JPWO2021221789A5 - - Google Patents

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Claims (25)

以下を含む、方法であって:
以下を準備すること:
第1分割イニシエーターを含む第1分割イニシエータープローブ;
第2分割イニシエーターを含む第2分割イニシエータープローブ;
以下を含む第1ヘアピン単量体:
第1トーホールドおよび第1ステム部を含む第1インプットドメイン、
第1ヘアピンループおよび前記第1ステム部に対する相補鎖を含む第1アウトプットドメイン、並びに
第1ハプテン分子;
以下を含む第2ヘアピン単量体:
第2トーホールドおよび第2ステム部を含む第2インプットドメイン、
第2ヘアピンループおよび前記第2ステム部に対する相補鎖を含む第2アウトプットドメイン、並びに
第2ハプテン分子;
標的分子;並びに
前記第1分割イニシエータープローブおよび前記第2分割イニシエータープローブを、前記標的分子と一緒にインキュベーションすること、を含む、
方法。
A method comprising:
Prepare the following:
a first split initiator probe including a first split initiator;
a second split initiator probe including a second split initiator;
A first hairpin monomer comprising:
a first input domain including a first toe hold and a first stem portion;
a first output domain comprising a first hairpin loop and a complementary strand to the first stem portion; and a first hapten molecule;
A second hairpin monomer comprising:
a second input domain including a second toe hold and a second stem portion;
a second output domain comprising a second hairpin loop and a complementary strand to the second stem portion; and a second hapten molecule;
a target molecule; and incubating the first split initiator probe and the second split initiator probe with the target molecule .
Method.
前記インキュベーションが、前記第1分割イニシエータープローブを前記標的分子に結合させ、前記第2分割イニシエータープローブを前記標的分子に結合させるものである、請求項に記載の方法。 2. The method of claim 1, wherein the incubation causes the first split initiator probe to bind to the target molecule and the second split initiator probe to bind to the target molecule. 前記第1ヘアピン単量体を前記第1分割イニシエーターおよび前記第2分割イニシエーターの両方に結合させること;
前記第2ヘアピン単量体を前記第1ヘアピン単量体に結合させること;
CARDを媒介する酵素である1または複数のレポーター体で標識された抗ハプテン分子を準備すること;
1または複数のCARD基質を準備すること;
前記CARDを媒介する酵素によって前記CARD基質から生成される、1または複数の沈着レポーターからのシグナルを測定すること、をさらに含む、請求項に記載の方法。
binding the first hairpin monomer to both the first splitting initiator and the second splitting initiator;
bonding the second hairpin monomer to the first hairpin monomer;
providing an anti-hapten molecule labeled with one or more reporter bodies that are enzymes that mediate CARD;
providing one or more CARD substrates;
2. The method of claim 1 , further comprising measuring a signal from one or more deposited reporters generated from the CARD substrate by the CARD-mediating enzyme.
前記抗ハプテン分子が抗ハプテン抗体または抗ハプテンナノボディである、請求項に記載の方法。 2. The method of claim 1 , wherein the anti-hapten molecule is an anti-hapten antibody or an anti-hapten nanobody. 前記少なくとも1つの標的分子が核酸またはタンパク質である、請求項に記載の方法。 2. The method of claim 1 , wherein the at least one target molecule is a nucleic acid or a protein . 前記少なくとも1つの標的分子がRNAである、請求項に記載の方法。 2. The method of claim 1 , wherein the at least one target molecule is RNA. 前記プローブが二次プローブであり、前記標的分子が二次標的分子であり、および前記二次標的分子が一次標的分子と結合する一次プローブである、請求項1に記載の方法。2. The method of claim 1, wherein the probe is a secondary probe, the target molecule is a secondary target molecule, and the secondary target molecule is a primary probe that binds to a primary target molecule. 前記一次プローブが、一次抗体またはナノボディである、請求項7に記載の方法。8. The method of claim 7, wherein the primary probe is a primary antibody or a Nanobody. 前記1または複数の沈着レポーターが、前記標的分子付近における補助レポーターの局在化を媒介する補助ハプテンで標識された補助CARD基質であり、前記シグナルが1または複数の補助レポーターから測定される、請求項3に記載の方法。wherein the one or more deposited reporters are co-CARD substrates labeled with co-haptens that mediate localization of co-reporters in the vicinity of the target molecule, and wherein the signal is measured from the one or more co-reporters. The method described in Section 3. 前記補助CARD基質がチラミドである、請求項9に記載の方法。10. The method of claim 9, wherein the auxiliary CARD substrate is a tyramide. 前記1または複数の沈着レポーターがフルオロフォア標識チラミドである、請求項3に記載の方法。4. The method of claim 3, wherein the one or more deposited reporters are fluorophore-labeled tyramide. 前記抗ハプテン抗体が一次抗体である、請求項4に記載の方法。5. The method of claim 4, wherein the anti-hapten antibody is a primary antibody. 前記抗ハプテン抗体が前記ハプテンと結合する一次抗体を含み、the anti-hapten antibody comprises a primary antibody that binds to the hapten;
前記一次抗体と結合する二次抗体(1または複数のレポーター体で標識されている)を準備することをさらに含む、請求項4に記載の方法。5. The method of claim 4, further comprising providing a second antibody (labeled with one or more reporter bodies) that binds to the first antibody.
以下を含む、方法であって:
以下を準備すること:
少なくとも1つのイニシエーターを含む少なくとも1つのイニシエーター標識プローブ;
以下を含む第1ヘアピン単量体:
第1トーホールドおよび第1ステム部を含む第1インプットドメイン、
第1ヘアピンループおよび前記第1ステム部に対する相補鎖を含む第1アウトプットドメイン、並びに
第1ハプテン分子;
以下を含む第2ヘアピン単量体:
第2トーホールドおよび第2ステム部を含む第2インプットドメイン、
第2ヘアピンループおよび前記第2ステム部に対する相補鎖を含む第2アウトプットドメイン、並びに
第2ハプテン分子、
標的分子;並びに
前記少なくとも1つのイニシエーターを含む少なくとも1つのイニシエーター標識プローブを前記標的分子と一緒にインキュベーションすること、を含む、
方法。
A method comprising:
Prepare the following:
at least one initiator-labeled probe comprising at least one initiator;
A first hairpin monomer comprising:
a first input domain including a first toe hold and a first stem portion;
a first output domain comprising a first hairpin loop and a complementary strand to the first stem portion; and a first hapten molecule;
A second hairpin monomer comprising:
a second input domain including a second toe hold and a second stem portion;
a second output domain comprising a second hairpin loop and a complementary strand to the second stem portion; and a second hapten molecule;
a target molecule; and incubating at least one initiator-labeled probe comprising the at least one initiator with the target molecule .
Method.
前記インキュベーションが、前記少なくとも1つのイニシエーターを含む少なくとも1つのイニシエーター標識プローブを前記標的分子に結合させる、請求項14に記載の方法。 15. The method of claim 14 , wherein the incubation causes at least one initiator-labeled probe comprising the at least one initiator to bind to the target molecule. 前記第1ヘアピン単量体を前記少なくとも1つのイニシエーターに結合させること;
前記第2ヘアピン単量体を前記第1ヘアピン単量体に結合させること;
CARDを媒介する酵素である1または複数のレポーター体で標識された抗ハプテン分子を準備すること;
1または複数のCARD基質を準備すること;
前記CARDを媒介する酵素によって前記CARD基質から生成される、1または複数の沈着レポーターからのシグナルを測定すること、をさらに含む、請求項14に記載の方法。
binding the first hairpin monomer to the at least one initiator;
bonding the second hairpin monomer to the first hairpin monomer;
providing an anti-hapten molecule labeled with one or more reporter bodies that are enzymes that mediate CARD;
providing one or more CARD substrates;
15. The method of claim 14 , further comprising measuring a signal from one or more deposited reporters generated from the CARD substrate by the CARD-mediating enzyme.
前記標的分子がタンパク質または核酸である、請求項14に記載の方法。 15. The method of claim 14 , wherein the target molecule is a protein or a nucleic acid . 前記抗ハプテン分子が抗ハプテン抗体または抗ハプテンナノボディである、請求項14に記載の方法。 15. The method of claim 14 , wherein the anti-hapten molecule is an anti-hapten antibody or an anti-hapten nanobody. 前記抗ハプテン抗体が一次抗体である、請求項18に記載の方法。 19. The method of claim 18 , wherein the anti-hapten antibody is a primary antibody. 前記抗ハプテン抗体が前記ハプテンと結合する一次抗体を含み、
記一次抗体と結合する二次抗体(1または複数のレポーター体で標識されている)を準備することをさらに含む、請求項18に記載の方法。
the anti-hapten antibody comprises a primary antibody that binds to the hapten;
19. The method of claim 18 , further comprising providing a second antibody (labeled with one or more reporter bodies) that binds to the first antibody.
前記プローブが二次プローブであり、前記標的分子が二次標的分子であり、および前記二次標的分子が一次標的分子と結合する一次プローブである、請求項14に記載の方法。15. The method of claim 14, wherein the probe is a secondary probe, the target molecule is a secondary target molecule, and the secondary target molecule is a primary probe that binds to a primary target molecule. 前記一次プローブが、一次抗体またはナノボディである、請求項21に記載の方法。22. The method of claim 21, wherein the primary probe is a primary antibody or Nanobody. 前記1または複数の沈着レポーターが、前記標的分子付近における補助レポーターの局在化を媒介する補助ハプテンで標識された補助CARD基質であり、前記シグナルが1または複数の補助レポーターから測定される、請求項16に記載の方法。wherein the one or more deposited reporters are co-CARD substrates labeled with co-haptens that mediate localization of co-reporters in the vicinity of the target molecule, and wherein the signal is measured from the one or more co-reporters. The method according to item 16. 前記補助CARD基質がチラミドである、請求項23に記載の方法。24. The method of claim 23, wherein the auxiliary CARD substrate is a tyramide. 前記1または複数の沈着レポーターがフルオロフォア標識チラミドである、請求項16に記載の方法。17. The method of claim 16, wherein the one or more deposited reporters are fluorophore-labeled tyramide.
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