JPWO2021127655A5 - - Google Patents

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JPWO2021127655A5 JP2022538188A JP2022538188A JPWO2021127655A5 JP WO2021127655 A5 JPWO2021127655 A5 JP WO2021127655A5 JP 2022538188 A JP2022538188 A JP 2022538188A JP 2022538188 A JP2022538188 A JP 2022538188A JP WO2021127655 A5 JPWO2021127655 A5 JP WO2021127655A5
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Description

安楽死後、TA筋肉を切片化し、アセトンで固定し、注射後にFSTおよびWFA(GALGT2によって生成されたGalNAcを認識するため)に対する抗体で染色した。図27Bに示すように、バイシストロン性ベクター(rAAVrh74.MCK.GALGT2.IRES.FST)の注射により、筋膜のグリコシル化を誘導するGALGT2(WFA染色によって示される)および最終的に筋肉細胞の外に分泌される、ゴルジ体において発現されるFSTの両方が機能的に発現された。GALGT2を発現する筋線維は正常な筋肉形態を示し、GALGT2遺伝子の過剰発現で知られる機能である筋ジストロフィーの兆候を示さないことに留意する。したがって、この単一のバイシストロン性AAVベクターは、GALGT2の過剰発現に起因する筋肉病理を阻害し、FST遺伝子の発現に起因する筋肉サイズを増加させる両方を行うことができ、二重機能療法を可能にする。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
ポリヌクレオチドであって、
a)プロモーターエレメント、
b)導入遺伝子、
c)内部リボソーム侵入部位(IRES)、および
d)筋肉成長因子または筋肉分化転換因子をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
(項目2)
前記プロモーターエレメントが、前記導入遺伝子に作動可能に連結される、項目1に記載のポリヌクレオチド。
(項目3)
前記IRESが、筋肉成長因子または筋肉分化転換因子をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結される、項目1または2に記載のポリヌクレオチド。
(項目4)
ポリヌクレオチドであって、
a)1つ以上のプロモーターエレメント、および
b)GNE cDNA配列を含む、ポリヌクレオチド。
(項目5)
ポリヌクレオチドであって、
a)1つ以上のプロモーターエレメント、
b)GNE cDNA配列またはGALGT2 cDNA配列、
c)内部リボソーム侵入部位(IRES)、および
d)筋肉成長因子または筋肉分化転換因子をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
(項目6)
前記プロモーターエレメントが、前記GNE cDNA配列または前記GALGT2 cDNA配列に作動可能に連結される、項目4または5に記載のポリヌクレオチド。
(項目7)
前記IRESが、筋肉成長因子または筋肉分化転換因子をコードする前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結される、項目5または6に記載のポリヌクレオチド。
(項目8)
前記プロモーターエレメントが、構成的プロモーターまたは筋肉特異的プロモーターである、項目1~7のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目9)
前記プロモーターエレメントが、CMVプロモーター、MCKプロモーター、MHCK7プロモーター、ミニCMVプロモーター、またはGNEプロモーターである、項目1~8のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目10)
前記GNE cDNA配列が、配列番号1の核酸配列を含むバリアント2 GNE野生型ヒトGNE遺伝子である、項目4~9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目11)
前記GNE cDNAの発現を駆動するためにエキソン1と2との間に見出されたヒトGNEプロモーターエレメントをさらに含む、項目4~10のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列。
(項目12)
前記GALGT2 cDNA配列が、配列番号36の核酸配列を含む、項目5~10のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列。
(項目13)
前記内部リボソーム侵入部位(IRES)が、線維芽細胞成長因子1A遺伝子に由来する、項目1~12のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目14)
前記IRESが、配列番号30のヌクレオチド配列またはその断片を含む、項目13に記載のポリヌクレオチド。
(項目15)
前記IRESが、配列番号8のヌクレオチド配列を含む、項目13に記載のポリヌクレオチド。
(項目16)
前記ヌクレオチド配列が、フォリスタチン、SMAD7、またはインスリン成長因子1(IGF1)バリアントをコードする、項目1~15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目17)
前記フォリスタチンが、フォリスタチン344またはフォリスタチン314である、項目16に記載のポリヌクレオチド。
(項目18)
前記IGF1バリアントが、HB-IGF1である、項目16に記載のポリヌクレオチド。
(項目19)
項目1~18のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列を含むゲノムを有する、組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)であって、前記ポリヌクレオチドが、単一のrAAVゲノム内にある、組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)。
(項目20)
前記ゲノムが、CMVプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNAを含む、項目19に記載のrAAV。
(項目21)
前記ゲノムが、MCKプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNAを含む、項目19に記載のrAAV。
(項目22)
前記ゲノムが、MHCKプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNAを含む、項目19に記載のrAAV。
(項目23)
前記ゲノムが、前記GNEプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNAを含む、項目19に記載のrAAV。
(項目24)
前記ゲノムが、ミニCMVプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNAを含む、項目19に記載のrAAV。
(項目25)
前記ゲノムが、MCK7プロモーター、バリアント2野生型ヒトcDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目26)
前記ゲノムが、前記MHCK7プロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列を含む、rAAVまたは項目19。
(項目27)
前記ゲノムが、前記CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目28)
前記ゲノムが、前記CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目29)
前記ゲノムが、前記MCKプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目30)
前記ゲノムが、前記MCKプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目31)
前記ゲノムが、前記GNEプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目32)
前記ゲノムが、前記GNEプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目33)
前記ゲノムが、前記ミニCMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目34)
前記ゲノムが、前記ミニCMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目35)
前記ゲノムが、MHCK7プロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目36)
前記ゲノムが、CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目37)
前記ゲノムが、MCKプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目38)
前記ゲノムが、GNEプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目39)
前記ゲノムが、ミニCMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目40)
前記ゲノムが、前記MCKプロモーター、前記GALGT2 cDNA、FGFR1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目41)
前記ゲノムが、前記MCKプロモーター、前記GALGT2 cDNA、FGFR1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目42)
前記ゲノムが、MCKプロモーター、前記GALGT2 cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列を含む、項目19に記載のrAAV。
(項目43)
前記rAAVが、血清型rAAVrh.74のものである、項目19~42のいずれか一項に記載のrAAV。
(項目44)
項目19~43のいずれか一項に記載のrAAVを含む、rAAV粒子。
(項目45)
GNEミオパチーの治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法であって、項目19~39のいずれか一項に記載のrAAVまたは項目44に記載のrAAV粒子を投与するステップを含む、方法。
(項目46)
GNEミオパチーの治療のための薬剤の調製のための、項目19~39のいずれか一項に記載のrAAVまたは項目44に記載のrAAV粒子の、使用。
(項目47)
GNEミオパチーの治療のための、項目19~39のいずれか一項に記載のrAAVまたは項目44に記載のrAAV粒子を含む、組成物。
(項目48)
筋ジストロフィーの治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法であって、項目40~42のいずれか一項に記載のrAAVまたは項目44に記載のrAAV粒子を投与するステップを含む、方法。
(項目49)
筋ジストロフィーの治療のための薬剤の調製のための、項目40~42のいずれか一項に記載のrAAVまたは項目44に記載のrAAV粒子の、使用。
(項目50)
筋ジストロフィーの治療のための、項目40~42のいずれか一項に記載のrAAVまたは項目44に記載のrAAV粒子を含む、組成物。
(項目51)
前記筋ジストロフィーが、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー2D、または先天性筋ジストロフィー1Aである、項目48~50のいずれか一項に記載の方法、使用、または組成物。
After euthanasia, TA muscles were sectioned, fixed with acetone, and stained with antibodies against FST and WFA (to recognize GalNAc produced by GALGT2) after injection. As shown in Figure 27B, injection of a bicistronic vector (rAAVrh74.MCK.GALGT2.IRES.FST) induces glycosylation of GALGT2 in the muscle membrane (as shown by WFA staining) and ultimately outside the muscle cells. Both FST, which is secreted into the Golgi apparatus and expressed in the Golgi apparatus, were functionally expressed. It is noted that myofibers expressing GALGT2 exhibit normal muscle morphology and do not show signs of muscular dystrophy, a known feature of overexpression of the GALGT2 gene. Therefore, this single bicistronic AAV vector can both inhibit muscle pathology caused by GALGT2 overexpression and increase muscle size caused by FST gene expression, providing a dual-functional therapy. enable.
In certain embodiments, for example, the following items are provided:
(Item 1)
A polynucleotide,
a) promoter element;
b) a transgene;
c) an internal ribosome entry site (IRES), and
d) A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a muscle growth factor or muscle transdifferentiation factor.
(Item 2)
2. The polynucleotide of item 1, wherein said promoter element is operably linked to said transgene.
(Item 3)
3. The polynucleotide of item 1 or 2, wherein the IRES is operably linked to a nucleotide sequence encoding a muscle growth factor or muscle transdifferentiation factor.
(Item 4)
A polynucleotide,
a) one or more promoter elements, and
b) A polynucleotide comprising a GNE cDNA sequence.
(Item 5)
A polynucleotide,
a) one or more promoter elements;
b) GNE cDNA sequence or GALGT2 cDNA sequence,
c) an internal ribosome entry site (IRES), and
d) A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a muscle growth factor or muscle transdifferentiation factor.
(Item 6)
Polynucleotide according to item 4 or 5, wherein said promoter element is operably linked to said GNE cDNA sequence or said GALGT2 cDNA sequence.
(Item 7)
7. The polynucleotide of item 5 or 6, wherein said IRES is operably linked to said nucleotide sequence encoding a muscle growth factor or muscle transdifferentiation factor.
(Item 8)
Polynucleotide according to any one of items 1 to 7, wherein the promoter element is a constitutive promoter or a muscle-specific promoter.
(Item 9)
Polynucleotide according to any one of items 1 to 8, wherein the promoter element is a CMV promoter, MCK promoter, MHCK7 promoter, miniCMV promoter, or GNE promoter.
(Item 10)
Polynucleotide according to any one of items 4 to 9, wherein the GNE cDNA sequence is a variant 2 GNE wild-type human GNE gene comprising the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 1.
(Item 11)
Polynucleotide sequence according to any one of items 4 to 10, further comprising a human GNE promoter element found between exons 1 and 2 to drive expression of said GNE cDNA.
(Item 12)
Polynucleotide sequence according to any one of items 5 to 10, wherein the GALGT2 cDNA sequence comprises the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 36.
(Item 13)
Polynucleotide according to any one of items 1 to 12, wherein the internal ribosome entry site (IRES) is derived from the fibroblast growth factor 1A gene.
(Item 14)
14. The polynucleotide of item 13, wherein the IRES comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 30 or a fragment thereof.
(Item 15)
14. The polynucleotide of item 13, wherein the IRES comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8.
(Item 16)
Polynucleotide according to any one of items 1 to 15, wherein the nucleotide sequence encodes follistatin, SMAD7, or an insulin growth factor 1 (IGF1) variant.
(Item 17)
17. The polynucleotide according to item 16, wherein the follistatin is follistatin 344 or follistatin 314.
(Item 18)
17. The polynucleotide according to item 16, wherein the IGF1 variant is HB-IGF1.
(Item 19)
A recombinant adeno-associated virus (rAAV) having a genome comprising a polynucleotide sequence according to any one of items 1 to 18, wherein said polynucleotide is within a single rAAV genome. Associated virus (rAAV).
(Item 20)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a CMV promoter and variant 2 wild type human GNE cDNA.
(Item 21)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises an MCK promoter and variant 2 wild type human GNE cDNA.
(Item 22)
rAAV according to item 19, wherein the genome comprises a MHCK promoter and variant 2 wild type human GNE cDNA.
(Item 23)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises the GNE promoter and variant 2 wild-type human GNE cDNA.
(Item 24)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a mini-CMV promoter and variant 2 wild-type human GNE cDNA.
(Item 25)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises the MCK7 promoter, variant 2 wild type human cDNA, FGF1 IRES, and a nucleic acid sequence encoding follistatin 344.
(Item 26)
rAAV or item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said MHCK7 promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1.
(Item 27)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said CMV promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344.
(Item 28)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said CMV promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1.
(Item 29)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said MCK promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344.
(Item 30)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said MCK promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1.
(Item 31)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said GNE promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344.
(Item 32)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a nucleic acid sequence encoding the GNE promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1.
(Item 33)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said miniCMV promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344.
(Item 34)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding said miniCMV promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1.
(Item 35)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a nucleic acid sequence encoding the MHCK7 promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7.
(Item 36)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a nucleic acid sequence encoding a CMV promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7.
(Item 37)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a nucleic acid sequence encoding the MCK promoter, variant 2 wild type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7.
(Item 38)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a nucleic acid sequence encoding a GNE promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7.
(Item 39)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises a nucleic acid sequence encoding a mini-CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7.
(Item 40)
20. The rAAV of item 19, wherein the genome comprises the MCK promoter, the GALGT2 cDNA, the FGFR1 IRES, and a nucleic acid encoding follistatin 344.
(Item 41)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid encoding said MCK promoter, said GALGT2 cDNA, FGFR1 IRES, and HB-IGF1.
(Item 42)
20. The rAAV of item 19, wherein said genome comprises a nucleic acid sequence encoding an MCK promoter, said GALGT2 cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7.
(Item 43)
The rAAV is of serotype rAAVrh. rAAV according to any one of items 19 to 42, which is of 74 types.
(Item 44)
rAAV particles comprising rAAV according to any one of items 19 to 43.
(Item 45)
A method of treating GNE myopathy in a human subject in need thereof, the method comprising administering an rAAV according to any one of items 19 to 39 or an rAAV particle according to item 44.
(Item 46)
Use of rAAV according to any one of items 19 to 39 or rAAV particles according to item 44 for the preparation of a medicament for the treatment of GNE myopathy.
(Item 47)
A composition comprising rAAV according to any one of items 19 to 39 or rAAV particles according to item 44 for the treatment of GNE myopathy.
(Item 48)
A method of treating muscular dystrophy in a human subject in need thereof, the method comprising the step of administering rAAV according to any one of items 40 to 42 or rAAV particles according to item 44.
(Item 49)
Use of rAAV according to any one of items 40 to 42 or rAAV particles according to item 44 for the preparation of a medicament for the treatment of muscular dystrophy.
(Item 50)
A composition comprising rAAV according to any one of items 40 to 42 or rAAV particles according to item 44 for the treatment of muscular dystrophy.
(Item 51)
51. The method, use, or composition according to any one of items 48 to 50, wherein the muscular dystrophy is Duchenne muscular dystrophy, limb-girdle muscular dystrophy 2D, or congenital muscular dystrophy 1A.

Claims (16)

ポリヌクレオチドであって、
a)1つ以上のプロモーターエレメント、
b)GNE cDNA配列またはGALGT2 cDNA配列、
c)内部リボソーム侵入部位(IRES)、および
d)筋肉成長因子または筋肉分化転換因子をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
A polynucleotide,
a) one or more promoter elements;
b) GNE cDNA sequence or GALGT2 cDNA sequence,
c) an internal ribosome entry site (IRES); and d) a nucleotide sequence encoding a muscle growth factor or muscle transdifferentiation factor.
前記プロモーターエレメントが、前記GNE cDNA配列または前記GALGT2 cDNA配列に作動可能に連結される、請求項に記載のポリヌクレオチド。 2. The polynucleotide of claim 1 , wherein the promoter element is operably linked to the GNE cDNA sequence or the GALGT2 cDNA sequence. 前記IRESが、筋肉成長因子または筋肉分化転換因子をコードする前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結される、請求項またはに記載のポリヌクレオチド。 3. The polynucleotide of claim 1 or 2 , wherein the IRES is operably linked to the nucleotide sequence encoding a muscle growth factor or muscle transdifferentiation factor. 前記プロモーターエレメントが、構成的プロモーターまたは筋肉特異的プロモーターであり、必要に応じて前記プロモーターエレメントが、CMVプロモーター、MCKプロモーター、MHCK7プロモーター、ミニCMVプロモーター、またはGNEプロモーターである、請求項1~のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。 The promoter element is a constitutive promoter or a muscle-specific promoter, and optionally the promoter element is a CMV promoter, MCK promoter, MHCK7 promoter, miniCMV promoter, or GNE promoter. 3. The polynucleotide according to any one of 3 . a)前記GNE cDNA配列が、配列番号1の核酸配列を含むバリアント2 GNE野生型ヒトGNE遺伝子である、
b)前記GALGT2 cDNA配列が、配列番号36の核酸配列を含む、
c)前記内部リボソーム侵入部位(IRES)が、線維芽細胞成長因子1A遺伝子に由来する、
d)前記IRESが、配列番号30のヌクレオチド配列またはその断片を含む、
e)前記IRESが、配列番号8のヌクレオチド配列を含む、かつ/または
f)前記ヌクレオチド配列が、フォリスタチン、SMAD7、またはインスリン成長因子1(IGF1)バリアントをコードする、
請求項のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
a) the GNE cDNA sequence is a variant 2 GNE wild-type human GNE gene comprising the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 1;
b) said GALGT2 cDNA sequence comprises the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 36;
c) said internal ribosome entry site (IRES) is derived from the fibroblast growth factor 1A gene;
d) said IRES comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 30 or a fragment thereof;
e) said IRES comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 8, and/or
f) said nucleotide sequence encodes follistatin, SMAD7, or an insulin growth factor 1 (IGF1) variant;
The polynucleotide according to any one of claims 1 to 4 .
前記GNE cDNAの発現を駆動するためにエキソン1と2との間に見出されたヒトGNEプロモーターエレメントをさらに含む、請求項のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列。 Polynucleotide sequence according to any one of claims 1 to 5 , further comprising a human GNE promoter element found between exons 1 and 2 to drive expression of said GNE cDNA. 前記フォリスタチンが、フォリスタチン344もしくはフォリスタチン314である、または前記IGF1バリアントが、HB-IGF1である、請求項に記載のポリヌクレオチド。 6. The polynucleotide of claim 5 , wherein the follistatin is follistatin 344 or follistatin 314, or the IGF1 variant is HB-IGF1 . 請求項1~のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列を含むゲノムを有する、組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)であって、前記ポリヌクレオチドが、単一のrAAVゲノム内にある、組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)。 A recombinant adeno-associated virus (rAAV) having a genome comprising a polynucleotide sequence according to any one of claims 1 to 7 , wherein said polynucleotide is within a single rAAV genome. Adeno-associated virus (rAAV). 前記ゲノムが、
a)CMVプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNA
b)MCKプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNA、
c)MHCKプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNA、
d)前記GNEプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNA、
e)ミニCMVプロモーターおよびバリアント2野生型ヒトGNE cDNA、
f)MCK7プロモーター、バリアント2野生型ヒトcDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列、
g)前記MHCK7プロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列、
h)前記CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列、
i)前記CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列、
j)前記CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列、
k)前記MCKプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列、
l)前記MCKプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列、
m)前記GNEプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列、
n)前記GNEプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列、
o)前記ミニCMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸配列、
p)前記ミニCMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸配列、
q)前記MHCK7プロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列、
r)前記CMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列、
s)前記MCKプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列、
t)前記プロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列、
u)前記ミニCMVプロモーター、バリアント2野生型ヒトGNE cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列、
v)前記MCKプロモーター、前記GALGT2 cDNA、FGFR1 IRES、およびフォリスタチン344をコードする核酸、
w)前記MCKプロモーター、前記GALGT2 cDNA、FGFR1 IRES、およびHB-IGF1をコードする核酸、または
x)MCKプロモーター、前記GALGT2 cDNA、FGF1 IRES、およびSMAD7をコードする核酸配列
を含む、請求項に記載のrAAV。
The genome is
a) CMV promoter and variant 2 wild-type human GNE cDNA ,
b) MCK promoter and variant 2 wild type human GNE cDNA,
c) MHCK promoter and variant 2 wild type human GNE cDNA,
d) the GNE promoter and variant 2 wild type human GNE cDNA;
e) mini-CMV promoter and variant 2 wild-type human GNE cDNA,
f) a nucleic acid sequence encoding the MCK7 promoter, variant 2 wild type human cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344;
g) a nucleic acid sequence encoding the MHCK7 promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1;
h) a nucleic acid sequence encoding the CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1;
i) a nucleic acid sequence encoding the CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344;
j) a nucleic acid sequence encoding the CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1;
k) a nucleic acid sequence encoding the MCK promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344;
l) a nucleic acid sequence encoding the MCK promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1;
m) a nucleic acid sequence encoding the GNE promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344;
n) a nucleic acid sequence encoding the GNE promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1;
o) a nucleic acid sequence encoding said mini-CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and follistatin 344;
p) a nucleic acid sequence encoding the mini-CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and HB-IGF1;
q) a nucleic acid sequence encoding the MHCK7 promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7;
r) a nucleic acid sequence encoding the CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7;
s) a nucleic acid sequence encoding the MCK promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7;
t) a nucleic acid sequence encoding the promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7;
u) a nucleic acid sequence encoding said mini-CMV promoter, variant 2 wild-type human GNE cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7;
v) a nucleic acid encoding the MCK promoter, the GALGT2 cDNA, the FGFR1 IRES, and follistatin 344;
w) a nucleic acid encoding said MCK promoter, said GALGT2 cDNA, FGFR1 IRES, and HB-IGF1, or
x) Nucleic acid sequence encoding the MCK promoter, the GALGT2 cDNA, FGF1 IRES, and SMAD7
9. The rAAV of claim 8 , comprising:
前記rAAVが、血清型rAAVrh.74のものである、請求項8または9に記載のrAAV。 The rAAV is of serotype rAAVrh. 10. The rAAV according to claim 8 or 9 , wherein the rAAV is of 74. 請求項10のいずれか一項に記載のrAAVを含む、rAAV粒子。 rAAV particles comprising rAAV according to any one of claims 8 to 10 . GNEミオパチーの治療のための薬剤の調製のための、請求項10のいずれか一項に記載のrAAVまたは請求項11に記載のrAAV粒子の、使用。 Use of rAAV according to any one of claims 8 to 10 or rAAV particles according to claim 11 for the preparation of a medicament for the treatment of GNE myopathy. GNEミオパチーの治療のための、請求項10のいずれか一項に記載のrAAVまたは請求項11に記載のrAAV粒子を含む、組成物。 A composition comprising rAAV according to any one of claims 8 to 10 or rAAV particles according to claim 11 for the treatment of GNE myopathy. 筋ジストロフィーの治療のための薬剤の調製のための、請求項10のいずれか一項に記載のrAAVまたは請求項11に記載のrAAV粒子の、使用。 Use of rAAV according to any one of claims 8 to 10 or rAAV particles according to claim 11 for the preparation of a medicament for the treatment of muscular dystrophy. 筋ジストロフィーの治療のための、請求項10のいずれか一項に記載のrAAVまたは請求項11に記載のrAAV粒子を含む、組成物。 A composition comprising rAAV according to any one of claims 8 to 10 or rAAV particles according to claim 11 for the treatment of muscular dystrophy. 前記筋ジストロフィーが、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー2D、または先天性筋ジストロフィー1Aである、請求項14または15に記載の使用、または組成物。
16. The use or composition according to claim 14 or 15 , wherein the muscular dystrophy is Duchenne muscular dystrophy, limb-girdle muscular dystrophy 2D, or congenital muscular dystrophy 1A.
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