KR100426880B1 - 모나스쿠스 피로수스를 이용한 적색 메주색소의 제조방법 - Google Patents

모나스쿠스 피로수스를 이용한 적색 메주색소의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 모나스쿠스 피로수스(Monascus pilosus) (KCCM 60084)를 이용한 메주 색소의 제조방법에 관한 것으로 상기 균주를 백미에서 발효를 시키게 되면 종래의 모나스쿠스속 균주를 이용하여 적색 메주색소를 생산하는 것 보다 많은 양의 적색 메주색소를 생산할 수 있는 뛰어난 효과를 제공한다.

Description

모나스쿠스 피로수스를 이용한 적색 메주색소의 제조방법{method for production of red pigment in meju by Monascus pilosus}
본 발명은 메주색소의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 모나스쿠스 피로수스를 이용하여 최적의 배양조건에서 적색의 메주색소를 제조하는 방법에 관한 것이다.
모나스쿠스속의 곰팡이는 진균류문, 아스코마이티나(Ascomytina)강, 프렉토마이세테스(Plectomycetes)목, 모나스카세(Monascaseae)과로 분류되는 미생물로서 곡류에 번식시킨 메주는 자색에서 적색에 이르는 색소를 함유하여 홍국(ang-kak, 紅麴)이라 부르며, 안카(anka), 앙콱(ang-quak), 안카 코지(anka koji), 벤지 코지(beni koji) 등으로 불리어 지고 있다. 우리나라를 비롯한 중국, 일본, 인도네시아 등 동아시아권 국가들에서는 이를 이용하여 홍주, 홍두부, 콩치즈 및 발효생선을 제조하는데 이용되어 왔으며, 식·음료의 착색 및 보존제로 사용되는 외에도 의약품과 화장품에도 널리 사용되고 있다. 또, 홍국은 발효과정 중에 monacolin K 및 그 유도체와 γ-aminobutylic acid 등에 유래하는 콜레스테롤 생합성 억제작용, 혈압강하작용, 항암작용 등 다양한 기능성이 알려져 있어 성인병 예방을 위한 식품신소재로서 각광을 받고 있다.
종래에 있어서, 이 홍국의 제조는 모나스쿠스의 몇몇 종이 주로 사용되었으며 아스퍼지러스 오라이제(Aspergillus oryzae)나 아스퍼지러서 소제(Aspergillus sojae)를 이용한 메주제조로부터 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) 등의 세균을 이용한 메주제조법도 연구되어 왔다(Kim, Z.U. and Cho, S.H. : A study on the manufacturing of soy sauce by the combined use ofAspergillus sojaeandBacillus subtilis. J. Kor. Agric. Chem. Soc. 18(1), 1-9 (1975) ). 그러나 모나스쿠스 퍼퍼레우스를 비롯한 모나스쿠스 속의 균들은 색소를 고 농도로 생산하지 못하는 문제가 있었고 특별히 모나스쿠스 피로수스 균에 대해서는 그 발효조건이 구체적으로 확립된 바 없었다.
본 발명은 모나스쿠스 속 곰팡이를 이용한 적색 메주색소 생산시 고 농도의 색소를 생산하지 못하는 문제를 해결하고자 같은 속 내의 모나스쿠스 피로수스 균을 사용하여 최적의 발효조건을 확립함으로써 고농도의 색소를 제공하는데 그 목적이 있다.
이하, 본 발명의 구성과 작용을 실시예를 통하여 상세히 설명하지만 그 권리범위가 하기 실시예에 만 한정되는 것은 아니다.
도 1은 모나스쿠스 피로수스에 의해 발효된 쌀메주에서 95%의 에탄올로 추출한 색소의 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 2는 30℃에서 발효된 쌀메주에 있는 모나스쿠스 피로수스 균수 및 색소함량의 변화를 나타낸다.
도 3은 30℃에서 12일 동안 발효시킨 후, 모나스쿠스 피로수스 생균수와 색소함량간의 상관관계를 나타낸다.
도 4는 10일 동안 모나스쿠스 퍼퍼레우스 (Monascus purpureus) (KCCM 11832)에 의해 발효된 다양한 메주에 있어서 색소함량에 대한 온도의 관계를 나타낸다. 여러 값들은 3회 반복에 의한 평균±표준편차의 값이고, 같은 재료, 다른 온도 하의 막대들에서의 다른 문자들(a-c)과 같은 온도, 다른 재료의 막대에서의 다른 문자들(A-E)은 p(유의수준)<0.05 일 때, 서로 유의적으로 다르다는 것을 나타낸다.
도 5는 10일 동안 모나스쿠스 피로수스에 의해 발효된 다양한 메주에 있어서 색소함량에 대한 온도의 효과를 나타낸다. 여러 값들은 3회 반복에 의한 평균±표준편차의 값이고, 같은 재료, 다른 온도 하의 막대들에서의 다른 문자들(a-c)과 같은 온도, 다른 재료의 막대들에서의 다른 문자들(A-E)은 p<0.05 일 때, 서로 유의적으로 다르다는 것을 나타낸다.
도 6은 쌀메주에서 30℃의 발효조건으로 색소를 생산할 때, 색소함량에 대한 모나스쿠스 피로수스의 초기 접종농도의 효과를 나타낸다.
도 7은 배양온도 30℃, 배양시간 8일의 발효조건으로 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스에 의해 색소를 생산할 경우, 그 배지로 콩메주를 쓴 경우 있어 첨가되는 백미 분말의 효과를 나타낸다. 여러 값들은 3회 반복에 의한 평균±표준편차의 값이고 같은 균, 다른 농도의 막대들에서 다른 문자들(a-c)과 같은 농도, 다른 균의 막대들에서 다른 문자들(A-C)은 p<0.05일 때, 유의적으로 다르다는 것을 나타낸다.
도 8은 30℃, 8일 동안의 배양시간으로 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스에 의해 색소를 생산할 경우, 색소 함량에 대한 콩에 첨가되는 백미의 효과를 나타낸다. 여러 값들은 3회 반복에 의한 평균±표준편차의 값이고 같은 균, 다른 농도의 막대들에서 다른 문자들(a-c)과 같은 농도, 다른 균의 막대들에서 다른 문자들(A-C)는 p<0.05일 때, 유의적으로 다르다는 것을 나타낸다.
본 발명은 모나스쿠스 피로수스를 배양하여 적색의 메주색소를 제조함에 있어서, 본 배양시에 접종되는 종균의 농도를 10∼15%(v/w)로 하고, 그 배지를 백미 또는 백미 1∼99중량%와 콩 1∼99중량%를 혼합한 백미와 콩의 혼합물로 하고, 그 배양시간을 6∼10일 동안으로 하는 것을 특징으로 하는 적색 메주색소 제조방법에 관한 것이다.
상기 종균발효에 있어 그 균주는 모나스쿠스 피로수스(Monascus pilosus) (KCCM 60084)를 말토 익스트랙트 아가(malt extract agar; Difco, USA)와 포테이토덱스트로오스 이스트 아가(potato dextrose yeast agar; Difco, USA)에 이식하여 30℃에서 10일간 배양하고 1개월 간격으로 새로운 배지에 이식하면서 사용하는 것이 좋다. 종배양(seed culture)은 미추타니(Mizutani) 액체배지(Park, M.Z.: Study on soy sauce preparation fermented byMonascus pilosussKCCM 60084, Dept. of Food Sci. and Technol. The Graduate School in Catholic Univ. of Daegu, Kyungsan, Korea (2001))를 사용하여 30℃, 30 rpm으로 진탕배양을 하고 균수를 106CFU/mL로 조정하여 사용하는 것이 좋다. 메주의 제조를 위한 재료로는 깨끗이 선별한 백미를 30 mech로 분쇄하여 사용하는 것이 좋으나 더욱 바람직하게는 낟알을 사용하는 좋다. 낟알에 비하여 분말상태일 때 색소의 생성력이 낮은 것은 발효의 환경과 관련이 있는 것으로 수분함량과 통기량 등이 영향을 미친 것이라 판단된다.
메주제조를 목적으로 하는 본 배양에서 그 배지인 백미는 24시간동안 수침하고 물기를 뺀 뒤 1L의 삼각 플라스크에 120 g 씩 넣어 121℃에서 60분간 증자, 살균하는 것이 좋다. 냉각 후 모나스쿠스 피로수스의 종 배양액을 10%∼15%(v/w)로 백미에 접종하는 것이 좋다. 바람직하게는 12.5%로 백미에 접종하는 것이 좋다. 종배양액의 첨가농도가 10∼15% 일 때는 최대생성량인 메주 그램 당 1200㎍을 생성하는 일수가 8일 정도이나 5% 첨가한 경우는 10일 정도로 지연된다. 1% 첨가한 경우는 12일 정도까지도 색소생성량이 200 ㎍이하를 나타낸다.
콩을 배지로 사용하는 경우에 콩은 8시간 동안 수침한 후 1 L 삼각 플라스크에 120 g씩 넣어 121℃에서 60분간 증자, 냉각하는 것이 좋으며, 종균을 접종하고30℃에서 10일간 배양한 다음 40℃에서 건조시키는 것이 좋다. 콩 만을 단독으로 하여 배지를 조성하는 것보다는 콩에 백미를 첨가하여 배지를 조성하는 것이 좋으며 바람직하게는 백미를 액상이 아닌 분말의 형태로 사용하는 것이 좋다. 분말의 백미를 콩에 첨가하여 사용하는 경우는 콩만을 단독으로 사용한 경우보다 약 150배정도 효소생산성이 증가하며, 콩에 액상의 백미를 사용한 경우보다는 약 3배정도 효소생산성이 증가한다. 이는 분말의 백미를 첨가하는 경우에 전체 배지의 수분함량을 낮출 수 있기 때문에 발생되는 효과라 판단된다.
발효시간은 6일부터 10일 동안 하는 것이 좋다. 바람직하게는 8일 동안 발효를 수행하는 것이 좋다. 균의 성장은 배양 2일 이후부터 서서히 시작되었으며 6일 이후부터는 급속한 성장을 나타낸다. 색소는 균이 급격하게 증식되는 발효 6일부터 10일 사이에 주로 생성되어 균의 성장과 정의 상관관계(r=0.9879)를 나타낸다.(도 3) 따라서 모나스쿠스 피로수스에 있어 메주색소의 생산은 일반적으로 색소를 포함한 2차 대사산물의 생산이 대수기 이후에 생산되는 것과 달리 특이적으로 색소의 생산이 대수기에 생성된다고 판단된다.
배양 후 색소의 추출은 김 등(Kim, M,H., Lee, T,K. and Yang, H,C. : Red pigment production fromMonascus anka albidus.Korean J. Food Sci. Technol,24(5), 451-458 (1992))의 방법에 준하여 메주분말 5g에 95% ethanol 50 mL을 넣어 실온에서 2시간동안 추출 후 4℃, 10,000 rpm에서 10분 동안 원심분리를 하며, 510 nm(도 1)에서 흡광도를 측정하여 표준품으로 홍국색소(Nanping Senfa Natural Pigment Co., Fujia, China)를 사용한 검량선에 의하여 함량을 산출한다. 구성색소는 95% ethanol을 용매로 한 추출액을 TLC 법(Blanc, P.J., Loret, M.O., Santerre, A.L., Pareilleux, A., Prome, D., Prome, J.C., Laussac, J.P. and Goma, G. : Pigments ofMonascus. J. Food Sci., 59(4), 862-865 (1994) )으로 분리한 후 510 nm에서 흡광도를 측정하여 동일방법으로 분리 정제한 표품의 검량선에 의하여 함량을 산출한다.
실시예 1: 균의 생육정도와 색소생성과의 관계
재료는 경북 의성에서 생산된 1999년 산 백미, 밀, 현미, 찰현미를 사용하였으며, 대두는 1999년도 국내산 은하콩(Glycine max merr.)을 사용하였으며 백미는 분쇄해서 사용하였다.
균주는 모나스쿠스 퍼퍼레우스 (KCCM 11832)와 모나스쿠스 피로수스 (KCCM 60084)를 사용하였으며, 한국종균협회 부설 미생물보존센터에서 분양 받아 각각 말토 익스트랙트 아가(malt extract aga; Difco, USA)와 포테이토 덱스트로오스 이스트 아가(potato dextrose yeast agar; Difco, USA)에 이식하여 30℃에서 10일간 배양하였으며, 1개월 간격으로 새로운 배지에 이식하면서 사용하였다. 종배양(seed culture)은 두 균주 모두 Mizutani 액체배지(Park, M.Z.: Study on soy sauce preparation fermented byMonascus pilosussKCCM 60084, Dept. of Food Sci. and Technol. The Graduate School in Catholic Univ. of Daegu, Kyungsan, Korea (2001))를 사용하여 30℃, 30 rpm의 진탕배양기에서 배양하여 균수를 106CFU/mL로조정하여 사용하였다. 균의 생육정도와 색소생성과의 관계를 조사한 결과 색소의 생성은 균이 급격하게 증식되는 발효 6일부터 10일 사이에 주로 생성되어 균의 성장과 정의 상관관계(r=0.9879)를 나타내었다(도 3). 즉, 균수가 생메주 그램당 log 4.1 cfu일 때의 색소함량은 35 ㎍ 이였으며, 균수가 log 11.3 cfu인 경우에는 1200 ㎍로 색소량이 최대를 나타내었다.
실시예 2: 배지의 종류에 따른 색소함량
백미, 분쇄미, 밀, 현미, 찰현미, 발아현미 및 발아 찰현미 메주의 제조는 24시간동안 수침하고 물기를 뺀 뒤 1 L 삼각플라스크에 120 g 씩 넣어 121℃에서 60분간 증자하고 살균하였다. 냉각 후 모나스쿠스 퍼퍼레우스 및 모나스쿠스 피로수스의 종 배양액을 10%(v/w)되게 접종하여 30℃에서 10일간 배양한 후 40℃에서 건조시켰다. 모나스쿠스 퍼퍼레우스를 이용한 발아 현미 메주의 색소함량은 현미의 경우에 비하여 20℃에서는 24%, 30℃에서는 58% 증가하였다.(도 4) 모나스쿠스 피로수스를 사용할 경우에는 20℃에서 23%, 30℃에서 55% 증가하였다.(도 5) 그러나 발아 찰현미로 제조한 메주의 색소함량은 찰현미의 경우와 비슷하였다. 통밀을 이용하여 제조한 메주의 색소함량은 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스 모두 30℃에서 높았다. 색소함량이 가장 높은 메주는 백미와 모나스쿠스 피로수스를 이용하여 제조된 메주로서 모나스쿠스 퍼퍼레우스를 이용한 발아현미 메주의 5배, 모나스쿠스 피로수스를 이용한 발아현미 메주의 8배로 높았다. 그리고 두 균주 모두에서 색소함량은 백미, 발아현미, 통밀, 현미, 찰현미, 발아찰현미 순서로 나타났으며, 색소함량이 가장 높은 백미에서는 모나스쿠스 피로수스를 사용한 경우가 메주 그램당 1200 ㎍으로 모나스쿠스 퍼퍼레우스에 비하여 3.8배나 높았다. 발아찰현미와 찰현미의 색소함량이 큰 차이를 보이지 않은 것은 찰현미의 발아율이 낮은 것과 관련이 있는 것으로 생각된다. 또, 통밀, 현미 등이 백미에 비하여 색소함량이 크게 낮은 것은 이들이 가지는 딱딱한 외피로 인하여 균의 번식력이 낮아졌기 때문으로 판단된다.
실시예 3: 백미의 형태에 따른 메주의 색소함량
두 균주 중 색소생성량이 높은 모나스쿠스 피로수스를 이용한 백미메주 제조시 백미의 형태(낟알 및 분말)에 따른 색소함량을 조사한 결과는 표 1과 같다.
백미를 배지로 하여 30℃에서 10일 동안 모나스쿠스 피로수스를 배양한 경우에 있어 입자형태의 효과
균주 입자형태 색소함량(㎍/gmeju)
Monascus purpureusKCCM11832 낟알 310.0±6.5a1)
입자 13.5±2.5b
Monascus pilosusKCCM60084 낟알 1200.0±12.5a
입자 16.0±3.5b
1) 3회 반복실시의 평균±표준편차 값과 p<0.05일 때 유의적으로 다르다는 것을 나타내는 구분되는 문자 a, b
그 결과 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나수쿠스 피로수스를 다같이 낟알 형태로 발효시킨 경우는 각각 310.0 ㎍/g 및 1200.0 ㎍/g으로 분말의 경우 13.5∼160.0 ㎍에 비하여 색소함량이 현저하게 높았으며 모나스쿠스 피로수스 균주의 색소 생성력이 높았다. 낟알에 비하여 분말상태일 때 색소의 생성력이 낮은 것은 발효의 환경과 관련이 있는 것으로 수분함량과 통기량 등이 영향을 미친 것이라 사료된다. 분프랩(Boonprab) 등(Boonprab, K., Suwanarit, P. and Lotong, N.: Selection of glucose derepression mutants for the improvement of ang-kak production and their regulation of pigmentation.Proceeding of Kasetsart University Annual Conference, 30 January-1 Februar, Bangkok Thariland (1996))은 글루코스(glucose)의 함량이 높으면 색소의 생성량이 감소된다고 하였으며 초기 수분함량이 높으면 글루코아밀라아제(glucoamylase)의 활성이 증가되어 글루코오스(glucose)함량이 증가되어 색소생성에 영향을 미친다고 하였다.
실시예 4: 종 배양액 첨가농도에 따른 메주의 색소함량
모나스쿠스 피로수스를 이용한 백미 메주의 제조시 종배양액의 첨가농도가 색소함량에 미치는 영향을 조사한 결과는 도 6과 같다. 종배양액의 첨가농도가 10% 및 15%일 때는 최대생성량인 메주 그램 당 1200㎍을 생성하는 일수가 8일 이였으나 5% 첨가한 경우는 10일로 지연되었다. 1% 첨가한 경우는 12일째까지도 색소생성량이 200 ㎍이하를 나타내었다.
실시예 5: 콩메주 제조와 색소함량
모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스의 종배양액을 증자한 콩에 10%(v/w)되게 접종하여 30℃에서 8일간 배양하였을 때의 색소 생성량은 표 2와 같다.
콩에서 30℃로 8일 간 배양했을 때, 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스에 의해 생산되는 메주색소의 함량
균주 색소 함량(㎍/g 메주)
Monascus purpureusKCCM 11832 0.50±0.05a1)
Monascus pilosusKCCM 60084 0.60±0.05b
1) 3회 반복실시의 평균±표준편차 값과 p<0.05일 때 유의적으로 다르다는 것을 나타내는 구분되는 문자 a, b
두 균주의 색소 생성량은 콩메주 그램 당 0.50∼0.60 ㎍으로서 매우 낮았다. 이러한 결과는 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스의 번식률이 낮기 때문으로 판단되는데 증자한 콩은 수분함량이 높을 뿐만 아니라 지질의 함량이 높아 통기가 불량하기 때문이라 사료된다. 이러한 문제점들을 해결하기 위하여 증자한 콩에 백미분말을 1, 3, 5 및 10%(w/w) 되게 첨가한 후 상기와 동일하게 종 배양액을 10%씩 첨가하여 30℃에서 8일 동안 발효시켜 얻은 메주의 색소함량을 측정한 결과는 도 7과 같다. 그 결과 첨가 농도별로 약간의 차이는 있지만 백미분말을 10%첨가하였을 때 두 균주 모두에서 가장 높은 함량인 메주 그램 당 23.5∼28.0 ㎍을 나타내었으나 백미에 비하여 현저하게 낮았다. 종배양액 대신에 균이 살아있는 백미메주의 분말을 종균으로 사용하여 증자콩에 1, 3, 5 및 10%(w/w) 되게 첨가하여 발효시킨(도 8) 결과에 의하면 첨가농도의 증가에 따라서 색소함량이 유의적으로 증가되었으며 모나스쿠스 퍼퍼레우스를 번식시킨 백미메주 분말을 10%되게 첨가할 경우는 메주 그램 당 23.0 ㎍,모나스쿠스 피로수스를 번식시킨 백미메주 분말을 10% 첨가할 경우는 75.0 ㎍으로 색소함량이 상당히 증가되었으며 모나스쿠스 피로수스가 모나스쿠스 퍼퍼레우스보다 생성량이 높았다.
실시예 6: 색소의 추출
색소의 추출은 김 등(Kim, M,H., Lee, T,K. and Yang, H,C. : Red pigment production fromMonascus anka albidus.Korean J. Food Sci. Technol,24(5), 451-458 (1992))의 방법에 준하여 메주분말 5g에 95% ethanol 50 mL을 넣어 실온에서 2시간동안 추출 후 4℃, 10,000 rpm에서 10분 동안 원심분리 하였으며, 510 nm(도 1)에서 흡광도를 측정하여 표준품으로 홍국색소(Nanping Senfa Natural Pigment Co., Fujia, China)를 사용한 검량선에 의하여 함량을 산출하였다. 구성색소는 95% ethanol을 용매로 한 추출액을 TLC 법(Blanc, P.J., Loret, M.O., Santerre, A.L., Pareilleux, A., Prome, D., Prome, J.C., Laussac, J.P. and Goma, G. : Pigments ofMonascus. J. Food Sci., 59(4), 862-865 (1994) )으로 분리한 후 황색대와 적색대로 구분하여 동일 용매로 추출하였으며 황색색소는 387 nm에서, 적색계 색소는 510 nm에서 흡광도를 각각 측정하여 동일방법으로 분리 정제한 표품의 검량선에 의하여 함량을 산출하였다. TLC 조건은 60 F254의silica gel 흡착제(silica gel 60 F254; Merck), 클로로포름 ·메탄올 ·증류수 혼합의 전개용매 (chloroform : methanol : distilled water = 65 : 25 : 4; v/v)를 사용하였다. 본 연구에서 사용한 균주인 모나스쿠스 퍼퍼레우스와 모나스쿠스 피로수스가 생성하는 구성색소별 함량을 조사하기 위하여 각 균주의 종 배양액을 증자미에 이식하여 30℃에서 10일 동안 배양한 후 충분히 건조시킨 쌀메주를 95% 에탄올(ethanol)로 추출하여 TLC법으로 분리해 본 결과 모나스쿠스 퍼퍼레우스의 쌀메주는 9종의 색소가 분리되었으나 모나스쿠스 피로수스의 쌀메주는 8종으로 band 8이 나타나지 않았다(표 3).
모나스쿠스 퍼퍼레우스 (KCCM 11832)와 모나스쿠스 피로수스 (KCCM 60084)에 의해 제조되는 색소들의 함량 및 Rf 값1)
Band No. Mean Rfvalues Color Monascus purpureusKCCM 11832 (㎍/g 메주) Monascus pilosusKCCM 60084 (㎍/g메주)
1 0.06 red 16.952) 101.3
2 0.23 red 12.20 93.8
3 0.36 red 12.00 205.0
4 0.45 red 10.80 182.5
5 0.59 red 49.20 287.5
6 0.68 red 68.40 43.8
7 0.78 red 23.68 112.5
8 0.88 red 23.30 -
9 0.97 yellow 118.72 402.5
Total 335.25 1428.9
1) TLC systems : plates, silica gel F254; 용매, chloroform : methanol : water(65 : 25 : 4, v/v)
2) 임의 3반복에 의한 평균±표준편차 값이다.
본 실험에서는 두 균주 모두 황색계 색소는 1종, 나머지는 모두 적색계 색소 이였다. 구성색소의 합계치는 모나스쿠스 피로수스 쌀메주는 그램당 1428.9 ㎍로서 모나스쿠스 퍼퍼레우스 경우 335.25 ㎍의 4.26배에 달하였다.
이상, 상기 실시예를 통하여 설명한 바와 같이 본 발명은 모나스쿠스 피로수스를 배양하여 적색류의 메주색소를 제조함에 있어서, 그 종균배양액의 농도를 10∼15%(v/w)로 하고, 그 배지를 백미 또는 백미와 콩의 혼합물로 하고, 그 배양시간을 6∼10일 동안으로 하여 발효시키면 고농도의 적색 메주색소를 생산하여 제공할 수 있으므로 색소 제조산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (2)

  1. 모나스쿠스 피로수스 (KCCM 60084) 균주를 종균의 농도를 10∼15%(v/w)로 하고, 그 배지는 백미 또는 콩에 백미 1∼99중량%를 첨가한 혼합물로 하고, 배양시간은 6∼10일로 하는 것을 특징으로 하는 적색 메주색소의 제조방법
  2. 제 1항에 있어서, 상기 백미는 그 형태가 낟알인 것을 특징으로 하는 적색 메주색소의 제조방법
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