KR100395723B1 - 항부착제 - Google Patents

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Abstract

본 발명에는 상처 치료에 있어서 인접 또는 주위 조직에 대한 손상 조직의 바람직하지 않은 부착을 억제하거나 실질적으로 감소시킬 수 있는 제제의 제조를 위한, 키토산 및 그에 고정화된 헤파린, 헤파란 술페이트 및 덱스트란 술페이트 중에서 선택되는 폴리사카라이드의 용도가 개시되어 있다.

Description

항부착제 {Anti-Adhesion Agent}
인간이 현재의 필요에 따라 원하는 대로 자유롭게 움직일 수 있는 능력은 인간 삶의 질에 대단히 중요하다. 근골격계가 주로 피부, 점막 및 신경 조직과 밀접하게 협력하여 적절하게 기능함은 우리의 움직이는 능력에 필요전제조건이고 그 자체로 뼈, 근육 및 건(腱)과 같은 상이한 구조가 서로에 대해 자유롭게 움직일 수 있음을 필요로 한다. 이러한 활동은 활주 영역, 최소의 마찰 및 최대로 움직일 수 있는 자유를 필요로 한다. 따라서, 예를 들면 인접 근육과 건 및 피부와 인접 조직 사이의 활주계가 최적 기능을 위해 필요하게 된다. 이것은 내장 구조, 예를 들면 위장관, 심장, 폐, 뇌 및 척수에 대해서도 마찬가지이다. 활주계는 복부, 흉강, 심막강에서 그리고 뇌 및 척수에 있어서 중피세포에 의해 경계지워지는 소성 결합 조직의 박막에 의해 형성된다. 건방(腱旁) 조직은 유사한 디자인을 보인다.
이들 활주계는 염증 및 손상에 매우 민감하다. 상처 조직은 쉽게 형성되어 기능의 손상 및 기능의 상실까지 야기한다. 부착은 복강에서 형성될 수 있다. 즉, 단선(單線)의 형성 및 인접 또는 주위 구조의 막 유사 융합은 최종적으로 생명을 위협하는 질병인 장폐색증을 야기할 수 있다. 손상을 치료하고 종양을 제거하거나 다른 질환을 치료하기 위해 그리고 재건을 위해 수행하는 외과 수술은 항상 상처를 형성시켜 "천연 및 본래" 활주계의 다소 광범위한 손실을 초래한다.
피부 및 점내막 손상의 치료는, 한편으로는 결합 조직의 재생 능력의 제한, 다른 한편으로는 정상 조직의 성숙도에 유사한 성숙도를 얻는 능력이 제한된 미성숙 육아조직의 형성에 의해 복잡하게 된다. 따라서, 진피는 손상 후에 거의 예외 없이 어린이나 성인에 있어서 재형성되지 않는다. 진피에 대한 작은 및(또는) 표면상의 손상은 인접 종류와 유사한 구조를 형성시키고 반응성 육아조직을 형성시켜 상실 조직을 대체시킴으로써 치료된다. 예를 들면 깊은 화상, 3도 열상 후, 그리고 진피 일부의 손실 후의 보다 광범한 조직 상실은 필연적으로 상처 형성, 가변적이지만 지속적인 조직의 상실 및 영구적인 변형으로 치료된다. 상처 조직의 기계적 저항 성분은 주로 단섬유의 타입 III 콜라겐 및 하부 구조로 구성되고 따라서 정상 최적 타입 I의 콜라겐에 비해 열등한 기계적 특성을 갖는다. 무정형 가소성 기질의 분획 및 조직 세포성이 저하된다. 혈관의 수는 정상 조직에서의 수에 비해 시간이 지남에 따라 감소되고 혈관의 분포 및 종류가 변화한다. 대응하는 정상 혈관에 비해 기능이 열등한, 광범위한 박막 혈관이 비정상적인 임프관계처럼 자주 발생한다. 이와 같이, 활주계는 최종적으로 단단한 섬유상 콜라겐 결합 조직으로 대체된다.
추가로 복잡하고 매우 중요한 인자는, 세포가 느린 속도로 강력하게 수축하여 장시간 동안 수축을 유지할 수 있게 하는 근육 단백질의 세포질성 다발의 수를 증가시키는, 대식구의 일부이기도 한 근섬유아세포, 즉 "통상적인" 결합 조직 세포 (섬유아세포)의 출현에 의해 발생한다. 이는 이에 영향받은 조직의 기능을 변형시키고 제한하는 경축을 야기할 수 있다. 근섬유아세포의 증가는 예를 들면 유방 이식체 주위 (유방 확대 또는 유방 재건을 위해 이식된 실리콘 보형재; 보다 구체적인 내용은 문헌 참조 [C. Lossing & H-A Hansson, Plastic Reconstr. Surgery 1993, Vol. 91, page 1277-1286]) 및 봉합 및 다른 외부 물질 이식체 주위에서 보인다. 근섬유아세포는 특정 류마티스성관절염에서 관절 주위에서 증가된 빈도로 발생하고 손가락의 변형 및 때때로 탈구도 발생시킬 수 있다. 이 세포는 뒤퓌트랑 (Dupuytren) 경축을 가진 환자를 괴롭히는 손의 변형을 야기하는 병인이다. 근섬유아세포 및 통상의 섬유아세포는 그의 한 단위체가 항상 β1-인테그린 (integrin)으로 구성되는 특정 이종이량체성 수용체를 통해 콜라겐 섬유에 부착된다. 인테그린을 차단하면 경축이 제거된다. 염증 저하 약물은 인테그린의 발현에 영향을 줄 수 있다.
따라서, 잘 정의된 활주계 표면을 갖거나 갖지 않는 소성 결합 조직의 활주계는 최소의 염증을 갖는 환자에게서만 회복된다. 그러나, 육아조직의 형성은 본질적으로 미성숙 세포 및 조직 성분을 형성시키는 염증성 반응과 협력되어서만 발생한다. 복구 반응 동안에 형성되는 새로운 조직이 정상 분화 수준에 근접하지 못하는 원인은 상처 조직이 상실된 처음의 성숙 조직에 비해 정량적으로 및 정성적으로 그 특질이 열등하기 때문이다. 재생된 조직의 성숙에는 세포, 섬유 및 기질의 분화를 조절하고 촉진하는 성장 인자에 대한 접근이 필요하다.
광범한 연구가 상처, 예를 들면 외과 절개, 사고, 염증 및 종양에 의해 발생한 상처의 치료에 있어서 조직의 바람직하지 않은 부착을 피하는 문제를 해결하고자 하였다. PCT 출원 제US90/02406호에는 이러한 특정 문제에 관련된 기술이 개시되어 있고 배경 기술에 대한 비교적 광범위한 규명을 포함하고 있다. 상기 특허 출원에 개시된 기술은 그 반대편 표면이 상이한 조성을 갖기 때문에 상이한 생물학적 기능을 갖는, 생분해가능 생활성막을 포함하는 샌드위치 구조의 사용에 기초한다. 그러나, 이에 따른 제품은 아직 시판되고 있지 않다.
발명의 요약
따라서, 본 발명의 목적은 그의 사용이 단기간 동안에 최소의 염증만을 일으키고, 생체 적합성이며 분해 생성물을 손상시키지 않고 생분해될 수 있는 항부착제를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 계면을 유도하는 능력을 갖고, 예를 들면 외과 절개에 있어서 기계적 기술적 처리를 단순하게 하는 항부착제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 상처 치료에 있어서 인접 또는 주위 조직 및 기관의 바람직하지 않은 부착을 억제하거나 실질적으로 감소시키는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 상처 치료에 있어서 조직의 재생을 촉진하는 것이다.
하기 기술에 의해 규명되는 이들 및 다른 목적을 위해 본 발명을 통하여 키토산 및 그에 고정화된, 헤파린, 헤파란 술페이트 및 덱스트란 술페이트 중에서 선택되는 폴리사카라이드의 신규의 용도가 제공된다. 이 조성물을 사용하여 상처 치료에 있어서 손상 조직의 인접 또는 주위 조직에 대한 바람직하지 않은 부착을 제거하거나 실질적으로 감소시키는 능력을 갖는 제제가 제조될 수 있다.
사용되는 폴리사카라이드는 주로 3가지의 상이한 방식으로 키토산에 고정될 수 있다. 따라서, 고정화는 이온결합, 공유결합 및 용액으로부터의 침전과 관련하여 키토산 내로의 기계적 봉입에 의해 수행될 수 있다. 관련 폴리사카라이드의 아미노기 함유 물질에 대한 공유 결합 방법은 미국 특허 제4,613,665호에 개시되어 있다.
폴리사카라이드로서는 수개의 제조회사에서 시판되는 헤파린 또는 헤파란 술페이트를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 또한, 부분 가수분해 형태의 폴리사카라이드도 생물학적 활성이 유지되는 한 사용될 수 있다.
본 발명에 따라 사용되는 항부착제는 상이한 물리적 형태, 예를 들면 필름 또는 막, 겔, 튜브 또는 호스, 분말, 에어로졸 또는 용액으로 존재할 수 있다. 물론 관련 형태가 관련 손상에 도포된다. 대부분의 경우에 필름이 유용하지만, 특정 경우, 예를 들면 근육 및 건과 같은 긴 폐쇄 조직에 대해서는 튜브 또는 겔을 사용할 수 있다.
키토산은 β-D-글루코스 아민 단위로 형성되는 선형 1,4-결합 폴리사카라이드이다. 키토산은 무엇보다도 곤충 및 갑각류의 외피를 형성하는 중합체인 키틴의 N-탈아세틸화에 의해 제조된다. 상업적으로, 키틴은 어류 가공 산업의 폐기물의 구성 요소인 게 및 새우의 표피로부터 회수된다. 키틴에 대한 알칼린 처리를 조절함으로써 N-아세틸화 수준이 상이한 키토산을 제조할 수 있다. 키틴을 진한 알칼리, 통상 수산화나트륨으로 처리할 때, N-탈아세틸화가 발생한다. 즉, 아세트아미도기가 아미노기로 전환되어 키토산을 형성한다.
그의 유용성에 영향을 주는 키토산의 물리적 특성은 N-아세틸화, 분자량 및 균질성에 의존한다. 키토산은 소화계에서의 키티나제 및 체액에서의 리소자임 및 다른 효소 모두에 의해서 생분해가능하다.
키토산의 N-아세틸화 수준은 약 90% 이하, 바람직하게는 약 50% 이하인 것이 본 발명의 용도에 관련하여 바람직하다. 키토산의 N-아세틸화는 약 25% 미만인 것이 특히 바람직하다.
또한, 본 발명은 상처 치료와 관련하여 조직의 바람직하지 않은 부착을 억제하거나 실질적으로 감소시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 상처 치료 부위에 키토산 및 이에 고정화된, 헤파린, 헤파란 술페이트 및 덱스트란 술페이트 중에서 선택되는 폴리사카라이드를 포함하는 제제를 도포하는 것을 포함한다.
관련 상처의 특성에 따라 제제는 필름, 겔 또는 튜브 또는 호스의 형태로 도포될 수 있다. 도포를 위해 선택되는 제품은 예를 들면 관련 외과 처리와 관련하여 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명은 신규의 항부착제, 즉 상처 치료에 있어서 조직의 바람직하지 않은 부착을 억제하는 능력을 갖는 생성물에 관한 것이다. 이 생성물은 또한 조직의 재생을 촉진함으로써 치료 특성을 개선시키는 능력도 갖는다.
또한, 본 발명은 조직의 상기 바람직하지 않은 부착을 억제하는 방법을 포함한다.
본 발명은 하기 실시예를 통하여 예시되고, 본 발명은 이에 제한되지 않는다. 실시예에서 모든 필름은 표면적이 54 cm2인 페트리디쉬에서 제조되었다.
실시예 1
키토산 필름의 제조
키토산 (아세틸화도 50%, 프로노바 (Pronova))의 히드로클로라이드염 5 g을 증류수 (1% v/w) 0.5 리터 중에 용해시켰다. 생성 용액 10 ml을 페트리디쉬에 옮기고 증발시키고 가열 캐비넷 중에서 70℃에서 24시간 동안 건조시켜 키토산 필름을 형성시켰다. 이어서, 0.2 M 인산나트륨 완충액 (pH 9.0)을 첨가하여 필름을 중화시켰다. 필름을 실온에서 상기 완충액 중의 페트리디쉬에 2 내지 4시간 동안 유지시킨 후 물로 3 내지 4회 세척하고 건조시켰다.
실시예 2
키토산 필름의 제조
키토산 (아세틸화도 20%, 프로노바)의 히드로클로라이드염 5 g을 2% 아세트산 용액 (1% v/w) 0.5 리터 중에 용해시켰다. 용액을 125℃에서 1시간 동안 오토클레이빙하여 멸균하였다. 냉각시킨 후 용액 20 ml을 사용하여 필름을 페트리디쉬에서 제조하였다. 이어서, 필름을 실온에서 건조시키고 0.2 M 인산나트륨 완충액 (pH 9.0)을 첨가하여 중화시키고 디쉬에 첨가하였다. 필름을 실온에서 상기 완충액 중에 2 내지 4시간 동안 유지시킨 후 증류수로 3 내지 4회 세척하고 재차 건조시켰다.
실시예 3
헤파린의 아질산 분해
헤파린 1 g을 물 300 ml 중에 용해시켰다. 용액을 빙수 중에서 0℃로 냉각시키고 차가운 상태로 유지시켰다. 먼저, 아질산나트륨 (NaNO2) 10 mg을 첨가하였다. 이어서, 아세트산 2 ml을 교반 중인 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 유지시키고 투석시킨 후 동결건조시켰다. 분해된 헤파린 0.7 g이 생성되었다.
실시예 4
헤파린의 페리오데이트 산화
소듐페리오데이트-산화 소듐헤파린 용액을 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 소듐페리오데이트 (NaIO4) 1 g을 증류수 200 ml 중에 용해시켰다. 소듐헤파린 10 g을 소듐페이로데이트 용액에 첨가하고 무광 하에 철야 교반하였다. 글리세롤 10 ml을 첨가하고 2시간 동안 교반한 후 생성 용액을 물에 대하여 투석시켰다. 물을 매시간 교체하였다. 이렇게 하여 농도가 약 19 mg/ml인 페리오데이트-산화 헤파린을 함유하는 용액을 얻었다.
실시예 5
공유결합 헤파린 (말단부 부착)을 갖는 키토산 필름의 제조
물 0.5 리터 중에 용해된 실시예 3에서 제조된 아질산염으로 분해된 헤파린 125 mg 및 NaCl 4.4 g을 함유하는 용액 20 ml을 실시예 1에 따라 제조된 중화된 키토산 필름에 첨가하였다. 용액에 수소화시아노붕소 나트륨 15 mg을 첨가하였다. 0.5 M 염산 또는 다른 산을 사용하여 용액의 pH를 3.9로 조정하였다. 키토산 필름을 포함하는 용액을 실온에서 14시간 동안 정치시킨 후 처리된 필름을 물로 3 내지 4회 세척하고 건조시켰다.
실시예 6
공유결합 헤파린 (다중 부위 부착)을 갖는 키토산 필름의 제조
염화나트륨 4.4 g 및 실시예 4에서 기술한 바와 같이 제조된 페리오데이트 산화된 헤파린 125 mg을 물 0.5 리터 중에 용해시키고 0.5 M 염산을 사용하여 pH를 3.9로 조정하였다. 용액에 소듐 시아노보로히드라이드 15 mg을 첨가하고 용액을 실온에서 10시간 동안 유지시켰다. 이 용액 20 ml 중에 실시예 2에 따라 제조된 중화된 키토산 필름을 첨가하고 24시간 동안 정치시켰다. 이어서, 처리된 필름을 물로 3 내지 4회 세척하고 건조시켰다. 이 헤파린의 공유결합 기술에 관한 세부 내용은 미국 특허 제4,613,665호 참조.
실시예 7
이온결합 헤파린을 갖는 키토산 필름의 제조
중화된 키토산 필름을 실시예 2에서와 같은 방법으로 제조하였다. NaCl 4.4 g을 포함하는 물 0.5 리터 중의 헤파린 125 g의 용액을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 정치시킨 후 필름을 물 0.5 리터로 2회 세척하고 건조시켰다.
실시예 8
생물학적 시험, 조절
실시예 2에 따라 제조된 필름을 다음과 같은 동물 모델에서 항부착막으로서 사용하였다.
쥐의 복벽을 절개하고 외과 수술 방식으로 시상봉합선 양쪽에 약 12 x 10 mm의 상처를 만들었다. 한쪽 상처에는 실시예 2의 필름 (약 18 x 15 mm)으로 덮고 다른 한쪽은 개방된 상태로 두었다. 덱손 (Dexon: 등록상표) 7-0을 사용하여 봉합이 복강에 노출되지 않도록 하여 막을 봉합하였다.
2주 및 4주 후에 결과를 평가하였다. 이와 관련하여, 막에 대해서 복강 내에 소량의 부착이 발견되었으며, 조직 결함이 필름에 의해 덮이지 않았다면 다량의 부착이 보였을 것이다.
필름 아래의 복부 결함은 본질적으로 상처 조직의 형성으로 치료되고 필름 주위에 염증성 반응 및 피막 형성의 징후가 있었다.
실시예 9
본 발명에 따른 생물학적 시험
실시예 3에 따라 제조된 필름을 다음과 같은 동물 모델에서 항부착막으로서 사용하였다.
쥐의 복부를 절개하고 외과 수술 방식으로 시상봉합선 양쪽에 약 12 x 10 mm의 상처를 만들었다.
상처 한쪽에는 약 18 x 15 mm의 필름으로 덮고 다른 한쪽에는 개방된 상태로 두었다. 막을 실시예 8과 동일한 방식으로 봉합하였다.
개방 상태로 유지시킨 상처 부위는 부착이 거의 발생하지 않은 필름으로 덮인 상처와는 달리 다수의 부착을 보였다.
실시예 10
이온결합 헤파린을 갖는 키토산 필름의 제조
키토산 (아세틸화도 45%, 프로노바)의 히드로클로라이드염 5 g을 물 (1% v/w) 0.5 리터 중에 용해시켰다. 용액을 125℃에서 1시간 동안 오토클레이빙하여 멸균하였다. 냉각시킨 후 용액 20 ml을 사용하여 필름을 페트리디쉬에서 제조하였다. 이어서, 필름을 실온에서 건조시키고 물 0.5 리터 중의 헤파린 125 g의 용액을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 유지시킨 후 필름을 물 0.5 리터로 2회 세척하고 건조시켰다.
실시예 11
키토산 필름의 제조
키토산 (아세틸화도 45%, 프로노바)의 히드로클로라이드염 5 g을 물 (1% v/w) 0.5 리터 중에 용해시켰다. 용액을 125℃에서 1시간 동안 오토클레이빙하여 멸균하였다. 냉각시킨 후 용액 20 ml을 사용하여 필름을 페트리디쉬에서 제조하였다. 이어서, 필름을 실온에서 건조시키고 0.2 M 인산나트륨 완충액 (pH 9.0)을 첨가하여 중화시키고 디쉬에 첨가하였다. 필름을 실온에서 상기 완충액 중에 2 내지 4시간 동안 유지시킨 후 증류수로 3 내지 4회 세척하고 재차 건조시켰다.
실시예 12
본 발명에 따른 생물학적 시험
실시예 10에서 상기한 바와 같이 키토산-헤파린으로부터 제조된 필름을 상기한 바와 같이 체강 복벽 상에 만든 상처 (10 x 12 mm, 깊이 1 mm)를 덮기 위해 위치시켰다. 동일한 상처를 복벽의 반대쪽에 만들고 실시예 11에 기술한 키토산 필름으로 덮었다. 2주 후에 부착 형성 평가하였다. 헤파린-키토산 필름으로 덮힌 상처에는 부착이 없었으나 평면 키토산 필름으로 덮힌 상처는 몇개의 작은 부착을 보였다. 헤파린-키토산 필름을 광학현미경으로 조사한 결과, 중피상 세포에 의한 피복의 정도를 포함하여 상처의 치료가 개선되고, 평면 키토산 필름으로 덮힌 대응하는 영역에서보다 헤파린-키토산 필름과 상처입은 복벽 조직 사이의 계면에서 염증 세포의 침윤이 보다 광범위하지 않음을 알았다.
실시예 13
키토산-헤파린 필름의 제조
키토산 (아세틸화도 16%, 프로노바)의 히드로클로라이드염 5 g을 2% 아세트산 용액 (1% v/w) 0.5 리터 중에 용해시켰다. 용액을 125℃에서 1시간 동안 오토클레이빙하여 멸균하였다. 냉각시킨 후 용액 20 ml을 사용하여 필름을 페트리디쉬에서 제조하였다. 이어서, 필름을 70℃에서 16시간 동안 오븐에서 증발시켰다. 필름을 0.1 M NaOH 용액으로 실온에서 3시간 동안 처리한 후 증류수로 3 내지 4회 세척하고 70℃에서 2시간 동안 재차 건조시켰다. 이어서, 생성 필름을 페트리디쉬에 옮기고 0.2 M 인산염 완충액 (pH 6.4) 중의 천연 헤파린 (1% w/v, 돼지 점막, 카비비트럼 (Kabivitrum))의 멸균 용액 30 ml을 첨가하였다. 필름을 실온에서 철야 유지시킨 후 멸균수로 세척하고 LAF 벤치에서 건조시켰다. 추가로 4개의 필름을 상기와 같은 방법을 사용하되 각각 헤파린 0.5%, 0.1%, 0.01% 및 0.00% 용액으로 처리하여 제조하였다. 헤파린 처리 필름을 원소 분석한 결과, 이들 필름은 각각 1.2%, 0.9%, 1.3%, 0.23 및 0.007%의 황을 포함하였다. 각각 10개의 생검을 갖는 6개의 군으로 분류하여 측정한 이들 수치는 각각 9.2%, 7.7%, 10.8%, 1.9% 및 0%의 헤파린 함량에 대응한다.
실시예 14
시험관내 상처의 제조
마섹터미 (masectomy) 시편으로부터 멸균 인간 피부를 얻었다. 각 실험에서 동일 공여자의 피부만을 사용하였다. 멸균 조건 하에서, 생검 펀치 (영국 소재의 스티펠 래버러토리즈 (Stiefel Laboratories))로 직경 6 mm의 원을 절개하였다. 각 단편의 중심의 표면 쪽에 3 mm 생검 펀치로 부분 상처를 만든 후 표면 쪽을 위로 하여 12-웰 플레이트 (코스타 (Costar))에 옮겼다. 상처를 기체/액체 계면 중에 유지하는 표면 수준이 되도록 각 웰을 둘베코스 모디파이드 이글스 미디엄 (DMEM)으로 충전하였다. 2% 우태아 혈청 (FCS) 및 항생제 (페니실린 50 μg/ml 및 스트렙토마이신 50 μg/ml)를 모든 시료에 첨가하였다.
실시예 15
시험관내 치료 시험
실시예 14에서 기술된 시험관내 상처를 각 군당 10개의 생검을 갖는 5개의 군으로 분류하였다. 모든 상처를 실시예 13에서 기술한 헤파린 처리 필름으로 덮었다. 배지를 매일 교체하였다. 7일 후에 단편을 4% 중성 완충 포름알데히드 중에 고정시키고 에탄올-크실렌계를 통하여 탈수시키고 파라핀 중에 담갔다. 두께10 내지 20 mm의 단면을 해마톡실린 및 에오신으로 염색하고 상피 재생 정도를 광학현미경으로 분석하였다. 전체가 표피세포로 덮힌 상처만을 치료된 것으로 간주하였다.
도 1에서 입증되는 바와 같이, 헤파린 함량이 2% 미만인 필름은 세포증식을 자극하지 않았다.
실시예 16
겔 조성물의 제조
0.9% NaCl을 포함하는 물을 사용하여 다음과 같은 겔 조성물 4개를 제조하였다.
A = 2% 메틸셀룰로스
B = 2% 메틸셀룰로스 + 0.2% 소듐헤파린
C = 0.5% 메틸셀룰로스 + 1% 키토산 (16% 아세틸화)
D = 0.5% 메틸셀룰로스 + 1% 키토산 (16% 아세틸화) + 0.2% 소듐헤파린
실시예 17
시험관내 치료 시험
실시예 14에서 기술된 시험관내 상처를 각 군당 10개의 생검을 갖는 6개의 군으로 분류하였다. 5개 군의 모든 상처를 실시예 16에서 기술한 겔 조성물로 덮었다. 1개 군은 배지 (2% FCS)로만 처리하였다. 배지를 매일 교체하였다. 7일 후에 단편을 4% 중성 완충 포름알데히드 중에 고정시키고 에탄올-크실렌계를 통하여 탈수시키고 파라핀 중에 담갔다. 두께 10 내지 20 mm의 단면을 해마톡실린 및에오신으로 염색하고 재상피화 정도를 광학현미경으로 분석하였다. 전체가 표피세포로 덮힌 상처만을 치료된 것으로 간주하였다.
도 2에서 입증되는 바와 같이, 키토산과 헤파린의 조합으로 구성된 겔은 키토산 또는 헤파린만을 갖는 겔보다 상처를 양호하게 치료하였다.
실시예 18
본 발명에 따른 생물학적 시험
실시예 7에 따라 제조된 필름을 사용하여 실시예 9를 반복하였다.
상기 생물학적 실험으로부터 명백한 바와 같이 본 발명에 따른 기술을 사용하여 부착 억제 및 성장 자극의 측면에서 치료 특성을 실질적으로 개선시킬 수 있었다. 본 발명은 상기 실시예에 제한되지 않고 본 발명의 범위는 첨부된 청구의 범위에 의해서만 제한된다.
본 발명의 출원에 대하여 상기 제조된 필름 또는 막, 겔 또는 분말 또는 용액은 복벽; 흉벽; 폐; 심장-심막; 중추 혈관; 장관; 비뇨생식관; 스쿨 (scull); 뇌; 척수; 건; 신경; 근육; 뼈; 점막; 각막, 피부 등의 기관 및 구조 내의 또는 상의 상처 및 결함에 관련하여 사용될 수 있음을 언급할 수 있다.
튜브 또는 호스 또는 겔 형태의 제품은 성장 자극의 가이드로서 사용될 수 있고 동시에 활주면은 주위 조직에 대한 부착을 피한다는 사실에 의해 유지될 수 있다. 이러한 제품은 신경, 건 및 인대, 장관, 비뇨생식관, 혈관 등에 대하여 사용될 수 있다.
본 발명을 성장 인자와 조합하여 훨씬 더 양호한 치료 특성의 자극을 달성할수도 있을 것이다.

Claims (32)

  1. 상처 치료에 있어서 인접 또는 주위 조직의 손상 조직에 대한 바람직하지 않은 부착을 억제하거나 감소시키기 위한, 키토산 및 그에 고정화된, 헤파린, 헤파란 술페이트 및 덱스트란 술페이트 중에서 선택되는 폴리사카라이드를 포함하는 제제.
  2. 제1항에 있어서, 폴리사카라이드가 이온결합에 의해 키토산에 고정화된 제제.
  3. 제1항에 있어서, 폴리사카라이드가 공유결합에 의해 키토산에 고정화된 제제.
  4. 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리사카라이드가 헤파린 또는 헤파란 술페이트인 제제.
  5. 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 필름 또는 막의 형태인 제제.
  6. 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 튜브 또는 호스의 형태인 제제.
  7. 제4항에 있어서, 필름 또는 막의 형태인 제제.
  8. 제4항에 있어서, 튜브 또는 호스의 형태인 제제.
  9. 제6항에 있어서, 겔의 형태인 제제.
  10. 제8항에 있어서, 겔의 형태인 제제.
  11. 제6항에 있어서, 분말, 에어로졸 또는 용액의 형태인 제제.
  12. 제8항에 있어서, 분말, 에어로졸 또는 용액의 형태인 제제.
  13. 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  14. 제4항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  15. 제5항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  16. 제6항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  17. 제7항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  18. 제8항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  19. 제9항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  20. 제10항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  21. 제11항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  22. 제12항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 90% 이하인 제제.
  23. 제13항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  24. 제14항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  25. 제15항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  26. 제16항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  27. 제17항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  28. 제18항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  29. 제19항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  30. 제20항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  31. 제21항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
  32. 제22항에 있어서, 키토산의 N-아세틸화도가 50% 이하인 제제.
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