KR100306376B1 - 간엽계세포의증식길항저해제 - Google Patents

Abstract

만성관절류우머티즘을 최초로 하는 교원병의 치료제로서, 유전자발현 촉진제를 구성하는 TGAGTCA 또는 TGACTCA로 된 AP-1누클레오티드를 함유하는 간엽계 세포의 증식길항저해제를 제공한다.

Description

[발명의 명칭]

간엽계 세포의 증식길항저해제

[기술분야]

본 발명은 간엽계 세포의 증식길항저해제와 이것을 사용한 교원병의 치료방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 특히 c-Fos 단백질의 유전자 결합을 억제하여 류머티즘의 발증을 방지하는데 유용한 치료제 및 이것을 사용한 치료방법에 관한 것이다.

[배경기술]

종래부터 신체 결합조직의 염증을 주 병변으로 하는 질환군을 의미하는 교원병은 전 세계적으로 그 병인의 해명과 치료가 어려운 난치병으로 알려져 있다. 이 교원병에는 만성 관절류머티즘, 류머티스성 발열, 다발생근염, 경피증 등이 포함되는 것으로 생각된다.

전 세계적으로 많은 연구가 진행되고 있기는 하지만, 아직도 치료에 유효한 수단이 발견되지 않은 것이 현실이다. 예를 들면, 만성 관절류머티즘(RA)은 인구의 0.3%라는 높은 발병율을 나타냄에도 그 병인이 밝혀지지 않은 난치병 중 하나이다. 또한 그 치료 역시 경험적인 범위를 벗어나지 못하고 있으며, 현저한 효능을 나타내는 치료약이 개발되지 않은 것이 현실이다. 이와 같은 현상은 현재의 치료약 개발이 최첨단의 병인 연구의 성과를 확실한 근거로 삼고 있지 않다는 것에 그 원인의 일부분이 있다고 생각된다.

만성관절류머티즘은 각종 염증성 물질에 의해 관절 활막세포의 증식이 이상 증진되어 관절을 파괴하는 것이다. 종래의 치료약은 이들 염증물질(인터로이킨-1, 혈관접착인자) 등을 저해하는 관점에서 연구·개발이 실시되어 왔으나 유효한 결과는 얻지 못하고 있다.

지금까지의 연구에 의하면 만성관절류머티즘은 관절의 염증으로부터 관절의 파괴, 그리고 관절변형을 나타내는 것이며, 병원인은 불명확하지만 다음과 같은 것이 병의 상태로 파악된다.

(1)어떤 항원(세균 혹은 바이러스)이 관절에 도달하여 관절염증을 야기한다.

(2)관절염이 만성화된다.

(3)관절파괴에 이른다.

그리고 (2)의 만성화 원인은 관절의 활막세포의 이상 증식항진에 있다. 또 활막세포 증식의 원인은 활막세포를 자극하는 물질(사이토킨 등)이 증가하는 것과 밀접한 관련이 있다고 생각된다.

현재의 류머티즘의 병인 연구와 치료약 개발 연구에서, 만성 류머티즘은 우선 혈액 중에서 관절활막에 도달한 미지의 병원인자에 의해 국소 면역반응이 개시되고, 계속하여 혈중에서 마이크로파아지, T세포, B세포, 백혈구 등이 유입하여 복잡한 만성염증이 전개되며, 마지막으로 관절파괴에 도달한다고 생각된다. 이 과정에 관여하는 중요한 인자로서는 우선 항원에 대한 특이 응답의 면역기억을 담당하는 T세포와, 그 지배 하에 있는 B세포라는 특이적 인식계 외에, 만성 염증에 널리 관여하는 사이토킨, 접착분자, 자기항체(류머티즘 인자), 단백질분해효소 등의 비특이적인 계가 있고, 종래의 연구는 이를 억제하도록 전개되어 왔다. 특히, 최근에는 사이토킨과 접착분자의 작용을 억제하는데 연구가 집중되고 있다. 현재의 연구로부터 T세포를 중심으로 한 면역응답계가 만성관절류머티즘의 병원인의 중요한 부분이라고 하겠지만, 적어도 판절파괴에 직접 관계하는 것은 비특이적인 활막간엽계 세포인 것이 확실하게 되어 있다.

상기 간엽계 세포에 대한 착안은 만성관절류머티즘 뿐 아니라 교원병 그 자체로서 주목되는 것이다.

그런데 연구로서는 진전되고 있지만 유감스럽게도 아직 만성관절류머티즘을 포함하는 교원병에 대해서는 그 유효한 치료제와 치료방법이 실현되고 있지 않은 실정이다.

그래서 본 발명은 이상과 같은 종래 기술의 한계를 극복하고, 만성관절류머티즘을 포함하는 교원병의 치료에 유효한 새로운 치료제와 이것을 사용한 치료방법의 제공을 목적으로 한다.

[발명의 개시]

본 발명은 상기 과제를 해결하기 위해 유전자 발현 촉진제를 구성하는 TGAGTCA 또는 TGACTCA로 이루어지는 AP-1뉴클레오티드를 함유하는 것을 특징으로 하는 간엽계 세포의 증식길항저해제를 제공한다.

[발명을 실시하기 위한 최량의 형태]

상기한 본 발명은 활막간엽계 세포를 억제함으로써 관절파괴 등의 병원인의 발현을 방지하고자 하는 것이다. 즉, 예를 들면 만성관절류머티즘에 대해 직접 관절파괴에 관계 있는 활막간엽계 세포를 억제함으로써 정확하지만, T세포의 응답계에 관여하지 않고, 만성 관절류머티즘 치료를 달성하고자 하는 것이다. 이와 같은 방법은 본 발명의 발명자에 의한 병원인 연구의 결과를 근거로 한 독자적인 것이다.

더욱 상세하게 설명하면, 만성관절 류머티즘의 관절병변에는 면역기억을 담당하는 응답계의 중심인 T세포와, 관절파괴에 직접 관여하는 활막간엽계 세포(Shiozawa et al. Ann. Rheum. Dis. 51:869, 1992)의 2가지가 기본적으로 중요하다. 후자는 판누수의 주요 구성요소이고, 만성관절류머티즘의 활막병변에서 중요한 IL1, IL6, TNFα등의 사이토킨을 생산한다(Shiozawa et al. Sem. Arthritis Rheum.21:267, 1992). 판누수는 종양 등의 증식기능을 보유하지만, 실제로 protooncogene의 c-fos유전자를 H-2 프로모터의 하류 영역에서 재조합하여 작성한 H2 c-fos transgenic mice에 실험관절염(antigen-induced arthritis)을 야기하면 임파구의 국소로 스며들지 않고 활막간엽계 세포에 의한 관절파괴가 유도된다. (Shiozawa et al. J. Immunol. 148: 3100, 1992). c-fos유전자는 활막세포에 특유의 형태변화(dendritic cell에서 fibroblastic cell로의 변환)파 증식태를 부여한다(Kuroki, Shiozawa et al. Rheumatol. 20:422, 1993).

c-fos 유전자는 만성관절류머티즘 활막에 다량 발현되어 있고, 골아 세포에 transfection법에 의해 인간의 c-fos유전자를 지속적으로 발현시키게 하면 I형 콜라겐의 합성 및 mRNA의 발현이 억제된다.(Kuroki, Shiozawa et al. BBRC 182:1389, 1992).

이와 같은 것은 c-fos 유전자의 과잉발현이 활막간엽계 세포의 증식을 자극하여 직접 판절파괴에 관여할 뿐 아니라 만성관절류머티즘의 골다공증의 원인으로 관여할 수 있다는 가능성을 암시한다.

본 발명은 이와 같이 c-fos 유전자는 간엽계 세포를 특히 활성화한다는 발견을 근거로 하여 그 작용기전에 대한 검토에 의해 이루어진 것이다.

즉, c-fos 단백질은 만성관절류머티즘 발원성 유전자의 촉진제의 AP-1 부위에 작용하여 유전자 발현을 조정한다는 것을 전제로 하고 있다.

이 촉진제는, 다음의

5′- GTG TTA CCC TGA GTC AGA GGA GAA -3′

3′- AAT GGG ACT CAG TCT CCT CTT GGG -5′

구조를 보유하고, AP-1 부위는 밑줄로 표시한 TGAGTCA를 의미한다. DNA의 2중 나선 중 하나 만이 단백질의 합성 시에 전사되며, c-fos단백질 복합체는 그 양쪽으로 결합한다.

그래서 본 발명에서 상기와 같이 유전자발현 촉진제를 구성하는 TGAGTCA 또는 TGACTCA로 이루어진 AP-1 뉴클레오티드를 간엽계 세포증식의 길항저해제로 사용한다.

이것에 의해 만성관절류머티즘 등의 발현이 극히 유효하게 억제된다. 물론 상기 AP-1 뉴클레오티드는 각종 다른 부가적인 조건과 조합하여 사용하여도 좋다.

본원발명의 약제는 의약 상 허용되는 부형제, 담체, 회석제 등의 제제보조제와 AP-1뉴클레오티드를 적절하게 혼합하여 통상 사용되는 방법에 의해 캡슐제, 산제, 현립제, 세립제, 환제, 현탁제, 유제, 시럽제, 좌제 또는 주사제 등으로 제제화하여 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 예를 들면 주사제는 AP-1뉴클레오티드를 주사제의 제제화에 통상 사용되는 무균수성액 또는 유성액에 용해 혹은 현탁화함으로써 조제되고, 피하주사, 피내주사, 근육주사 또는 관절 내 주사에 의해 투여된다. 또 AP-1뉴클레오티드를 폴리머로 포장하거나, 혹은 양이온성 유지와 혼합하여 투여함으로써 보다 뛰어난 효과를 기대할 수 있다. 투여방법, 투여량 및 투여회수는 환자의 연령, 체중 및 증상에 따라 적절하게 선택할 수 있지만, 경구 투여의 경우, 성인에 대해 1일 10㎍-10mg을 1회 내지 수회로 분할하여 투여하면 좋다.

이하에서 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

[실시예]

DBA1/J male mice 피하에 FCA와 함께 200㎍의 II형 콜라겐을 3주 간격으로 2회 면역하고, 초회 면역 후 2주일 후부터 주 2회의 비율로 1회 5㎍의 이중나선 AP-1뉴클레오티드를 창자 내로 투여하였다. 대조군으로는 비특이 이중나선 뉴클레오티드를 사용하고, 제 2회 면역 종료 후 3주 째에 발관절의 병리 조직학 검사를 행하였다.

그 결과 food pad의 증식(hyperplasta)(＞3.7mm)은 실험군에서 6/14예(43%), 대조군에서 12/16예(75%)를 나타내었다. 조직학적으로 염증세포침윤이 인정된 예가 실험군에서 7/14예(50%), 대조군에서 8/16예(50%), 상해가 없는 관절염을 보유한 예가 실험군에서 12/14예(86%), 대조군에서 2/16예(13%)였다. 또 마우스의 체중 변동은 실험 전후로, 실험군 151%, 대조군 144%로 양자간에 차이가 인정되지 않았다.

또 in vitro의 활막배양계에서 투여된 AP-1은 AP-1 사이트를 통하여 작동하는 인터로이킨-1 등의 발현계를 억제했지만, AP-1을 퉁하지 않은 유전자 발현계로는 작용하지 않아 그 특이성이 확인되었다.

이상의 결과로부터 명확하듯이 투여된 AP-1 뉴클레오티드는 마우스의 콜라겐 관절염에 있어서의 관절파괴를 유효하게 억제하였다. 관절파괴의 유효한 억제에 대해 관절 국소의 염증세포침윤의 정도는 양자에서 차이가 없었다. 이 결과는 관절염에 있어서는 스며 들어오는 염증세포가 반드시 관절파괴에 직접 관여하는 것이 아니라는 것을 나타내고, 이전의 H2-c-fos trangenic mice에서의 관절파괴에서 활막간엽계 세포의 역할의 결과와 부합하는 것이다.

[산업상의 이용가능성]

이상 설명한 바와 같이 본 발명에 의하여 교원병, 특히 만성관절류머티즘의 치료가 가능하고, 임상이 가능하다. 만성관절류머티즘의 병원인 기전의 해명이나 다른 만성염증성 질환, 혹은 간엽계 세포의 증식이 병 상태에 중요하다는 점에서 난치성 질환의 병원인 해명과 치료에도 응용될 수 있을 것으로 기대된다.

Claims (3)

1. 유전자발현촉진제를 구성하는 TGAGTCA 또는 TGACTCA로 이루어진 AP-1뉴클레오티드를 함유하는 것을 특징으로 하는 간엽계 세포의 증식길항저해제.
2. 제1항에 기재된 길항저해제로 이루어진 교원병치료제.
3. 제2항에 기재된 치료제로서의 만성관절류머티즘 치료제.