KR100536163B1 - Compositions for the prevention or treatment of cancer - Google Patents

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KR100536163B1
KR100536163B1 KR10-2004-0000364A KR20040000364A KR100536163B1 KR 100536163 B1 KR100536163 B1 KR 100536163B1 KR 20040000364 A KR20040000364 A KR 20040000364A KR 100536163 B1 KR100536163 B1 KR 100536163B1
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Abstract

본 발명은 물 1L에 대하여 제독된 복어; 유근피; 천궁; 구기자; 지구자; 및 인진쑥을 500 내지 1,500 g; 5 내지 100 g; 5 내지 100 g; 5 내지 100 g; 5 내지 100 g; 및 5 내지 100 g의 비율로 포함하는 혼합물을 증류하여 얻어지는 수추출물 및 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다The present invention is deodorant blowfish against 1L of water; Root skin; Celestial arches; Wolfberry; Earth; And 500-1500 g of jinjin wormwood; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; And it provides a composition for preventing or treating cancer comprising a water extract obtained by distilling the mixture comprising a ratio of 5 to 100 g and a pharmaceutically acceptable additive.

Description

암 예방 또는 치료용 조성물{Compositions for the prevention or treatment of cancer}Compositions for the prevention or treatment of cancer}

본 발명은 제독된 복어, 유근피, 천궁, 구기자, 지구자, 및 인진쑥으로부터 얻어진 추출물을 유효성분으로 하는 암 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for preventing and treating cancer comprising extracts obtained from detoxified puffer fish, root roots, horoscopes, goji berry, earth worm, and jinjin wormwood.

암 (cancer)이란 세포의 비정상적 증식에 의하여 야기되는 질병을 의미한다. 즉, 정상세포의 불필요한 세포 분열을 억제하는 정상적 세포분열 조절 기능에 이상이 생겨, 세포들이 비정상적으로 지속적인 세포 분열을 함으로써 야기되는 질병이다. 세포가 비정상적으로 증식하게 되면 세포 집단을 형성하여 주위 조직 및 장기를 침범하고, 발생부위에서 멀리 떨어진 조직 및 장기까지도 이들 세포들이 퍼지는 전이 (metastasis)를 일으키게 되어 결국 개체의 정상적인 기능을 마비시켜 죽음에 이르게 한다. 이들 암의 약 80%는 생활 습관 및 환경요인에 의해 발생하는 것으로 인정된다. 암을 야기하는 여러 화학적, 물리적, 및 생물학적 물질에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 그에 따라 암을 예방 또는 치료하기 위한 물질이 보고되고 있다. Cancer means a disease caused by abnormal proliferation of cells. That is, abnormality occurs in the normal cell division regulating function that suppresses unnecessary cell division of normal cells, and the disease is caused by abnormally persistent cell division of cells. When cells multiply abnormally, they form cell populations that invade surrounding tissues and organs, and metastases spread through even the tissues and organs far from the site of development, eventually paralyzing the individual's normal function and causing death. It leads to About 80% of these cancers are recognized to be caused by lifestyle and environmental factors. Research into various chemical, physical, and biological substances that cause cancer is actively conducted, and thus, substances for preventing or treating cancer have been reported.

복어는 저칼로리, 고단백질, 저지방과 각종 무기질 및 비타민이 들어 있는 다이어트 식품으로 유용하며, 대한민국 특허공개 제2002-91641호는 복어 알의 수성 추출액을 이용한 유방암, 위암, 폐암, 간암, 난소암 등의 암을 치료할 수 있는 약학 조성물을 개시한 바 있다. 그러나, 이러한 조성물은 복어의 알로부터 추출하는 것이기 때문에, 대량으로 추출하는 데는 문제점이 있다. 또한, 상기 발명은 복어 독이 세포 분열을 억제하는 작용이 있다는 점에 착안하여 복어 독 성분을 함유하는 추출액을 제조한 것이다. 따라서, 상기 특허에는 복어 독을 함유하는 부분, 즉 고환, 난소, 간장, 비장, 안구 및 혈액으로부터 암 치료 활성을 갖는 수성 추출액을 제조하는 방법이 개시되어 있을 뿐이다. 따라서, 당업자라면 복어 독을 함유하고 있지 않는 부분에서도 항암 활성을 갖는 수성 추출물을 얻을 수 있을 것이라고는, 예측할 수 없을 것이다. Blowfish is useful as a diet food containing low calorie, high protein, low fat and various minerals and vitamins, and Korean Patent Publication No. 2002-91641 discloses breast cancer, stomach cancer, lung cancer, liver cancer and ovarian cancer using aqueous extracts of puffer fish eggs. Pharmaceutical compositions capable of treating cancer have been disclosed. However, since such a composition is to be extracted from the puffer eggs, there is a problem in the extraction in large quantities. In addition, the above-described invention focuses on the fact that blowfish poison has a function of inhibiting cell division, thereby preparing an extract containing blowfish poison component. Therefore, the patent only discloses a method for producing an aqueous extract having cancer therapeutic activity from the portion containing blowfish poison, namely, the testes, ovaries, liver, spleen, eyes and blood. Therefore, those skilled in the art will not be able to predict that an aqueous extract having anticancer activity can be obtained even in a portion containing no blowfish poison.

본 발명자들은 암의 예방 및 치료에 유용한 천연 추출물을 개발하고자 연구하던 중, 놀랍게도 복어 독을 포함하고 있지 않는 제독된 복어, 유근피, 천궁, 구기자, 지구자 및 인진쑥의 수추출물이 암 세포의 증식을 효과적으로 억제할 수 있을 뿐만 아니라 암세포의 자살을 유도한다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.The inventors of the present invention have been researching to develop natural extracts useful for the prevention and treatment of cancer. The present invention was found to be able to effectively inhibit as well as to induce suicide of cancer cells, thereby completing the present invention.

따라서, 본 발명의 목적은 암의 예방 및 치료에 유용한 추출물을 제공하는 것이다. It is therefore an object of the present invention to provide extracts useful for the prevention and treatment of cancer.

본 발명의 일 태양에 따라, 물 1L에 제독된 복어; 유근피; 천궁; 구기자; 지구자; 및 인진쑥을 각각 500 내지 1,500g; 5 내지 100g; 5 내지 100g; 5 내지 100g; 5 내지 100g; 및 5 내지 100g의 비율로 포함하는 혼합물을 증류하여 얻어지는 수추출물 및 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.According to one aspect of the invention, puffer fish detoxified in 1 liter of water; Root skin; Celestial arches; Wolfberry; Earth; And 500-1,500 g of phosphorus mugwort, respectively; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; And it provides a composition for preventing or treating cancer comprising water extract and pharmaceutically acceptable additives obtained by distilling the mixture comprising a ratio of 5 to 100g.

본 발명의 조성물은 바람직하게는, 물 1L에 제독된 복어; 유근피; 천궁; 구기자; 지구자; 및 인진쑥을 각각 800 내지 1,000g; 10 내지 50g; 10 내지 50g; 10 내지 50g; 10 내지 50g; 및 10 내지 50g의 비율로 포함하는 혼합물을 증류하여 얻어지는 수추출물 및 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.The composition of the present invention preferably is blowfish detoxified in 1 L of water; Root skin; Celestial arches; Wolfberry; Earth; And 800 to 1,000 g of phosphorus mugwort, respectively; 10-50 g; 10-50 g; 10-50 g; 10-50 g; And it provides a composition for preventing or treating cancer comprising water extract and pharmaceutically acceptable additives obtained by distilling the mixture comprising a ratio of 10 to 50g.

본 발명에서 사용되는 복어는 분류학적으로 알려진 모든 복어를 사용할 수 있으며, 예를 들어 참복과, 불뚝복과. 거북복과, 가시복과 등에 속하는 복어들을 모두 사용할 수 있다. 상기에서 참복과에 속한 복어로서, 우리나라 수역에 서식하는 복어는 자지복, 검복, 까치복 등 18 종과 가시복의 1 종을 합쳐 19 종으로 알려져 있다. 복어에는 독성이 특히 강한 검복고, 자지복, 까치복 등이 있다.The puffer fish used in the present invention may use any taxonomically known puffer fish, for example, bokbokdae, firefish. You can use all of the puffer fish belonging to the turtle suit, thorn suit and the like. As a blowfish belonging to the bokbok family, the blowfish inhabiting the waters of Korea are known as 19 species including 18 species such as cock, sword, magpie, and 1 species of thorn. Blowfish are particularly toxic, including black robes, cocks and magpies.

본 발명에서 "제독된 복어"라 함은 복어의 간장, 생식선, 소화관, 피부 등에 들어있는 테트라도톡신이라는 신경독이 제거된 복어를 말하며, 통상 복어의 지느러미, 아가미, 눈을 제거하고 개복을 통하여 내장, 복어알, 그리고 피를 제거하여 흐르는 물에 1시간 동안 씻어서 제독할 수 있다.In the present invention, "adventured blowfish" refers to a blowfish that has been removed a neurotoxin called tetradotoxin contained in the liver, gonad, digestive tract, skin, etc. of the blowfish, and usually removes the fins, gills, and eyes of the blowfish Remove pufferfish, puffer fish, and blood and wash in running water for 1 hour to detoxify.

유근피는 느릅나무 또는 뿌리의 껍질로 치습, 이뇨제, 소종독에 사용하는 약재이다. 천궁은 중국이 원산지로서 우리나라의 한랭한 산간지방에서 당귀와 더불어 재배하는 다년생 약초로 강한 방향을 가지고 있다. 땅속의 덩어리 모양의 줄기 뿌리를 천궁이라 한다. 한방에서 뿌리를 음위, 보익, 간질, 치통, 대하, 진통, 강장, 진정, 부인혈증, 치풍, 역상 등에 약재로 쓴다. 지구자는 갈매나무과에 속하는 가엽활엽교목(잎이 크고 키가 큰 나무)의 열매로서, 호깨, 헛개, 호리께, 볼개 등의 다른 이름으로 불리우는 약용식물이다. 구기자는 구기자나무의 열매로 단백질·지방·당질·칼슘·인·철분·베타인·루틴·비타민(A·B1·B2·C) 등이 들어 있어 흡수가 빠르다. 한방에서는 강장제·해열제로 쓰고 간기능 보호 작용이 뛰어나 부작용이 별로 없다. 또한, 인진쑥은 국화과에 속하는 다년생 쑥을 말하며, 황달 등 간질환을 고치는 데 예부터 이름이 높으며, 소화계나 항암효과도 기대할 수 있다고 알려져 있다.Root root skin is a bark of elm or root and is used for moisturizing, diuretic and small poison. Cheonggung is a perennial herb that is native to China and grows with donkeys in the cold mountainous regions of Korea. The stem roots in the form of lumps in the ground are called celestial arches. Herbal roots in the stomach, bowel, epilepsy, toothache, lobster, analgesic, tonic, soothing, gynecological, hurricane, reversed medicine is used. The earth is the fruit of the broad-leaved broad-leaved arborescent (tree with large and tall leaves) belonging to the sea buckthorn family, and it is a medicinal plant called by other names such as sesame, barn, grass, and volley. Goji berries are fruits of goji berry, which contain protein, fat, sugar, calcium, phosphorus, iron, betaine, rutin, and vitamins (A, B1, B2, C). In oriental medicine, it is used as a tonic and antipyretic. Injin mugwort is a perennial mugwort belonging to the chrysanthemum family, and it is known for treating liver diseases such as jaundice since ancient times, and it is known that the digestive system or anticancer effect can be expected.

본 발명의 조성물에 함유되는 수추출물은 물 1L에 제독된 복어; 유근피; 천궁; 구기자; 지구자; 및 인진쑥을 각각 500 내지 1,500g; 5 내지 100g; 5 내지 100g; 5 내지 100g; 5 내지 100g; 및 5 내지 100g의 비율로 포함하는 혼합물을 증류하여 얻어진다. 증류방법은 통상의 증류방법 (예를 들어, 단순 증류)에 따라 수행할 수 있으며, 바람직하게는 회분식 증류탑에서 100 ℃ 내지 150 ℃의 온도, 압력 1 내지 5 kgF/cm2에서 2 내지 7시간, 더욱 바람직하게는 125 ℃ 내지 135 ℃의 온도, 압력 2.8 내지 3.2 kgF/cm2에서 5 내지 7시간 동안 증류함으로써, 효과적으로 유용성분을 추출할 수 있다.The water extract contained in the composition of the present invention is blowfish detoxicated in 1L of water; Root skin; Celestial arches; Wolfberry; Earth; And 500-1,500 g of phosphorus mugwort respectively; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; And it is obtained by distilling the mixture containing in the ratio of 5-100 g. The distillation method can be carried out according to a conventional distillation method (for example, simple distillation), preferably in a batch distillation column at a temperature of 100 ℃ to 150 ℃, 2 to 7 hours at a pressure of 1 to 5 kgF / cm 2 , More preferably, by distilling for 5 to 7 hours at a temperature of 125 ℃ to 135 ℃, pressure 2.8 to 3.2 kgF / cm 2 , it is possible to extract useful components effectively.

본 발명에서 사용되는 수추출물은 제독된 복어를 물 1L 당 500 내지 1,500g의 많은 양으로 포함하는 혼합물으로부터 증류되기 때문에 복어에 포함되어 있는 유용 성분, 특히 단백질 및 펩타이드를 액상과 고상으로 분리할 수 있도록 한다. 특히, 복어 속에 있는 유효한 성분 (예: 유용 펩타이드, 과기부 2003년도 신기술 융합과제: "유용 펩타이드 리간드의 발굴과 정보화 및 응용에 관한 연구"를 참조)은 아주 적은 양으로 존재하여 적은 양의 복어로부터 유용한 성분을 얻기가 힘들기 때문에, 많은 양의 복어를 사용함으로써 고농축 유효성분을 얻고자 하는 것이다. 또한, 본 발명의 추출물은 제독된 복어외에 유근피, 천궁, 구기자, 지구자, 및 인진쑥을 포함하는 혼합물로부터 추출된 것으로, 본 발명의 조성물의 암 예방 또는 치료 효과는 이들 각 원료로부터 추출된 성분들이 상승적으로 작용하기 때문인 것으로 여겨진다. Since the water extract used in the present invention is distilled from a mixture containing a large amount of deodorized puffer fish in the amount of 500 to 1,500 g per liter of water, it is possible to separate the useful components, particularly proteins and peptides contained in the puffer fish, in liquid and solid phase. Make sure In particular, active ingredients in pufferfish (e.g., useful peptides, widows, new technology fusion projects 2003: see "Discovery, Information and Application of Useful Peptide Ligands") are present in very small quantities and are useful in small amounts of puffer fish. Since it is difficult to obtain the ingredients, it is intended to obtain a highly concentrated active ingredient by using a large amount of blowfish. In addition, the extract of the present invention is extracted from a mixture containing the roots, cheongung, gojija, earthworms, and jinjin mugwort in addition to the admiral blowfish, the cancer prevention or therapeutic effect of the composition of the present invention It seems to be because it works synergistically.

본 발명의 조성물에 함유되는 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 통상적인 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 현탁화제 등 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택적으로 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물을 정제 또는 경질캅셀제 등의 고형제형으로 제조할 경우, 부형제로서 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈 등이 사용될 수 있고, 붕해제로서 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘 등이 사용될 수 있다. 결합제로는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈 등이 사용될 수 있고, 활택제로서는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크 등으로부터 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 현탁화제로는 약제학 분야에서 통상적으로 사용되는 계면활성제 (예를 들어, 소르비탄 에스테르류, 또는 폴리소르베이트류 등)를 사용할 수 있다.As the pharmaceutically acceptable additive contained in the composition of the present invention, one or two or more of conventional excipients, disintegrants, binders, lubricants, suspending agents, and the like may be selectively used. For example, when the composition of the present invention is prepared in a solid form such as tablets or hard capsules, microcrystalline cellulose, lactose, low-substituted hydroxycellulose and the like can be used as excipients, sodium starch glycolate, anhydrous as a disintegrant. Calcium monohydrogen phosphate may be used. As the binder, polyvinylpyrrolidone, low-substituted hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl cellulose and the like can be used. The lubricant can be selected from magnesium stearate, silicon dioxide, talc and the like. In addition, as the suspending agent, surfactants (eg, sorbitan esters, polysorbates, etc.) commonly used in the pharmaceutical field may be used.

본 발명의 조성물은 고형 및 액상 형태를 포함한 다양한 형태의 제형으로 제제화할 수 있으며, 이들 제형은 정제, 캅셀제 (경질 또는 연질), 액제 (solution), 현탁제, 유제, 및 시럽제 등을 포함한다. 바람직하게는 액제, 현탁제, 유제, 및 시럽제 등의 액체 제형을 가질 수 있으며, 기능성 식품으로 제조할 수도 있다.The compositions of the present invention can be formulated in a variety of forms, including solid and liquid forms, which include tablets, capsules (hard or soft), solutions, suspensions, emulsions, syrups and the like. It may preferably have liquid formulations such as liquids, suspensions, emulsions, and syrups, and may also be prepared as a functional food.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구를 포함한 다양한 투여방법으로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 암 예방 또는 치료가 필요한 사람에게 1일 0.1 내지 1,000 mg/kg의 범위로 투여될 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 나이, 연령 및 성별과 같은 상태 및 질병의 경중 등에 따라 적당한 양으로 조정하여 투여될 수 있으며, 이러한 투여량은 임상적으로 환자의 치료 또는 예방에 종사하는 당업자라면 용이하게 조정할 수 있다.The composition of the present invention may be administered by various methods of administration, including oral or parenteral, and may be preferably administered orally. The composition of the present invention can be administered to a person in need of cancer prevention or treatment in the range of 0.1 to 1,000 mg / kg per day. However, the dosage may be adjusted to an appropriate amount depending on the condition such as age, age and gender and the severity of the disease, such dosage can be easily adjusted by those skilled in the art clinically engaged in the treatment or prevention of patients. Can be.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 간암, 폐암, 직장암, 위암, 유방암, 췌장암, 피부암, 자궁경부암, 대장암 및 식도암에 대하여 예방 또는 치료 효과를 갖는 것을 포함하나, 상기 예에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는, 위암, 대장암, 간암, 자궁경부암, 및/또는 식도암에 대하여 예방 또는 치료 효과를 갖는 것이다. In the present invention, the composition includes one having a prophylactic or therapeutic effect on liver cancer, lung cancer, rectal cancer, stomach cancer, breast cancer, pancreatic cancer, skin cancer, cervical cancer, colon cancer and esophageal cancer, but is not limited thereto. Preferably, it has a prophylactic or therapeutic effect against gastric cancer, colon cancer, liver cancer, cervical cancer, and / or esophageal cancer.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이 실시예에 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, this embodiment is for illustrative purposes only and the scope of the present invention is not limited to this embodiment.

실시예 1Example 1

참복 (검자주복 : Fugu rubripes rubripes)의 지느러미, 아가미, 눈을 제거하고, 개복하여 내장, 복어알, 그리고 피를 제거하여 흐르는 물에 1 시간 동안 씻어서 제독처리하였다. 제독된 복어 30 kg을 유근피 500 g, 천궁 500 g, 구기자 500 g, 지구자 500 g, 및 인진쑥 500 g과 함께 물 20 L 중에 혼합하였다. 상기 혼합물을 원통형 회분식 증류탑 (55 L 용량)에 주입하였다. 다음으로, 온도 130 ℃, 압력 3 kgF/cm2의 조건에서 약 6시간 동안 증류를 수행하였다.The fins, gills, and eyes of the abalone ( Fugu rubripes rubripes ) were removed, and the abdominal glands, puffer fish, and blood were removed, washed in running water for 1 hour, and detoxified. 30 kg of decontaminated puffer fish was mixed in 20 L of water with 500 g of rhizome skin, 500 g of hemunggi, 500 g of goji berries, 500 g of earthworms, and 500 g of jinjin mugwort. The mixture was injected into a cylindrical batch distillation column (55 L capacity). Next, distillation was performed for about 6 hours at the temperature of 130 degreeC and the pressure of 3 kgF / cm <2> .

그 결과, 탑상으로는 복어와 상기 5 종류의 한약재의 유효한 단백질, 펩티드 등을 포함하는 액상 추출물 30 L를 얻었으며, 탑의 하단에서는 증류되고 남은 고형 물질 20 kg을 얻었다. As a result, 30 L of a liquid extract containing blowfish and effective proteins, peptides, and the like of the five kinds of herbal medicines were obtained on the top, and 20 kg of the remaining solid material was obtained at the bottom of the tower.

이렇게 탑상으로부터 얻어진 액상 추출물에 대하여 항암 활성이 있는지 여부를 조사하였다. The liquid extract obtained from the column top was examined for anticancer activity.

실시예 2 : TE2, SW480, HepG2, HeLa, SNU-638, SNU-688, 및 AGS 세포를 이용한 항암 활성의 평가Example 2 Evaluation of Anticancer Activity Using TE2, SW480, HepG2, HeLa, SNU-638, SNU-688, and AGS Cells

실시예 1에서 제조된 복어와 5 종류의 한약재 추출물을 암 세포에 처리하여 암세포를 사멸시키는 효과가 있는지 여부를 조사하였다. 실험에 사용한 세포는 TE2 (인간 식도암 세포주; Cell Resource Center for Biomedical Research, Institute of Development, Aging and Cancer, Tohoku University, Japan; http://www.idac.tohoku.ac.jp/dep/ccr/; Catalog # TKG 0253), SW480 (인간 대장암 세포주, ATCC CCL-228) , HepG2 (인간 간암 세포주, ATCC HB-8065), HeLa (인간 자궁경부암 세포주, ATCC CCL-2), SNU-638 (인간 위암 세포주, 한국세포주은행 KCLB 00638), SNU-668 (인간 위암 세포주, 한국세포주은행 KCLB 00668), 및 AGS (인간 위암 세포주, 한국세포주은행 KCLB 21739)의 배양물에 농도별로 본 발명의 제독된 복어와 5 종 한약재 추출물을 처리한 다음, 세포의 생존에 미치는 효과를 측정하였다.The blowfish and five kinds of herbal extracts prepared in Example 1 were treated with cancer cells to investigate whether the cancer cells were killed. The cells used in the experiment were TE2 (human esophageal cancer cell line; Cell Resource Center for Biomedical Research, Institute of Development, Aging and Cancer, Tohoku University, Japan; http://www.idac.tohoku.ac.jp/dep/ccr/ ; Catalog # TKG 0253), SW480 (Human Colon Cancer Cell Line, ATCC CCL-228), HepG2 (Human Liver Cancer Cell Line, ATCC HB-8065), HeLa (Human Cervical Cancer Cell Line, ATCC CCL-2), SNU-638 (Human Gastric Cancer) Cellulose, Korea Cell Line Bank KCLB 00638), SNU-668 (Human Gastric Cancer Cell Line, Korea Cell Line Bank KCLB 00668), and AGS (Human Gastric Cancer Cell Line, Korea Cell Line Bank KCLB 21739) After treatment with five herbal extracts, the effect on cell survival was measured.

(1) 세포의 배양(1) Cell culture

본 실시예에서 TE2, SW480, HepG2 및 HeLa 세포는 10 % FBS가 보충된 DMEM 배지를 포함하는 직경 10 cm 세포 배양 접시에서 37 ℃, 5 % CO2의 배양기에서 배양하였다. SNU-638, SNU-668 및 AGS 세포주는 10 % FBS가 보충된 RPMI 배지를 포함하는 직경 10 cm 세포 배양 접시에서 37 ℃, 5 % CO2의 배양기에서 배양하였다.In this example, TE2, SW480, HepG2 and HeLa cells were cultured in a 37 cm, 5% CO 2 incubator in a 10 cm diameter cell culture dish containing DMEM medium supplemented with 10% FBS. SNU-638, SNU-668 and AGS cell lines were cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator in a 10 cm diameter cell culture dish containing RPMI medium supplemented with 10% FBS.

(2) 본 발명의 제독된 복어 및 5 종의 한약재 추출물의 처리(2) Treatment of admiral puffer fish and five herbal extracts of the present invention

실험 1 일째에, 상기에서 배양된 각 세포주 배양물을 96-웰 플레이트에서 웰 당 5 x 102 세포가 되도록 첨가하고, 웰당 배지를 200 ㎕ 씩 첨가하였다. 실험은 각 처리에 대하여 6 배수로 실험하였다. 본 실시예에 사용되는 복어와 5 종류의 한약재 추출물은 실시예 1과 동일한 방법으로 추출된 것이다.On day 1 of the experiment, each cell line culture incubated above was added to be 5 × 10 2 cells per well in a 96-well plate, and 200 μl of medium was added per well. Experiments were conducted in multiples of 6 for each treatment. Blowfish and five kinds of herbal extracts used in this embodiment are extracted in the same manner as in Example 1.

실험 2 일째에, 상기 96 웰 플레이트의 각 웰에 0.2 ㎛ 필터로 여과하여 멸균한 본 발명의 제독된 복어 및 5 종 한약재 추출물을 각각 1 ㎕, 2 ㎕, 4 ㎕, 10 ㎕, 및 20 ㎕ 씩 첨가하였다. 대조군 웰에는 아무것도 처리하지 않았다. On the second day of the experiment, 1 μl, 2 μl, 4 μl, 10 μl, and 20 μl of the detoxified blowfish and five herbal medicine extracts of the present invention, which were sterilized by filtration with 0.2 μm filters in each well of the 96 well plate, were sterilized. Added. No control wells were treated.

제독된 복어 및 5종 한약재 추출물로 처리된 세포 배양물을 37 ℃, 5 % CO2의 배양기에서 72 시간 동안 배양하였다. 제독된 복어 및 5 종 한약재 추출물로 처리한 72 시간 후에 각 웰에 MTT 시약 (세포 독성 확인에 널리 사용됨)을 50 ㎕ 씩을 첨가하고, 4 시간 동안 37 ℃, 5 % CO2 배양기에서 배양하였다. 다음으로, 각 웰로부터 배지와 MTT를 제거한 후, 각 웰에 100 ㎕의 DMSO 시약을 첨가하였다. 약 5 분 정도 웰 바닥에 있는 MTT를 DMSO로 녹인 다음, ELISA 리더를 이용하여 570 nm에서 형광을 측정하였다.Cell cultures treated with detoxified blowfish and five herbal extracts were incubated for 72 hours in an incubator at 37 ° C., 5% CO 2 . After 72 hours of treatment with detoxified puffer fish and five herbal extracts, 50 μl of MTT reagent (widely used for cytotoxicity confirmation) was added to each well and incubated in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 4 hours. Next, after removing the medium and MTT from each well, 100 μl of DMSO reagent was added to each well. MTT at the bottom of the well was dissolved in DMSO for about 5 minutes, and fluorescence was measured at 570 nm using an ELISA reader.

(3) 본 발명의 제독된 복어 및 5종 한약재 추출물이 세포 생존율에 미치는 영향(3) Effect of Admiralized Blowfish and Five Herbal Medicine Extracts of the Present Invention on Cell Viability

상기 측정 결과를 도 1 내지 7에 나타내었다. 도 1 내지 7은 각각 SW480, HepG2, TE2, SNU-668, AGS, HeLa 및 SNU-638 세포주에 대한 결과를 나타내는 것이다. 도 1 내지 7에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 추출물을 20 ㎕로 처리하였을 경우, 대조군의 세포 생존율을 1로 환산하였을 때, SW480, HepG2, TE2, SNU-668, AGS, HeLa 및 SNU-638 세포주는 각각 0.572, 0.586, 0.487, 0.121, 0.063, 0.126 및 0.443으로서 대조군에 비하여 유의한 세포 사멸 효과를 나타내었다. 상기 암 세포주 중에서 AGS 세포주가 세포 사멸효과에 가장 민감함을 알 수 있었다.The measurement results are shown in FIGS. 1 to 7. 1 to 7 show the results for SW480, HepG2, TE2, SNU-668, AGS, HeLa and SNU-638 cell lines, respectively. As shown in Figures 1 to 7, when treated with 20 μl of the extract of the present invention, the cell survival rate of the control group when converted to 1, SW480, HepG2, TE2, SNU-668, AGS, HeLa and SNU-638 cell line Were 0.572, 0.586, 0.487, 0.121, 0.063, 0.126 and 0.443, respectively, which showed significant cell killing effect compared to the control. Among the cancer cell lines, AGS cell line was found to be the most sensitive to the cell death effect.

본 발명의 암 예방 또는 치료용 조성물에 따르면, 암을 예방 또는 치료하는데 효과적으로 이용될 수 있다. According to the composition for preventing or treating cancer of the present invention, it can be effectively used for preventing or treating cancer.

도 1 내지 7은 본 발명의 제독된 복어 및 5 종 한약재의 혼합물의 수추출물을 암세포주 SW480, HepG2, TE2, SNU-668, AGS, HeLa 및 SNU-638 세포주에 각각 처리한 후, 세포 생존율에 대한 결과를 각각 나타내는 도면이다.Figures 1 to 7 are treated with cancer extracts of the mixture of admiral puffer fish and five herbal medicines of the present invention cancer cell lines SW480, HepG2, TE2, SNU-668, AGS, HeLa and SNU-638 cell lines, respectively, the cell survival rate It is a figure which shows each result about.

Claims (4)

물 1L에 제독된 복어; 유근피; 천궁; 구기자; 지구자; 및 인진쑥을 각각 500 내지 1,500 g; 5 내지 100 g; 5 내지 100 g; 5 내지 100 g; 5 내지 100 g; 및 5 내지 100 g의 비율로 포함하는 혼합물을 증류하여 얻어지는 수추출물 및 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물.Puffer fish detoxified with 1 liter of water; Root skin; Celestial arches; Wolfberry; Earth; And 500-1,500 g of phosphorus mugwort, respectively; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; 5 to 100 g; And a water extract obtained by distilling the mixture comprising a ratio of 5 to 100 g, and a pharmaceutically acceptable additive. 제1항에 있어서, 상기 증류가 회분식 증류탑에서 100 ℃ 내지 150 ℃의 온도, 압력 1 내지 5 kgF/cm2에서 2 내지 7 시간 동안 증류하여 이루어진 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the distillation is performed by distillation in a batch distillation column at a temperature of 100 ° C. to 150 ° C. and a pressure of 1 to 5 kgF / cm 2 for 2 to 7 hours. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 암은 식도암, 위암, 대장암, 자궁경부암 또는 간암인 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1 or 2, wherein the cancer is esophageal cancer, stomach cancer, colon cancer, cervical cancer, or liver cancer. 제1항 또는 제2항에 있어서, 액제, 현탁제, 유제, 및 시럽제로 이루어진 군으로부터 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1 or 2, having a formulation selected from the group consisting of liquids, suspensions, emulsions, and syrups.
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