KR100769361B1 - 누에로부터 분리한 히포쎄티칼 프로틴32 유전자의프로모터와 전체 게놈 유전자 서열 - Google Patents

Abstract

본 발명은 누에로부터 분리한 히포쎄티칼 프로틴32(hypothetical protein32) 유전자의 프로모터와 전체 게놈 유전자 서열에 관한 것이다.

누에, 프로모터, 형질전환운반체, 액틴3, 히포쎄티칼 프로틴32, piggyBac

Description

누에로부터 분리한 히포쎄티칼 프로틴32 유전자의 프로모터와 전체 게놈 유전자 서열{Characterization of the promoter and sequencer of hypothetical protein32 in the silkworm Bombyx mori}

도 1은 누에의 cDNA 유전자은행으로부터 무작위로 950개의 cDNA을 선발하여 누에의 엑틴3 cDNA를 대조로 하여 닷 블랏 혼성화 실험 (dot blot hybridization)을 한 결과이다.

도 2는 닷 블랏 혼성화 실험을 한 결과에서 선발한 액티3 대비 고발현 9종의 클론에 대하여 RT-PCR를 수행한 결과이다.

도 3은 도 2에서 액틴3 대비 가장 높은 전사체 발현을 나타낸 2번 클론 (high basic serine protease)과 4번 클론 (히포쎄티칼 프로틴 32)에 대한 조직별 및 발육 시기별로 전사체 발현 분석한 결과이다(도 3A는 누에 조직별 RT-PCR를 수행한 결과이고, 도 3B 및 3C는 각각 누에 5령 발육시기별 RT-PCR과 노던 블랏 분석 (Northern blot)을 수행한 결과이며, 도 3D는 산란 후 초기배 발생 단계별로 RT-PCR를 수행한 결과이다).

도 4는 히포쎄티칼 프로틴 32 클론의 프로모터를 포함한 전체 게놈 유전자 및 cDNA에 대한 염기서열을 분석한 결과이다(도 4A는 각각 전체 게놈 유전자에 대한 염기서열이고, 도 4B는 히포쎄티칼 프로틴 32 클론의 프로모터를 포함한 전체 게놈 유전자에 대하여 구조분석을 한 결과이다).

도 5A는 표지유전자로 반딧불이 (firefly)의 루시퍼레이즈 유전자를 포함하고 있는 프로모터가 없는 운반체인 pGL3-Basic 운반체 (Promega, USA)의 제한효소 위치인 XhoⅠ과 BglⅡ 사이에 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 개시코돈 (ATG) 바로 앞 위치 (+220)에서부터 각각 -1,821, -1,300, -778, -527 및 -303 염기 위치까지의 프로모터 영역을 도입하여 제작한 각각의 deletion set construct에 대한 프로모터 활성검정을 위한 pGL3-Hp32-Fluc의 운반체들이다. 도 5B은 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터에 대하여 제작한 5종의 deletion construct인 pGL3-Hp32-D1 (-1,821~+220), pGL3-Hp32-D2 (-1,300~+220), pGL3-Hp32-D3 (-778~+220), pGL3-Hp32-D4 (-527~+220) 및 pGL3-Hp32-D5 (-303~+220)의 표준화 (normalization)를 위한 대조 운반체인 pRL-A3-Rluc를 제작한 것이다. 대조 운반체의 제작은 pRL-SV40 운반체 (Promega, USA)의 SV40 프로모터를 제한효소 KpnⅠ과 HindⅢ로 처리하여 제거한 다음, 그 위치에 누에의 액틴3 프로모터를 도입하였다. 이 운반체 내에는 표지 유전자인 Renilla 루시퍼레이즈 유전자가 포함되어 있다.

도 6은 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터의 deletion construct 5종에 대한 루시퍼레이즈 활성을 분석한 결과이다.

도 7은 누에의 액틴3 프로모터 대비 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터에 대한 루시퍼레이즈 활성을 검정한 결과이다.

본 발명은 누에로부터 분리한 히포쎄티칼 프로틴32(hypothetical protein32) 유전자의 프로모터와 전체 게놈 유전자 서열에 관한 것이다

누에 형질전환 기술개발은 일본의 Tamura 등 (2000)이 나비목 곤충 Trichoplusia ni에서 유래한 piggyBac 전이인자를 이용한 연구에서 누에의 액틴3 프로모터 하류에 표지 유전자인 GFP(green fluorescent protein)를 포함하고 있는 형질전환 운반체 (donor plasmid)와 전이인자인 piggyBac transposase를 발현하는 도움 운반체 (helper plasmid)를 제작하여 각각을 1:1로 혼합한 다음, 누에 초기배 (산란 후 1~2시간)에 미세주사한 후, 부화 유충과 차세대 개체의 GFP 발현 유무로 형질전환체 선발을 실시하였다. 이 연구에서 미세 주사한 1,058개의 누에 알로부터 695개의 알이 부화하였고 다시 이 중 425두가 나방으로 우화하였으며, 이들을 교배하여 얻은 G1 세대의 GFP 발현 검정한 결과 3 아구로부터 GFP를 발현하는 누에 개체를 확인하였다. 이와 같이 표지유전자인 GFP 발현 유무에 의한 G1 세대의 형질전환 누에를 선발하기 위해서는 약 50,000～100,000 개체의 누에를 사육해야만 하므로 많은 시간과 비용이 소요된다는 단점이 있다 (Yamamoto et al., 2004).

누에 형질전환체 선발을 위해서 많은 시간과 비용이 소요되는 이유로는 누에 알 상태 (초기배)에서는 액틴3 프로모터 조절에 의한 GFP 발현이 형광현미경으로 관찰할 수 있을 만큼 충분하게 발현되지 않기 때문에, 누에 알을 부화하여 일정 기간 사육해야만 비로소 형질전환체 선발이 가능하기 때문인 것으로 판단된다 (Horn et al., 2002). 따라서 누에 알 상태에서 직접적인 표지유전자 발현에 의한 누에 형질전환체 선발뿐만 아니라 누에 유충에서도 강한 표지유전자의 발현에 의한 좀 더 용이한 누에 형질전환체 선발을 위해서는 초기 배단계 뿐만 아니라 유충단계에서 액틴3 프로모터에 비하여와 강력한 프로모터의 개발이 절실히 요구된다.

그러나 현재까지 누에에서는 조직 및 발육시기별로 항상 과량 발현하면서 액틴3보다 강력한 프로모터의 개발이 전무한 실정이다.

본 발명자들은 누에로부터 기존의 액틴3보다 강력한 프로모터를 개발하기 위하여, 누에의 액틴3 유전자를 대조로 950개의 cDNA 클론에 대하여 닷 블랏 혼성화 시험 (dot blot hybridization)을 수행하였고, 이 중 기존의 액틴3 프로모터보다 약 33배 이상의 프로모터 강도를 나타내는 히포쎄티칼 프로틴32 유전자의 프로모터와 전체 게놈 서열을 해독함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 누에로부터 분리한 신규 히포쎄티칼 프로틴32 유전자의 프로모터와 전체 게놈 유전자 서열을 제공하는 것이다.

누에에서 분리한 기존의 액틴3 유전자의 프로모터보다 강력한 프로모터를 보유한 유전자를 개발하기 위하여 본 발명은,

1) 먼저 5령 3일째 누에로부터 cDNA 유전자은행을 제작한 다음, 무작위로 950개의 cDNA 클론을 선발하여 액틴3 유전자를 대조로하여 닷 블랏 혼성화 시험 (dot blot hybridization)을 수행하는 단계,

2) 상기 단계 1)에서 액틴3에 비하여 훨씬 과량의 전사체를 발현하는 클론을 선발하고, 이들 클론에 대하여 부분 염기서열 분석하여 기존 밝혀진 유전자와 상동성을 분석하는 단계,

3) 상기 단계 2)에서 선발된 클론에 대하여 액틴3와 비교하여 누에의 조직 및 발육 시기별로 전사체 발현량을 분석하는 단계,

4) 상기 단계 3)에서 선발한 히포쎄티칼 프로틴32 cDNA 유전자에 대하여, 이를 탐침으로하여 게놈 유전자은행을 스크리닝(screening)하여 파아지 클론을 확보하는 단계,

5) 상기 단계 4)에서 선발한 히포쎄티칼 프로틴32 cDNA 유전자의 파아지 클론에 대하여 전체 염기서열 및 구조를 분석하는 단계,

6) 상기 단계 5)에서 분리한 히포쎄티칼 프로틴32 유전자의 프로모터에 대하여 5종의 deletion construct를 제작하고, 이들 각각의 deletion construct를 표지유전자로 루시퍼레이즈를 포함하고 있는 프로모터가 없는 운반체인 pGL3-Basic 운반체 (Promega, USA)에 도입하는 단계,

7) 상기 단계 6)에서 제작한 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터에 대한 5종의 deletion construct인 pGL3-Hp32-D1(-1,821~+220), pGL3-Hp32-D2(-1,300~+220), pGL3-Hp32-D3(-778~+220), pGL3-Hp32-D4(-527~+220) 및 pGL3-Hp32-D5(-303~+220)에 대하여 루시퍼레이즈 활성을 검정하는 단계,

8) 상기 단계 7)에서 가장 강한 루시퍼레이즈 활성을 나타낸 pGL3-Hp32-D2 (-1,300~+220)와 pGL3-Actin3에 대하여 루시퍼레이즈 활성을 비교 분석하는 단계; 를 포함하는 방법에 의해서, 기존 누에의 액틴3 프로모터보다 강력한 프로모터를 보유한 유전자를 개발함을 특징으로 한다.

본 발명은 기존 누에의 액틴3 유전자에 비하여 훨씬 과량의 전사체를 발현하는 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자를 분리하여 프로모터를 포함한 전체 게놈 유전자의 염기서열을 해독한 다음, Dual Luciferase Assay System (Promega, USA)을 이용하여 액틴3 프로모터와 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터의 강도를 비교 분석하였으며, 하기 실시예에 의해서 보다 구체적으로 설명하지만 보호범위가 하기 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1. 누에 액틴3 유전자 대비 고발현 유전자 선발

기존의 누에 액틴3 유전자 대비 고발현 유전자를 선발하기 위해 먼저, 누에 5령 3일째 유충으로부터 전체 RNA를 분리한 다음, 폴리(A)+ RNA만을 순수 분리하였다. 순수 분리한 폴리(A)+ RNA를 이용하여 단일쇄 cDNA와 이중쇄 cDNA를 차례대로 합성하고, 5’-말단 및 3’-말단에 각각 EcoRⅠ 및 XhoⅠ 제한효소 인식 서열을 부여하였다. 이렇게 제작된 cDNA는 pBluescript SK(-) Plasmid를 포함하고 있는 Lambda ZAP Ⅱ 운반체 (Stratagen, USA)에 방향성 있게 삽입한 후, in vitro packaging을 거쳐, cDNA 유전자은행을 제작하였다. 제작된 cDNA 유전자은행의 pfu(plaque forming unit)는 1.2X10⁶이었다.

상기 제작된 cDNA 유전자은행으로부터 무작위 선발한 950개의 cDNA 파아지 클론들을 in vivo excision 방법을 이용하여, 플라스미드 pBluescript SK(-)로 전 환한 다음, hybri-dot manifold system(BRL, USA)을 이용하여, A1 위치에는 대조인 액틴3 유전자를 블랏팅하고, 나머지 위치에는 무작위 선발한 클론을 블랏팅하였다.

블랏팅한 10장의 나이론 막을 5령 3일째 누에에서 분리한 폴리(A)+ RNA를 이용하여 합성한 단일쇄 cDNA를 프로브로 하여, 하이브리드 형성(hybridization)을 수행하였다. 그 결과, 누에의 액틴3 대비 더 강한 신호를 나타내는 9개의 cDNA 클론들을 선별하였다(도 1에서 원은 액틴3를, 화살표는 액틴3 대비 고발현 cDNA 클론을 나타낸다).

실시예 2. 누에 액틴3 유전자 대비 선발 고발현 클론 9종에 대한 부분 염기서열 분석 및 전사체 발현 분석

상기 누에 액틴3 유전자 대비 선발 고발현 클론 9종에 대한 부분 염기서열 분석은 자동염기서열 분석장치(Perkin Elmer, ABI 377, USA)를 사용하여 수행한 다음, 분석된 염기서열에 대해서, NCBI 유전자은행 데이터베이스 검색 (Blast-X)을 수행하여, 기존에 밝혀진 유전자와의 상동성 분석을 수행하였다. 상동성 분석 결과, 선발한 액티3 대비 고발현 9종의 클론은 tropomycin〔Lonomia obliqua〕, high basic serine protease, β-tubulin, 히포쎄티칼 프로틴 32, tropomycin〔Chironomus kiiensis〕, non-LTR retrotransposon endonuclease, elongation fator 1-α, heat shock cognate protein 및 heat shock 70 kDa protein 유전자와 높은 상동성을 나타내었다.

이들 선발 9종에 클론에 대하여 액틴3 대비 전사체 발현 분석을 위하여RT- PCR를 수행한 결과, heat shock 70 kDa protein 유전자와 상동성을 나타낸 9번 클론을 제외한 8종 클론 모두가 액틴3 유전자에 비하여 높은 전사체 발현 양상을 나타내었다(도 2 참조).

실시예 3. 선발 9종 중 누에 액틴3 유전자 대비 가장 높은 전사체 발현 양상을 나타낸 high basic serine protease 및 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 상동성 클론에 대한 누에 조직별 및 발육시기별 전사체 발현 분석

상기 선발한 9종의 클론 중에서 액틴3 대비 가장 높은 전사체 발현을 나타낸 2번 클론 (high basic serine protease)과 4번 클론 (히포쎄티칼 프로틴 32)에 대한 조직별 및 발육 시기별로 전사체 발현을 분석하였다. 조직별 전사체 발현 분석에서, 2번 클론이 중장(midgut)과 말피기관(malpighian tubule)에서만 특이적으로 발현된 반면, 4번 클론은 전 조직에서 액틴3에 비하여 과량의 전사체를 발현하는 것을 확인할 수 있었다(도 3A 참조). 발육시기별 전사체 발현 분석에서는 2번 및 4번 클론 모두 액틴3에 비하여 훨씬 과량의 전사체를 발현하는 것을 RT-PCR과 노던 블랏 분석 (Northern blot)에 의해서 확인하였다(도 3B 및 3C 참조).

특히, 4번 클론(히포쎄티칼 프로틴 32)은 조직 및 발육시기별로 액틴3 보다 훨씬 과량 발현하는 특성을 나타내므로 최종적으로 선발 유전자로 결정하고, 이 유전자에 대하여 초기배 단계에서의 전사체 발현을 액틴3와 비교분석 하였다. 도 3D에서 보는 바와 같이, 4번 클론 (히포쎄티칼 프로틴 32)은 초기배 단계 모두에서 액틴3보다 훨씬 과량의 전사체를 발현하므로 이 유전자의 프로모터를 분리여 형광 표지유전자의 발현 프로모터 또는 외래유전자 발현을 위한 프로모터로 이용하고자 하였다.

실시예 4. 히포쎄티칼 프로틴 32 클론의 프로모터를 포함한 전체 게놈 유전자의 염기서열 및 구조분석

히포쎄티칼 프로틴 32 클론의 전체 게놈 유전자를 확보하기 위해, 이 cDNA를 탐침으로 누에 게놈 유전자은행(농과원 생체정보실 보유)을 스크리닝 (screening)하여 히포쎄티칼 프로틴 32의 게놈 유전자를 포함하고 있는 파아지 클론을 선발하였다. 선발 파아지 클론으로부터 파아지 DNA를 분리하여, 제한효소 EcoRⅠ과 XhoⅠ으로 동시 처리한 다음 플라스미드 운반체인 pBluescript SK(-)의 EcoRⅠ과 XhoⅠ 위치에 서브 클로닝 (sub-cloning)하였다. 제작한 각각의 서브 클론들에 대한 염기서열 분석은 자동염기서열 분석장치(Perkin Elmer, ABI 377, USA)를 사용하여 수행하였다. 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 게놈 전체 염기서열 및 cDNA 염기서열은 첨부한 서열목록의 서열번호 1 및 2에 기재된 바와 같으며, 게놈 전체 유전자의 구조분석을 도4B에 나타내었다. 서열번호 1에 기재된 서열에서 1~1,821는 프로모터 영역을 나타내며, 서열번호 3에 cDNA에 의해 연역되는 아미노산을 나타내었다. 도 4A의 밑줄 친 TATAAAA, ATTCTAC, ATG, TAA 및 AATAAA는 각각 TATA 박스, 전사개시 영역인 cap 사이트, 개시코돈, 종결코돈 및 잠정 종결신호을 나타낸다. 도 4B는 히포쎄티칼 프로틴 32 클론의 프로모터를 포함한 전체 게놈 유전자에 대하여 구조분석을 한 결과이다. 박스 및 그 아래의 숫자는 전체 게놈 중에서 cDNA가 차지하는 영역과 염기 크기를 나타낸다.

실시예 5. 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터의 활성부위 결정을 위한 5종의 deletion construct 운반체 제작

분리한 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터의 활성부위를 결정하기 위하여, forward 프라이머는 5종을 제작하였고 reverse 프라이머는 1종을 제작하였다. 제작한 forward 프라이머 5종은 각각 -1,821~-1,800 (D1), -1,300~-1279 (D2), -778~-757 (D3), -527~-526 (D4) 및 -303~-282 (D5) 염기에 제한효소 XhoⅠ 싸이트 (CTCGAG)를 부가 (flanking)하여 합성하였고, reverse 프라이머 1종은 +199 염기위치부터 개시코돈 (ATG) 바로 앞 염기위치인 +220 염기에 BglⅡ 싸이트(AGATCT)를 부가하여 합성하였다. 합성한 각각의 forward 프라이머와 reverse 프라이머는 파이지 DNA를 주형으로한 PCR 반응에 사용하였다. PCR 반응에서 증폭된 5종의 PCR 산물은 각각 pGEM-T easy 운반체 (Promega, USA)에 클로닝하여, 5종의 deletion construct인 pGEMT-Hp32-D1, pGEMT-Hp32-D2, pGEMT-Hp32-D3, pGEMT-Hp32-D4 및 pGEMT-Hp32-D5를 제작하였다. 제작한 5종의 deletion construct는 각각 제한효소 XhoⅠ과 BglⅡ로 동시에 처리하여 5종의 삽입 유전자를 확보한 다음, 표지유전자로 반딧불이 (firefly)의 루시퍼레이즈 유전자를 포함하고 있는 프로모터가 없는 운반체인 pGL3-Basic 운반체 (Promega, USA)의 제한효소 위치인 XhoⅠ과 BglⅡ 사이에 도입하여, 5종의 프로모터 활성분석용 운반체인 pGL3-Hp32-D1, pGL3-Hp32-D2, pGL3-Hp32-D3, pGL3-Hp32-D4 및 pGL3-Hp32-D5를 제작하였다 (도 5A 참조).

또 한편으로, 제작한 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터에 대한 5종의 deletion construct의 표준화 (normalization)를 위한 대조 운반체 제작은 표지 유전자로 Renilla 루시퍼레이즈 유전자를 포함하고 있는 pRL-SV40 운반체 (Promega, USA)에서 SV40 프로모터를 제한효소 KpnⅠ과 HindⅢ로 처리하여 제거한 다음, 그 위치에 누에의 액틴3 프로모터를 도입하여, 반딧불이 (firefly) 루시퍼레이즈 활성을 표준화 할 수 있는 대조 운반체인 pRL-A3-Rluc를 제작하였다 (도 5B).

실시예 6. 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터의 활성부위 결정을 위한 5종의 deletion construct 운반체에 대한 루시퍼레이즈 활성검정

제작한 프로모터 활성분석용 운반체인 pGL3-Hp32-D1, pGL3-Hp32-D2, pGL3-Hp32-D3, pGL3-Hp32-D4 및 pGL3-Hp32-D5에 대한 루시퍼레이즈 활성검정은 Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, USA)을 이용하여 수행하였다. 즉, pGL3-Hp32-D1, pGL3-Hp32-D2, pGL3-Hp32-D3, pGL3-Hp32-D4, pGL3-Hp32-D5 및 pGL3-Basic 운반체 각각에 대한 400ng과 대조 운반체인 pRL-A3-Rluc 40ng를 멸균증류수 25㎕에 각각 혼합한 다음, 세포내 핵산도입 시약인 FuGENE HD Transfection Reagent (Roche, USA) 2㎕를 다시 혼합하여, 24 well 플레이트에서 생장하고 있는 Bm5 누에 배양세포주에 처리하였다. 처리 48시간 후에 배양액을 제거하고 1X PBS 용액으로 수세한 다음, 1X Passive Lysis Buffer 100㎕를 부가하여 15분간 회전교반하여 배양세포를 분해시켰다.

96 well white 플레이트(Greiner bio-one, Germany)에 1X Firefly Luciferase Assay ReagentⅡ 100㎕를 6개의 well에 분주한 다음, 각각의 well에 상기에서 준비한 각각의 세포 분해물 (cell lysate) 20㎕를 혼합한 후, luminometer (TECAN, USA)를 이용하여 각각의 deletion construct에 대한 firefly 루시퍼레이즈 활성을 측정하였다.

Firefly 루시퍼레이즈 활성을 표준화(normalization) 시키기 위하여, firefly 루시퍼레이즈 활성측정 직후에, firefly 루시퍼레이즈 활성억제 및 Renilla 루시퍼레이즈 활성측정 용액인 1X Stop & Glo Subtrate 100㎕를 부가한 다음, luminometer (TECAN, USA)를 이용하여 각각의 deletion construct에 대한 Renilla 루시퍼레이즈 활성을 측정하였다. 루시퍼레이즈 활성 측정은 3반복으로 수행하였다.

Luminometer에 의해 측정된 각각의 deletion construct에 대한 firefly 루시퍼레이즈 측정값은 각각의 deletion construct에 대하여 측정된 Renilla 루시퍼레이즈 측정값으로 나누어 표준화 (normalization) 하였다.

이때, deletion construct인 pGL3-Hp32-D1의 표준화 값을 100으로 설정한 다음, 나머지 deletion construct에 대해서는 상대값으로 계산하였다. 도 6에서 나타난 것처럼 pGL3-Hp32-D2가 pGL3-Hp32-D1에 비하여 상대값이 139.2%로 가장 높게 나타났으며, pGL3-Hp32-D3, pGL3-Hp32-D4, pGL3-Hp32-D5 및 pGL3-Basic의 상대값은 각각 4.6%, 3.9%, 4.2% 및 0.4%로 매우 낮게 나타났다. 따라서 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 적정 프로모터 영역은 -1,300 염기 위치에서부터 +220 염기 위치까지(서열번호 1의 서열목록에서는 501 위치에서 2040위치까지)인 것으로 판단되었다 (도 6 참조).

실시예 7. 누에의 액틴3 프로모터 대비 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터의 루시퍼레이즈 활성 검정

상기 실시예6에서 명시한 동일한 방법을 이용하여, 누에 액틴3 프로모터 (pGL3-A3) 대비 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터 (pGL3-Hp32-D2)의 활성 강도를 측정하였다. 루시퍼레이즈 활성 측정은 3반복으로 수행하였다.

도 7에서 나타난 것과 같이 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터 (pGL3-Hp32-D2)의 루시퍼레이즈 활성은 누에 액틴3 프로모터에 비하여 3,330% (33.3배) 높은 것으로 나타났다.

기존 누에의 액틴3 프로모터가 누에 알 상태 (초기배)에서 표지 유전자인 GFP를 형광현미경으로 관찰할 수 있을 만큼 충분하게 발현시키지 못함으로써, 누에 알을 부화하여 일정 기간 사육해야만 비로소 형질전환체 선발이 가능하기 때문에 누에 형질전환체 선발을 위해서는 많은 시간과 비용이 소요된다는 단점이 있었다.

본 발명의 히포쎄티칼 프로틴 32 프로모터는 기존 누에의 액틴3에 비하여 프로모터 강도가 33배 이상 강하여, 누에 알 상태에서 직접적인 표지유전자 발현에 의한 누에 형질전환체 선발뿐만 아니라, 누에 유충에서도 강한 표지유전자의 발현에 의한 좀 더 용이하게 누에 형질전환체를 선발할 수 있는 프로모터로 유용하게 이용될 것이다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims (4)

1. 누에로부터 분리한 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 유전자 영역 및 프로모터 영역을 포함하는 서열번호 1에 기재된 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 염기서열.
2. 서열번호 2에 기재된 히포쎄티칼 프로틴32 유전자의 cDNA 염기서열.
3. 제 2항의 염기서열에 의해 연역되는 서열번호 3에 기재된 아미노산 서열.
4. 서열번호 1에 기재된 염기서열 중 501~2040의 염기서열로 이루어진 히포쎄티칼 프로틴 32 유전자의 최대 프로모터 활성영역.

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