KR100614099B1

KR100614099B1 - 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트의검출방법

Info

Publication number: KR100614099B1
Application number: KR1020050113743A
Authority: KR
Inventors: 정봉철; 정병화; 조성희
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2005-11-25
Filing date: 2005-11-25
Publication date: 2006-08-22

Abstract

본 발명은 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트(DHEA Sulfate 이하 DHEAS로 줄임)를 고성능 액체크로마토그래피를 이용하여 검출하는 방법에 관한 것으로서, 트리에틸아민 완충용액을 전개용매로 사용하여 농축컬럼을 통해 뇨 또는 플라즈마 시료로부터 분석방해물질을 제거하고 분석물질을 농축시키는 제 1단계; 및 상기 분석방해물질이 제거되고 농축이 완료되면 트리에틸아민 완충용액과 함께 아세토니트릴을 전개용매로 공급함으로써 상기 농축컬럼으로부터 분석물질을 용출시킨 후 용출된 분석물질을 분석컬럼으로 도입하여 농도를 분석하는 제 2단계를 포함하며, 상기 각 단계는 스위칭 밸브의 조절에 의해 각 단계에서 사용되는 전개용매들의 투입과 농축컬럼 및 분석컬럼으로의 시료의 유입 및 유출이 결정되는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 별도의 추출이나 유도체화 과정 없이 시료 중의 분석방해물질을 효과적으로 제거하고 DHEAS를 농축시켜 시간과 비용, 그리고 노력을 줄일 수 있으며 각 단계에 적합한 각각 다른 전개용매를 사용함으로써 우수한 감도를 확보할 수 있다. 이와 같은 방법은 알츠하이머 질병을 가진 환자의 체내 DHEAS의 농도 변화에 대한 모니터링과 알츠하이머 질병의 원인 연구에 효과적으로 이용될 수 있다.

디에이치이에이 설페이트, 고성능 액체크로마토그래피, 질량분석기, 컬럼 스위칭, 뇨, 플라즈마, 트리에틸아민, 아세토니트릴, 알츠하이머 질병

Description

뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트의 검출방법{Method for detection of DHEA sulfate in urine or plasma sample}

도 1은 본 발명에 따른 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트(DHEA Sulfate 이하 DHEAS로 줄임)의 검출방법에 사용되는 장치의 개략도이다.

도 2a는 본 발명에 따른 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법 중에서 제 1단계를 나타내는 개략도이고, 도 2b는 본 발명에 따른 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법 중에서 제 2단계를 나타내는 개략도이다.

도 3은 본 발명에 따른 방법에서 분석물질인 DHEAS와 내부표준물질인 선택된 이온의 크로마토그램과 질량스펙트럼이다.

도 4는 본 발명에 의한 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법 에서 얻은 정량을 위한 검량곡선이다.

도 5는 본 발명에 따른 방법에 따라 측정된 알츠하이머 환자와 정상인의 뇨와 플라즈마 시료에서의 DHEAS의 농도를 도표화(plotting)하여 나타낸 것이다.

*도면 부호의 간단한 설명*

1: 전개용매 공급부

1-1: 트리에틸아민 공급부

1-2: 아세토니트릴 공급부

2: 시료 공급부

3: 컬럼 스위칭 밸브

4: 농축컬럼

5: 분석컬럼

6: 질량분석기

7: 폐기부

본 발명은 알츠하이머 질병을 가진 환자의 뇨 또는 플라즈마 시료에 존재하는 DHEAS(dehydroepiandrosterone-sulfate)의 빠르고 간편한 검출방법에 관한 것이다. 생체 시료에 존재하는 분석물질을 검출함에 있어서는, 생체시료에 존재하는 많은 분석방해물질을 제거하기 위한 전처리 과정이 필요하다. 이러한 전처리 과정을 위해서는 많은 시간과 노력 그리고 비용이 소요된다. 본 발명에서는 컬럼 스위칭을 이용한 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 전처리 과정 없이 쉽게 뇨 또는 플라즈마 시료에서 DHEAS를 검출하기 위한 방법을 제공하는 것이다.

체내의 스테로이드 호르몬 중 DHEAS는 가장 많은 양을 이루며, 안드로겐이나 에스트로겐으로 변한다. DHEAS의 생리적, 병리적 기능은 아직 정확히 밝혀지지 않았지만, 과학적 조사나 의학적 진단을 위한 잣대로써 많은 관심을 받고 있다. 또한 DHEAS의 순환은 내생적 생산, 호르몬 보충, 질병 상태의 종류와 같은 많은 요소들에 의해 변화되어 질 수 있기 때문에 DHEAS의 농도 변화와 질병과의 관계에 대한 연구가 진행되어 왔다. 특히 알츠하이머 질병의 진단 표지자로서 DHEAS 농도에 대한 연구가 많이 진행되어 왔다(V. M. S. de Bruin et al, Brain and cagnition 50 (2002) 316; R. C. Brown et al, neurobiol. Aging 24 (2003) 57; F. X. Windhager et al, Psychopharmacology 111 (1993) 23.).

그 동안 알츠하이머 환자의 혈장과 혈청 시료에서 DHEAS의 검출 방법으로는 방사면역측정법을 이용한 방법이 많이 사용되었다(V. M. S. de Bruin et al, Brain and cognition 50 (2002) 316). 그러나 방사면역측정법은 실험 중 방사능을 방출한다는 문제점이 있어 최근에는 그 사용이 자제되고 있다.

그 외에도, 고성능 액체크로마토그래피와 질량분석기를 이용하여 혈액 시료에서 DHEAS를 검출하는 연구가 진행되어 왔다(M. Kuniko et al, J. Chromatogr. B 796 (2003) 121; N. Masaharu et al, Biomed. Chromatogr. 12 (1998) 211). 그러나 위의 방법은 고체상 추출을 통한 시료의 전처리 과정을 거쳐야 하므로 많은 시간과 비용이 수반되는 문제점이 있었다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명에서는 컬럼 스위칭을 이용한 고성능 액체 크로마토그래피와 질량분석기를 사용하여 시료 의 추출이나 유도체화 과정 없이 간단한 여과과정만을 거친 후 직접 시료를 주입하여 시료 전처리에 필요한 시간, 노력 그리고 비용을 절감하여 간편하고 감도 좋은 분석을 가능하게 하는 것을 목적으로 한다. 또한 이러한 분석방법을 이용하여 알츠하이머 질병을 가진 환자와 정상인의 뇨 또는 플라즈마에서 DHEAS의 농도가 어떤 차별성을 가지는지 모니터링 할 수 있도록 하는 것을 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 의한 방법은, 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트(DHEAS)를 고성능 액체크로마토그래피를 이용하여 검출하는 방법으로서, 트리에틸아민 완충용액을 전개용매로 사용하여 농축컬럼을 통해 뇨 또는 플라즈마 시료로부터 분석방해물질을 제거하고 분석물질을 농축시키는 제 1단계; 및 상기 분석방해물질이 제거되고 농축이 완료되면 트리에틸아민 완충용액과 함께 아세토니트릴을 전개용매로 공급함으로써 상기 농축컬럼으로부터 분석물질을 용출시킨 후 용출된 DHEAS를 분석컬럼으로 도입하여 농도를 분석하는 제 2단계를 포함하며, 상기 각 단계는 스위칭 밸브의 조절에 의해 각 단계에서 사용되는 전개용매들의 투입과 농축컬럼 및 분석컬럼으로의 시료의 유입 및 유출이 결정되는 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명에 따른 방법에 있어서, 상기 제 2단계는 상기 분석컬럼을 통과한 DHEAS를 질량분석기로 분석하여 DHEAS의 농도의 분석감도를 확보하는 것이 바람직하다.

상기한 본 발명에 따른 방법에 있어서, 바람직하게는 상기 시료는 알츠하이머 질환의 환자 유래의 것이다.

상기한 본 발명에 따른 방법에 있어서, 바람직하게는 상기 스위칭 밸브는 제조자 또는 사용자의 입력에 의해 자동적으로 개폐되는 것이다.

상기한 본 발명에 따른 방법에 있어서, 바람직한 트리에틸아민 완충용액은 pH를 6 내지 7로 맞춘 것이다.

이하에서 도면을 참조로 하여 본 발명에 따른 방법을 더욱 상세히 설명한다.

도 1은 본 발명에 따른 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트(DHEAS)의 검출방법에 사용되는 장치의 개략도이다. 먼저 전개용매 공급부(1)는 전개용매를 공급하는 부분으로서 트리에틸아민 공급부(1-1) 및 아세토니트릴 공급부(1-2)를 포함한다. 시료 공급부(2)는 인간의 뇨 또는 플라즈마를 공급하는 부분이다. 전개용매 스위칭 밸브(도면에 나타내지 아니함)는 어떤 전개용매를 유출시킬 것인가를 조절한다. 컬럼 스위칭 밸브(3)는 시료를 농축컬럼(4)에 투입하고 분석방해물질을 제거하는 경로와 농축컬럼(4)에 존재하는 분석물질을 용출하여 분석컬럼(5)으로 투입하는 경로 중 어느 경로를 진행할 것인지 결정한다. 농축컬럼(4)은 분석방해물질이 제거된 DHEAS를 농축시킨다. 분석컬럼(5)에서 아세토니트릴과 트리에틸아민 용액 (pH 6.4)의 혼합액인 전개용매에 의해 농축컬럼으로부터 용출된 DHEAS를 농축컬럼에 남아있는 혈장성분으로부터 분리한 후 분리된 DHEAS는 질량분석기 (6)에 의해 농도가 분석된다.

도 2a는 본 발명에 따른 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법 중에서 제 1단계를 나타내는 개략도이다. 굵은 선으로 표시된 경로가 제 1단계를 나타낸다. 먼저 전개용매 스위칭 밸브의 조절에 의해 트리에틸아민 완충용액이 트리에틸아민 공급부(1-1)로부터 공급되고 시료 공급부(2)로부터 공급된 뇨 또는 플라즈마 시료와 함께 컬럼 스위칭 밸브(3)의 조절에 의해 농축컬럼(4)으로 도입된다. 친수성의 트리에틸아민 완충용액만을 흘려줄 경우 농축컬럼(4)은 분석하고자 하는 분석물질인 DHEAS와는 충분한 상호작용을 하지만 큰 친수성을 가지는 여러 분석방해물질과는 충분한 상호작용을 하지 못해 분석물질만을 농축시키고 분석방해물질을 농축컬럼(4) 밖으로 유출시켜 폐기부(7)로 보낸다.

도 2b는 본 발명에 따른 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법 중에서 제 2단계를 나타내는 개략도이다. 굵은 선으로 표시된 경로가 제 2단계를 나타낸다. 전개용매 스위칭 밸브에 의한 조절에 따라 트리에틸아민 공급부(1-1)로부터의 트리에틸아민의 공급량이 조절되고, 아세토니트릴 공급부(1-2)로부터 아세토니트릴이 공급되어 컬럼 스위칭 밸브(3)의 조절에 의해 DHEAS가 농축되어 있는 농축컬럼(4)에 도입된다. 트리에틸아민 완충용액만을 흘려줄 때에는 유출되지 아니하였던 분석물질이 아세토니트릴에 의해 유출된다. 농축컬럼(4)으로부터 유출된 분석물질은 분석컬럼(5)에 도입된 후 질량분석기(6)를 통해 농도가 분석된다.

이하에서는 각 단계별로 나누어 본 발명에 따른 방법을 더욱 상세히 설명한다.

1. 분석방해물질 제거 및 분석물질 농축단계

본 발명에서 사용하는 시료인 뇨와 플라즈마는 친수성의 성질을 가지고 있다. 따라서 분석하고자 하는 분석물질 이외에도 많은 친수성의 분석방해물질을 가지고 있다. 본 발명에서는 분석방해물질 제거 및 분석물질을 농축시키기 위한 농축컬럼(4)을 사용하여 복잡한 전처리 과정을 거치지 않고 쉽게 분석물질을 검출할 수 있다. 농축컬럼(4)으로서 바람직한 예는 Shodex MS pak PK-2A 컬럼(N-vinylacetamide copolymer, 내경 2.0 mm, 길이 10 mm, Showa Denko K.K.)을 들 수 있다. 트리에틸아민 완충용액으로서 바람직한 예는 0.1% 트리에틸아민 완충용액(초산으로 pH 6.4 로 조정한 용액)을 들 수 있다. 트리에틸아민 완충용액의 pH는 6 내지 7인 것이 바람직하며 특히 pH 6.4인 것이 바람직하다. 본 분석물질은 고성능 액체크로마토그래피로 분리된 후 네거티브(negative) 전기 분무 이온화(electrospray ionization)방법으로 분석된다. 따라서 전자 포획(electron capture) 능력이 좋은 트리에틸아민 완충용액을 사용하는 것이 바람직하다. 그러나 0.1% 트리에틸아민 완충용액만을 이동상으로 사용할 경우 용매의 pH가 매우 높기 때문에 컬럼과 분석물질을 손상시키며 농축컬럼에서 플라즈마에 존재하는 혈장 단백질을 제거하는 효과를 감소시킬 수 있다. 따라서 초산을 이용해 분석물질을 최적으로 분석할 수 있는 pH 범위는 6 내지 7, 가장 바람직하게는 6.4로 맞추어 사용하는 것이 바람직하다. 트리에틸아민 완충용액의 pH가 6 미만이거나 7을 초과하는 경우에는 컬럼과 분석물질의 손상가능성이 높아지고 혈장단백질 제거효과가 현저히 감소되므로 6 내지 7의 pH인 것이 바람직하다.

농축을 위하여 흘려주는 트리에틸아민 완충용액의 유속은 400~600㎕/분인 것이 바람직하며, 가장 바람직한 유속은 500㎕/분이다. 트리에틸아민 완충용액을 흘려주는 시간은 8 내지 12분인 것이 바람직하며 특히 10분간 흘려주는 것이 바람직하다.

친수성의 트리에틸아민 완충용액만을 흘려줄 경우 농축컬럼은 분석하고자 하는 분석물질인 DHEAS와는 충분한 상호작용을 하지만 큰 친수성을 가지는 여러 분석방해물질과는 충분한 상호작용을 하지 못해 분석물질은 농축시키고 혈장단백질을 포함한 분석방해물질을 컬럼 밖으로 유출시켜 폐기시킨다.

2. 분석물질의 유출 단계

상기와 같이 하여 시료로부터 분석방해물질이 제거되고 분석물질이 농축되어 있는 농축컬럼(4)에, 도 2b에 나타낸 바와 같이 컬럼 스위칭 밸브(3)를 조절하여 25 내지 35% 아세토니트릴과 75 내지 65% 의 0.1 % 트리에틸아민용액을 전개용매로 도입시킨 후 아세토니트릴의 비율을 75-85%로 올리는 gradient 방법을 사용하는 것이 바람직하다. 아세토니트릴의 농도를 75-85% 까지 올리는 이유는 농도가 75% 미만인 경우에는 농축컬럼으로부터 DHEAS가 유출되지 않으며 85%를 초과하면 농축컬럼에 농축된 DHEAS와 제거되지 않고 남아있는 혈장성분이 분석컬럼에서 분리 되지 않기 때문이다.

아세토니트릴 용액의 양은 처음에는 적은 양으로 시작하여 시간이 경과함에 따라 그 양을 점차 늘려가다가 다시 줄이는 방식으로 도입한다. 바람직하게는 전체 전개용매 중 아세토니트릴의 함유량이 25~35%(v/v)의 양으로 시작하여 4 내지 6분 경에는 45~65%(v/v)로 그 비율을 높이고 9 내지 11분 경에는 75 내지 85%(v/v)로 올린 후 4 내지 6분간 유지하다가 13 내지 18분 경에 다시 30%(v/v)로 내리고 2 내지 4분간 유지한 후 분석물질을 유출시키는 것이 바람직하다. 이 때 흘려주는 전개용매의 유속은 80 내지 120㎕/분인 것이 바람직하며, 100 ㎕/분인 것이 가장 바람직하다.

상기와 같이 gradient를 주는 이유는 gradient를 주지 않으면 혈장 성분과 DHEAS가 한꺼번에 유출되어 분리되지 않기 때문이다. 처음에 아세토나이트릴 비율을 적게 하여 극성이 강한 혈장 성분을 먼저 유출시킨 후 아세토나이트릴 비율울 높여주어 DHEAS를 그 후에 유출되도록 하는 것이다. 초기 아세토나이트릴 비율을 너무 낮추면 혈장 성분 유출 후 DHEAS를 유출하기 까지 시간이 많이 걸려 비효율적이며 초기 아세토나이트릴 비율을 너무 높이면 혈장성분과 DHEAS가 분리되지 않고 한꺼번에 유출되기 때문에 초기 아세토니트릴의 비율은 25 내지 35%인 것이 바람직하다. 11분 이후에 아세토니트릴의 비율을 높이는 이유는 11분 이전에 혈장성분이 대부분 유출되므로 분석컬럼에 있는 DHEAS를 재빨리 유출시키기 위함이다.

트리에틸아민 완충용액만을 흘려줄 경우 유출되지 않았던 분석물질이 유기용매를 함유한 전개 용매로 사용할 경우 농축컬럼으로부터 유출되고 그 유출된 분석 물질은 분석컬럼에서 분리된다.

분석컬럼으로 사용될 수 있는 바람직한 예는 길이가 15 ㎝, 내경 1.5 ㎜, 입자크기가 5 ㎛인 시세이도사의 Capcell Pak C18 MG 컬럼을 들 수 있다. 시료에서 분석물질을 분리시키기 위한 기기로서 바람직한 예는, 시세이도사의 Shiseido nanospace SI-2 고성능 액체 크로마토그래피 (Shiseido Co., Tokyo, Japan)를 들 수 있다.

3. 질량분석기를 이용한 DHEAS 농도의 분석 단계

상기 1과 2 단계를 통해 질량분석기의 분석을 위한 최적의 조건이 확립된 후 질량분석기를 사용하여 DHEAS의 농도를 분석한다. 본 발명에 따른 방법에서 사용될 수 있는 질량분석기의 바람직한 예로는, 써머 피니간사의 LCQ Advantage 질량분석기(ThermoFinnigan, version 1.0, Scan Jose, CA, USA)를 들 수 있다.

4. 정량단계

본 발명자들은 알츠하이머 질병의 환자와 정상인의 뇨와 플라즈마 시료에서 DHEAS의 농도를 정량하기 위한 검량곡선을 도 4에 제시하였고 이를 통해 DHEAS의 농도를 정량하였다. 이 검량곡선은 R=0.999 이상의 좋은 선형성을 보였고 변동 계수(Coefficient Variation) 값도 10% 이내로 나타내어 좋은 반복성을 보였다.

이하에서는 본 발명의 바람직한 일실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설 명하나, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.

실시예

1. 분석방해물질 제거 및 분석물질 농축단계

19명의 알츠하이머 질병의 환자와 18명의 정상인 각각의 뇨와 플라즈마 시료를 얻고 각 시료를 시료 공급부(2)에 충진시켰다. 전개용매 스위칭 밸브를 조절하여 트리에틸아민 공급부(1-1)로부터 트리에틸아민이 유출되도록 하고 유출된 트리에틸아민이 시료 공급부(2)로부터 공급된 시료와 함께 농축컬럼(4)으로 흘러가도록 하였다. 농축컬럼(4)으로는 Shodex MS pak PK-2A 컬럼(N-vinylacetamide copolymer, 내경 2.0 mm, 길이 10 mm, Showa Denko K.K.)을 사용하였다. 트리에틸아민 완충용액으로서 0.1% 트리에틸아민 완충용액 (초산으로 pH 6.4 로 조정한 용액)을 500 ㎕/분의 유속으로 10분간 흘려주었다.

2. 분석물질의 유출 단계

상기와 같이 하여 분석방해물질이 제거되고 분석물질이 농축된 농축컬럼에(4) 0.1% 트리에틸아민(pH 6.4)과 아세토니트릴의 혼합용액을 사용하여 분석물질을 유출시켰다. 전개용매 중의 아세토니트릴 용액의 함유량을 처음에는 전체 전개용매 중 30%(v/v)로 시작하여 5분에 50%, 10분에 80%로 올린 후 5분간 유지 한 후 17분에 다시 30%로 내리고 3분간 유지하며 100㎕/분의 유속으로 흘려주며 분석물질을 유출시켰다. 유출된 분석물질을 분석컬럼으로 도입하였다.

분석컬럼으로는 길이가 15 ㎝, 내경 1.5 ㎜, 입자크기가 5 ㎛인 시세이도사의 Capcell Pak C18 MG 컬럼을 사용하였다. 시료에서 분석물질을 분리 시키기 위한 기기는 시세이도사의 Shiseido nanospace SI-2 고성능 액체 크로마토그래피 (Shiseido Co., Tokyo, Japan)을 사용하였다.

3. 질량분석기를 이용한 DHEAS 농도의 분석

상기 고성능 액체 크로마토그래피를 통해 분리된 분석물질을 써머 피니간사의 LCQ Advantage 질량분석기(ThermoFinnigan, version 1.0, Scan Jose, CA, USA)에 도입하였다. 상기의 질량분석기는 전기스프레이 이온화기를 장착하였으며 물질을 이온화시킬 때의 전기스프레이의 조건은 보조 (auxillary) 가스(질소) 속도는 50 a.u. (arbitary unit), 이온 스프레이 전압은 4.5 KV, 모세관 전압은 -10 V, 튠 렌즈 오프셋(tune lens offset)은 -50 V, 그리고 모세관 온도는 250 ℃이었다.

정량은 MS의 SRM (selected reaction monitoring) mode를 사용하여 분석하였다. 디에이치이에이 설페이트는 [M-H]^- 값인 367을 m/z로 선택하여 정량하였다. 상기와 같이 하여 얻어진 크로마토그램과 질량스펙트럼을 도 3에 나타내었다. ISTD는 내부표준물질의 선택된 이온을 나타낸다.

4. 정량단계

도 4에 제시된 검량곡선에 따라 각 시료 중의 DHEAS의 농도를 정량하였다. 그 결과는 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타난 바와 같이, 알츠하이머 환자(AD) 시료 중의 DHEAS 농도는 정상인(Normal) 시료 중의 DHEAS 농도와는 현격히 다른 경향을 보임을 확인할 수 있었다.

Claims

뇨 또는 플라즈마 시료 중의 디에이치이에이 설페이트(DHEAS)를 고성능 액체크로마토그래피를 이용하여 검출하는 방법으로서,

트리에틸아민 완충용액을 전개용매로 사용하여 농축컬럼을 통해 뇨 또는 플라즈마 시료로부터 분석방해물질을 제거하고 분석물질을 농축시키는 제 1단계; 및

상기 분석방해물질이 제거되고 농축이 완료되면 트리에틸아민 완충용액과 함께 아세토니트릴을 전개용매로 공급함으로써 상기 농축컬럼으로부터 분석물질을 용출시킨 후 용출된 분석물질을 분석컬럼으로 도입하여 농도를 분석하는 제 2단계를 포함하며,

상기 각 단계는 스위칭 밸브의 조절에 의해 각 단계에서 사용되는 전개용매들의 투입과 농축컬럼 및 분석컬럼으로의 시료의 유입 및 유출이 결정되는 것을 특징으로 하는 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출 방법.
제 1항에 있어서,

상기 제 2단계는,

상기 분석컬럼을 통과한 DHEAS를 질량분석기로 분석하여 DHEAS의 농도의 분석감도를 확보하는 것을 특징으로 하는 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법.
제 1항 또는 2항에 있어서, 상기 시료는 알츠하이머 질환의 환자 유래의 것임을 특징으로 하는 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 스위칭 밸브는 제조자 또는 사용자의 입력에 의해 자동적으로 개폐되는 것을 특징으로 하는 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 트리에틸아민 완충용액은 pH를 6 내지 7로 맞춘 용액임을 특징으로 하는 뇨 또는 플라즈마 시료 중의 DHEAS의 검출방법.