KR100330911B1 - Fancy goods decorated by human protein band strip - Google Patents

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    • B44DECORATIVE ARTS
    • B44CPRODUCING DECORATIVE EFFECTS; MOSAICS; TARSIA WORK; PAPERHANGING
    • B44C5/00Processes for producing special ornamental bodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10Plasmid DNA

Abstract

본 발명은 단백질의 밴드 스트립 (band strip)을 이용하여 장식되는 장식품에 관한 것으로, 구체적으로 공여자로부터 채취한 단백질 또는 유전공학적인 방법으로 공여자의 유전자로부터 얻어낸 단백질로부터 얻어지는 밴드 스트립, 특히 혈액 단백질을 분리하여 얻어진 밴드 스트립을 염색한 후 제품에 삽입하거나 직접 부착시킴으로써, 장신구류, 악세사리, 카드, 휴대폰용 악세사리, 음반, 문구류 등을 장식한 장식품에 관한 것이다. 본 발명에 의해 단백질 밴드 스트립으로 장식된 여러 가지 제품은 보관하기 편하고 아름다운 외관을 가지며 또한 공여자만의 특징적인 이미지를 함유하므로 그 소유자로 하여금 공여자와 함께 하고 있다는 이미지를 극대화시켜 나타내는 효과가 있어 차별화된 캐릭터의 표현이 요구되는 여러 가지 제품에 널리 응용될 수 있다.The present invention relates to an ornament that is decorated using a band strip of protein, and specifically, isolates a band strip obtained from a protein obtained from a donor or a protein obtained from a donor's gene by genetic engineering method, in particular a blood protein. The present invention relates to ornaments decorated with ornaments, accessories, cards, accessories for mobile phones, records, stationery, and the like by dying the band strips obtained by inserting or directly attaching them to the product. Various products decorated with protein band strips according to the present invention are easy to store and have a beautiful appearance, and also contain a characteristic image of the donor, thereby maximizing the image that the owner is with the donor. It can be widely applied to various products requiring the expression of characters.

Description

단백질의 밴드 스트립을 이용한 장식품{Fancy goods decorated by human protein band strip}Fancy goods decorated by human protein band strip}

본 발명은 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품에 관한 것으로, 구체적으로 공여자로부터 채취한 단백질 또는 유전공학적인 방법으로 공여자의 유전자로부터얻어낸 단백질으로부터 얻어지는 밴드 스트립, 특히 혈액 단백질을 분리하여 얻어진 밴드 스트립을 염색한 후 장식하고자 하는 제품에 삽입 또는 부착한 장식품에 관한 것이다.The present invention relates to an ornament using a protein band strip, and specifically, after staining a band strip obtained from a protein obtained from a donor or a protein obtained from a donor's gene by genetic engineering method, in particular, a band strip obtained by separating blood proteins The present invention relates to an ornament inserted or attached to a product to be decorated.

대중 스타의 이미지를 가까이에서 느끼고 공유하고자 하는 이들의 요구에 부합하여, 여러 가지 제품에는 대중 스타의 캐릭터를 특징지어 나타내기 위해 사진이나 싸인 등을 삽입하여 제품을 장식하고 있다. 또한, 특이성을 부각시키고 외관이 더욱 화려하게 보이도록 하기 위하여 홀로그램 등의 기법을 사용하여 제품을 장식하기도 한다. 그러나 지금까지는 제품을 장식하는 목적으로 단백질, 특히 공여자로부터 얻어지는 단백질을 사용한 예는 없었다.In order to meet the demands of those who want to feel and share the image of the public star in close proximity, various products are decorated by inserting photos or signs to characterize the character of the popular star. In addition, in order to highlight the specificity and make the appearance more colorful, the product is decorated using a holographic technique. Until now, however, there have been no examples of using proteins, particularly those obtained from donors, to decorate products.

단백질은 생물체의 몸을 구성하는 성분으로서, 구체적으로 근육이나 피부 및 뼈의 주요 성분으로 골격 형성을 담당하고 에너지를 저장하며 혈액 내 여러 가지 구성 물질의 주요 성분으로 산소나 이산화탄소 등의 작은 분자 또는 에너지를 운송하는 역할을 하기도 한다. 더욱이 세포 내에서는 각종 화학반응이 끊임없이 일어나고 있는데, 이 화학반응은 생물체를 구성하는 모든 물질을 합성하는 데 필요한 것이고 또 생물의 활동에 필요한 모든 에너지를 공급하는 데 필요하다. 이 모든 화학반응은 필요한 시기에 필요한 양만큼, 그리고 필요한 장소에서 이루어져야 하며, 바로 이 조절 및 촉매 역할을 맡고 있는 효소의 주요 성분이 단백질이다. 또한 단백질은 외부에서 들어온 항원에 대항하는 항체를 형성하여 면역 반응을 담당하고 신경 신호를 전달하며 세포의 성장 및 분화에 관계하는 물질 및 호르몬을 구성하는 등 생명 유지에 있어 대단히 중요한 유기물질이다.Proteins are the components that make up the body of an organism. Specifically, they are the main components of muscles, skin, and bones. They are responsible for the formation of skeletons, store energy, and are the main components of various constituents in the blood. It also serves to transport Moreover, various chemical reactions are constantly occurring in cells, which are necessary for the synthesis of all the substances that make up the organism and for supplying all the energy necessary for the activity of the organism. All these chemical reactions must be carried out in the right amount and at the right place at the right time, and the protein is the main component of the enzyme responsible for this regulation and catalyst. In addition, protein is an organic substance that is very important in maintaining life, such as forming an antibody against an antigen from outside to play an immune response, transmit nerve signals, and make up substances and hormones involved in the growth and differentiation of cells.

구체적으로 혈액은 혈장 (plasma)과 혈구 (cellular portion)로 나누어지는데, 혈장은 혈액 속의 유형 성분, 즉 혈구를 제외한 액체성분으로서, 투명환 담황색 중성 액체이다. 혈액에 응고방지제를 넣어 원심침강시키거나 저온 (약 0 ℃)에 방치해 두면 혈구가 아래쪽으로 침강함으로써 혈장과 혈구로 분리된다. 전체 혈액 중 혈장이 차지하는 비율은 약 50-60%이고, 혈장은 다시 물, 혈장 단백질, 나트륨, 염소, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등의 무기염류 이온, 당류, 콜레스테롤과 레시틴 등의 지질, 아미노산, 호르몬, 비타민, 혈장에 녹아있는 기체 등으로 나누어진다. 혈장 단백질로는 주로 알부민 (albumin), 글로불린 (globulin), 피브리노겐 (fibrinogen) 등이 존재하며, 상기 여러 혈장 내 성분들은 그 크기와 분자량, 특정한 분자에 대한 친화도 및 전하량 등의 물리적, 화학적 성질이 다르므로 여러 가지 적합한 물리적, 화학적 방법에 의해 분리할 수 있다. 또한 혈구는 주로 몸의 각 부분으로 산소, 이산화탄소 및 영양분을 공급하는 적혈구, 외부 바이러스에 대항하는 여러 종류의 백혈구 및 출혈 시 혈액응고를 담당하는 혈소판으로 구성되어 있으며, 신체 활동 및 유지에 중대한 역할을 하고 있다. 이러한 혈장의 총량과 조성 및 혈구 성분의 상태는 질병 등 각 개체의 신체적 상황에 따라 현저하게 변화하므로 병의 진단이나 상태를 알아내는 데 유용하며, 따라서 각 공여자로부터 추출된 혈장 및 혈구 성분 및 그 분리된 양상은 그 공여자만의 특징적인 성질을 내포하고 있다고 할 수 있다.Specifically, blood is divided into plasma and cellular portion. Plasma is a physiological component of blood, that is, a liquid component excluding blood cells, and is a transparent, light yellow neutral liquid. If anticoagulant is added to the blood and centrifuged or left at a low temperature (about 0 ° C), the blood cells settle downward and are separated into plasma and blood cells. Plasma accounts for about 50-60% of the total blood, and plasma again contains water, plasma proteins, inorganic salt ions such as sodium, chlorine, potassium, calcium and magnesium, sugars, lipids such as cholesterol and lecithin, amino acids and hormones. It is divided into vitamins, gases dissolved in plasma. Plasma proteins mainly include albumin, globulin, and fibrinogen, and the various plasma components have different physical and chemical properties such as size, molecular weight, affinity and charge for a particular molecule. It is different and can be separated by a variety of suitable physical and chemical methods. Blood cells also consist mainly of red blood cells, which supply oxygen, carbon dioxide and nutrients to different parts of the body, various types of white blood cells against external viruses, and platelets responsible for blood coagulation in the event of bleeding. Doing. The total amount and composition of plasma and the state of blood cell components change significantly according to the physical condition of each individual such as disease, which is useful for diagnosing or detecting the disease. Therefore, plasma and blood cell components extracted from each donor and their isolation One aspect can be said to contain the characteristic characteristics of the donor.

단백질의 분리하기 위한 방법으로 전기영동 (electrophoresis)을 이용하는데, 전기영동은 콜로이드 용액 속에 전극을 넣고 직류 전압을 가하면 콜로이드 입자가 어느 한쪽의 전극을 향해서 이동하는 현상을 말한다. 전기영동은 콜로이드 입자가 전하를 띠고 있기 때문에 일어나는 것으로, 입자의 이동 속도는 입자 계면에서의 전기운동학적인 전위차에 의해서 변하고, 전해질이 흡착되면 이 전위차의 크기가 변하므로 용액 속의 전해질의 농도나 종류에 따라 영향을 받는다. 또한 입자의 크기와 형태 및 용액 내 이온의 종류와 농도에 따라서도 이동 속도가 변한다. 따라서 콜로이드 입자의 각종 성질이 같다고 해도 그 중 어느 하나가 다르면 전기영동에 의해서 입자를 분리할 수가 있으며, 주로 단백질 등 고분자의 분리 및 분석에 사용된다. 특히 전기영동은 겔 (gel) 상에서 주로 행해지는데, 겔 자체가 분자체 (molecular sieve)의 역할을 동시에 수행하기 때문에 그만큼 분리의 효율이 더 높아지며, 분리된 여러 개의 밴드로부터 단백질의 특징을 나타낼 수 있다. 겔 전기영동 방법 중 가장 널리 쓰이는 것은 특히 SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis)로서, SDS 음이온은 약 두 개의 아미노산 잔기와 결합하기 때문에 SDS와 결합한 변성된 단백질의 전체 전하량은 그 단백질 질량에 거의 비례하게 되어 단백질을 그 질량에 따라 매우 효율적으로 분리할 수 있다.Electrophoresis is used as a method for separating proteins. Electrophoresis refers to a phenomenon in which colloidal particles move toward one electrode when an electrode is placed in a colloidal solution and a DC voltage is applied. Electrophoresis occurs because the colloidal particles are charged, and the rate of movement of the particles varies with the electrokinetic potential difference at the interface of the particles, and when the electrolyte is adsorbed, the magnitude of the potential difference changes with the concentration or type of electrolyte in the solution. Affected accordingly. The rate of movement also varies with the size and shape of the particles and the type and concentration of ions in the solution. Therefore, even though the various properties of the colloidal particles are the same, if any one of them is different, the particles can be separated by electrophoresis, mainly used for separation and analysis of polymers such as proteins. In particular, electrophoresis is mainly performed on a gel, and since the gel itself plays a role of a molecular sieve at the same time, the separation efficiency is higher, and the protein can be characterized from several separated bands. . The most widely used method of gel electrophoresis is especially SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis), since the SDS anion binds about two amino acid residues, so the total charge of the denatured protein bound to SDS depends on its protein mass. Nearly proportional, the protein can be separated very efficiently by mass.

한편 이러한 단백질은 그 생물체의 유전자에 의하여 지시되는 대로 합성된다. 단백질은 자연적인 방법에 의한 합성 외에도 근래에 들어 유전공학 (genetic engineering)을 이용하여 인위적으로 합성되기도 하는데, 유전공학은 현존하는 생물이나 새로운 형태의 생물을 의도적으로 변화시키기 위한 기술로서, 구체적으로는 재조합 유전자 기술 (recombinant DNA technology), 세포융합기술 및 핵치환기술 등을 이용하여 생물의 유전자를 인공적으로 가공해서 인간에게 필요한 물질을 대량으로 값싸게 얻을 수 있다. 유전자 재조합은 특정한 단백질을 합성하는 유전자를 제한효소로 절단하여 대장균의 플라스미드에 넣어 단백질 합성을 행하게 하는 것으로, 예를 들면 사람의 인슐린, 생장호르몬, 인터페론 등이 대장균에서 생산된다.These proteins, on the other hand, are synthesized as directed by the organism's genes. In addition to natural synthesis, proteins have recently been artificially synthesized using genetic engineering. Genetic engineering is a technique for intentionally changing existing organisms or new types of organisms. Recombinant DNA technology, cell fusion technology, and nuclear replacement technology can be used to artificially process genes of living organisms to obtain a large amount of substances necessary for humans at low cost. Gene recombination is to cut a gene synthesizing a specific protein with a restriction enzyme and put it in a plasmid of E. coli to perform protein synthesis. For example, human insulin, growth hormone, interferon, etc. are produced in E. coli.

재조합 유전자 기술은 기본적으로 두 과정으로 이루어진다. 첫째는 DNA 단편을 플라스미드나 박테리오파지처럼 독자적 복제능력이 있는 적당한 유전자 운반체 (vector)에 연결시켜 주는 일이다. DNA 단편은 자기복제 능력이 없으므로 이것들이 새 숙주세포에 들어가서 유전자로서 기능을 할 수 있게 하기 위해서 작은 레플리콘 (replicon : 플라스미드 또는 바이러스)에 연결시켜 그 숙주세포에서 자기복제할 수 있게 해 주어야 한다. 둘째 과정은 재조합된 DNA를 숙주세포 속에 주입하여 유전정보를 발현시키게 하는 일이다. 구체적인 전사 과정은 미생물과 고등 생물의 경우 다른데, 고등생물은 대개의 경우 mRNA로부터 거꾸로 전사한 상보 DNA (cDNA, complementary DNA)를 만들어서 이것을 미생물에 주입시켜 형질을 발현시킨다. 먼저 특정 세포에서 mRNA를 추출하고, 원하는 단백질의 합성이 확인되면 그 mRNA를 역전사효소 (reverse transcriptase)를 이용하여 cDNA를 만들고 알칼리로 처리하여 RNA를 제거한 뒤, 한 가닥 사슬로 되어 있는 cDNA를 주형으로 하여 DNA 의존성 중합효소를 이용해 2가닥의 사슬로 된 cDNA를 합성한다. 이렇게 해서 얻어진 cDNA는 원래 유전자의 DNA (genonaic DNA)와는 달리 인트론 (intron)이 존재하지 않으며, 이와 같이 거의 순수하게 유전정보를 갖고 있는 cDNA를 합성한 뒤 플라스미드 등의 운반체에 끼워 박테리아에 도입하고 발현시켜 원하는 단백질을 얻는다.Recombinant gene technology basically consists of two processes. The first is to link the DNA fragments to appropriate gene vectors (such as plasmids and bacteriophages) that have independent replication capabilities. Since DNA fragments are incapable of self-replicating, they must be linked to small replicons (plasmids or viruses) so that they can enter new host cells and function as genes, allowing them to self-replicate in that host cell. . The second step is to inject the recombinant DNA into the host cell to express the genetic information. The specific transcription process is different for microorganisms and higher organisms, which usually make up complementary DNA (cDNA) that is reversed from mRNA and inject it into the microorganism to express traits. First, extract mRNA from specific cells, and when the synthesis of the desired protein is confirmed, make the cDNA using reverse transcriptase and treat it with alkali to remove RNA, and then use cDNA as a template Then, DNA-dependent polymerase is used to synthesize cDNA of two strands. Unlike the DNA of the original gene (genonaic DNA), the obtained cDNA does not have introns. Thus, cDNAs containing almost pure genetic information are synthesized and introduced into bacteria, such as plasmids, and introduced into bacteria. To get the desired protein.

이처럼 모든 생물의 특이성 또는 개체성은 종간이건 개체간이건 모두 그 개체의 유전자에 의하여 결정되므로, 이 유전자에 의해서 만들어지는 수많은 종류의 단백질은 그 개체의 특이성을 반영한다. 따라서 어떤 두 개체의 형태적, 기능적 차이는 그들 체내에 있는 단백질 종류의 차이라고 할 수 있다.As such, the specificity or individuality of every organism is determined by the gene of the individual, whether between species or individuals, so that the many kinds of proteins produced by this gene reflect the specificity of the individual. Thus, the morphological and functional differences between two individuals are the differences in the types of proteins in their bodies.

그런데 각 개체에 대한 유전 정보를 포함하고 있는 것은 비록 유전자이지만 유전자에 의해 개체만의 고유한 형질이 발현되는 것은 단백질을 통해서이다. 더욱이 상술한 바와 같이, 단백질은 직접적으로 각 개체를 이루는 구성물질일 뿐만 아니라 생물체의 활동에 관한 모든 역할을 담당하고 있고 각각의 분자를 식별할 수 있는 능력이 각각 다르며, 또한 단백질에는 각 개체마다의 특이성이 부여되어 있기 때문에, 단백질 공여자만의 특징을 두드러지게 나타낸다고 볼 수 있다. 그 중에서도 상술한 대로 혈액은 생물체가 살아 움직이게 하는 데 있어 원동력이 되는 가장 기본적인 것으로서, 혈액 속 단백질 및 그 혈액 자체는 각 개체에 대하여 더욱 큰 의미를 갖는다. 따라서 인체 내 단백질 특히 혈액 중에 함유된 단백질은 공여자만의 유일한 특징을 나타내며 그 공여자에 대한 차별화된 식별 효과를 나타낼 수 있다. 더욱이 이러한 단백질의 특징적 효과는 전술한 공여자의 싸인이나 사진 등이 나타낼 수 있는 이미지보다 더 뛰어난 것이다.By the way, although it is a gene that contains genetic information about each individual, it is through protein that individual's unique trait is expressed by gene. Furthermore, as mentioned above, proteins are not only directly constituents of each individual entity, but they also play all roles in the activities of organisms, and each has a different ability to identify each molecule. Since specificity is conferred, it can be said that the characteristic of the protein donor is outstanding. Among them, as described above, the blood is the most basic driving force for living organisms, and the protein in the blood and the blood itself have a greater meaning for each individual. Thus, proteins in the human body, particularly proteins contained in the blood, exhibit unique characteristics of the donor and may have a differentiated identification effect on the donor. Moreover, the characteristic effect of these proteins is superior to the images that can be represented by the above signs or photographs of donors.

이에 본 발명자는 인체 내 단백질이 공여자만이 갖는 유일한 특징을 나타내며 공여자와 함께 한다는 심리적 효과를 줄 수 있다는 것에 착안하여, 공여자의 단백질, 특히 단백질의 밴드 스트립을 사용해 공여자의 캐릭터를 휴대하고자 하는 수요가 있는 여러 가지 제품을 효과적으로 장식할 수 있다는 것을 알아내어 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have realized that the protein in the human body exhibits a unique feature that only the donor has and can have a psychological effect of being with the donor. Therefore, there is a demand for carrying a donor's character, especially a band strip of the protein. The present invention has been accomplished by finding that it can effectively decorate various products.

본 발명의 목적은 공여자만의 차별된 특징을 나타낼 수 있도록 악세사리, 카드, 음반, 문구류 등 여러 가지 제품에 가공처리된 단백질의 밴드 스트립을 삽입 또는 부착함으로써 장식되는 장식품을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide an ornament that is decorated by inserting or attaching a band strip of processed protein to a variety of products, such as accessories, cards, records, and stationery, so that the donor can exhibit distinctive features.

도 1 은 분해된 단백질의 SDS-PAGE 결과를 나타낸 것이고,Figure 1 shows the SDS-PAGE results of the degraded protein,

도 2 은 본 발명의 실시 형태에 따라 단백질 밴드 스트립을 함유하도록 장식된 카드 제품을 나타낸 것이다.2 shows a card product decorated to contain a protein band strip according to an embodiment of the invention.

※ 도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명※ Explanation of codes for main parts of drawing

1 : 카드 2 : 단백질 밴드 스트립1: card 2: protein band strip

3 : 공여자의 사진 또는 싸인 4 : 공여자 단백질의 분석 내용3: photo or signature of donor 4: analysis of donor protein

5 : 시리얼 번호5: serial number

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 공여자의 단백질의 밴드 스트립 (band strip)을 삽입 또는 부착한 장식품을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides an ornament in which a band strip of a donor protein is inserted or attached.

구체적으로 본 발명은 공여자로부터 채취한 단백질을 분리하여 밴드 스트립을 제조하고 염색한 다음 제품에 삽입 또는 부착하여 제조되는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품을 제공한다. 이 때, 단백질은 공여자의 혈액, 침, 피부 조직 등 신체의 조직 또는 분비물로부터 얻어지는 것을 포함할 수 있다. 또한, 단백질은 공여자의 유전자를 증폭시켜 플라스미드 벡터에 클로닝하고 대장균에 형질도입하여 얻어진 형질전환체를 배양하여 그 배양물로부터 얻어지는 것을 포함할 수 있다.더불어 단백질 밴드 스트립을 통상의 방법으로 스캔 (scan)하여 얻어진 이미지를 제품에 삽입 또는 부착하는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품을 제공한다.Specifically, the present invention provides an ornament using a protein band strip prepared by separating a protein taken from a donor to prepare a band strip, dyeing and inserting or attaching the product to a product. At this time, the protein may include those obtained from tissues or secretions of the body such as blood, saliva, skin tissue of the donor. In addition, the protein may include amplifying a gene of a donor, cloning it into a plasmid vector, and culturing the transformant obtained by transducing Escherichia coli, and then obtaining the protein band strip. The present invention provides an ornament using a protein band strip, which comprises inserting or attaching the obtained image to a product.

상기 단백질은 통상의 단백질 분리 방법 중 하나 이상의 방법에 의해 분리하여 제품에 주입 또는 부착할 수 있다. 좀 더 상세하게는 공여자의 단백질은 겔 전기영동 (gel electrophoresis), SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis), 투석 (dialysis), 겔 여과 크로마토그래피 (gel-filtration chromatography), 이온 교환 크로마토그래피 (ion exchange chromatography), 친화 크로마토그래피 (affinity chromatography), 원심분리, 솔팅 아웃 (salting out), 이소일렉트릭 포커싱 (isoelectric focusing), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 및 웨스턴 블럿 (Western blotting) 중 하나 이상의 방법에 의해 분리할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.The protein may be separated by one or more of conventional protein separation methods and injected or attached to the product. More specifically, donor proteins may be used for gel electrophoresis, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), dialysis, gel-filtration chromatography, ion exchange chromatography. one or more of ion exchange chromatography, affinity chromatography, centrifugation, salting out, isoelectric focusing, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and western blotting It may be separated by a method, but is not limited thereto.

본 발명은 단백질을 SDS-PAGE에 의해 제조되는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품을 제공한다.The present invention provides an ornament using a protein band strip produced by SDS-PAGE of the protein.

더불어 단백질 밴드 스트립은 여러 단백질 중에서 단백질을 분리하여 얻어지거나, 또는 단백질 분해효소를 사용하여 단백질을 여러 부분으로 분해하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품을 제공한다.In addition, the protein band strip is obtained by separating the protein from a number of proteins, or provides a decoration using a protein band strip, characterized in that obtained by breaking down the protein in several parts using a protease.

또한 본 발명은 단백질의 일부 또는 전부를 염색하여 제품에 주입 또는 부착하는 단백질을 이용한 장식품을 제공한다. 좀 더 상세하게는, 염색은 브로모페놀 블루 (bromophenol bule) 또는 코마시 블루 (Coomassie brilliant blue R-250)의염색 용액을 사용하거나 또는 실버 스테이닝 (silver staining)법으로 실시할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In another aspect, the present invention provides an ornament using a protein that dyes some or all of the protein to inject or attach to the product. More specifically, the dyeing may be performed using a dyeing solution of bromophenol bule or Coomassie brilliant blue R-250 or by silver staining. It is not limited.

본 발명의 상기 단백질 밴드 스트립은 제품의 표면 위에 놓고 통상의 투명 스티커 또는 에폭시 (epoxy) 등의 투명 접착제를 사용하여 부착시키는 방법에 의해 장식품에 삽입 또는 장착할 수 있다.The protein band strip of the present invention can be inserted or mounted on an ornament by placing it on the surface of the product and attaching it using a conventional transparent sticker or a transparent adhesive such as epoxy.

상기 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품으로는 팔찌, 목걸이, 머리띠 등의 장신구류, 인형, 악세사리, 열쇠고리, 가방고리용 카드, 휴대폰용 악세사리, 비디오테이프, 음반 및 그 케이스, 가방, 필통, 필기구, 노트 등의 문방구류 등이 있으며, 친척간 계보 작성표에도 단백질을 이용한 제품을 이용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.Ornaments using the protein band strips include jewelry, bracelets, necklaces, headbands, ornaments, dolls, accessories, key chains, card holders, cell phone accessories, video tapes, records and cases, bags, pencil cases, writing instruments, notebooks. There are stationery, etc., and products using proteins can also be used in genealogy table of relatives, but is not limited thereto.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

단백질은 공여자로부터 채취한 것을 사용할 수도 있고, 또는 공여자의 유전자를 증폭시켜 플라스미드 벡터에 클로닝하고 대장균에 형질도입하여 얻어진 형질전환체를 배양하여 그 배양물로부터 얻어지는 것을 포함할 수도 있다. 구체적으로 공여자의 혈액으로부터 주형 RNA를 분리하여 cDAN를 합성하고 RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction)로 cDNA를 증폭한다. 증폭된 cDNA는 일반적으로 많이 사용되는 pMAL-P2나 pUC 19 등의 플라스미드에 클로닝하고, 상기 유전자가 삽입된 플라스미드로 대장균을 형질전환시킨다. 형질전환된 대장균을 대량으로 배양하고 발현시켜 원하는 단백질을 얻는다.The protein may be one obtained from a donor, or may include amplified donor gene, cloned into a plasmid vector, and cultured transformant obtained from the culture. Specifically, cDAN is synthesized by separating template RNA from donor blood, and cDNA is amplified by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The amplified cDNA is cloned into plasmids such as pMAL-P2 or pUC 19 which are commonly used, and E. coli is transformed with the plasmid into which the gene is inserted. The transformed Escherichia coli is cultured in large quantities and expressed to obtain the desired protein.

단백질은 각각의 성분의 특징에 따라 예를 들면, 크기 또는 질량, 특별한 분자에 대한 친화도, 전하량 등에 따라 공지된 방법을 통해 추출 및 분리될 수 있다. 이러한 단백질의 분리 방법으로는 겔 전기영동 (gel electrophoresis), SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis), 투석 (dialysis), 겔 여과 크로마토그래피 (gel-filtration chromatography), 이온 교환 크로마토그래피 (ion exchange chromatography), 친화 크로마토그래피 (affinity chromatography), 원심분리, 솔팅 아웃 (salting out), 이소일렉트릭 포커싱 (isoelectric focusing), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 및 웨스턴 블럿 (Western blotting) 등을 사용할 수 있다. 특히 단백질은 SDS-PAGE를 이용하여 밴드 스트립을 얻는 것이 바람직하다.Proteins can be extracted and separated according to the characteristics of each component, for example, by known methods depending on the size or mass, the affinity for a particular molecule, the amount of charge, and the like. These proteins can be separated by gel electrophoresis, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), dialysis, gel-filtration chromatography, ion exchange chromatography (ion) exchange chromatography, affinity chromatography, centrifugation, salting out, isoelectric focusing, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and western blotting can be used. . In particular, the protein is preferably obtained by using a band strip using SDS-PAGE.

또한 단백질은 여러 단백질 중에서 그 자체로 분리되어 밴드 스트립을 제조할 수도 있고, 또는 단백질 분해효소를 사용하여 여러 부분으로 분해된 단백질의 밴드 스트립을 제조할 수도 있다.In addition, the protein may be separated from itself among several proteins to prepare a band strip, or a protease may be used to prepare a band strip of protein that has been broken down into various parts.

단백질을 상기의 어느 한 방법으로 분리한 후 제품에 삽입하였을 때 뛰어난 시각적 효과를 나타내게 하기 위하여 염색할 수 있는데, 이 때 염색방법으로는 코마시 블루 (Coomassie blue), 브로모페놀 블루 (bromophenol blue), 페놀 레드 (phenol red) 등의 염색시약을 사용하거나 또는 실버 스테이닝 (silver staining) 방법 (Wray et. al.,Anal. Biochem. 1981, 118, 197-203)을 사용할 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.Proteins can be isolated and stained in order to produce excellent visual effects when inserted into the product, in which case Coomassie blue and bromophenol blue are stained. , Dyes such as phenol red, or silver staining methods (Wray et. Al., Anal. Biochem. 1981 , 118, 197-203) may be used, but are not limited thereto. Do not.

단백질은 상기 방법들에 의해 분리하여 얻어진 그 고유의 밴드 스트립을 사용하여 제품에 삽입 또는 부착할 수 있다. 구체적으로 단백질의 밴드 스트립은 장식품의 내부에 위치하도록 할 수 있으며, 또는 장식품의 외부 표면에 위치하도록 부착시킬 수도 있다. 후자의 경우 밴드 스트립은 투명 스티커 또는 에폭시 (epoxy) 등의 투명 접착제를 이용하여 제품의 표면에 부착할 수 있다.The protein can be inserted or attached to the product using its own band strip obtained separately by the above methods. Specifically, the band strip of protein may be positioned inside the ornament, or may be attached so as to be located on the outer surface of the ornament. In the latter case, the band strip may be attached to the surface of the product by using a transparent sticker such as a transparent sticker or epoxy.

본 발명의 방법에 의해 분리, 염색된 단백질 밴드 스트립으로 제품을 장식할 때 그 시각 효과를 증대시키기 위하여 단백질 밴드 스트립이 부착되는 부분은 투명재질을 사용하는 것이 바람직하며, 이 투명체의 모양은 제품의 특성과 목적에 맞게 다양한 형태로 제조될 수 있다. 또한, 삽입된 단백질 밴드 스트립의 안정적인 보관을 위하여, 단백질 밴드 스트립이 삽입된 투명체는 완전히 밀봉된 상태로 마무리되어야 한다. 이에 더하여, 상기 방법에 의해 단백질 밴드 스트립으로 장식된 제품에는 특정한 공여자만의 특징적인 단백질이 삽입되어 있다는 것을 나타내기 위하여, 스티커 인쇄, PVC 인쇄 또는 실크 인쇄 등의 방법을 이용하여 단백질에 대한 설명, 그림, 단백질 공여자의 싸인 및 사진 등이 추가로 더 포함될 수 있다.In order to enhance the visual effect when decorating the product with the protein band strip separated and dyed by the method of the present invention, the portion to which the protein band strip is attached is preferably made of a transparent material. It can be manufactured in various forms according to the characteristics and purposes. In addition, for stable storage of the inserted protein band strip, the transparent body in which the protein band strip is inserted must be finished in a completely sealed state. In addition, the description of the protein using a method such as sticker printing, PVC printing, or silk printing, to indicate that the product is decorated with a protein band strip by the above method to insert a specific donor-specific protein, Pictures, signs of protein donors, and photographs may be further included.

본 발명의 방법에 의해 단백질 밴드 스트립을 사용하여 장식할 수 있는 제품에는 팔찌, 목걸이, 머리띠, 머리핀 등의 장신구류, 인형, 책갈피, 악세사리, 열쇠고리, 가방고리용 카드, 휴대폰용 악세사리, 비디오테이프, 음반 및 그 케이스, 가방, 필통, 필기구, 노트 등의 문방구류 등이 포함되나 이에 한정되지는 않는다. 또한 본 발명의 방법을 사용하여 가족이나 친척간의 계보 작성 등의 용도에 각 공여자의 단백질 밴드 스트립을 이용할 수도 있다.Products that can be decorated using protein band strips by the method of the present invention include accessories such as bracelets, necklaces, headbands, hairpins, dolls, bookmarks, accessories, key rings, bag cards, cell phone accessories, video tape , Stationery and cases, bags, pencil cases, writing instruments, stationery such as notebooks, but is not limited to these. The donor protein band strips can also be used for applications such as genealogy between family and relatives using the method of the present invention.

본 발명은 각 개체만의 고유한 유전 정보가 표면적, 가시적으로 발현되어 나타난 단백질 밴드 스트립을 사용하여 제품을 장식하므로, 본 발명에 의해 단백질로, 특히 혈액을 사용하여 장식된 제품을 소유하는 사람으로 하여금 단백질 공여자와 함께 한다는 이미지를 심어주는 효과가 있다. 더욱이 이러한 단백질 밴드 스트립의 특징적이고 상직적인 효과는 이미 상용화된 공여자의 싸인이나 사진 등이 포함된 제품에서 나타내고 있는 이미지보다 훨씬 뛰어난 것이다.Since the present invention decorates a product using protein band strips in which the genetic information unique to each individual is expressed in surface area and visually, the present invention is directed to a person who owns a product decorated with protein, in particular, using blood. It has the effect of planting the image that it is with the protein donor. Moreover, the characteristic and vertical effect of these protein band strips is far superior to the images shown in products containing commercially available donor signs and photographs.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

단, 하기 실시예들은 본 발명을 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the examples.

<실시예 1> 혈액의 채취 및 분리Example 1 Blood Collection and Separation

단백질 공여자로부터 혈액이 응고되지 않도록 항응고제를 첨가한 주사기를 이용하여 혈액을 20 ㏄ 채취하고, 상기 혈액을 1,000 rpm으로 3분간 원심분리하여 상등액과 침전물을 분리하였다. 혈장에는 여러 종류의 성분이 포함되어 있으므로, 먼저 분리된 혈장 (상등액)의 약 1 ㏄를 취하고 여기에 트리클로로아세트산 (trichloroacetic acid)이 10%가 되도록 첨가해 혈장의 pH를 산성화하여 단백질을 침전시키고 다시 10,000 rpm으로 15분간 원심분리하여 얻어진 단백질 침전물을 다시 용해시켰다. 상기와 같이 하여 혈액 중 혈구 성분과 혈장을 분리하였으며, 이 중 혈장의 혈청 성분을 밴드 스트립을 제조하는 데 사용하였다.In order to prevent coagulation of the blood from the protein donor, 20 μg of blood was collected using a syringe to which anticoagulant was added, and the blood was centrifuged at 1,000 rpm for 3 minutes to separate the supernatant and the precipitate. Plasma contains several components, so take about 1 의 of the separated plasma (supernatant) and add trichloroacetic acid to 10% to acidify the pH of the plasma to precipitate the protein. Again, the protein precipitate obtained by centrifugation at 10,000 rpm for 15 minutes was dissolved again. As described above, blood cells and plasma components were separated from the blood, and the serum components of the plasma were used to prepare a band strip.

<실시예 2> 혈액의 채취 및 주형 RNA의 분리Example 2 Collection of Blood and Isolation of Template RNA

단백질 공여자로부터 혈액이 응고되지 않도록 항응고제를 첨가한 주사기를 이용하여 혈액을 20 ㏄ 채취하였다. 이 혈액을 튜브에 담고 변성 (denaturation) 용액 [4M guanidium thiocyanate, 25 mM sodium citrate (pH 7.0), 0.5% sarcosyl, 0.1M 2-mercaptoethanol] 100 ㎕를 넣어 단백질이 분해될 때까지 기다렸다. 그 후 2 M 아세트산나트륨 (sodium acetate) (pH 4) 10 ㎕를 넣어 잘 섞고, 포화된 페놀 수용액 (water-saturated phenol) (약 pH 4.5) 100 ㎕을 넣어 잘 섞은 후, 다시 여기에 클로로포름:이소프로필 알코올 (chloroform:isoamyl alcohol = 49:1) 혼합 용액 20 ㎕를 넣어 잘 섞었다. 이 후 혼합 용액을 얼음 튜브에 15분간 둔 후, 4 ℃에서 15,000 rpm으로 15분 동안 원심분리하였다.Blood was collected from the protein donor using a syringe containing anticoagulant to prevent blood clotting. The blood was placed in a tube and 100 μl of denaturation solution [4M guanidium thiocyanate, 25 mM sodium citrate (pH 7.0), 0.5% sarcosyl, 0.1M 2-mercaptoethanol] was waited until the protein was digested. Then add 10 μl of 2 M sodium acetate (pH 4) and mix well, add 100 μl of saturated water-saturated phenol (approximately pH 4.5), mix well, and then add chloroform: iso 20 μl of propyl alcohol (chloroform: isoamyl alcohol = 49: 1) mixed solution was mixed well. Thereafter, the mixed solution was placed in an ice tube for 15 minutes, and then centrifuged at 15,000 rpm for 15 minutes at 4 ° C.

원심분리 후 상층액은 새 튜브에 옮겨 고순도 에탄올 240 ㎕를 넣어 잘 섞어 준 다음 -20 ℃에 15분간 방치해 두었다. 그리고 나서 상기와 동일한 조건으로 한번 더 원심분리하고, 그 상층액을 버린 후 침전물을 80% 에탄올로 세척하였다. 침전물은 물기를 말리고 DEPC로 처리된 물 100 ㎕에 녹인 후 -20 ℃에서 보관하였다.After centrifugation, the supernatant was transferred to a new tube, and 240 µl of high-purity ethanol was mixed well, and left at -20 ° C for 15 minutes. Then centrifuged once more under the same conditions as above, the supernatant was discarded and the precipitate was washed with 80% ethanol. The precipitate was dried, dissolved in 100 μl of DEPC treated water and stored at −20 ° C.

<실시예 3> 유전자의 증폭Example 3 Gene Amplification

(1) cDNA의 합성(1) Synthesis of cDNA

먼저 RT-PCR을 실행하기 위하여 cDNA를 합성하였다.First, cDNA was synthesized to perform RT-PCR.

실시예 2에서 준비된 RNA와 DEPC로 처리된 증류수 19.5 ㎕에 5× 역전사 효소 완충용액 (reverse transcriptase buffer) 6.0 ㎕, 2.5 mM dNTPs 1.5 ㎕, 500ng/㎕ DTT 1.0 ㎕, 100mM DTT (dithreitol) 1.0 ㎕ 및 200 units/㎕ MMLV 역전사 효소1.0 ㎕를 첨가하여 30 ㎕의 반응 혼합용액을 만든 후, 42 ℃에서 30분간 배양하고 나서 다시 75 ℃에서 30분간 배양하였다.6.0 μl of 5 × reverse transcriptase buffer, 1.5 μl of 2.5 mM dNTPs, 1.0 μl of 500 ng / μl DTT, 1.0 μl of 100 mM DTT (dithreitol) and 19.5 μl of RNA and DEPC treated distilled water prepared in Example 2 30 μl of the reaction mixture was prepared by adding 1.0 μl of 200 units / μL MMLV reverse transcriptase, followed by incubation at 42 ° C. for 30 minutes, and then at 75 ° C. for 30 minutes.

(2) cDNA의 증폭(2) cDNA amplification

상기 역전사 반응에서 일차적으로 생성된 cDNA는 다음과 같은 방법에 의해 증폭하였다.The cDNA generated primarily in the reverse transcription reaction was amplified by the following method.

우선 (1)의 과정에 의해 만들어진 혼합용액 5.0 ㎕에 10× 완충용액 5.0 ㎕, 2.5 mM dNTP 4.0 ㎕, 25 pmol/㎕ 순방향 시발체 (upstream primer) 1.0 ㎕, 25 pmol/㎕ 역방향 시발체 (downstream primer) 1.0 ㎕, 2.5 unit/㎕ Taq 중합효소 (polymerase) 1.0 ㎕ 및 증류수 33.0 ㎕를 첨가하여 전체 50 ㎕인 혼합용액을 만들었다. 이 반응 혼합용액으로 중합효소 연쇄반응 (PCR)을 실시하였는데, PCR 조건은 95 ℃에서 3분, 94 ℃에서 1분, 55 ℃에서 1분 30초 씩 35번, 72 ℃에서 1분, 그리고 마지막으로 72 ℃에서 3분이었다.First, 5.0 μl of the mixed solution prepared by the procedure of (1), 5.0 μl of 10 × buffer, 4.0 μl of 2.5 mM dNTP, 25 pmol / μl upstream primer 1.0 μl, 25 pmol / μl downstream primer A total solution of 50 μl was prepared by adding 1.0 μl, 2.5 unit / μl Taq polymerase 1.0 μl and distilled water 33.0 μl. The polymerase chain reaction (PCR) was carried out with the reaction mixture, and PCR conditions were 3 minutes at 95 ° C, 1 minute at 94 ° C, 1 minute 30 seconds at 55 ° C, and 1 minute at 72 ° C, and It was 3 minutes at 72 degreeC.

PCR 증폭에 의해 원하는 P53 유전자 (약 2.95 kb)를 얻었으며, 0.7% 아가로스 겔 (agarose gel)에서 전기영동을 실시하여 그 밴드를 확인할 수 있었다.The desired P53 gene (about 2.95 kb) was obtained by PCR amplification, and the band was confirmed by electrophoresis on a 0.7% agarose gel.

<실시예 4> 유전자의 클로닝 및 형질전환Example 4 Gene Cloning and Transformation

실시예 3에서 PCR에 의해 증폭된 유전자를 일반적으로 많이 사용되고 있는 pMAL-P2 (NEB사) 플라스미드 벡터에 클로닝하였다.The gene amplified by PCR in Example 3 was cloned into a commonly used pMAL-P2 (NEB) plasmid vector.

플라스미드 pMAL-P2는 제한효소 Sph I과 BamH I으로 개열시킨 후 여기에 상기 유전자를 클로닝하여 삽입하였다. 상기에서 사용된 제한효소를 동시에 첨가하고 30∼40 ℃에서 30분 내지 2시간 동안 반응시켜 플라스미드를 분해 개열시킨 후 페놀 및 클로로포름으로 불순물을 추출하여 제거하고 에탄올로 침전시켜 정제하였다. 회수한 플라스미드 단편에 정제된 공여자의 유전자를 2 내지 10배의 양으로 첨가하고 4∼40 시간 동안 DNA 결합효소 존재 하에 반응시켰다. 첨가된 플라스미드를 사용하여 대장균 JM103을 형질전환하였으며, 선별용 배지에서 제대로 형질전환된 대장균 균주만을 분리하여 이후의 실험에 사용하였다.Plasmid pMAL-P2 was cleaved with restriction enzymes Sph I and BamH I and cloned into the gene. The restriction enzymes used above were added at the same time and reacted for 30 minutes to 2 hours at 30 to 40 ° C. to decompose and cleavage the plasmid. The impurities were extracted and removed by phenol and chloroform and precipitated and purified by ethanol. To the recovered plasmid fragment, the purified donor gene was added in an amount of 2 to 10 times and reacted in the presence of DNA binding enzyme for 4 to 40 hours. E. coli JM103 was transformed using the added plasmid, and only the transformed E. coli strain was isolated from the selection medium and used in subsequent experiments.

한편, pMAL-p2 플라스미드 벡터는 대장균의 세포막 공간 (periplasmic space)으로 분비되는 말토스 (maltose) 결합 단백질을 가지고 있는데, 얻고자 하는 단백질을 이 말토스 결합 단백질과 연결시켜 세포막 공간으로 같이 빠져 나오도록 하게 함으로써 쉽게 단백질을 분리할 수 있었다.On the other hand, the pMAL-p2 plasmid vector has a maltose binding protein secreted into the periplasmic space of E. coli. By doing so, the proteins could be easily separated.

형질전환된 대장균 균주는 LB 배지에 접종하고 배양기 (fermentor)를 이용하여 대량으로 통기 배양하였다. 본 배양에 들어가기 전에 종배양 (seed culture)을 하여 균주의 성장 단계를 동일하게 하였으며, 37 ℃에서 18시간 동안 O.D. 600=0.42 정도가 되도록 배양하였다.The transformed E. coli strains were inoculated in LB medium and cultured in aeration using a fermentor. Before entering the main culture, seed cultures were carried out, and the growth stages of the strains were the same, and O.D. Incubated to 600 = 0.42.

<실시예 5> 단백질의 수거 및 분리Example 5 Collection and Separation of Proteins

(1) 단백질의 수거(1) protein collection

실시예 4에서 배양된 배양액은 4,000g에서 10분간 원심분리하여 모은 다음,Tris 완충용액으로 1회 세척하였다. 이 후 삼투압을 이용하여 배양액 속의 균주 막을 터뜨려서 세포막 공안에 있는 단백질들을 수거하였는데, 구체적인 방법은 다음과 같다.The culture cultured in Example 4 was collected by centrifugation at 4,000 g for 10 minutes, and then washed once with Tris buffer. Thereafter, the membranes in the cell membrane were collected by bursting the strain membrane in the culture medium using osmotic pressure. Specific methods are as follows.

상기 배양액을 30M Tris 완충용액과 20% 수크로스 (sucrose) 용액에 녹여 원심분리하여 모은 균주를 다시 풀어준 다음 최종 농도가 1 mM이 될 때까지 0.5 M EDTA를 첨가하여 잘 섞어 주었다. 그리고 10분간 흔들어 준 다음 다시 4 ℃에서 8000g로 원심분리하여 상층액은 버리고 균주를 모은 뒤, 침전물에 얼음으로 냉각한 5 mM MgSO410 ㎖를 넣고 얼음물 위에서 10분간 흔들어 주었다. 그 뒤 다시 상기와 동일한 조건으로 원심분리하여 상층액에서 원하는 단백질을 얻었다.The culture solution was dissolved in 30M Tris buffer and 20% sucrose solution, centrifuged to release the collected strains again, and then mixed well by adding 0.5 M EDTA until the final concentration was 1 mM. After shaking for 10 minutes and again centrifuged at 8000g at 4 ℃, the supernatant was discarded, strains were collected, and 10ml of 5 mM MgSO 4 cooled with ice was added to the precipitate, followed by shaking for 10 minutes on ice water. Then centrifuged again under the same conditions as above to obtain the desired protein in the supernatant.

(2) 단백질의 분리(2) protein isolation

삼투압을 이용하여 수거한 단백질에는 이종 단백질이 섞여 있으므로, 다음과 같이 친화 크로마토그래피 (affinity chromatography)를 실시하여 원하는 단백질을 분리하였다.Since proteins collected by osmotic pressure are mixed with heterologous proteins, desired proteins were separated by affinity chromatography as follows.

직경 2.5 ㎝, 길이 10 ㎝인 칼럼 (column)에 아밀로스 수지 (amylose resin)을 채웠는데, 이 때 수지의 양은 칼럼을 통과하는 물질이 1 ㎖당 3 ㎎이 결합할 수 있는 정도로 하였다. 컬럼은 8배 부피의 완충용액으로 세척하고, 상기 (1)의 삼투압 과정에 의해 수거된 단백질 용액을 1 ㎖/min의 속도로 칼럼 속에 주입하였다. 그 뒤 12배 부피의 완충용액으로 칼럼을 세척하고, 완충용액과 10 mM 말토스(maltose) 혼합 용액을 통과시켜 칼럼 속의 수지에 결합되어 있던 원하는 단백질만을 분리하였다.A column of 2.5 cm in diameter and 10 cm in length was filled with an amylose resin, wherein the amount of the resin was such that 3 mg per ml of the substance passing through the column could be bound. The column was washed with 8 times the volume of buffer, and the protein solution collected by the osmotic process of (1) was injected into the column at a rate of 1 ml / min. Thereafter, the column was washed with a 12-fold volume of buffer solution, and passed through a buffer solution and 10 mM maltose mixed solution to separate only the desired protein bound to the resin in the column.

단백질은 15개의 튜브에 각각 3 ㎖씩 분리되어 모아졌는데, 분리된 단백질의 양은 자외선 분광기 (UV spectrophotometer)로 280 nm에서의 흡광도로부터 측정하였으며, SDS-PAGE로 순도를 확인하였다.Proteins were separated and collected by 3 ml in 15 tubes, and the amount of separated protein was measured from the absorbance at 280 nm by UV spectrophotometer, and the purity was confirmed by SDS-PAGE.

한편, 순수하게 분리된 단백질은 SDS-PAGE로 분리하였을 때 여러 개의 밴드가 나타나도록 하기 위하여, 단백질 분해효소 (peptidase)로 37 ℃에서 2시간 이상 처리하여 분해하였다 (도 1참조).On the other hand, purely separated protein was digested by treatment at 37 ° C. for 2 hours or more with a proteinase (peptidase) so that several bands appeared when separated by SDS-PAGE (see FIG. 1 ).

<실시예 6> 단백질 밴드 스트립의 제조Example 6 Preparation of Protein Band Strips

상기 실시예 1에서 분리된 혈청 성분 또는 실시예 5에서 얻어진 단백질 중 일정량을 통상적인 단백질 분리 방법인 SDS-PAGE (Laemmli, U. K., Nature, 1970, 227, 680-685)를 사용하여 겔 상에서 분리하였다.A certain amount of the serum component isolated in Example 1 or the protein obtained in Example 5 was separated on a gel using SDS-PAGE (Laemmli, UK, Nature, 1970, 227, 680-685), which is a conventional protein separation method. .

겔은 표 1의 조성으로 제조하여 사용하였으며, 전체가 100 ㎖가 되도록 한 후, 공기를 제거하고 유리판 홈에 일정량을 조심스럽게 부어 중합시켰다.The gel was prepared and used in the composition shown in Table 1, and the total amount was 100 ml, and then air was removed and a certain amount was carefully poured into the glass plate groove to polymerize.

겔의 조성Composition of gel Gel 성 분ingredient 비 율ratio 8% Tris-글리신(glycine)SDS-PAGE 겔8% Tris-glycine SDS-PAGE gel 증류수30% 아크릴아미드1.5M Tris (pH 8.8)10% SDS10% APSTEMEDDistilled Water 30% Acrylamide 1.5M Tris (pH 8.8) 10% SDS 10% APSTEMED 46 ㎖27 ㎖25 ㎖1 ㎖1 ㎖0.06 ㎖총 100 ㎖46 ml 27 ml 25 ml 1 ml 1 ml 0.06 ml 100 ml total stacking gelstacking gel 증류수30% 아크릴아미드1M Tris (pH 6.8)10% SDS10% APSTEMEDDistilled Water 30% Acrylamide 1M Tris (pH 6.8) 10% SDS 10% APSTEMED 68 ㎖17 ㎖12.5 ㎖1 ㎖1 ㎖0.1 ㎖총 100 ㎖68 ml 17 ml 12.5 ml 1 ml 1 ml 0.1 ml total 100 ml

단백질 시료는 분리가 가능한 만큼의 양을 상기에서와 같이 제조된 겔 위에 로딩 (loading)한 후, 겔 전체 표면 면적 당 약 10 ㎃의 일정한 전류로 전기영동을 실시하여 상기 단백질 시료를 분리하여, 단백질의 밴드 스트립을 제조하였다.The protein sample is loaded on the gel prepared as described above in an amount that can be separated, and then subjected to electrophoresis at a constant current of about 10 mA per surface area of the gel to separate the protein sample. Band strips were prepared.

<실시예 7> 단백질 밴드 스트립의 염색Example 7 Staining of Protein Band Strips

상기 실시예 6에서 단백질을 분리하여 얻은 밴드 스트립은 브로모페놀 블루 (bromophenol blue), 코마시 블루 염색 시약 (Coomassie brilliant blue R-250), 또는 실버 스테이닝(silver staining) 방법 (Wray et. al.,Anal. biochem. 1981, 118, 197-203)을 사용하여 충분히 염색하였다.The band strip obtained by separating the protein in Example 6 is bromophenol blue, Coomassie brilliant blue R-250, or silver staining method (Wray et. Al. , Anal. Biochem. 1981 , 118, 197-203).

(1) 브로모페놀 블루 염색(1) Bromophenol Blue Dyeing

물과 메탄올을 1 : 1의 비율로 섞어 90 ㎖를 준비한 다음 여기에 아세트산을 10 ㎖ 첨가하여 탈색용액을 제조하였다. 염색용액은 여기에 브로모페놀 블루 시약을 첨가하여 전체 농도 0.16%로 하여 제조하였다. 전기영동이 끝난 겔은 염색용액 속에 담그고 2시간 이상 천천히 흔들어 주어 염색하였고, 이 후 탈색 용액을 여러 번 교체하면서 겔을 천천히 흔들어 주어 겔을 탈색하였다. 이 염색에 의해 단백질은 청색으로 염색되었다.Water and methanol were mixed at a ratio of 1: 1 to prepare 90 ml, and then 10 ml of acetic acid was added thereto to prepare a decolorizing solution. Staining solution was prepared by adding a bromophenol blue reagent to a total concentration of 0.16%. The gel was electrophoresed and soaked in a dyeing solution and shaken for 2 hours or more, and then, the gel was decolorized by shaking the gel slowly while replacing the decolorizing solution several times. By this stain the protein was stained blue.

(2) 코마시 블루 염색(2) komash blue dyeing

물과 메탄올을 1 : 1의 비율로 섞어 90 ㎖를 준비한 다음 여기에 아세트산을 10 ㎖ 첨가하여 탈색용액을 제조하였다. 염색용액은 여기에 코마시 블루 (Coomassie brilliant blue R-250) 시약을 0.25 g 더 첨가하여 제조하였다. 전기영동이 끝난 겔은 염색용액 속에 담그고 2시간 이상 천천히 흔들어 주어 염색하였고, 이 후 탈색 용액을 여러 번 교체하면서 겔을 천천히 흔들어 주어 겔을 탈색하였다. 이 염색에 의해 단백질은 청색으로 염색되었다.Water and methanol were mixed at a ratio of 1: 1 to prepare 90 ml, and then 10 ml of acetic acid was added thereto to prepare a decolorizing solution. The dyeing solution was prepared by adding 0.25 g of Coomassie brilliant blue R-250 reagent thereto. The gel was electrophoresed and soaked in a dyeing solution and shaken for 2 hours or more, and then, the gel was decolorized by shaking the gel slowly while replacing the decolorizing solution several times. By this stain the protein was stained blue.

(3) 실버 스테이닝(3) silver staining

실버 스테이닝 (silver staining) 방법 (Wray et. al.,Anal. biochem. 1981, 118, 197-203)에 의한 염색은 표 2의 용액을 가지고 실시하였다. 먼저 용액 1로 5분간, 용액 2로 5분간 겔을 염색한 후 용액 3으로 다시 30분간 염색하였다. 그리고 나서 용액 4로 5분간 겔을 염색하고 용액 5로 5분간 3번 염색한 후 용액 6으로 5분간 염색하였으며, 최종적으로는 용액 7로 5분간 겔을 염색하였다. 그리고 나서 상기 (1) 또는 (2)에서 제조된 탈색용액으로 겔을 탈색시켰으며, 이 염색에 의하여 단백질은 갈색으로 염색되었다.Staining by silver staining method (Wray et. Al., Anal. Biochem. 1981 , 118, 197-203) was carried out with the solution of Table 2. First, the gel was stained with solution 1 for 5 minutes and solution 2 for 5 minutes, followed by solution 3 again for 30 minutes. Then, the gel was stained for 5 minutes with solution 4, three times for 5 minutes with solution 5, and then stained for 5 minutes with solution 6, and finally, the gel was stained with solution 7 for 5 minutes. Then, the gel was decolorized with the decolorizing solution prepared in (1) or (2), and the protein was stained brown by this dyeing.

실버 스테이닝의 용액Solution of silver staining 용액 번호Solution number 조 성Furtherance 용액 1Solution 1 50% 메탄올 + 12% 아세트산50% Methanol + 12% Acetic Acid 용액 2Solution 2 10% 메탄올 + 5% 아세트산10% Methanol + 5% Acetic Acid 용액 3Solution 3 0.1% K2Cr2O7+ 20 ㎕/100 ㎖ HNO3 0.1% K 2 Cr 2 O 7 + 20 μl / 100 mL HNO 3 용액 4Solution 4 0.2% AgNO3 0.2% AgNO 3 용액 5Solution 5 3% 탄산나트륨3% sodium carbonate 용액 6Solution 6 3% 탄산나트륨 + 50 ㎕37% 포름알데히드3% Sodium Carbonate + 50 μl 37% Formaldehyde 용액 7Solution 7 3% 아세트산3% acetic acid

<실시예 8> 단백질 밴드 스트립을 사용하여 장식된 제품의 제조 (1)Example 8 Preparation of Decorated Product Using Protein Band Strip (1)

본 발명의 바람직한 실시예 중 하나로 카드형 제품을 위하여 다음과 같이 단백질의 밴드 스트립이 삽입 또는 부착된 제품을 제조하였다 (도 2참조).In one preferred embodiment of the present invention for the card-like product was prepared a product in which the band strip of protein is inserted or attached as follows (see Figure 2 ).

공여자의 싸인, 사진, 시리얼 번호 또는 단백질의 설명 등이 포함되도록 먼저 통상의 방법에 따라 제조된 카드의 정해진 위치에 넓이 5 mm, 길이 3 cm, 깊이 1 mm가 되도록 홈을 판 후, 거기에 상기 실시예 7에서 제조된 단백질의 밴드 스트립을 크기에 맞게 잘라 넣고 투명 스티커 또는 에폭시 등 통상의 투명 접착제로 카드에 완전히 접착시킴과 동시에 밀봉하였다.In order to include the donor's signature, photograph, serial number, or a description of the protein, the grooves are first made to have a width of 5 mm, a length of 3 cm, and a depth of 1 mm at a predetermined position of a card manufactured according to a conventional method. The band strip of protein prepared in Example 7 was cut to size and completely sealed to the card with a conventional transparent adhesive such as a transparent sticker or epoxy.

<실시예 9> 단백질 밴드 스트립을 사용하여 장식된 제품의 제조 (2)Example 9 Preparation of Decorated Product Using Protein Band Strip (2)

본 발명의 바람직한 실시예 중 하나로 카드형 제품을 위하여 다음과 같이 단백질의 밴드 스트립이 삽입 또는 부착된 제품을 제조하였다 (도 2참조).In one preferred embodiment of the present invention for the card-like product was prepared a product in which the band strip of protein is inserted or attached as follows (see Figure 2 ).

상기 실시예 7에서 만들어진 단백질 밴드 스트립을 통상의 드럼 스캔법을 이용하여 스캔하여 단백질 밴드 스트립의 이미지를 얻었다. 그리고 나서 공여자의 싸인, 사진, 시리얼 번호 또는 단백질의 설명 등이 포함되도록 통상의 방법에 따라 제조되는 카드에, 추가적으로 상기 밴드 스트립의 이미지를 포함하도록 하여 카드를 제조하였다.The protein band strip produced in Example 7 was scanned using a conventional drum scan method to obtain an image of the protein band strip. The card was then prepared by including an image of the band strip in a card manufactured according to a conventional method such that the donor's signature, photograph, serial number or protein description was included.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명은 여러 가지 제품을 장식하는데 있어 기존에는 쓰이지 않던 단백질이라는 새로운 형태의 물질, 특히 공여자의 특징을 나타내는 단백질을 분리하여 얻어진 밴드 스트립을 사용하는 방법을 제공하고 있으며, 본 발명에 의해 단백질 밴드 스트립을 사용하여 장식한 제품은 단백질 공여자만의 특징적인 가치가 부여되어 그 제품의 소유자로 하여금 공여자와 함께 한다는 이미지를 극대화시켜 갖게 하는 효과를 나타낼 수 있다.As described above, the present invention provides a method of using a band strip obtained by separating a new type of material, a protein that is characteristic of a donor, which is not used in the past, in decorating various products. A product decorated with a protein band strip according to the invention can be given the characteristic value of a protein donor to have the effect of maximizing the image of the owner of the product with the donor.

Claims (10)

공여자의 단백질의 밴드 스트립 (band strip)을 제품에 삽입 또는 부착하여 제조되는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.Ornaments using protein band strips made by inserting or attaching a band strip of donor proteins to a product. 제 1 항에 있어서, 단백질은 공여자의 혈액, 침, 피부 조직 등 신체의 조직 또는 분비물로부터 얻어지는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.The ornament using a protein band strip according to claim 1, wherein the protein is obtained from tissues or secretions of the body such as donor blood, saliva, and skin tissue. 제 1 항에 있어서, 단백질은 공여자의 유전자를 증폭시켜 플라스미드 벡터에 클로닝하고 대장균에 형질도입하여 얻어진 형질전환체를 배양하여 그 배양물로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.The ornament according to claim 1, wherein the protein is obtained from the culture by culturing the transformant obtained by amplifying a donor gene, cloning it into a plasmid vector and transducing E. coli. 제 1 항에 있어서, 단백질 밴드 스트립을 통상의 방법으로 스캔 (scan)하여 얻어진 이미지를 제품에 삽입 또는 부착하는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.2. An ornament using a protein band strip according to claim 1, wherein an image obtained by scanning the protein band strip in a conventional manner is inserted or attached to a product. 제 1 항에 있어서, 공여자의 단백질은 겔 전기영동 (gel electrophoresis), SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis), 투석 (dialysis), 겔 여과 크로마토그래피 (gel-filtration chromatography), 이온 교환 크로마토그래피 (ion exchange chromatography), 친화 크로마토그래피 (affinity chromatography), 원심분리, 솔팅 아웃 (salting out), 이소일렉트릭 포커싱 (isoelectric focusing), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 및 웨스턴 블럿 (Western blotting) 중 하나 이상의 방법에 의해 분리하는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.2. The donor protein of claim 1, wherein the donor's protein comprises: gel electrophoresis, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), dialysis, gel-filtration chromatography, ion exchange chromatography One of ion exchange chromatography, affinity chromatography, centrifugation, salting out, isoelectric focusing, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and western blotting Ornament using a protein band strip, characterized in that separated by the above method. 제 1 항에 있어서, 단백질 밴드 스트립은 SDS-PAGE에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.The ornament using a protein band strip according to claim 1, wherein the protein band strip is made by SDS-PAGE. 제 1 항에 있어서, 단백질 밴드 스트립은 여러 단백질 중에서 단백질을 분리하여 얻어지거나, 또는 단백질 분해효소를 사용하여 단백질을 여러 부분으로 분해하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.According to claim 1, wherein the protein band strip is obtained by separating the protein from a number of proteins, or ornaments using a protein band strip, characterized in that obtained by breaking down the protein in several parts using a protease. 제 1 항에 있어서, 염색은 브로모페놀 블루 (bromophenol bule) 또는 코마시 블루 (Coomassie brilliant blue R-250)의 염색 용액을 사용하거나 또는 실버 스테이닝 (silver staining)법으로 실시하는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.The method of claim 1, wherein the dyeing is performed using a dyeing solution of bromophenol blue or Coomassie brilliant blue R-250 or by silver staining. Ornaments with protein band strips. 제 1 항에 있어서, 단백질 밴드 스트립을 제품의 표면 위에 놓고 통상의 투명 스티커 또는 에폭시 (epoxy) 등의 투명 접착제를 사용하여 부착시키는 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.The ornament using a protein band strip according to claim 1, wherein the protein band strip is placed on the surface of the product and attached using a normal transparent sticker or a transparent adhesive such as epoxy. 제 1 항에 있어서, 장식품은 팔찌, 목걸이, 머리띠 등의 장신구류, 인형, 악세사리, 열쇠고리, 가방고리용 카드, 휴대폰용 악세사리, 비디오테이프, 음반 및 그 케이스, 가방, 필통, 필기구, 노트 등의 문방구류 및 친척 간 계보 작성표 등인 것을 특징으로 하는 단백질 밴드 스트립을 이용한 장식품.The method of claim 1, wherein the ornaments are jewelry, bracelets, necklaces, headbands, ornaments, dolls, accessories, keys, card holders, cell phone accessories, video tapes, records and cases, bags, pencil cases, writing instruments, notebooks, etc. Ornaments using a protein band strip, characterized in that the stationery stationery and relative lineage chart.
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