KR100842378B1 - Scaffolds increased specific gravity for cell culture and method for manufacturing thereof - Google Patents
Scaffolds increased specific gravity for cell culture and method for manufacturing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- KR100842378B1 KR100842378B1 KR1020070041058A KR20070041058A KR100842378B1 KR 100842378 B1 KR100842378 B1 KR 100842378B1 KR 1020070041058 A KR1020070041058 A KR 1020070041058A KR 20070041058 A KR20070041058 A KR 20070041058A KR 100842378 B1 KR100842378 B1 KR 100842378B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- support
- specific gravity
- cell culture
- scaffold
- cell
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/14—Scaffolds; Matrices
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/02—Inorganic materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/26—Mixtures of macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/28—Materials for coating prostheses
- A61L27/30—Inorganic materials
Abstract
Description
도 1은 인듐 옥사이드를 이용하여 제조된 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 SEM으로 확인한 것이다.1 is a SEM confirm the support for increased cell specific gravity prepared using indium oxide.
도 2는 티타늄 디옥사이드를 이용하여 제조된 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 SEM으로 확인한 것이다.Figure 2 is confirmed by SEM the cell culture scaffold increased specific gravity prepared using titanium dioxide.
발명의 분야Field of invention
본 발명은 비중이 증가된 세포 배양용 지지체 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 세포 배양에 사용되는 생체 적합성 고분자 지지체의 제조시 화학적으로 안정된 고비중의 무기화합물을 첨가하여 생체 적합성 고분자 지지체의 비중을 증가시킨 세포 배양용 지지체 및 그 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a cell culture support and a method for producing the same, and more particularly, to a biocompatible polymer by adding a chemically stable high specific gravity inorganic compound when preparing a biocompatible polymer support used for cell culture. The present invention relates to a cell culture support and a method of manufacturing the same, wherein the specific gravity of the support is increased.
배경기술Background
암세포를 제외한 대부분의 세포는 부착하여 성장하고, 이러한 세포의 증식을 증대시키기 위한 배양 용기 및 배양 소재에 대한 연구가 진행되고 있으며, 생체 적합성 지지체(scaffold) 입자를 적용하여 세포 부착 표면적을 증대시켜 배양하는 방법이 보편적으로 많이 사용되고 있는 추세이다. 그러나, 세포를 회수하기 위하여 지지체와 세포를 분리해야 하고, 가장 적절한 분리 방법인 원심분리를 통해 분리하는 경우 지지체와 세포 간의 비중 차이가 크게 나지 않아 분리 시간이 증대되며, 이로 인하여 세포의 손상이 일어나고, 지지체와 세포층의 구분이 명확하지 않아 세포가 유실될 가능성이 높다. Most of the cells except cancer cells are attached and grown, and researches on culture vessels and culture materials for increasing the proliferation of these cells have been carried out, and by applying biocompatible scaffold particles to increase cell adhesion surface area There is a trend that is widely used. However, in order to recover the cells, the support and the cells must be separated, and when the separation is performed through centrifugation, which is the most suitable separation method, the separation time increases because the difference in specific gravity between the support and the cells is not increased, which causes damage to the cells. As a result, the distinction between the scaffold and the cell layer is not clear and the cell is likely to be lost.
성체 줄기세포 분야에서 세포 배양에 관한 다양한 방법들이 소개되고 있으나, 여전히 배양의 효율을 증가시켜야 하는 문제점을 가지고 있다. 이를 해결하기 위한 시도로써 지지체의 미세화를 통한 세포 부착면의 극대화와 간헐적 상대운동으로 부착 확률을 증가시킨 미세 지지체를 이용한 3차원 배양법이 있다 (대한민국 특허출원 제2006-79725호). Various methods for cell culture have been introduced in the field of adult stem cells, but there is still a problem of increasing the efficiency of culture. In an attempt to solve this problem, there is a three-dimensional culture method using a micro support that maximizes the cell attachment surface through miniaturization of the support and increases the attachment probability by intermittent relative movement (Korean Patent Application No. 2006-79725).
예전에는 세포에 비해 비교적 큰 100㎛ 이상의 지지체를 이용한 배양법이 소개되었으나, 최근에는 10~100㎛ 사이의 지지체가 이용되고 있으므로 세포 분리를 위한 필터가 미세해져야 한다. 그러나, 필터의 크기가 작아질수록 시간 소비와 세포 유실의 가능성이 높아지므로 미세 필터 방식보다는 원심분리를 이용하는 것이 현실적이다. 그러나, 배양에 주로 사용되는 고분자 지지체의 비중과 세포의 비중이 크게 차이 나지 않아, 최종적으로 트립신 처리 후 세포를 분리하는 과정에서 원심 분리 시간이 길어지고, 확실한 경계층을 찾기가 어려워서 세포가 유실되는 문제점이 있다. In the past, a culture method using a support having a relatively larger size than 100 μm has been introduced. However, since a support between 10 μm and 100 μm is used in recent years, the filter for cell separation should be finer. However, as the size of the filter decreases, the time consumption and the possibility of cell loss increase, so it is realistic to use centrifugation rather than the fine filter method. However, the specific gravity of the polymer support mainly used in the culture and the specific gravity of the cells are not significantly different, so the centrifugation time is long in the process of finally separating the cells after trypsin treatment, and the cells are lost due to difficulty in finding a reliable boundary layer. There is this.
세포를 주로 다루는 생명공학 영역에서 원심분리는 가장 사용 빈도가 높은 과정 중의 하나이다. 그러나, 세포의 파괴를 막기 위한 원심력과 시간(약 100G(분리능 RCF(relative centrifugal force)와 비례하는 수치)/10분)에 제한이 있어 분리율에는 한계가 있다. 이때, 비중의 차이가 크게 날수록 비교적 낮은 RCF에서도 쉽게 분리할 수 있다. 특히, 줄기세포, B-임파구와 같은 유핵 세포의 분리시 명확한 경계층을 찾기 위한 수단으로서 Percoll, Ficoll, Hyperfaque 등과 같은 비중액을 사용하면 세포층과 그 상층의 경계를 쉽게 찾을 수 있으므로, 원심분리시 빈번하게 사용되고 있다. 상기 비중액을 사용하여 세포 배양용 지지체를 제조하는 것은 경계층을 쉽게 얻기 위한 것으로서, 원심분리의 용이성을 증가시킨 것이라고 할 수 있다. Centrifugation is one of the most frequently used processes in the biotechnology sector, which primarily deals with cells. However, there is a limit to the centrifugal force and time (about 100 G (number proportional to the relative centrifugal force) / 10 minutes) to prevent cell destruction, and thus the separation rate is limited. At this time, the greater the difference in specific gravity, the more easily it can be separated even in a relatively low RCF. In particular, using specific gravity solutions such as Percoll, Ficoll, Hyperfaque, etc. as a means to find a clear boundary layer when separating nucleated cells such as stem cells and B-lymphocytes, the boundary between the cell layer and its upper layer can be easily found. Is being used. The preparation of the cell culture support using the specific gravity solution is for easily obtaining a boundary layer, which can be said to increase the ease of centrifugation.
세포 배양에 사용되는 지지체는 세포를 안전하고 효율적으로 배양하기 위해서 세포의 특성과 목적에 따라 극소수의 물질로 제한되어 사용되고 있고, 이들은 보통 천연 또는 합성 고분자 물질로서 비중이 세포와 비슷한 물질이 사용되고 있는데, 현재 임상적으로 허가되어 사용되는 생물 분해성(biodegradable) 또는 생물 친화성(biocompatible) 소재는 폴리유산(poly lactic acid, PLA), 폴리락타이드(poly L-lactic acid, PLLA), 폴리글리콜산(poly glycolic acid, PGA), 폴리 유산-코-글리콜산(poly lactic-co-glycolic acid, PLGA), 폴리카프로-락탐(polycapro-lactam, PCL) 등 소수의 다당류가 사용되고 있으며, 이들의 비중은 1.1~1.3 근처에서 결정 되고, 세포나 인체 유래 고형 물질의 비중도 1.2 이상이므로, 고분자 물질과 세포나 인체 유래 고형 물질의 비중이 유사하여 원심분리 과정이 반드시 필요하다는 문제점이 있다. In order to culture cells safely and efficiently, scaffolds used for cell culture are limited to very few materials depending on the characteristics and purpose of the cells, and they are usually natural or synthetic polymer materials, and materials having a specific gravity similar to cells are used. Biodegradable or biocompatible materials currently clinically licensed and used include polylactic acid (PLA), polyl-lactic acid (PLLA), and polyglycolic acid. A few polysaccharides such as glycolic acid (PGA), poly lactic-co-glycolic acid (PLGA), polycapro-lactam (PCL) are used, and their specific gravity is 1.1 to It is determined around 1.3, and the specific gravity of the cell or human-derived solid material is 1.2 or more, so the specific gravity of the polymer and the cell or human-derived solid material is similar, so the centrifugation process is necessary. That there is a problem.
비중의 경계가 명확하지 않은 경우, 보석, 종자 구분 등과 같이 원하는 경계의 비중액을 사용하는 경우가 흔하지만, 세포를 손상시키지 않고 사용하기에는 제한이 많다. 대부분 사용하는 비중액은 보통 비중 1.2 이하이므로, 비중이 1.2 이상인 유핵세포와 지지체의 경계를 구분하기 위해 사용되는 비중액은 구하기 힘든 실정이다. 특히, 인체에 세포치료제로서 주입되는 경우, 더욱 검증이 필요하고 규제의 대상이 되기 쉬워 사용이 쉽지 않다. When the boundary of specific gravity is not clear, the specific gravity of the desired boundary is often used, such as jewelry and seed separation, but there are many limitations in using it without damaging the cells. Since most used specific gravity is usually 1.2 or less, specific gravity is difficult to find the specific gravity used to distinguish the boundary of nucleated cells and the support with a specific gravity of 1.2 or more. In particular, when injected into the human body as a cell therapy, it is not easy to use because it needs more verification and is subject to regulation.
따라서, 지지체 자체의 비중이 증가되면 원심분리상의 문제가 해결되므로, 고분자 물질을 기본 물질로 하고 비중을 1.3 이상으로 증가시킨다면 원심분리에 걸리는 시간과 경계층 구분에 어려움이 없을 것이다. Therefore, if the specific gravity of the support itself is increased, the problem of centrifugation is solved. Therefore, if the polymer material is used as the base material and the specific gravity is increased to 1.3 or more, it will not be difficult to distinguish the time between centrifugation and the boundary layer.
이에, 본 발명자들은 분리된 세포의 회수가 용이한 세포 배양용 지지체를 개발하고자 예의 노력한 결과, 세포 배양용 지지체에 고비중의 무기화합물 성분을 첨가하여 기존의 세포 배양용 지지체에 비하여 비중을 증가시킨 경우, 원심분리만으로 세포를 분리할 수 있고, 세포의 손상을 최소화할 수 있다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, the present inventors have made efforts to develop a cell culture scaffold that is easy to recover the separated cells, and as a result, by adding a high specific gravity inorganic compound component to the cell culture scaffold, the specific gravity was increased compared to the conventional cell culture scaffold. In this case, it was confirmed that the cells can be separated only by centrifugation, and the damage of the cells can be minimized.
본 발명의 주된 목적은 기존의 세포 배양용 지지체에 비하여 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 제조하는 방법을 제공하는데 있다. It is a main object of the present invention to provide a method for producing a cell culture support having an increased specific gravity compared to a conventional cell culture support.
본 발명의 다른 목적은 생체 적합성 고분자 및 무기화합물로 구성된 세포 배양용 지지체 및 상기 세포 배양용 지지체를 이용하는 세포의 배양방법을 제공하는데 있다. Another object of the present invention is to provide a cell culture support composed of a biocompatible polymer and an inorganic compound and a cell culture method using the cell culture support.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 생체 적합성 고분자에 무기화합물을 혼합하는 단계; (b) 상기 (a) 혼합물에 추가로 생체 적합성 고분자를 혼합한 후, 세척·건조하여 지지체를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 지지체에 비중액을 넣어 비중액에 비해 비중이 높은 지지체를 밀도구배법으로 회수하는 단계를 포함하는 비중을 증가시킨 세포 배양용 지지체의 제조방법을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention comprises the steps of (a) mixing an inorganic compound with the biocompatible polymer; (b) mixing the biocompatible polymer further into the mixture (a), followed by washing and drying to prepare a support; And (c) it provides a method for producing a cell culture scaffold to increase the specific gravity comprising the step of putting the specific gravity solution in the support to recover the support having a higher specific gravity than the specific gravity solution by the density gradient method.
본 발명은 또한, (a) 둘 이상의 생체 적합성 고분자 물질을 혼합하는 단계; (b) 상기 (a) 혼합물에 무기화합물을 혼합한 후, 세척·건조하여 지지체를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 지지체에 비중액을 넣어 비중액에 비해 비중이 높은 지지체를 밀도구배법으로 회수하는 단계를 포함하는 비중을 증가시킨 세포 배양용 지지체의 제조방법을 제공한다. The invention also comprises the steps of (a) mixing two or more biocompatible polymeric materials; (b) mixing the inorganic compound with the mixture (a), followed by washing and drying to prepare a support; And (c) it provides a method for producing a cell culture scaffold to increase the specific gravity comprising the step of putting the specific gravity solution in the support to recover the support having a higher specific gravity than the specific gravity solution by the density gradient method.
본 발명은 또한, (a) 둘 이상의 생체 적합성 고분자 물질을 혼합하는 단계; (b) 상기 (a) 혼합물을 세척·건조한 후, 무기화합물로 코팅하여 지지체를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 지지체에 비중액을 넣어 비중액에 비해 비중이 높은 지지체를 밀도구배법으로 회수하는 단계를 포함하는 비중을 증가시킨 세포 배양용 지지체의 제조방법을 제공한다. The invention also comprises the steps of (a) mixing two or more biocompatible polymeric materials; (b) washing and drying the mixture (a) and coating the inorganic compound to prepare a support; And (c) it provides a method for producing a cell culture scaffold to increase the specific gravity comprising the step of putting the specific gravity solution in the support to recover the support having a higher specific gravity than the specific gravity solution by the density gradient method.
본 발명은 또한, 상기 방법에 의하여 제조되고, 생체 적합성 고분자 및 비중 증가용 무기화합물을 함유하는 직경이 10~250㎛인 세포 배양용 지지체 및 상기 세포 배양용 지지체를 이용하는 것을 특징으로 하는 세포의 배양방법을 제공한다. The present invention also provides a cell culture support and a cell culture support characterized by using the cell culture support and the cell culture support prepared by the above method, containing a biocompatible polymer and an inorganic compound for increasing specific gravity. Provide a method.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 일 양태는 비중이 증가된 세포 배양용 지지체의 제조방법에 관한 것이다. One aspect of the invention relates to a method for producing a support for cell culture with increased specific gravity.
본 발명에 따른 세포 배양용 지지체의 제조방법에 대한 일 구현예는 (a) 생체 적합성 고분자에 무기화합물을 혼합하는 단계; (b) 상기 (a) 혼합물에 추가로 생체 적합성 고분자를 혼합한 후, 세척·건조하여 지지체를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 지지체에 비중액을 넣어 비중액에 비해 비중이 높은 지지체를 밀도구배법으로 회수하는 단계를 포함한다.One embodiment of the method for producing a cell culture support according to the present invention comprises the steps of: (a) mixing an inorganic compound with a biocompatible polymer; (b) mixing the biocompatible polymer further into the mixture (a), followed by washing and drying to prepare a support; And (c) recovering the support having a higher specific gravity than the specific gravity solution by putting a specific gravity solution on the support by a density gradient method.
본 발명에 따른 세포 배양용 지지체의 제조방법에 대한 다른 구현예는 (a) 둘 이상의 생체 적합성 고분자 물질을 혼합하는 단계; (b) 상기 (a) 혼합물에 무기화합물을 혼합한 후, 세척·건조하여 지지체를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 지지체에 비중액을 넣어 비중액에 비해 비중이 높은 지지체를 밀도구배법으로 회수하는 단계를 포함한다.Another embodiment of the method for producing a cell culture support according to the present invention comprises the steps of (a) mixing two or more biocompatible polymer materials; (b) mixing the inorganic compound with the mixture (a), followed by washing and drying to prepare a support; And (c) recovering the support having a higher specific gravity than the specific gravity solution by putting a specific gravity solution on the support by a density gradient method.
본 발명에 따른 세포 배양용 지지체의 제조방법에 대한 또 다른 구현예는 (a) 둘 이상의 생체 적합성 고분자 물질을 혼합하는 단계; (b) 상기 (a) 혼합물을 세척·건조한 후, 무기화합물로 코팅하여 지지체를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 지지체에 비중액을 넣어 비중액에 비해 비중이 높은 지지체를 밀도구배법으로 회수하는 단계를 포함한다.Another embodiment of the method for producing a cell culture support according to the present invention comprises the steps of (a) mixing two or more biocompatible polymer materials; (b) washing and drying the mixture (a) and coating the inorganic compound to prepare a support; And (c) recovering the support having a higher specific gravity than the specific gravity solution by putting a specific gravity solution on the support by a density gradient method.
본 발명에 있어서, 상기 생체 적합성 고분자는 폴리유산(poly lactic acid, PLA), 폴리락타이드(poly L-lactic acid, PLLA), 폴리글리콜산(poly glycolic acid, PGA), 폴리 유산-코-글리콜산(poly lactic-co-glycolic acid, PLGA), 폴리비닐 알코올(polyvinylalcohol, PVA), 콜라겐(collagen), 알지네이트(alginate), 키토산(chitosan), 불소 수지(teflon), 아가겔(agar gel) 및 폴리아크릴아마이드(polyacrylamide)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the biocompatible polymer is polylactic acid (PLA), polylactide (poly L-lactic acid, PLLA), polyglycolic acid (poly glycolic acid, PGA), polylactic acid-co-glycol Acid (poly lactic-co-glycolic acid (PLGA), polyvinyl alcohol (polyvinylalcohol, PVA), collagen, alginate, chitosan, fluorocarbon (teflon), agar gel and It may be characterized in that it is selected from the group consisting of polyacrylamide (polyacrylamide).
삭제delete
본 발명에 있어서, 상기 무기화합물은 수산화 인회석(hydroxyapatite, Ca10(PO4)6(OH)3), 티타늄 디옥사이드(titanium dioxide, TiO2), 티탄산바륨(barium titanate, BiTiO3), 지르콘(zircon, ZrSiO4), 지르코니아 디옥사이드(zirconia dioxide, ZrO2), 산화철, 산화아연(zinc oxide, ZnO), 실리콘 디옥사이드(silicon dioxide, SiO2), 인듐 옥사이드(indium oxide, In2O3) 및 산화주석(tin oxide, SnO2)으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the inorganic compound is hydroxyapatite (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 3 ), titanium dioxide (TiO 2 ), barium titanate (BiTiO 3 ), zircon (zircon , ZrSiO 4 ), zirconia dioxide (ZrO 2 ), iron oxide, zinc oxide (ZnO), silicon dioxide (SiO 2 ), indium oxide (In 2 O 3 ) and tin oxide It may be characterized in that it is selected from the group consisting of (tin oxide, SnO 2 ).
본 발명에 있어서, 상기 무기화합물은 빛에 반응하는 무기화합물인 것을 특징으로 할 수 있고, 상기 빛에 반응하는 화합물은 티타늄 디옥사이드, 산화아연 및 산화주석으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 빛에 반응하는 무기화합물을 이용하여 세포 배양용 지지체를 제조할 경우, 광량을 달리하여 세포 부착성을 조절할 수 있다. 즉, 티타늄 디옥사이드 등은 빛에 반응하기 때문에 상기 티타늄 디옥사이드 등의 빛에 반응하는 무기화합물을 이용하여 제조한 세포 배양용 지지체를 이용하여 세포를 배양할 경우, 광량의 조절에 의해 세포 부착성을 조절할 수 있다. In the present invention, the inorganic compound may be characterized in that the inorganic compound that reacts to light, the compound that reacts to light may be characterized in that selected from the group consisting of titanium dioxide, zinc oxide and tin oxide. . When preparing a cell culture support using the inorganic compound that reacts to the light, the cell adhesion may be controlled by varying the amount of light. That is, since titanium dioxide reacts to light, when culturing cells using a cell culture support prepared using an inorganic compound that reacts to light such as titanium dioxide, the cell adhesion is controlled by controlling the amount of light. Can be.
본 발명에서는 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 제조하기 위하여 생체 적합성 고분자인 폴리락타이드(poly L-lactide, PLLA)에 인듐 옥사이드(indium oxide, In2O3) 또는 티타늄 디옥사이드(titanium dioxide, TiO2)를 혼합하여 교반한 후, 폴리비닐 알코올(polyvinylalcohol, PVA)을 혼합하여 교반하여 세포 배양용 지지체를 제조하거나, 폴리비닐 알코올, 폴리락타이드 및 인듐 옥사이드 또는 티타늄 디옥사이드를 혼합하여 교반함으로써 세포 배양용 지지체를 제조하였다.In the present invention, in order to prepare a support for cell culture with increased specific gravity, indium oxide (poly L-lactide, PLLA) or indium oxide (poly Indium oxide, In 2 O 3 ) or titanium dioxide (titanium dioxide, TiO) 2 ) After mixing and stirring, polyvinyl alcohol (polyvinylalcohol, PVA) is mixed and stirred to prepare a cell culture support, or cell culture by mixing and stirring polyvinyl alcohol, polylactide and indium oxide or titanium dioxide A support was prepared.
또한, 폴리비닐 알코올 및 폴리락타이드를 혼합하여 제조한 지지체를 원심분리하여 세척하고 동결건조한 후, 인듐 옥사이드 또는 티타늄 디옥사이드를 혼합하여 열처리로 코팅하였다. 상기 코팅된 지지체를 원심분리로 세척한 후, 동결건조하는 과정을 반복하여 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 제조하였다. In addition, the support prepared by mixing polyvinyl alcohol and polylactide was washed by centrifugation and lyophilized, and then coated with heat treatment by mixing indium oxide or titanium dioxide. After washing the coated support by centrifugation, the freeze-drying process was repeated to prepare a support for cell culture with increased specific gravity.
상기 지지체를 비중액인 Percoll을 이용하여 Percoll의 비중보다 높은 지지체를 회수함으로써, 기존의 세포 배양용 지지체보다 비중이 증가된 지지체를 제조할 수 있었다. By recovering the support having a specific gravity higher than that of Percoll using the specific gravity solution, Percoll, a scaffold having an increased specific gravity than the conventional cell culture scaffold could be prepared.
본 발명에 따른 세포 배양용 지지체를 제조하는데 있어서, 세포 배양 안전성, 지지체 제조 기법상 위험요소(risk)와 예측하지 못하는 변수(unpredictable variance)를 최소화하기 위하여, 기본적으로 사용되는 고분자 물질은 생체 적합성 소재이고, 비중을 증가시키기 위하여 사용되는 무기화합물은 생물학적으로 안전한 물질임과 동시에 고분자 지지체에 큰 영향을 미치지 않도록 하기 위하여 그 크기가 10㎛ 이하인 것이 바람직하다. In preparing the cell culture scaffold according to the present invention, in order to minimize cell culture safety, risks and unpredictable variance in the scaffold preparation technique, the polymer material used basically is a biocompatible material. In order to increase the specific gravity, the inorganic compound is preferably a biologically safe material and its size is 10 μm or less in order not to significantly affect the polymer support.
각 세라믹마다 그 비중이 다르므로(티타늄 디옥사이드: 4; 티탄산바륨: 6.08; 지르콘: 2.1; 지르코니아 디옥사이드: 5.56~6.1; 산화아연: 5.4~5.7; 실리콘 디옥사이드: 2.2~2.6; 인듐 옥사이드: 7.19; 산화주석: 6.9~9.0), 세라믹의 종류를 달리하여 목적하는 비중을 가지는 지지체를 제조할 수 있다. 또한 비중액도 종류마다 그 비중이 다르므로(Ficoll: 1.077; Percoll: 1.13; Histopaque: 1.077), 사용하는 비중액에 따라 목적하는 비중을 가지는 지지체를 제조할 수 있다. The specific gravity of each ceramic is different (titanium dioxide: 4; barium titanate: 6.08; zircon: 2.1; zirconia dioxide: 5.56 to 6.1; zinc oxide: 5.4 to 5.7; silicon dioxide: 2.2 to 2.6; indium oxide: 7.19; oxidation Note: 6.9 ~ 9.0), by varying the type of ceramic can be prepared a support having a desired specific gravity. In addition, since the specific gravity of each type is different (Ficoll: 1.077; Percoll: 1.13; Histopaque: 1.077), a support having a specific specific gravity can be produced according to the specific gravity used.
상기 배양용 지지체의 직경이 250㎛ 이상인 경우에는 세포 분리시 세포와 지지체가 잘 분리되는 반면 세포 증식율이 낮고, 직경이 10㎛ 이하인 경우에는 세포와 지지체를 분리하기가 용이하지 않다. 따라서, 상기 세포 배양용 지지체는 10~250㎛의 직경을 가지는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 20~150㎛, 더욱 바람직하게는 약 100㎛의 직경을 가지는 것이 바람직하다. When the diameter of the culture support is 250㎛ or more, the cell and the support are separated well during cell separation, whereas the cell proliferation rate is low, and when the diameter is 10㎛ or less, it is not easy to separate the cell and the support. Therefore, the cell culture support preferably has a diameter of 10 to 250 μm, more preferably 20 to 150 μm, still more preferably about 100 μm.
본 발명은, 다른 관점에서, 상기 방법에 의하여 제조되고, 생체 적합성 고분자 및 비중 증가용 무기화합물을 함유하는 직경이 10~250㎛인 세포 배양용 지지체 및 상기 세포 배양용 지지체를 이용하는 것을 특징으로 하는 세포의 배양방법에 관한 것이다. In another aspect, the present invention is characterized by using a cell culture support and a cell culture support prepared by the above method, the cell culture support having a diameter of 10 ~ 250㎛ containing a biocompatible polymer and an inorganic compound for increasing specific gravity. It relates to a method of culturing cells.
본 발명에 있어서, 상기 세포로는 지방세포(adipocyte) 만을 예시하였으나, 섬유아세포(fibroblast), 성체줄기세포, 지방전구세포(preadipocyte), 자궁경구암세포(HeLa) 등을 예시할 수 있으나, 지지체에 부착 배양이 가능한 세포라면 제한없이 사용할 수 있다.In the present invention, only the adipocytes (adipocytes) are illustrated, but fibroblasts, adult stem cells, preadipocytes, cervical cancer cells (HeLa), etc. may be exemplified. Any cell capable of adhesion culture can be used without limitation.
본 발명에 따르면, 상기 세포 배양용 지지체에서 세포를 배양한 후 원심분리한 경우, 세포를 지지체로부터 별도의 처리 없이 쉽게 분리할 수 있었다.According to the present invention, when the cells were cultured in the cell culture support and then centrifuged, the cells could be easily separated from the support without additional treatment.
이하, 본 발명을 구체적인 실시예에 의해 보다 더 상세히 설명하고자 한다. 하지만, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 사상과 범위 내에서 여러 가지 변형 또는 수정할 수 있음은 이 분야에서 당업자에게 명백한 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to specific examples. However, the present invention is not limited to the following examples, and it will be apparent to those skilled in the art that various changes or modifications can be made within the spirit and scope of the present invention.
특히, 하기 실시예에서는 생체 적합성 고분자 물질로서 폴리락타이드 (poly L-lactide, PLLA) 만을 예시하였으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 무기화합물로 인듐 옥사이드 또는 티타늄 디옥사이드를 예시하였으나, 칼슘(calcium), 인(phosphorus), 티타늄(titanium), 지르코늄(zirconium, Zr), 철(Fe), 아연(zinc), 실리콘(silicon), 인듐(indium, In) 및 주석(tin) 등과 같은 금속 또는 세라믹 등 지지체의 비중을 증가시킬 수 있는 물질이라면 제한 없이 사용할 수 있다.In particular, in the following examples, only polylactide (poly L-lactide, PLLA) is illustrated as a biocompatible polymer material, but is not limited thereto. In addition, indium oxide or titanium dioxide is illustrated as an inorganic compound, but calcium (calcium), phosphorus (phosphorus), titanium (titanium), zirconium (Zr), iron (Fe), zinc (zinc) and silicon (silicon) If the material can increase the specific gravity of the support, such as metal or ceramic, such as indium (Indium, In) and tin (tin) can be used without limitation.
하기 실시예에서는 사용가능한 세포로서 지방세포(adipocyte) 만을 예시하였으나, 섬유아세포(fibroblast), 성체줄기세포, 지방전구세포(preadipocyte), 자궁경구암세포(HeLa) 등 부착 가능한 세포라면 제한없이 사용할 수 있다.In the following Examples, only the adipocytes (adipocytes) are exemplified as the usable cells, but any adhering cells such as fibroblasts, adult stem cells, preadipocytes, cervical cancer cells (HeLa) can be used without limitation. .
또한, 하기 실시예에서는 빛에 반응하는 무기화합물로서 티타늄 디옥사이드만을 예시하였으나, 산화아연, 산화주석 등 빛에 반응하는 화합물이라면 제한 없이 사용할 수 있다.In addition, in the following examples, only titanium dioxide is illustrated as an inorganic compound that reacts to light, but any compound that reacts to light such as zinc oxide and tin oxide may be used without limitation.
실시예Example 1: 세포 배양용 지지체의 제조 1: Preparation of support for cell culture
1-1: 세포 배양용 지지체의 제조1-1: Preparation of Cell Culture Support
비중이 큰 세포 배양용 지지체를 제조하기 위하여, 폴리락타이드(poly L-lactide, PLLA)를 디클로로메탄(dichloromethane)에 녹인 후, 인듐 옥사이드(indium oxide, In2O3) 또는 티타늄 디옥사이드(titanium dioxide, TiO2)를 혼합하여 6,000rpm에서 3분 동안 교반한 다음, 증류수에 녹인 1% 폴리비닐 알코올(polyvinylalcohol, PVA)을 혼합하여 24시간 교반하여 지지체를 제조하였다. 상기 지지체를 PBS로 3,000rpm에서 5분간 5회 원심분리하여 세척하고, 2일간 동결건조하였다.To prepare a support for cell culture with high specific gravity, polylactide (poly L-lactide, PLLA) is dissolved in dichloromethane, and then indium oxide (In 2 O 3 ) or titanium dioxide (titanium dioxide) , TiO 2 ) was mixed and stirred at 6,000 rpm for 3 minutes, and then 1% polyvinyl alcohol (polyvinylalcohol, PVA) dissolved in distilled water was mixed and stirred for 24 hours to prepare a support. The support was washed with PBS by centrifugation 5 times at 3,000 rpm for 5 minutes and lyophilized for 2 days.
상기 지지체를 Percoll을 이용한 불연속밀도구배법으로 Percoll의 비중인 1~1.3보다 비중이 높은 지지체를 회수함으로써 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 수득하였다. 상기 수득된 세포 배양용 지지체를 SEM으로 확인한 결과, 그 입자의 크기가 20~150㎛인 것을 확인할 수 있었다 (도 1 및 도 2).The support for cell culture was obtained by increasing the specific gravity by recovering the support having a specific gravity higher than that of the specific gravity of Percoll by the discontinuous density gradient method using the Percoll. As a result of confirming the obtained cell culture scaffold by SEM, it was confirmed that the particle size was 20 ~ 150㎛ (Fig. 1 and Fig. 2).
1-2: 세포 배양용 지지체의 제조1-2: Preparation of support for cell culture
비중이 큰 세포 배양용 지지체를 제조하기 위하여, 증류수에 녹인 1% 폴리비닐 알코올(polyvinylalcohol, PVA), 디클로로메탄(dichloromethane)에 녹인 폴리락타이드(poly L-lactide, PLLA) 및 인듐 옥사이드(indium oxide, In2O3) 또는 티타늄 디옥사이드(titanium dioxide, TiO2)를 혼합하여 24시간 동안 교반하여 지지체를 제조하였다. 상기 지지체를 PBS로 3,000rpm에서 5분간 5회 원심분리하여 세척하고, 2 일간 동결건조하였다.In order to prepare a support for cell culture with a high specific gravity, 1% polyvinylalcohol (PVA) dissolved in distilled water, poly L-lactide (PLLA) and indium oxide (indium oxide) dissolved in dichloromethane , In 2 O 3 ) or titanium dioxide (TiO 2 ) was mixed and stirred for 24 hours to prepare a support. The support was washed with PBS by centrifugation 5 times at 3,000 rpm for 5 minutes and lyophilized for 2 days.
상기 지지체를 Percoll을 이용한 불연속밀도구배법으로 Percoll의 비중인 1~1.3보다 비중이 높은 지지체를 회수함으로써 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 수득하였다. 상기 수득된 세포 배양용 지지체를 SEM으로 확인한 결과, 그 입자의 크기가 20~150㎛인 것을 확인할 수 있었다.The support for cell culture was obtained by increasing the specific gravity by recovering the support having a specific gravity higher than that of the specific gravity of Percoll by the discontinuous density gradient method using the Percoll. As a result of confirming the obtained cell culture scaffold by SEM, the size of the particles was confirmed to be 20 ~ 150㎛.
1-3: 세포 배양용 지지체의 제조1-3: Preparation of support for cell culture
증류수에 녹인 1% 폴리비닐 알코올(polyvinylalcohol, PVA)과 디클로로메탄(dichloromethane)에 녹인 폴리락타이드(poly L-lactide, PLLA)를 24시간 동안 혼합하여 지지체를 제조하였다. 상기 지지체를 PBS로 3,000rpm에서 5분간 5회 원심분리하여 세척하고, 2일간 동결건조한 후, 인듐 옥사이드(indium oxide, In2O3) 또는 티타늄 디옥사이드(titanium dioxide, TiO2)를 혼합한 다음, 열처리하여 코팅하였다. 상기 코팅된 지지체를 PBS로 3,000rpm에서 5분간 5회 원심분리하여 세척한 후, 2일간 동결건조하는 과정을 반복하였다.A support was prepared by mixing 1% polyvinylalcohol (PVA) dissolved in distilled water and polylactide (poly L-lactide, PLLA) dissolved in dichloromethane for 24 hours. The support was washed with PBS by centrifugation for 5 minutes at 3,000 rpm for 5 minutes, lyophilized for 2 days, and then mixed with indium oxide (In 2 O 3 ) or titanium dioxide (TiO 2 ), It was coated by heat treatment. The coated support was washed with PBS by centrifugation 5 times at 3,000 rpm for 5 minutes and then lyophilized for 2 days.
상기 지지체를 Percoll을 이용한 불연속밀도구배법으로 Percoll의 비중인 1~1.3보다 비중이 높은 지지체를 회수함으로써 비중이 증가된 세포 배양용 지지체를 수득하였다. 상기 수득된 세포 배양용 지지체를 SEM으로 확인한 결과, 그 입자의 크기가 20~150㎛인 것을 확인할 수 있었다.The support for cell culture was obtained by increasing the specific gravity by recovering the support having a specific gravity higher than that of the specific gravity of Percoll by the discontinuous density gradient method using the Percoll. As a result of confirming the obtained cell culture scaffold by SEM, the size of the particles was confirmed to be 20 ~ 150㎛.
실시예Example 2: 세포 분리 효율 2: cell separation efficiency
서울대학교 유방암센터에서 분양받은 여성의 유방조직에서 지방조직을 분리하여 PBS로 세척한 다음, 조직을 잘게 자른 후 collagenase type 1(1mg/ml)을 첨가하여 digestion한 다음, 원심분리 하였다. 상층액은 suction하고 바닥에 남은 펠렛으로부터 지방세포를 수득하였다.Adipose tissue was isolated from breast tissue of women who had been treated at Seoul National University Breast Cancer Center and washed with PBS. The tissue was then chopped and digested with collagenase type 1 (1mg / ml), followed by centrifugation. The supernatant was suctioned and fat cells were obtained from the pellet remaining at the bottom.
상기 수득된 세포에 10% 우태혈청(fetal bovine serum, FBS) 및 1% 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS)가 포함된 DMEM(4.00mM L-글루타민(L-Glutamine), 4500mg/L 글루코오스(Glucose), sodium pyruvate, 증류수) 배지와 상기에서 제조된 세포 배양용 지지체를 주입하고, 3~4회 흔들어 세포 배양용 지지체에 세포를 부착시킨 후, 배양하였다. 1차 세포의 배양이 완료되면 배지와 상기에서 제조된 세포 배양용 지지체를 추가로 투입하는 과정을 반복하였다.DMEM (4.00 mM L-Glutamine), 4500 mg / L glucose (Glucose) containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% lipopolysaccharide (LPS) in the obtained cells ), Sodium pyruvate, distilled water) medium and the support for cell culture prepared above were injected, and shaken 3 to 4 times to attach the cells to the support for cell culture, followed by culturing. When the culture of the primary cells is completed, the process of additionally adding the medium and the support for cell culture prepared above was repeated.
상기 세포 배양용 지지체에 부착된 세포를 원심분리하여 지지체로부터 세포가 분리되는 정도를 측정하였다. 그 결과, 원심분리만으로 세포가 지지체로부터 쉽게 분리되는 것을 확인할 수 있었다.The degree of separation of cells from the support was measured by centrifuging the cells attached to the support for cell culture. As a result, it was confirmed that the cells were easily separated from the support only by centrifugation.
실시예Example 3: 세포 3: cell 부착성Adhesion 조절 control
상기에서 제조한 티타늄 디옥사이드를 이용한 세포 배양용 지지체에 지방세포(adipocyte)를 상기 실시예 2의 방법으로 부착시켜 배양한 후, 자외선을 조사하여 지지체로부터 세포를 분리하였다. 그 결과, 자외선을 조사하지 않은 대조군에 비하여 세포가 쉽게 분리되는 것을 확인할 수 있었다. 이는 세포 부착성이 광량에 따라 조절된다는 것을 의미한다.After adhering the adipocytes (adipocytes) to the cell culture scaffold using the titanium dioxide prepared above by the method of Example 2, the cells were separated from the scaffold by irradiation with ultraviolet rays. As a result, it was confirmed that the cells were easily separated as compared to the control group not irradiated with ultraviolet rays. This means that cell adhesion is controlled by the amount of light.
이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명은 비중이 증가된 세포 배양용 지지체 및 그 제조방법을 제공하는 효과가 있다. 본 발명에 따른 세포 배양용 지지체를 사용할 경우, 세포의 분리시간을 줄여 세포의 손상을 최소화할 수 있고, 경계층을 명확히 하여 세포의 회수가 용이하다.As described in detail above, the present invention has the effect of providing a support for cell culture with increased specific gravity and a method for producing the same. When using the cell culture support according to the present invention, it is possible to minimize the damage of the cells by reducing the separation time of the cells, it is easy to recover the cells by clearing the boundary layer.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다. The specific parts of the present invention have been described in detail above, and it is apparent to those skilled in the art that such specific descriptions are merely preferred embodiments, and thus the scope of the present invention is not limited thereto. something to do. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (20)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070041058A KR100842378B1 (en) | 2007-04-27 | 2007-04-27 | Scaffolds increased specific gravity for cell culture and method for manufacturing thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070041058A KR100842378B1 (en) | 2007-04-27 | 2007-04-27 | Scaffolds increased specific gravity for cell culture and method for manufacturing thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR100842378B1 true KR100842378B1 (en) | 2008-07-01 |
Family
ID=39823295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020070041058A KR100842378B1 (en) | 2007-04-27 | 2007-04-27 | Scaffolds increased specific gravity for cell culture and method for manufacturing thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100842378B1 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101626087B1 (en) * | 2011-12-23 | 2016-05-31 | 메디칸 주식회사 | Method for cultivating, isolating and storing biological cell from biological sample |
| WO2017176055A1 (en) * | 2016-04-06 | 2017-10-12 | 경희대학교산학협력단 | Micro-beads for cell culture and cell culture monitoring method using same |
| KR20170114993A (en) | 2016-04-06 | 2017-10-16 | 경희대학교 산학협력단 | Micro-bead for cell culture and method for cell culture monitoring using the same |
| WO2019031641A1 (en) * | 2017-08-07 | 2019-02-14 | 이희영 | Method and apparatus for isolating stromal cells from biological tissue without using enzyme |
| CN112046112A (en) * | 2020-08-28 | 2020-12-08 | 南方医科大学 | Intelligent material with electrostriction as well as preparation method and application thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63196280A (en) | 1987-02-12 | 1988-08-15 | Sumitomo Electric Ind Ltd | Substrate for cell culture |
| JPS63196281A (en) * | 1987-02-12 | 1988-08-15 | Sumitomo Electric Ind Ltd | Substrate for cell culture |
| JP2004033136A (en) * | 2002-07-05 | 2004-02-05 | Fuji Photo Film Co Ltd | Carrier for culturing cell |
| JP2004254608A (en) | 2003-02-26 | 2004-09-16 | Fuji Photo Film Co Ltd | Carrier for culturing cell |
-
2007
- 2007-04-27 KR KR1020070041058A patent/KR100842378B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63196280A (en) | 1987-02-12 | 1988-08-15 | Sumitomo Electric Ind Ltd | Substrate for cell culture |
| JPS63196281A (en) * | 1987-02-12 | 1988-08-15 | Sumitomo Electric Ind Ltd | Substrate for cell culture |
| JP2004033136A (en) * | 2002-07-05 | 2004-02-05 | Fuji Photo Film Co Ltd | Carrier for culturing cell |
| JP2004254608A (en) | 2003-02-26 | 2004-09-16 | Fuji Photo Film Co Ltd | Carrier for culturing cell |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101626087B1 (en) * | 2011-12-23 | 2016-05-31 | 메디칸 주식회사 | Method for cultivating, isolating and storing biological cell from biological sample |
| WO2017176055A1 (en) * | 2016-04-06 | 2017-10-12 | 경희대학교산학협력단 | Micro-beads for cell culture and cell culture monitoring method using same |
| KR20170114993A (en) | 2016-04-06 | 2017-10-16 | 경희대학교 산학협력단 | Micro-bead for cell culture and method for cell culture monitoring using the same |
| US11667888B2 (en) | 2016-04-06 | 2023-06-06 | University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University | Microbeads for cell culture and method of monitoring cell culture using the same |
| WO2019031641A1 (en) * | 2017-08-07 | 2019-02-14 | 이희영 | Method and apparatus for isolating stromal cells from biological tissue without using enzyme |
| CN112046112A (en) * | 2020-08-28 | 2020-12-08 | 南方医科大学 | Intelligent material with electrostriction as well as preparation method and application thereof |
| CN112046112B (en) * | 2020-08-28 | 2021-08-24 | 南方医科大学 | Intelligent material with electrostriction as well as preparation method and application thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Antmen et al. | The role of biomaterials and scaffolds in immune responses in regenerative medicine: macrophage phenotype modulation by biomaterial properties and scaffold architectures | |
| KR100842378B1 (en) | Scaffolds increased specific gravity for cell culture and method for manufacturing thereof | |
| Alaribe et al. | Scaffolds from biomaterials: advantages and limitations in bone and tissue engineering | |
| Cadafalch Gazquez et al. | Flexible yttrium-stabilized zirconia nanofibers offer bioactive cues for osteogenic differentiation of human mesenchymal stromal cells | |
| Le et al. | Engineering a biocompatible scaffold with either micrometre or nanometre scale surface topography for promoting protein adsorption and cellular response | |
| CA2795243C (en) | Templated islet cells and small islet cell clusters for diabetes treatment | |
| EP2682135B1 (en) | Non-woven fabric containing bone prosthetic material | |
| JP5280432B2 (en) | Cell culture support having increased specific gravity and method for producing the same | |
| US20230380976A1 (en) | Surface Topographies for Altering the Physiology of Living Cells | |
| Kuznetsova et al. | Scaffold-and cell system-based bone grafts in tissue engineering | |
| CN106730033B (en) | Double-effect drug-loaded nanoparticle microsphere with antibacterial and growth promoting functions and preparation method and application thereof | |
| US11667888B2 (en) | Microbeads for cell culture and method of monitoring cell culture using the same | |
| Sanaei-Rad et al. | Enhancement of stem cell differentiation to osteogenic lineage on hydroxyapatite-coated hybrid PLGA/gelatin nanofiber scaffolds | |
| Cai et al. | In vitro evaluation of a bone morphogenetic protein‑2 nanometer hydroxyapatite collagen scaffold for bone regeneration | |
| CN111214698A (en) | Composite bone repair material and preparation method thereof | |
| Kong et al. | Dual delivery of encapsulated BM‐MSCs and BMP‐2 improves osteogenic differentiation and new bone formation | |
| Rodriguez-Evora et al. | Smurf1 knocked-down, mesenchymal stem cells and BMP-2 in an electrospun system for bone regeneration | |
| SE537637C2 (en) | Titanium dioxide scaffold, method of producing this scaffolding medical implant including it | |
| CN109749119A (en) | Polylactic acid-glycolic base apatite micron/nano multilevel structure composite microsphere material and application | |
| US20230257697A1 (en) | Microbeads for cell culture and method of monitoring cell culture using the same | |
| CN109069691A (en) | Dental prosthese and its component | |
| Chen et al. | Decoding the “Fingerprint” of Implant Materials: Insights into the Foreign Body Reaction | |
| Okada et al. | Solid-state inorganic and metallic adhesives for soft biological tissues | |
| EP3498300A1 (en) | Templated islet cells and small islet cell clusters for diabetes treatment | |
| Leng et al. | A comparative study of proliferation and osteogenic differentiation of rat adipose-derived stem cells in β-tricalcium phosphate (β-TCP), forsterite (Mg 2 SiO 4) and clinoenstatite (MgSiO 3) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| N231 | Notification of change of applicant | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130515 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140619 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150623 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160526 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180614 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190612 Year of fee payment: 12 |