KR100533520B1 - A skin-care agent containing Veronica Peregrina L. extract - Google Patents

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KR100533520B1 KR10-2004-0036449A KR20040036449A KR100533520B1 KR 100533520 B1 KR100533520 B1 KR 100533520B1 KR 20040036449 A KR20040036449 A KR 20040036449A KR 100533520 B1 KR100533520 B1 KR 100533520B1
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Abstract

본 발명은 선도초(Veronica peregrina L.) 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로서 좀더 상세히는 선도초(Veronica peregrina L.) 추출물을 0.001 ~ 30.0 중량% 함유하며 피부 노화방지, 자극완화 효과 및 미백효과가 우수한 피부외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an external composition for skin containing Veronica peregrina L. extract, and more specifically, 0.001 to 30.0 wt% of Veronica peregrina L. extract, which is an anti-aging, irritant and skin whitening agent. The present invention relates to an external skin composition having excellent effects.

Description

선도초 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물{A skin-care agent containing Veronica Peregrina L. extract}A skin-care agent containing Veronica Peregrina L. extract

본 발명은 선도초 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로, 좀더 상세히는 선도초 추출물을 0.001 - 30.0 중량% 함유하며 항산화효과, 기질 금속단백질 분해효소의 활성억제와 발현조절에 효과적이며 항염증효과, 티노시나제 활성 억제, 멜라닌 합성 억제 등에 효과가 있는 항노화, 자극완화 효과 및 미백효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an external composition for skin containing jujucho extract, more specifically, 0.001-30.0% by weight of jujucho extract, antioxidant effect, effective in inhibiting the activity and expression control of matrix metalloproteinase, anti-inflammatory effect The present invention relates to an external composition for skin having excellent anti-aging, stimulating effect and whitening effect, which are effective in inhibiting tinosinase activity, inhibiting melanin synthesis, and the like.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological)와 광노화(phtoaging) 두가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am. Acad. Dermatol., 25, 751-760(1991)]. 또한, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 프리라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. Skin aging can be divided into intrinsic chronological and phtoaging [Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol., 21, 610-613 (1989). Endogenous aging is a naturally occurring aging phenomenon caused by deterioration of physiological functions of living bodies with increasing age [Braverman IM et al .: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443 (1982). Photoaging means that the skin is repeatedly exposed to light to change the appearance or function of the skin [Ridder GM et al .: J. Am. Acad. Dermatol., 25, 751-760 (1991). In addition, skin aging may be caused by the activation of free radicals with ultraviolet rays, stress, disease conditions, environmental factors, wounds, and age, and when this condition is exacerbated, it destroys the antioxidant defense network existing in vivo, cells and Damage to tissues promotes adult disease and aging. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides, and nucleic acids, which are major constituents of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging.

기질 금속단백질 분해효소(matrix metalloprotease; MMP)는 연결 조직, 특히 콜라겐의 생리학적 및 병리학적 파괴에 있어 주요한 역할을 하는 효소군이다. 콜라겐 및 콜라게나제의 다양한 유형(MMP 유형)이 이 분야에서 알려져 있고, 상세한 설명은 미국 특허 출원 제08/588,771호에서 확인 할수 있다. MMP 발현에 영향을 끼치는 MMP의 저해제(즉, 프로티나제의 직접 저해제) 및 분자 경로의 저해제(즉, AP-1의 저해제)가 다른 분야에 알려져 있으며, 미국 특허 제588,771호에도 기재되어 있다.Matrix metalloprotease (MMP) is a family of enzymes that plays a major role in the physiological and pathological destruction of connective tissues, especially collagen. Various types of collagen and collagenase (MMP type) are known in the art and details can be found in US patent application Ser. No. 08 / 588,771. Inhibitors of MMPs (ie, direct inhibitors of proteinases) and inhibitors of molecular pathways (ie, inhibitors of AP-1) that affect MMP expression are known in other fields and are also described in US Pat. No. 588,771.

햇빛에 의해 손상된 피부의 외관을 개선하기 위한 치료로서 레티노이드를 사용하여 왔다. 미국 특허 제4,877,805호는 광에 의해 노화된 피부의 치료 방법을 개시하고 있다. 이 특허는 노화의 효과가 나타나기 시작할 때까지 광손상을 치료하기 위해 레티노이드를 도포함에 있어서는 약점이 있음을 시사하고 있다. 여러 가지 연구에서 모든 트란스 레티노익산을 사용하여 기존의 광손상된 피부의 외관을 개선시키는 방법이 연구되어 왔다[ Weinstein G.D.등, Arch. Dermatol., 127,659-665(1991); Weiss J.S. 등, J. Amer. Med. Assn., 259(4),527-532(1988)].Retinoids have been used as a treatment to improve the appearance of skin damaged by sunlight. U.S. Patent 4,877,805 discloses a method of treating skin that is aged by light. The patent suggests a weakness in applying retinoids to treat photodamage until the effects of aging begin to emerge. Various studies have been conducted to improve the appearance of existing photodamaged skin using all trans retinoic acid [Weinstein G.D. et al., Arch. Dermatol., 127,659-665 (1991); Weiss J.S. Et al., J. Amer. Med. Assn., 259 (4), 527-532 (1988).

레티노익산(Retinoic acid)은 UV-A에 의한 지질과산화(lipid per-oxidation)와 UV-B에 의한 오르니틴 디카복실라제 반응(ornithine decarboxylase reponse)을 억제하며, 피부의 광손상(photodamage)을 개선하여 준다[Francz P.I.등, Biol. Chem., 379(10),1263-1269(1998)]. 그러나 피부에 대한 자극이 강력하여 현재 임상적으로만 사용되고 있다. 미국 및 국내의 FDA에서는 화장품 원료로서의 사용을 금지하고 있다.Retinoic acid inhibits lipid per-oxidation by UV-A and ornithine decarboxylase reponse by UV-B and improves skin photodamage [Francz PI et al., Biol. Chem., 379 (10), 1263-1269 (1998). However, skin irritation is so strong that it is currently used only clinically. FDAs in the U.S. and Korea prohibit their use as cosmetic ingredients.

레티놀(Retinol;비타민A)의 피부주름 개선 정도는 레티노익산에 비하여 약하지만 물질의 안전성이 높아 현재 가장 널리 사용되고 있는 주름 방지제이다. 그러나 레티놀도 고농도로 사용하는 경우 피부 자극 등의 문제를 일으키고 있으며, 특히 자외선에 노출되면 강력한 피부 트러블의 원인이 된다고 알려져 있다. 나아가 레티놀은 그 자체의 안정성이 매우 낮아 공기중의 산소, 빛, 열에 의해 쉽게 산화되는 단점이 있다(대한민국특허공보 제10-0271315).Retinol (Vitamin A) improves the wrinkles of the skin compared to retinoic acid, but the safety of the material is the most widely used anti-wrinkle agent. However, retinol also causes problems such as skin irritation when used in high concentrations, especially when exposed to ultraviolet light is known to cause strong skin problems. Furthermore, retinol has a disadvantage in that its stability is very low and is easily oxidized by oxygen, light and heat in the air (Korean Patent Publication No. 10-0271315).

다음으로, 색소 침착에 의한 피부 변화이다. 피부는 태양광의 자외선으로부터 피부를 보호하기 위해 정상적으로 멜라닌을 생성한다. 멜라닌은 피부 세포의 일종인 멜라노사이트에서 생성되고, 피부표면에 분포되어 인체에 유해한 자외선을 차단하는 자연적인 스크리닝 기능을 가지고 있다. 멜라닌 생성 기전에는 멜라노사이트에서 합성되는 티로시나제라는 효소가 있다. 티로시나제는 티로신이라는 아미노산을 기질로 하여 도파(DOPA)를 거쳐 도파퀴논(Dopaquinone)을 생성시키며, 도파퀴논으로부터 여러 단계의 산화 축합 반응으로 흑색 색소인 멜라닌이 생성된다. 이미 아스코르빈산(일본특허공개 평4-9320), 하이드로퀴논(일본특허공개 평6-192062), 코직산(일본특허공개 소56-7710), 알부틴(일본특허공개 평4-9315) 및 일부의 추출물등이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나, 처방계 중에서의 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 그리고 티로시나제의 억제효과는 입증되었으나, 실제 생체 레벨과 유사한 실험에서는 그 효과가 낮게 나타난다. Next is skin change by pigmentation. The skin normally produces melanin to protect the skin from the sun's ultraviolet rays. Melanin is produced from melanocytes, a kind of skin cells, and has a natural screening function that is distributed on the surface of the skin and blocks ultraviolet rays harmful to the human body. There is an enzyme called tyrosinase that is synthesized in melanocytes. Tyrosinase generates dopaquinone via dopa (DOPA) based on an amino acid called tyrosine, and melanin, which is a black pigment, is produced by several stages of oxidative condensation reaction from dopaquinone. Ascorbic acid (JP-A 4-9320), hydroquinone (JP-A-6-192062), kojic acid (JP-A-56-7710), arbutin (JP-A 4-9315) and some Although extracts have tyrosinase inhibitory activity and are used as whitening cosmetics, their use is limited due to poor stability in the prescription system, discoloration due to poor coloration, off-flavor, efficacy at the biological level, unclear effect and safety issues. It's happening. And the inhibitory effect of tyrosinase has been demonstrated, but the effect is low in experiments similar to the actual biologic level.

최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연 추출물로부터 얻어진 항산화, 주름완화, 미백 등의 기능을 가진 기능성 화장료(functional cosmetics)에 많은 관심이 집중되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. 예를 들어, 미국 특허공보 US 5,972,341는 코미포라(Commiphora)속 식물, 특히, 코미포라 무쿨(Commiphora mukul)추출물의 주름개선 효과에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평9-672662 는 히알우로니다제(Hyaluronidase)억제 효능을 가지는 해초류 추출물들에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평10-85905은 와카메(Wakame)로부터 추출된 푸코이단 (Fucoidan)의 피부감촉 개선효과에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평2-245087은 사르가숨(Sargassum)속 추출물의 항산화 효과에 관하여 기술하고 있다; 일본특허공개 평3-294384는 히지키아(Hizikia)속으로부터 추출된 항산화 조성물에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평7-10769는 수렴효과(astringent effect)가 있는 페오피시에(Phaeophyceae)강 추출물에 관하여 기술하고 있다.Recently, in order to reduce skin irritation caused by various chemicals, a lot of attention has been focused on functional cosmetics having functions such as antioxidants, wrinkle reduction, and whitening obtained from natural extracts. Natural ingredients have less side effects on the skin, and as the consumer's response to cosmetics using natural ingredients has increased recently, the development value of cosmetics as a raw material for cosmetics is increasing. For example, US Pat. No. 5,972,341 describes the antiwrinkle effect of a plant of the genus Commiphora, in particular Commiphora mukul extract. Japanese Patent Application Laid-open No. Hei 9-672662 describes seaweed extracts having a hyaluroronidase inhibitory effect. Japanese Patent Application Laid-open No. Hei 10-85905 describes the skin texture improvement effect of Fucoidan extracted from Wakame. Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-245087 describes the antioxidant effect of Sargassum genus extract; Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-294384 describes an antioxidant composition extracted from the genus Hijikia. Japanese Patent Laid-Open No. 7-10769 describes a extract of Phaeophyceae river having an astringent effect.

중국의 중화본초에 따르면, 선도초(仙挑草)는 비단풀, 내금초, 점박이풀로 불리고 지금(地錦), 지면(地綿), 초혈갈(草血竭), 혈견수(血見愁), 오공초(蜈蚣草) 등의 여러 이름을 가지며, 일년생 소교목으로 줄기와 가지는 섬세하고 엷은 선홍색으로 가는 털이 나있는 한해살이 풀이다.According to China's Chinese herbaceous plant, judocho is called silk grass, naegumcho and spotted grass, and it is now, ground, super blood gallon and blood ) It has various names such as Ogongcho (蜈蚣 草), and is a yearly small arboreous tree with stems and branches that are delicate and pale crimson hairs.

본 발명은 여러 천연물들 중 선도초를 선택하여, 피부외용제의 원료로 사용함으로써 우수한 기능성을 갖는 피부외용제를 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a skin external preparation having excellent functionality by selecting a fresh seed among various natural products and using it as a raw material of the skin external preparation.

즉, 선도초 추출물을 유효성분으로 함유시켜 항산화효과, 콜라게나아제 발현저해효과, 피부 잔주름 완화효과 등 우수한 항노화 효과, 티로시나아제 저해효과, 멜라닌생성 억제효과 등 우수한 미백효과 및 염증매개 물질에 의한 피부 자극완화 효과 등에 있어 탁월한 효과를 나타내는 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다. In other words, it contains the extract of judochocho as an active ingredient, and it has excellent anti-aging effects such as antioxidant effect, collagenase expression inhibition effect, skin wrinkle relief effect, excellent whitening effect such as tyrosinase inhibitory effect and melanogenesis inhibitory effect. It is to provide an external skin composition for showing an excellent effect in the skin irritation-reducing effect and the like.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명자들은 다양한 천연물들 중에서 피부외용제로서의 응용 가능성을 연구한 결과, 선도초 추출물이 항산화 효과, 콜라게나아제 발현 저해효과, 피부 잔주름 완화효과, 티로시나아제 활성 억제 효과, 멜라닌 합성 억제효과, 자극완화 효과를 측정한 결과 항노화, 미백 및 자극완화 효과 등이 우수한 것을 확인하고 이를 함유하는 피부외용제 조성물을 제조하였다.In order to achieve the above object, the present inventors have studied the possibility of applying as a skin external preparation among various natural products, the extract of juichocho extract antioxidant effect, collagenase expression inhibitory effect, skin wrinkle relief effect, tyrosinase activity inhibitory effect, As a result of measuring melanin synthesis inhibitory effect and stimulating effect, it was confirmed that the anti-aging, whitening and stimulating effect is excellent, and prepared the external preparation composition containing the same.

본 발명은 선도초(Veronica peregrina L.) 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an external composition for skin containing Veronica peregrina L. extract.

또한, 본 발명은 상기 선도초(Veronica peregrina L.) 추출물이 전체 조성물 의 총중량을 기준으로 0.001~30.0중량%로 함유되는 것을 특징으로 한다. 추출물의 함량이 0.01중량% 미만이면 효능이 미약하며, 30.0중량%를 초과하면 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효능의 증가가 나타나지 않아 경제적이지 못하다.In addition, the present invention is characterized in that the extract of Verona peregrina L. is contained in 0.001 ~ 30.0% by weight based on the total weight of the total composition. If the content of the extract is less than 0.01% by weight, the efficacy is weak, and if the content exceeds 30.0% by weight it is not economical because there is no apparent increase in efficacy as the content increases.

또한, 본 발명은 상기 선도초 추출물이 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 1종 이상을 용매로 사용하여 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention using the at least one selected from the group consisting of purified water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane as the solvent, the cold extract, heating at room temperature A liquid obtained by filtration, and further characterized in that it is obtained by concentration under reduced pressure or lyophilization.

뿐만 아니라, 본 발명은 상기 피부외용제 조성물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물인 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized in that the topical skin composition is a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형으로 제형화되는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized in that the cosmetic composition is formulated in a lotion, gel, water-soluble liquid, cream, essence, oil-in-water (O / W) type or water-in-oil (W / O) type.

선도초 추출물은 캡슐제, 액상제, 연고제, 첩부제 또는 약학적으로 허용되는 담체를 이용한 서방화제제 등의 약학 조성물로 제제화 할 수 있으며, 약리학적으로 허용되는 기제, 운반제, 부형제, 결합제(예: 전분, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 당밀, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐에테르, 폴리비닐 피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스), 분쇄제(예: 한천, 전분, 젤라틴가루, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 및 알긴산 나트륨), 윤활제(예: 스테아린산 마그네슘, 활석, 수첨 식물유) 및 착색제 등을 포함한다. 상기 운반제 및 부형제로는 젖당, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 감자녹말, 옥수수녹말, 탄산칼슘, 인산칼슘 및 셀룰로오스 등을 사용한다. Derivative extract can be formulated into pharmaceutical compositions, such as capsules, liquids, ointments, patch or sustained-release agent using a pharmaceutically acceptable carrier, pharmacologically acceptable bases, carriers, excipients, binders ( Examples: starch, tragacanth gum, gelatin, molasses, polyvinyl alcohol, polyvinylether, polyvinyl pyrrolidone, hydroxypropyl cellulose, methyl cellulose, ethyl cellulose and carboxymethyl cellulose), grinding agents (e.g., agar, Starch, gelatin powder, sodium carboxymethyl cellulose, calcium carboxymethyl cellulose, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium bicarbonate and sodium alginate), lubricants (e.g. magnesium stearate, talc, hydrogenated vegetable oils), colorants and the like. The carriers and excipients include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, corn starch, calcium carbonate, calcium phosphate and cellulose.

상기 외에도 안정화제, 용해보조제, 경피흡수 촉진제 등의 보조제 방향제, 방부제 등의 첨가제가 더 첨가될 수 있다.In addition to the above, additives such as adjuvants such as stabilizers, dissolution aids, transdermal absorption accelerators, and preservatives may be further added.

이와 같이 제조되는 약학 조성물은 증상에 따라 일일 1회 내지 수회 피부에 적용할 수 있으며 증상의 호전정도에 따라 적용량을 조절할 수 있다.The pharmaceutical composition prepared as described above may be applied to the skin once or several times a day depending on the symptoms and may adjust the amount applied according to the improvement of symptoms.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these examples are merely illustrative of the present invention and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예 1: 선도초 추출물 제조Example 1: Preparation of juniper extract

세절하여 음건한 선도초를 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조시켜, 감압농축물 및 동결건조물이 0.001~30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 선도초 추출물을 제조하였다.The dried and dried fresh lead herb was refluxed three times for 5 hours with an aqueous 95% (V / V) ethanol solution, and the mixture was cooled and then filtered through Whatman # 5 filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 50 ° C. or lower, and the dried extract was prepared using one or more solvents selected from purified water, ethanol, butylene glycol, and propylene glycol to contain 0.001 to 30.0 wt% of the reduced pressure concentrate and lyophilisate. An extract was prepared.

실험예 1: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험Experimental Example 1 Experiment of Measuring Antioxidant Effect Using NBT Method

실시예 1에서 수득한 선도초 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 항산화제로 잘 알려진 BHT를 비교샘플로 하고 NBT(Nitro Blue Tetrazolium)법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.In order to confirm the antioxidant effect of the extract of judochocho obtained in Example 1, BHT, which is well known as an antioxidant under laboratory conditions, was compared and the antioxidant activity was measured using NBT (Nitro Blue Tetrazolium) method.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시킨다. 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.In order to measure the antioxidant effect, the active oxygen produced by xanthine and xanthine oxidase is measured by the NBT method, and the effect of the test substance removing the active oxygen, that is, the active oxygen scavenging effect, is evaluated. Free radicals are produced by xanthine and xanthine oxidase. This active oxygen reacts with Nitro Blue Tetrazolium (NBT) to measure the active oxygen scavenging rate by measuring the blue color produced by this at a wavelength of 560 nm.

측정방법으로서 As a measuring method

1. 0.05M Na2CO3 ------------------------------------- 2.4ml0.05M Na 2 CO 3 ------------------------------------- 2.4ml

2. 3mM 크산틴 용액---------------------------------- 0.1ml 2.3mM xanthine solution ---------------------------------- 0.1ml

3. 3mM EDTA 용액------------------------------------ 0.1ml 3.3mM EDTA Solution ------------------------------------ 0.1ml

4. BSA 용액----------------------------------------- 0.1ml 4.BSA solution ---------------------------------------- 0.1ml

5. 0.72mM NBT 용액---------------------------------- 0.1ml 5.0.72 mM NBT solution ---------------------------------- 0.1ml

6. 크산틴 옥시다제 용액----------------------------- 0.1ml 6.Xanthine Oxidase Solution ----------------------------- 0.1ml

7. 6mM CuCl2 용액----------------------------------- 0.1ml7.6 mM CuCl 2 solution ----------------------------------- 0.1ml

① 바이엘병에 1,2,3,4,5를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.① Add 1,2,3,4,5 to Bayer's bottle and add 0.1ml of sample solution to it and leave at 25 ℃ for 10 minutes.

② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.② Add 6 and stir quickly, and start incubation for 20 minutes at 25 ℃.

③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.③ After that, add 7 to stop the reaction and measure the absorbance St at 560nm.

④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.④ For the blank test, measure the absorbance Bt by using distilled water instead of the sample solution as above.

⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.⑤ Also, the blank of the sample solution is operated in the same manner using distilled water instead of 6 to measure the absorbance Bo.

효과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 그 결과는 표 1에 나타내었다.The effect was calculated by Equation 1, and the results are shown in Table 1.

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100% Inhibition = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] X 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도 St: absorbance at 560 nm after enzyme reaction of sample solution

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도 Bt: absorbance at 560 nm after enzymatic reaction of blank test solution

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도 So: absorbance at 560 nm before reaction without enzyme addition of sample solution

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도 Bo: absorbance at 560 nm before reaction without enzyme in blank test solution

표 1에서 확인할 수 있도록 선도초 추출물이 우수한 항산화 효과를 나타내었고, 선도초 추출물은 BHT보다 우수한 항산화력을 갖고 있음이 확인되었다.As shown in Table 1, jujucho extract showed an excellent antioxidant effect, judocho extract was confirmed to have a superior antioxidant power than BHT.

시료명Sample Name 항산화효과(%)Antioxidative effect(%) 선도초 추출물 0.1중량%Udoncho extract 0.1% by weight 97%97% 선도초 추출물 0.01중량%0.01% by weight of judocho extract 77%77% 선도초 추출물 0.001중량%0.001% by weight of fresh seaweed extract 37%37% BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 88%88%

실험예 2: 자유라디칼 소거활성 측정 실험Experimental Example 2: Free radical scavenging activity measurement experiment

실시예 1에서 수득한 선도초 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 BHT와 같은 항산화제를 비교샘플로 하고 DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.In order to determine the antioxidant effect of the extract of judochocho obtained in Example 1, an antioxidant such as BHT was compared with a sample and the antioxidant activity was measured using the DPPH method.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.DPPH method measures the antioxidant activity by reducing power using a free group called DPPH (2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical). The free radical scavenging rate is measured at a wavelength of 560 nm by comparing the degree to which the DPPH is reduced by the test substance to reduce the absorbance.

DPPH 자유라디칼 소거활성 측정을 위하여 0.1%, 0.01%, 0.001% 농도의 선도초 추출물을 준비하였다. 상기 농도의 추출물을 96웰 플레이트에 각각 넣고, 여기에 100uM 에탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200㎕가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 방치한 후 560nm에서 흡광도를 측정하였다. 자유라디칼 소거활성(%)은 다음의 수학식 2로 산출하였다.For the measurement of DPPH free radical scavenging activity, the extracts of the vinegar were prepared in 0.1%, 0.01%, 0.001% concentration. Extracts of the above concentrations were placed in 96-well plates, respectively, and DPPH prepared in 100 uM ethanol solution was added to obtain a total volume of 200 μl. After leaving it at 37 ° C. for 30 minutes, absorbance was measured at 560 nm. Free radical scavenging activity (%) was calculated by the following equation.

자유라디칼소거활성(%)= 100-(B/A)X100Free radical scavenging activity (%) = 100- (B / A) X100

A: 본 발명 추출물을 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도A: absorbance of control wells not treated with the extract of the present invention

B: 본 발명 추출물을 처리한 실험군 웰의 흡광도 B: Absorbance of Experimental Wells Treated with Extracts of the Invention

표 2에서 확인할 수 있듯이 선도초 추출물은 항산화제로 많이 이용되고 있는 BHT보다 우수한 항산화 효과를 갖고 있음을 알 수 있었다.As can be seen in Table 2, the extract of judochocho was found to have an excellent antioxidant effect than BHT which is widely used as an antioxidant.

시료명Sample Name 항산화효과(%)Antioxidative effect(%) 선도초 추출물 0.1중량%Udoncho extract 0.1% by weight 93%93% 선도초 추출물 0.01중량%0.01% by weight of judocho extract 63%63% 선도초 추출물 0.001중량%0.001% by weight of fresh seaweed extract 41%41% BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 85%85%

실험예 3: 인비트로 기질 금속단백질분해효소 억제 어세이(in vitro MMP-1 inhibition assay)Experimental Example 3: In vitro MMP-1 Inhibition Assay

기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 저해활성은 테스트관 내에서 스크리닝 타입의 생화학적 모델에서 측정하였는데 이는 정제된 콜라게나제 및 이의 기질인 플루오레세인에 접합된 콜라겐과 젤라틴의 이용을 기초로 한다(EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라프루브). 클로스트리디움 히스토리티컴으로부터 정제된 콜라게나제를 상기 EnzChek(상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트 내에 공급하였다. 돼지 피부로부터 정제되고 플로오레세인에 접합된 DQ-콜라겐과 0.05M 트리스-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl2 및 0.2mM 나트륨 아지드(pH 7.6)로 이루어지는 반응완충액은 EnzChek(상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트(몰큘라 프로브스)를 이용하였다. 선도초 추출물은 상기 반응완충액 내에 용해시켰다. 이는 0.01중량%, 0.5중량%, 0.1중량%에서 테스트하였다. 테스트 추출물의 희석액은 25㎍/㎖의 DQ-콜라겐 및 0.1U/㎖의 콜라게나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.Substrate metalloproteinase (MMP-1) inhibitory activity was measured in vitro in a screening type biochemical model based on the use of collagen and gelatin conjugated to purified collagenase and its substrate, fluorescein. (EnzChek ™ Gelatinase / Collagenase Kit, Molecule Prove). Collagenase purified from Clostridium historiescom was supplied in the EnzChek ™ gelatinase / collagenase kit. The reaction buffer consisting of DQ-collagen purified from porcine skin and conjugated to fluorescein with 0.05M Tris-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl 2 and 0.2mM sodium azide (pH 7.6) was identified as EnzChek® gelatinase. Collagenase kit (Molcula Probes) was used. The fresh seaweed extract was dissolved in the reaction buffer. It was tested at 0.01%, 0.5%, 0.1% by weight. Dilutions of the test extracts were incubated with 25 μg / ml of DQ-collagen and 0.1 U / ml of collagenase for 15 minutes, 45 minutes, and 120 minutes at room temperature.

각각의 실험조건에서 콜라게나제와 DQ-콜라겐 혼합물에 상응하는 대조용 혼합물(control)도 동일하게 항온처리하였다. 또한 각각의 실험 조건에서 Blank, 이하 '효소 비함유 blank'이라 칭하는 샘플은 DQ-콜라겐의 존재 및 콜라게나제의 부재하에서 항온처리하였다. 각각의 실험은 3회 수행하였다.In each experimental condition, the control corresponding to the collagenase and DQ-collagen mixture was also incubated in the same manner. Also in each experimental condition a sample called Blank, hereinafter 'enzyme free blank', was incubated in the presence of DQ-collagen and in the absence of collagenase. Each experiment was performed three times.

15분, 45분, 120분 경과 후 DQ-콜라겐의 분해에 상응하는 신호는 형광측정기(여기:485nm, 방출 505nm)로 측정하였다. '효소 비함유 blank' 형광값을 기준으로 하여 각각의 샘플의 형광값을 측정하였다. 결론적으로 선택된 실험 조건하에서 0.01 내지 0.1중량%에서 테스트된 선도초 추출물은 투여랑 의존성 항콜라게나제/젤라티나제 활성을 보유하였다. After 15, 45 and 120 minutes, the signal corresponding to the degradation of DQ-collagen was measured with a fluorometer (excitation: 485 nm, emission 505 nm). The fluorescence value of each sample was measured based on the 'enzyme free blank' fluorescence value. In conclusion, the herbaceous extract tested at 0.01 to 0.1% by weight under selected experimental conditions retained dose dependent anticollagenase / gelatinase activity.

결과는 표 3에 나타냈으며 선도초 추출물을 0.1중량% 처리시 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성을 78% 억제하였으며 이는 녹차추출물의 저해 효과와 유사하게 나타났다.The results are shown in Table 3. When 0.1% by weight of judocho extract, the collagen degrading activity of Clostridium collagenase was inhibited by 78%, which was similar to the inhibitory effect of green tea extract.

시료명Sample Name 저해율(%)% Inhibition 선도초 추출물 0.1중량%Udoncho extract 0.1% by weight 7878 선도초 추출물 0.05중량%Udoncho extract 0.05% by weight 5959 선도초 추출물 0.01중량%0.01% by weight of judocho extract 3232 녹차추출물 0.2중량%0.2% by weight of green tea extract 7979

실험예 4: 자외선 조사 후 선도초 추출물에 의한 MMP-1 발현억제 평가Experimental Example 4: Evaluation of the inhibition of MMP-1 expression by the extract of judo vinegar after ultraviolet irradiation

본 실험예는 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 ELISA를 실시하였다. In this experimental example, ELISA was performed to measure the concentration of MMP-1 after UV irradiation and sample addition of the fresh seaweed extract obtained in Example 1.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 6.3J/㎠의 에너지로 조사하였다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간을 유지시켰다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96웰에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분간 반응시켰다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질용액(1㎎/㎖ ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였다.Human dermal fibroblasts were irradiated with UVA at an energy of 6.3 J / cm 2 using a UV chamber. UV irradiation amount and incubation time were established through preliminary experiments to maximize the expression of MMP in fibroblasts. The negative control was wrapped in tinfoil to keep the same time in the environment of UVA. UVA emission was measured using a UV radiometer. The cells during the UVA irradiation were intact in the previously dispensed medium and irradiated with UVA, exchanged with the medium containing the sample, and then cultured for 24 hours, and the medium was recovered and coated in 96 wells. The primary antibody (MMP-1 (Ab-5) monoclonal antibody) was treated and reacted at 37 ° C. for 60 minutes. After reacting the secondary antibody anti-mouse IgG (whole mouse, alkaline phosphatase conjugated) again for about 60 minutes, the alkaline phosphatase substrate solution (1 mg / ml ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer solution) was reacted at room temperature for 30 minutes and then Absorbance was measured at 405 nm with a plate reader. As a control, one without addition of a sample was used.

자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 선도초 추출물은 68% 이상의 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율에 비해 상당히 우수한 결과를 나타내었다(표 4).Compared with the control group that did not process the MMP-1 expression induced by UV irradiation, the extract of judochocho showed more than 68% inhibition rate, which was significantly superior to the inhibition rate of the retinol used as a control group (Table 4). ).

시험군Test group MMP-1 발현억제율(%)MMP-1 expression inhibition rate (%) 대조군Control -- 선도초 추출물 0.05중량%Udoncho extract 0.05% by weight 6868 선도초 추출물 0.01중량%0.01% by weight of judocho extract 3636 레티놀Retinol 4747

실험예 5: 티로시나제 활성 억제 실험Experimental Example 5: Inhibition of Tyrosinase Activity

티로시나제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 Sigma 사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 L-티로신(Sigma)은 0.05M 인산나트룸 완충용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1㎎/㎖ 용액으로 만들어 사용하였다. 선도초 추출물은 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 적당한 농도로 조절하여 용해한 후 사용하였다. L-티로신 용액 0.5 ㎖를 시험관에 넣고 여기에 선도초 추출물 시료액 0.5㎖을 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후 각 시료액에 200unit/㎖ 티로시나제 0.5㎖를 첨가하고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시킨 후 분광광도계를 파장 475nm에서의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 상기 시료 대신 완충용액 0.5㎖를 넣은 것을 사용하였다.Tyrosinase was isolated and purified from mushrooms and purchased from Sigma. Substrate L-tyrosine (Sigma) was dissolved in 0.05M sodium phosphate buffer (pH 6.8) to make a 0.1mg / ㎖ solution was used. Judocho extract was used after dissolving in an appropriate concentration in 0.05M sodium phosphate buffer (pH 6.8). 0.5 ml of L-tyrosine solution was placed in a test tube, and 0.5 ml of fresh vinegar extract sample solution was added thereto and left for 10 minutes in a 37 ° C thermostat. Thereafter, 0.5 ml of 200 unit / ml tyrosinase was added to each sample solution, and the mixture was reacted at 37 ° C for 10 minutes. The test tube containing the reaction solution was placed on ice, quenched to stop the reaction, and the spectrophotometer measured absorbance at a wavelength of 475 nm. As a control, 0.5 ml of buffer solution was used instead of the sample.

상기 각 시료의 티로시나아제 활성저해율은 수학식 3에 따라 계산하고 그결과를 표 5에 나타내었다.The tyrosinase activity inhibition rate of each sample was calculated according to Equation 3 and the results are shown in Table 5.

효소활성저해율(%) = 100-(비교군흡광도/대조군흡광도)X100Enzyme Inhibition Rate (%) = 100- (Comparative Absorption / Control Absorption) X100

시료명Sample Name 티로시나제 저해율(%)Tyrosinase inhibition rate (%) 대조군Control -- 선도초 추출물 0.05중량%Udoncho extract 0.05% by weight 61%61% 선도초 추출물 0.01중량%0.01% by weight of judocho extract 29%29% 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 63%63%

실험예 6: B16F1 멜라닌 세포를 이용한 멜라닌 합성억제 실험Experimental Example 6: Melanin synthesis inhibition experiment using B16F1 melanocytes

실시예 1에서 수득한 선도초 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 세포에 대한 멜라닌 합성억제 효과를 측정하였다.The melanin synthesis inhibitory effect on B16F1 melanocytes was measured in order to confirm the whitening effect of the extract of judochocho obtained in Example 1.

B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라닌 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 x 106cell 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신(trypsin)-EDTA로 떼어 낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1㎖를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 4에 의하여 계산하였다.The melanin synthesis inhibitory effect of B16F1 melanocytes was measured as follows. B16F1 melanocytes were dispensed in 6-well plates at a concentration of 2 x 10 6 cells per well, and the cells were attached and incubated for 72 hours by treating the sample at a concentration that does not cause toxicity. After 72 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, the number of cells was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Quantification of intracellular melanin was carried out with a slight modification of the method of Rotan: Cancer Res. , 40: 3345-3350, 1980. The cell pellet was washed once with PBS, and then 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added to vortex for 5 minutes to disrupt the cells. Melanin was extracted by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell filtrate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 minutes), and then measured the absorbance of melanin at 405 nm with a microplate reader. Percent inhibition of production was measured. Melanin production inhibition rate (%) of B16F1 melanocytes was calculated by the equation (4).

저해율 (%) = [(A-B)/A] X 100% Inhibition = [(A-B) / A] X 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Melanin amount in wells without sample

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Melanin amount in the wells to which the sample was added

B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 억제효과를 시험한 결과 선도초 추출물은 0.05%에서 25%의 멜라닌 생성 억제효과를 나타내어 알부틴과 유사한 생성억제효과를 나타내었다(표 6).As a result of testing the melanin synthesis inhibitory effect of B16F1 melanin cells, the extract of jujucho showed a melanin production inhibitory effect of 0.05% to 25%, showing a similar production inhibitory effect to arbutin (Table 6).

시료명Sample Name 멜라닌 합성 저해효과(%)Melanin Synthesis Inhibitory Effect (%) 대조군Control -- 선도초 추출물 0.05중량%Udoncho extract 0.05% by weight 25%25% 선도초 추출물 0.01중량%0.01% by weight of judocho extract 16%16% 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 27%27%

실험예 7: 자외선조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제 효과Experimental Example 7: Inhibitory Effect of Prostaglandin Biosynthesis by UV Irradiation

본 실험예는 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물의 프로스타글란딘 생합성 억제 효과를 평가하기 위하여 사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(Keratinocyte)를 24-웰 시험 플레이트에 5x104개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. FBS가 포함되지 않은 배지로 교체하고, 18시간동안 배양한 다음, 상기의 각질형성세포에 최종농도가 50uM이 되도록 아스피린(aspirin)을 처리하여 각질형성세포에 존재하는 프로스타글란딘 생합성 효소(prostaglandin E2 synthetase, 또는 cyclooxygenase, 이하 COX)의 활성을 제거하였다. 아스피린 처리 2시간 후에 각질형성세포가 들어있는 각 웰을 PBS로 2회 세척하고 각 웰에 100㎕의 PBS를 넣었다. 이 각질형성세포에 UVB 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 30mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액(keratinocyte growth media, Clonetics, Biowhittacker사, MD, USA) 250㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 선도초 추출물을 처리한 후 16시간동안 배양하였다. 배양 상층액을 적당량 취하여 16시간동안 생합성된 PGE2(prostaglandin E2)를 정량함으로서 선도초 추출물의 프로스타글란딘 억제효과를 판단하였다. PGE2의 양은 효소면역분석법(enzyme immunoassay)를 이용하여 정량화하였으며 실험결과 선도초 추출물은 자외선에 의한 프로스타글란딘의 생성을 효과적으로 억제함을 알 수 있었다. 특히 생성되는 PGE2는 주로 COX-2 효소에 의해 만들어지는 것으로 알려져 있으므로 상기 실험을 통해 선도초 추출물이 COX-2 효소의 유도작용 또는 활성을 억제함을 알 수 있다(표 7).In this experimental example, in order to evaluate the inhibitory effect of prostaglandin biosynthesis of judochori extract obtained in Example 1, 5 × 10 4 keratinocytes isolated from epidermal tissue were put on a 24-well test plate and attached for 24 hours. I was. After replacing with FBS-free medium and incubating for 18 hours, prostaglandin biosynthetic enzymes (prostaglandin E 2 synthetase) present in keratinocytes were treated with aspirin to achieve a final concentration of 50 uM on the keratinocytes. , Or cyclooxygenase (hereinafter referred to as COX) was removed. Two hours after aspirin treatment, each well containing keratinocytes was washed twice with PBS and 100 μl of PBS was added to each well. The keratinocytes were irradiated with UV 30 mJ / cm 2 using a UVB lamp (Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki, Japan), and then PBS was removed and each cell was prepared with keratinocyte growth media (Clonetics, Biowhittacker, MD, USA) 250 μl was added. After treatment with the extract of the vinegar to be evaluated here was incubated for 16 hours. An appropriate amount of the culture supernatant was taken to quantify PGE 2 (prostaglandin E 2 ) biosynthesized for 16 hours to determine the prostaglandin inhibitory effect of the extract of Judo. The amount of PGE 2 was quantified using an enzyme immunoassay, and the results showed that the extract of edodes effectively inhibited the production of prostaglandins by UV light. Particularly, the produced PGE 2 is known to be mainly produced by the COX-2 enzyme, and thus, it can be seen from the above experiment that the extract of judocho inhibits the induction or activity of the COX-2 enzyme (Table 7).

시료명Sample Name PGE2 억제율(%)PGE 2 Inhibition Rate (%) (-) UV B(-) UV B -- (+) UV B(+) UV B -- (+) UV B + 선도초 추출물 0.05중량%(+) UV B + fresh vinegar extract 0.05% by weight 67%67% (+) UV B + 선도초 추출물 0.01중량%(+) UV B + fresh seaweed extract 0.01% by weight 25%25%

실시예 2 내지 4 및 비교예 1Examples 2 to 4 and Comparative Example 1

실시예 1에서 수득한 선도초 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 잔주름 개선효과와 피부미용효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.A cosmetic containing the extract of judochocho obtained in Example 1 was prepared and evaluated for the effect of improving skin wrinkles and skin beauty by performing a comparative experiment with Comparative Example 1.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 8에 나타낸 바와 같다. 우선 표 8에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 2 내지 4, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 2 내지 4에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 3개월간 도포하였다.The cosmetics used in the comparative experiments are in the form of a cream, the composition of which is shown in Table 8. First, the phase b) recorded in Table 8 is heated and stored at 70 ° C. To this, a) phase is added, and after pre-emulsification, it is emulsified uniformly with a homomixer, and then cooled slowly to prepare a cream (Examples 2 to 4, Comparative Example 1). 20 experimenters (20-35 year old female) applied the cream prepared in Examples 2 to 4 on the right side of the face and the cream prepared in Comparative Example 1 twice on the left side of the face for 3 consecutive months. It was.

실험완료 후 피부 잔주름 완화효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부영상분석기(skin visiometer SV600, C+K, Germany)로 눈가 잔주름의 상태를 비교한다.After completion of the experiment, the skin wrinkle relief effect was collected before and after using the product for 2 months by using a silicone resin copy (replica) around the face of the eyelids. Compare the condition of fine lines around the eyes.

원료Raw material 실시예 2Example 2 실시예 3Example 3 실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 88 88 88 스테아린산Stearic acid 22 22 22 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic cholesterol 22 22 22 22 스쿠알란Squalane 44 44 44 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 66 66 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mol addition) alcohol ester 33 33 33 33 글리세릴모노스테아린산아스테르Glyceryl monostearic acid ester 22 22 22 22 I 선도초 추출물Fresh seaweed extract 1010 1One 0.10.1 -- 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 55 55 55 정제수Purified water 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity

주)단위: 중량%Note) Unit: Weight%

표 9는 실시예 4에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 1의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 표 9에서 나타난 바와 같이 선도초 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈주위 피부에서 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있다.Table 9 compares the average eye wrinkle depth and wrinkle reduction rate of the experimenter using the cream prepared in Example 4 with the experimenter using the cream of Comparative Example 1. As shown in Table 9, it can be seen that the skin wrinkle improvement effect is excellent in the skin around the facial eye of the experimenter applying the cream containing the extract of judocho.

실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 사용 전Before use 2개월 후2 months later 사용 전Before use 2개월 후2 months later 평균 잔주름 깊이(AU)Average fine wrinkle depth (AU) 0.1940.194 0.1670.167 0.1910.191 0.1870.187 사용전 대비 주름 감소율(%)Wrinkle Reduction (%) 13.92%13.92% 2.09%2.09%

n=20, p<0.01n = 20, p <0.01

실시예 5 내지 7 및 비교예 2Examples 5 to 7 and Comparative Example 2

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 2와 비교실험을 행하여 평가하였다.This Example prepared the cosmetic containing the extract of judochocho obtained in Example 1 and evaluated the skin whitening effect in a comparative experiment with Comparative Example 2 in humans.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 10에 나타낸 바와 같다. 우선 표 10에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림 (실시예 5 내지 7, 비교예 2)을 제조한다. 실험자 (20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 5 내지 7에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 2에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다. 표 11은 실시예 7에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색을 비교예 2로 만든 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색과 비교한 것이다.The cosmetics used in the comparative experiments are in the form of a cream, the composition of which is shown in Table 10. First, the phase b) recorded in Table 10 is heated and stored at 70 ° C. To this, a) phase is added, and after pre-emulsification, it is emulsified uniformly with a homomixer, and then cooled slowly to prepare a cream (Examples 5 to 7, Comparative Example 2). 20 experimenters (women aged 20-35 years) were treated with creams prepared in Examples 5 to 7 on the right side of the face, and creams prepared in Comparative Example 2 on the left side of the face for 2 consecutive days. Applied. After completion of the test, the skins of the application areas on both sides of the face were compared by using an image analyzer and a color difference meter. Table 11 compares the facial skin color of the experimenter using the cream prepared in Example 7 with the facial skin color of the experimenter using the cream made in Comparative Example 2.

표 11에서 나타낸 바와 같이 선도초 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.As shown in Table 11, it can be seen that the whitening effect is excellent in the facial skin of the experimenter applying the cream containing the extract of judocho.

원료Raw material 실시예 5Example 5 실시예 6Example 6 실시예 7Example 7 비교예2Comparative Example 2 end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 88 88 88 스테아린산Stearic acid 22 22 22 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic cholesterol 22 22 22 22 스쿠알란Squalane 44 44 44 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 66 66 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mol addition) alcohol ester 33 33 33 33 글리세릴모노스테아린산에스테르Glyceryl Monostearic Acid Ester 22 22 22 22 I 선도초 추출물Fresh seaweed extract 1010 1One 0.10.1 -- 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 55 55 55 정제수Purified water 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity

주)단위: 중량%Note) Unit: Weight%

실험인원번호Experiment No. 실시예 7Example 7 비교예2Comparative Example 2 오른쪽피부색Right skin color 왼쪽피부색Left skin color 1One 22 33 22 2.52.5 33 33 1.51.5 22 44 22 2.52.5 55 2.52.5 33 66 22 2.52.5 77 33 3.53.5 88 22 33 99 2.52.5 33 1010 2.52.5 3.53.5 1111 1One 22 1212 2.52.5 33 1313 1One 22 1414 22 3.53.5 1515 22 22 1616 2.52.5 33 1717 33 33 1818 22 3.53.5 1919 2.52.5 33 2020 22 33

이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 8 내지 10에서 제조하였다. 선도초 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 항산화 효과, 피부 잔주름 개선 효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.Other examples are shown below. That is, the lotion, milky lotion and essence containing the extract of judochocho obtained in Example 1 were prepared in Examples 8 to 10. The lotion, milky lotion and essence containing the extract of jujucho showed excellent effects on skin improvement such as antioxidant effect and skin wrinkle improvement.

실시예 8: 화장수의 제조Example 8: Preparation of a Lotion

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해 한다. 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.To 8 g of 95% ethanol, 0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of fragrance, 0.1 g of paraoxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant, and a small amount of pigment are dissolved. . 0.05 g of judo herb extract obtained in Example 1 and 5 g of glycerine were dissolved in 85.33 g of purified water, and then the mixed solution was added and stirred to obtain a lotion having a skin improvement effect.

실시예 9: 유액의 제조Example 9: Preparation of Latex

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of petrolatum, 0.2 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoesteralide, 1 g of polyoxyethylene (20 mole added) monooleate and 0.1 g of fragrance were mixed and dissolved at 70 ° C. , 0.5 g of the fresh lead extract obtained in Example 1, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1500, 0.2 g of triethanolamine, and 76.2 g of purified water were heated to 75 ° C. to dissolve it. Both mixtures were emulsified and cooled to obtain an emulsion having an oil-in-water (O / W) type skin improvement effect.

실시예 10: 미용액의 제조Example 10 Preparation of Cosmetic Liquid

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 선도초 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of kitulose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium licorice, 0.1 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of judocho extract obtained in Example 1 and a suitable amount of pigment was mixed to obtain a cosmetic liquid having an effect of improving skin.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 항산화 효과, MMP 저해효과, 자외선 조사에 의한 MMP 발현 조절효과, 잔주름 개선효과 등 우수한 항노화 효과와 자외선 조사 후 야기되는 피부 자극을 완화시켜 주며, 기미, 주근깨 및 피부 색소 침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌 생성억제, 티로시나제 활성억제 등의 미백효과를 나타내는 선도초 추출물 피부외용제 조성물을 제공할 수 있다.As described above, the present invention provides an excellent anti-aging effect such as antioxidant effect, MMP inhibitory effect, MMP expression control effect by UV irradiation, fine wrinkle improvement effect and skin irritation caused by UV irradiation, blemishes, freckles and It is possible to provide a fresh skin extract extract external skin composition for whitening effects such as melanin production inhibitory, tyrosinase activity inhibitory, which is a substance causing skin pigmentation.

또한, 본 발명은 상기 효과를 바탕으로 선도초 추출물을 유효성분으로 하는 화장수, 크림, 유액, 팩, 파우더 등의 화장료 조성물로 제공할 수 있다.In addition, the present invention can be provided as a cosmetic composition such as a lotion, cream, emulsion, pack, powder, etc. as an active ingredient extract of judocho extract based on the above effects.

Claims (5)

선도초(Veronica Peregrina L.) 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물.Skin external composition containing the extract of Veronica Peregrina L .. 제1항에 있어서, 상기 선도초 추출물은 전체 조성물 총중량을 기준으로 0.001~30.0중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 선도초 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물.According to claim 1, wherein the judocho extract is an external skin composition containing judocho extract, characterized in that contained in 0.001 ~ 30.0% by weight based on the total weight of the total composition. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 선도초 추출물은 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 1종 이상을 용매로 사용하여 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻는 것을 특징으로 하는 선도초 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물.According to claim 1 or claim 2, wherein the fresh extract is a solvent using one or more selected from the group consisting of purified water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane as a solvent A skin external preparation composition containing fresh grass extract, which is obtained by cooling at room temperature, heating and filtration, and further obtaining a solvent under reduced pressure or lyophilization. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 피부외용제 조성물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물인 것을 특징으로 하는 선도초 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물.The external skin composition according to claim 1 or 2, wherein the external skin composition is a cosmetic composition or a pharmaceutical composition. 제4항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 선도초 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물.According to claim 4, wherein the cosmetic composition is a lotion, gel, water-soluble liquid, cream, essence, oil-in-water (O / W) type or water-in-oil (W / O) type judocho extract characterized in that Skin external preparation composition containing.
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