식 I의 화합물에서, R⁷ 및 R⁸은 각각 1보다 큰 t의 경우 반복시마다 변경될 수 있다. 예를 들면 t가 2인 경우, 용어 (CR⁷R⁸)_t는 -CH₂CH₂- 또는 -CH(CH₃)C(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)-가 될 수도 있고, R⁷ 및 R⁸의 정의의 범위내에 포함되는 유사한 부분의 조합일 수도 있다.

용어 "면역조절제"라는 것은 자극 또는 억제를 통하여 정상의 또는 이상의 면역계를 변화시킬 수 있는 천연 또는 합성 생성물을 의미한다.

용어 "예방"이라는 것은 질환을 지닌 것으로 진단된 환자 또는 상기의 질환이 진행될 우려가 있는 환자에게서 본 명세서에서 언급한 질환을 예방하는 본 발명의 화합물 또는 조성물의 능력을 의미한다. 또한, 용어는 상기 질환을 이미 앓고 있거나 또는 이의 징후를 갖는 환자에게서 질환의 추가의 진행을 예방하는 것을 포함한다.

용어 "환자" 또는 "개체"라는 것은 동물(예, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그 등) 또는 키메라 및 유전자 이전 동물 및 포유동물을 비롯한 포유동물을 의미한다. HCV 감염의 치료 또는 예방에서, 용어 "환자" 또는 "개체"는 바람직하게는 원숭이 또는 사람, 가장 바람직하게는 사람을 의미한다. 특정의 구체예에서, 환자 또는 개체는 C형 간염 바이러스에 감염되거나 또는 이에 노출된다. 특정의 구체예에서, 환자는 사람 유아 (0-2세), 아동 (2-17세), 청년기 (12-17세), 성인(18 세 이상) 또는 노인 (연령 70 세 이상) 환자이다. 또한, 환자는 면역손상된 환자, 예컨대 HIV 양성 환자, 암 환자, 면역요법 또는 화학요법의 치료를 받고 있는 환자 등이 있다. 특정의 구체예에서, 환자는 건강한 개인, 즉 기타의 바이러스 감염의 징후를 나타내지 않는다.

용어 "치료 유효량"은 바이러스 질환의 치료 또는 예방에서의 잇점을 제공하고, 바이러스 감염 또는 바이러스 유발된 질환과 관련된 징후를 지연 또는 감소시키거나 또는 개선시키기에 충분한 본 발명의 화합물의 함량을 의미한다. 특히, 치 료 유효량은 생체내 치료 효능을 제공하기에 충분한 함량을 의미한다. 본 발명의 화합물의 함량과 관련하여 사용한 용어 "바람직하게는"는 전체 치료를 개선시키고, 질환의 징후 또는 원인을 감소 또는 배제시키거나 또는 기타의 치료제를 사용한 치료 효능 또는 상승효과를 개선시키는 비독성 함량을 포함한다.

용어 "예방 유효량"이라는 것은 감염의 예방, 바이러스 감염의 재발 또는 확산을 초래하기에 충분한 본 발명의 화합물 또는 기타의 활성 성분의 함량을 의미한다. 예방 유효량이라는 것은 초기 감염의 예방, 감염의 재발 또는 확산 또는 감염과 관련된 질환을 예방하는데 충분한 함량을 의미할 수 있다. 본 발명의 화합물의 함량과 관련하여 사용한 용어 바람직하게는 전체적인 예방을 개선시키거나 또는 기타의 예방제 또는 치료제를 사용한 예방 효능 또는 상승효과를 개선시키는 비독성 함량을 포함한다.

용어 "병용하여"는 둘 이상의 예방제 및/또는 치료제를 동시에 또는 순차적으로 그리고 이들 각각의 효과가 부가적 또는 상승적이 되도록 사용하는 것을 의미한다.

용어 "치료하다"라는 것은

(i) 질환, 질병 및/또는 상태에 대한 소인을 지닐 수 있지만 아직 이를 지니는 것으로 진단되지는 않은 동물에게서 상기의 질환, 질병 및/또는 상태가 발생하지 않도록 예방하고,

(ii) 질환, 질병 또는 상태를 억제하고, 즉 이의 전개를 중지시키고,

(iii) 질환, 질병 또는 상태를 경감시키고, 즉 질환, 질병, 및/또는 상태의 복귀를 야기하는 것을 의미한다.

용어 "α" 및 "β"는 도시한 화학식의 비대칭 탄소 원자에서 치환체의 특정의 입체화학 구조를 나타낸다. 본 명세서에서 설명한 화합물은 모두 D-푸라노실 구조로 존재한다.

본 발명의 화합물은 호변이성체 현상을 나타낼 수 있다. 화학식 I는 모든 가능한 호변이성체 형태를 명백하게 도시하지는 않았으나, 화학식 I는 도시한 화합물의 임의의 호변이성체 형태를 나타내고자 하며 화학식으로 도시한 특정의 화합물 형태에 한정되지 않는 것으로 이해하여야 한다. 예를 들면, 치환체가 이의 에놀 또는 이의 케토 형태로 도시되거나 도시되지 않은 것과는 상관 없이 이들은 동일한 화합물을 나타내는 것으로 이해하여야 한다(하기 예에 도시한 바와 같음).

특정의 본 발명의 화합물은 단일 입체이성체 (즉, 기타의 입체이성체가 거의 없음), 라세메이트, 및/또는 거울상 이성체 및/또는 부분입체이성체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 상기의 단일 입체이성체, 라세메이트 및 이의 혼합물 모두는 본 발명의 범위내에 포함시키고자 한다. 광학 활성인 본 발명의 화합물은 광학적으로 순수한 형태로 사용되는 것이 바람직하다.

당업자가 일반적으로 이해하고 있는 바와 같이, 하나의 키랄 중심(즉 하나의 비대칭 탄소 원자)을 갖는 광학적으로 순수한 화합물은 2 개의 가능한 거울상 이성체중 거의 하나로 (즉 순수한 거울상 이성체로) 구성된 것이며, 1 초과의 키랄 중심을 갖는 광학적으로 순수한 화합물은 모두 순수한 부분입체 이성체 및 순수한 거울상 이성체이다. 본 발명의 화합물을 90% 이상으로 광학적으로 순수한 형태, 즉 90% 이상의 단일 이성체 [80% 거울상 이성체 과량("e.e.") 또는 부분입체 이성체 과량 ("d.e.")], 더욱 바람직하게는 95% 이상(90% e.e. 또는 d.e.), 더더욱 바람직하게는 97.5% 이상 (95% e.e. 또는 d.e.), 가장 바람직하게는 99% 이상 (98% e.e. 또는 d.e.)의 형태로 사용되는 것이 바람직하다.

또한, 화학식 I는 명시한 구조의 용매화된 형태뿐 아니라 용매화되지 않은 형태도 포함시키고자 한다. 예를 들면, 화학식 I는 수화된 형태 및 수화되지 않은 형태 모두에서의 명시된 구조의 화합물을 포함한다. 용매화물의 기타의 예로는 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 또는 에탄올아민과 조합된 구조를 포함한다.

화학식 I의 화합물 이외에, 본 발명은 상기 화합물 및 대사물의 약학적으로 허용되는 전구약물, 약학적 활성 대사물 및 이의 약학적으로 허용되는 염도 포함한다.

"약학적으로 허용되는 전구약물"은 생리적 조건하에서 또는 약리 효과(들)을 나타내기 이전에 특정의 화합물로의 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용되는 염으로의 가용매분해에 의하여 전환될 수 있는 화합물이다. 통상적으로, 전구약물은 개선된 화학 안정성, 개선된 환자 허용 및 컴플라이언스, 개선된 생체이용율, 연장 된 작용 기간, 개선된 장기 선택성, 개선된 배합(예, 증가된 수용해도) 및/또는 감소된 부작용(예, 독성)을 목적으로 배합된다. 전구약물은 당업계에 공지된 방법, 예컨대 문헌[Burger's Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 1, 172-178, 949-982 (1995)]에 기재된 것을 사용하여 화학식 I의 화합물로부터 용이하게 생성될 수 있다. 또한, 문헌[Bertolini et al., J. Med. Chem., 40, 2011-2016 (1997); Shan, et al., J. Pharm. Sci., 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res., 34, 220-230 (1995); Bodor, Advances in Drug Res., 13, 224-331 (1984); Bundgaard, Design of Prodrugs, (Elsevier Press 1985); Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991); Dear et al., J. Chromatogr. B, 748, 281-293 (2000); Spra㎕ et al., J. Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 10, 601-605 (1992); 및 Prox et al., Xenobiol., 3, 103-112 (1992)]을 참조한다.

"약학적 활성 대사물"이라는 것은 특정의 화합물 또는 이의 염의 체내 대사를 통하여 생성된 약리학적 활성 생성물을 의미하고자 한다. 대부분의 약물은 체내로 유입된 후, 이의 물리적 그리고 생물학적 효과를 변경시킬 수 있는 화학 반응에 대한 기질이 된다. 이러한 대사 전환은 일반적으로 화학식 I의 화합물의 극성에 영향을 미치는데, 이는 약물이 분배되어 신체로부터 배설되는 경로를 변경시킨다. 그러나, 특정의 경우에서, 약물의 대사는 치료 효능에 필요하게 된다. 예를 들면 항대사물의 항암 약물은 이들이 암 세포로 수송된 후 이의 활성 형태로 전환되어야만 한다.

대부분의 약물이 특정 유형의 대사 변형을 거치기 때문에, 약물 대사에 작용하는 생화학적 반응은 무수하며 다양하다. 약물 대사의 주요 부위는 간이지만, 물론 기타의 조직도 또한 참여할 수 있기는 하다.

이러한 전환 중 다수의 특징은, 간혹 극성 약물이 극성이 더 작은 생성물을 산출하는 경우도 있기는 하나, 대사 생성물 또는 "대사물"이 모 약물보다 극성이 더 크다는 점이다. 지질/물 분배 계수가 큰 물질은 막을 용이하게 통과하며, 또한 요세관 소변으로부터 신세뇨관 세포를 통하여 혈장으로 용이하게 역확산된다. 그래서, 이러한 물질은 청소율이 낮고 체내 체류 시간이 긴 경향이 있다. 극성이 더 크고 분배 계수는 더 낮은 화합물로 약물이 대사될 경우, 이의 요세관 재흡수는 크게 감소된다. 또한, 인접 신세뇨관에서 그리고 간 실질 세포에서의 음이온 및 양이온에 대한 특정의 분비 기전은 극성이 매우 높은 물질에 작용한다.

특정의 예로서, 펜아세틴(이세토페네티딘) 및 아세트아닐리드는 온화한 진통제이자 해열제이지만, 이는 체내에서 극성이 더 크고 더 효과적인 대사물인, 오늘날 광범위하게 사용되는 p-히드록시아세트아닐리드 (아세트아미노펜)으로 전환된다. 소정 투여량의 아세트아닐리드를 사람에게 투여할 경우, 연속적인 대사물이 혈장내에서 순차적으로 피이크를 이룬 후 감소된다. 제1의 시간 동안 아세트아닐리드는 주요한 혈장 성분이 된다. 제2의 시간에서는 아세트아닐리드 농도가 감소되므로, 대사물인 아세트아미노펜 농도는 피이크에 도달한다. 마지막으로, 수 시간 후, 주요한 혈장 성분은 불활성인 추가의 대사물이 되며, 신체로부터 배설될 수 있다. 그리하여, 1 이상의 대사물뿐 아니라 약물 자체의 혈장 농도는 약리학적으 로 중요할 수 있다.

"이의 약학적으로 허용되는 염"은 특정의 화합물의 유리 산 및 염기의 생물학적 효능을 보유하고 생물학적으로 바람직한 염을 의미하고자 한다. 본 발명의 화합물은 충분한 산성, 충분한 염기성 또는 작용기 모두를 지닐 수 있으며, 따라서 임의의 다수의 무기 또는 유기 염기 및 무기산 및 유기산과 반응하여 이의 약학적으로 허용되는 염을 형성한다. 이의 약학적으로 허용되는 염의 예로는 본 발명의 화합물과 무기산 또는 유기산 또는 무기 염기와의 반응에 의하여 생성된 염, 예컨대 황산염, 피로황산염, 중황산염, 아황산염, 중아황산염, 인산염, 모노수소인산염, 2수소인산염, 메타인산염, 피로인산염, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 아세트산염, 프로피온산염, 데칸산염, 카프릴산염, 아크릴산염, 포름산염, 이소부티르산염, 카프로산염, 헵탄산염, 프로피올산염, 옥살산염, 말론산염, 숙신산염, 수베르산염, 세바스산염, 푸마르산염, 말레산염, 부틴-1,4-디오에이트, 헥신-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 구연산염, 유산염, γ-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 주석산염, 메탄-설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 및 만델산염을 비롯한 염 등이 있다.

본 발명의 화합물이 염기인 경우, 이의 소정의 약학적으로 허용되는 염은 당업계에서 입수 가능한 임의의 적절한 방법에 의하여, 예를 들면 유리 염기를 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등 또는 유기산, 예컨대 아세트 산, 말레산, 숙신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 피라노시딜산, 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산, α-히드록시산, 예컨대 구연산 또는 주석산, 아미노산, 예컨대 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족 산, 예컨대 안식향산 또는 신남산, 설폰산, 예컨대 p-톨루엔설폰산 또는 에탄설폰산 등으로 처리하여 생성될 수 있다.

본 발명의 화합물이 산인 경우, 소정의 이의 약학적으로 허용되는 염은 임의의 적절한 방법, 예를 들면 유리 산을 무기 또는 유기 염기, 예컨대 아민 (1차, 2차 또는 3차), 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 등으로 처리하여 생성될 수 있다. 적절한 염의 예로는 아미노산, 예컨대 글리신 및 아르기닌, 암모니아, 1차, 2차 및 3차 아민 및 고리형 아민, 예컨대 피페리딘, 모르폴린 및 피페라진으로부터 유도된 유기 염 및 나트륨, 칼슘, 칼륨, 마그네슘, 망간, 철, 구리, 아연, 알루미늄 및 리튬으로부터 유도된 무기 염 등이 있다.

고형인 약제의 경우, 당업자라면, 본 발명의 화합물 및 염은 다양한 결정 또는 다형 형태로 존재할 수 있으며, 이들 모두는 본 발명의 범위 및 제시된 화학식의 범위에 포함시키고자 한다는 것을 이해할 것이다.

C형 간염 바이러스 감염의 치료 및 예방 방법

본 발명은 치료를 필요로 하는 환자의 C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

본 발명은 C형 간염 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 상기 화합물의 조합을 환자의 혈류에 투입하는 방법을 제 공한다.

그러나, 감염의 급성 또는 만성 치료 또는 예방에서 본 발명의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물의 예방적 또는 치료적 투여량의 정도는 감염의 성질 및 경중도, 활성 성분을 투여하는 경로에 따라 달라지게 된다. 투여량 및 특정의 경우에서 투여 빈도는 치료하고자 하는 감염, 각각의 환자의 연령, 체중 및 반응에 따라 달라진다. 적절한 투여량 섭생은 상기의 요인을 고려하여 당업자에 의하여 용이하게 선택될 수 있다.

본 발명의 방법은 사람 환자에게 특히 잘 적용된다. 특히, 본 발명의 방법 및 투여량은 암 환자, HIV 감염된 환자 및 면역퇴행성 질환을 갖는 환자 등을 비롯한 면역손상된 환자에 유용할 수 있으나, 이들 환자에게 한정되는 것은 아니다. 또한, 이러한 방법은 현재 완화 상태에 있는 면역손상된 환자에 대하여 유용할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법 및 투여는 기타의 항바이러스 치료를 받고 있는 환자에게 유용하다. 본 발명의 예방 방법은 특히 바이러스 감염의 우려가 있는 환자에게 유용하다. 이들 환자의 예로는 의료 기관 종사자, 예를 들면 의사, 간호사, 호스피스 간병인; 군대 직원; 교사; 어린이 보육 시설 종사자; 사회 원조 작업자, 선교사 및 외교관을 비롯한 외국, 특히 제3세계를 여행하거나 또는 거주하는 환자 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 마지막으로, 이러한 방법 및 조성물은 무반응 환자 또는 치료에 대한 내성이 있는 환자, 예컨대 역전사효소 억제제, 프로테아제 억제제 등에 대한 내성이 있는 환자의 치료를 포함한다.

투여

본 발명 화합물의 독성 및 효능은 예를 들면 LD₅₀ (모집단의 50%의 치사량) 및 ED₅₀ (모집단의 50%에서의 치료 유효량)을 측정하기 위하여 세포 배양액 또는 실험 동물에서의 표준 약학적 절차에 의하여 결정될 수 있다. 독성 및 치료 효능 사이의 투여비는 치료 지수가 되며, 이는 LD₅₀/ED₅₀의 비로서 설명될 수 있다.

세포 배양액 분석 및 동물 실험으로부터 얻은 데이타는 사람에게 사용하기 위한 화합물의 투여량 범위를 배합하는데 사용될 수 있다. 상기 화합물의 투여량은 거의 독성이 없거나 독성이 없는 ED₅₀를 포함하는 순환 농도 범위내에 포함되는 것이 바람직하다. 투여량은 사용한 투여 제형 및 사용한 투여 경로에 따라 상기 범위내에서 변경될 수 있다. 본 발명의 방법에 사용된 임의의 화합물의 경우, 치료적 유효 투여량은 초기에 세포 배양 분석으로부터 측정될 수 있다. 투여량은 세포 배양액중에서 측정된 바와 같은 IC₅₀ (즉, 징후의 최대 1/2의 억제를 달성하는 테스트 화합물의 농도)를 비롯한 순환중인 혈장 농도를 달성하기 위하여 동물 모델에게 투여될 수 있거나; 또는 화학식 I의 화합물의 투여량은 고정된 반응 정도를 달성하는데 필요한 농도에 해당하는 화합물의 순환중인 혈장 농도를 달성하기 위하여 동물 모델에게 투여될 수 있다. 상기의 정보는 사람에게서 유용한 투여량을 보다 정확하게 측정하기 위하여 사용할 수 있다. 혈장중의 농도는 예를 들면 고성능 액체 크로마토그래피에 의하여 측정될 수 있다.

본 발명의 프로토콜 및 조성물은 시험관내에서 테스트한 후, 사람에게 사용 하기 이전에 소정의 치료적 또는 예방적 활성을 위하여 생체내에서 테스트하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 특정의 치료 프로토콜의 투여를 나타내는지의 여부를 측정하기 위하여 사용할 수 있는 시험관내 분석은 화학식 I의 화합물의 효능에 반응하는 세포를 리간드에 노출시키고, 반응의 정도를 적절한 기법에 의하여 측정하는 시험관내 세포 배양액 분석을 포함한다. 그후, 화학식 I의 화합물의 분석은 화학식 I의 화합물 효능 및 화학식 I의 화합물의 전구약물로의 전환도에 대하여 평가한다. 본 발명의 방법에 사용하기 위한 화합물을 사람에게 테스트하기 이전에 래트, 마우스, 닭, 소, 원숭이, 토끼, 햄스터 등을 비롯한 적절한 동물 모델계에서 테스트할 수 있으며, 이들 동물에 한정되는 것은 아니다. 화합물은 적절한 임상 실험에서 사용될 수 있다.

감염 또는 상태의 급성 또는 만성 치료 또는 예방에서의 본 발명의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물의 전구약물의 예방 또는 치료적 투여량의 정도는 감염의 성질 및 경중도, 활성 성분을 투여하는 경로에 따라 달라질 수 있다. 투여량 및 투여 빈도는 치료하고자 하는 감염, 각각의 환자의 연령, 체중 및 반응에 따라 달라진다. 적절한 투여량 섭생은 상기의 요인을 고려하여 당업자에 의하여 용이하게 선택될 수 있다. 한 구체예에서, 투여된 투여량은 사용하고자 하는 특정의 화합물 및 환자의 체중 및 상태에 따라 달라진다. 또한, 투여량은 다양한 특정의 화학식 I의 화합물에 따라 달라질 수 있으며, 적절한 투여량은 본 명세서에서 설명하거나 또는 참조한 시스템에서 측정시 기타의 화학식 I의 화합물보다 낮은 농도에서 효능을 나타내는 화학식 I의 화합물에 대하 여 더 소량인 투여량이 적절하도록 전술한 시험관내 측정, 특히 화학식 I의 화합물이 관련된 이사토리빈(1)의 측정에 기초하여, 그리고 동물 실험에 기초하여 예측할 수 있다. 일반적으로, 1일 투여량은 약 0.001 내지 100 ㎎/㎏, 바람직하게는 약 1 내지 25 ㎎/㎏, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 15 ㎎/㎏이다. C형 간염 바이러스에 감염된 사람의 치료의 경우, 1일 약 0.1 ㎎ 내지 약 15 g을 1일 1회 내지 4회로 나누어 투여하며, 바람직하게는 1일 100 ㎎ 내지 12 g, 더욱 바람직하게는 1 일 100 ㎎ 내지 8,000 ㎎으로 투여한다.

화합물, 예컨대 3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘의 전구약물에 대한 바람직한 구체예에서, 1일 200 ㎎ 내지 8,000 ㎎을 1일 약 1 내지 4회로 나누어 투여한다. 또한, 추천되는 1일 투여량은 단일 약제로서 또는 기타의 치료제와 병용하여 주기적으로 투여할 수 있다. 한 구체예에서, 1일 투여량은 단일 투여량으로 투여하거나 또는 동량으로 나눈 투여량으로 투여한다. 관련 구체예에서, 추천된 1일 투여량은 1주당, 1회, 1주당 2회, 1주당 3회, 1주당 4회 또는 1주당 5회로 투여할 수 있다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 환자에게서 화합물의 전신 분포를 제공하도록 투여한다. 관련 구체예에서, 본 발명의 화합물은 체내에서 전신 효능을 나타내도록 투여한다.

또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 경구, 점막(설하, 협측, 직장, 비강 또는 질 포함), 비경구(피하, 근육내, 일시 주사, 동맥내 또는 정맥내 포함), 경피 또는 국소 투여에 의하여 투여한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 화합물은 점 막(설하, 협측, 직장, 비강 또는 질 포함), 비경구(피하, 근육내, 일시 주사, 동맥내 또는 정맥내 포함), 경피 또는 국소 투여에 의하여 투여한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 화합물은 경구 투여에 의하여 투여한다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 화합물은 경구 투여에 의하여 투여하지는 않는다.

당업자에 의하여 용이하게 공지되어 있는 바와 같이 상이한 감염에 대하여 상이한 치료 유효량이 적용 가능하다. 유사하게, 상기의 감염을 치료 또는 예방하기에 충분하지만, 종래의 요법과 관련한 부작용을 야기하기에는 충분하지 않거나 또는 이를 감소시키기에 충분한 함량은 상기에서 설명한 투여량 및 투여 빈도 스케쥴에 의하여 결정된다.

병용 요법

본 발명의 특정의 방법은 추가의 치료제 (즉, 본 발명의 화합물을 제외한 치료제)의 투여를 추가로 포함한다. 본 발명의 특정의 구체예에서, 본 발명의 화합물은 1 이상의 기타의 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. 이러한 치료제의 예로는 항생제, 항구토제, 항우울증제 및 항진균제, 항염증제, 항바이러스제, 항암제, 면역조절제, β-인터페론, 알킬화제, 호르몬 또는 시토킨 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 HCV 특이성을 갖거나 또는 항-HCV 활성을 나타내는 추가의 치료제의 투여를 포함한다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 항생제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 예를 들면, 마크롤리드 (예, 토브라마이신 (Tobi(등록상표)), 세팔로스포린 (예, 세팔렉신 (Keflex(등록상표)), 세프라딘 (Velosef(등록상표)), 세푸록심 (Ceftin(등록상표)), 세프프로질 (Cefzil(등록상표)), 세팍클로 (Ceclor(등록상표)), 세픽심 (Suprax(등록상표)) 또는 세파드록실 (Duricef(등록상표)), 클라리트로마이신 (예, 클라리트로마이신 (Biaxin(등록상표)), 에리트로마이신 (예, 에리트로마이신 (EMycin(등록상표)), 페니실린 (예, 페니실린 V (V-Cillin K(등록상표) 또는 Pen Vee K(등록상표)) 또는 퀴놀론 (예, 오플록사신 (Floxin(등록상표)), 시프로플록사신 (Cipro(등록상표)) 또는 노르플록사신 (Noroxin(등록상표)), 아미노글리코시드 항생제 (예, 아프라마이신, 아르베카신, 밤베르마이신, 부티로신, 디베카신, 네오마이신, 네오마이신, 운데실레네이트, 네틸미신, 파로모마이신, 리보스타마이신, 시소미신 및 스펙티노마이신), 암페니콜 항생제 (예, 아지담페니콜, 클로람페니콜, 플로르페니콜 및 티암페니콜), 안사마이신 항생제 (예, 리파미드 및 리팜핀), 카르바세펨 (예, 로라카르베프), 카르바페넴 (예, 비아페넴 및 이미페넴), 세팔로스포린 (예, 세팍클로, 세파드록실, 세파만돌, 세파트리진, 세파제돈, 세포조프란, 세프피미졸, 세프피라미드 및 세프피롬), 세파마이신(예, 세프부페라존, 세프메타졸 및 세프미녹스), 모노박탐 (예, 아즈트레오남, 카루모남 및 티게모남), 옥사세펨 (예, 플로목세프 및 목살락탐), 페니실린 (예, 암디노실린, 암디노실린 피복실, 아목시실린, 바캄피실린, 벤질페니실린산, 벤질페니실린 나트륨, 에피실린, 펜베니실린, 플록사실린, 페남실린, 페네타메이트 히드리오다이드, 페니실린 o-베네타민, 페니실린 0, 페니실린 V, 페니실린 V 벤자틴, 페니실린 V 히드라바민, 페니메피사이클린 및 펜시히실린 칼륨), 린코사미드 (예, 클린다마이신 및 린코마이신), 암포마이신, 바시트라신, 카프레오마이신, 콜리스틴, 엔듀라시딘, 엔비오마 이신, 테트라사이클린 (예, 아피사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린 및 데멕클로사이클린), 2,4-디아미노피리미딘 (예, 브로디모프림), 니트로푸란 (예, 푸랄타돈 및 염화푸라졸륨), 퀴놀론 및 이의 유사체 (예, 시녹사신, 클리나플록사신, 플루메퀸 및 그레파글록사신), 설폰아미드 (예, 아세틸 설파메톡시피라진, 벤질설파미드, 노프릴설파미드, 프탈릴설파세타미드, 설파크리소이딘 및 설파시틴), 설폰 (예, 디아티모설폰, 글루코설폰 나트륨 및 설라설폰), 시클로세린, 무피로신 및 투베린 등과 함께 제제화될 수 있다.

또한, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 항구토제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 적절한 항구토제의 예로는 메토클로프로마이드, 돔페리돈, 프로클로르페라진, 프로메타진, 클로르프로마진, 트리메토벤자미드, 온단세트론, 그라니세트론, 히드록시아연, 아세틸류신 모노에탄올아민, 알리자프라이드, 아자세트론, 벤즈퀴나미드, 비에타나우틴, 브로모프라이드, 부클리진, 클레보프라이드, 사이클리진, 디멘히드리네이트, 디페니돌, 돌라세트론, 메클리진, 메탈라탈, 메토피마진, 나빌론, 옥시펜딜, 피파마진, 스코폴라민, 설피리드, 테트라히드로카나비놀, 티에틸페라진, 티오프로페라진, 트로피세트론 및 이의 혼합물 등이있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 항우울제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 항우울증제의 적절한 예로는 비네달린, 카록사존, 시탈로프람, 디메타잔, 펜카민, 인달핀, 인델록사진 염산염, 네포팜, 노미펜신, 옥시트립탄, 옥시페르틴, 파록세틴, 세르트랄린, 티아제심, 트라조돈, 벤목신, 이프로클로자이드, 이프로니 아지드, 이소카르복사지드, 니알라미드, 옥타목신, 페넬진, 코티닌, 롤리시프린, 롤리프람, 마프로틸린, 메트랄린돌, 미안세린, 미르타제핀, 아디나졸람, 아미트립틸린, 아미트립틸리녹시드, 아목사핀, 부트립틸린, 클로미라민, 데메십틸린, 데시프라민, 디벤제핀, 디메타크린, 도티에핀, 독세핀, 플루아시진, 이미프라민, 이미프라민 N-옥시드, 이프린돌, 로페프라민, 멜리트라센, 메타프라민, 노르트립틸린, 녹십틸린, 오피프라몰, 피조틸린, 프로피제핀, 프로트립틸린, 퀴누프라민, 티아넵틴, 트리미프라민, 아드라피닐, 베낙티진, 부프로피온, 부타세틴, 디옥사드롤, 둘록세틴, 에토페리돈, 페바르바메이트, 페목세틴, 펜펜타디올, 플루옥세틴, 풀루복사민, 헤마토포르피린, 하이페리신, 레보파세토페란, 메디폭사민, 밀나시프란, 미나프린, 목클로베마이드, 네파조돈, 옥사플로잔, 피베랄린, 프로린탄, 피리숙시데아놀, 리탄세린, 록신돌, 염화루비듐, 설피리드, 탄도스피론, 토잘리논, 토페나신, 톨록사톤, 트라닐시프로민, L-트립토판, 벤락팍신, 빌록사진 및 지멜딘 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 항진균제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 항진균제의 적절한 예로는 암포테리신 B, 이트라코나졸, 케토코나졸, 플루코나졸, 인트라테칼, 플루시토신, 미코나졸, 부토코나졸, 클로트리마졸, 니스타틴, 테르코나졸, 티오코나졸, 시클로피록스, 에코나졸, 할로프로그린, 나프티핀, 테르비나핀, 운데실레네이트 및 그리세오풀딘 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 항염증제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 항염증제의 유용한 예로는 비스테로이스성 항염증 약물, 예컨대 살리실산, 아세틸살리실산, 메틸 살리실레이트, 디플루니살, 살살레이트, 올살라진, 설파살라진, 아세트아미노펜, 인도메타신, 술린닥, 에토돌락, 메페남산, 메클로페나메이트 나트륨, 톨메틴, 케토롤락, 디클로페낙, 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 나트륨, 페노프로펜, 케토프로펜, 플루르빈프로펜, 옥사프로진, 피록시캄, 멜록시캄, 암피록시캄, 드록시캄, 피복시캄, 테녹시캄, 나부메톰, 페닐부타존, 옥시펜부타존, 안티피린, 아미노피린, 아파존 및 니메술리드; 질류톤, 오로티오글루코스, 골드 나트륨 티오말레에이트 및 오라노핀을 비롯한 류코트리엔 길항 물질(이에 한정되지 않음); 알클로메타손 디프로프리오네이트, 암시노니드, 벡클로메타손 디프로피오네이트, 베타메타손, 베타메타손 벤조에이트, 베타메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 인산나트륨, 베타메타손 발레레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 클로코르톨론 피발레이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손 유도체, 데소니드, 데속시마타존, 덱사메타손, 플루니솔리드, 플루콕시놀리드, 플루란드레놀리드, 할시노시드, 메드리손, 메틸프레드리솔론, 메트프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 나트륨 숙시네이트, 모메타손 푸로에이트, 파라메타손 아세테이트, 프레드니솔론, 프레드니솔론 아세테이트, 프레드니솔론 인산나트륨, 프레드니솔론 테부아테이트, 프레드니손, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 디아세테이트 및 트리암시놀론 헥사세토니드 등을 비롯한 스테로이드(이에 한정되지 않음); 및 메토트렉세이트, 콜키친, 알로푸리놀, 프로베네시드, 설핀피라존 및 벤즈브로마론 등을 비롯한 기타의 항염증제(이에 한정되지 않음) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 기타의 항바이러스제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 항바이러스제의 유용한 예로는 프로테아제 억제제, 뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제 및 뉴클레오시드 유사체 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 항바이러스제는 지도부딘, 아사이클로비르, 강사이클로비르, 빈다라빈, 이독수리딘, 트리플루리딘, 레보비린, 비라미딘 및 리바비린뿐 아니라, 포스카르네트, 아만타딘, 리만타딘, 사퀴나비르, 인디나비르, 암프레나비르, 로피나비르, 리토나비르, α-인터페론, β-인터페론, 아데포비르, 클레바딘, 엔테카비르, 플레코나릴 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 면역조절제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 면역조절제의 예로는 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 시클로포스파미드, 시클로스포린 A, 미코페놀레이트 미페틸, 라파마이신 (시롤리무스), 미조리빈, 데옥시스페르구알린, 브레퀴나르, 말로노니트릴로아민데스 (예, 리플루나미드), T 세포 수용체 조절제 및 시토킨 수용체 조절제, 펩티드 모사체 및 항체 (예, 사람, 사람화, 키메라, 모노클로날, 폴리클로날, Fvs, ScFvs, Fab 또는 F(ab)2 분절 또는 에피토프 결합 분절), 핵산 분자 (예, 안티센스 핵산 및 삼중나선), 소분자, 유기 화합물 및 무기 화합물 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. T 세포 수용체 조절제의 예로는 항-T 세포 수용체 항체 (예, 항-CD4 항체 (예, cM-T412 (베링거), IDEC-CE9.1(등록상표) (아이덱 앤 에스케이비), mAB 4162W94, 오르토클론 및 OKTcdr4a (얀센-실락)), 항-CD3 항체 (예, 누비온 (프로덕트 디자인 랩스), OKT3 (존슨 앤 존슨) 또는 리툭산 (아이덱)), 항-CD5 항체 (예, 항-CD5 리신 결합된 면 역공액체), 항-CD7 항체 (예, CHH-380 (노바티스)), 항-CD8 항체, 항-CD40 리간드 모노클로날 항체 (예, IDEC-131 (아이덱)), 항-CD52 항체 (예, CAMPATH 1H (일렉스)), 항-CD2 항체, 항-CD11a 항체 (예, 사넬림 (지넨테크)) 및 항-B7 항체 (예, IDEC-114 (아이덱)) 및 CTLA4-면역글로블린 등이 있으나, 이에 한정된 것은 아니다. 시토킨 수용체 조절제의 예로는 가용성 시토킨 수용체 (예, TNF-α 수용체 또는 이의 분절의 세포외 도메인, IL-1β 수용체 또는 이의 분절의 세포외 도메인 및 IL-6 수용체 또는 이의 분절의 세포외 도메인), 시토킨 또는 이의 분절 (예, 인터류킨 (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-α, 인터페론 (IFN)-α, IFN-β, IFN-γ 및 GM-CSF), 항-시토킨 수용체 항체 (예, 항-IFN 수용체 항체, 항-IL-2 수용체 항체 (예, Zenapax (프로테인 디자인 랩스)), 항-IL-4 수용체 항체, 항-IL-6 수용체 항체, 항-IL-10 수용체 항체 및 항-IL-12 수용체 항체), 항-시토킨 항체 (예, 항-IFN 항체, 항-TNF-α 항체, 항-IL-1β 항체, 항-IL-6 항체, 항-IL-8 항체 (예, ABX-IL-8 (아브게닉스)) 및 항-IL-12 항체) 등이 있으나, 이에 한정된 것은 아니다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 HCV 프로테아제의 억제제, 예컨대 BILN 2061 및 NS5b 폴리머라제의 억제제, 예컨대 NM107 및 이의 전구약물 NM283 (미국 매사추세츠주에 소재하는 케임브릿지에 소재하는 이데닉스 파마슈티칼즈, 인코포레이티드) 등을 비롯한 바이러스 효소 억제제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 HCV 폴리머라제 억제제, 예컨대 문헌[Wu, Curr Drug Targets Infect Disord. 2003; 3(3):207-19]에 기재된 것과 병용하여, 또는 바이러스의 헬리카제를 억제하는 화합물, 예컨대 문헌[Bretner M, et al., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2003; 22(5-8):1531]에 기재된 것 또는 기타의 HCV 특이성 표적의 억제제, 예컨대 문헌[Zhang X. IDrugs. 2002; 5(2):154-8]에 기재된 것과 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 바이러스 복제 억제제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 시토킨과 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 시토킨의 예로는 인터류킨-2 (IL-2), 인터류킨-3 (IL-3), 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-5 (IL-5), 인터류킨-6 (IL-6), 인터류킨-7 (IL-7), 인터류킨-9 (IL-9), 인터류킨-10 (IL-10), 인터류킨-12 (IL-12), 인터류킨 15 (IL-15), 인터류킨 18 (IL-18), 혈소판 유도된 성장 인자 (PDGF), 에리트로포이에틴 (Epo), 표피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 과립구 대식세포 자극 인자 (GM-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 대식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF), 프롤락틴 및 인터페론 (IFN), 예를 들면 IFN-α 및 IFN-γ) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 호르몬과 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 호르몬의 예로는 황체형성 호르몬 분비 호르몬 (LHRH), 성장 호르몬 (GH), 성장 호르몬 분비 호르몬, ACTH, 소마토스타틴, 소마토트로핀, 소마토메딘, 부갑상선 호르몬, 시상하부 방출 인자, 인슐린, 글루카곤, 엔케팔린, 바소프레신, 칼시토닌, 헤파린, 저분자량 헤파린, 헤파리노이드, 합성 및 천연 아편유사제, 인슐린 갑 상선 자극 호르몬 및 엔돌핀 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b를 비롯한 (이에 한정되지 않음) β-인터페론과 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 인터페론 알파-1, 인터페론 알파-2a (로페론), 인터페론 알파-2b, 인트론, Peg-인트론, 페가시스, 콘센서스 인터페론 (인퍼겐) 및 알부페론 등을 비롯한(이에 한정되지 않음) α-인터페론과 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 글리콜산나트륨; 카프르산나트륨; N-라우릴-y-D-말토피라노시드; EDTA; 혼합 미셀; 및 본 명세서에서 참고로 인용하는 문헌[Muranishi Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 7-1-33]에 기재된 것을 비롯한(이에 한정되지 않음), 흡수 증강제, 특히 림프계를 표적으로 하는 것과 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 또한, 기타의 공지된 흡수 증강제를 사용할 수 있다. 그래서, 본 발명은 1 이상의 본 발명의 화학식 I의 화합물 및 1 이상의 흡수 증강제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 알킬화제와 병용하여 투여 또는 제제화될 수 있다. 알킬화제의 예로는 질소 머스타드, 에틸렌이민, 메틸멜라민, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아, 트리아젠, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 클로람부실, 헥사메틸멜라인, 티오테파, 부설판, 카르무스틴, 스트렙토조신, 다카르바진 및 테모졸로마이드 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화합물 및 기타의 치료제는 부가적으로 작용할 수 있거나, 더욱 바람직하게는 상승적으로 작용할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 동일한 조성물의 일부가 될 수 있거나 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 것과는 상이한 조성일 수 있는 기타의 치료제의 투여와 동시에 투여된다. 또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 기타의 치료제 이전에 또는 기타의 치료제 투여에 이어서 투여된다. 별도의 구체예에서, 본 발명의 화합물은 기타의 치료제, 특히 항바이러스제를 사용한 치료를 현재 받고 있지 않거나 또는 이미 받지 않았었던 환자에게 투여한다.

한 구체예에서, 본 발명의 방법은 추가의 치료제 없이 1 이상의 본 발명의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함한다.

약학적 조성물 및 투여 제형

본 발명의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 수화물을 포함하는 약학적 조성물 및 단일 단위 투여 제형도 또한 본 발명에 포함된다. 본 발명의 각각의 투여 제형은 경구, 점막(설하, 협측, 직장, 비강 또는 질), 비경구(피하, 근육내, 일시 주사, 동맥내 또는 정맥내 포함), 경피 또는 국소 투여에 의하여 투여한다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물 및 투여 제형은 통상적으로 1 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 무균 투여 제형 또한 포함한다.

또다른 구체예에서, 이와 같은 구체예에 의하여 달성되는 약학적 조성물은 본 발명의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 수화물 및 1 이상의 추가의 치료제를 포함한다. 추가의 치료제의 예로는 상기 섹션 5.2.2.에서 제시한 것 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 조성물, 형상 및 투여 제형의 유형은 통상적으로 이의 용도에 따라 달라진다. 예를 들면 질환 또는 관련 질환의 급성 치료에 사용되는 투여 제형은 동일한 질환의 만성 치료에 사용되는 투여 제형보다 더 많은 함량의 1 이상의 활성 성분을 포함할 수 있다. 유사하게, 비경구 투여 제형은 동일한 질환 또는 질병을 치료하는데 사용되는 경구 투여 제형보다 더 적은 함량의 1 이상의 활성 성분을 포함할 수 있다. 본 발명에 의하여 달성되는 특정의 투여 제형이 서로 달라질 수 있는 이와 같은 방법 및 기타의 방법은 당업자에게 용이하게 명백할 것이다. 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)]. 투여 제형의 예로는 정제, 캐플릿; 캡슐, 예컨대 연질 탄성 젤라틴 캡슐; 카세제; 트로키; 로젠지; 분산제; 좌제; 연고; 습포(찜질); 페이스트; 분말제; 드레싱; 크림; 석고; 액제, 패취; 에어로졸(예, 비강 스프레이 또는 흡입기); 겔; 현탁액(예, 수성 또는 비수성 액체 현탁액, 수중유 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼), 액제 및 엘릭시르를 비롯한 환자에게 경구 또는 점막 투여에 적절한 액체 투여 제형; 환자에게 비경구 투여에 적절한 액체 투여 제형; 및 환자에게 비경구 투여에 적절한 액체 투여 제형을 제공하도록 재구성될 수 있는 무균 고형물(예, 결정형 또는 무정형 고형물) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

통상의 약학적 조성물 및 투여 제형은 1 이상의 담체, 부형제 또는 희석제를 포함한다. 적절한 부형제는 약학 분야의 당업자에게 주지되어 있으며, 부형제의 적절한 비제한적인 예는 본 명세서에 제시되어 있다. 특정의 부형제가 약학적 조성물 또는 투여 제형에 혼입하기에 적절한지의 여부는 환자에게 투여 제형을 투여 하는 방법 등을 비롯한 당업자에게 공지된 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으나, 이에 한정된 것은 아니다. 예를 들면, 경구 투여 제형, 예컨대 정제는 비경구 투여 제형에 사용하기에 적절하지 않은 부형제를 포함할 수 있다. 또한, 특정의 부형제의 적합성은 투여 제형에서의 특정의 활성 성분에 따라 달라질 수 있다.

본 발명은 추가로 활성 성분을 포함하는 무수 약학적 조성물 및 투여 제형을 포함하는데, 이는 물이 특정의 화합물의 분해를 촉진할 수 있기 때문이다. 예를 들면, 물의 첨가(예, 5%)는 시간 경과에 따른 특성, 예컨대 저장 수명 또는 제제의 안정성을 측정하기 위하여 장시간 저장을 모의 실험하는 수단으로서 약학 분야에서 널리 용인되고 있다. 예를 들면 문헌[Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principles & Practice, 2d. Ed., Marcel Dekker, NY, NY, 1995, pp. 379-80]. 실제로, 물 및 열은 특정 화합물의 분해를 촉진시킨다. 그리하여 제제에 대한 물의 효과가 상당히 중요할 수 있는데, 이는 수분 및/또는 습도가 통상적으로 제제의 제조, 취급, 포장, 저장, 수송 및 사용중에 흔하게 접하기 때문이다.

본 발명의 무수 약학적 조성물 및 투여 제형은 무수 또는 저 수분 함유 성분 및 저 수분 또는 저 습도 상태를 이용하여 생성될 수 있다.

무수 약학적 조성물은 이의 무수 성질을 유지하도록 제조 및 저장되어야 한다. 따라서, 무수 조성물은 이들이 적절한 처방 키트에 포함될 수 있도록 물에 노출을 방지하는 것으로 공지된 물질을 사용하여 포장하는 것이 바람직하다. 적절한 포장재의 예로는 밀폐 밀봉 호일, 플라스틱, 단위 투여 용기(예, 바이알), 수포 팩 및 스트립 팩 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 추가로 활성 성분을 분해하는 속도를 감소시키는 1 이상의 화합물을 포함하는 약학적 조성물 및 투여 제형을 포함한다. 본 명세서에서 "안정화제"로 지칭하는 이러한 화합물의 예로는 산화방지제, 예컨대 아스코르브산, pH 완충제 또는 염 완충제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

부형제의 함량 및 유형과 마찬가지로, 투여 제형중의 활성 성분의 함량 및 특정의 유형은 요인, 예컨대 환자에게 투여하고자 하는 경로 등에 따라 달라질 수 있으며, 이러한 요인에 한정되는 것은 아니다. 그러나, 본 발명의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 수화물을 포함하는 본 발명의 특정의 투여 제형은 1일 약 0.01 내지 200 ㎎/㎏의 투여량을 제공하도록 1 단위당 0.1 ㎎ 내지 1,500 ㎎을 포함한다.

경구 투여 제형

경구 투여에 적절한 본 발명의 약학적 조성물은 별도의 투여 제형, 예컨대 정제(예, 츄어블 정제), 캐플릿, 캡슐 및 액체(예, 향이 가미된 시럽) 등으로서 제시될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 투여 제형은 소정 함량의 활성 성분을 포함하며, 당업자에게 주지된 약학적 방법에 의하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)]을 참조한다.

본 발명의 통상의 경구 투여 제형은 통상의 약학적 배합 기법에 의하여 1 이상의 부형제와 완전 혼합된 활성 성분(들)을 혼합하여 생성된다. 부형제는 투여에 필요한 제제의 형태에 따라 달라지는 광범위한 제형을 취할 수 있다. 예를 들면, 경구 액제 또는 에어로졸 투여 제형에 사용하기에 적절한 부형제의 예로는 물, 글리콜, 오일, 알콜, 풍미제, 방부제 및 착색제 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 고형의 경구 투여 제형(예, 분말, 정제, 캡슐 및 캐플릿)에 사용하기에 적절한 부형제의 예로는 전분, 당, 미정질 셀룰로스, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제 및 붕해제 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

투여의 용이성으로 인하여, 고형 부형제를 사용하는 정제 및 캡슐이 가장 이로운 경구 투여 단위 제형을 나타낸다. 필요할 경우, 정제는 표준의 수성 또는 비수성 기법에 의하여 피복될 수 있다. 이러한 투여 제형은 임의의 약학 방법에 의하여 생성될 수 있다. 일반적으로, 약학적 조성물 및 투여 제형은 활성 성분을 액체 담체, 미분 고형 담체 또는 둘다와 완전하게 그리고 균일하게 혼합한 후, 필요할 경우 생성물을 소정의 형태로 성형하여 생성된다.

예를 들면, 정제는 압축 또는 성형에 의하여 생성될 수 있다. 압축 정제는 적절한 장치로 자유 유동 형태, 예컨대 분말 또는 과립으로 압축시키고, 임의로 부형제와 혼합하여 생성될 수 있다. 성형 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤화된 분말 화합물의 혼합물을 적절한 장치로 성형하여 생성될 수 있다. 본 발명의 경구 투여 제형에 사용될 수 있는 부형제의 예로는 결합제, 충전제, 붕해제 및 윤활제 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 약학적 조성물 및 투여 제형에 사용하기에 적절한 결합제는 옥수수 전분, 감자 전분 또는 기타의 전분, 젤라틴, 천연 또는 합성 껌, 예컨대 아카시아, 알긴산나트륨, 알긴산, 기타의 알긴산염, 분말 트라가칸트, 구아껌, 셀룰로스 및 이의 유도체 (예, 에틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 카르 복시메틸 셀룰로스 칼슘, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스), 폴리비닐 피롤리돈, 메틸 셀룰로스, 예비젤라틴화된 전분, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, (예, 번호 2208, 2906, 2910), 미정질 셀룰로스 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 명세서에서 개시된 약학적 조성물 및 투여 제형에 사용하기에 적절한 충전제의 예로는 탈크, 탄산칼슘(예, 과립 또는 분말), 미정질 셀룰로스, 분말 셀룰로스, 덱스트레이트, 카올린, 만니톨, 실리스산, 소르비톨, 전분, 예비젤라틴화된 전분 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 약학적 조성물중의 결합제 또는 충전제는 통상적으로 약학적 조성물 또는 투여 제형의 약 50 내지 약 99 중량%로 존재한다.

미정질 셀룰로스의 적절한 제형의 예로는 AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (미국 펜실베이니아주 마르쿠스 훅에 소재하는 FMC 코포레이션, 어메리칸 비스코스 디비젼, 아비셀 세일즈로부터 입수 가능) 및 이의 혼합물로서 시판되는 물질 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 특정의 결합제는 AVICEL RC-581로 시판되는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스 및 미정질 셀룰로스의 혼합물이다. 적절한 무수 또는 저 수분 부형제 또는 첨가제의 예로는 AVICEL-PH-103^TM 및 Starch 1500 LM 등이 있다.

수성 환경에 노출될 경우 붕해되는 정제를 제공하기 위하여 본 발명의 조성물에 붕해제를 사용한다. 지나치게 많은 붕해제를 포함하는 정제는 저장시 붕해될 수 있으며, 너무 적은 붕해제를 포함하는 것은 소정의 속도에서 또는 소정의 조건하에서 붕해되지 않을 수도 있다. 그리하여, 활성 성분의 방출을 해롭게 변형시키기에 지나치게 많거나 또는 지나치게 적지 않은 충분량의 붕해제를 사용하여 본 발명의 고형 경구 투여 제형을 형성하여야 한다. 사용한 붕해제의 함량은 제형의 유형에 기초하며, 이는 당업자가 용이하게 인식할 것이다. 통상의 약학적 조성물은 약 0.5 내지 약 15 중량%의 붕해제, 특히 약 1 내지 약 5 중량%의 붕해제를 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물 및 투여 제형에 사용할 수 있는 붕해제의 예로는 한천-한천, 알긴산, 탄산칼슘, 미정질 셀룰로스, 크로스카르멜로스 나트륨, 크로스포비돈, 폴라크릴린 칼륨, 나트륨 전분 글리콜레이트, 감자 또는 타피오카 전분, 예비젤라틴화된 전분, 기타의 전분, 점토, 기타의 알긴, 기타의 셀룰로스, 껌 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 약학적 조성물 및 투여 제형에 사용될 수 있는 윤활제의 예로는 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 광유, 경질 광유, 글리세린, 소르비톨, 만니톨, 폴리에틸렌 글리콜, 기타의 글리콜, 스테아르산, 라우릴 황산나트륨, 탈크, 수소화된 식물성유(예, 낙화생유, 면실유, 해바라기씨유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유), 스테아르산아연, 에틸 올레에이트, 에틸 라우레에이트, 한천 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 추가의 윤활제의 예로는 실로이드 실리카 겔(AEROSIL 200, 미국 매릴랜드주 볼티모어에 소재하는 더블유.알. 그레이스 컴파니에서 제조), 합성 실리카의 응고된 에어로졸(미국 텍사스주 플라노에 소 재하는 데구싸 컴파니에서 시판), CAB-O-SIL (미국 매사추세츠주 보스턴에 소재하는 캐벗 컴파니에서 시판하는 발열 이산화규소 생성물 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 적어도 윤활제를 사용할 경우, 이는 통상적으로 이들이 혼입되는 약학적 조성물 또는 투여 제형의 약 1 중량% 미만의 함량으로 사용된다.

지연 방출 투여 제형

본 발명의 활성 성분은 당업자에게 주지된 조절 방출 방법에 의하여 또는 전달 장치에 의하여 투여될 수 있다. 이의 예로는 본 명세서에서 참고로 인용하는 미국 특허 제3,845,770호; 제3,916,899호; 제3,536,809호; 제3,598,123호; 및 제4,008,719호, 제5,674,533호, 제5,059,595호, 제5,591,767호, 제5,120,548호, 제5,073,543호, 제5,639,476호, 제5,354,556호 및 제5,733,566호에 기재된 것 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 투여 제형은 예를 들면 히드로프로필메틸 셀룰로스, 기타의 중합체 기질 , 겔, 투과성 막, 삼투압계, 다층 코팅, 미립자, 리포좀, 미소구체 또는 이들의 조합을 사용하여 1 이상의 활성 성분의 서방 또는 조절 방출을 제공하여 다양한 비율로 소정의 방출 프로파일을 제공할 수 있다. 본 명세서에서 설명된 것을 비롯한 당업자에게 공지된 적절한 제어 방출 제제는 본 발명의 활성 성분과 함께 사용하기 위하여 용이하게 선택할 수 있다. 그래서, 본 발명은 경구 투여에 적절한 단일 단위 투여 제형, 예컨대 조절 방출에 대하여 변형된 정제, 캡슐, 겔캡 및 캐플릿 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

모든 조절 방출 약학적 생성물은 이의 조절되지 않은 대응물에 의하여 달성 되는 것보다 약물 치료를 개선시키는 통상의 목적을 갖는다. 이상적으로, 의약 치료에서의 최적으로 설계된 조절 방출 제제의 사용은 최소량의 시간에 상태를 치료 또는 조절하는데 사용되는 최소의 약물 물질을 특징으로 한다. 조절 방출 제제의 잇점은 약물의 연장된 활성, 감소된 투여 빈도 및 증가된 환자 컴플라이언스 등을 포함한다. 또한, 조절 방출 제제를 사용하여 예컨대 약물의 혈중 농도와 같은 작용 또는 기타의 특징에 영향을 미칠 수 있으며, 그리하여 부작용(예, 불리한 작용)의 발생에 영향을 미칠 수 있다.

대부분의 조절 방출 제형은 장시간 동안 이와 같은 치료 또는 예방 효과의 정도를 유지하기 위하여 기타 함량의 약물의 점진적이고도 연속적인 방출 및 소정의 치료 효과를 즉시 생성하는 약물(활성 성분)의 함량을 초기에 방출하도록 설계되었다. 체내에서 약물의 일정한 농도를 유지하기 위하여, 약물은 대사되어 신체로부터 배설되는 양을 교체하는 속도로 투여 제형으로부터 방출되어야 한다. 활성 성분의 제어 방출은 pH, 온도, 효소, 물 또는 기타의 생리적 조건 또는 화합물을 비롯한 다양한 조건에 의하여 자극될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

비경구 투여 제형

비경구 투여 제형은 피하, 정맥내(일시 주사 포함), 근육내 및 동맥내를 비롯한 다양한 경로에 의하여 환자에 투여될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 투여가 통상적으로 오염원에 대한 환자의 자연 방어를 우회하기 때문에, 비경구 투여 제형은 환자에게 투여 이전에 무균 상태이거나 또는 살균될 수 있는 것이 바람직하다. 비경구 투여 제형의 예로는 주사용 액제, 주사용 약학적으로 허용되 는 비히클에 용해 또는 현탁된 건조 및/또는 동결건조된 생성물(재구성 가능한 분말), 주사용 현탁액 및 에멀젼 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 비경구 투여 제형을 제공하기 위하여 사용할 수 있는 적절한 비히클은 당업자에게 주지되어 있다. 이의 예로는 주사용수 USP; 수성 비히클, 예컨대 염화나트륨 주사액, 링거 주사, 덱스트로스 주사, 덱스트로즈와 염화나트륨 주사 및 락테이트 링거 주사; 수혼화성 비히클, 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜; 비수성 비히클, 예컨대 옥수수유, 면실유, 낙화생유, 참기름, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트 및 벤질 벤조에이트 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 본 명세서에 개시된 1 이상의 활성 성분의 용해도를 증가시키는 화합물을 본 발명의 비경구 투여 제형에 혼입할 수 있다.

경피 투여 제형

경피 투여 제형은 피부에 적용될 수 있으며, 소정량의 활성 성분의 투과가 가능한 소정의 시간 동안 착용할 수 있는 "저장기형" 또는 "매트릭스형" 패치를 포함한다.

본 발명에 포함되는 경피 및 국소 투여 제형을 제공하는데 사용될 수 있는 적절한 부형제(예, 담체 및 희석제) 및 기타의 물질은 약학 분야의 당업자에게 주지되어 있으며, 소정의 약학적 조성물 또는 투여 제형을 적용하는 특정의 조직에 따라 달라진다. 이러한 사실을 고려하면, 통상의 부형제의 예로는 물, 아세톤, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 광유 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 치료하고자 하는 특정 조직에 따라서, 본 발명의 활성 성분을 사용한 치료 이전, 동시에 또는 차후에 추가의 성분을 사용할 수 있다. 예를 들면, 투과 증강제는 활성 성분을 조직에 전달하는 것을 보조하는데 사용할 수 있다. 적절한 투과 증강제의 예로는 아세톤; 각종 알콜, 예컨대 에탄올, 올레일 및 테트라히드로푸릴; 알킬 설폭시드, 예컨대 디메틸 설폭시드; 디메틸 아세트아미드; 디메틸 포름아미드; 폴리에틸렌 글리콜; 피롤리돈, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; Kollidon 등급(포비돈, 폴리비돈); 우레아; 및 각종 수용성 또는 불용성 당 에스테르, 예컨대 Tween 80 (폴리소르베이트 80) 및 Span 60 (소르비탄 모노스테아레이트) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

약학적 조성물 또는 투여 제형을 적용하는 조직의 또는 약학적 조성물 또는 투여 제형의 pH는 1 이상의 활성 성분의 전달을 개선시키기 위하여 조절될 수 있다. 유사하게, 용매 담체의 극성, 이의 이온 강도 또는 등장성 삼투압은 전달을 개선시키기 위하여 조절될 수 있다. 화합물, 예컨대 스테아레이트는 전달을 개선시키도록 1 이상의 활성 성분의 친수성 또는 친유성을 이롭게 변경시키기 위하여 약학적 조성물 또는 투여 제형에 첨가될 수 있다. 이러한 점에서 스테아레이트는 제제에 대한 지질 비히클로서, 유화제 또는 계면활성제로서 및 전달 개선 또는 투과 개선제로서 작용할 수 있다. 활성 성분의 각종 염, 수화물 또는 용매화물은 생성된 조성물의 성질을 추가로 조절하는데 사용될 수 있다.

국소 투여 제형

본 발명의 국소 투여 제형의 예로는 크림, 로션, 연고, 겔, 액제, 에멀젼, 현탁제 또는 기타의 당업자에게 공지된 제형을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않았다. 예를 들면 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990)]; 및 문헌[Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed., Lea & Febiger, Philadelphia (1985)]을 참조한다.

본 발명에 포함되는 경피 및 국소 투여 제형을 제공하는데 사용될 수 있는 부형제(예, 담체 및 희석제) 및 기타의 물질은 약학 분야의 당업자에게 주지되어 있으며, 소정의 약학적 조성물 또는 투여 제형을 적용하는 특정의 조직에 따라 달라진다. 이에 기초하여, 통상의 부형제의 예로는 물, 아세톤, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 광유 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

치료하고자 하는 특정 조직에 따라서, 본 발명의 활성 성분을 사용한 치료 이전, 동시에 또는 차후에 추가의 성분을 사용할 수 있다. 예를 들면, 투과 증강제는 활성 성분을 조직에 전달하는 것을 보조하는데 사용할 수 있다. 적절한 투과 증강제의 예로는 아세톤; 각종 알콜, 예컨대 에탄올, 올레일 및 테트라히드로푸릴; 알킬 설폭시드 예컨대 디메틸 설폭시드; 디메틸 아세트아미드; 디메틸 포름아미드; 폴리에틸렌 글리콜; 피롤리돈, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; Kollidon 등급(포비돈, 폴리비돈); 우레아; 및 각종 수용성 또는 불용성 당 에스테르, 예컨대 Tween 80 (폴리소르베이트 80) 및 Span 60 (소르비탄 모노스테아레이트) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

점막 투여 제형

본 발명의 점막 투여 제형의 예로는 안과용 액제, 스프레이 및 에어로졸 또는 기타의 당업자에게 공지된 제형 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들면 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990)]; 및 문헌[Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed., Lea & Febiger, Philadelphia (1985)]을 참조한다. 구강내의 점막 조직을 치료하는데 적절한 투여 제형은 구강세정액 또는 구강 겔로서 제제화될 수 있다. 한 구체예에서, 에어로졸은 담체를 포함한다. 또다른 구체예에서, 에어로졸은 담체를 포함하지 않는다.

또한, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 흡입에 의하여 폐로 직접 전달될 수 있다. 흡입에 의한 투여의 경우, 화학식 I의 화합물은 다수의 상이한 장치에 의하여 폐로 간편하게 전달될 수 있다. 예를 들면, 적절한 저 비점 추진제, 예를 들면 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타의 적절한 가스를 포함하는 캐니스터를 사용하는 정량식 흡입기("MDI")를 사용하여 화학식 I의 화합물을 폐에 직접 전달할 수 있다. MDI 장치는 여러 공급업체, 예컨대 3엠 코포레이션, 아벤티스, 베링거 잉겔하임, 포레스트 래버러토리즈, 글락소-웰컴, 쉐링 플라우 및 벡튜라로부터 입수 가능하다.

또는, 무수 분말 흡입기(DPI) 장치는 폐에 화학식 I의 화합물을 투여하는데 사용할 수 있다. 본 명세서에서 참고로 인용한 문헌[Raleigh et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Research Annual Meeting, 1999, 40, 397]을 참조한다. DPI 장치는 통상적으로 기체가 파열하여 용기 내부에 건조 분말의 구름이 형성된 후 환자가 이 를 흡입할 수 있는 메카니즘을 사용한다. 또한, DPI 장치는 당분야에서 주지되어 있으며, 다양한 판매 업자, 예를 들면 피손, 글락소-웰컴, 인헤일 쎄라퓨틱 시스템즈, ML 래버로토리즈, Q도즈 및 벡츄라로부터 구입할 수 있다. 널리 보급된 변형은 다중 투여 DPI("MDDPI") 시스템이며, 이는 1회보다 많은 치료 투여량을 전달한다. MDDPI 장치는 예를 들면 아스트라제네카, 글락소웰컴, IVAX, 쉐링 플라우, 스카이파마 및 벡츄라와 같은 회사로부터 입수 가능하다. 예를 들면 화합물 및 적절한 분말 베이스, 예컨대 이러한 시스템을 위한 락토스 또는 전분의 분말 혼합을 포함하는 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한 젤라틴의 카트리지 및 캡슐을 제형화할 수 있다.

폐에 화학식 I의 화합물을 전달하는데 사용할 수 있는 또다른 유형의 장치는 예를 들면 아라다임 코포레이션에서 공급하는 액체 분무 장치이다. 액체 분무 시스템은 매우 작은 노즐 구멍을 사용하여 액체 약물 제제를 분무화한 후, 이를 폐에 직접 흡입시킬 수 있다.

바람직한 구체예에서, 연무기 장치는 화학식 I의 화합물을 폐에 전달하는데 사용된다. 연무기는 예를 들면 흡입이 용이한 미립자를 형성할 수 있는 초음파 에너지를 사용함으로써 액체 약물 제제로부터 에어로졸을 생성한다. 본 명세서에서 참고로 인용하는 문헌[Verschoyle et al., British J. Cancer, 1999, 80, Suppl 2, 96]을 참조한다. 연무기의 예로는 셰필드/시스테믹 풀모나리 딜리버리 리미티드(예를 들면 본 명세서에서 참고로 인용하는 문헌[Armer et al.의 미국 특허 제5,954,047호; van der Linden et al.의 미국 특허 제5,950,619호; van der Linden et al.의 미국 특허 제5,970,974호]을 참조함), 아벤티스 및 바텔 풀모나리 쎄라퓨틱스에 의하여 공급되는 장치 등이 있다.

특히 바람직한 구체예에서, 전기수력학적("EHD") 에어로졸 장치를 사용하여 화학식 I의 화합물을 폐에 전달한다. EHD 에어로졸 장치는 전기 에너지를 사용하여 액체 약물 액제 또는 현탁제를 분무시킨다(예를 들면 본 명세서에서 참고로 인용하는 Noakes et al.의 미국 특허 제4,765,539호; Coffee의 미국 특허 제4,962,885호; Coffee의 PCT 특허 출원 제WO94/12285호; Coffee의 PCT 특허 출원 제WO94/14543호; Coffee의 PCT 특허 출원 제WO95/26234호, Coffee의 PCT 특허 출원 제WO95/26235호, Coffee의 PCT 특허 출원 제WO95/32807호를 참조한다). 화학식 I의 화합물 제제의 전기화학적 성질은 EHD 에어로졸 장치를 사용하여 이러한 약물을 폐에 전달하는 경우 최적화시키는 중요한 변수가 될 수 있으며, 이러한 최적화가 통상적으로 당업자에 의하여 수행된다. EHD 에어로졸 장치는 종래의 폐 전달 기법보다 폐에 약물을 더욱 효과적으로 전달할 수 있다. 화학식 I의 화합물의 폐내 전달의 기타의 방법은 당업자에게 공지되어 있으며, 이는 본 발명의 범위에 포함된다.

연무기 및 액체 분무 장치 및 EHD 에어로졸 장치를 사용하기에 적절한 액체 약물 제제는 화학식 I의 화합물과 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 약학적으로 허용되는 담체는 액체, 예컨대 알콜, 물, 폴리에틸렌 글리콜 또는 퍼플루오로탄소를 포함하는 것이 바람직하다. 임의로, 화학식 I의 화합물의 액제 또는 현탁액의 에어로졸 성질을 변경시키기 위하여 기타의 물질을 첨가할 수 있다. 이러한 물질은 액체, 예컨대 알콜, 글리콜, 폴리글리콜 또는 지방산인 것이 바람직하다. 에어로졸 장치에 사용하기에 적절한 액체 약물 액제 또는 현탁액을 제제화하기 위한 기타의 방법은 당업자에게 공지되어 있다. (예를 들면 본 명세서에서 참고로 인용하는 Biesalski의 미국 특허 제5,112,598호; Biesalski의 미국 특허 제5,556,611호를 참조한다.). 또한, 화학식 I의 화합물은 직장 또는 질 조성물, 예컨대 통상의 좌제 베이스, 예컨대 코코아 버터 또는 기타의 글리세라이드를 포함하는 좌제 또는 또는 정체 관장으로 제제화될 수 있다.

상기에서 설명한 제제 이외에, 또한 화학식 I의 화합물은 데포 제제로서 제제화될 수 있다. 이러한 장 시간 작용 제제는 이식(예를 들면 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사에 의하여 투여될 수 있다. 그리하여, 예를 들면 화합물은 적절한 중합체 또는 소수성 물질(예를 들면 허용 가능한 오일중의 에멀젼으로서) 또는 이온 교환 수지를 사용하여 또는 가용성이 적은 유도체, 예를 들면 가용성이 적은 염으로서 제제화될 수 있다.

또한, 기타의 약학적 전달 시스템을 사용할 수 있다. 리포좀 및 에멀젼은 화학식 I의 화합물을 전달하는데 사용될 수 있는 전달 비히클의 주지된 예가 된다. 일반적으로, 독성이 더 크기는 하나, 특정의 유기 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드를 사용할 수 있다. 또한, 화학식 I의 화합물은 조절 방출 시스템에 전달될 수 있다. 한 구체예에서, 펌프를 사용할 수 있다. 문헌[Sefton, CRC Crit. Ref Biomed Eng., 1987, 14, 201; Buchwald et al., Surgery, 1980, 88, 507; Saudek et al., N. Engl. J. Med., 1989, 321, 574]. 또다른 구체예에서, 중합체 물질을 사용할 수 있다. 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer 및 Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen 및 Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger 및 Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem., 1983, 23, 61; Levy et al., Science, 1985, 228, 190; During et al., Ann. Neurol., 1989, 25, 351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71, 105]을 참조한다. 또다른 구체예에서, 조절 방출 시스템은 본 발명의 화합물의 표적, 예를 들면 폐 부근에 배치될 수 있으며, 그리하여 전신 투여의 일부분만을 필요로 하게 된다. 예를 들면, 문헌[Goodson, Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115 (1984)]을 참조한다. 기타의 조절 방출 시스템을 사용할 수 있다. 문헌[Langer, Science, 1990, 249, 1527]을 참조한다.

본 발명에 포함되는 점막 투여 제형을 제공하는데 사용될 수 있는 적절한 부형제(예, 담체 및 희석제) 및 기타의 물질은 약학 분야의 당업자에게 주지되어 있으며, 이는 소정의 약학적 조성물 또는 투여 제형이 투여되는 특정의 부위 또는 방법에 따라 달라진다. 이에 기초하여, 통상의 부형제의 예로는 비독성이고 약학적으로 허용 가능한 물, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 광유 및 이의 혼합물 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 추가의 성분은 당업계에서 주지되어 있다. 예를 들면 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990)]을 참조한다.

약학적 조성물 또는 투여 제형을 적용하는 조직 또는 약학적 조성물 또는 투여 제형의 pH를 조절하여 1 이상의 활성 성분의 전달을 개선시킬 수 있다. 유사하게, 용매 담체의 극성, 이의 이온 강도 또는 등장성 삼투압을 조절하여 전달을 개선시킬 수 있다. 또한, 화합물, 예컨대 스테아레이트를 약학적 조성물 또는 투여 제형에 첨가하여 전달을 개선시키도록 1 이상의 활성 성분의 친수성 또는 친유성을 이롭게 변경시킬 수 있다. 이와 관련하여, 스테아레이트는 제제화용 지질 비히클로서, 유화제 또는 계면활성제로서 및 전달 개선제 또는 투과 개선제로서 작용할 수 있다. 활성 성분의 각종 염, 수화물 또는 용매화물을 사용하여 상기 생성된 조성물의 성질을 추가로 조절할 수 있다.

키트

본 발명은 C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 유용한 화학식 I의 화합물을 포함하는 1 이상의 용기를 포함하는 약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 기타의 구체예에서, 본 발명은 C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 유용한 화학식 I의 화합물을 포함하는 1 이상의 용기, 및 상기 섹션 5.2.2에 제시한 것, 특히 항바이러스제, 인터페론, 바이러스 효소 억제제 또는 바이러스 복제 억제제(이에 한정되지 않음)를 비롯한 추가의 치료제, 바람직하게는 HCV 특이성을 갖거나 또는 항-HCV 활성을 나타내는 추가의 치료제를 포함하는 1 이상의 용기를 포함하는 약학적 팩 또는 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 약학적 조성물의 1 이상의 성분을 포함하는 1 이상의 용기를 포함하는 약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 임의로, 이러한 용기(들) 과 관련하여, 약학적 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 관할 기관에 의하여 처방된 제형에서의 공고문이 될 수 있으며, 이러한 공고문은 신체 관리에 대하여 제조, 사용 또는 판매 기관에 의한 승인을 나타낸다.

본 발명의 약제는 하기와 같은 반응 경로 및 합성 반응식을 사용하고, 입수가 용이한 출발 물질을 사용하여 당업계에 공지된 일반적인 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 예시되지 않은 화합물의 합성은 당업자에게 명백한 수정에 의하여, 예를 들면 방해하는 기를 적절히 보호함으로써, 당업자에게 공지된 기타의 적절한 제제로 변경시킴으로써 또는 반응 조건의 통상의 변경을 실시함으로써 성공적으로 실시될 수 있다. 또는, 본 명세서에서 개시된 기타의 반응 또는 당업계에 일반적으로 공지된 기타의 반응은 본 발명의 기타의 화합물의 제조에 대한 적용성을 갖는 것으로 인지될 것이다.

화합물 제조

하기에 설명한 합성 반응식에서, 특별한 언급이 없는 한 모든 온도는 섭씨를 나타내며, 모든 부 및 %는 중량을 기준으로 한 것이다. 제제는 통상의 공급처, 예컨대 알드리치 케미칼 컴파니 또는 랭카스터 신테시즈 리미치드로부터 구입하였으며, 특별한 언급이 없는 한 추가로 정제하지 않고 사용하였다. 테트라히드로푸란(THF) 및 N,N-디메틸포름아미드(DMF)는 알드리치로부터 Sure Seal 병에 담긴 상태로 입수하여 그대로 사용하였다. 특별한 언급이 없는 한 하기의 용매 및 제제를 무수 질소 블랭킷하에서 증류시켰다. THF 및 Et₂O는 Na-벤조페논 케틸로부터 증류 시켰으며, CH₂Cl₂, 디이소프로필아민, 피리딘 및 Et₃N은 CaH₂로부터 증류시키고; MeCN은 P₂O₅로부터 증류시킨 후, CaH₂로부터 증류시키고; MeOH는 Mg로부터 증류시키고; PhMe, EtOAc 및 i-PrOAc는 CaH₂로부터 증류시키고; TFAA는 무구 아르곤하에서 단순 대기압 증류에 의하여 정제하였다.

하기에 설명한 반응은 일반적으로 양의 압력의 아르곤하에서 무수 용매중에서 상온(특별한 언급이 없는 한)에서 실시하였으며, 반응 플라스크에는 기질 및 제제를 주사기를 통하여 투입하기 위하여 고무 격막을 장착하였다. 유리 제품은 오븐 건조 및/또는 가열 건조시켰다. 반응은 TLC에 의하여 분석하였으며, 출발 물질의 소비로 판단하여 중지시킨다. 분석용 박층 크로마토그래피 (TLC)는 알루미늄 백킹 실리카 겔 60 F₂₅₄ 0.2 ㎜ 플레이트 (EM 사이언스)상에서 실시하고, UV광(254 ㎚)로 가시화한 후, 시판중인 에탄올성 인몰리브덴산과 함께 가열하였다. 정제용 박층 크로마토그래피(TLC)는 알루미늄 백킹 실리카 겔 60 F₂₅₄ 1.0 ㎜ 플레이트(EM 사이언스)상에서 실시하고, UV광(254 ㎚)으로 가시화하였다.

워크업 처리는 통상적으로 반응 용매 또는 추출 용매를 사용하여 반응 부피를 2 배로 하여 실시하며, 그후 표기한 수용액을 사용하여 특별한 언급이 없는 한 추출 부피의 25 부피%를 사용하여 세정하였다. 생성물 용액을 무수 Na₂SO₄ 및/또는 Mg₂SO₄상에서 건조시킨 후, 여과 및 회전 증발기상에서의 감압하에서 용매를 증발시키고, 진공하에서 용매를 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피는 230-400 메쉬 실리 카 겔 또는 50-200 메쉬 중성 알루미나를 사용하여 양의 압력하에서 완료하였다. 수소분해 반응은 실시예에 표시한 압력에서 또는 상압에서 실시하였다.

¹H-NMR 스펙트럼은 400 ㎒에서 작동하는 Varian Mercury-VX400 기기상에서 기록하고, ¹³C-NMR 스펙트럼은 75 ㎒에서 작동하여 기록하였다. NMR 스펙트럼은 표준 물질로서 클로로포름(7.27 ppm 및 77.00 ppm), CD₃OD (3.4 및 4.8 ppm 및 49.3 ppm), DMSO-d₆ 또는 적절할 경우 내부 표준물질 테트라메틸실란(0.00 ppm)을 사용하여 CDCl₃ 용액(ppm 단위)으로서 얻었다. 필요할 경우, 기타의 NMR 용매를 사용하였다. 피이크 다중도는 하기와 같은 약어를 사용하여 보고하였다: s (단일선), d (이중선) t (삼중선), q (사중선), m (다중선), br (넓음), dd (이중선의 이중선), dt (삼중선의 이중선). 커플링 상수를 제시할 경우 헤르츠(㎐) 단위로 보고하였다.

적외선(IR) 스펙트럼은 니트 오일로서, KBr 펠릿으로서 또는 CDCl₃ 용액으로서 FT-IR 분광계상에서 보고하였으며, 파수를 제시할 경우 ㎝^-1 단위로 보고하였다. 보고한 중량 스펙트럼은 애나디스 파마슈티칼스, 인코포레이티드의 분석화학부에서 실시한 (+)-ES LC/MS이다. 원소 분석은 미국 조지아주 노르크로스에 소재하는 애틀란틱 마이크로랩, 인코포레이티드에 의하여 실시하였다. 융점(mp)은 개방 모세관 장치상에서 측정하였으며, 보정하지 않았다.

기재한 합성 경로 및 실험 절차는 다수의 공통의 화합물 약어, THF (테트라 히드로푸란), DMF (N,N-디메틸포름아미드), EtOAc (에틸 아세테이트), DMSO (디메틸 설폭시드), DMAP (4-디메틸아미노피리딘), DBU (1,8-디아자시클로[5.4.0]운데크-7-엔), DCM (4-(디시아노메틸렌)-2-메틸-6-(4-디메틸아미노-스티릴)-4H-피란), MCPBA (3-클로로퍼옥시안식향산), EDC (1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염), HATU (O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), HOBT (1-히드록시벤조트리아졸 수화물), TFAA (트리플루오로아세트산 무수물), pyBOP (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트), DIEA (디이소프로필에틸아민), BOC (t-부톡시카르보닐), 2,2-DMP (2,2-디메톡시프로판), IPA (이소프로필 알콜), TEA (트리에틸아민), DCE (1,2-디클로로에탄), PPTS (피리디늄 p-톨루엔설포네이트), DEAD (디에틸아조디카르복실레이트), PS (지지된 중합체), HF (불화수소), MeCN (아세토니트릴), MeOH (메탄올), Val (발린), Phe (페닐 알라닌), HPLC (고압 액체 크로마토그래피), TLC (박층 크로마토그래피) 등을 사용하였다.

하기 반응식 1은 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온의 5'-아미노산 에스테르를 제조하는 일반적인 절차를 예시한다.

통상의 합성 경로에서, 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온의 β-D-리보스 부분의 2',3'-히드록실 기를 우선 바람직하게는 화합물(2)에 도시한 바와 같이 아세토니드를 사용하여 보호한다. 그후, 유리 5'-히드록실을 N-보호된 아미노산을 사용한 다양한 에스테르화 방법으로 처리하여 화학식 IIa를 형성할 수 있다. 아미노산 에스테르의 질소 및 리보스 단위의 2',3'-히드록실을 다양한 탈보호 조건에서, 바람직하게는 동시에 처리한 후, 화학식 II에 대하여 예시한 바와 같이 아미노산 에스테르의 유리 아민의 염 형성을 실시한다.

실시예 1: 5-아미노-3-(5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피 리미딘-2,7-디온 이염산염(3)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온의 제조

250 ㎖ Morton 플라스크에 수용된 아세톤 (40 ㎖)중의 화합물(1) (5.37 g, 17.0 mmol, 본 명세서에서 참고로 인용하는 미국 특허 제5,041,426호(실시예 2)에 제시된 절차에 의하여 생성함)의 불균질 혼합물에 2,2-DMP (6.26 ㎖, 50.9 mmol), DMSO (6.6 ㎖) 및 MeSO₃H (220 ㎕, 3.39 mmol)를 실온에서 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 격렬하게 교반하여 균질하게 만들고, 디올인 황금색이 소모되었다. TLC 분석 (SiO₂, 10% MeOH-CHCl₃)에 의하면, 6 시간후 반응이 완료된 것으로 나타났다. 용해되지 않은 고형물을 세로홈이 있는 Whatman 타입 1 여과지를 사용하여 중력 여과로 제거하였다. 그후, 여과액을 10 부피의 빙수(약 400 ㎖)에 부었으며, 그리하여 백색 고형물이 즉시 침전되었다. 약간의 교반후, 물 (10 ㎖)에 용해된 NaHCO₃ (285 ㎎, 3.39 mmol)를 첨가하여 MeSO₃H를 중화시켰다. Morton 반응기중에서 격렬한 교반을 15 분간 지속한 후, 이때 혼합물을 거친 소결 유리 깔때기에 여과시켰다. 고형 물질을 빙수 (100 ㎖)로 세정하고, 공기 건조시킨 후, 추가로 고진공하에서 65℃에서 건조시켜 백색 고형물인 5.36 g (88%)의 아세토니드(2)를 얻 었다. mp 280-81℃.

¹H (DMSO-d₆) δ 1.28 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 3.43-3.55 (m, 2H), 3.95-3.99 (m, 1H), 4.77-4.80 (m, 1H), 4.88-4.91 (m, 1H), 5.24-5.26 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 6.97 (br s, 2H), 11.25 (s, 1H).

단계 2: 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시카르보닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(4)의 제조

0℃의 THF (9 ㎖)중의 N-부톡시카르보닐-(L)-발린 (671 ㎎, 2.81 mmol)의 용액에 EDC (588 ㎎, 3.07 mmol)를 첨가하였다. 생성된 균질한 혼합물을 45 분간 0℃에서 교반하고, 이때 불균질해졌으며, 상기 단계 1로부터의 고형 아세토니드(2) (1.00 g, 2.81 mmol)를 한 부분으로 첨가하였다. 그후, 고형 DMAP (522 ㎎, 4.27 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온이 되게 하고, 추가의 5 시간 동안 교반하고, 이를 25℃에서 회전 증발로 농축시켜 황색 시럽을 얻었다. 잔류물을 EtOAc (50 ㎖)에 용해시키고, 1 N HCl (10 ㎖)로 분배시킨 후, 포화 수성 NaHCO₃ (10 ㎖)로 산을 중화시켰다. 산성 수성상을 EtOAc (2×50 ㎖)로 추가로 추출한 후, 염기성 수성상으로 분배시켰다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조시키고, SiO₂의 단패드에 여과시키고, 농축시켜 발포체인 1.480 g (96%)의 Boc-보호된 아미노산 에스테르(4)를 얻었다. mp 158℃ (분해).

¹H (CDCl₃) δ 0.86 (d, J = 7.0, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.56 (s, 3H), 1.75 (br s, 1H), 2.08-2.19 (m, 1H), 4.20-4.24 (m, 2H), 4.30-4.37 (m, 1H), 4.56 (dd, J = 11.0, 5.9, 1H), 4.96 (dd, J = 6.2, 3.7, 1H), 5.11 (br d, J = 8.8, 1H), 5.29 (br d, J = 6.6, 1H), 5.88 (br s, 2H), 6.23 (s, 1H).

단계 3: 5-아미노-3-(5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 이염산염(3)의 제조

HCl 가스 흐름을 진한 H₂SO₄ 버블러에 통과시킨 후, 포화 용액을 얻을 때까지 0℃에서 무수 이소프로필 아세테이트 (80 ㎖)를 포함하는 250 ㎖ 3-목 Morton 플라스크로 보냈다. 이에, 이소프로필 아세테이트 (30 ㎖)중의 상기 단계 2로부터의 Boc-아미노산 에스테르(5.53 g, 9.95 mmol)의 용액을 첨가하여 5 분 이내에 백색 고형 침전물이 형성되었다. 여기에 10% (v/v) IPA (11 ㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시킨 후, 12 시간 동안 교반하였다. 균질한 반응 혼합물을 무수 톨루엔 (100 ㎖)으로 희석하였다. N₂하에서의 중간 공극 소결 유리 깔때기를 사용한 여과에 의하여 회백색의 무정형 고형물을 얻었다. 무수 THF중의 고형물을 마쇄한 후, 여과하고, 65℃에서 진공 건조시켜 백색 고형물인 3.677 g (81%)의 표제 화합물(3)을 얻었다.

mp 166-68℃ (분해).

¹H (DMSO-d₆) δ 0.90 (d, J = 7.0, 3H), 0.94 (d, J = 7.0, 3H), 2.14-2.18 (m, 1H), 3.83-3.85 (m, 1H), 3.96-4.00 (m, 1H), 4.23-4.28 (m, 2H), 4.42 (dd, J = 11.7, 3.4, 1H), 4.75 (dd, J = 10.3, 5.5, 1H), 5.81 (d, J = 4.4, 1H), 6.46 (br s, 3H), 7.23 (br s, 2H), 8.47 (s, 3H), 11.5 (br s, 1H).

C₁₅H₂₁N₅O₇S·2HCl의 원소분석:

이론치: C, 36.89; H, 4.75; Cl, 14.52; N, 14.34; S, 6.57;

실측치: C, 37.03: H, 4.74; Cl, 14.26; N, 14.24; S, 6.42.

실시예 2: 5-아미노-3-(5'-O-L-이소류실-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 3/2 염산염(5)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시카르보닐-L-이소류실)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미디닌-2,7-디온(6)의 제조

실시예 1의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시카르보닐-L-이소류실)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온(6)은 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온(2) 및 N-t-부톡시-L-이소류신(7)로부터 93%의 수율로 회백색 발포체로서 제조하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.29 (s, 1H), 7.09 (d, J = 8.0, 1H), 7.02 (br s, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.28 (d, J = 6.2, 1H), 5.06 (br s, 1H), 4.16-4.22 (m, 2H), 3.85 (dd, J = 8.0, 6.6, 1H), 1.68 (br s, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.34 (s, 9H), 1.29 (s, 3H), 0.71-0.89 (m, 5H).

단계 2: 5-아미노-3-(5'-O-L-이소류실-β-D-리보푸라노실)티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 이염산염(5)의 제조

실시예 2의 단계 3과 유사한 방법으로 상기 중간체로부터 백색 고형물인 표제 화합물을 80% 수율로 생성하였다. mp 173-174℃ (분해).

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.41 (br s, 1H), 8.41 (br s, 3H), 7.15 (br s, 2H), 5.82 (d, J = 4.8, 1H), 4.50-5.00 (m, 2H), 4.40 (dd, J = 11.7, 3.3, 1H), 4.21-4.30 (m, 2H), 3.91-4.0 (m, 2H), 1.84-1.91 (m, 1H), 1.37-1.44 (m, 1H), 1.19-1.27 (m, 1H), 0.80-0.87 (m, 6H).

C₁₆H₂₃N₅O₇S·3/2HCl의 원소 분석:

이론치: C, 39.69; H, 5.10; N, 14.47; Cl, 10.98; S, 6.62;

실측치: C, 39.05; H, 5.13; N, 13.73; Cl, 11.08; S, 6.02.

실시예 3: 5-아미노-3-(5'-O-[α-L-t-부틸글리시닐]-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(8)의 제조

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시-카르보닐-[α- L-t-부틸글리실]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(9)의 제조

실시예 1의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시카르보닐-[α-L-t-부틸글리시닐]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온(10)은 5-아미노-3-(2,3-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미디논-2,7-디온(2) 및 N-α-L-t-부톡시글리신으로부터 66%의 수율로 회백색 발포체로서 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.28 (br s, 1H), 6.70-7.40 (m, 3H), 6.02 (s, 1H), 5.30 (d, J = 6.2, 1H), 5.05 (br s, 1H), 4.17-4.24 (m, 3 H), 3.77 (d, J = 8.4, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.29 (s, 3H), 0.85 (s, 9H).

단계 2: 5-아미노-3-(5'-O-[α-L-t-부틸글리실]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(8)의 제조

실시예 1의 단계 3과 유사한 방법으로 상기 중간체로부터 백색 고형물인 표제 화합물(8)을 80% 수율로 얻었다. mp 202-203℃ (분해).

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.35 (br s, 1H), 8.31 (br s, 3H), 7.08 (br s, 2H), 5.83 (d, J = 4.0, 1H), 5.45 (br s, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.77-4.82 (m, 1H), 4.42 (dd, J = 11.4, 2.6, 1H), 4.23-4.28 (m, 1H), 3.96-4.04 (m, 1H), 3.74 (s, 1H), 0.97 (s, 9H).

C₁₆H₂₃N₅O₇S·HCl의 원소 분석:

이론치: C, 41.25; H, 5.19; N, 15.03; Cl, 7.61; S, 6.88;

실측치: C, 40.41; H, 5.41; N, 14.16; Cl, 7.01; S, 6.23.

실시예 4: 5-아미노-3-(5'-O-[α-L-N-메틸발리닐]-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(11)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시카르보닐-[α-L-N-메틸발리닐]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(12)의 제조

실시예 1의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-5'-N-t-부톡시카르보닐-[α-L-N-메틸발리닐]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온(12)은 5-아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온(2) 및 N-t-부톡시-L-N-메틸발린(13)으로부터 63%의 수율로 회백색 발포체로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) 회전이성체 카르바메이트 δ 11.28 (br s, 1H), 7.00 (br s, 2H), 6.02 (s, 1H), 5.27 (d, J = 6.6, 1H), 5.04 (br s, 1H), 4.14-4.28 (m, 3H), 3.91 (d, J = 9.5, 1H), 2.79 (br s, 3H), 2.09 (br s, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 4.5H), 1.32 (s, 4.5H), 1.28 (s, 3H), 0.78-0.89 (m, 6H).

단계 2: 5-아미노-3-(5'-O-[α-L-N-메틸발리닐]-β-D-리보푸라노실)티아졸 로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(11)

실시예 1의 단계 3과 유사한 방법으로 상기 중간체로부터 약간 불순한 백색 고형물인 표제 화합물(11)을 60%의 수율로 생성하였다. mp >180℃ (분해).

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.31 (br s, 1H), 9.05 (br s, 2H), 7.05 (br s, 2H), 5.83 (d, J = 4.4, 1H), 5.46 (br s, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.76-4.82 (m, 1H), 4.42-4.48 (m, 1H), 4.28-4.38 (m, 1H), 4.22-4.28 (m, 1H), 3.94-4.04 (m, 2H), 2.54 (br s, 3H), 2.23 (br s, 1H), 0.98 (d, J = 7.0, 3H), 0.88 (d, J = 7.0, 3H).

C₁₆H₂₃N₅O₇S·HCl의 원소 분석:

이론치: C, 41.25; H, 5.02; N, 15.03; S, 6.88; Cl, 7.61;

실측치: C, 40.57; H, 5.37; N, 13.57; S, 6.16; Cl, 7.29.

하기 반응식 2는 5-아미노-7-메톡시-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온 및 5,7-디아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 생성하는 일반적인 절차를 나타낸다.

실시예 5: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-7-메톡시-티아졸로[4,5- d ]피리미딘 -2-온(14)

무수물(1) (2.0 g, 6.3 mmol)을 무수 피리딘에 아르곤 대기하에서 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시키고, TFAA (13.3 g, 63 mmol)를 혼합물에 적가시켰다. 5 분후, 반응물을 60℃ 오일조에 1.5 시간 동안 두고, 피리디늄 양이온의 형성에 대하여 TLC (SiO₂, 20% MeOH-CHCl₃)에 의하여 모니터하였다. 0.2 R_f 출발 물질은 기준 점으로 변환되었으며, 이는 254 ㎚ UV광으로의 노출시 청색 형광이 나타났다. 활성화된 중간체로 전환시, 새로이 생성된 나트륨 메톡시드 (1.8 g Na, 78 mmol, 300 ㎖ 메탄올) 용액을 0℃에서 반응물에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 2 일간 진행시켰다. 혼합물을 1 M NH₄Cl (100 ㎖)로 종결시키고, 25% IPA-CHCl₃ (5×100 ㎖)로 추출하였다. 미정제 물질을 실리카 겔 플러그로 여과한 후, 농축시켜 1.6 g (75%)의 표제 화합물(14)을 얻었다. 분석 샘플은 정제용 TLC (SiO₂; 물, 메탄올, 에틸 아세테이트, 5:10:85)에 의하여 백색 고형물로서 얻었다. mp > 160℃ (분해). [M+H]⁺ 330.9, [2M+H]⁺ 661.1, [3M+H]⁺ 991.0; R_f = 0.6 (20% MeOH-CHCl₃); mp 200.4℃-200.9℃;

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 6.92 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.2, 1H), 5.28 (d, J = 5.6, 1H), 4.96 (d, J = 5.2, 1H), 4.78 (dd, J = 10.8, 5.6, 1H), 4.67 (t, J = 6.0, 1H), 4.07-4.10 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.70-3.80 (m, 1H), 3.55- 3.60 (m, 1H), 3.40-3.45 (m, 1H).

C₁₁H₁₄N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 40.00; H, 4.27; N, 16.96; S, 9.71;

실측치: C, 40.07; H, 4.43; N, 16.71; S, 9.53.

실시예 6: 5,7-디아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(15)

무수물(1) (0.3 g, 0.9 mmol)을 무수 피리딘에 아르곤 대기하에서 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시킨 후, TFAA (1.2 ㎖, 9.5 mmol)를 혼합물에 적가하였다. 5 분후, 반응물을 60℃ 오일조에 1.5 시간 동안 넣고, 피리디늄 양이온의 형성에 대하여 TLC (20% MeOH-CHCl₃)로 모니터하였다. 0.2 R_f 출발 물질은 기준 점으로 변환시켰으며, 이는 254 ㎚ UV광으로의 노출시 청색 형광이 나타났다. 활성화된 중간체로 전환시, 반응 플라스크를 얼음조에 넣었다. 온도가 평형화되도록 한 후, 30% NH₃ 수용액(25 ㎖)을 발열이 중단될 때까지 적가하고, 나머지를 첨가하였다. 5 분 이내에, 분석 TLC R_f 0.25 (SiO₂, 20% MeOH-CHCl₃)에 의하여 나타난 바와 같이 생성물이 형성되었다. 플라스크를 30 분간 실온으로 가온시킨 후, 수용액을 회전 진공하에서 탈기시킨 후, 25% IPA-CHCl₃ (5×100 ㎖)로 추출하였다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 10% MeOH-CHCl₃)로 처리하여 55 ㎎ (17%)의 약간 불순한 표제 화합물(15)을 얻었다. 분석 샘플은 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH- EtOAc, 5:10:85)에 의하여 백색 고형물로서 얻었다. mp > 155℃ (분해). [M+H]⁺ 316.0; R_f = 0.25 (SiO₂, 20% MeOH-CHCl₃);

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 6.76 (s, 2H), 6.14(s, 2H), 5.85 (d, J = 5.2, 1H), 5.22 (d, J = 4.8, 1H), 4.92 (d, J = 2.8, 1H), 4.70-4.83 (m, 2H), 4.05-4.10 (m, 1H), 3.65-3.80 (m, 1H), 3.52-3.62 (m, 1H) 3.40-3.50 (m, 1H).

C₁₀H₁₃N₅O₅S·1/2 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 37.03; H, 4.35; N, 21.59; S, 9.89.

실측치: C, 37.27; H, 4.32; N, 20.43; S, 10.11.

실시예 7: 5-아미노-7-메틸아미노-3-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(18)

단계 1: 5-아세틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7(6H)-디온(16)의 제조

무수물(1) (8.0 g, 39.5 mmol)을 무수 피리딘 (65 ㎖)에 용해시켰다. DMAP (3.1g, 25.3 mmol) 및 아세트산 무수물 (19.1 ㎖, 202.4 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 반응을 2 시간 동안 실온에서 진행시키고, 이를 포화 NaHCO₃ (100 ㎖)로 종결시키고, DCM (3×200 ㎖)로 추출하였다. 유기상을 농축하고, 에테르로 마쇄시켰다. 백색 고형물인 12.5 g (103%)의 약간 불순한 5-아세틸아미노-3-(2,3,5-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로-[4,5-d]피리미딘-2,7(6H)-디온(16)을 얻었다. mp 246.7-248.1℃; R_f = 0.20 (SiO₂, 50% EtOAc-CHCl₃);

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 12.23 (s, 1H), 11.85 (s, 1H), 5.97 (m, 2H), 5.48 (t, J = 6, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 4.25-4.31 (m, 1H), 4.08-4.18 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 2.00 (s, 3H).

단계 2: 5-아세틸아미노-7-(2,4,6-트리이소프로필-벤젠설포닐옥시)-3-(2,3,5-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(17)의 제조

상기 단계 1로부터의 중간체 (500 ㎎, 0.98 mmol)를 DCM (15 ㎖)에 상온에서 용해시켰다. DMAP (7.3 ㎎, 0.06 mmol) 및 TEA (16 ㎖, 11 mmol)를 용액에 첨가한 후, 염화2,4,6-트리이소프로필벤젠설포닐 (454 ㎎, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 1 시간 후, 반응이 완료되도록 하고, 미정제 혼합물을 농축시킨 후, 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 10% EtOAc-CHCl₃)로 정제시켜 발포 백색 고형물인 690 ㎎ (92%)의 5-아세틸아미노-7-(2,4,6-트리이소프로필-벤젠설포닐옥시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온(17)을 얻었다. 74.5-76.3℃; R_f = 0.7 (SiO₂, 20% EtOAc-CHCl₃);

¹H (400㎒, d₆-DMSO) δ 10.83 (s, 1H), 7.39 (s, 2H), 6.03 (d, J = 4.0, 1H), 5.91-5.96 (m, 1H), 5.69 (t, J = 6.4, 1H), 4.30-4.70 (m, 1H), 4.22-4.26 (m, 1H), 4.16-4.20 (m, 1H), 3.90-4.00 (m, 2H), 2.97-3.01 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.17-1.25 (m, 18H).

단계 3: 5-아세틸아미노-7-메틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(19)의 제조

상기 단계 2로부터의 중간체 (1.7 g, 2.27 mmol)를 디옥산 (20 ㎖)에 상온에서 용해시켰다. 여기에 메탄올중의 메틸아민 (3.4 ㎖, 6.8 mmol)의 2.0 M 용액을 첨가하였다. 2 시간 후, 출발 물질이 소모되었다. 반응 혼합물을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 구배 용출, 20-80% EtOAc-CHCl₃)로 정제하여 황색 오일인 945 ㎎ (83%)의 순수한 표제 화합물을 얻었다. [M+H]⁺ 498.2, [2M+H]⁺ 995.4; R_f = 0.55 (10% CH₃OH-CHCl₃);

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 10.13 (s, 1H), 7.70 (d, J = 4.41, 1H), 5.95-6.02 (m, 2H), 5.69 (s, 1H), 4.35-4.39 (m, 1H), 4.16-4.23 (m, 2H), 2.90 (d, J = 4.8, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.00 (s, 3H).

단계 4: 5-아미노-7-메틸아미노-3-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(18)의 제조

상기 단계 3으로부터의 중간체 (420 ㎎, 0.85 mmol)를 디옥산 (4 ㎖)에 용해시키고, 1 M LiOH (8.5 ㎖, 8.5 mmol)를 용액에 첨가하였다. O-아세틸 기룰 40 분 이내에 제거하여 R_f = 0.15 (SiO₂, 5% MeOH-EtOAc)에서의 중간체를 얻었다. 2 시간 후, N-아세틸을 TLC R_f = 0.20 (SiO₂, 5% MeOH-EtOAc)로 나타난 바와 같이 하여 제거하였다. 반응 혼합물을 화학량론적 아세트산으로 중화시키고, 25% IPA-CHCl₃로 추출한 후, 농축시켜 195 ㎎ (70%)의 화합물(18)을 얻었다. 표제 화합물(18)의 분석 샘플은 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70)에 의하여 백색 고형물을 얻었다. [M+H]⁺ 330.0; R_f = 0.20 (5% MeOH-EtOAc); mp > 108℃;

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 7.06 (d, J = 3.6, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.85 (d, J = 5.2, 1H), 5.22 (d, J = 4.8, 1H), 4.93 (d, J = 5.2, 1H), 4.70-4.80 (m, 2H), 4.07 (d, J = 4.8, 1H), 3.75 (d, J = 4.4, 1H), 3.5-3.6 (m, 1H), 3.40-3.50 (m, 1H), 2.82 (d, J = 4.4, 3H).

실시예 8: 5-아미노-7-디메틸아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(20)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-디메틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 7의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아세틸아미노-7-디메틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 80% 수율로 황색 오일로서 얻었다. M⁺ 511.14; R_f = 0.70 (SiO₂, 10% MeOH-CHCl₃);

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 10.15 (s, 1H), 6.10-6.15 (m, 1H), 5.98-6.09 (m, 1H), 5.5.66-5.70 (m, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 4.22-4.27 (m, 1H), 4.14-4.08 (m, 1H), 3.18 (s, 6H), 2.19 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).

단계 2: 5-아미노-7-디메틸아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(20)의 제조

실시예 7의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물(20)을 82%의 수율로 생성 하였다. 분석 샘플은 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70)에 의하여 백색 고형물로서 얻었다. [M+H]⁺ 344.0; [2M+H]⁺ 687.4; mp > 112℃; R_f = 0.20 (5% MeOH-EtOAc);

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 6.27 (s, 2H), 5.91 (d, J = 4.8, 1H), 5.22 (d, J = 6.0, 1H), 4.93 (d, J = 5.2, 1H), 4.71-4.76 (m, 2H), 4.07-4.09 (m, 1H), 3.7-3.8 (m, 1H), 3.5-3.6 (m, 1H), 3.5-3.6 (m, 1H), 3.09 (s, 6H).

C₁₂H₁₇N₅O₅S의 원소 분석:

이론치: C, 41.98; H, 4.99; N, 20.40;

실측치: C, 41.32; H, 5.14; N, 18.59.

실시예 9: 5-아미노-7-시클로프로필아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온 일염산염(21)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-시클로프로필아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 3의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아세틸아미노-7-시클로프로필아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 80% 수율로 황색 오일로서 얻었다. R_f = 0.45 (SiO₂, 75% EtOAc-CHCl₃);

¹H NMR (400㎒, D₆-DMSO) δ 10.11 (s, 1H), 7.87 (d, J = 2.8, 1H), 5.98-6.01 (m, 1H), 5.70-5.76 (s, 1H), 4.32-4.39 (m, 1H), 4.16-4.30 (m, 2H), 3.85 (s, 1H), 2.87 (s, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 0.73-0.76 (m, 2H), 0.57-0.60 (m, 2H).

단계 2: 5-아미노-7-시클로프로필아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 7의 단계 3과 유사한 방법으로 5-아미노-7-시클로프로필아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 79% 수율로 얻었다. 분석 샘플은 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70)에 의하여 백색 고형물로서 얻었다. R_f = 0.20 (5% MeOH-EtOAc); mp > 100℃; [M+H]⁺ 356.0;

¹H (400㎒, d₆-DMSO) δ 7.24 (s, 1H), 6.28 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.6, 1H), 5.22 (d, J = 6, 1H), 4.92 (d, J = 5.2, 1H), 4.70-4.80 (m, 2H), 4.05-4.10 (m, 1H), 3.7-3.8 (m, 1H), 3.5-3.6 (m, 1H), 3.45-3.50 (m, 1H), 2.8 (s, 1H), 0.68-0.70 (m, 2H), 0.54-0.57 (m, 2H).

단계 3: 5-아미노-7-시클로프로필아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온 염산염(21)의 제조

상기 단계 2에서 제조한 고형 물질을 격렬히 교반중인 디옥산중의 4 M HCl에 첨가하여 백색 고형물인 표제 화합물을 생성하였다. mp > 99℃;

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 7.25 (d, 1H, J = 2.8, 1H), 6.23 (s, 2H), 5.87 (d, J = 5.2, 1H), 5.21 (bs, 1H), 4.98 (bs, 1H), 4.73-4.79 (m, 2H), 4.09 (t, J = 5.6, 1H), 3.72-3.79 (m, 1H), 3.55-3.60 (m, 1H), 3.45-3.37 (m, 1H), 2.75-2.82 (m, 1H), 0.72-0.79 (m, 2H), 0.55-0.63 (m, 2H).

C₁₃H₁₇N₅O₅S·HCl의 원소 분석:

이론치: C, 39.85; H, 4.63; N, 17.87; Cl, 9.05;

실측치: C, 39.66; H, 4.85; N, 16.57; Cl, 8.13.

실시예 10: 5-아미노-7-시클로펜틸아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(22)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-피롤리디노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 7의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아세틸아미노-7-피롤리디노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 70%의 수율로 생성하였다. 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70)에 의하여 백 색 고형물인 분석 샘플을 얻었다. mp > 108℃ (분해). R_f = 0.80 (에틸 아세테이트중의 10% 물 및 20% 메탄올); [M+H]⁺ 384.0;

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 7.00 (d, J = 7.2, 1H), 6.17 (s, 2H), 5.18 (d, J = 5.2, 1H), 5.21 (d, J = 5.6, 1H), 4.92 (d, J = 5.6, 1H), 4.74-4.80 (m, 2H), 4.30-4.35 (m, 1H), 4.05-4.10 (m, 1H), 3.70-3.80 (m, 1H), 3.55-3.60 (m, 1H), 3.30-3.45 (m, 1H), 1.40-2.0 (m, 8H).

단계 2: 5-아미노-7-시클로펜틸아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 7의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물(22)를 70%의 수율로 얻었다. 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70)에 의하여 백색 고형물인 분석 샘플을 얻었다. mp > 108℃ (분해). R_f = 0.80 (에틸 아세테이트중의 20% 메탄올 및 10% 물); [M+H]⁺ 384.0;

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 7.00 (d, J = 7.2, 1H), 6.17 (s, 2H), 5.18 (d, J = 5.2, 1H), 5.21 (d, J = 5.6, 1H), 4.92 (d, J = 5.6, 1H), 4.74-4.80 (m, 2H), 4.30-4.35 (m, 1H), 4.05-4.10 (m, 1H), 3.70-3.80 (m, 1H), 3.55-3.60 (m, 1H), 3.30-3.45 (m, 1H), 1.40-2.0 (m, 8H).

실시예 11: 5-아미노-7-피롤리디노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리 미딘-2-온(23)

단계 1): 5-아세틸아미노-7-피롤리디노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 7의 단계 2와 유사한 방법으로 5-아세틸아미노-7-피롤리디노-3-(2,3,5-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 79%의 수율로 황색 오일로서 생성하였다. [M+H]⁺ 538.1; R_f = 0.80 (SiO₂, 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70);

¹H (400㎒, D₆-DMSO) δ 10.04 (s, 1H), 5.97-6.02 (m, 2H), 5.68 (s, 1H), 4.38 (dd, J = 11.6, 3.6, 1H), 4.15-4.23 (m, 2H), 3.58 (s, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.89 (s, 4H).

단계 2: 5-아미노-7-피롤리디노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 7의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물(23)을 81%의 수율로 생성하였다. 정제용 TLC (SiO₂; 물-MeOH-EtOAc, 10:20:70)에 의하여 백색 고형물인 분석 샘플을 얻었다. mp > 112.4℃ (분해). [M+H]⁺ 370.3;

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.22 (s, 2H), 5.90 (d, J = 4.8, 1H), 5.23 (d, J = 5.2, 1H), 4.94 (d, J = 4.4, 1H), 4.68-4.75 (m, 2H), 4.08 (d, J = 4.8, 1H), 3.71-3.76 (m, 1H), 3.55 (bs, 5H), 3.38-3.54 (m, 1H), 1.87 (s, 4H).

실시예 12: 5-아미노-7-시클로펜틸아미노-3-(5'-O-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온 염산염(24)

격렬히 교반하면서 중간체(B)를 이소프로필 아세테이트중의 무수 염화수소 용액에 0℃에서 용해시키고, 실온으로 가온시켰다. 균질한 혼합물에 추가의 이소프로필 아세테이트를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가의 12 시간 동안 교반하였다. 톨루엔을 첨가하고, 생성물을 여과하고, 진공하에서 건조시켜 소정의 디-HCl 염(24)를 얻었다.

중간체는 하기와 같이 생성하였다:

5-아미노-7-시클로펜틸아미노-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(A)

화합물 A는 Kini et al.의 절차에 따라 5-아미노-7-시클로펜틸아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온(22)와 아세톤, DMSO, 메탄설폰산 및 과량의 디메톡시프로판의 혼합물을 0℃에서 출발 물질이 소모될 때까지 교반하여 생성하였다. 반응 혼합물을 빙수에 첨가하고, 포화 NaHCO₃로 pH 7로 중화시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 농축시키고, 실리카상의 컬럼 크로마토그래피로 처리하여 2',3'-보호된 디올 생성물을 생성하였다.

5-아미노-7-시클로펜틸아미노-3-(5'-O-(N-(t-부톡시카르보닐)-L-발리닐)-2',3'-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(B)

0℃에서 THF중의 1.0 당량의 N-(t-부톡시카르보닐)-L-발린의 용액에 1.1 당량의 EDC를 첨가하였다. 30 분간 교반한 후, 1.0 당량의 5-아미노-7-시클로펜틸-3-(2',3'-O-이소프로필리덴-β-D-리보푸라노실)티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온(A) 및 1.5 당량의 DMAP를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 5 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, 1 N HCl로 분배시키고, 포화 수성 NaHCO₃ (10 ㎖)로 중화시켰다. 수성상을 EtOAc로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에서 증발시켜 중간 체(B)를 얻고, 이를 실리카상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하였다.

반응식 5a-5c

반응식 5a-5c는 5-아미노-7-알콕시-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 생성하기 위한 일반적인 절차를 나타낸다.

통상의 합성 경로에서, β-D-리보스 부분의 2',3',5'-히드록실 기 및/또는 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온의 5-아미노 기를 우선 바람직하게는 화합물(16), 화합물(25) 및 화합물(26)에 대하여 도시한 바와 같은 실릴 또는 아실 기로 보호한다. 7-위치에서의 카르보닐을 각종 알콜을 사용한 다양한 알킬화 방법으로 처리하여 화학식 IVa, 화학식 IVb 및 화학식 IVc를 형성한다. 리보스 단위의 2',3',5'-히드록실 및/또는 5-아미노 기의 질소를 적절한 탈보호 조건으로 처리하여 화학식 V를 생성시킨다. 필요할 경우, 화학식 V를 추가로 적절히 변형시킬 수 있다.

반응식 6a-6e

하기 반응식 6a-6e는 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 생성하기 위한 일반적인 방법을 나타낸다.

기타의 통상의 합성 경로에서, 5-아미노 기 및/또는 β-D-리보스의 2',3',5'-히드록실 기에서 바람직하게는 화합물(16) 또는 화합물(25)에 대하여 도시한 바와 같은 아실 기로 보호한 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온(1)은 7-위치에서의 C-7 카르보닐을, 환원될 수 있는 머캅토 및 할 로겐을 비롯한 다양한 기(이에 한정되지 않음)로 전환시키는 다양한 조건으로 처리할 수 있다. 불균질 또는 균질한 반응 조건하에서의 환원 반응후, 리보스 단위의 2',3',5'-히드록실 및/또는 5-아미노 기의 질소를 적절한 탈보호 조건으로 처리하여 화합물(79)를 생성한다. 필요할 경우, 화합물(79)를 추가로 적절히 변형시킬 수 있다. 또다른 방법에서, 5-아미노-3H-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온을 합성하고, 각종 글리코실화 조건하에서 적절한 β-D-리보스로 추가로 처리한다.

하기 반응식 7은 5-아미노-7-치환된 및 7-미치환-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온의 에스테르를 생성하기 위한 일반적인 절차를 나타낸다.

통상의 합성 경로에서, β-D-리보스 부분 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘의 5'-히드록실 기를 바람직하게는 화학식 VII에 대하여 도시 한 바와 같은 적절한 실릴기를 사용하여 선택적으로 보호한다. 그후, 2'- 및 3'-히드록실 기를 각종의 에스테르화 방법으로 처리하여 화학식 VIII를 형성한다. 리보스 단위의 5'-히드록실을 적절한 탈보호 조건으로 처리하여 화학식 IX를 생성한다. 필요할 경우, 화학식 IX를 추가로 적절히 변형시킬 수 있다.

하기 화학식 8은 5-아미노-3-(5'-O-아미노산 에스테르)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온의 에스테르화 반응의 일반적인 절차를 나타낸다.

통상의 합성 경로에서, 화학식 II의 5'-아미노산 에스테르의 N-말단 아민을 바람직하게는 적절한 알콕시-카르보닐 기로 선택적으로 보호한 후, 화학식 XI에 대하여 도시한 바와 같은 2' 및 3' 히드록실 기의 에스테르화 반응을 실시한다. N-말단 아민을 적절한 탈보호 조건으로 처리하여 화학식 XII를 생성한다.

하기 반응식 9는 N-말단 보호된 펩티드를 사용한 5'-히드록실에서의 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2,7-디온의 에스테르화 반응에 대한 일반적인 절차를 나타낸다.

통상의 합성 경로에서, 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘 예컨대 화합물(2)의 2',3'-히드록시 보호된 β-D-리보스 부분인 5'-히드록실 기는 N-보호된 말단 아민 (바람직하게는 적절한 알콕시-카르보닐 기) 펩티드로 에스테르화되어 화학식 XIII의 5'-아미노산 에스테르를 형성한다. N-말단 아민 및 2',3'-히드록시 기 모두를 동시에 적절한 탈보호 조건으로 처리하여 화학식 XIV를 생성한다.

하기 화학식 10은 5-아미노-7-치환된 및 7-미치환-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온의 5'-에스테르를 생성하는 일반적인 절차를 나타낸 다.

통상의 합성 경로에서, 예컨대 화학식 VII에서 5'-히드록실 보호된 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실티아졸로[4,5-d]피리미딘의 2'- 및 3'-히드록실 기를 보호한다. 이상적으로, 유리 5'-히드록실 기는 화학식 XV에서 도시한 바와 같이 2'- 및 3'-히드록실 기를 보호하는 조건하에서 탈보호시킨다. 그후, 리보스 단위의 5'-히드록실을 적절한 카르복실산 또는 이의 유도체를 사용한 다양한 에스테르화 조건으로 처리하여 화학식 XVI를 생성한다. 그후, 리보스 단위의 2',3'-히드록실 기를 적절한 탈보호 조건으로 처리하여 화학식 XVII를 생성한다. 필요할 경우, 화학식 XVII를 추가로 적절히 변형시킬 수 있다.

실시예 13: 5-아미노-7-이소프로폭시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ] 피리미딘-2-온(28)

단계 1: 5-아세틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(16)의 제조

무수물(1) (8.17 g, 25.7 mmol) 및 DMAP (3.13 g, 25.7 mmol)를 무수 아세토니트릴 (125 ㎖)에 현탁시켰다. 아세트산 무수물 (24.5 ㎖, 257 mmol)을 현탁액에 서서히 첨가하였다. 반응 플라스크에 물 냉각 환류 응축기를 장착하고, 4.5 시간 동안 환류시켰다. 그후, 반응 혼합물을 600 ㎖의 물에 부었다. 고형물을 1 시간 동안 침전시켰다. 고형물을 수집하고, 건조시키고, 에틸 에테르 (80 ㎖)중에서 18 시간 동안 마쇄시켰다. 이는 황갈색 고형물인 10.3 g (82.5%)의 화합물(16)을 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 12.19 (s, 1H), 11.81 (s, 1H), 5.95 (m, 2H), 5.49 (m, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.25 (m, 1H), 4.07 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.00 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 485. R_f = 0.45 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

C₁₈H₂₀N₄O₁₀S의 원소 분석:

이론치: C, 44.63; H, 4.16; N, 11.57; S, 6.62.

실측치: C, 44.40; H, 4.18; N, 11.58; S, 6.56.

단계 2: 5-아세틸아미노-7-이소프로폭시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(27)의 제조

화합물 (16) (650 ㎎, 1.34 mmol) 및 Argonaut PS-트리페닐포스핀 수지 (4.02 mmol, 1.86 g)를 화염 건조시킨 플라스크내에서 건조 질소 대기하에 둔 후, 무수 THF (20 ㎖)를 첨가하였다. 그후, 플라스크를 얼음조내에서 0℃로 냉각시켰다. 이소프로판올 (IPA) (0.20 ㎖, 2.68 mmol)을 첨가한 후, 디에틸 아조디카르복실레이트 (DEAD) (0.366 ㎖, 2.0 mmol)를 적가하였다. 플라스크를 얼음조로부터 꺼내어 상온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 TLC에 의하여 화합물(16)이 소실된 것을 모니터하였다. 화합물(16)을 소비하면, 고형물 지지된 물질을 여과하여 제거하였다. 미정제 반응 혼합물을 클로로포름중의 에틸 아세테이트의 15 내지 60% 구배를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. 용매를 제거하여 백색 발포체인 460 ㎎ (64.9%)의 화합물(27)을 얻었다. MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 527. R_f = 0.7 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 3: 5-아미노-7-이소프로폭시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(28)의 제조

화합물(27) (600 ㎎, 1.14 mmol)을 건조 질소 대기하에서 메탄올 (15 ㎖)에 용해시켰다. K₂CO₃ (31.5 ㎎, 0.2 mmol)를 첨가하고, TLC (1:1 THF:클로로포름)로 주기적으로 모니터하면서 혼합물을 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에서 농축시키고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (클로로포름중의 3% 메탄올)로 정제하였다. 분리한 고형물을 에틸 에테르로 마쇄하여 백색 고형물인 210 ㎎ (51%)의 순수한 화합물(28)을 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.83 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.34 (m, 1H), 5.26 (d, J = 5.6 ㎐, 2H), 4.95 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.58 (m,1H), 3.43 (m,1H), 1.29 (d, J = 6.4 ㎐, 6H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 359, [2M+H]⁺ m/z 717.3. R_f = 0.2 (50% THF-CHCl₃).

C₁₃H₁₈N₄O₁₆S의 원소 분석:

이론치: C, 43.57; H, 5.06; N, 15.63; S, 8.95.

실측치: C, 43.39; H, 5.07; N, 15.45; S, 8.82.

실시예 14: 5-아미노-7-에톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(30)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-에톡시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라 노실)-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온(29)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(16) 및 에탄올로부터 화합물(29)을 72%의 수율로 백색 발포체로서 생성하였다. MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 513. R_f = 0.45 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-에톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(30)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(29)로부터 65% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.87 (s, 2H), 5.85 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.27 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.36 (m, 2H), 4.09 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.58 (m,1H), 3.40 (m, 1H), 1.29 (m, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 445, [2M+H]⁺ m/z 689. R_f = 0.2 (50% THF-CHCl₃).

C₁₂H₁₆N₄O₆S·0.25 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 41.31; H, 4.77; N, 16.06; S, 9.19.

실측치: C, 41.24; H, 4.71; N, 15.89; S, 9.06.

실시예 15: 5-아미노-7-벤질옥시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리 미딘-2-온(32)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-벤질옥시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(31)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(31)을 화합물(16) 및 벤질 알콜로부터 77% 수율로 백색 발포체로서 생성하였다. MS (+)-ES [M+H]⁺ 575. R_f = 0.55 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-벤질옥시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(32)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(31)로부터 62% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.39 (bm, 5H), 6.95 (s, 2H), 5.86 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.28 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.66 (m,1H), 4.09 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.42 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 407, [2M+H] 813. R_f = 0.15 (50% THF-CHCl₃).

C₁₇H₁₈N₄O₁₆S의 원소 분석:

이론치: C, 50.24; H, 4.46; N, 13.79; S, 7.89.

실측치: C, 49.97; H, 4.55; N, 13.44; S, 7.70.

실시예 16: 5-아미노-7-(4-메톡시-벤질옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(34)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-(4-메톡시-벤질옥시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(33)을 화합물(16) 및 4-메톡실-벤질 알콜로부터 72% 수율로 백색 발포체로서 얻었다. [M+H]⁺ 605. R_f = 0.5 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-(4-메톡시-벤질옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(34)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(33)으로부터 68%의 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.38 (dd, J = 8,4, 2.0 ㎐, 2H), 6.93 (s, 2H), 6.91 (dd, J = 6.8, 2.0 ㎐, 2H), 5.85 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.27 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.2, 1H), 4.78 (m, 2H), 4.65 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.74 (m, 3H), 3.55 (m, 1H), 3.41 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 437, [2M+H]⁺ 873. R_f = 0.3 (50% THF-CHCl₃).

C₁₈H₂₀N₄O₇S·1.0 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 47.57; H, 4.88; N, 12.33; S, 7.06.

실측치: C, 47.28; H, 4.91; N, 12.36; S, 7.10.

실시예 17: 7-알릴옥시-5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(36)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-알릴옥시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(35)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(35)를 화합물(16) 및 알릴 알콜로부터 73%의 수율로 백색 발포체로서 생성하였다. [M+H]⁺ 525. R_f = 0.6 (75% 에틸 아세테이트/CHCl₃).

단계 2: 7-알릴옥시-5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(36)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(35)로부터 69% 의 수율로 백색 발포체로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.90 (s, 2H), 6.04 (m, 1H), 5.86 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.26 (m, 2H), 4.96 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.79 (m, 2H), 4.66 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.45 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 357, [2M+H]⁺ 713. R_f = 0.3 (50% THF-CHCl₃).

C₁₃H₁₆N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 43.82; H, 4.53; N, 15.72; S, 9.00.

실측치: C, 43.65; H, 4.65; N, 15.64; S, 8.96.

실시예 18: 5-아미노-7-(3-메틸-부트-2-에닐옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(38)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-(3-메틸-부트-2-에닐옥시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(37)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(37)을 화합물(16) 및 3-메틸-부트-2-엔-1-올로부터 76% 수율로 백색 발포체로서 생성하였다. MS (+)-ES [M+H]⁺ 553. R_f = 0.8 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-(3-메틸-부트-2-에닐옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(38)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(37)로부터 68%의 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.86 (s, 1H), 5.85 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.41 (m, 1H), 5.27 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.86 (d, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.56 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.70 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 385. R_f = 0.35 (50% THF-CHCl₃).

C₁₅H₂₀N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 46.87; H, 5.24; N, 14.57; S, 8.34.

실측치: C, 46.86; H, 5.24; N, 14.62; S, 8.34.

실시예 19: 5-아미노-7-(프로프-2-이닐옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(40)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-(프로프-2-이닐옥시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸- 3-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(39)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(39)을 화합물(16) 및 프로파르길 알콜로부터 62%의 수율로 백색 발포체로서 생성하였다. MS (+)-ES [M+H]⁺ 523. R_f = 0.7 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-(프로프-2-이닐옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(40)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(39)로부터 68%의 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.99 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.29 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.97 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.65 (m, 2H), 4.08 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.28 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 355. R_f = 0.25 (50% THF-CHCl₃).

C₁₃H₁₄N₄O₆S·0.5 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 42.97; H, 4.16; N, 15.42; S, 9.82;

실측치: C, 43.22; H, 4.27; N, 14.80; S, 8.47.

실시예 20: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘 -7-일옥시)-아세트산 메틸 에스테르(42)

단계 1: [5-아세틸아미노-2-옥소-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-3-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시]-아세트산 메틸 에스테르(41)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(41)을 화합물(16) 및 히드록실-아세트산 메틸 에스테르로부터 58%의 수율로 백색 발포체로서 생성하였다. MS (+)-ES [M+H]⁺ 556. R_f = 0.45 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시)-아세트산 메틸 에스테르(42)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(41)로부터 57%의 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.93 (s, 3H), 5.86 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.28 (m, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.95 (s, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.55 (m, 1H), 3.42 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 389, [2M+H]⁺ 777.3. R_f = 0.15 (75% THF-CHCl₃).

C₁₃H₁₆N₄O₈S의 원소 분석:

이론치: C, 40.21; H, 4.15; N, 14.43; S, 8.26.

실측치: C, 40.07; H, 4.25; N, 14.20; S, 8.11.

실시예 21: 2-(5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시)-프로피온산 메틸 에스테르(44)

단계 1: 2-[5-아세틸아미노-2-옥소-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-3-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시]-프로피온산 메틸 에스테르(43)

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(43)을 화합물(16) 및 (±) 2-히드록시-프로피온산 메틸 에스테르로부터 55% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

MS (+)-ES [M+H]⁺ 571. R_f = 0.4 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 2-(5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시)-프로피온산 메틸 에스테르(44)

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(43)으로부터 63% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.88 (s, 2H), 5.84 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.39 (m, 1H), 5.29 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.97 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.56 (m, 1H), 3.43(m, 1H), 1.51 (d, J = 6.8 ㎐, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 403, [2M+H]⁺ 805. R_f = 0.15 (50% THF-CHCl₃).

C₁₄H₁₈N₄O₈S의 원소 분석:

이론치: C, 41.79; H, 4.51; N, 13.92; S, 7.97.

실측치: C, 41.77; H, 4.50; N, 13.88; S, 7.94.

실시예 22: 5-아미노-7-메톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(14)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-메톡시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(45)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(45)를 화합물(16) 및 메탄올로부터 65% 수율로 백색 발포체로서 생성하였다.

MS (+)-ES [M+H]⁺ 499. R_f = 0.5 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-메톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘- 2-온(14)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(45)로부터 78% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.91 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.28 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.56 (m, 1H), 3.43 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 331. R_f = 0.2 (50% THF-CHCl₃).

C₁₁H₁₄N₄O₆S·0.25 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 39.46; H, 4.37; N, 16.73; S, 9.58.

실측치: C, 39.59; H, 4.17; N, 16.55; S, 9.52.

실시예 23: 5-아미노-7-프로폭시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(47)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-프로폭시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(46)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(46)을 화합물(16) 및 n-프로 판올로부터 65% 수율로 백색 발포체로서 생성하였다.

MS (+)-ES [M+H]⁺ 527. R_f = 0.55 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-프로폭시-3-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(47)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(47)로부터 70% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.87 (s, 2H), 5.85 (J = 5.2 ㎐, 1H), 5.28 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 1.2 ㎐, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.29 (m, 2H), 4.08 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.56 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 1.71 (m, 2H), 0.92 (m, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 359. R_f = 0.3 (50% THF-CHCl₃).

C₁₃H₁₈N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 43.57; H, 5.06; N, 15.63; S, 8.95.

실측치: C, 43.77; H, 5.29; N, 15.39; S, 8.81.

실시예 24: 5-아미노-7-부톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미 딘-2-온(49)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-부톡시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(48)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(48)을 화합물(16) 및 n-부탄올로부터 64% 수율로 백색 페이스트로서 생성하였다.

MS (+)-ES [M+H]⁺ 541. R_f = 0.65 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

단계 2: 5-아미노-7-부톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(49)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(48)로부터 72% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.87 (s, 2H), 5.85 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.28 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.95 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.41 (m, 1H), 1.63 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 0.92 (m, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 373. R_f = 0.25 (50% THF-CHCl₃).

C₁₄H₂₀N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 45.15; H, 5.41; N, 15.04; S, 8.61.

실측치: C, 44.79; H, 5.34; N, 15.02; S, 8.60.

실시예 25: 5-아미노-7-(4-플루오로벤질옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(51)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-(4-플루오로벤질옥시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(50)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(50)을 화합물(16) 및 4-플루오로벤질 알콜로부터 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 8.20 (m, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 6.10 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 6.02 (dd, J = 3.0, 6.0 ㎐, 1H), 5.92 (t, J = 5.0 ㎐, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.51 (dd, J = 4.0, 6.0 ㎐, 1H), 4.34 (m, 1), 4.23 (dd, J = 4.0, 8.0 ㎐, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.04 (s, 3H).

단계 2: 5-아미노-7-(4-플루오로벤질옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(51)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(50)로부터 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.50 (m, 2H), 7.19 (m, 2H), 6.96 (s, 2H), 5.86 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.28 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.78 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.66 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.09 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.75 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.42 (m, 1H).

실시예 26: 5-아미노-7-(3-히드록시-1-프로폭시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(53)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-(3-아세톡시-1-프로폭시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(52)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(52)를 화합물(16) 및 1,3-프로판디올 모노아세테이트로부터 생성하였다. 문헌[Dittmer, JACS, 79, 4431-35) (1957)].

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 8.17 (s, 1H), 6.10 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 6.02 (dd, J = 2.8, 6.0 ㎐, 1H), 5.89 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.56-4.89 (m, 3H), 4.34 (m, 1H), 4.26-4.20 (m, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.15 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H).

단계 2: 5-아미노-7-(3-히드록시-1-프로폭시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로 -[4,5- d ]피리미딘-2-온(53)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(52)로부터 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.87 (s, 2), 5.86 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.28 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.78 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.67 (t, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.53 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.40 (t, J = 6.8 ㎐, 2H), 4.09 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.75 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.50 (q, J = 6.4 ㎐, 2H), 3.42 (m, 1H), 1.83 (m, 2H).

실시예 27: 5-아미노-7-(4-히드록시-1-부톡시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(55)

단계 1: 5-아세틸아미노-7-(4-아세톡시-1-부톡시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(54)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(54)을 화합물(16) 및 1,4-부탄디올 모노아세테이트로부터 생성하였다. 문헌[Clarke, Tet. Lett., 43(27), 4761-64 (2002)].

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 8.15 (s, 1H), 6.10 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 6.02 (dd, J = 3.2, 6.4 ㎐, 1H), 5.89 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 4.50 (m, 3H), 4.32 (m, 1H), 4.24 (dd, J = 6.4, 12.0 ㎐, 1H), 4.13 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.78 (m, 2H).

단계 2: 5-아미노-7-(4-히드록시-1-부톡시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5-d]피리미딘-2-온(55)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(54)로부터 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.87 (s, 2H), 5.85 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.79 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.43 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.35 (t, J = 6.8 ㎐, 2H), 4.09 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.75 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.42 (m, 3H), 1.72 (m, 2H), 1.50 (m, 2H).

실시예 28: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-에틸-카르밤산 에틸 에스테르(58)

단계 1: N-에틸-N-(히드록시메틸)우레탄 (56)의 제조

문헌[Kelper, JOC, 52, 453-55 (1987)]에 보고된 일반적인 실험 조건하에서, 물 (480 ㎕)중의 Ba(OH)₂ (46.0 ㎎, 266 μmol)의 슬러리를 N-에틸우레탄 (2.04 ㎖, 17.1 mmol) 및 37% 포르말린 수용액 (1.28 ㎖, 17.1 mmol)의 혼합물에 교반하면서 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물이 냉각되도록 하고, 점차로 흐린 용액이 형성되었다. 혼합물을 실온에서 교반하고, TLC 분석에 의하여 N-에틸우레탄의 소실을 모니터하였다. 2 시간 후, 고체 CO₂를 첨가하여 반응을 종결시키고, 30 분간 교반하고, 여과하여 침전된 탄산바륨을 제거하였다. 용매를 진공하에서 제거하여 오일 잔류물을 제공하였다. 미량의 물은 벤젠 (3×100 ㎖)과의 공비 증류에 의하여 제거하여 맑은 오일인 화합물(56) (2.50 g, 정량적)을 제공하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 4.88 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 4.79 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 4.18 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 3.40 (q, J = 6.4 ㎐, 2H), 1.30 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 1.19 (t, J = 7.6 ㎐, 3H).

단계 2: 5-아세틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-에틸-카르밤산 에틸 에스테르(57)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(57)을 화합물(16) 및 화합물(56)으로부터 백색 고형물로서 24% 수율로 생성하였다.

R_f = 0.4 (33% EtOAc-CHCl₃);

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 11.49 (br s, 1H), 6.08 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.75 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.49 (dd, J = 13.5, 8.4 ㎐, 1H), 4.30 (m, 5H), 3.62 (q, J = 7.2 ㎐, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.36 (t, J = 6.8 ㎐, 3H), 1.20 (t, J = 6.8 ㎐, 3H); [M+H]⁺ 614.2.

단계 3: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-에틸-카르밤산 에틸 에스테르(58)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(57)로부터 백색 고형물인 30% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.89 (br s, 2H), 5.82 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.49 (m, 3H), 5.32 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.01 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.82 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.69 (t, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.20 (q, J = 7.2 ㎐, 2H), 4.11 (q, J = 5.6 ㎐, 2H), 3.78 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 1.27 (t, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.09 (t, J = 6.0 ㎐, 3H); [M+H]⁺ 446.3.

실시예 29: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-메틸-카르밤산 에틸 에스테르(61)

단계 1: N-메틸-N-(히드록시메틸)우레탄(59)의 제조

실시예 28의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(59)를 N-메틸우레탄 및 포르말린으로부터 진한 오일로서 정량적 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 5.02 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 4.79 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 4.18 (q, J = 4.4 ㎐, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.30 (t, J = 7.6 ㎐, 3H).

단계 2: (5-아미노-2-옥소-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-메틸-카르밤산 에틸 에스테르(60)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(60)을 화합물(16) 및 화합물(59)로부터 백색 고형물로서 24% 수율로 생성하였다.

R_f = 0.4 (33% EtOAc-CHCl₃);

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 11.49 (br s, 1H), 6.08 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.75 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.49 (dd, J = 13.5, 8.4 ㎐, 1H), 4.30 (m, 5H), 3.62 (q, J = 7.2 ㎐, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.36 (t, J = 6.8 ㎐, 3H), 1.20 (t, J = 6.8 ㎐, 3H); [M+H]⁺ 614.2.

단계 3: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-메틸-카르밤산 에틸 에스테르(61)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(60)로부터 백색 고형물로서 20% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.86 (br s, 2H), 5.82 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.31 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.00 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.82 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.67 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.18 (q, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.12 (m, 1H), 3.78 (q, J = 6.0 ㎐, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.47 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 1.27 (t, J = 6.8 ㎐, 3H); [M+H]⁺ 432.3.

실시예 30: 5-아미노-7-시클로프로필메톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(63)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(25)의 제조

아세토니트릴 (160 ㎖)중의 화합물(1) (5.00 g, 15.8 mmol)의 현탁액에 0℃에서 Et₃N (11.0 ㎖, 79.0 mmol), DMAP (195 ㎎, 1.59 mmol) 및 Ac₂O (4.47 ㎖, 47.4 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 이를 갈색 시럽으로 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, MeOH/CHCl₃ = 1-10%)로 정제하여 백색 고형물인 6.22 g (89%)의 트리아세테이 트(25)를 얻었다. mp 198-199℃.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.34 (s, 1H), 7.02 (br s, 2H), 5.90 (m, 2H), 5.51 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 12.4, 3.2 ㎐, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.08 (q, J = 6.0 ㎐, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.00 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 443.3.

단계 2: 5-아미노-7-시클로프로필메톡시-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(62)의 제조

THF (70 ㎖) 중의 상기 트리아세테이트(25) (1.49 g, 3.37 mmol), Argonaut 지지된 중합체-트리페닐포스핀 수지 (5.98 g, 10.1 mmol) 및 시클로프로필메틸 카르비놀 (546 ㎕, 6.74 mmol)의 불균질 혼합물에 0℃에서 DEAD (742 ㎕, 4.72 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 16 시간 동안 교반하고, 그후, SiO₂의 단패드에 여과시켰다. 농축된 여과액을 크로마토그래피(SiO₂, 구배 용출, 0-5% EtOAc-CHCl₃)로 처리하여 680 ㎎ (42%)의 백색 고형물을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.95 (s, 2H), 5.99 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.91 (dd, J = 6.2, 4.0 ㎐, 1H), 5.55 (dd, J = 6.6, 6.2 ㎐, 1H), 4.37 (dd, J = 12.1, 3.7 ㎐, 1H), 4.22-4.26 (m, 1H), 4.19 (d, J = 7.0 ㎐, 2H), 4.09 (dd, J = 11.7, 5.9 ㎐, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.20-1.26 (m, 1H), 0.53-0.58 (m, 2H), 0.31-0.35 (m, 2H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 497.

C₂₀H₂₄N₄O₉S의 원소 분석:

이론치: C, 48.38; H, 4.87; N, 11.28; S, 6.46.

실측치: C, 48.53; H, 4.99; N, 11.27; S, 6.18.

단계 3: 5-아미노-7-시클로프로필메톡시-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(63)의 제조

MeOH중의 화합물(62) (570 ㎎, 1.18 mmol)의 현탁액에 K₂CO₃ (50 ㎎, 0.36 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 농축시키고, 20% IPA-CHCl₃ 및 물의 사이에 분배시킨 후, Et₂O로 마쇄시켜 백색 고형물인 128 ㎎ (29%)의 화합물(63)을 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.86 (s, 2H), 5.85 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 5.27 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.77 (q, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.66 (t, J = 5.9 ㎐, 1H), 4.18 (dd, J = 7.3, 1.1 ㎐, 1H), 4.09 (q, J = 5.5 ㎐, 1H), 3.75 (q, J = 5.1 ㎐, 1H), 3.39-3.60 (m, 2H), 1.20-1.27 (m, 1H), 0.53-0.57 (m, 2H), 0.31-0.34 (m, 2H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 371.

C₁₄H₁₈N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 45.40; H, 4.90; N, 15.13; S, 8.66.

실측치: C, 44.98; H, 4.92; N, 14.92; S, 8.49.

실시예 31: 5-아미노-7-(3-페닐-알릴옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(65)

단계 1: 5-아미노-7-(3-페닐-알릴옥시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(64)의 제조

실시예 25의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(64)을 화합물(25) 및 신나밀 알콜로부터 69% 수율로 생성하였다.

MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 601.

단계 2: 5-아미노-7-(3-페닐-알릴옥시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(65)의 제조

실시예 25의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(64)로부터 19% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.46 (d, J = 7.0 ㎐, 1H), 7.34 (t, J = 7.3 ㎐, 1H), 7.23-7.27 (m, 1H), 6.93 (s, 2H), 6.74 (d, J = 16.1 ㎐, 1H), 6.45-6.53 (m, 1H), 5.86 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 5.28 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.04 (d, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.96 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.79 (q, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.67 (t, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.09 (q, J = 5.1 ㎐, 1H), 3.76 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 3.30-3.60 (m, 2H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 433.

C₁₉H₂₀N₄O₆S의 원소 분석:

이론치: C, 52.77; H, 4.66; N, 12.96; S, 7.41.

실측치: C, 52.28; H, 4.66; N, 12.66; S, 7.27.

실시예 32: 5-아미노-7-(5-메틸-2-옥소-[1,3]디옥솔-4-일메톡시)-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(66)

THF (50 ㎖)중의 트리아세테이트(25) (1.55 g, 3.50 mmol)의 용액을 0℃에서 중합체 지지된-트리페닐포스핀 (4.95 g, 10.50 mmol, Argonaut)을 첨가하였다. 이 혼합물에 문헌[Alepegiani, Syn. Comm., 22(9), 1277-82 (1992)]에 기재된 바와 같이 생성된 4-히드록시메틸-5-메틸-[1,3]디옥솔-2-온(0.91 g, 7.00 mmol)를 첨가하고, 디에틸 아조디카르복실레이트 (0.73 ㎖, 4.60 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 48 시간 동안 교반하고, 여과하고, MeOH 및 CHCl₃로 세정하였다. 여과액을 농축시키고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 아세톤/CHCl₃ = 10-20%)로 정제하여 백색 고형물인 디옥솔론 유도체(66) (1.38 g, 71%)를 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.06 (s, 2H), 6.00 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.92 (dd, J = 6.6, 4.4 ㎐, 1H), 5.56 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.38 (dd, J = 11.6, 3.6 ㎐, 1H), 4.25 (t, J = 3.6 ㎐, 1H), 4.10 (q, J = 6.0 ㎐, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.00 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 555.3.

C₂₁H₂₂N₄O₁₂S·Me₂CO의 원소 분석:

이론치: C, 47.06; H, 4.61; N, 9.15; S, 5.23.

실측치: C, 47.25; H, 4.37; N, 9.53; S, 5.52.

실시예 33: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-카르밤산 에틸 에스테르(68)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리스-O-트리에틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(26)의 제조

DMF (20 ㎖)중의 화합물(1) (1.00 g, 3.16 mmol)의 현탁액에 실온에서 이미다졸 (753 ㎎, 11.06 mmol), DMAP (39 ㎎, 0.32 mmol) 및 클로로트리에틸실란 (1.64 ㎖, 9.80 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 이를 포화 NaHCO₃ 용액 (20 ㎖)로 종결시켰다. 혼합물을 CHCl₃ (3×20 ㎖)로 추출하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, MeOH/CHCl₃ = 1-5%)로 정제하여 백색 고형물인 1.91 g (92%)의 화합물(26)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 5.99 (s, 1H), 5.62 (br s, 2H), 5.19 (dd, J = 4.4, 6.0 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 2.8, 4.4 ㎐, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.77 (dd, J = 7.6, 10.8 ㎐, 1H), 3.68 (dd, J = 4.8, 10.4 ㎐, 1H), 1.10 (t, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.96 (t, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.89 (t, J = 7.1 ㎐, 3H), 0.68 (q, J = 7.1 ㎐, 2H), 0.61 (q, J = 7.1 ㎐, 2H), 0.54 (m, 2H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 660.0.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리스-O-트리에틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-카르밤산 에틸 에스테르(67)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(67)을 화합물(26) 및 N-에틸우레탄으로부터 백색 고형물로서 31% 수율로 생성하였다. [M+H]⁺ 760.5;

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 6.43 (br s, 2H), 6.09 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 5.94 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.31 (d, J = 4.8 ㎐, 2H), 5.19 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 4.8, 2.8 ㎐, 1H), 4.19 (q, J = 6.4 ㎐, 2H), 3.98 (m, 1H), 3.76 (dd, J = 10.8, 7.6 ㎐, 1H), 3.68 (dd, J = 10.4, 4.8 ㎐, 1H), 1.29 (t, J = 6.8 ㎐, 3H), 1.02 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.96 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 0.90 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.69 (q, J = 8.0 ㎐, 2H), 0.61 (q, J = 8.0 ㎐, 2H), 0.55 (m, 2H); [M+H]⁺ 760.5.

단계 3: (5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시메틸)-카르밤산 에틸 에스테르(68)의 제조

화합물(67) (244 ㎎, 321 mmol), 피리딘중의 5M HF (321 ㎕, 1.60 mmol) 및 THF (3.20 ㎖)의 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 진공하에서 용매를 제거하여 잔류물을 남겼으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 10% MeOH-CHCl₃)로 정제하여 백색 고형물인 화합물(68) (119 ㎎, 90%)을 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.43 (br s, 1H), 7.76 (br s, 2H), 5.82 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.78 (s, 2H), 5.32 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.24 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 5.00 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.82 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.68 (t, J = 6.0, 1H), 4.11 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.09 (q, J = 7.2 ㎐, 2H), 3.78 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 1.21 (t, J = 7.2 ㎐, 3H); [M+H]⁺ 418.2.

실시예 34: 5-아미노-7-(5-메틸-2-옥소-[1,3]디옥솔-4-일메톡시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(70)

단계 1: 5-아미노-7-(5-메틸-2-옥소-[1,3]디옥솔-4-일메톡시)-3-(2',3',5'-트리스-O-트리에틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(69)의 제조

실시예 32와 유사한 방법으로 화합물(69)을 화합물(26) 및 4-히드록시메틸-5-메틸-[1,3]디옥솔-2-온으로부터 백색 고형물로서 45% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 6.06 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.21 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 5.18 (d, J = 3.2 ㎐, 2H), 4.94 (br s, 2H), 4.38 (dd, J = 4.8, 2.8 ㎐, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.79 (dd, J = 11.2, 8.0 ㎐, 1H), 3.69 (dd, J = 10.8, 5.2 ㎐, 1H), 2.23 (s, 3H), 1.02 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.96 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 0.89 (t, J = 8.4 ㎐, 3H), 0.70 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 0.61 (q, J = 8.0 ㎐, 2H), 0.53 (m, 2H); [M+H]⁺ 771.5.

단계 2: 5-아미노-7-(5-메틸-2-옥소-[1,3]디옥솔-4-일메톡시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(70)의 제조

실시예 33의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(69)로부터 백색 고형물로서 89% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 7.03 (br s, 2H), 5.90 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.33 (s, 2H), 5.02 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.83 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.71 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.14 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.80 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.47 (m, 1H), 2.27 (s, 3H); [M+H]⁺ 429.2.

실시예 35: 4-(5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시)-부티르산 t-부틸 에스테르(72)

단계 1: 4-(5-아미노-2-옥소-3-(2',3',5'-트리스-O-트리에틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시)-부티르산 t-부틸-에스테르(71)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(71)을 화합물(26) 및 4-히드록시-부티르산 t-부틸-에스테르[Lui, JOC, 68(17), 6679-6684 (2003)]로부터 백색 고형물로서 92% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 6.06 (d, J = 6.4 ㎐, 1H), 5.22 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 4.98 (br s, 2H), 4.42 (t, J = 6.0 ㎐, 2H), 4.38 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.80 (dd, J = 10.8, 7.6 ㎐, 1H), 3.69 (dd, J = 10.8, 5.2 ㎐, 1H), 2.38 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 2.06 (quint, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.02 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.96 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.70 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 0.61 (q, J = 8.0 ㎐, 2H), 0.53 (m, 2H); [M+H]⁺ 801.5.

단계 2: 4-(5-아미노-2-옥소-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일옥시)-부티르산 t-부틸-에스테르(72)의 제조

실시예 33의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(71)로부터 백색 고형물로서 66% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.93 (br s, 2H), 5.90 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.32 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.10 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.83 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.71 (t, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.38 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.13 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 3.80 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.47 (m, 1H), 2.35 (t, J = 7.6 ㎐, 2H), 1.96 (quint, J = 6.8 ㎐, 2H), 1.44 (s, 9H); [M+H]⁺ 459.3.

실시예 36: 5-아미노-7-(4-아세톡시-1-부톡시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(74)

단계 1: 5-아미노-7-(4-아세톡시-1-부톡시)-3-(2',3',5'-트리스-O-트리에틸 실라닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(73)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(73)을 화합물(26) 및 1,4-부탄디올 모노아세테이트로부터 백색 고형물로서 81% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 6.06 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.23 (dd, J = 5.6, 5.2 ㎐, 1H), 4.93 (br s, 2H), 4.41 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.37 (dd, J = 4.8, 2.8 ㎐, 1H), 4.14 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.80 (dd, J = 11.2, 7.6 ㎐, 1H), 3.69 (dd, J = 10.8, 4.8 ㎐, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.85 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.02 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 0.96 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 7.6 ㎐, 3H), 0.70 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 0.61 (q, J = 8.0 ㎐, 2H), 0.56 (m, 2H); [M+H]⁺ 773.5.

단계 2: 5-아미노-7-(4-아세톡시-1-부톡시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(74)의 제조

화합물(73) (188 ㎎, 243 μmol)의 용액 및 아세토니트릴중의 1M HF (1.22 ㎖, 1.22 mmol)를 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 진공하에서 용매를 제거하여 잔류물을 남기고, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 10% MeOH-CHCl₃)로 정제하여 백색 고형물인 화합물(74) (91.1 ㎎, 88%)를 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.93 (br s, 2H), 5.90 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.32 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.01 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.83 (q, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.71 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.41 (t, J = 6.0 ㎐, 2H), 4.14 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.07 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 3.80 (q, J = 6.0 ㎐, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.47 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.71 (m, 2H); [M+H]⁺ 431.3.

실시예 37: 5-아미노-7-(4-아세톡시-1-프로폭시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(76)

단계 1: 5-아미노-7-(4-아세톡시-1-프로폭시)-3-(2',3',5'-트리스-O-트리에틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(75)의 제조

실시예 13의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(75)을 화합물(26) 및 1,3-프로판디올 모노아세테이트로부터 백색 고형물로서 70% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 6.06 (d, J = 6.4 ㎐, 1H), 5.23 (dd, J = 6.4, 4.8 ㎐, 1H), 4.93 (br s, 2H), 4.46 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.38 (dd, J = 4.4, 2.4 ㎐, 1H), 4.22 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.80 (dd, J = 10.8, 7.6 ㎐, 1H), 3.69 (dd, J = 10.8, 5.2 ㎐, 1H), 2.12 (quint, J = 6.4 ㎐, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.02 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.96 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 0.70 (q, J = 8.4 ㎐, 2H), 0.61 (q, J = 8.4 ㎐, 2H), 0.54 (m, 2H); [M+H]⁺ 759.5.

단계 2: 5-아미노-7-(4-아세톡시-1-프로폭시)-3-β-D-리보푸라노실-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온(76)의 제조

실시예 36의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(76)을 화합물(75)로부터 백색 고형물로서 92% 수율로 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 6.94 (br s, 2H), 5.90 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.32 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.00 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.83 (q, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.71 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.46 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.14 (t, J = 6.4 ㎐, 2H), 3.80 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.62 (dd, J = 11.2, 8.0 ㎐, 1H), 3.47 (dd, J = 11.2, 6.0 ㎐, 1H), 2.06 (quint, J = 6.4 ㎐, 2H), 2.04 (s, 3H); [M+H]⁺ 417.2.

실시예 38: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)

단계 1: 5-아미노-7-티옥소-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(77)의 제조

피리딘 (50 ㎖)중의 화합물(25) (1 g, 2.26 mmol)의 용액에 실온에서 P₂S₅ (2.13 g, 4.79 mmol)를 첨가하였다. 용액을 약하게 (조 온도 130℃∼140℃) 29 시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공하에서 무수 상태로 증발시켰다. 과량의 P₂S₅는 H₂O (40 ㎖)를 60℃에서 첨가하여 분해되었다. 혼합물을 1 시간 동안 60℃에서 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 CHCl₃ (3×40 ㎖)로 추출하였다. 건조된 (MgSO₄) 유기 층을 증발시켜 시럽을 얻고, 이를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 아세톤/CHCl₃ = 15%)로 정제하여 황색 고형물인 0.93 g (90%)의 화합물(77)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 12.50 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 5.89 (m, 2H), 5.51 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 12.0, 4.0 ㎐, 1H), 4.24 (m, 1H), 4.10 (q, J = 6.0 ㎐, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.01 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 459.3.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(78)의 제조

아세톤 (50 ㎖)중의 Raney(등록상표) 2800 니켈 (3개의 커다란 주걱, H₂O, MeOH 및 아세톤으로 미리 세정함)의 현탁액을 1 시간 동안 환류 교반하였다. 그후, 트리아세테이트(77) (0.93 g, 2.03 mmol)를 상기 현탁액에 환류하에 첨가하였다. 혼합물을 5 분간 교반하고, 실온으로 30 분간 냉각시켰다. 반응은 혼합물에 2 시간 동안 H₂S (g)를 버블링시켜 종결시켰다. 생성된 혼합물을 Celite(등록상표) 단패드에 여과시키고, EtOH로 세정하였다. 여과액을 농축시키고, 플래쉬 컬럼 크 로마토그래피 (실리카, MeOH/CHCl₃ = 1-2%)로 정제하여 백색 고형물인 0.52 g (60%)의 화합물(78)을 얻었다. mp 121-123℃;

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.38 (s, 1H), 6.93 (s, 2H), 6.03 (d, J = 3.6 ㎐, 1H), 5.93 (dd, J = 6.4, 3.6 ㎐, 1H), 5.58 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.38 (dd, J = 11.6, 3.6 ㎐, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.11 (q, J = 6.0 ㎐, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.00 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 427.2.

C₁₆H₁₈N₄O₈S·0.5 CH₃OH·0.25 H₂O의 원소 분석

이론치: C, 44.34; H, 4.62; N, 12.54; S, 7.17.

실측치: C, 44.54; H, 4.88; N, 12.16; S, 7.17.

단계 3: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)의 제조

MeOH (20 ㎖)중의 화합물(78) (0.52 g, 1.22 mmol)의 용액에 K₂CO₃ (25 ㎎, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 교반한 후, AcOH (21 ㎕, 0.36 mmol)로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가의 30 분간 교반하고, 농축시키고, H₂O (2 ㎖)로 마쇄시켜 백색 고형물인 0.33 g의 화합물(79) (89%)을 얻었다.

mp 220℃ (분해).

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.34 (s, 1H), 6.85 (s, 2H), 5.90 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.31 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.98 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.81 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.67 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.11 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.77 (dd, J = 10.8, 4.8 ㎐, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.44 (m, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 301.1.

C₁₀H₁₂N₄O₅S·0.3 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 39.29; H, 4.15; N, 18.33; S, 10.49.

실측치: C, 39.51; H, 4.18; N, 17.95; S, 10.27.

실시예 39: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)

대안의 합성 경로 A

단계 1: 5-아미노-7-클로로-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(80)의 제조

CHCl₃ (9 ㎖)중의 화합물(25) (0.84 g, 1.90 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.50 ㎖, 3.59 mmol) 및 POCl₃ (1.60 ㎖, 17.1 mmol)를 첨가하였다. 16 시간 동안 환류 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이를 얼음 및 포화 수성 NaHCO₃ (150 ㎖)에 부었다. 생성된 혼합물을 CH₂Cl₂ (3×75 ㎖)로 추출하고, 합한 유기층을 건조시켰다(MgSO₄). 농축시킨 후, 플래쉬 크로마토그래피 (9:1/ CH₂Cl₂:EtOAc)로 처리하여 백색 고형물인 708 ㎎ (87%)의 생성물을 얻었다. m.p. 101-103℃.

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 6.10 (d, J = 2.8 ㎐, 1H), 6.01 (dd, J = 5.6, 3.2 ㎐, 1H), 5.92 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.42 (s, 2), 4.97 (dd, J = 11.6, 3.6 ㎐, 1H), 4.32 (m, 1), 4.21 (dd, J = 12.0, 5.2 ㎐, 1H), 2.12 (s, 6H), 2.06 (s, 3H).

단계 2: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(78)의 제조

화염 건조시킨 둥근 바닥 플라스크에 화합물(80) (4.37 g, 9.48 mmol) 및 빙초산 (61 ㎖)을 채웠다. 플라스크를 격막으로 밀폐시키고, 질소로 세정하였다. 아연-구리 커플 (6.07 g, 알드리치)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 21 시간 동안 교반하였다. 반응물을 80℃로 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, Celite(등록상표) 패드로 여과하고, EtOAc (200 ㎖)로 세정하고, 감압하에 농축시켰다. 생성된 백색 고형물(잔류물)을 CH₂Cl₂ (250 ㎖)로 희석하고, 0.5 M NaOH (500 ㎖)로 세정하였다. 수성층을 CH₂Cl₂ (2×150 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 5% 아세톤-CH₂Cl₂)로 정제하여 실시예 38의 단계 2에서 분리한 물질과 모든 면에서 동일한 백색 분말인 화합물(78) (3.64 g, 90 %)을 얻었다.

단계 3: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)의 제조

표제 화합물의 제조는 실시예 38의 단계 3에 기재되어 있다.

실시예 40: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)

대안의 합성 경로 B

단계 1: 5-아세틸아미노-7-클로로-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(81)의 제조

옥시염화인 (6.42 ㎖, 70.2 mmol)을 화합물(16) (3.40 g, 7.02 mmol), 트리에틸아민 (1.96 ㎖, 14.04 mmol) 및 클로로포름 (14 ㎖)의 용액에 30 분간 실온에서 질소하에 적가하였다. 반응 혼합물을 70℃로 30 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 상온으로 냉각시키고, 2 시간에 걸쳐 포화 수성 NaHCO₃ (500 ㎖)의 0℃ 용액에 적가하고, 추가의 1 시간 동안 교반하였다. 층이 분리되었으며, 수성층을 염화메틸렌 (2×100 ㎖)으로 역추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 황색 고형물로 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 5% 아세톤-CHCl₃)에 의하여 정제를 실시하여 백색 고형물인 화합물(81) (3.17 g, 90%)을 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 6.09 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.99 (dd, J = 6.0, 4.0 ㎐, 1H), 5.76 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.41 (dd, J = 11.2, 3.2 ㎐, 1H), 4.32 (td, J = 7.2, 3.2 ㎐, 1H), 4.24 (dd, J = 11.6, 6.8 ㎐, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.03 (s, 3H); [M+H]⁺ 503.3.

단계 2: 5-아세틸아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(82)의 제조

10% 탄소상 팔라듐 (862 ㎎)을 화합물(81) (2.07 ㎎, 4.12 mmol), 아세트산나트륨 (675 ㎎, 8.23 mmol) 및 무수 에탄올 (100 ㎖)의 용액에 질소하에 첨가하였다. 혼합물을 48 시간 동안 용기(bomb)중의 250-300 psi H₂ (g)하에 교반하였다. 혼합물을 Celite(등록상표)에 여과시키고, 에틸 아세테이트 (200 ㎖)로 세정하고, 황색 고형물로 농축시켰다. 혼합물을 H₂O (200 ㎖)로 희석시키고, CH₂Cl₂ (3×100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 10% 아세톤-CHCl₃)로 정제하여 백색 분말인 화합물(82) (1.74 g, 90%)을 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 10.78 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 6.10 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 6.04 (dd, J = 6.0, 4.0 ㎐, 1H), 5.77 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.41 (dd, J = 11.6, 3.2 ㎐, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.23 (dd, J = 12.0, 6.8 ㎐, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.03 (s, 3H); [M+H]⁺ 469.4.

단계 3: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)의 제조

실시예 13의 단계 3과 유사한 방법으로 표제 화합물을 화합물(82)로부터 생성하였다.

실시예 41: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)

대안의 합성 경로 C

단계 1: N'-(7-클로로-2-옥소-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-5-일)-N,N-디메틸-포름아미딘(83a)의 제조

염화티오닐 (2.58 ㎖, 35.4 mmol)을 CHCl₃ (28 ㎖)중의 화합물(16) (500 ㎎, 1.03 mmol) 및 DMF (1.29 ㎖, 16.7 mmol)의 혼합물에 1 시간에 걸쳐 N₂하에서 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 60℃로 23 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 조심스럽게 얼음 냉각된 포화 NaHCO₃ 용액에 붓고, 30 분간 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 CH₂Cl₂ (2×80 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO₄상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 백색 발포체인 화합물(83a) (519 ㎎, 정량적)를 생성하였다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.65 (s, 1H), 6.14 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.97 (dd, J = 6.4, 3.6 ㎐, 1H), 5.62 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 12.0, 3.6 ㎐, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.16 (dd, J = 12.0, 5.2 ㎐, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.02 (s, 3H); [M+H]⁺ 516.1.

단계 1a: N'-(7-브로모-2-옥소-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노 실)-2,3-디히드로-티아졸로[4,5-d]피리미딘-5-일)-N,N-디메틸-포름아미딘(83b)의 제조

브롬화티오닐 (11.2 ㎖, 145 mmol)을 1 시간에 걸쳐 화합물(16) (2.34 g, 4.83 mmol), DMF (5.61 ㎖, 72.5 mmol), CHCl₃ (50 ㎖) 및 톨루엔 (55 ㎖)의 혼합물에 실온에서 N₂하에 적가하였다. 반응 혼합물을 110℃로 20 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 얼음 냉각된 포화 NaHCO₃ 용액에 조심스럽게 붓고, 1 시간 동안 교반하였다. 층이 분리되었으며, 수성층을 CH₂Cl₂ (2×80 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 황색 잔류물로 농축시켰다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 20% 아세톤-CHCl₃)로 정제하여 백색 발포체인 화합물(83b) (1.53 g, 57%)을 얻었다.

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.64 (s, 1H), 6.12 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 5.96 (dd, J = 6.4, 3.2 ㎐, 1H), 5.61 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 8.8, 3.2 ㎐, 1H), 4.31 (m, 1H), 4.16 (dd, J = 12.4, 5.6 ㎐, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.02 (s, 3H); [M+H]⁺ 560.2.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(78)의 제조

화염 건조시킨 둥근 바닥 플라스크에 화합물(83a) (1.08 g, 2.11 mmol) 및 빙초산 (21 ㎖)을 채웠다. 플라스크를 격막으로 밀봉시키고, 질소로 세정하였다. 아연 더스트 (1.38 g, 21.1 mmol)를 첨가하고, 반응물을 80℃로 48 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, Celite(등록상표) 패드에 여과시키고, EtOAc (100 ㎖)로 세정하고, 감압하에 농축시켰다. 생성된 백색 고형물(잔류물)을 CH₂Cl₂ (100 ㎖)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃ (500 ㎖)로 세정하였다. 수성층을 CH₂Cl₂ (2×50 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (SiO₂, 5% 아세톤-CH₂Cl₂)로 정제하여 실시예 38의 단계 2에서 분리한 물질과 모든 면에서 동일한 백색 분말인 화합물(78) (464 ㎎, 52%)을 얻었다.

단계 3: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)의 제조

표제 화합물의 제조는 실시예 38의 단계 3에 기재되어 있다.

실시예 42: 5-아미노-3-β-D-리보푸라노실-3H-티아졸로-[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)

대안의 합성 경로 D

단계 1: 4-클로로-2-옥소-2,3-디히드로-티아졸-5-카르브알데히드(85)의 제조

문헌[Baranov, et al, Chem. Het. Compounds (Engl. Trsl.), 1975, 11, p.73]에 의하여 합성한 화합물(85)은 보고된 절차를 변형시켜 생성하였다. 시판중인 2,4-티아졸리딘디온(84) (25.0 g, 213 mmol)을 얼음조를 사용하여 0℃로 냉각시 킨 POCl₃ (59 ㎖, 641 mmol)에 현탁시켰다. DMF (24.8 ㎖, 320 mmol)를 반응기에 15 분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 90℃로 2 시간 동안 가열한 후, 115℃에서 20 분간 가열하였다. 20 분 후, 반응물을 90℃로 냉각시키고, 추가의 1 시간 동안 유지하였다. 1 시간 후, 혼합물을 115℃로 15 분간 가열하였다. 고온의 반응 혼합물을 격렬히 교반하면서 1 ℓ의 물에 부었다. 10 분후, 혼합물을 여과하였다. 수성상을 에틸 에테르 (600 ㎖)로 5회 추출하고, 유기상을 분리하고, 감압하에 농축시켰다. 고형 잔류물을 최소 부피의 NaHCO₃의 포화 수용액에 용해시켰다. 혼합물을 6 M HCl을 사용하여 pH = 2로 조심스럽게 산성화시키고, 침전물이 약 30 분후 형성되었다. 여과에 의하여 20.9 g의 화합물(85)을 62% 수율로 생성하였다. R_f = 0.3 (2%H₂O, 8% 메탄올, 90% 에틸 아세테이트);

¹H NMR (400 ㎒, CDCl₃) δ 9.79 (s, 1H), 8.95 (s, 1H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 164.

단계 2: 5-아미노-3H-티아졸[4,5- d ]피리미딘-2-온(86)의 제조

화합물(85) (1.22 g, 7.47 mmol), 구아니딘 염산염 (2.13 g, 22.4 mmol), K₂CO₃ (1.03 g, 7.47 mmol) 및 NaHCO₃ (1.88 g, 22.3 mmol)을 DMF에 현탁시키고, 2 일간 110℃에서 가열하였다. TLC에 의하여 출발 물질이 소비된 것을 확인하면, 용매를 진공하에서 제거하였다. 고형 잔류물을 물에 마쇄시켰다. 화합물(86)의 분 석적으로 순수한 샘플을 HPLC (ODS-C18; 3-97% CH₃CN/H₂O 구배; 1.0 ㎖/분)에 의하여 얻었다. 황갈색 고형물. HPLC R_t = 1.63 분; R_f = 0.45 (2% H₂O, 8% 메탄올, 90% 에틸 아세테이트);

¹H NMR (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 6.67 (s, 2H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 169;

C₅H₄N₄OS·0.1 CH₃CN·0.1 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 35.88; H, 2.61; N, 32.99; S, 18.42.

실측치: C, 35.96; H, 2.75; N, 32.56; S, 18.42.

단계 3: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(79)의 제조

화합물(86) (62 ㎎, 0.4 mmol), 1,2,3,5-테트라-O-아세틸-β-D-리보푸라노스 테트라아세테이트 (128 ㎎, 0.4 mmol) 및 촉매량의 비스(p-니트로페닐) 수소 포스페이트 (13 ㎎, 0.04 mmol)를 혼합하고, 500 ㎖ 플라스크에 넣었다. 반응 용기를 조심스럽게 진공 (약 5.0 mmHg)하에 두고, 150℃에서 10 분간 가열한 오일조에 넣었다. 실온으로 냉각시킨 후, 고형물을 에틸 아세테이트로 세정하였다. 미정제 생성물을 플래쉬 컬럼(실리카, 클로로포름중의 5 내지 35% 에틸 아세테이트 구배)로 정제하여 실시예 38의 단계 2에서 분리한 물질과 모든 면에서 동일한 백색 고형물인 68 ㎎의 화합물(79) (40%)를 얻었다.

실시예 43: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(89)

단계 1: 5-아미노-3-(5'-O-t-부틸-디메틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(87)의 제조

DMF (10 ㎖)중의 화합물(79) (0.68 g, 2.28 mmol)의 용액에 이미다졸 (0.54 g, 7.93 mmol) 및 염화t-부틸디메틸실릴 (0.68 g, 4.56 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 이를 농축하고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, MeOH/CHCl₃; 구배 = 5-20%)로 정제하여 백색 고형물인 0.49 g (52%)의 화합물(87)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.33 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 5.90 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.33 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.00 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.79 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.16 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.77 (m, 2H), 3.64 (dd, J = 12.0, 7.2 ㎐, 1H), 0.84 (s, 9H), 0.00 (s, 6H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 415.4.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸, 5'-O-t-부틸-디메틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(88)의 제조

아세토니트릴 (5 ㎖)중의 화합물(87) (0.20 g, 0.48 mmol)의 용액에 0℃에서 Et₃N (0.26 ㎖, 1.86 mmol) 및 Ac₂O (91 ㎕, 0.96 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하고, 이를 농축시키고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 아세톤/CHCl₃: 구배 = 5-10%)로 정제하여 백색 고형물인 0.22 g (92%)의 화합물(88)를 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.36 (s, 1H), 6.90 (s, 2H), 6.00 (m, 2H), 5.57 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.07 (q, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.77 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 0.83 (s, 9H), 0.00 (d, J = 2.4 ㎐, 6H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 499.5.

단계 3: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(89)의 제조

플라스틱 바이알내의 THF (5 ㎖)중의 화합물(88) (0.22 g, 0.44 mmol)의 용액에 HF/피리딘 (0.70 ㎖)를 첨가하였다. 반응물을 2 시간 동안 교반하고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카, MeOH/CHCl₃: 구배 = 5-10%)로 정제하여 백색 고형물인 0.17 g (100%)의 표제 화합물을 얻었다. mp 109-111℃.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 8.37 (s, 1H), 6.91 (s, 2H), 6.00 (m, 2H), 5.48 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.91 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.04 (dd, J = 10.4, 6.0 ㎐, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.52 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.05 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 385.3.

C₁₄H₁₆N₄O₇S·0.5 CH₃OH·0.2 CHCl₃의 원소 분석:

이론치: C, 41.61; H, 4.32; N, 13.21; S, 7.56:

실측치: C, 41.73; H, 4.29; N, 12.86; S, 7.33.

실시예 44: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2-온(89)

대안의 합성 경로 A

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-3H-티아졸로[4,5-d]피리미딘-2-온(89)의 제조

아세톤 (5 ㎖)중의 화합물(78) (500 ㎎)의 맑은 용액에 인산나트륨 완충액 (pH = 7.0, 0.1 M, 25 ㎖)을 첨가하고, 이때 용액은 흐리게 된다(백색 침전). 캔디다 안타르티카(candida antarctica) 리파제 수지 (250 ㎎)를 상기 혼합물에 첨가하고, 그후 현탁액을 10 시간 동안 실온에서 가볍게 흔들었다. 생성된 맑은 혼합물을 여과하고, 유기 용매를 진공하에서 제거하였다. 그후, 수용액을 에틸 아세테이트 (3×25 ㎖)로 추출하고, 유기 층을 합하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 고형물을 실시예 43의 단계 3에 기재된 것과 유사한 방법으로 추가로 정제할 수 있다.

실시예 45: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(92)

단계 1: 5-아미노-3-(5'-O-t-부틸-디메틸실라닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(90)의 제조

DMF중의 화합물(1) (12.0 g, 37.9 mmol) 및 이미다졸 (7.75 g, 114 mmol)의 혼합물에 DMF (25 ㎖)중의 용액으로서 염화t-부틸디메틸실릴 l (5.72 g, 37.9 mmol)을 첨가하였다. TLC 분석(20% MeOH-CHCl₃)에 의하면, 반응이 약 60% 완료되었다는 것을 알 수 있다. 반응이 완료될 때까지 추가의 염화t-부틸디메틸실릴 (5.72 g, 37.9 mmol)을 일부분씩 첨가하고, 이를 MeOH (10 ㎖)로 종결시킨 후, 갈색 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (800 ㎖)에 용해시킨 후, 물 (3×200 ㎖)로 세정하였다. 유기상을 무수 Na₂SO₄-목탄상에서 건조시킨 후, SiO₂의 단패드에 여과하여 용액을 얻고, 이를 황갈색 고형물로 농축시켰다. 미정제 생성물을 Et₂O로 마쇄시켜 백색 고형물인 12.41 g (76%)의 화합물(90)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.16 (s, 1H), 6.92 (br s, 2H), 5.77 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.27 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.95 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 4.73 (dd, J = 9.9, 5.1 ㎐, 1H), 4.11 (dd, J = 10.6, 5.1 ㎐, 1H), 3.70-3.76 (m, 2H), 3.59-3.64 (m, 1H), 0.84 (s, 9H), 0.0 (s, 6H).

단계 2: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸, 5'-O-t-부틸-디메틸실라닐-β-D-리 보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(91)의 제조

MeCN (40 ㎖) 중의 디올(90) (2.44 g, 5.67 mmol) 및 Et₃N (2.37 ㎖, 17.0 mmol)의 균질한 용액에 Ac₂O (1.06 ㎖, 11.3 mmol) 및 DMAP (69 ㎎, 0.57 mmol)를 순차적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 3 시간 동안 교반시키고, 농축시키고, 크로마토그래피(SiO₂, 구배 용출, 40-60% EtOAc-CHCl₃)로 처리하여 백색 고형물인 1.2 g (41%)의 화합물(91)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.25 (s, 1H), 7.96-8.00 (m, 1H), 7.54-7.57 (m, 2H), 7.24-7.28 (m, 2H) 6.96 (br s, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.96 (s, 1H), 5.39-5.41 (m, 1H), 5.01-5.04 (m, 1H), 4.12-4.17 (m, 1H), 3.48-3.59 (m, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 515.

단계 3: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(92)의 제조

THF (20 ㎖)중의 화합물(91) (1.2 g, 2.3 mmol)의 균질한 용액에 THF (4.7 ㎖, 4.7 mmol)중의 1.0 M 불화테트라부틸암모늄을 첨가하였다. 반응 혼합물을 16 시간 동안 교반하고, 농축시키고, 크로마토그래피로 처리하여 800 ㎎ (86%)의 백색 고형물을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.25 (s, 1H), 6.97 (br s, 2H), 5.95 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.41 (t, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.90 (t, J = 5.9 ㎐, 1H), 4.00 (q, J = 5.9 ㎐, 1H), 3.48-3.64 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 401.

실시예 46: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-5'-O-피발릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(93)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-5'-O-피발릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(93)의 제조

실시예 30의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(93)을 화합물(92) 및 피발산 무수물로부터 21% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.27 (s, 1H), 6.98 (br s, 2H), 5.88-5.91 (m, 2H), 5.55 (dd, J = 7.0, 5.9 ㎐, 1H), 4.29 (dd, J = 12.1, 4.0 ㎐, 1H), 4.18-4.27 (m, 1H), 4.11 (dd, J = 12.1, 5.1 ㎐, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.13 (s, 9H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 485.

C₁₉H₂₄N₄O₉S·0.75 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 45.82; H, 5.16; N, 11.25; S, 6.44.

실측치: C, 45.93; H, 5.20; N, 11.29; S, 6.44.

실시예 47: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-5'-O-라우릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(94)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-5'-O-라우릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(94)의 제조

실시예 30의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(94)을 화합물(92) 및 라우르산 무수물로부터 59% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.26 (s, 1H), 6.97 (br s, 2H), 5.87-5.91 (m, 2H), 5.51 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 12.1, 3.5 ㎐, 1H), 4.18-4.22 (m, 1H), 4.08 (dd, J = 12.1, 5.9 ㎐, 1H), 2.27 (t, J = 7.3 ㎐, 1H), 2.06 (s, 6H), 1.46-1.50 (m, 1H), 1.17-1.28 (m, 16H), 0.85 (t, J = 6.0 ㎐, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 583.

C₂₆H₃₈N₄O₉S의 원소 분석:

이론치: C, 52.55; H, 6.49; N, 9.25; S, 5.29.

실측치: C, 52.58; H, 6.57; N, 9.49; S, 5.38.

실시예 48: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-부티릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸 로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(95)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-부티릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(95)의 제조

실시예 30의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(95)을 화합물(1) 및 부티르산 무수물로부터 생성하였다. 컬럼 크로마토그래피 (SiO₂, 40% EtOAc-CHCl₃)로 정제하고, Et₂O-헥산으로 마쇄하여 17% 수율로 백색 고형물을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.27 (s, 1H), 6.97 (br s, 2H), 5.87-5.91 (m, 2H), 5.54 (dd, J = 12.8, 6.2 ㎐, 1H), 4.37 (dd, J = 12.1, 3.7 ㎐, 1H), 4.18-4.22 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 12.1, 5.9 ㎐, 1H), 2.25-2.38 (m, 6H), 1.47-1.59 (m, 6H), 0.84-0.91 (m, 9H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 527.

C₂₂H₃₀N₄O₉S의 원소 분석:

이론치: C, 50.18; H, 5.74; N, 10.64; S, 6.09.

실측치: C, 50.18; H, 5.64; N, 10.56; S, 6.02.

실시예 49: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-카프릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸 로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(96)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-카프릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(96)의 제조

실시예 30의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(96)을 화합물(1) 및 카프릴산 무수물로부터 30% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.28 (s, 1H), 6.96 (br s, 2H), 5.87-5.92 (m, 2H), 5.35 (dd, J = 12.8, 6.2 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.7, 3.3 ㎐, 1H), 4.17-4.21 (m, 1H), 4.09 (dd, J = 11.7, 5.9 ㎐, 1H), 2.24-2.39 (m, 6H), 1.48-1.53 (m, 6H), 1.22-1.25 (m, 2H), 0.82-0.87 (m, 9H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 695.

C₃₄H₅₄N₄O₉S의 원소 분석:

이론치: C, 58.77; H, 7.83; N, 8.06; S, 4.61.

실측치: C, 58.65; N, 7.92; N, 7.98; S, 4.55.

실시예 50: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(98)

단계 1: 5-아미노-3-[2',3'-디-O-아세틸-5'-O-(N-t-부톡시카르보닐-L-발리닐])-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(97)의 제조

MeCN (10 ㎖)중의 화합물(3) (2.00 g, 4.09 mmol)의 현탁액에 실온에서 Et₃N (1.14 ㎖, 8.19 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30 분간 교반하고, 디-t-부틸디카보네이트(894 ㎎, 4.09 mmol)로 처리하고, 16 시간 동안 교반하였다. 이러한 혼합물에 Et₃N (1.40 ㎖, 10.0 mmol) 및 Ac₂O (950 ㎕, 10.0 mmol)를 순차적으로 첨가하였다. 3 시간 후, 혼합물을 농축시키고, EtOAc (200 ㎖) 및 물 (100 ㎖) 사이에 분배하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 농축시킨 후, 크로마토그래피(SiO₂, 80% EtOAc-CHCl₃)로 처리하여 백색 발포체를 제공하였다. 발포체를 CHCl₃-Et₂O-헥산으로 마쇄하여 백색 고형물인 1.38 g의 디아세테이트(97)를 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.29 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 6.99 (br s, 2H), 5.91 (d, J = 1.5 ㎐, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.34 (dd, J = 11.0, 2.2 ㎐, 1H), 4.13-4.23 (m, 2H), 3.84 (dd, J = 8.1, 6.6 ㎐, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.97-2.03 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 0.82 (d, J = 6.6 ㎐, 6H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 598.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-아세틸-5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(98)의 제조

디옥산 (50 ㎖) 및 i-PrOAc중의 4 M HCl의 혼합물에 고형물(97) (1.35 g, 2.25 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액은 수분 이내에 불균질한 혼합물을 형성하였다. 1 시간 후, 현탁액을 여과하고, Et₂O로 세정한 후, 고진공하에서 건조시켜 0.66 g (55%)의 백색 고형물을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.46 (s, 1H), 8.40 (s, 3H), 7.19 (br s, 2H), 4.46 (dd, J = 12.5, 3.7 ㎐, 1H), 4.28-4.44 (m, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.68 (br s, 1H), 2.13-2.24 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 0.95 (d, J = 7.3 ㎐, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 ㎐, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 498.

C₁₉H₂₅N₅O₉S·1.0 HCl·1.0 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 41.19; H, 5.09; Cl, 6.40; N, 12.64; S, 5.79.

실측치: C, 41.52; H, 5.01; Cl, 6.64; N, 12.85; S, 5.85.

실시예 51: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-부티릴-5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(100)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-부티릴-5'-N-t-부톡시카르보닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(99)의 제조

실시예 49의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(99)을 화합물(3) 및 부티르산 무수물로부터 62% 수율로 백색 왁스질 고형물을 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.27 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 6.97 (br s, 2H), 5.92 (dd, J = 6.6, 3.7 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 3.7 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.7, 2.9 ㎐, 1H), 4.13-4.23 (m, 2H), 3.84 (dd, J = 8.1, 6.6 ㎐, 1H), 2.24-2.39 (m, 4H), 1.98-2.03 (m, 1H), 1.46-1.59 (m, 4H), 1.35 (s, 9H), 0.85-0.91 (m, 12H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 654.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3'-디-O-부티릴-5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(100)의 제조

실시예 49의 단계 2와 유사한 방법으로 표제 화합물을 60% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.48 (s, 1H), 8.42 (s, 3H), 7.19 (br s, 2H), 6.00 (dd, J = 6.6, 4.4 ㎐, 1H), 5.92 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.57 (dd, J = 12.5, 5.9 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 12.5, 2.9 ㎐, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 4.27-4.31 (m, 1H), 3.83-3.85 (m, 1H), 2.28-2.40 (m, 4H), 2.14-2.25 (m, 1H), 1.46-1.60 (m, 4H), 0.83-0.96 (m, 12H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 554.

C₂₃H₃₃N₅O₉S·1.1 HCl·0.5 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 45.68; H, 5.85; Cl, 6.45; N, 11.58; S, 5.30.

실측치: C, 45.34; H, 5.70; Cl, 6.59; N, 11.62; S, 5.42.

실시예 52: 5-아미노-3-(2',3'-O-카르보닐-5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(102)

단계 1: 5-아미노-3-[2',3'-O-카르보닐-5'-O-(N-t-부톡시카르보닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실)]-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(101)의 제조

실시예 49의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물(101)을 화합물(3) 및 트리포스겐으로부터 백색 고형물로서 54% 수율로 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.34 (s, 1H), 7.09 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 7.06 (br s, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.83 (d, J = 8.1, 1H), 5.67-5.72 (m, 1H), 4.46-4.51 (m, 1H), 4.23-4.32 (m, 2H), 3.82 (dd, J = 13.9, 5.9 ㎐, 1H), 1.94-1.99 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 0.81 (d, J = 6.6 ㎐, 6H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 540.

단계 2: 5-아미노-3-(2',3'-O-카르보닐-5'-O-L-발리닐-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(102)의 제조

실시예 49의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물(102)을 65% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.51 (s, 1H), 8.36 (s, 3H), 7.25 (br s, 2H), 6.13 (s, 1H), 5.88 (d, J = 7.3 ㎐, 1H), 5.76-5.82 (m, 2H), 4.39 (dd, J = 10.3, 2.9 ㎐, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.41-3.54 (m, 1H), 2.01-2.32 (m, 1H), 0.91 (d, J = 7.3 ㎐, 3H), 0.85 (d, J = 6.6 ㎐, 3H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 440.

C₁₆H₁₉N₅O₈S·1.1 HCl·0.5 H₂O·0.75 Et₂O의 원소 분석:

이론치: C, 40.21; H, 4.22; Cl, 7.42; N, 14.66; S, 6.71.

실측치: C, 41.48; H, 5.08; Cl, 7.16; N, 12.75; S, 5.79.

실시예 53: 5-아미노-3-(5'-O-(L-발리닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(104)

단계 1: 5-아미노-3-[2',3'-O-이소프로필리덴-5'-O-(N-t-부톡시카르보닐-L-발리닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실]-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(103)의 제조

DCE (22.5 ㎖)중의 Boc-Val-Val-OH (3.00 g, 9.48 mmol) 및 EDC (1.82 g, 9.48 mmol)의 불균질 혼합물에 실온에서 피리딘 (7.5 ㎖)을 첨가하였다. 혼합물이 균질해지면, 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 교반한 후, 0℃로 냉각시켰다. 이 용액에 화합물(2) (3.07 g, 8.62 mmol) 및 DMAP (1.16 g, 9.48 mmol)를 순차적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 30 분간 0℃에서 교반한 후, 16 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 무수 상태로 증발시키고, EtOAc (200 ㎖) 및 물 (100 ㎖)의 사이에 분배시켰다. 유기 상을 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 농축시키고, 크로마토그래피(SiO₂, 구배 용출 60% EtOAc-CHCl₃ 내지 100% EtOAc)로 처리하고, 끈적이는 고형물로 농축시켰다. 고형물을 Et₂O-CHCl₃에서 마쇄시켜 결정질 고형물인 2.048 g (36%)의 화합물(103)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.63 (s, 1H), 11.37 (s, 1H), 11.25 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 13.2, 8.1 ㎐, 1H), 6.98 (br s, 2H), 6.61 (dd, J = 11.7, 8.8 ㎐, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.23-5.27 (m, 1H), 5.05 (br s, 1H), 4.10-4.35 (m, 3H), 3.76-3.90 (m, 2H), 3.57-3.60 (m, 1H), 1.80-2.06 (m, 2H), 1.47 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.29 (s, 3H), 0.77-0.86 (m, 12 H); [M-H]⁺ m/z 653.

단계 2: 5-아미노-3-(5'-O-[L-발리닐-L-발리닐]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(104)의 제조

디옥산 (50 ㎖) 및 i-PrOAc중의 4 M HCl의 혼합물에 고형물(103) (1.48 g, 2.26 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액은 수 분간 불균질한 혼합물을 형성하였다. 1 시간 후, 현탁액을 여과하고, Et₂O로 세정한 후, 고진공하에서 건조시켜 백색 고 형물인 948 ㎎ (74%)의 화합물(104)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.29 (s, 1H), 8.52 (d, J = 7.7 ㎐, 1H), 8.06 (br s, 3H), 7.03 (br s, 2H), 5.79 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.42 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 5.13 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 4.71 (dd, J = 9.9, 5.5 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.7, 3.3 ㎐, 1H), 4.18-4.22 (m, 2H), 4.06 (dd, J = 11.7, 8.0 ㎐, 1H), 3.88-3.92 (m, 1H), 3.69 (s, 1H), 2.02-2.13 (m, 2H), 0.87-0.92 (m, 12H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 513.

실시예 54: 5-아미노-3-(5'-O-(L-페닐알리닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(106)

단계 1: 5-아미노-3-[2',3'-O-이소프로필리덴-5'-O-(N-t-부톡시카르보닐-L-페닐알리닐-L-발리닐)-β-D-리보푸라노실]-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(105)의 제조

실시예 52의 단계 1과 유사한 방법으로 표제 화합물을 64% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.24 (s, 1H), 8.00-8.08 (m, 1H), 7.22-7.23 (m, 4H), 7.13-7.16 (m, 1H), 6.98 (br s, 2H), 6.83-6.87 (m, 1H), 6.02 (d, J = 3.7 ㎐, 1H), 5.25-5.28 (m, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.12-4.34 (m, 4H), 2.88-2.94 (m, 1H), 2.66-2.75 (m, 1H), 1.97-2.04 (m, 1H), 1.46 (d, J = 7.3 ㎐, 2H), 1.17-1.28 (m, 14H), 0.77-0.85 (m, 6H); MS (-)-ES [M-H]⁺ m/z 701.

단계 2: 5-아미노-3-(5'-O-[L-페닐알리닐-L-발리닐]-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(106)의 제조

실시예 52의 단계 2과 유사한 방법으로 표제 화합물을 74% 수율로 백색 고형물로서 생성하였다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.32 (s, 1H), 8.72 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 8.16 (br s, 3H), 7.19-7.28 (m, 5H), 7.09 (br s, 2H), 5.79 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.20 (br s, 3H), 4.70 (dd, J = 5.5, 4.4 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 11.7, 3.3 ㎐, 1H), 4.03-4.24 (m, 3H), 3.90-3.94 (m, 1H), 3.09 (dd, J = 14.0, 5.9 ㎐, 1H), 2.92 (dd, J = 14.0, 7.7 ㎐, 1H), 2.01-2.10 (m, 1H), 0.89 (d, J = 6.6 ㎐, 3H), 0.88 (d, J = 6.6 ㎐, 3H); MS (-)-ES M⁺ m/z 562.

실시예 55: 5-아미노-3-(5'-O-카프릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온 염산염(109)

단계 1: 5-아미노-3-[2',3'-O-(4-플루오로벤질리덴)-β-D-리보푸라노실]-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(107)의 제조

THF중의 화합물(90) (750 ㎎, 1.74 mmol) 및 4-플루오로벤즈알데히드 (1.86 ㎖, 17.4 mmol)의 균질한 용액에 H₂SO₄ (1 방울)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16 시간 동안 교반하고, 이때 침전물이 형성되었다. 여과에 의하여 황색 고형물인 360 ㎎ (49%)의 벤질리덴 아세탈(107)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.24 (s, 1H), 7.96-8.00 (m, 1H), 7.54-7.57 (m, 2H), 7.24-7.28 (m, 2H), 6.96 (br s, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.96 (s, 1H), 5.39-5.41 (m, 1H), 5.01-5.04 (m, 1H), 4.12-4.17 (m, 1H), 3.48-3.59 (m, 3H); MS (+)-ES [M+H]+ m/z 423.

단계 2: 5-아미노-3-[2',3'-O-(4-플루오로벤질리덴)-5'-카프릴옥시-β-D-리보푸라노실]-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(108)의 제조

MeCN (5 ㎖)중의 화합물(107) (360 ㎎, 0.605 mmol), Et₃N (278 ㎕, 2.00 mmol) 및 DMAP (5 ㎎, 0.04 mmol)의 불균질한 혼합물에 카프릴산 무수물 (180 ㎕, 0.605 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 16 시간 동안 교반하고, 이를 농축시키고, 크로마토그래피 (SiO₂, 구배 용출 40-60% EtOAc-CHCl₃)로 처리하여 백색 고형물인 407 ㎎ (87%)의 화합물(108)을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.28 (s, 1H), 7.56 (dd, J = 8.4, 6.2 ㎐, 2H), 7.25 (dd, J = 9.2, 8.8 ㎐, 2H), 7.00 (br s, 2H), 6.14 (s, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.39 (d, J = 7.0 ㎐, 1H), 5.15-5.18 (m, 1H), 4.27-4.35 (m, 2H), 4.14 (dd, J = 11.4, 7.7 ㎐, 1H), 2.26 (t, J = 7.0 ㎐, 2H), 1.45-1.47 (m, 2H), 1.20-1.23 (m, 8H), 0.82 (t, J = 5.9 ㎐, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 549.

단계 4: 5-아미노-3-(5'-O-카프릴-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-2,7-디온(109)의 제조

MeOH (40 ㎖)중의 화합물(108) (200 ㎎, 0.365 mmol) 및 PPTS (5 ㎎, 0.02 mmol)의 혼합물을 45℃로 20 분간 가열하고, 농축시키고, HPLC 정제로 처리하여 백색 고형물인 69 ㎎ (43%)의 표제 화합물을 얻었다.

¹H (400 ㎒, d₆-DMSO) δ 11.18 (s, 1H), 6.93 (br s, 2H), 5.77 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.35 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 5.08 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.67 (dd, J = 9.9, 5.3 ㎐, 1H), 4.30 (dd, J = 11.9, 3.7 ㎐, 1H), 4.21 (dd, J = 12.1, 6.4 ㎐, 1H), 3.98 (dd, J = 11.9, 6.8 ㎐, 1H), 3.84-3.88 (m, 1H), 2.27 (t, J = 7.1 ㎐, 2H), 1.47-.150 (m, 2H), 1.19-1.25 (m, 8H), 0.84 (t, J = 6.8 ㎐, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ m/z 443.

C₁₈H₂₆N₄O₇S·1.0 H₂O의 원소 분석:

이론치: C, 46.71; H, 5.78; N, 11.47; S, 6.56.

실측치: C, 46.62; H, 6.09; N, 12.01; S, 6.89.

실시예 56: (5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-2,3-디히드로-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-일)-톨루엔-4-설폰산-에스테르(110)

단계 1: 5-아미노-3-(2',3',5'-트리-O-아세틸-β-D-리보푸라노실)-티아졸로[4,5- d ]피리미딘-7-(4-톨루엔설포닐옥시)-2-온(110)

화합물(25) (250 ㎎, 0.56 mmol)을 CH₂Cl₂ (10 ㎖)에 용해시키고, DMAP (3.4 ㎎, 0.028 mmol) 및 TEA (0.24 ㎖, 1.70 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물에 염화p-톨루엔설포닐 (21.5 ㎎, 113 mmol)을 매40 분마다 1/4 당량의 분액으로 첨가하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터하였다. 3 시간 후, 대부분의 출발 물질이 소모되었다. 미정제 반응 혼합물을 실리카 플러그에 통과시키고, 농축시키고, 클로로포름중의 25% 에틸 아세테이트를 사용하여 플래쉬 컬럼으로 정제하였다. 생성물을 에틸 에테르에 용해시키고, 헥산을 첨가하여 화합물(16) (190 ㎎, 0.32 mmol)이 백색 고형물로서 침전되었다.

¹H NMR (400㎒, d₆-DMSO) δ 8.00 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.47 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.35 (s, 2H), 5.97 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.86 (m, 1H), 5.52 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.24 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.97 (s, 3H); MS (+)-ES [M+H]⁺ 597. R_f = 0.65 (75% 에틸 아세테이트-CHCl₃).

C₂₃H₂₄N₄O₁₁S의 원소 분석:

이론치: C, 46.30; H, 4.05; N, 9.39; S, 10.75.

실측치: C, 46.54; H, 4.27; N, 9.19; S, 10.44.

생물학적 테스트

화학식 I의 화합물이 이로운 경구 전달 특성을 드러내고 소정의 경로에 의하여 투여시 면역 반응을 유도하는 능력은 마우스 및 비이글 개에서의 실험으로 용이하게 입증된다. 화학식 I의 화합물에 대한 이와 같은 측정 결과를 본 명세서에서 참조한 문헌(예, 미국 특허 제5,041,426호 및 제4,880,784호)에 기재된 화합물을 사용하여 유사한 실험 결과와 비교함으로써, 약물동태학적 및 약역학적 성질에 대한 화학식 I의 화합물의 잇점을 입증할 수 있다.

마우스에서의 인터페론 알파 (Mu-IFN-α) 농도

정상의 마우스는 본 명세서에 기재된 발명이 화합물(1) (이사토리빈)의 경구 전달에서의 물질 개선을 제공하는 정도를 평가하기 위한 유용한 시스템을 제공한다. 상기 전구약물(들)의 경구 투여로부터 발생한 이사토리빈의 혈장 농도를 측정할 수 있을 뿐 아니라, 마우스에서 실시한 광범위한 면역 실험은 이사토리빈의 소정의 생물학적 활성을 반영하는 관심 시토킨인 인터페론 알파의 농도를 측정하는데 적당한 제제를 제공한다.

본 출원인은 일련의 실험에서 화합물(1)의 5'-발린 에스테르 (val-이사토리빈)인 화합물(3)이 이사토리빈 자체의 투여로부터 발생하는 것보다 실질적으로 개선된 인터페론 반응을 나타내는 것을 예시하는 쥐 계통을 사용하였다.

하기 표 1은 경구 경로로 50 ㎎/㎏의 농도로 중탄산염으로 제제화한 이사토리빈으로 2회 투여한 마우스의 혈장중의 쥐 인터페론 알파에 대한 분석 결과를 기재한다. 인터페론은 4 시간의 간격후 투여를 반복할 경우조차 측정 가능하지 않음이 명백하다.

4 시간 간격 2 회의 경구 50 ㎎/㎏ 이사토리빈 투여후 마우스에서의 인터페론 알파 (Mu-IFN-α) 혈장 농도 (pg/㎖)
시간(시)	개별적인 수치			평균	SD
1차 투여
0.00	BQL50	BQL125	BQL50	0.00	0.00
0.03	BQL25	BQL250	BQL25	0.00	0.00
0.08	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
0.25	BQL50	BQL25	BQL25	0.00	0.00
0.50	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
1.00	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
1.50	BQL100	BQL25	BQL25	0.00	0.00
2.00	BQL25	BQL75	BQL25	0.00	0.00
3.00	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.00	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
2차 투여
4.03	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.08	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.25	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.50	BQL50	BQL37.5	BQL50	0.00	0.00
5.00	BQL50	BQL50	BQL50	0.00	0.00
5.50	BQL37.5	BQL37.5	BQL37.5	0.00	0.00
6.00	BQL50	BQL41.3	BQL37.5	0.00	0.00
7.00	BQL50	BQL50	BQL50	0.00	0.00
8.00	BQL50	BQL25	BQL50	0.00	0.00
BQLn - 증가된 정량화 가능한 한계치 이하 < n pg/㎖

하기 표 2에는 중탄산염으로 1차 투여하고, 4 시간 후, 50 ㎎/㎏의 농도에서 중탄산염으로 제제화한 이사토리빈을 경구 투여한 마우스의 혈장중의 쥐 인터페론 알파에 대한 분석 결과를 기재하였다. 중탄산염 비히클 투여를 수용한 2 마리를 포함한, 4 마리의 마우스로부터의 혈장중의 인터페론을 보고하였다. 본 실험에서 보고한 모든 수치는 낮으며, 보고한 인터페론 농도는 매 시점에서 평가한 3 마리 마우스 모두에 대하여 일치하도록 보고되지는 않았으며, 이는 이러한 신호가 분석의 하한치 부근의 측정으로부터 야기되는 결과가 될 수 있다는 것을 시사한다.

비히클 투여 1회 및 4 시간 후 50 ㎎/㎏ 이사토리빈 투여 1회로 처리 후 마우스에서의 인터페론 알파 (Mu-IFN-α) 혈장 농도 (pg/㎖)
시간(시)	개별적인 수치			평균	SD
1차 투여
0.00	BQL50	BQL100	BQL62.5	0.00	0.00
0.03	BQL50	BQL50	BQL37.5	0.00	0.00
0.08	BQL50	BQL50	BQL50	0.00	0.00
0.25	BQL50	BQL62.5	BQL50	0.00	0.00
0.50	BQL50	BQL50	BQL50	0.00	0.00
1.00	BQL50	BQL50	BQL100	0.00	0.00
1.50	BQL50	BQL100	BQL50	0.00	0.00
2.00	34.9	BQL25	BQL25	11.6	20.15
3.00	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.00	BQL25	35.4	BQL100	11.8	20.44
2차 투여
4.03	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.08	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.25	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
4.50	BQL100	BQL25	133.2	44.4	76.90
5.00	74.9	BQL50	NR	37.5	52.96
5.50	BQL250	BQL75	BQL25	0.00	0.00
6.00	BQL25	BQL75	BQL75	0.00	0.00
7.00	BQL50	BQL50	BQL25	0.00	0.00
8.00	BQL25	BQL25	BQL25	0.00	0.00
BQLn - 증가된 정량화 가능한 한계치 이하 < n pg/㎖ NR - 보고하지 않음

하기 표 3은 몰 기준으로 50/㎎/㎏의 이사토리빈에 해당하는 투여량으로 중탄산염에 용해된 val-이사토리빈과 함께 경구 투여한 마우스의 혈장중 쥐 인터페론 알파에 대한 분석 결과를 기재한다. 인터페론은 투여후 1.0 시간, 1.5 시간 및 2.0 시간에서 측정이 용이한 것이 명백하다. 인터페론은 소정의 시간에서 측정한 모든 마우스에서 검출되었으며, 이는 val-이사토리빈 투여후의 효능의 신뢰성을 나타낸다. 그리하여, val-이사토리빈의 단일 투여는 이사토리빈의 단일 투여 또는 반복된 투여에 비하여 우수하다.

단일 73.0 ㎎/㎏ 투여의 val-이사토리빈 이후 마우스에서의 인터페론 알파 (Mu-IFN-α)혈장 농도(pg/㎖)
시간(시)	개별적인 수치			평균	SD
0.00	BQL	BQL125	BQL25	0.00	0.00
0.25	BQL	BQL	BQL	0.00	0.00
0.50	BQL25	BQL25	BQL	0.00	0.00
0.75	BQL	BQL	BQL25	0.00	0.00
1.00	173.2	125.1	89.0	129.1	42.24
1.50	202.9	145.9	294.8	214.5	75.13
2.00	49.2	137.9	138.3	108.5	51.33
3.00	BQL25	NR	NR	0.00	0.00
4.00	BQL25	27.6	BQL	9.20	15.90
5.00	BQL	BQL25	BQL25	0.00	0.00
BQL - 정량화 가능한 한계치 이하 < 12.5 pg/㎖ BQLn - 증가된 정량화 가능한 한계치 이하 < n pg/㎖ NR - 보고하지 않음

또한, 상기 표 1, 표 2 및 표 3에 기재한 데이타는 측정 가능한 인터페론 농도의 발생을 고려할 수 있다. 인터페론은 이사토리빈의 실험에 사용한 114 마리의마우스중 4 마리만의 혈장에서 검출된 반면, val-이사토리빈을 투여한 30 마리의 마우스중 10 마리가 혈장에서 인터페론이 검출 가능하다. 그래서, 전구약물은 4%에서 30%로의 인터페론 반응을 나타내는 마우스 비율이 증가되었으며, 평균 및 피이크 반응 모두의 크기가 2 배로 증가되었다.

기타의 실험에서, 이사토리빈 및 인터페론 알파의 농도는 정맥내 경로에 의하여 이사토리빈을 투여한 마우스에게서 측정되며, 이러한 농도를 val-이사토리빈의 경구 투여후 발생한 이사토리빈 및 인터페론 알파의 농도와 비교하였다. 이러한 데이타를 도 1에 요약하였다. 이러한 도면에서, 경구 val-이사토리빈 ("val-isator")(50 ㎎/㎏ 이사토리빈 몰 당량)에 의하여 유발된 인터페론 알파의 농도는 25 ㎎/㎏에서의 정맥내 이사토리빈 ("isator")으로부터의 것과 유사한 것이 명백하다. 그러므로, 경구 val-이사토리빈은 이사토리빈 자체의 정맥내 투여후 관찰된 것의 약 50%인 이사토리빈 및 인터페론의 농도를 제공한다.

비이글 개

비이글 개에게의 경구 투여후 이사토리빈(1)으로의 전신 노출에 대한 전구약물 (val-이사토리빈, 3)의 효과를 조사하였다. 이사토리빈을 중탄산나트륨 용액중에서 생성하였다. val-이사토리빈 및 이사토리빈을 하기와 같은 제제로서 생성하였으며, 이들은 용해도를 확인하기 위하여 선택하였다:

제제 1: 중탄산나트륨 용액중의 이사토리빈, 1 및 4　㎎/㎖.

제제 2: 몰 기준으로 1 및 4　㎎/㎖의 이사토리빈에 해당하는, 포스페이트 완충 염수중의 val-이사토리빈, 1.62 및 6.48 ㎎/㎖.

체중이 15 내지 27 ㎏이고, 연령이 약 1 내지 2 세인 4 마리의 수컷 및 4 마리의 암컷 성체 비이글 개를 실험 개시시 사용하였다. 동물을 각각 2 마리 수컷과 2 마리 암컷의 2 개의 군으로 나누었다. 테스트 물질을 1 일째 및 8일째에 급식으로 투여하고, 투여 사이에 7일의 약효세척 기간을 두었다. 혈액 샘플 (2 ㎖)을 각각의 동물로부터 투여전, 15 분, 30 분, 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 10 시간에서 각각의 투여후 리튬 헤파린관에 수집하였다. 분석때까지 혈장을 -70℃로 냉동시켰다. 혈장은 HPLC-MS/MS 분석에 의하여 이사토리빈에 대하여 분석하였다.

각각의 개에서의 이사토리빈 또는 val-이사토리빈으로부터 야기되는 이사토리빈에 대한 약물동태학적 변수를 하기 표 4 및 표 5에 요약하였다. 최대 농도(C_max)를 정의하는 핵심 약물동태학적 변수, 및 50 ㎎/㎏ 투여량에서의 전구약물 및 중탄산염 용액에 대한 시간-농도 곡선 아래의 면적(AUC)에 의하여 측정한 바와 같은 총 노출의 비를 하기 표 6에 요약하였다. 전구약물(3)의 경우, C_max 비율은 2.98±0.695이고, AUC 비율은 2.38±0.485이었다. 이러한 결과에 의하면, 50 ㎎/㎏의 투여량에서, 전구약물 val-이사토리빈이 중탄산염 용액중의 이사토리빈보다 실질적으로 더 높은 C_max 및 더 큰 생체이용율을 제공한다는 것을 알 수 있다.

10 ㎎/㎏ 투여에 대하여 중탄산염 용액에 대한 전구약물의 C_max 및 AUC 비율은 하기 표 7에 요약하였다. 전구약물의 경우, C_max 비율은 2.24±0.249이고, AUC 비율은 1.82±0.529이다. 이러한 결과에 의하면, 10 ㎎/㎏ 투여에서 전구약물 val-이사토리빈은 중탄산염 용액중의 이사토리빈에 비하여 더 높은 C_max 및 더 큰 생체이용율을 제공한다는 것을 알 수 있다.

그래서, 경구 투여후 달성된 이사토리빈의 최대 농도는 적어도 2 배가 되며, 이사토리빈에 대한 전신 노출은 10 및 50 ㎎/㎏ 투여 모두에서 이사토리빈 자체에 비하여 전구약물 val-이사토리빈의 경구 투여후 약 2 배 개선되었다.

50 ㎎/㎏으로 투여된 개에서의 이사토리빈의 약물동태학적 변수
	투여 기간	1	2
	제제	이사토리빈	val-이사토리빈
동물 번호	투여량(㎎/㎏) 몰 당량 이사토리빈	50	50
개 3517322	Cmax(ng/㎖)	3038.7	11741.5
	Tmax (h)	0.50	0.50
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	15227.0	33038.1
	T1/2 (h)	6.4	2.4
개 3521451	Cmax(ng/㎖)	3354.0	10652.1
	Tmax (h)	1.00	1.00
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	9422.2	26552.7
	T1/2 (h)	1.9	1.6
개 3528707	Cmax(ng/㎖)	8915.3	20340.6
	Tmax (h)	0.50	0.50
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	29701.7	53273.0
	T1/2 (h)	2.2	2.3
개 3532828	Cmax(ng/㎖)	6134.7	15987.9
	Tmax (h)	0.50	0.50
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	12069.7	32987.0
	T1/2 (h)	1.4	1.6

10 ㎎/㎏으로 투여된 개에서의 이사토리빈의 약물동태학적 변수
	투여 기간	1	2
동물 번호	제제	이사토리빈	val-이사토리빈
	투여량(㎎/㎏) 몰 당량 이사토리빈	10	10
개 3524523	Cmax(ng/㎖)	4091.5	8594.6
	Tmax (h)	1.00	0.50
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	13305.8	17166.2
	T1/2 (h)	2.1	1.7
개 3526402	Cmax(ng/㎖)	1859.5	4047.0
	Tmax (h)	1.00	1.00
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	5774.4	10548.9
	T1/2 (h)	1.6	2.2
개 357450	Cmax(ng/㎖)	1620.3	4228.7
	Tmax (h)	0.50	1.00
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	4387.3	11158.0
개 354708	Cmax(ng/㎖)	2781.2	5784.8
	Tmax (h)	0.50	0.50
	AUC(0-inf) (ng·h/㎖)	7522.1	12259.1
	T1/2 (h)	1.6	2.0

50 ㎎/㎏으로 투여한 개에서의 이사토리빈의 약물동태학적 변수의 비율
동물 번호	제제	이사토리빈	val-이사토리빈
개 3517322	Cmax 비율	1.00	3.86
	AUC 비율	1.00	2.17
개 3521451	Cmax 비율	1.00	3.18
	AUC 비율	1.00	2.82
개 3528707	Cmax 비율	1.00	2.28
	AUC 비율	1.00	1.79
개 3532828	Cmax 비율	1.00	2.61
	AUC 비율	1.00	2.73
	평균 Cmax 비율	N/A	2.98
	SD Cmax 비율	N/A	0.695
	평균 AUC 비율	N/A	2.38
	SD AUC 비율	N/A	0.485

10 ㎎/㎏으로 투여한 개에서의 이사토리빈의 약물동태학적 변수의 비율
동물 번호	제제	이사토리빈	val-이사토리빈
개 3524523	Cmax 비율	1.00	2.10
	AUC 비율	1.00	1.29
개 3526402	Cmax 비율	1.00	2.18
	AUC 비율	1.00	2.20
개 3527450	Cmax 비율	1.00	2.61
	AUC 비율	1.00	2.54
개 355708	Cmax 비율	1.00	2.08
	AUC 비율	1.00	1.63
	평균 Cmax 비율	N/A	2.24
	SD Cmax 비율	N/A	0.249
	평균 AUC 비율	N/A	1.82
	SD AUC 비율	N/A	0.529

전구약물은 여러 가지 이유로 인하여 바람직하다. 첫째, 전구약물은 높은 비율의 활성제를 제공하기 위하여 제제화가 용이하다. 이로 인하여 소정의 투여량에 대한 캡슐의 크기가 작아지며, 이는 경구 생성물에 대하여 이롭다. 둘째, 전구약물은, 약제가 장관을 둘러싼 림프 조직을 통과할 때 활성 구조체를 차폐하는 가능성을 제공하며, 이는 이러한 조직의 활성화를 최소화시킬 것이며, 그리하여 경구 용인성을 증가시키게 된다. 마지막으로, 테스트한 투여량에서, val-이사토리빈은 경구 투여후 생물학적 효능을 위해 바람직한 범위내에 포함되는 이사토리빈의 혈장 농도를 제공하는데, 이사토리빈 자체의 경우는 그렇지 못하였다.

위장관 자극의 감소

또한, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 예상 밖의 크게 감소된 독성 효능, 특히 감소된 GI 자극을 나타낸다. 위장관("GI")은 실질적인 면역 조직(예, 파이어판 등)으로 둘러싸여 있다. 화학식 I의 화합물은, 약제가 장관을 둘러싼 림프 조직을 통과할 때 활성 구조체를 차폐하는 가능성을 제공하며, 이는 이러한 조직의 활성화를 최소화시킬 것이며, 그리하여 GI 자극을 감소시키게 된다.

Robins et al.은 이사토리빈 뉴클레오시드의 5'-히드록실의 제거가 활성을 제거한다는 사실을 밝혀냈다. 문헌[Robins et al., Adv. Enzyme Regul., 29, 97-121 (1989)]. 임의의 특정의 이론에 한정하고자 하는 것은 아니나, 에스테르 치환에 의한 히드록실 부위의 차단은 활성을 유사하게 제거하나, 전신 순환에서 수송되며, 여기서 발린 에스테르는 분해되어 이사토리빈에 노출된다고 가정하였다.

본 출원인은 이러한 가설이 확인된 것을 발견하였다. 정맥내 투여한 이사토리빈 및 경구 투여한 이사토리빈 및 val-이사토리빈의 형식적 독성 실험을 비이글 개에게 실시하였다. 경구 투여된 이사토리빈에 대한 독성 결과는 ICN/뉴클레익 애시드 리서치 인스티튜트에서 실시한 실험으로부터 얻었다.

본 출원인은 화합물(1) 및 화합물(3)의 경구 독성 및 화합물(1)의 정맥내 독성을 확인하였다. 본 출원인은 화합물(3)의 경구 독성이 화합물(1)의 경구 독성보다는 화합물(1)의 정맥내 독성과 훨씬 더 유사한 것으로 관찰하였다. 특히, 화합물(3)의 경구 독성을 제한하는 투여량은 화합물(1)의 정맥내 독성과 본래 유사하며, 화합물(1)의 정맥내 투여후 관찰된 것과 유사한 혈액 노출에서 발생하였다. 반대로, 화합물(1)의 경구 독성은 상이한 제한 독성(위장관 병변)을 지니며, 이러한 독성은 화합물(1)의 정맥내 및 화합물(3)의 경구 독성 투여량보다 더 낮은 투여량에서 관찰되었다. 또한, 구토는 구토가 발생하는 화합물(3)의 경구 투여보다 더 낮은 투여량에서 화합물(1)의 경구 투여로 처치된 개에게서 관찰되었다. 하기 표 8 참조. 또한, 구토 평가를 위한 기타의 시스템은 예컨대 흰담비에게서 알려져 있는데, 이는 화합물의 경구 및 정맥내 투여를 비교 가능케 한다. 문헌[Strominger N. et al., Brain Res. Bull, 5, 445-451 (2001)].

각각의 경우에서, 화합물을 급식에 의하여 또는 정맥내 주입에 의하여 액제로서 투여하였다. 다수의 변수는 독성 실험에서 통상적인 바와 같이 평가하였다. 이사토리빈에 대한 더 높은 잠재 노출을 제공하는 실험에서, 이사토리빈의 혈장 농도는 a LC/MS 방법으로 평가하였다. 특징적인 GI 수치에 등급을 매기고, 이를 하기 표 8에 기재하였다.

독성 실험에서의 이사토리빈에 대한 전산 노출(AUC)에 의하여 매겨진 이사토리빈 또는 val-이사토리빈의 투여후 개에게서의 GI 용인도에 대한 효과
		경구 이사토리빈		정맥내 이사토리빈		경구 val-이사토리빈
이사토리빈 당량 적용된 투여량 (㎎/㎏)	AUC0-24 h (㎎·h/㎖)	구토 또는 설사	GI 병변 또는 자극	구토 또는 설사	GI 병변 또는 자극	구토 또는 설사	GI 병변 또는 자극
2.5	n.d.	Neg.	Neg.
5	n.d.	+	Neg.
10	n.d.	++	++
8.1	11.4					Neg.	Neg.
16	15.6					Neg.	Neg.
12.5	19.5			Neg.	Neg.
32	31.7					Neg.	Neg.
25	42.8			Neg.	Neg.
64	71					Neg.	Neg.
130	75.3					+	Neg.
50	87.8			+	Neg.
260	127					++	Neg.
390	180					+++	Neg.
100	209			++	Neg.

경구 투여된 이사토리빈의 경우, 원칙적인 발견은 GI 자극에 의하여 측정된 바와 같은 GI 용인성과 관련되어 있다. 표 8에 보고된 임상적 징후는 구토 및/또는 설사이었다. 이들 임상적 징후는 10 ㎎/㎏ 군에서 더 자주 발생하며, 이러한 투여량에서 동물 한 마리에서는 혈변이 보고되었다. GI 관의 전체 조직병리학 평가는 10 ㎎/㎏에서의 개 8 마리중 4 마리에게서 장관 점막의 복수의 산란된 붉은 병변이 보고되었으며, 현미경 검사에 의하면 세포 울혈 및 출혈인 것으로 밝혀졌는데, 이는 진행중인 국소화된 감염 과정에 대한 것으로 예상된다. GI 효과는 NOAEL을 5 ㎎/㎏으로 설정하였다.

정맥내 투여된 이사토리빈은 개에게서의 통상의 발견과 같은 구토 및/또는 설사를 야기하며, 이러한 효과는 경구 투여된 이사토리빈보다 더 크게 적용된 투여량에서 발생하였다. 조직의 부검 또는 조직병리학적 평가에서 GI 관에서는 병변이 발견되지 않았다. GI 독성은 NOAEL에 영향을 미치지 않으며, 이는 기타의 발견에 기초하여 12.5 ㎎/㎏로 설정되었다.

경구 투여된 val-이사토리빈은 정맥내 투여된 이사토리빈과 유사한 독성 프로파일을 나타낸다. 더 많이 적용된 투여량에서는 구토 및 설사가 관찰되었다. GI 병변이 이러한 실험에서의 평가의 촛점이 되기는 하나, 이는 관찰되지 않았다. 정맥내 투여된 이사토리빈의 경우, NOAEL은 기타의 발견에 기초하여 설정되었다. 이사토리빈의 전신 노출에 대한 관찰된 독성의 일치가 본 연구에서 중요하며, 구토 및 설사의 관찰에 대한 이사토리빈 AUC의 역치는 정맥내 투여된 이사토리빈 및 경구 투여된 val-이사토리빈에 대한 것과 유사하다. (표 8).

표 8의 데이타에 의하면, 경구 투여된 val-이사토리빈이 경구 투여된 이사토리빈보다 개선된 독성 프로파일을 제공하며, 이는 이사토리빈의 활성의 화학적 차폐가 뉴클레오시드의 히드록실 중 하나를 에스테르로 화학 치환시켜, 바람직하게는뉴클레오시드의 5'-히드록실 위치에서 에스테르를 화학 치환하여 제공된다. 체내에 유입시 분해 가능하도록 하는 이러한 치환을 조절하여 GI 관의 해부학적 구조로부터 야기되는 제한된 GI 독성을 갖지 않는 화합물의 유용한 활성에 전신 노출을 제공하게 된다. 이는 허용 가능한 것보다 실질적으로 더 높은 몰을 기준으로 한 투여량을 투여할 수 있으며, 그리하여 비경구 "차폐하지 않은" 화합물 단독의 투여와 비교시 더 큰 효능 및 감소된 부작용을 산출한다.

화학식 I의 화합물의 경구 투여후 화합물(1)(이사토리빈)에 대한 전신 노출의 평가

R2=H인 화학식 I의 화합물에 대한 약물동태학적 변수
	약물동태학적 변수
화합물	Caco2 (nm/s)	원숭이 간세포 (%)	원숭이 PK ((ng/㎖)*h)/(㎎/㎏)
79	100	10	390
89	200	45	560
78	600	20	630

Caco2 분석

분화되고 P-당단백질 발현되는 Caco2 세포 단층을 사용한 시험관내 약물 수송 분석은 창자 상피 세포 차단체를 가로지르는 후보 약물 화합물의 흡수 속도를 예측하는데 널리 사용된다. 문헌[Hilgers, A. R. et al., Pharm. Res., 20(8), 1149-55 (Aug. 2003)].

Caco-2 세포 (ATCC로부터 입수)를 막의 꼭대기 부분 및 기저측 모두로의 접근을 허용하는 챔버내에서 투과성 막에 대한 합류로 성장시켰다. 생성된 세포막의 무상해 성질을 상피통과 전기 저항을 사용하여 평가하였다. 테스트 화합물을 막의 꼭대기측에 기지의 농도로 첨가하고, 막의 기저측에 대한 화합물의 출현 비율은 HPLC 또는 LC-MS/MS를 사용한 분석으로 평가하였다. Caco-2 세포에서의 더 높은 수송 비율은 개선된 위장관 흡수와 관련이 있다.

이러한 시스템내에서의 화합물(79), 화합물(89) 및 화합물(78)의 평가 목적은 화합물(89) 및 화합물(78)이 화합물(79)보다 더 큰 정도로 수송되었는지를 측정하고자 하는 것이다. 화합물(89) 및 화합물(78)은 화합물(79)에 비하여 상당히 개선된 수송을 나타낸다는 것을 확인하였다.

1차 간세포

본 발명의 화합물이 유효한 전구약물로서 작용하도록 하는 경우 체내에서 화합물(1)로 전환되어야만 한다. 종종 간세포는 화합물이 동물의 체내에서 전환될 수 있는 정도를 평가하는데 사용되며, 이러한 전환은 전체 동물에서의 대사를 반영하는 방법으로 각종 종으로부터의 간세포에 따라 달라질 수 있는 것으로 알려져 있다. 문헌[Seddon T. et al., Biochem Pharmacol., 38(10), 1657-65 (May 1989)].

필리핀 원숭이 간세포는 통상의 공급처로부터 구입하여 표본 48 시간 이내에 사용하였다. 화합물을 10 μM/㎖의 농도로 배양 배지에서 준비하고, 37℃에서 2 시간 동안 1 ㎖당 1,000,000 개의 생육성 간세포를 갖는 표준 시스템내에서 배양하였다. 배양 말기의 전환 정도는 LC-MS/MS에 의하여 화합물(1)을 측정하여 평가하였다.

이러한 시스템에서의 화합물(79), 화합물(89) 및 화합물(78)의 평가의 목적은 화합물(1)로의 전환 정도를 측정하기 위한 것이다. 화합물(89) 및 화합물(78)은 화합물(79)보다 훨씬 더 많이 화합물(1)로 전환되었다는 것을 확인하였다.

동물 PK 실험

경구 투여후 전신 순환에 화합물(1)을 전달하는 본 발명의 화합물의 능력의 평가는 당업계에서 주지된 방법에 의하여 평가하였다. 하기 표 9 및 표 10에서, 각각의 테스트 화합물을 pH3에서 수성 완충액, 예컨대 PBS에, 또는 가용화제, 예컨대 Cremaphor, Tween 80 또는 PEG 400을 포함하는 용액에 용해시켜 경구 투여용 액제로 제제화하였다. 일반적으로 각 실험에 대하여 3 마리의 동물의 군을 사용하여 화합물의 용액을 스프라그-돌리 래트에게 또는 필리핀 원숭이에게 경구 급식으로 투여하였다. 혈장 샘플을 여러 시점(일반적으로 6 내지 12 개의 시점을 사용함)에서 6 내지 24 시간 이내에 동물로부터 채취하였다. 혈장 샘플을 수집후 즉시 급냉시키고, 생분석에 대한 샘플 표본 전에 즉시 해동시켰다.

화합물(1)에 대한 기준값은 경구 또는 정맥내 투여후 유사한 절차에 의하여 얻었다. 화합물(1)의 정맥내 투여에 의하여 무상해 화합물(1)로서 소변에서 투여된 투여량의 대부분(>75%)이 회수되었으며; 그리하여 소변에서의 화합물(1)의 측정은 화합물(1)에 대한 전신 노출의 간편한 측정을 제공하게 된다. 이러한 이유로, 특정의 실험에서, 투여후 24 시간에 걸쳐 수집한 소변중의 화합물(1)의 함량을 사용하여 화합물을 평가하였다.

생분석

동물 PK 실험 또는 시험관내 실험에서 수집한 각각의 샘플의 분액(일반적으로 50 ㎕)을 내부 표준물질(일반적으로 네뷸라린)을 포함하는 아세토니트릴 (3:1 아세토니트릴-대-혈장 비율)로 억제시켰다. 현탁액을 14,000 rpm에서 5-10 분간 원심분리하였다. 생성된 상청액 분액을 깨끗한 바이알에 옮기고, 질소하에서 건조시켰다. 건조된 샘플을 재구성하고, MRM(다중 반응 모니터링) 방법에 의하여 LC-MS/MS로 처리하였다. 보정 표준물질은 동물 혈장 또는 세포 배양 매질을 사용한 분석물의 초기 농축 표준물의 일련의 희석에 의하여 생성하였다. 보정 표준물질은 동물 PK 샘플에 대하여 상기에서 설명한 바와 같은 LC-MS/MS 분석에 대하여 생성하였다. LC-MS/MS 분석은 실험 샘플을 괄호안에 표시한 2 이상의 보정 표준물질 세트를 사용하는 회분식으로 실시하였다. 분석물 및 내부 표준물질 모두에 대한 LC-MS/MS 미량을 적분하고, 이러한 피크 면적의 비율을 사용하여 실험 샘플 및 보정 표준물질 모두에서의 분석물의 상대적인 반응을 계산하였다. 합한 보정 곡선은 보정 표준물질로부터의 반응에 곡선 적합 방법을 적용하여 전개시켰다. 적합된 보정 곡선을 사용하여 샘플중의 분석물의 함량을 계산하였다. 보정 곡선의 유용한 역학 범위는 2,000-10,000 ng/㎖에 대하여 1-5 ng/㎖이었다.

PK 계산

공지의 투여량의 화합물의 경구 투여후 화합물(1)이 혈장 농도 - 시간 프로파일을 사용하여 전신 순환에서의 화합물(1)의 AUC(곡선 아래의 면적)를 계산하였다. AUC는 분자량에 기초하여 화합물중의 화합물(1)의 총 이론적 함량에 의하여 정규화하였다. 표 8의 경우, AUC를 1 ㎎/㎏의 투여량으로 추가로 정규화하였다.

표 8로부터, AUC 데이타는 화합물(89) 및 화합물(78)이 화합물(79)보다 경구 투여후 전신 순환에 더 많은 (44-69% 증가) 화합물(1)을 전달한다는 것을 예시한다.

R2=OR5인 화학식 I의 화합물에 대한 약물동태학적 변수
화합물 번호		SD 래트, PO ANA245 AUC(0-24h)	SD 래트,PO ANA245 AUC(0-1h)	필리핀 원숭이, PO ANA245 AUC(0-24h)
1	정맥내 투여	341	256	740
	경구 투여	23		15
14		16
30		169; 136	73	205
28		156		153
62			34
63			46
32		157
66			9
38			6
40			14
36			16
34			6
66		130	81; 60	127
68				27
51			0
72				0
70				0
61				104

화합물의 항-바이러스 활성

다수의 분석을 본 발명에 의하여 사용하여 예컨대 세포 배양액, 동물 모델 및 사람 개체에게의 투여를 비롯한 본 발명의 화합물의 항-바이러스 활성을 측정할 수 있다. 본 명세서에서 설명된 분석을 사용하여 시간 경과에 따른 바이러스 성장을 분석하여 본 발명의 화합물의 존재하에서 바이러스의 성장 특성을 측정하였다.

또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물 및 바이러스를 바이러스 감염이 우려되는 동물 개체에게 투여하였다. 발생 빈도, 경중도, 길이, 바이러스 부하, 감염 치사율 등을 개체에게 (본 발명의 화합물 없이) 바이러스만을 투여한 경우 관찰되는 발생 빈도, 경중도, 길이, 바이러스 부하, 감염 치사율과 비교할 수 있다. 본 발명의 화합물의 항-바이러스 활성은 본 발명의 화합물을 사용한 발생 빈도, 경중도, 길이, 바이러스 부하, 감염 치사율 등이 감소된 것으로 나타났다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 화합물 및 바이러스를 동시에 동물 개체에게 투여하였다. 또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물 이전에 바이러스를 동물 개체에게 투여하였다. 또다른 특정의 구체예에서, 본 발명의 화합물을 바이러스 이전에 동물 개체에게 투여하였다.

또다른 구체예에서, 다수의 시점의 후-감염에서 사람 또는 동물 개체로부터 본 발명의 화합물의 존재 또는 부재하에서 생물학적 유체/임상적 샘플(예, 비강 흡인물, 인후 면봉법, 가래, 기관지-폐포 세척, 소변, 타액, 혈액 또는 혈청)을 채취하고, 바이러스의 정도를 측정하여 바이러스의 성장율을 테스트할 수 있다. 특정의 구체예에서, 바이러스의 성장율은 세포 배양물중에서의 성장, 허용 가능한 성장 배지에서의 성장, 또는 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들면 면역분석(예, ELISA; ELISA에 관한 논의의 경우 문헌[Ausubel et al., eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, John Wiley & Sons, Inc., New York at 11.2.1]을 참조함), 바이러스 특이성 핵산의 검출 또는 분석하고자 하는 바이러스를 면역특이적으로 인지하는 항체를 사용한 면역형광 염색 또는 면역블롯 분석(예, 서던 블롯 또는 RT-PCR 분석 등에 의함)을 사용한 개체에서의 성장후 샘플중의 바이러스의 존재를 평가하여 분석하나, 이들 방법에 한정되지는 않는다.

특정의 구체예에서, 바이러스 역가는 감염된 세포 또는 감염된 개체로부터 생물학적 유체/임상적 샘플을 얻고, 샘플의 일련의 희석물을 생성하고, 바이러스 감염의 우려가 있는 세포(예, 1차 세포, 변형된 세포주, 환자 조직 샘플 등)의 단층을 단일 판의 출현을 허용하는 바이러스의 희석으로 감염시켜 측정할 수 있다. 그후, 플라크를 계수하고, 바이러스 역가를 샘플 1 ㎖당 플라크 형성 단위로서 나타냈다.

한 특정의 구체예에서, 개체중의 바이러스의 성장율은 개체내에서의 바이러스에 대한 항체의 역가에 의하여 평가할 수 있다. 항체 혈청 역가는 당업계에 주지된 임의의 방법에 의하여 측정할 수 있으며, 예를 들면 혈청 샘플중의 항체 또는 항체 분절의 함량은 예를 들면 ELISA에 의하여 정량화할 수 있기는 하나, 이러한 방법에 한정되지는 않는다. 또한, 화학식 I의 화합물의 생체내 활성은 테스트 동물에게 화합물을 직접 투여하고, 생물학적 유체(예, 비강 흡인물, 인후 면봉법, 가래, 기관지-폐포 세척, 소변, 타액, 혈액 또는 혈청)를 수집하고, 항-바이러스 활성에 대하여 유체를 테스트하여 측정할 수 있다.

바이러스 레벨에 대하여 분석하고자 하는 샘플이 생물학적 유체/임상적 샘플 (예, 비강 흡인물, 인후 면봉법, 가래, 기관지-폐포 세척, 소변, 타액, 혈액 또는 혈청)인 구체예에서, 샘플은 무상해 세포를 포함할 수 있거나 또는 이를 포함하지 않을 수 있다. 무상해 세포를 포함하는 개체로부터의 샘플을 직접 처리할 수 있는 반면, 무상해 세포를 포함하지 않는 분리물은 우선 증식 허용 세포주(예, 1차 세포, 변형된 세포주, 환자 조직 샘플 등) 또는 성장 매질(예, LB 브로쓰/한천, YT 브로쓰/한천, 혈액 한천 등)에서 배양시킬 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 세포 현탁액은 5 분간 실온에서 예를 들면 300×g에서의 원심분리에 의하여 세정한 후, 동일한 조건하에서 PBS, pH 7.4 (Ca⁺⁺ 및 Mg⁺⁺ 없음) 세정액으로 세정하였다. 세포 펠릿은 분석에 대하여 소부피의 PBS에 재현탁시킬 수 있다. 무상해 세포를 포함하는 1차 임상적 분리물을 PBS와 혼합하고, 5 분간 실온에서 300×g에서 원심분리하였다. 살균 피펫 끝을 이용하여 계면으로부터 점액을 제거하고, 세포 펠릿을 동일한 조건하에서 PBS를 사용하여 1번 더 세정할 수 있다. 그후, 분석을 위하여 펠릿을 소부피의 PBS에 재현탁시킬 수 있다.

또다른 구체예에서, 본 발명의 화합물을 바이러스로 감염된 사람 개체에게 투여하였다. 발생 빈도, 경중도, 길이, 바이러스 부하, 감염 치사율 등을 본 발명의 화합물을 사용하지 않거나 또는 위약의 존재하에서 바이러스로 감염된 사람 개체에서 관찰되는 발생 빈도, 경중도, 길이, 바이러스 부하, 감염 치사율 등과 비교할 수 있다. 본 발명의 화합물의 항-바이러스 활성은 본 발명의 화합물의 존재하에서 발생 빈도, 경중도, 길이, 바이러스 부하, 감염 치사율 등이 감소한 것으로 나타났다. 당업계에서 공지된 임의의 방법을 사용하여 개체에서의 항-바이러스 활성, 예컨대 상기에서 설명한 것을 측정할 수 있다.

또한, 화학식 I의 화합물의 생체내 활성은 동물 또는 사람 개체에게 화합물을 직접 투여하고, 생물학적 유체/임상적 샘플(예, 비강 흡인물, 인후 면봉법, 가래, 기관지-폐포 세척, 소변, 타액, 혈액 또는 혈청)을 수집하고, 항-바이러스 활성에 대하여 생물학적 유체/임상적 샘플을 테스트하여 (예를 들면 바이러스의 존재하에서 배양물중의 세포에 첨가하여) 측정할 수 있다.

도 2: 이사토리빈의 1일 1회 정맥내 투여에 대한 바이러스 부하의 변화

이사토리빈 조사 약물 생성물은 50 ㎖ 바이알에 수용된 정상의 살균 염수중의 1 ㎎/㎖ 용액으로서 공급된다. 이사토리빈은 7 일간 1일 1회로 투여당 200, 400, 600 또는 800 ㎎으로 정맥내 주입에 의하여 투여된다. 모든 투여는 800 ㎎ 투여를 80 분간 투여하는 것을 제외하고는 60 분간 일정한 주입 속도로 투여한다. 각각의 투여에 대한 유속은 200 ㎎ 투여의 경우 3.33 ㎖/분; 400 ㎎ 투여의 경우 6.67 ㎖/분; 500 ㎎ 투여의 경우 8.33 ㎖/분; 또는 600 ㎎ 및 800 ㎎ 투여의 경우 10.0 ㎖/분이 된다.

각각의 투여군(투여당 200 ㎎, 400 ㎎, 600 ㎎ 및 800 ㎎)에 4 내지 6 명의 환자를 등록하고, 7 일간 매일 1회 정맥내 주입하였다. 투여전, HCV 바이러스의 유전형을 평가하기 위하여 각각의 환자로부터 혈액 샘플을 채혈하였다.

혈장 HCV RNA는 이들 매일(×7 일간) 투여군에 대하여 D2 내지 D7에서의 1차 1일 이사토리빈 정맥내 주입 개시 이전에 기준선 (D-1 또는 예비측정 및 D1에서 측정한 2 개의 예비치료 측정치의 평균) 및 1일 1회로 측정하였다. 바이러스 부하는 분지된 DNA 방법(Versant^TM v3.0 bDNA 분석, 바이엘 다이아그노스틱스)에 의하여 측정하였다. 혈장 HCV RNA의 경우, 예비치료 기준선으로부터의 최대 변화는 로그 변환값을 사용하여 평가하였다.

실시예: 경구 조성물

하기 표 11은 100 ㎎의 val-이사토리빈을 포함하는 회분 제형 및 단일 투여 단위 제형을 예시한다.

100 ㎎ 정제에 대한 제제
물질	중량%	함량(㎎/정제)	함량(㎏/회분)
val-이사토리빈	40%	100.00	20.00
미정질 셀룰로스, NF	53.5%	133.75	26.75
Pluronic F-68 계면활성제	4.0%	10.00	2.00
크로스카르멜로스 나트륨 타입 A, NF	2.0%	5.00	1.00
스테아르산마그네슘, NF	0.5%	1.25	0.25
총	100.0%	250.00 ㎎	50.00 ㎏

미정질 셀룰로스, 크로스카르멜로스 나트륨 및 val-이사토리빈 성분은 #30 메쉬 스크린(약 430 μ 내지 약 655 μ)을 통과한다. Pluronic F-68(미국 캔사스주 레넥사에 소재하는 JRH 바이오사이언시즈 제조) 계면활성제는 #20 메쉬 스크린(약 457 μ 내지 약 1,041 μ)을 통과한다. Pluronic F-68 계면활성제 및 0.5 ㎏의 크로스카르멜로스 나트륨을 16 쿼트 트윈 셸 텀블 블렌더에 넣고, 약 5 분간 혼합하였다. 미정질 셀룰로스를 첨가한 3 ft³ 트윈 셸 텀블 블렌더에 옮기고, 약 5 분간 혼합하였다. 화합물을 첨가하고, 추가의 25 분간 혼합하였다. 이러한 예비혼합물을 롤러 콤팩터의 배출에 연결된 해머 밀을 갖는 롤러 콤팩터에 통과시키고, 텀블 블렌더로 다시 이동한다. 잔류 크로스카르멜로스 나트륨 및 스테아르산마그네슘을 텀블 블렌더에 가하고, 약 3 분간 혼합하였다. 최종 혼합물을 정제 1 개당 250 ㎎으로 회전 타정기상에서 타정하였다(200,000 정제 회분 크기).

실시예: 점막 조성물

고전단 혼합기가 장착된 밀폐 스테인레스 스틸 용기에서 이사토리빈 및 12.6 ㎏ 부분의 트리클로로모노플루오로메탄을 혼합하여 농축물을 생성하였다. 혼합을 약 20 분간 실시하였다. 그후, 21℃∼27℃로의 온도 조절 및 2.8 내지 4.0 bar로의 압력 조절되는 벌크 생성물 탱크 내에서 나머지 추진제와 상기 농축물을 혼합하여 밀폐된 용기내에서 벌크 현탁액을 생성하였다. 계측 밸브를 갖는 17 ㎖의 에어로졸 용기는 본 발명의 조성물의 100 회 흡입을 제공하도록 설계되었다. 각각의 용기에 하기와 같이 제공한다:

val-이사토리빈	0.0120 g
트리클로로모노플루오로메탄	1.6960 g
디클로로디플루오로메탄	3.7028 g
디클로로테트라플루오로에탄	1.5766 g
총	7.0000 g

실시예: 정맥내 조성물

적절한 액체 매질, 예컨대 주사용수(WFI) 또는 5% 덱스트로스 용액으로 본 발명의 화합물을 재구성하여 정맥내 제제를 생성하였다. 소정 농도의 정맥내 제제는 적량의 본 발명의 화합물을 적절한 부피의 액체 매질로 재구성하여 얻을 수 있다. 소정의 농도의 정맥내 제제는 정맥내 약학적 제제를 필요로 하는 환자, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 사람에게 본 발명의 치료 유효량의 화합물을 제공하고, 상기 환자에게서 본 발명의 화합물의 치료 유효량을 유지한다. 치료 유효량의 투여량은 정맥내 제제를 환자에게 전달하는 속도 및 정맥내 제제의 농도에 따라 달라진다. 예를 들면, 조성물을 포함하는 하나의 바이알(예, 바이알당 본 발명의 화합물 50 ㎎)은 5% 덱스트로스 용액 (바이알당 14 ㎖의 5% 덱스트로스 용액)으로 재구성하여 총 25 ㎖의 용액을 얻는다. 재구성된 용액을 주입 백중의 덱스트로스 용액에 혼입하고, 50 ㎖까지 충분량으로 하여 정맥내 주입 투여에 적절한 본 발명의 1 ㎎/㎖의 화합물을 포함하는 용액을 얻는다. 주입 백중의 액체 매질중에서 화합물의 바람직한 농도는 약 0.001 내지 약 3 ㎎/㎖, 바람직하게는 약 0.75 내지 약 1 ㎎/㎖이다.

상기의 설명은 예시 및 설명을 위한 것이며, 이는 본 발명 및 이의 바람직한 구체예를 예시하기 위한 것으로 이해하여야 한다. 당업자는 통상의 실험에 의하여 본 발명의 정신으로부터 벗어나지 않고도 명백한 변형예 및 수정예가 가능하다는 인지할 것이다. 그러므로, 본 발명은 상기의 설명에 의하여 한정되지 않으며, 그 대신 본 발명은 하기에 첨부한 청구의 범위 및 이의 균등물에 의하여 한정하고자 한다.

Claims (20)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 하기 화학식의 화합물들로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.

   
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. 

    로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
11. 

    의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
12. 약학적으로 허용되는 담체 및 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 의한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 바이러스 질환의 치료를 위한 약학적 조성물.
13. 제12항에 있어서, 상기 화합물이

    

    으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물인 약학적 조성물.
14. 제12항에 있어서, 상기 화합물이

    

    또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물인 약학적 조성물.
15. 삭제
16. 삭제
17. 삭제
18. 약학적으로 허용되는 담체 및 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염의 치료를 위한 약학적 조성물.
19. 제18항에 있어서, 상기 화합물이

    

    으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물인 약학적 조성물.
20. 제18항에 있어서, 상기 화합물이

    

    또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물인 약학적 조성물.

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