KR100492461B1

KR100492461B1 - Ｏ-폴리사카라이드를 이용한 중금속의 제거방법

Info

Publication number: KR100492461B1
Application number: KR10-2002-0035160A
Authority: KR
Inventors: 소재성; 오은택
Original assignee: 학교법인 인하학원
Priority date: 2002-06-22
Filing date: 2002-06-22
Publication date: 2005-05-31
Also published as: KR20040000645A

Abstract

본 발명은 O-폴리사카라이드가 중금속과 결합하는 성질을 이용하여 중금속을 제거하는 방법에 관한 것으로, O-폴리사카라이드를 지지체에 고정시켜 중금속 용액을 흘려주거나, O-폴리사카라이드를 세포 표면에 발현하는 균주를 이용하여 산업 폐기물에 포함되어 있는 중금속을 제거하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 O-폴리사카라이드를 이용하여 중금속을 제거하는 방법은 환경 친화적인 방법으로 효율적으로 중금속을 제거하는데 유용하게 사용될 수 있다.

Description

Ｏ-폴리사카라이드를 이용한 중금속의 제거방법{Method for removing heavy metals using O-polysaccharide}

본 발명은 O-폴리사카라이드가 중금속과 결합하는 성질을 이용하여 중금속을 제거하는 방법에 관한 것으로, O-폴리사카라이드를 지지체에 고정시켜 중금속 용액을 흘려주거나, O-폴리사카라이드를 세포 표면에 발현하는 균주를 이용하여 산업 폐기물에 포함되어 있는 중금속을 제거하는 방법에 관한 것이다.

박테리아는 그들의 표면에 여러 가지 복잡한 물질을 생산하고, 상기와 같은 물질에는 세포 표면이 음전하를 갖도록 많은 전하를 띠는 화합 그룹(예; 포스포릴 그룹, 카복실 그룹, 아미노 그룹)이 포함되어 있다. 상기와 같은 물질에 의해 세포표면은 여러 양이온들과 상호작용한다. 금속 양이온은 정전기적으로 끌어 당겨지고 세포에 결합한다.

그람-양성 및 그람-음성 박테리아에서 금속 이온-세포 표면 상호작용에 대한 많은 연구가 진행되어 왔다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498; Park, et al., 1999. J. Microbiol. Biotechnol. 9: 650-654). 브래디리조비움 자포니쿰(Bradyrhizobium japonicum)은 그람-음성 토양 박테리아로, EPS(exopolysaccaride) 및 LPS(lipopolysaccharide)와 같은 여러 세포 표면 물질을 갖고 있다. LPS는 여러 그람-음성 병원균의 발병에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한, LPS는 탄수화물 부위의 음이온 그룹이 Cd²⁺, Cu²⁺, Pb²⁺ 및 Zn²⁺와 같은 2가 이온과 특이적으로 상호작용 하도록 한다(Glauner, B. et al., 1988. J. Biol. Chem. 263: 10088-10095; Jacques, M. 1996. Trends in Microbiol. 4: 410; Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498; Pazirandeh, H. et al., 1998. Appl. Environ. Microbiol. 64: 4068-4072).

최근에 독성 화합물에 대한 생물재치료(bioremediation)에 대한 관심이 증가하고 있고, 중금속 등을 포함하는 산업 폐기물을 제거하는데 용이하게 사용될 수 있는 생물자원들이 발견되고 있다. 특히 미생물 생물자원은 금속 이온과 결합할 수 있는 유용한 리간드를 제공한다. 따라서, 산업 유출물에서 금속 이온의 처리를 위한 박테리아 생물자원의 이용에 대한 관심이 증가하고 있고, 금속과 박테리아의 상호작용에 대해서 연구가 진행되고 있다(Pazirandeh, H. et al., 1998. Appl. Environ. Microbiol. 64: 4068-4072; Vecchio, A. et al., 1998. Fresenius J. Anal. Chem. 361: 338-342). 그러나, LPS는 여러 음이온 그룹을 갖고 있어 여러 양이온 그룹 및 금속 이온과 상호작용하는 것으로 알려져 있지만, 미생물 세포와 금속 사이의 상호작용에 대한 정확한 메카니즘은 아직 밝혀지지 않고 있는 실정이다. LPS는 지질 A(lipid A), 중심(core) 폴리사카라이드, O-폴리사카라이드로 이루어진다.지질 A는 LPS의 소수성 부분으로 세포막에 결합하는 영역이다.중심 폴리사카라이드 또는 R 항원(antigen)은 당의 짧은 사슬로 이루어져 있다.O-폴리사카라이드 또는 O 항원은 중심 폴리사카라이드에 결합되어 있으며, 반복되는 3-5개의 당으로 이루어진 올리고사카라이드로 구성된다. O-폴리사카라이드에는 또한, 편모를 보유하지 않는 무 편모 균주(O 형태)가 갖는 균주 특성과 관련된 O 항원이 존재한다.

이에 본 발명자들은 박테리아의 LPS가 양이온 금속이온과 상호작용하는 메카니즘에 대해서 연구한 결과, LPS의 O-폴리사카라이드 부분이 금속이온의 결합에 중요한 역할을 한다는 것을 밝혀내고 상기 O-폴리사카라이드를 산업 폐기물 등에 포함되어 있는 중금속의 제거에 유용하게 사용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 O-폴리사카라이드를 이용하여 중금속을 효율적으로 제거하는 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 O-폴리사카라이드를 이용하여 중금속을 제거하는 방법을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 O-폴리사카라이드를 지지체에 고정시켜 중금속 용액을 흘려주거나, O-폴리사카라이드를 세포 표면에 발현하는 균주를 이용하여 산업 폐기물에 포함되어 있는 중금속을 제거하는 방법을 제공한다.

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본 발명은 O-폴리사카라이드를 지지체에 고정시키고, 여기에 중금속이 포함된 산업 폐기물을 흘려서 산업 폐기물에 있는 중금속이 지지체에 결합된 O-폴리사카라이드에 결합하여 중금속을 제거하는 방법을 제공한다. 본 발명에서는 O-폴리사카라이드가 결합된 레진을 제조하고, 상기 O-폴리사카라이드가 결합된 레진을 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 중금속을 제거할 수 있다.

또한, 본 발명은 O-폴리사카라이드를 세포 표면에 발현하는 미생물인 브래디리조비움 자포니쿰을 중금속이 포함된 산업 폐기물과 함께 배양하고, 중금속이 결합된 미생물을 제거하여 중금속을 제거하는 방법을 제공한다. 즉, 유해물질을 분해하는 균주 특히 O-폴리사카라이드를 가지고 있는 균주를 산업폐기물과 함께 배양하면 중금속 제거가 가능하다.

본 발명에서 O-폴리사카라이드를 이용하여 제거할 수 있는 중금속은 O-폴리사카라이드와 결합할 수 있는 모든 금속이 가능하고, 2가 금속이온인 것이 바람직하고, 카드뮴, 구리, 납, 아연, 란탄(La) 및 하프늄(Hf)으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상인 것이 더욱 바람직하다.

본 발명의 바람직한 실시예에서 B.자포니쿰에 의한 금속 결합에서 LPS의 O-폴리사카라이드가 기여하는 정도를 알아보았는데, LPS의 폴리사카라이드 사슬은 음이온 전하를 띠고, 이러한 부분은 중금속 2가 이온과 같은 양이온과 상호작용한다. LPS의 글리코시드 디포스페이트 부분(glycosidic diphosphate moiety)이 높은 친화 금속 결합에 관여할 것으로 이전에 주장되어 왔다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498; Vecchio, A. et al., 1998. Fresenius J. Anal. Chem. 361: 338-342). 또한, 금속은 LPS 분자와 이온 결합을 형성하여 외부 막을 안정화시킬 것으로 추정되어 왔다(Strain, S.M. et al., J. Biol. Chem. 255: 13466-13477). 금속 침전 형성의 촉진에 관여하는 다른 인자는 상대적 세포표면 소수성(CSH)이다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498). 이전의 연구에서, 본 발명자들은 LPS 변이 균주가 정상 균주에 비해 증가된 세포표면 소수성을 갖고 있는 것을 보고하였다(Park, K.-M. and J.-S. So. 2000. J. Microbiol. Methods. 41: 219-226). 따라서 LPS는 균주의 상대적 세포표면 소수성을 조절하고, 금속 침전의 형성을 촉진하여 금속 결합에 기여할 것으로 여겨진다. LPS 돌연변이의 금속 결합능의 변화는 O-폴리사카라이드의 결핍에 기인함에도 불구하고, 박테리아는 그들의 표면에 이온화 그룹을 포함하고, 금속 이온은 복잡한 반응성을 갖고 있고 이는 pH, 산화환원 포텐셜, 환경적 전해물 및 세포 농도에 의해 영향을 받는다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498). 따라서, 환경 인자를 간단히 하기 위하여, 박테리아를 단일 금속 용액을 사용하여 O-폴리사카라이드의 금속이온과의 결합능을 조사하였다. O-폴리사카라이드가 결핍된 변이 균주에 결합된 금속의 양은 O-폴리사카라이드가 있는 균주에 결합된 금속의 양 보다 50-70% 적게 결합되었다. 상기 결과로부터, LPS의 O-폴리사카라이드는 금속 결합 및 세포 표면 전하의 영향에 중요한 역할을 한다는 것을 알 수 있고, O-폴리사카라이드를 이용하면 환경친화적으로 중금속을 효율적으로 제거할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 박테리아 균주 및 배양

본 발명자들은 박테리아와 중금속의 결합 메카니즘을 알아보기 위하여, 박테리아로 브래디리조비움 자포니쿰 균주를 사용하였다. 본 발명자들은 이전의 연구에서 결핍 변이 균주 JS314을 분리하고 그의 특징에 대해 연구하였으며, 상기 변이 균주는 O-폴리사카라이드를 포함하지 않는다는 것을 밝혀내었다(Stacey, G. et al., 1991. Mol. Plant-Microbe Interact. 4: 332-340). 또한, 상기 변이 균주에 대한 LPS 유전자를 클로닝하고, 상기 클론된 유전자를 보충하도록 변이시킨 균주를 제조하였다(So, J.-S. et al., 2000. FEMS Microbiol. Lett. 190: 109-114). 본 발명에서는 상기 정상 균주(61A101c), 결핍 변이 균주(JS314) 및 보충 균주 JS314/pLps(pRK415/Lps를 형질전환시킨 JS314)를 사용하였다(Park, K.-M. and J.-S. So. 2000. J. Microbiol. Methods. 41: 219-226).

세포는 AMA 배지(10 g mannitol, 1 g bacto yeast extract, 0.2 g magnesium sulfate, 0.2 g sodum chloride, 1 ℓ 증류수)에서 회전 셰이커(rotating shaker)로 27℃에서 배양하였다(So, J.-S. et al., 2000. FEMS Microbiol. Lett. 190: 109-114).

<실시예 2> B. 자포니쿰 균주의 LPS 분석

본 발명자들은 상기 실시예 1에서 준비한 3가지 균주의 LPS를 분석하였다. 구체적으로, Hichcock 및 Brown(Hitchcock, P.J. and T.M. Brown. 1983. J. Bacteriol. 154: 269-277)에 기재된 방법에 따라 3가지 균주로부터 LPS를 분리하였다. 액체 배지에서 배양한 정상균주(61A101c) 및 2개의 변이형 균주를 수확하고, 10 ㎖ PBS(pH 7.2)에 현탁하였다. 현탁액 중 일부(15 ㎖)는 15,00 X g로 5분 동안 원심분리하였다. 침전물은 2% SDS 및 4% 2-머캡토에탄올 블루를 포함하는 용해 버퍼 50 ㎕에 녹였다. 용해물은 100℃에서 10분 동안 가열하였다. 단백질 분해를 위하여 용해버퍼 10 ㎕에 용해된 프로테아제 K(PK) 25 ㎍을 끊인 용해물에 각각 첨가하여 60℃에서 60분 동안 반응시켰다(Hitchcock, P.J. and T.M. Brown. 1983. J. Bacteriol. 154: 269-277).

상기에서 준비한 샘플은 SDS-PAGE를 수행하고, Hitchcock 및 Brown(Hitchcock, P.J. and T.M. Brown. 1983. J. Bacteriol. 154: 269-277)의 민감한 은 염색 방법에 따라 시각화하였다. 구체적으로, 전기영동은 4% 스택킹 젤 및 12% 분리 젤을 사용하여 50 mA의 전류로 트리스-글리신(pH 8.3) 및 0.1% SDS 버퍼에서 약 1.5 시간 수행하였다. 은 염색은 종래의 방법에 따라 수행하였다(Hitchcock, P.J. and T.M. Brown. 1983. J. Bacteriol. 154: 269-277; Lam, J.S. et al., 1992. J. Bacteriol. 174: 7159-7167).

그 결과, 도 1에서 보는 바와 같이 정상 균주(61A101c) 및 보충 균주(JS314/pLps)는 아래부터 위쪽까지 여러 밴드가 나타나는 것으로 보아 온전한 LPS 프로파일을 보였으나, 결핍 변이균주(JS314)에서 생산된 LPS를 관찰하여 보면, O-폴리사카라이드 사슬에 해당하는 밴드가 없고, 이는 B.자포니쿰의 변이 균주는 O-폴리사카라이드가 없는 것을 나타낸다(Hitchcock, P. J. and T. M. Brown. 1988. J. Biol. Chem. 263: 10088-10095; Stacey, G. et. al. 2000. FEMS Microbiol. Lett. 190: 109-114; Park, K.-M. and J.-S. So. 2000. J. Microbiol. Methods 41: 219-226).

<실시예 3> 균주의 EPS 분석

본 발명자들은 상기 실시예 1에서 준비한 균주들이 변화된 EPS(exopolysaccharide)를 포함하는 다면발현성(pleotrophic) 표현형을 갖는지 알아보기 위하여, 3 균주의 EPS를 젤 투과 크로마토그래피(Gel permeation chromatography; GPC)를 이용하여 조사하였다. 구체적으로, B. 자포니쿰 균주를 AMA 배지 50 ㎖, 27℃, 회전 셰이커에서 150 rpm으로 배양하였다. 세포배양은 600 nM에서 1이 될 때까지 수행한 후, 세포를 수확하고, 0.85% NaCl 용액 10 ㎖로 세척한 후, 4℃, 10,000 X g에서 10분 동안 원심분리하였다. 상등액을 회수한 후 상등액에 3배 부피의 차가운 에탄올을 첨가하여 EPS를 침전시키고, 건조시켰다. 건조된 EPS는 0.1 M NaNO₃로 녹였다. 상기 샘플은 0.20 ㎛ 시린지 필터(sartorius, Germany)로 여과하였다(Park, K.-M. and J.-S. So. 2000. J. Microbiol. Methods. 41: 219-226).

EPS는 울트라하이드로젤 2000 Å 컬럼 7.8 X 300 ㎜(Waters, USA) 및 RI 검출기(Waters 410, USA)를 사용하여 분석하였다. 용매 전달 모듈 모델 910(Young in, Korea)를 사용하여 EPS 샘플을 진공으로 컬럼에 수여하였다. 이동상은 0.1 M NaNO₃이고, 유입 속도는 0.6 ㎖/min, 내부 및 외부 온도는 각각 35℃ 및 50℃이다.

그 결과, 도 2에서 보는 바와 같이, 3 균주로부터의 EPS 샘플은 거의 동일한 패턴을 나타내고, 이는 3가지 균주의 EPS 샘플이 같은 사이즈라는 것을 나타낸다. 즉 EPS가 같은 양으로 있는 것으로 보아 중금속 흡착에 절대 영향을 주는 것은 LPS라는 것을 나타낸다.

<실시예 4> 균주의 금속 결합 분석

본 발명자들은 LPS의 O-폴리사카라이드와 금속결합과의 관계를 알아보았다. LPS 변이 균주의 금속 결합능의 변화는 O-폴리사카라이드의 결핍에 기인함에도 불구하고, 박테리아는 그들의 표면에 이온화 그룹을 포함하고, 금속 이온은 복잡한 반응성을 갖고 있고 이는 pH, 산화환원 포텐셜, 환경적 전해물 및 세포 농도에 의해 영향을 받는다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498). 따라서, 환경 인자를 간단히 하기 위하여, 박테리아를 단일 금속 용액에 현탁하였다. 2가 금속 이온과 세포의 상호작용은 Cd²⁺, Cu²⁺, Pb ²⁺ 및 Zn²⁺의 첨가가 AAS(Atomic adsorption spectrophotometery) 분석에서 각각의 금속의 흡착 피크에 미치는 영향을 관찰하였다.

금속 용액의 제조

본 발명에 사용한 금속염으로는 CdN₂O₆·H₂O, CuN₂O₆·H ₂O, N₂O₆Pb(all from Fluka Chemical Co., Japan) 및 Zn(NO₃)₂·H₂O(Sigm-Aldrich Chemical Co., USA)을 사용하였다. 금속 용액은 Zn(NO₃)₂·H₂O 1%(v/v) HCl에 녹여서 제조하고, 나머지 금속염은 1%(v/v) HNO₃에 녹여서 제조하였다. 모든 장비는 사용하기 전에 12시간 이상 50%(v/v) HNO₃로 걸러내고, 초순수 증류수(ultra pure deionized water)로 세척하였다. 금속 농도에 대한 표준 커브는 카드뮴, 구리, 납 및 아연(Sigma-Aldrich Chemical Co., USA)의 원자 흡착 표준 용액을 사용하여 만들어졌다.

금속-결합 분석을 위한 샘플의 제조

세포를 중간-지수 단계(600 nm에서 0.5)까지 배양하고, 세포 현탁액 30 ㎖를 멸균된 튜브에 옮겼다. 튜브를 4℃에서 8,000 X g로 5분 동안 원심분리한(Eppendorf, Germany) 후, 상등액을 제거하고, 세포침전물을 ddH₂O 15 ㎖에 재현탁하였다. 1 ㎖의 재현탁 세포용액을 1.5 ㎖ 마이크로센트리퓨즈 튜브에 옮겼다. 상기 세포를 ddH₂O 1 ㎖로 세척하고, 15,000 X g로 3분 동안 원심분리하였다. 상기 절차를 3회 반복 수행하였다. 세척된 세포는 0.1, 0.3, 0.5 및 0.7 g/L 금속 용액 1 ㎖에 재현탁하였다. 금속 용액을 25℃에서 30분간 배양 후, 세포를 15,00 X g로 5분 동안 원심분리하여 부착되지 않은 금속 이온을 포함하는 상등액을 회수하였다. 상등액은 1%(v/v) HNO₃로 희석하여 측정하였다. 세포에 부착한 금속의 양은 최초에 세포와 혼합한 금속 양에서 부착되지 않은 금속의 양을 빼서 계산하였다. 세포 중량을 결정하기 위하여, 금속을 포함하지 않는 동일 부피의 세포 현탁액을 원심분리하고, 이를 드라이 오븐에서 1시간 동안 건조시켰다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498).

원자 흡착 스펙트로포토미터 분석

카드뮴, 구리, 납 또는 아연 이온을 포함하는 샘플을 원자 흡착 스펙트로포토미터(Analytical Jena 5EA, Germany)를 사용하여 기존의 방법으로 분석하여 금속 함량을 알아보았다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498).

금속 흡착에서 직선 증가는 반응의 30분 동안에서 관찰되었기 때문에, 금속 흡착은 반응 30분 후에 측정하였다. 첨가된 금속의 농도의 범위는 0.1 부터 0.7 g/L이다.

3가지 균주에 의해 결합된 금속의 양은 도 3 내지 3d에 나타내었다. 균주에 의해 결합된 금속의 양에서 많은 차이가 있었다. 결핍 변이 균주(JS314)에 결합된 금속의 양은 다른 균주에 결합된 금속의 양 보다 50-70% 적은 반면, 정상(61A101c) 및 보충 균주(JS314/pLps)는 거의 동일 양의 금속이 결합되었다. 그러나, 용액에서 4 금속의 농도가 증가하면, 결합된 금속의 양은 3 균주 모두에서 증가하였다. 도 3b는 각각의 균주에 결합된 아연의 양을 보여주고, 여기서 동일 양의 아연이 정상 및 보충된 균주에 결합하였으나, 변이 균주에는 적은 양의 아연이 결합하였다. 도 3c는 각각의 균주에 의해 결합되는 카드뮴의 양을 나타낸 것으로, 3 균주에 결합된 카드뮴 및 구리의 양은 납 또는 아연 보다 상당히 많았다. 구리 결합 실험의 결과는 도 3d에 나타내었고, 이는 카드뮴 결합 실험에서 얻은 결과와 비슷한 결과를 나타내었다. 세포 표면에 금속 결합의 견고함을 알아보기 위하여, 심한 교반에 의해 세포 표면에서 유리되는 금속의 양을 측정하였다.

금속 탈착 테스트

본 발명자들은 금속 이온의 결합에 대한 원심력의 영향을 알아보기 위하여, 금속 탈착 테스트를 수행하였다. 금속 흡착 실험 후에, 마이크로튜브에 있는 세포 침전물을 PBS(phosphate-buffered saline)로 2회 세척하고, 15,000 x g로 5분 동안 원심분리하여 분리한 후, 상등액을 취하였다. 상기 용액을 분석하여 결합된 세포로부터 탈착된 금속의 양을 결정하였다.

	Pb	Zn	Cd	Cu
61A101c	9.03	5.90	0.739	7.74
JS314	6.07	1.97	0.246	3.99
JS314/pLps	9.18	5.90	0.739	7.58

(g 금속 / g 세포)

표 1은 금속 결합 세포의 원심분리 후의 탈착 금속의 양을 보여준다. 예상대로, 변이 균주 JS314로부터 탈착된 금속의 양은 다른 2 균주로부터 탈착된 금속의 양보다 낮다. 그러나, 테스트한 금속이 세포 표면에 단단히 결합하였기 때문에 부착 세포로부터 유리되는 금속의 양은 결합 금속의 양(300 ㎍ 이상)에 비하면 매우 적은 양이다(10 ㎍ 이하). 4 금속 중에서 카드뮴은 매우 적게 탈착되었고 이는 흡착된 카드뮴의 분획이 다른 금속에 비해 매우 높은 것을 나타낸다. 상기로부터 원심분리는 금속이 세포에 결합하는 것에 영향을 주지 못한다. 이는 단순히 금속 이온이 결합하는 반응 위치를 제공하는 것에 비하여 세포 표면력 전하가 특이 물리화학적 특성을 갖는 금속 침전의 형성을 촉진함에 의해 금속 결합에 기여할 것으로 여겨지고 있다(Langley, S. and T.J. Beveridge. 1999. Appl. Environ. Microbiol. 65: 489-498). 상기 결과로부터, LPS의 O-폴리사카라이드는 금속 결합 및 B. 자포니쿰의 세포 표면 전하의 영향에 중요하다.

상기에서 살펴본 바와 같이, O-폴리사카라이드가 중금속과 결합하는 성질을 이용하여 O-폴리사카라이드를 지지체에 고정시켜 중금속 용액을 흘려주거나, O-폴리사카라이드를 세포표면에 발현하는 미생물을 산업 폐기물과 함께 배양하면 중금속을 효율적으로 제거할 수 있으며, 상기와 같은 방법은 환경친화적인 방법으로 더 이상의 오염을 예방할 수 있다.

도 1은 B. 자포니쿰 균주의 LPS를 분석한 사진이다. 빨리 이동하는 밴드(II)는 코어 LPS이고, 천천히 이동하는 밴드(I)는 O-폴리사카라이드를 갖는 LPS이다. 레인 1 : 정상균주(61A101c), 레인 2 : 보충 균주(JS314/pLps), 레인 3 : 결핍 균주(JS314).

도 2는 B. 자포니쿰으로부터 분리한 EPS의 분자량 분포를 GPC(Gel permeation chromatography)로 분석한 그래프이다.

도 3a 내지 3d는 B. 자포니쿰에 결합된 금속의 양을 나타낸 그래프이다.

Claims

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O-폴리사카라이드를 세포 표면에 발현하는 미생물인 브래디리조비움 자포니쿰(Bradyrhizobium japonicum)을 중금속이 포함된 산업 폐기물에서 배양하고, 중금속이 결합된 미생물을 제거하여 중금속을 제거하는 방법.
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