JPWO2021050948A5 - - Google Patents

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JPWO2021050948A5
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[0047] 別の態様では、本開示は、医薬品として又は医薬品の調製に使用するための、
組換え核酸、ベクター、改変Ｔ細胞、又は医薬組成物を提供する。
参照による組み込み
[0048] 本明細書で言及される刊行物、特許、及び特許出願はすべて、個別の刊行物、特許、又は特許出願がそれぞれ具体的かつ個別に参照により本明細書に組み込まれた場合と同様に、参照により本明細書に組み込まれる。
本願は以下の発明を包含する。
［項目１］ （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（２）膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）抗原結合ドメインを含む抗体と
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメインをコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲγ定常ドメイン若しくはＴＣＲδ定常ドメインである前記配列か、又はＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体が機能的に連結されており、
かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。
［項目２］ （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、
（２）膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）抗体又はその断片に結合できる結合リガンド又はその断片と
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメインをコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲγ定常ドメイン若しくはＴＣＲδ定常ドメインである前記配列か、又はＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び結合リガンド又はその断片は機能的に連結されており、かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。
［項目３］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、若しくはＴＣＲδの細胞内ドメイン、又はＣＤ３ε、ＣＤ３γ、若しくはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む、項目１又は項目２に記載の組換え核酸。
［項目４］ 前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲδ定常ドメインである、項目１～３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目５］ 前記ＴＣＲδ定常ドメインが、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４３、若しくは配列番号２６５、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目４に記載の組換え核酸。
［項目６］ 前記細胞内ドメインが、ＴＣＲγの細胞内ドメインである、項目３～５のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目７］ 前記ＴＣＲδ定常ドメインをコードする前記配列が、前記ＴＣＲδ定常ドメインをコードする前記配列に機能的に連結されている第２の抗原結合ドメイン又はリガンド結合ドメインをさらにコードする、項目３～５のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＦＰの前記抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインと同一のもの又は異なるものである、項目７に記載の組換え核酸。
［項目９］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＣＲδ定常ドメインをコードする前記配列にリンカーを介して機能的に連結されている、項目７に記載の組換え核酸。
［項目１０］ 前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲγ定常ドメインである、項目１～３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１１］ 前記ＴＣＲγ定常ドメインが、配列番号２１若しくは配列番号１５５、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１０に記載の組換え核酸。
［項目１２］ 前記細胞内ドメインが、ＴＣＲδの細胞内ドメインである、項目１０又は１１に記載の組換え核酸。
［項目１３］ 前記ＴＣＲγ定常ドメインをコードする前記配列が、前記ＴＣＲγ定常ドメインをコードする前記配列に機能的に連結されている第２の抗原結合ドメイン又はリガンド結合ドメインをさらにコードする、項目８～１２のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１４］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＦＰの前記抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインと同一のもの又は異なるものである、項目１３に記載の組換え核酸。
［項目１５］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＣＲγ定常ドメインをコードする前記配列にリンカーを介して機能的に連結されている、項目１３に記載の組換え核酸。
［項目１６］ 前記組換え核酸が、ＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインをコードする配列を含む、項目１～３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７］ 前記ＴＣＲγ定常ドメインが、配列番号２１若しくは配列番号１５５、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１６に記載の組換え核酸。
［項目１８］ 前記ＴＣＲγ定常ドメインをコードする前記配列が、さらにＴＣＲγ可変ドメインをコードし、その結果、全ＴＣＲγドメインをコードする、項目１６又は１７に記載の組換え核酸。
［項目１９］ 前記全ＴＣＲγドメインが、γ９又はγ４である、項目１８に記載の組換え核酸。
［項目２０］ 前記全ＴＣＲγドメインが、配列番号２５５、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１８又は１９に記載の組換え核酸。
［項目２１］ 前記ＴＣＲδ定常ドメインが、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４３、若しくは配列番号２６５、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１６～２０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２２］ 前記ＴＣＲδ定常ドメインをコードする前記配列が、さらにＴＣＲδ可変ドメインをコードし、その結果、全ＴＣＲδドメインをコードする、項目１６～２１のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２３］ 前記全ＴＣＲδドメインが、δ２又はδ１である、項目２２に記載の組換え核酸。
［項目２４］ 前記全ＴＣＲδ定常ドメインが、配列番号２５６、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目２２又は２３に記載の組換え核酸。
［項目２５］ 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、又はＣＤ３δである、項目１６～２４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２６］ 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３εである、項目１６～２５のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２７］ 少なくとも１つのリーダー配列及び少なくとも１つのリンカーをさらに含む、項目１～２６のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２８］ ＴＣＲα定常ドメインの一部、ＴＣＲβドメインの一部、又はその両方をさらに含む、項目２７に記載の組換え核酸。
［項目２９］ 前記配列が、５’から３’方向に、第１のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー、ＴＲＤＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、及びＴＲＧＣ遺伝子配列を含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目３０］ 前記配列が、５’－３’方向に、第１のリーダー配列、ＴＲＤＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー配列、及びＴＲＧＣ遺伝子配列を含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目３１］ 前記配列が、５’－３’方向に、第１のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、第１のリンカー配列、ＴＲＤＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー、第２のリーダー配列、第２の抗原結合ドメイン配列、第２のリンカー配列、及びＴＲＧＣ遺伝子配列を含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目３２］ 前記配列が、５’－３’方向に、第１のリーダー配列、ＴＲＤＣ遺伝子配列、第１の切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、ＴＲＧＣ遺伝子配列、第２の切断可能なリンカー配列、第３のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー配列、及びＣＤ３ε遺伝子配列を含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目３３］ 前記配列が、５’－３’方向に、第１のリーダー配列、第１の抗原結合ドメイン配列、第１のリンカー配列、ＴＲＤＣ遺伝子配列又はその断片、ＴＲＡＣ遺伝子配列又はその断片、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、第２の抗原結合ドメイン配列、第２のリンカー配列、ＴＲＧＣ遺伝子配列又はその断片、及びＴＲＢＣ遺伝子配列又はその断片を含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目３４］ 前記配列が、配列番号１に示されるポリペプチドをコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目３５］ 前記配列が、配列番号２に示されるポリペプチドをコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目３６］ 前記配列が、配列番号３に示されるポリペプチドをコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目３７］ 前記配列が、配列番号４に示されるポリペプチドをコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目３８］ 前記配列が、配列番号５に示されるポリペプチドをコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目３９］ 前記配列が、配列番号２４２の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４０］ 前記配列が、配列番号２４４の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４１］ 前記配列が、配列番号２４５の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４２］ 前記配列が、配列番号２４６の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４３］ 前記配列が、配列番号２４８の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４４］ 前記配列が、配列番号２５０の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４５］ 前記配列が、配列番号２５２の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４６］ 前記配列が、配列番号２５７の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４７］ 前記配列が、配列番号２６３の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４８］ 前記配列が、配列番号２６４の配列をコードする、項目１～３３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目４９］ 前記結合リガンドが、前記抗体のＦｃドメインと結合できる、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５０］ 前記結合リガンドが、ＩｇＧ１抗体を選択的に結合できる、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５１］ 前記結合リガンドが、ＩｇＧ４抗体に特異的に結合できる、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５２］ 前記抗体又はその断片が細胞表面抗原に結合する、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５３］ 前記抗体又はその断片が、マウス、ヒト、又はヒト化されたものである、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５４］ 前記抗体又はその断片が腫瘍細胞の表面にある細胞表面抗原に結合する、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５５］ 前記結合リガンドが、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、又は十量体を含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５６］ 前記結合リガンドが抗体又はその断片を含まない、項目１に記載の組換え核酸。
［項目５７］ 前記結合リガンドが、ＣＤ１６結合ポリペプチド又はその断片を含む、項目５６に記載の組換え核酸。
［項目５８］ 前記結合リガンドが、ＣＤ１６結合ポリペプチドを含む、項目５６に記載の組換え核酸。
［項目５９］ 前記結合リガンドがヒトのものであるか、又はヒト化されている、項目１に記載の組換え核酸。
［項目６０］ 前記結合リガンドが結合できる抗体又はその断片をコードする核酸配列をさらに含む、項目１に記載の組換え核酸。
［項目６１］ 前記抗体又はその断片が細胞から分泌可能である、項目６０に記載の組換え核酸。
［項目６２］ （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（２）膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）細胞の表面に発現する受容体又はポリペプチドに結合するリガンド又はその断片を含む抗原結合ドメインと
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメインをコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲγ定常ドメイン若しくはＴＣＲδ定常ドメインである前記配列か、又はＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗原結合ドメインは機能的に連結されており、
かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。
［項目６３］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、若しくはＴＣＲδの細胞内ドメイン、又はＣＤ３ε、ＣＤ３γ、若しくはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目６４］ 少なくともＴＣＲα定常ドメインをコードする部分配列、ＴＣＲβ定常ドメインをコードする部分配列、又はＴＣＲα定常ドメインとＴＣＲβ定常ドメイン両方の部分配列をさらに含む、項目１～６３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目６５］ 前記抗原結合ドメインがリガンドを含む、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目６６］ 前記リガンドが細胞の受容体に結合する、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目６７］ 前記リガンドが、細胞の表面に発現する前記ポリペプチドに結合する、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目６８］ 細胞の表面に発現する前記受容体又はポリペプチドが、ストレス応答受容体又はポリペプチドを含む、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目６９］ 細胞の表面に発現する前記受容体又はポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩ関連糖タンパク質である、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７０］ 前記ＭＨＣクラスＩ関連糖タンパク質が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＡＥＴ１Ｅ、ＲＡＥＴ１Ｇ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、項目６９に記載の組換え核酸。
［項目７１］ 前記抗原結合ドメインが、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、又は十量体を含む、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７２］ 前記抗原結合ドメインが、前記リガンド又はその断片の単量体又は二量体を含む、項目７１に記載の組換え核酸。
［項目７３］ 前記リガンド又はその断片が、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、又は十量体を含む、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７４］ 前記リガンド又はその断片が単量体又は二量体である、項目７３に記載の組換え核酸。
［項目７５］ 前記抗原結合ドメインが抗体又はその断片を含まない、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７６］ 前記抗原結合ドメインが可変領域を含まない、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７７］ 前記抗原結合ドメインがＣＤＲを含まない、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７８］ 前記リガンド又はその断片が、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド又はその断片である、項目６２に記載の組換え核酸。
［項目７９］ Ｔ細胞で発現すると、前記ＴＣＲ定常ドメインが機能的ＴＣＲ複合体に組み込まれる、項目１～７８のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８０］ 前記ＴＣＲ定常ドメインが、Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰを組み込む前記機能的ＴＣＲ複合体と同じ機能的ＴＣＲ複合体に組み込まれる、項目１～７９のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８１］ 前記ＴＦＰをコードする配列及び前記ＴＣＲ定常ドメイン（複数可）をコードする配列が、同じ核酸分子内に含まれている、項目１～８０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８２］ 前記コードされるＴＦＰ及び前記コードされるＴＣＲ定常ドメインが、第１のリンカー配列によって機能的に連結されている、項目１～８１のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８３］ 前記第１のリンカーが、プロテアーゼ切断部位を含む、項目８２に記載の組換え核酸。
［項目８４］ 前記プロテアーゼ切断部位が、２Ａ、例えばＴ２Ａ又はＰ２Ａ切断部位である、項目８３に記載の組換え核酸。
［項目８５］ 前記ＴＦＰをコードする配列及び前記ＴＣＲ定常ドメインをコードする配列が、異なる核酸分子内に含まれている、項目１～８４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８６］ 前記ＴＦＰの、前記ＴＣＲサブユニットと、前記抗体ドメイン、前記抗原結合ドメイン、若しくは前記結合リガンド、又はそれらの断片とが、第２のリンカー配列によって機能的に連結されている、項目１～８５に記載の組換え核酸。
［項目８７］ 前記第２のリンカー配列が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ （式中、ｎ＝１～４）を含む、項目８６に記載の組換え核酸。
［項目８８］ 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲδ、又はＴＣＲγからのＴＣＲ膜貫通ドメインである、項目１～８７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目８９］ 前記細胞内ドメインが、ＣＤ３εのみ、ＣＤ３γのみ、ＣＤ３δのみ、ＴＣＲαのみ、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、又はＴＣＲδに由来する、項目３～６１及び６３～８８のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目９０］ 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲ細胞内ドメインを含み、（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のうち少なくとも２つは同じＴＣＲサブユニット由来である、項目１～８９のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目９１］ 前記ＴＣＲ細胞外ドメインが、ＴＣＲγ鎖、ＴＣＲδ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列からなる群から選択される、タンパク質の細胞外ドメイン又はその一部を含む、項目１～９０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目９２］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲγ鎖又はＴＣＲδ鎖の、（ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲ細胞内ドメインを含む、項目９１に記載の組換え核酸。
［項目９３］ 前記ＴＣＲ細胞外ドメインが、ＴＣＲγ鎖若しくはＴＣＲδ鎖の定常ドメインの細胞外部分、その機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目９２に記載の組換え核酸。
［項目９４］ 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲ細胞内ドメインを含み、δ定常ドメイン又はその断片であるか、又はそれらを含む、項目９２又は９３に記載の組換え核酸。
［項目９５］ 前記δ定常ドメインが、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４３、若しくは配列番号２６５、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を有する、項目９４に記載の組換え核酸。
［項目９６］ （ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲ細胞内ドメインを含む、前記ＴＣＲサブユニットが、γ定常ドメインであるか、又はそれを含む、項目９２又は９３に記載の組換え核酸。
［項目９７］ 前記γ定常ドメインが、配列番号２１若しくは配列番号１５５、それらの機能的断片の配列、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を有する、項目９６に記載の組換え核酸。
［項目９８］ 前記ＴＦＰの細胞外ドメインは、γ鎖又はδ鎖の可変ドメインを含まない、項目９４～９７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目９９］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、若しくはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインから選択されるタンパク質の刺激ドメイン、又はそれらに対して少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲ細胞内ドメインを含む、項目３～６１及び６３～８８のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１００］ 前記ＴＦＰのＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３εの細胞外、膜貫通、及び細胞内ドメインを含む、項目９９に記載の組換え核酸。
［項目１０１］ 前記ＣＤ３εのＴＣＲサブユニットが、配列番号２５８、その機能的断片の配列、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１００に記載の組換え核酸。
［項目１０２］ 前記ＴＦＰ、前記ＴＣＲγ定常ドメイン、前記ＴＣＲδ定常ドメイン、及びそれらの任意の組み合わせが、内因性ＴＣＲ複合体及び／又は少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用できる、項目１～１０１のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１０３］ （ａ）前記ＴＣＲ定常ドメインはＴＣＲγ定常ドメインであり、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、若しくはそれらの組み合わせの内因性サブユニットを含むＴＣＲ複合体に前記ＴＦＰが機能的に統合されるか；
（ｂ）前記ＴＣＲ定常ドメインはＴＣＲδ定常ドメインであり、ＴＣＲγ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、若しくはそれらの組み合わせの内因性サブユニットを含むＴＣＲ複合体に前記ＴＦＰが機能的に統合されるか；又は
（ｃ）前記ＴＣＲ定常ドメインはＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインであり、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、若しくはそれらの組み合わせの内因性サブユニットを含むＴＣＲ複合体に前記ＴＦＰが機能的に統合される、項目１～１０２のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１０４］ 前記少なくとも１つだが２０以下の修飾が、細胞シグナル伝達を媒介するアミノ酸の修飾、又は前記ＴＦＰへのリガンド結合に応答してリン酸化されるアミノ酸の修飾を含む、項目１～１０３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１０５］ 前記抗体が抗体断片である、項目１、３～６１、及び８５～１０４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１０６］ 前記抗体断片が、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体ドメイン、Ｖ Ｈ ドメイン、又はＶ Ｌ ドメインである、項目１０５に記載の組換え核酸。
［項目１０７］ 抗原結合ドメインが、抗ＣＤ１９結合ドメイン、抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメイン、抗メソテリン（ＭＳＬＮ）結合ドメイン、抗ＣＤ２０結合ドメイン、抗ＣＤ７０結合ドメイン、抗７９ｂ結合ドメイン、抗ＨＥＲ２結合ドメイン、抗ＰＭＳＡ結合ドメイン、抗ＭＵＣ１６結合ドメイン、抗ＣＤ２２結合ドメイン、抗ＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、抗ＢＡＦＦ又はＢＡＦＦ受容体結合ドメイン、抗ネクチン－４結合ドメイン、抗ＴＲＯＰ－２結合ドメイン、抗ＧＰＣ３結合ドメイン、及び抗ＲＯＲ－１結合ドメインからなる群から選択される、項目１、３～６１、及び８５～１０６のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１０８］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６０のＣＤＲ１、配列番号６１のＣＤＲ２、及び配列番号６２のＣＤＲ３を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１０９］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６３のＣＤＲ１、配列番号６４のＣＤＲ２、及び配列番号６５のＣＤＲ３を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１１０］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６６のＣＤＲ１、配列番号６７のＣＤＲ２、及び配列番号６８のＣＤＲ３を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１１１］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６９、配列番号７０、又は配列番号７１の配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する配列を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１１２］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号７３の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７５のＣＤＲ２、及び配列番号７７のＣＤＲ３を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１１３］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号７９の重鎖ＣＤＲ１、配列番号８１のＣＤＲ２、及び配列番号８３のＣＤＲ３を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１１４］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号８５の配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、及び／又は配列番号８７の配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、項目１０７に記載の組換え核酸。
［項目１１５］ ＴＣＲα膜貫通ドメインをコードする配列をさらに含む、項目１～１１４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１１６］ ＴＣＲβ膜貫通ドメインをコードする配列をさらに含む、項目１～１１４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１１７］ ＴＣＲα膜貫通ドメインをコードする配列及びＴＣＲβ膜貫通ドメインをコードする配列をさらに含む、項目１～１１４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１１８］ （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（２）マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）抗原結合ドメインを含む抗体又はその断片と
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメイン（複数可）をコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、マウスＴＣＲα定常ドメイン若しくはマウスＴＣＲβ定常ドメインである前記配列か、又はマウスＴＣＲα定常ドメインとマウスＴＣＲβ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体は機能的に連結されており、
かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。
［項目１１９］ （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（２）マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）抗体又はその断片に結合可能である結合リガンド又はその断片と
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメイン（複数可）をコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、マウスＴＣＲα定常ドメイン若しくはマウスＴＣＲβ定常ドメインである前記配列か、又はマウスＴＣＲα定常ドメインとマウスＴＣＲβ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び結合リガンド又はその断片は機能的に連結されており、
かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。
［項目１２０］ 前記ＴＣＲサブユニットが、マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの細胞内ドメインを含む、項目１１８又は１１９に記載の組換え核酸。
［項目１２１］ 前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲα定常ドメインである、項目１１８又は１２０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１２２］ 前記ＴＣＲα定常ドメインが、配列番号１７、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４６、若しくは配列番号２０７、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１２１に記載の組換え核酸。
［項目１２３］ 前記ＴＣＲα定常ドメインが、マウスＴＣＲα定常ドメインを含む、項目１２１に記載の組換え核酸。
［項目１２４］ 前記マウスＴＣＲα定常ドメインが、マウスＴＣＲα定常ドメインのアミノ酸２～１３７を含む、項目１２３に記載の組換え核酸。
［項目１２５］ 前記マウスＴＣＲα定常ドメインが、配列番号１４６のアミノ酸２～１３７を含む、項目１２４に記載の組換え核酸。
［項目１２６］ 前記マウスＴＣＲα定常ドメインが、配列番号２０７の配列を含む、項目１２４に記載の組換え核酸。
［項目１２７］ 前記マウスＴＣＲα定常ドメインが、配列番号１４６のアミノ酸８２～１３７を含む、項目１２３に記載の組換え核酸。
［項目１２８］ 前記マウスＴＣＲα定常ドメインが、配列番号１７の配列を含む、項目１２７に記載の組換え核酸。
［項目１２９］ 前記細胞内ドメインが、ＴＣＲβの細胞内ドメインである、項目１２２～１２８のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１３０］ 前記ＴＣＲα定常ドメインをコードする前記配列が、前記ＴＣＲα定常ドメインをコードする前記配列に機能的に連結されている第２の抗原結合ドメイン又はリガンド結合ドメインをさらにコードする、項目１２１～１２９のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１３１］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＦＰの前記抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインと同一のもの又は異なるものである、項目１３０に記載の組換え核酸。
［項目１３２］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＣＲα定常ドメインをコードする前記配列にリンカーを介して機能的に連結されている、項目１３０に記載の組換え核酸。
［項目１３３］ 前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲβ定常ドメインである、項目１１８～１２０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１３４］ 前記ＴＣＲβ定常ドメインが、配列番号１８、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５２、若しくは配列番号２０９、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１３３に記載の組換え核酸。
［項目１３５］ 前記ＴＣＲβ定常ドメインが、マウスＴＣＲβ定常ドメインを含む、項目１３４に記載の組換え核酸。
［項目１３６］ 前記マウスＴＣＲβ定常ドメインが、前記マウスＴＣＲβ定常ドメインのアミノ酸２～１７３を含む、項目１３４に記載の組換え核酸。
［項目１３７］ 前記マウスＴＣＲβ定常ドメインが、配列番号１５２のアミノ酸２～１７３を含む、項目１３４に記載の組換え核酸。
［項目１３８］ 前記マウスＴＣＲβ定常ドメインが、配列番号２０９を含む、項目１３４に記載の組換え核酸。
［項目１３９］ 前記ＴＣＲβ定常ドメインが、配列番号１５２のアミノ酸１２３～１７３を含む、項目１３４に記載の組換え核酸。
［項目１４０］ 前記ＴＣＲβ定常ドメインが、配列番号１８を含む、項目１３４に記載の組換え核酸。
［項目１４１］ 前記細胞内ドメインが、ＴＣＲαの細胞内ドメインである、項目１３３～１４０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１４２］ 前記ＴＣＲβ定常ドメインをコードする前記配列が、前記ＴＣＲβ定常ドメインをコードする前記配列に機能的に連結されている第２の抗原結合ドメイン又はリガンド結合ドメインをさらにコードする、項目１１８～１４１のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１４３］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＦＰの前記抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインと同一のもの又は異なるものである、項目１４２に記載の組換え核酸。
［項目１４４］ 前記第２の抗原結合ドメイン又は前記リガンド結合ドメインが、前記ＴＣＲβ定常ドメインをコードする前記配列にリンカーを介して機能的に連結されている、項目１４２に記載の組換え核酸。
［項目１４５］ 前記組換え核酸が、ＴＣＲα定常ドメイン及びＴＣＲβ定常ドメインをコードする配列を含む、項目１１８～１２０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１４６］ 前記ＴＣＲα定常ドメインが、配列番号１７、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４６、若しくは配列番号２０７、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１４５に記載の組換え核酸。
［項目１４７］ 前記ＴＣＲβ定常ドメインが、配列番号１８、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５２、若しくは配列番号２０９、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１４５又は１４６に記載の組換え核酸。
［項目１４８］ 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、又はＣＤ３δである、項目１１８～１４７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１４９］ 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３εである、項目１１８～１４７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１５０］ 前記配列が、５’から３’方向に、第１のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー、ＴＲＡＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、及びＴＲＢＣ遺伝子配列を含む、項目１４５に記載の組換え核酸。
［項目１５１］ 前記配列が、５’から３’方向に、第１のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー、ＴＲＡＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、及びＴＲＢＣ遺伝子配列を含む、項目１４５に記載の組換え核酸。
［項目１５２］ 前記配列が、５’から３’方向に、第１のリーダー配列、ＴＲＡＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー、及びＴＲＢＣ遺伝子配列を含む、項目１４５に記載の組換え核酸。
［項目１５３］ 前記配列が、５’から３’方向に、第１のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー、ＴＲＡＣ遺伝子配列、切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー、及びＴＲＢＣ遺伝子配列を含む、項目１４５に記載の組換え核酸。
［項目１５４］ 前記配列が、５’－３’方向に、第１のリーダー配列、ＴＲＡＣ遺伝子配列、第１の切断可能なリンカー配列、第２のリーダー配列、ＴＲＢＣ遺伝子配列、第２の切断可能なリンカー配列、第３のリーダー配列、抗原結合ドメイン配列、リンカー配列、及びＣＤ３ε遺伝子配列を含む、項目１４５に記載の組換え核酸。
［項目１５５］ 前記配列が、配列番号１０に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１５６］ 前記配列が、配列番号２０４に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１５７］ 前記配列が、配列番号２０６に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１５８］ 前記配列が、配列番号２１０に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１５９］ 前記配列が、配列番号２１１に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６０］ 前記配列が、配列番号２１７に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６１］ 前記配列が、配列番号２１８に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６２］ 前記配列が、配列番号２１９に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６３］ 前記配列が、配列番号２２０に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６４］ 前記配列が、配列番号２５９に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６５］ 前記配列が、配列番号２６１に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６６］ 前記配列が、配列番号２６２に示されるポリペプチドをコードする、項目１１５～１５４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６７］ 少なくとも１つのリーダー配列及び少なくとも１つのリンカーをさらに含む、項目１１５～１６６のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６８］ 前記結合リガンドが、前記抗体のＦｃドメインと結合できる、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１６９］ 前記結合リガンドが、ＩｇＧ１抗体を選択的に結合できる、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７０］ 前記結合リガンドが、ＩｇＧ４抗体に特異的に結合できる、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７１］ 前記抗体又はその断片が細胞表面抗原に結合する、項目１１８、及び１２０～１７０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７２］ 前記抗体又はその断片が、マウス、ヒト、又はヒト化されたものである、項目１１８及び１２０～１７０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７３］ 前記抗体又はその断片が腫瘍細胞の表面にある細胞表面抗原に結合する、項目１１８及び１２０～１７０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７４］ 前記結合リガンドが、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、又は十量体を含む、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７５］ 前記結合リガンドが、抗体又はその断片を含まない、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７６］ 前記結合リガンドが、ＣＤ１６結合ポリペプチド又はその断片を含む、項目１７５に記載の組換え核酸。
［項目１７７］ 前記結合リガンドがＣＤ１６結合ポリペプチドを含む、項目１７５に記載の組換え核酸。
［項目１７８］ 前記結合リガンドがヒトのものであるか、又はヒト化されている、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１７９］ 前記結合リガンドが結合できる抗体又はその断片をコードする核酸配列をさらに含む、項目１１９～１６７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１８０］ 前記抗体又はその断片が細胞から分泌できる、項目１１８及び１２０～１７０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１８１］ （ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（２）マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）細胞の表面に発現する受容体又はポリペプチドに結合するリガンド又はその断片を含む抗原結合ドメインと
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメインをコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、マウスＴＣＲα定常ドメイン若しくはマウスＴＣＲβ定常ドメインである前記配列か、又はマウスＴＣＲα定常ドメインとマウスＴＣＲβ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗原結合ドメインは機能的に連結されており、
かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。
［項目１８２］ 前記ＴＣＲサブユニットが、マウスＴＣＲα又はマウスＴＣＲβの細胞内ドメインを含む、項目１８１に記載の組換え核酸。
［項目１８３］ 前記細胞外ドメインが、ＴＣＲα定常ドメイン若しくはＴＣＲβ定常ドメインの細胞外部分、又はその断片を含む、項目１１８～１８２のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１８４］ 少なくともＴＣＲγ定常ドメインをコードする部分配列、ＴＣＲδ定常ドメインをコードする部分配列、又はＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメイン両方の部分配列をさらに含む、項目１１８～１８３のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１８５］ 前記抗原結合ドメインがリガンドを含む、項目１８１～１８４のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目１８６］ 前記リガンドが細胞の受容体に結合する、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１８７］ 前記リガンドが、細胞の表面に発現する前記ポリペプチドに結合する、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１８８］ 細胞の表面に発現する前記受容体又はポリペプチドが、ストレス応答受容体又はポリペプチドを含む、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１８９］ 細胞の表面に発現する前記受容体又はポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩ関連糖タンパク質である、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９０］ 前記ＭＨＣクラスＩ関連糖タンパク質が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＡＥＴ１Ｅ、ＲＡＥＴ１Ｇ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１８９に記載の組換え核酸。
［項目１９１］ 前記抗原結合ドメインが、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、又は十量体を含む、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９２］ 前記抗原結合ドメインが、前記リガンド又はその断片の単量体又は二量体を含む、項目１９１に記載の組換え核酸。
［項目１９３］ 前記リガンド又はその断片が、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、又は十量体を含む、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９４］ 前記リガンド又はその断片が単量体又は二量体である、項目１９３に記載の組換え核酸。
［項目１９５］ 前記抗原結合ドメインが抗体又はその断片を含まない、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９６］ 前記抗原結合ドメインが可変領域を含まない、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９７］ 前記抗原結合ドメインがＣＤＲを含まない、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９８］ 前記リガンド又はその断片が、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド又はその断片である、項目１８５に記載の組換え核酸。
［項目１９９］ Ｔ細胞で発現すると、前記ＴＣＲ定常ドメインが機能的ＴＣＲ複合体に組み込まれる、項目１１８～１９８のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２００］ 前記ＴＣＲ定常ドメインが、Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰを組み込む前記機能的ＴＣＲ複合体と同じ機能的ＴＣＲ複合体に組み込まれる、項目１９９のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２０１］ 前記ＴＦＰをコードする配列及び前記ＴＣＲ定常ドメイン（複数可）をコードする配列が、同じ核酸分子内に含まれている、項目１１８～２００のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２０２］ 前記ＴＦＰ及び前記ＴＣＲ定常ドメインが、第１のリンカー配列によって機能的に連結されている、項目１１８～２００のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２０３］ 前記第１のリンカーが、プロテアーゼ切断部位を含む、項目２０２に記載の組換え核酸分子。
［項目２０４］ 前記プロテアーゼ切断部位が、２Ａ、例えばＴ２Ａ又はＰ２Ａ切断部位である、項目２０３に記載の組換え核酸分子。
［項目２０５］ 前記ＴＦＰをコードする配列及び前記ＴＣＲ定常ドメイン（複数可）をコードする配列が、異なる核酸分子内に含まれている、項目１１８～２００のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２０６］ 前記ＴＦＰの、前記ＴＣＲサブユニットと、前記抗体ドメイン、前記抗原結合ドメイン、若しくは前記結合リガンド、又はそれらの断片とが、第２のリンカー配列によって機能的に連結されている、項目１１８～２０５のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２０７］ 前記第２のリンカー配列が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ （式中、ｎ＝１～４）を含む、項目２０６に記載の組換え核酸。
［項目２０８］ 前記膜貫通ドメインが、ＴＣＲα又はＴＣＲβ、例えば、マウスＴＣＲα又はＴＣＲβからのＴＣＲ膜貫通ドメインである、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２０９］ 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲα又はＴＣＲβのＴＣＲ細胞内ドメインを含む、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１０］ 前記ＴＣＲ細胞外ドメインが、ＴＣＲα鎖若しくはＴＣＲβ鎖、例えばマウスのＴＣＲα鎖若しくはＴＣＲβ鎖の定常ドメインの細胞外部分、その機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１１］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα鎖若しくはＴＣＲβ鎖、例えばマウスのＴＣＲα鎖若しくはＴＣＲβ鎖の膜貫通ドメイン、その機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、膜貫通ドメインを含む、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１２］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα鎖若しくはＴＣＲβ鎖、例えばマウスのＴＣＲα鎖若しくはＴＣＲβ鎖のＴＣＲ細胞内ドメイン、又はそれに対して少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含む、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１３］ 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲ細胞内ドメインを含み、α定常ドメインであるか、又はそれを含む、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１４］ 前記α定常ドメインが、配列番号１７、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４６、若しくは配列番号２０７の配列、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列、例えば配列番号１４６のアミノ酸２～１３７を含む、項目２１３に記載の組換え核酸。
［項目２１５］ （ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲ細胞内ドメインを含む、コードされるＴＣＲが、β定常ドメインであるか、又はそれを含む、項目１１８～２０７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１６］ 前記β定常ドメインが、配列番号１８、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５２、若しくは配列番号２０９の配列、それらの機能的断片、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列、例えば配列番号１５２のアミノ酸２～１７３を含む、項目２１５に記載の組換え核酸。
［項目２１７］ 前記ＴＣＲサブユニットの前記細胞外ドメインが、α鎖又はβ鎖の可変ドメインを含まない、項目２１５又は２１６に記載の組換え核酸。
［項目２１８］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、若しくはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインから選択されるタンパク質の刺激ドメイン、又はそれらに対して少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲ細胞内ドメインを含む、項目１～２１７のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２１９］ 前記ＴＦＰのＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３εの細胞外、膜貫通、及び細胞内ドメインを含む、項目２１８に記載の組換え核酸。
［項目２２０］ 前記ＣＤ３εのＴＣＲサブユニットは、配列番号２５８、その機能的断片の配列、又は少なくとも１つだが２０以下の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目２１８又は２１９に記載の組換え核酸。
［項目２２１］ 前記ＴＦＰ、前記ＴＣＲα定常ドメイン、前記ＴＣＲβドメイン、及びそれらの任意の組み合わせが、内因性ＴＣＲ複合体及び／又は少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用できる、項目１～２２０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２２２］ （ａ）前記ＴＣＲ定常ドメインはＴＣＲα定常ドメインであり、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、若しくはそれらの組み合わせの内因性サブユニットを含むＴＣＲ複合体に前記ＴＦＰが機能的に統合されるか；
（ｂ）前記ＴＣＲ定常ドメインはＴＣＲβ定常ドメインであり、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、若しくはそれらの組み合わせの内因性サブユニットを含むＴＣＲ複合体に前記ＴＦＰが機能的に統合されるか；又は
（ｃ）前記ＴＣＲ定常ドメインはＴＣＲα定常ドメイン及びＴＣＲβ定常ドメインであり、前記ＴＦＰが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、若しくはそれらの組み合わせの内因性サブユニットを含むＴＣＲ複合体に機能的に統合される、項目１～２２１のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２２３］ 前記少なくとも１つだが２０以下の修飾が、細胞シグナル伝達を媒介するアミノ酸の修飾、又は前記ＴＦＰへのリガンド結合に応答してリン酸化されるアミノ酸の修飾を含む、項目２２０～２２２のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２２４］ 前記抗体が抗体断片である、項目１１８及び１２０～１８０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２２５］ 前記抗体断片が、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体ドメイン、Ｖ Ｈ ドメイン、又はＶ Ｌ ドメインである、項目２２４に記載の組換え核酸。
［項目２２６］ 抗原結合ドメインが、抗ＣＤ１９結合ドメイン、抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメイン、抗メソテリン（ＭＳＬＮ）結合ドメイン、抗ＣＤ２０結合ドメイン、抗ＣＤ７０結合ドメイン、抗７９ｂ結合ドメイン、抗ＨＥＲ２結合ドメイン、抗ＰＭＳＡ結合ドメイン、抗ＭＵＣ１６結合ドメイン、抗ＣＤ２２結合ドメイン、抗ＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、抗ＢＡＦＦ又はＢＡＦＦ受容体結合ドメイン、抗ネクチン－４結合ドメイン、抗ＴＲＯＰ－２結合ドメイン、抗ＧＰＣ３結合ドメイン、及び抗ＲＯＲ－１結合ドメインからなる群から選択される、項目１１８及び１２０～１８０のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２２７］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６０のＣＤＲ１、配列番号６１のＣＤＲ２、及び配列番号６２のＣＤＲ３を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２２８］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６３のＣＤＲ１、配列番号６４のＣＤＲ２、及び配列番号６５のＣＤＲ３を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２２９］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６６のＣＤＲ１、配列番号６７のＣＤＲ２、及び配列番号６８のＣＤＲ３を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２３０］ 前記抗ＭＳＬＮ結合ドメインが、配列番号６９、配列番号７０、又は配列番号７１の配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する配列を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２３１］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号７３の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７５のＣＤＲ２、及び配列番号７７のＣＤＲ３を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２３２］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号７９の重鎖ＣＤＲ１、配列番号８１のＣＤＲ２、及び配列番号８３のＣＤＲ３を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２３３］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号８５の配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域、及び／又は配列番号８７の配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、項目２２６に記載の組換え核酸。
［項目２３４］ 前記核酸が、ＤＮＡ及びＲＮＡからなる群から選択される、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２３５］ 前記核酸がｍＲＮＡである、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２３６］ 前記核酸がｃｉｒｃＲＮＡである、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２３７］ 前記組換え核酸が核酸類似体を含み、前記核酸類似体は前記組換え核酸のコード配列にはない、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２３８］ 前記核酸類似体が、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノプロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’－アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホロアミダイトからなる群から選択される、項目２３７に記載の組換え核酸。
［項目２３９］ リーダー配列をさらに含む、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２４０］ プロモーター配列をさらに含む、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２４１］ ポリ（Ａ）尾部をコードする配列をさらに含む、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２４２］ ３’ＵＴＲ配列をさらに含む、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２４３］ 前記核酸が、単離された核酸又は天然に存在しない核酸である、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸。
［項目２４４］ 前記核酸がｉｎ ｖｉｔｒｏ転写した核酸である、先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
［項目２４５］ 先行項目のいずれか１項に記載の組換え核酸を含むベクター。
［項目２４６］ 前記ベクターが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ベクター、又はレトロウイルスベクターからなる群から選択される、項目２４５に記載のベクター。
［項目２４７］ 前記ベクターがＡＡＶ６ベクターである、項目２４５又は２４６に記載のベクター。
［項目２４８］ プロモーターをさらに含む、項目２４５～２４７のいずれか１項に記載のベクター。
［項目２４９］ 前記ベクターがｉｎ ｖｉｔｒｏ転写したベクターである、項目２４５～２４８のいずれか１項に記載のベクター。
［項目２５０］ 項目１～２４４のいずれか１項に記載の組換え核酸又は項目２４５～２４９のいずれか１項に記載のベクターを含む改変Ｔ細胞であって、前記改変Ｔ細胞は内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む、前記改変Ｔ細胞。
［項目２５１］ 項目１～２４４のいずれか１項に記載の核酸の前記ＴＦＰをコードする前記配列、又はＴＦＰをコードする項目１～２４４のいずれか１項に記載の前記核酸の前記配列によってコードされる前記ＴＦＰを含む改変Ｔ細胞であって、前記改変Ｔ細胞は内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む、前記改変Ｔ細胞。
［項目２５２］ 項目１～２４４のいずれか１項に記載のＴＦＰをコードする前記配列、又はＴＦＰをコードする項目１～２４４のいずれか１項に記載の前記核酸の前記配列によってコードされる前記ＴＦＰを含む、改変同種Ｔ細胞。
［項目２５３］ 前記Ｔ細胞がＴＣＲ定常ドメインをコードする異種配列をさらに含み、前記ＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲγ定常ドメイン、ＴＣＲδ定常ドメイン、又はＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインである、項目２５０～２５２のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２５４］ 前記Ｔ細胞がＴＣＲ定常ドメインをコードする異種配列をさらに含み、前記ＴＣＲ定常ドメインは、ＴＣＲα定常ドメイン、ＴＣＲβ定常ドメイン、又はＴＣＲα定常ドメインとＴＣＲβ定常ドメインである、項目２５０～２５３のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２５５］ 前記ＴＣＲ定常ドメイン、例えば、前記ＴＣＲα定常ドメイン、前記ＴＣＲβ定常ドメイン、又は前記ＴＣＲα定常ドメイン及び前記ＴＣＲβ定常ドメインが、マウスＴＣＲγ定常ドメイン、例えば、マウスＴＣＲα定常ドメイン、マウスＴＣＲβ定常ドメイン、又はマウスＴＣＲα定常ドメインとマウスＴＣＲβ定常ドメインである、項目２５４に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２５６］ 機能的に破壊される前記内因性ＴＣＲが、内因性ＴＣＲα鎖、内因性ＴＣＲβ鎖、又は内因性ＴＣＲα鎖と内因性ＴＣＲβ鎖である、項目２５０～２５５のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２５７］ 機能的に破壊された前記内因性ＴＣＲが、未改変の対照Ｔ細胞のものと比較して、ＭＨＣペプチド複合体への結合が減少する、項目２５０～２５６のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２５８］ 前記機能的破壊が、前記内因性ＴＣＲをコードする遺伝子の破壊である、項目２５０～２５７のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２５９］ 前記内因性ＴＣＲをコードする遺伝子の前記破壊が、Ｔ細胞のゲノム由来の前記内因性ＴＣＲをコードする前記遺伝子の配列の除去である、項目２５８に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２６０］ 前記Ｔ細胞が、ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、ナイーブＴ細胞、メモリー幹Ｔ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、二重陰性Ｔ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ０細胞、Ｔｃ０細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｃ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｃ２細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、α／βＴ細胞、γ／δＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、造血幹細胞、及び多能性幹細胞から選択されるヒトＴ細胞である、項目２５０～２５９のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２６１］ 前記Ｔ細胞がＣＤ８ ＋ Ｔ細胞又はＣＤ４ ＋ Ｔ細胞である、項目２５０～２６０のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２６２］ 前記Ｔ細胞が同種Ｔ細胞である、項目２５０～２６１のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２６３］ 細胞内シグナル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第２のポリペプチドと会合した、抑制分子の少なくとも一部を含む第１のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸をさらに含む、項目２５０～２６２のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２６４］ 前記抑制分子が、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第１のポリペプチドと、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のポリペプチドとを含む、項目２６３に記載の改変Ｔ細胞。
［項目２６５］ （ａ）項目２５０～２６４のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞と、
（ｂ）薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
［項目２６６］ 項目２５０～２６４のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞を作製する方法であって、
（ａ）ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、又はＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖をコードする内因性ＴＣＲ遺伝子を破壊し、それにより内因性ＴＣＲ遺伝子の機能的破壊を含んだＴ細胞を作製することと、
（ｂ）内因性ＴＣＲ遺伝子の機能的破壊を含んだＴ細胞に、項目１～２４４のいずれか１項に記載の組換え核酸又は項目２４５～２４９のいずれか１項に記載のベクターを形質導入することを含む、前記方法。
［項目２６７］ 前記破壊が、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、又はＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖をコードする内因性遺伝子を標的とするヌクレアーゼタンパク質、又はヌクレアーゼタンパク質をコードする核酸配列をＴ細胞に形質導入することを含む、項目２６６に記載の方法。
［項目２６８］ 項目２５０～２６４のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞を作製する方法であって、内因性ＴＣＲ遺伝子の機能的破壊を含んだＴ細胞に、項目１～２４４のいずれか１項に記載の組換え核酸又は項目２４５～２４９のいずれか１項に記載のベクターを形質導入することを含む、前記方法。
［項目２６９］ 内因性ＴＣＲ遺伝子の機能的破壊を含んだ前記Ｔ細胞が、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、又はＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖をコードする内因性ＴＣＲ遺伝子の機能的破壊を含んだＴ細胞である、項目２６８に記載の方法。
［項目２７０］ 前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞である、項目２６６～２６９のいずれか１項に記載の方法。
［項目２７１］ 内因性ＴＣＲ遺伝子の機能的破壊を含んだ前記Ｔ細胞が、未改変の対照Ｔ細胞のものと比較して、ＭＨＣ－ペプチド複合体への結合が減少する、項目２６６～２７０のいずれか１項に記載の方法。
［項目２７２］ 前記ヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ、又はｍｅｇａＴＡＬヌクレアーゼである、項目２６７～２７１のいずれか１項に記載の方法。
［項目２７３］ 前記組換え核酸又は前記ベクターに含まれる前記配列が、前記切断部位で前記内因性ＴＣＲサブユニット遺伝子に挿入され、前記内因性ＴＣＲサブユニット遺伝子への前記配列の前記挿入により前記内因性ＴＣＲサブユニットが機能的に破壊される、項目２６６～２７２のいずれか１項に記載の方法。
［項目２７４］ 前記ヌクレアーゼがメガヌクレアーゼである、項目２６７～２７１のいずれか１項に記載の方法。
［項目２７５］ 前記メガヌクレアーゼが第１のサブユニット及び第２のサブユニットを含み、前記第１のサブユニットは前記認識配列の第１の認識半部位に結合し、前記第２のサブユニットは前記認識配列の第２の認識半部位に結合する、項目２７４に記載の方法。
［項目２７６］ 前記メガヌクレアーゼが、リンカーを含む一本鎖メガヌクレアーゼであり、前記リンカーは前記第１のサブユニットと前記第２のサブユニットとを共有結合する、項目２７５に記載の方法。
［項目２７７］ 治療を必要とする対象におけるがんの治療方法であって、項目２６５に記載の治療有効量の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［項目２７８］ 治療を必要とする対象におけるがんの治療方法であって、（ａ）項目２６６～２７６のいずれか１項に記載の方法に従って作製される改変Ｔ細胞と、（ｂ）薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［項目２７９］ 治療を必要とする対象におけるがんの治療方法であって、（ａ）項目２６６～２７６のいずれか１項に記載の方法に従って作製される改変Ｔ細胞と、（ｂ）薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［項目２８０］ 前記改変型Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞である、項目２７７～２７９のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８１］ 有効量の未改変の対照Ｔ細胞を投与した対象と比較して、前記対象において放出されるサイトカインが少ない、項目２７７～２８０のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８２］ 項目１～２４４のいずれか１項に記載の組換え核酸又は項目２４５～２４９のいずれか１項に記載のベクターを含む有効量の改変Ｔ細胞を投与した対象と比較して、前記対象において放出されるサイトカインが少ない、項目２７７～２８１のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８３］ 前記方法が、前記医薬組成物の有効性を増加させる薬剤と組み合わせて前記医薬組成物を投与することを含む、項目２７７～２８２のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８４］ 前記方法が、前記医薬組成物に付随する１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて前記医薬組成物を投与することを含む、項目２７７～２８３のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８５］ 前記がんが固形癌、リンパ腫、又は白血病である、項目２７７～２８４のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８６］ 前記がんが、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、子宮頸癌、脳癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、及び胃癌からなる群から選択される、項目２７７～２８５のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８７］ 項目１～２４４に記載のＴＦＰを発現する有効量の自己Ｔ細胞を投与した対象と比較して、前記対象において放出されるサイトカインが少ない、項目２７７～２８６のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８８］ 前記方法が、移植片対宿主病を誘発しない、項目２７７～２８７のいずれか１項に記載の方法。
［項目２８９］ 項目１～２４４に記載のＴＦＰを発現する有効量の自己Ｔ細胞を投与した対象と比較して、前記対象が移植片対宿主病を発症するリスクが低減される、項目２７７～２８８のいずれか１項に記載の方法。
［項目２９０］ 医薬品として又は医薬品の調製に使用するための、項目１～２４４のいずれか１項に記載の組換え核酸、項目２４５～２４９のいずれか１項に記載のベクター、項目２５０～２６４のいずれか１項に記載の改変Ｔ細胞、又は項目２６５に記載の医薬組成物。 [0047] In another aspect, the present disclosure provides for use as a medicament or in the preparation of a medicament.
Recombinant nucleic acids, vectors, modified T cells, or pharmaceutical compositions are provided.
Inclusion by reference
[0048] All publications, patents, and patent applications mentioned herein are mentioned as if each individual publication, patent, or patent application was specifically and individually incorporated by reference herein. , incorporated herein by reference.
This application includes the following inventions.
[Item 1] (a) A sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) At least a portion of the TCR extracellular domain, and
(2) Transmembrane domain
TCR subunits containing
(ii) an antibody containing an antigen-binding domain;
said array comprising;
(b) a sequence encoding a TCR constant domain, the TCR constant domain comprising the above sequence which is a TCRγ constant domain or a TCRδ constant domain, or a sequence encoding a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain;
the TCR subunit and the antibody are operably linked;
and
A recombinant nucleic acid which, when expressed in an engineered T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
[Item 2] (a) A sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) at least a portion of the TCR extracellular domain;
(2) Transmembrane domain
TCR subunits containing
(ii) a binding ligand or fragment thereof capable of binding to the antibody or fragment thereof;
said array comprising;
(b) a sequence encoding a TCR constant domain, the TCR constant domain comprising the above sequence which is a TCRγ constant domain or a TCRδ constant domain, or a sequence encoding a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain;
the TCR subunit and the binding ligand or fragment thereof are operably linked, and
A recombinant nucleic acid which, when expressed in an engineered T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
[Item 3] The item wherein the TCR subunit further comprises an intracellular domain comprising an intracellular domain of TCRα, TCRβ, TCRγ, or TCRδ, or a stimulatory domain from an intracellular signaling domain of CD3ε, CD3γ, or CD3δ. 1 or the recombinant nucleic acid according to item 2.
[Item 4] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 3, wherein the TCR constant domain is a TCRδ constant domain.
[Item 5] The TCRδ constant domain comprises SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 243, or SEQ ID NO: 265, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but no more than 20 modifications. Recombinant nucleic acid according to item 4.
[Item 6] The recombinant nucleic acid according to any one of items 3 to 5, wherein the intracellular domain is an intracellular domain of TCRγ.
[Item 7] Items 3 to 3, wherein the sequence encoding the TCRδ constant domain further encodes a second antigen-binding domain or a ligand-binding domain that is operably linked to the sequence encoding the TCRδ constant domain. 5. The recombinant nucleic acid according to any one of 5.
[Item 8] The recombinant nucleic acid according to item 7, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is the same as or different from the antigen-binding domain or the ligand-binding domain of the TFP.
[Item 9] The recombinant nucleic acid according to item 7, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is operably linked to the sequence encoding the TCRδ constant domain via a linker.
[Item 10] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 3, wherein the TCR constant domain is a TCRγ constant domain.
[Item 11] The recombinant nucleic acid according to item 10, wherein the TCRγ constant domain comprises SEQ ID NO: 21 or SEQ ID NO: 155, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof with at least one but no more than 20 modifications.
[Item 12] The recombinant nucleic acid according to item 10 or 11, wherein the intracellular domain is an intracellular domain of TCRδ.
[Item 13] Items 8 to 8, wherein the sequence encoding the TCRγ constant domain further encodes a second antigen-binding domain or a ligand-binding domain that is operably linked to the sequence encoding the TCRγ constant domain. 12. The recombinant nucleic acid according to any one of 12.
[Item 14] The recombinant nucleic acid according to item 13, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is the same as or different from the antigen-binding domain or the ligand-binding domain of the TFP.
[Item 15] The recombinant nucleic acid according to item 13, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is operably linked to the sequence encoding the TCRγ constant domain via a linker.
[Item 16] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 3, wherein the recombinant nucleic acid comprises a sequence encoding a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain.
[Item 17] The recombinant nucleic acid according to item 16, wherein the TCRγ constant domain comprises SEQ ID NO: 21 or SEQ ID NO: 155, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof with at least one but no more than 20 modifications.
[Item 18] The recombinant nucleic acid according to item 16 or 17, wherein the sequence encoding the TCRγ constant domain further encodes a TCRγ variable domain, and thus encodes the entire TCRγ domain.
[Item 19] The recombinant nucleic acid according to item 18, wherein the entire TCRγ domain is γ9 or γ4.
[Item 20] The recombinant nucleic acid according to item 18 or 19, wherein the entire TCRγ domain comprises SEQ ID NO: 255, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof with at least one but no more than 20 modifications.
[Item 21] The TCRδ constant domain comprises SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 243, or SEQ ID NO: 265, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but no more than 20 modifications. The recombinant nucleic acid according to any one of items 16 to 20.
[Item 22] The recombinant nucleic acid according to any one of items 16 to 21, wherein the sequence encoding the TCRδ constant domain further encodes a TCRδ variable domain, and thus encodes the entire TCRδ domain.
[Item 23] The recombinant nucleic acid according to item 22, wherein the entire TCR δ domain is δ2 or δ1.
[Item 24] The recombinant nucleic acid according to item 22 or 23, wherein the entire TCRδ constant domain comprises SEQ ID NO: 256, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof with at least one but no more than 20 modifications.
[Item 25] The recombinant nucleic acid according to any one of items 16 to 24, wherein the intracellular signal transduction domain is CD3ε, CD3γ, or CD3δ.
[Item 26] The recombinant nucleic acid according to any one of items 16 to 25, wherein the intracellular signal transduction domain is CD3ε.
[Item 27] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 26, further comprising at least one leader sequence and at least one linker.
[Item 28] The recombinant nucleic acid according to item 27, further comprising a part of the TCRα constant domain, a part of the TCRβ domain, or both.
[Item 29] The sequence includes, in the 5' to 3' direction, a first leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker, a TRDC gene sequence, a cleavable linker sequence, a second leader sequence, and a TRGC gene sequence. The recombinant nucleic acid according to item 1, comprising:
[Item 30] The sequence includes, in the 5'-3' direction, a first leader sequence, a TRDC gene sequence, a cleavable linker sequence, a second leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker sequence, and a TRGC gene sequence. The recombinant nucleic acid according to item 1, comprising:
[Item 31] The sequence includes, in the 5'-3' direction, a first leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a first linker sequence, a TRDC gene sequence, a cleavable linker, a second leader sequence, a second The recombinant nucleic acid according to item 1, comprising an antigen-binding domain sequence of , a second linker sequence, and a TRGC gene sequence.
[Item 32] The sequences include, in the 5'-3' direction, a first leader sequence, a TRDC gene sequence, a first cleavable linker sequence, a second leader sequence, a TRGC gene sequence, a second cleavable linker sequence. The recombinant nucleic acid according to item 1, comprising a linker sequence, a third leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker sequence, and a CD3ε gene sequence.
[Item 33] The sequence includes, in the 5′-3′ direction, a first leader sequence, a first antigen-binding domain sequence, a first linker sequence, a TRDC gene sequence or a fragment thereof, a TRAC gene sequence or a fragment thereof, The recombinant according to item 1, comprising a cleavable linker sequence, a second leader sequence, a second antigen-binding domain sequence, a second linker sequence, a TRGC gene sequence or a fragment thereof, and a TRBC gene sequence or a fragment thereof. Nucleic acid.
[Item 34] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 1.
[Item 35] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 2.
[Item 36] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 3.
[Item 37] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 4.
[Item 38] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 5.
[Item 39] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 242.
[Item 40] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 244.
[Item 41] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 245.
[Item 42] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 246.
[Item 43] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 248.
[Item 44] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 250.
[Item 45] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 252.
[Item 46] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 257.
[Item 47] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 263.
[Item 48] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 33, wherein the sequence encodes the sequence of SEQ ID NO: 264.
[Item 49] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the binding ligand is capable of binding to the Fc domain of the antibody.
[Item 50] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the binding ligand is capable of selectively binding an IgG1 antibody.
[Item 51] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the binding ligand can specifically bind to an IgG4 antibody.
[Item 52] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the antibody or fragment thereof binds to a cell surface antigen.
[Item 53] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the antibody or fragment thereof is mouse, human, or humanized.
[Item 54] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the antibody or fragment thereof binds to a cell surface antigen on the surface of a tumor cell.
[Item 55] The binding ligand is a monomer, dimer, trimer, tetramer, pentamer, hexamer, heptamer, octamer, nonamer, or decamer. The recombinant nucleic acid according to item 1, comprising:
[Item 56] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the binding ligand does not include an antibody or a fragment thereof.
[Item 57] The recombinant nucleic acid according to item 56, wherein the binding ligand comprises a CD16-binding polypeptide or a fragment thereof.
[Item 58] The recombinant nucleic acid according to item 56, wherein the binding ligand comprises a CD16 binding polypeptide.
[Item 59] The recombinant nucleic acid according to item 1, wherein the binding ligand is human or humanized.
[Item 60] The recombinant nucleic acid according to item 1, further comprising a nucleic acid sequence encoding an antibody or a fragment thereof to which the binding ligand can bind.
[Item 61] The recombinant nucleic acid according to item 60, wherein the antibody or fragment thereof can be secreted from cells.
[Item 62] (a) A sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) At least a portion of the TCR extracellular domain, and
(2) Transmembrane domain
TCR subunits containing
(ii) an antigen-binding domain comprising a ligand or a fragment thereof that binds to a receptor or polypeptide expressed on the surface of a cell;
said array comprising;
(b) a sequence encoding a TCR constant domain, the TCR constant domain comprising the above sequence which is a TCRγ constant domain or a TCRδ constant domain, or a sequence encoding a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain;
the TCR subunit and the antigen binding domain are operably linked;
and
A recombinant nucleic acid which, when expressed in an engineered T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
[Item 63] The TCR subunit further comprises an intracellular domain comprising an intracellular domain of TCRα, TCRβ, TCRγ, or TCRδ, or a stimulatory domain from an intracellular signaling domain of CD3ε, CD3γ, or CD3δ. 62. The recombinant nucleic acid according to 62.
[Item 64] According to any one of items 1 to 63, further comprising at least a partial sequence encoding a TCRα constant domain, a partial sequence encoding a TCRβ constant domain, or a partial sequence of both a TCRα constant domain and a TCRβ constant domain. recombinant nucleic acids.
[Item 65] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the antigen-binding domain comprises a ligand.
[Item 66] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the ligand binds to a cellular receptor.
[Item 67] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the ligand binds to the polypeptide expressed on the surface of a cell.
[Item 68] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the receptor or polypeptide expressed on the surface of cells comprises a stress response receptor or polypeptide.
[Item 69] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the receptor or polypeptide expressed on the surface of cells is an MHC class I-related glycoprotein.
[Item 70] The recombinant nucleic acid according to item 69, wherein the MHC class I-related glycoprotein is selected from the group consisting of MICA, MICB, RAET1E, RAET1G, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, and combinations thereof.
[Item 71] The antigen-binding domain is a monomer, dimer, trimer, tetramer, pentamer, hexamer, heptamer, octamer, nonamer, or decamer. 63. The recombinant nucleic acid according to item 62, comprising:
[Item 72] The recombinant nucleic acid according to item 71, wherein the antigen-binding domain comprises a monomer or dimer of the ligand or a fragment thereof.
[Item 73] The ligand or fragment thereof is a monomer, dimer, trimer, tetramer, pentamer, hexamer, heptamer, octamer, nonamer, or decamer. 63. The recombinant nucleic acid according to item 62, comprising:
[Item 74] The recombinant nucleic acid according to item 73, wherein the ligand or fragment thereof is a monomer or a dimer.
[Item 75] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the antigen-binding domain does not include an antibody or a fragment thereof.
[Item 76] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the antigen-binding domain does not include a variable region.
[Item 77] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the antigen-binding domain does not contain CDRs.
[Item 78] The recombinant nucleic acid according to item 62, wherein the ligand or fragment thereof is a natural killer group 2D (NKG2D) ligand or a fragment thereof.
[Item 79] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 78, wherein the TCR constant domain is incorporated into a functional TCR complex when expressed in a T cell.
[Item 80] The recombinant according to any one of items 1 to 79, wherein the TCR constant domain is incorporated into the same functional TCR complex that incorporates the TFP when expressed in a T cell. Nucleic acid.
[Item 81] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 80, wherein the sequence encoding the TFP and the sequence encoding the TCR constant domain(s) are contained within the same nucleic acid molecule. .
[Item 82] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 81, wherein the encoded TFP and the encoded TCR constant domain are operably linked by a first linker sequence.
[Item 83] The recombinant nucleic acid according to item 82, wherein the first linker includes a protease cleavage site.
[Item 84] The recombinant nucleic acid according to item 83, wherein the protease cleavage site is a 2A, eg, T2A or P2A cleavage site.
[Item 85] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 84, wherein the TFP-encoding sequence and the TCR constant domain-encoding sequence are contained in different nucleic acid molecules.
[Item 86] The TCR subunit of the TFP and the antibody domain, the antigen-binding domain, or the binding ligand, or a fragment thereof are operably linked by a second linker sequence. 1-85.
[Item 87] The second linker sequence is (G 4 S) n (wherein n=1-4).
[Item 88] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 87, wherein the transmembrane domain is a TCR transmembrane domain from CD3ε, CD3γ, CD3δ, TCRα, TCRβ, TCRδ, or TCRγ.
[Item 89] The recombinant according to any one of items 3 to 61 and 63 to 88, wherein the intracellular domain is derived from only CD3ε, only CD3γ, only CD3δ, only TCRα, TCRβ, TCRγ, or TCRδ. Nucleic acid.
[Item 90] The TCR subunit includes (i) at least a portion of a TCR extracellular domain, (ii) a TCR transmembrane domain, and (iii) a TCR intracellular domain, (i), (ii), and Recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 89, wherein at least two of (iii) are derived from the same TCR subunit.
[Item 91] The TCR extracellular domain comprises a TCRγ chain, a TCRδ chain, a CD3εTCR subunit, a CD3γTCR subunit, a CD3δTCR subunit, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but not more than 20 modifications. 91. The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 90, comprising an extracellular domain of a protein or a part thereof selected from the group consisting of:
[Item 92] Item 91, wherein the TCR subunit comprises (i) at least a portion of a TCR extracellular domain, (ii) a TCR transmembrane domain, and (iii) a TCR intracellular domain of a TCR γ chain or a TCR δ chain. Recombinant nucleic acid described in.
[Item 93] According to item 92, the TCR extracellular domain comprises an extracellular portion of a constant domain of a TCR γ chain or a TCR δ chain, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but not more than 20 modifications. recombinant nucleic acids.
[Item 94] Whether the TCR subunit includes (i) at least a portion of a TCR extracellular domain, (ii) a TCR transmembrane domain, and (iii) a TCR intracellular domain, and is a δ constant domain or a fragment thereof. , or the recombinant nucleic acid according to item 92 or 93, comprising the same.
[Item 95] The δ constant domain has SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 243, or SEQ ID NO: 265, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof with at least one but no more than 20 modifications. Recombinant nucleic acid according to item 94.
[Item 96] The TCR subunit comprising (i) at least a portion of a TCR extracellular domain, (ii) a TCR transmembrane domain, and (iii) a TCR intracellular domain is or is a gamma constant domain. 94. The recombinant nucleic acid according to item 92 or 93, comprising:
[Item 97] The recombinant according to item 96, wherein the γ constant domain has the sequence of SEQ ID NO: 21 or SEQ ID NO: 155, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof with at least one but not more than 20 modifications. Nucleic acid.
[Item 98] The recombinant nucleic acid according to any one of items 94 to 97, wherein the extracellular domain of TFP does not include a γ chain or δ chain variable domain.
[Item 99] A TCR intracellular domain in which the TCR subunit comprises a stimulatory domain of a protein selected from the intracellular signaling domains of CD3ε, CD3γ, or CD3δ, or an amino acid sequence having at least one modification thereto. The recombinant nucleic acid according to any one of items 3-61 and 63-88, comprising:
[Item 100] The recombinant nucleic acid according to item 99, wherein the TCR subunit of TFP comprises the extracellular, transmembrane, and intracellular domains of CD3ε.
[Item 101] The recombinant nucleic acid according to item 100, wherein the TCR subunit of CD3ε comprises SEQ ID NO: 258, a sequence of a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but not more than 20 modifications.
[Item 102] The TFP, the TCRγ constant domain, the TCRδ constant domain, and any combination thereof are capable of functionally interacting with an endogenous TCR complex and/or at least one endogenous TCR polypeptide. The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 101.
[Item 103] (a) The TCR constant domain is a TCRγ constant domain, and the TFP is functionally integrated into a TCR complex comprising endogenous subunits of TCRδ, CD3ε, CD3γ, CD3δ, or a combination thereof. mosquito;
(b) said TCR constant domain is a TCRδ constant domain, and said TFP is functionally integrated into a TCR complex comprising endogenous subunits of TCRγ, CD3ε, CD3γ, CD3δ, or a combination thereof; or
(c) the TCR constant domain is a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain, and the TFP is functionally integrated into a TCR complex comprising endogenous subunits of CD3ε, CD3γ, CD3δ, or a combination thereof; The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 102.
[Item 104] Items 1 to 103, wherein the at least one but not more than 20 modifications include modifications of amino acids that mediate cell signal transduction or modifications of amino acids that are phosphorylated in response to ligand binding to the TFP. The recombinant nucleic acid according to any one of the above.
[Item 105] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1, 3 to 61, and 85 to 104, wherein the antibody is an antibody fragment.
[Item 106] The antibody fragment is an scFv, a single domain antibody domain, a V H domain or V L The recombinant nucleic acid according to item 105, which is a domain.
[Item 107] The antigen binding domain is an anti-CD19 binding domain, an anti-B cell maturation antigen (BCMA) binding domain, an anti-mesothelin (MSLN) binding domain, an anti-CD20 binding domain, an anti-CD70 binding domain, an anti-79b binding domain, an anti-HER2 binding domain binding domain, anti-PMSA binding domain, anti-MUC16 binding domain, anti-CD22 binding domain, anti-PD-L1 binding domain, anti-BAFF or BAFF receptor binding domain, anti-nectin-4 binding domain, anti-TROP-2 binding domain, anti-GPC3 The recombinant nucleic acid according to any one of items 1, 3-61, and 85-106, selected from the group consisting of a binding domain, and an anti-ROR-1 binding domain.
[Item 108] The recombinant nucleic acid according to item 107, wherein the anti-MSLN binding domain comprises CDR1 of SEQ ID NO: 60, CDR2 of SEQ ID NO: 61, and CDR3 of SEQ ID NO: 62.
[Item 109] The recombinant nucleic acid according to item 107, wherein the anti-MSLN binding domain comprises CDR1 of SEQ ID NO: 63, CDR2 of SEQ ID NO: 64, and CDR3 of SEQ ID NO: 65.
[Item 110] The recombinant nucleic acid according to item 107, wherein the anti-MSLN binding domain comprises CDR1 of SEQ ID NO: 66, CDR2 of SEQ ID NO: 67, and CDR3 of SEQ ID NO: 68.
[Item 111] The recombinant nucleic acid of item 107, wherein the anti-MSLN binding domain comprises a sequence having at least about 80% sequence identity to the sequence SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, or SEQ ID NO: 71. .
[Item 112] The recombinant nucleic acid according to item 107, wherein the anti-CD19 binding domain comprises light chain CDR1 of SEQ ID NO: 73, CDR2 of SEQ ID NO: 75, and CDR3 of SEQ ID NO: 77.
[Item 113] The recombinant nucleic acid according to item 107, wherein the anti-CD19 binding domain comprises heavy chain CDR1 of SEQ ID NO: 79, CDR2 of SEQ ID NO: 81, and CDR3 of SEQ ID NO: 83.
[Item 114] The anti-CD19 binding domain has a light chain variable region that has at least about 80% sequence identity to the sequence SEQ ID NO: 85 and/or has at least about 80% sequence identity to the sequence SEQ ID NO: 87. 108. The recombinant nucleic acid of item 107, comprising heavy chain variable regions having sequence identity.
[Item 115] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 114, further comprising a sequence encoding a TCRα transmembrane domain.
[Item 116] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 114, further comprising a sequence encoding a TCRβ transmembrane domain.
[Item 117] The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 114, further comprising a sequence encoding a TCRα transmembrane domain and a sequence encoding a TCRβ transmembrane domain.
[Item 118] (a) A sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) at least a part of the extracellular domain of mouse TCRα or mouse TCRβ, and
(2) Transmembrane domain of mouse TCRα or mouse TCRβ
TCR subunits containing
(ii) an antibody or a fragment thereof containing an antigen-binding domain;
said array comprising;
(b) a sequence encoding a TCR constant domain(s), wherein said TCR constant domain is a mouse TCRα constant domain, a mouse TCRβ constant domain, or a mouse TCRα constant domain and a mouse TCRβ constant domain; and a coding sequence;
the TCR subunit and the antibody are operably linked;
and
A recombinant nucleic acid which, when expressed in an engineered T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
[Item 119] (a) A sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) at least a part of the extracellular domain of mouse TCRα or mouse TCRβ, and
(2) Transmembrane domain of mouse TCRα or mouse TCRβ
TCR subunits containing
(ii) a binding ligand or fragment thereof capable of binding to the antibody or fragment thereof;
said array comprising;
(b) a sequence encoding a TCR constant domain(s), wherein said TCR constant domain is a mouse TCRα constant domain, a mouse TCRβ constant domain, or a mouse TCRα constant domain and a mouse TCRβ constant domain; and a coding sequence;
the TCR subunit and the binding ligand or fragment thereof are operably linked;
and
A recombinant nucleic acid which, when expressed in an engineered T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
[Item 120] The recombinant nucleic acid according to item 118 or 119, wherein the TCR subunit comprises an intracellular domain of mouse TCRα or mouse TCRβ.
[Item 121] The recombinant nucleic acid according to any one of Item 118 or 120, wherein the TCR constant domain is a TCRα constant domain.
[Item 122] The TCRα constant domain is SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 146, or SEQ ID NO: 207, a functional fragment thereof, or an amino acid thereof having at least one but not more than 20 modifications. 122. A recombinant nucleic acid according to item 121, comprising the sequence.
[Item 123] The recombinant nucleic acid according to item 121, wherein the TCRα constant domain comprises a mouse TCRα constant domain.
[Item 124] The recombinant nucleic acid according to item 123, wherein the mouse TCRα constant domain comprises amino acids 2 to 137 of the mouse TCRα constant domain.
[Item 125] The recombinant nucleic acid according to item 124, wherein the mouse TCRα constant domain comprises amino acids 2 to 137 of SEQ ID NO: 146.
[Item 126] The recombinant nucleic acid according to item 124, wherein the mouse TCRα constant domain comprises the sequence of SEQ ID NO: 207.
[Item 127] The recombinant nucleic acid according to item 123, wherein the mouse TCRα constant domain comprises amino acids 82-137 of SEQ ID NO: 146.
[Item 128] The recombinant nucleic acid according to item 127, wherein the mouse TCRα constant domain comprises the sequence of SEQ ID NO: 17.
[Item 129] The recombinant nucleic acid according to any one of items 122 to 128, wherein the intracellular domain is an intracellular domain of TCRβ.
[Item 130] Items 121 to 121, wherein the sequence encoding the TCRα constant domain further encodes a second antigen binding domain or a ligand binding domain that is operably linked to the sequence encoding the TCRα constant domain. 129. The recombinant nucleic acid according to any one of 129.
[Item 131] The recombinant nucleic acid according to item 130, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is the same as or different from the antigen-binding domain or the ligand-binding domain of the TFP.
[Item 132] The recombinant nucleic acid according to item 130, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is operably linked to the sequence encoding the TCRα constant domain via a linker.
[Item 133] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 120, wherein the TCR constant domain is a TCRβ constant domain.
[Item 134] The TCRβ constant domain is SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 152, or SEQ ID NO: 209, a functional fragment thereof, or an amino acid thereof having at least one but not more than 20 modifications. 134. A recombinant nucleic acid according to item 133, comprising the sequence.
[Item 135] The recombinant nucleic acid according to item 134, wherein the TCRβ constant domain comprises a mouse TCRβ constant domain.
[Item 136] The recombinant nucleic acid according to item 134, wherein the mouse TCRβ constant domain comprises amino acids 2 to 173 of the mouse TCRβ constant domain.
[Item 137] The recombinant nucleic acid according to item 134, wherein the mouse TCRβ constant domain comprises amino acids 2 to 173 of SEQ ID NO: 152.
[Item 138] The recombinant nucleic acid according to item 134, wherein the mouse TCRβ constant domain comprises SEQ ID NO: 209.
[Item 139] The recombinant nucleic acid according to item 134, wherein the TCRβ constant domain comprises amino acids 123-173 of SEQ ID NO: 152.
[Item 140] The recombinant nucleic acid according to item 134, wherein the TCRβ constant domain comprises SEQ ID NO: 18.
[Item 141] The recombinant nucleic acid according to any one of items 133 to 140, wherein the intracellular domain is an intracellular domain of TCRα.
[Item 142] Items 118 to 142, wherein said sequence encoding said TCRβ constant domain further encodes a second antigen binding domain or ligand binding domain operably linked to said sequence encoding said TCRβ constant domain. 142. The recombinant nucleic acid according to any one of 141.
[Item 143] The recombinant nucleic acid according to item 142, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is the same as or different from the antigen-binding domain or the ligand-binding domain of the TFP.
[Item 144] The recombinant nucleic acid according to item 142, wherein the second antigen-binding domain or the ligand-binding domain is operably linked to the sequence encoding the TCRβ constant domain via a linker.
[Item 145] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 120, wherein the recombinant nucleic acid comprises sequences encoding a TCRα constant domain and a TCRβ constant domain.
[Item 146] The TCRα constant domain is SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 146, or SEQ ID NO: 207, a functional fragment thereof, or an amino acid thereof having at least one but not more than 20 modifications. 146. A recombinant nucleic acid according to item 145, comprising the sequence.
[Item 147] The TCRβ constant domain is SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 152, or SEQ ID NO: 209, a functional fragment thereof, or an amino acid thereof having at least one but not more than 20 modifications. 147. A recombinant nucleic acid according to item 145 or 146, comprising the sequence.
[Item 148] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 147, wherein the intracellular signaling domain is CD3ε, CD3γ, or CD3δ.
[Item 149] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 147, wherein the intracellular signaling domain is CD3ε.
[Item 150] The sequence includes, in a 5' to 3' direction, a first leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker, a TRAC gene sequence, a cleavable linker sequence, a second leader sequence, and a TRBC gene sequence. 146. The recombinant nucleic acid according to item 145, comprising:
[Item 151] The sequence includes, in the 5' to 3' direction, a first leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker, a TRAC gene sequence, a cleavable linker sequence, a second leader sequence, and a TRBC gene sequence. 146. The recombinant nucleic acid according to item 145, comprising:
[Item 152] The sequence includes, in the 5' to 3' direction, a first leader sequence, a TRAC gene sequence, a cleavable linker sequence, a second leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker, and a TRBC gene sequence. 146. The recombinant nucleic acid according to item 145, comprising:
[Item 153] The sequence includes, in the 5' to 3' direction, a first leader sequence, an antigen-binding domain sequence, a linker, a TRAC gene sequence, a cleavable linker sequence, a second leader sequence, an antigen-binding domain sequence, 146. The recombinant nucleic acid of item 145, comprising a linker and a TRBC gene sequence.
[Item 154] The sequences include, in the 5'-3' direction, a first leader sequence, a TRAC gene sequence, a first cleavable linker sequence, a second leader sequence, a TRBC gene sequence, a second cleavable linker sequence. 146. The recombinant nucleic acid of item 145, comprising a linker sequence, a third leader sequence, an antigen binding domain sequence, a linker sequence, and a CD3ε gene sequence.
[Item 155] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 10.
[Item 156] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 204.
[Item 157] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 206.
[Item 158] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 210.
[Item 159] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 211.
[Item 160] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 217.
[Item 161] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 218.
[Item 162] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 219.
[Item 163] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 220.
[Item 164] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 259.
[Item 165] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 261.
[Item 166] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 154, wherein the sequence encodes the polypeptide shown in SEQ ID NO: 262.
[Item 167] The recombinant nucleic acid according to any one of items 115 to 166, further comprising at least one leader sequence and at least one linker.
[Item 168] The recombinant nucleic acid according to any one of items 119-167, wherein the binding ligand is capable of binding to the Fc domain of the antibody.
[Item 169] The recombinant nucleic acid according to any one of items 119 to 167, wherein the binding ligand is capable of selectively binding an IgG1 antibody.
[Item 170] The recombinant nucleic acid according to any one of items 119 to 167, wherein the binding ligand is capable of specifically binding to an IgG4 antibody.
[Item 171] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 and 120 to 170, wherein the antibody or fragment thereof binds to a cell surface antigen.
[Item 172] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 and 120 to 170, wherein the antibody or fragment thereof is mouse, human, or humanized.
[Item 173] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 and 120-170, wherein the antibody or fragment thereof binds to a cell surface antigen on the surface of a tumor cell.
[Item 174] The binding ligand is a monomer, a dimer, a trimer, a tetramer, a pentamer, a hexamer, a heptamer, an octamer, a nonamer, or a decamer. The recombinant nucleic acid according to any one of items 119 to 167, comprising:
[Item 175] The recombinant nucleic acid according to any one of items 119 to 167, wherein the binding ligand does not include an antibody or a fragment thereof.
[Item 176] The recombinant nucleic acid according to item 175, wherein the binding ligand comprises a CD16 binding polypeptide or a fragment thereof.
[Item 177] The recombinant nucleic acid of item 175, wherein the binding ligand comprises a CD16 binding polypeptide.
[Item 178] The recombinant nucleic acid according to any one of items 119 to 167, wherein the binding ligand is human or humanized.
[Item 179] The recombinant nucleic acid according to any one of items 119 to 167, further comprising a nucleic acid sequence encoding an antibody or fragment thereof to which the binding ligand can bind.
[Item 180] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 and 120-170, wherein the antibody or fragment thereof can be secreted from a cell.
[Item 181] (a) A sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) at least a part of the extracellular domain of mouse TCRα or mouse TCRβ, and
(2) Transmembrane domain of mouse TCRα or mouse TCRβ
TCR subunits containing
(ii) an antigen-binding domain comprising a ligand or a fragment thereof that binds to a receptor or polypeptide expressed on the surface of a cell;
said array comprising;
(b) a sequence encoding a TCR constant domain, wherein the TCR constant domain is a mouse TCRα constant domain or a mouse TCRβ constant domain, or a sequence encoding a mouse TCRα constant domain and a mouse TCRβ constant domain; including;
the TCR subunit and the antigen binding domain are operably linked;
and
A recombinant nucleic acid which, when expressed in an engineered T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
[Item 182] The recombinant nucleic acid according to item 181, wherein the TCR subunit comprises an intracellular domain of mouse TCRα or mouse TCRβ.
[Item 183] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 182, wherein the extracellular domain comprises an extracellular portion of a TCRα constant domain or a TCRβ constant domain, or a fragment thereof.
[Item 184] According to any one of items 118 to 183, further comprising at least a partial sequence encoding a TCRγ constant domain, a partial sequence encoding a TCRδ constant domain, or a partial sequence of both a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain. recombinant nucleic acids.
[Item 185] The recombinant nucleic acid according to any one of items 181 to 184, wherein the antigen-binding domain comprises a ligand.
[Item 186] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the ligand binds to a cellular receptor.
[Item 187] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the ligand binds to the polypeptide expressed on the surface of a cell.
[Item 188] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the receptor or polypeptide expressed on the surface of cells comprises a stress response receptor or polypeptide.
[Item 189] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the receptor or polypeptide expressed on the surface of cells is an MHC class I-related glycoprotein.
[Item 190] The recombinant nucleic acid of item 189, wherein the MHC class I-related glycoprotein is selected from the group consisting of MICA, MICB, RAET1E, RAET1G, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, and combinations thereof.
[Item 191] The antigen-binding domain is a monomer, dimer, trimer, tetramer, pentamer, hexamer, heptamer, octamer, nonamer, or decamer. 186. The recombinant nucleic acid according to item 185, comprising:
[Item 192] The recombinant nucleic acid according to item 191, wherein the antigen-binding domain comprises a monomer or dimer of the ligand or a fragment thereof.
[Item 193] The ligand or fragment thereof is a monomer, a dimer, a trimer, a tetramer, a pentamer, a hexamer, a heptamer, an octamer, a nonamer, or a decamer. 186. The recombinant nucleic acid according to item 185, comprising:
[Item 194] The recombinant nucleic acid according to item 193, wherein the ligand or fragment thereof is a monomer or a dimer.
[Item 195] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the antigen-binding domain does not include an antibody or a fragment thereof.
[Item 196] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the antigen-binding domain does not include a variable region.
[Item 197] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the antigen-binding domain does not contain CDRs.
[Item 198] The recombinant nucleic acid according to item 185, wherein the ligand or fragment thereof is a natural killer group 2D (NKG2D) ligand or a fragment thereof.
[Item 199] The recombinant nucleic acid of any one of items 118-198, wherein when expressed in a T cell, the TCR constant domain is incorporated into a functional TCR complex.
[Item 200] The recombinant nucleic acid of any one of item 199, wherein the TCR constant domain is incorporated into the same functional TCR complex that incorporates the TFP when expressed in a T cell.
[Item 201] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 200, wherein the sequence encoding the TFP and the sequence encoding the TCR constant domain(s) are contained within the same nucleic acid molecule. .
[Item 202] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 200, wherein the TFP and the TCR constant domain are operably linked by a first linker sequence.
[Item 203] The recombinant nucleic acid molecule according to item 202, wherein the first linker includes a protease cleavage site.
[Item 204] The recombinant nucleic acid molecule according to item 203, wherein the protease cleavage site is a 2A, eg, T2A or P2A cleavage site.
[Item 205] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 200, wherein the TFP-encoding sequence and the TCR constant domain(s)-encoding sequence are contained within different nucleic acid molecules. .
[Item 206] The TCR subunit of the TFP and the antibody domain, the antigen-binding domain, or the binding ligand, or a fragment thereof are operably linked by a second linker sequence. The recombinant nucleic acid according to any one of 118 to 205.
[Item 207] The second linker sequence is (G 4 S) n (wherein n=1-4).
[Item 208] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 207, wherein the transmembrane domain is a TCR transmembrane domain from TCRα or TCRβ, for example from mouse TCRα or TCRβ.
[Item 209] The TCR subunit of items 118 to 207, wherein the TCR subunit comprises (i) at least a portion of a TCR extracellular domain, (ii) a TCR transmembrane domain, and (iii) a TCR intracellular domain of TCRα or TCRβ. The recombinant nucleic acid according to any one of the above.
[Item 210] The TCR extracellular domain is the extracellular portion of the constant domain of the TCRα chain or TCRβ chain, such as a mouse TCRα chain or TCRβ chain, a functional fragment thereof, or a functional fragment thereof having at least one but not more than 20 modifications. Recombinant nucleic acid according to any one of items 118-207, comprising an amino acid sequence.
[Item 211] The TCR subunit comprises the transmembrane domain of a TCRα or TCRβ chain, such as a mouse TCRα or TCRβ chain, a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but no more than 20 modifications. , a transmembrane domain.
[Item 212] The TCR subunit of items 118 to 207, wherein the TCR subunit comprises the TCR intracellular domain of a TCR α chain or TCR β chain, such as a mouse TCR α chain or TCR β chain, or an amino acid sequence having at least one modification thereto. The recombinant nucleic acid according to any one of the above.
[Item 213] The TCR subunit comprises (i) at least a portion of a TCR extracellular domain, (ii) a TCR transmembrane domain, and (iii) a TCR intracellular domain, and is or is an α constant domain. The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 207, comprising:
[Item 214] The α constant domain has the sequence SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 146, or SEQ ID NO: 207, a functional fragment thereof, or at least one but not more than 20 modifications. Recombinant nucleic acid according to item 213, comprising its amino acid sequence, eg amino acids 2-137 of SEQ ID NO: 146.
[Item 215] The encoded TCR comprising (i) at least a portion of the TCR extracellular domain, (ii) the TCR transmembrane domain, and (iii) the TCR intracellular domain is or is a β-constant domain. The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 to 207, comprising:
[Item 216] The β constant domain has the sequence SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 152, or SEQ ID NO: 209, a functional fragment thereof, or at least one but not more than 20 modifications. Recombinant nucleic acid according to item 215, comprising its amino acid sequence, eg amino acids 2-173 of SEQ ID NO: 152.
[Item 217] The recombinant nucleic acid according to item 215 or 216, wherein the extracellular domain of the TCR subunit does not include an α chain or a β chain variable domain.
[Item 218] A TCR intracellular domain in which the TCR subunit comprises a stimulatory domain of a protein selected from the intracellular signaling domains of CD3ε, CD3γ, or CD3δ, or an amino acid sequence having at least one modification thereto. The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 217, comprising:
[Item 219] The recombinant nucleic acid according to item 218, wherein the TCR subunit of TFP comprises the extracellular, transmembrane, and intracellular domains of CD3ε.
[Item 220] The recombinant nucleic acid according to item 218 or 219, wherein the TCR subunit of CD3ε comprises SEQ ID NO: 258, a sequence of a functional fragment thereof, or an amino acid sequence thereof having at least one but not more than 20 modifications. .
[Item 221] Item 1, wherein the TFP, the TCRα constant domain, the TCRβ domain, and any combination thereof are capable of functionally interacting with an endogenous TCR complex and/or at least one endogenous TCR polypeptide. -220.
[Item 222] (a) The TCR constant domain is a TCRα constant domain, and the TFP is functionally integrated into a TCR complex comprising endogenous subunits of CD3ε, CD3γ, CD3δ, or a combination thereof;
(b) said TCR constant domain is a TCRβ constant domain, and said TFP is functionally integrated into a TCR complex comprising endogenous subunits of CD3ε, CD3γ, CD3δ, or a combination thereof; or
(c) the TCR constant domains are TCRα constant domains and TCRβ constant domains, and the TFP is functionally integrated into a TCR complex comprising endogenous subunits of CD3ε, CD3γ, CD3δ, or a combination thereof; The recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 221.
[Item 223] Items 220 to 222, wherein the at least one but not more than 20 modifications include modifications of amino acids that mediate cell signal transduction or modifications of amino acids that are phosphorylated in response to ligand binding to the TFP. The recombinant nucleic acid according to any one of the above.
[Item 224] The recombinant nucleic acid according to any one of items 118 and 120 to 180, wherein the antibody is an antibody fragment.
[Item 225] The antibody fragment is an scFv, a single domain antibody domain, a V H domain or V L 225. The recombinant nucleic acid according to item 224, which is a domain.
[Item 226] The antigen binding domain is an anti-CD19 binding domain, anti-B cell maturation antigen (BCMA) binding domain, anti-mesothelin (MSLN) binding domain, anti-CD20 binding domain, anti-CD70 binding domain, anti-79b binding domain, anti-HER2 binding domain, anti-PMSA binding domain, anti-MUC16 binding domain, anti-CD22 binding domain, anti-PD-L1 binding domain, anti-BAFF or BAFF receptor binding domain, anti-nectin-4 binding domain, anti-TROP-2 binding domain, anti-GPC3 Recombinant nucleic acid according to any one of items 118 and 120-180, selected from the group consisting of a binding domain, and an anti-ROR-1 binding domain.
[Item 227] The recombinant nucleic acid according to item 226, wherein the anti-MSLN binding domain comprises CDR1 of SEQ ID NO: 60, CDR2 of SEQ ID NO: 61, and CDR3 of SEQ ID NO: 62.
[Item 228] The recombinant nucleic acid according to item 226, wherein the anti-MSLN binding domain comprises CDR1 of SEQ ID NO: 63, CDR2 of SEQ ID NO: 64, and CDR3 of SEQ ID NO: 65.
[Item 229] The recombinant nucleic acid according to item 226, wherein the anti-MSLN binding domain comprises CDR1 of SEQ ID NO: 66, CDR2 of SEQ ID NO: 67, and CDR3 of SEQ ID NO: 68.
[Item 230] The recombinant nucleic acid of item 226, wherein the anti-MSLN binding domain comprises a sequence having at least about 80% sequence identity to the sequence SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, or SEQ ID NO: 71. .
[Item 231] The recombinant nucleic acid according to item 226, wherein the anti-CD19 binding domain comprises light chain CDR1 of SEQ ID NO: 73, CDR2 of SEQ ID NO: 75, and CDR3 of SEQ ID NO: 77.
[Item 232] The recombinant nucleic acid according to item 226, wherein the anti-CD19 binding domain comprises heavy chain CDR1 of SEQ ID NO: 79, CDR2 of SEQ ID NO: 81, and CDR3 of SEQ ID NO: 83.
[Item 233] The anti-CD19 binding domain has a light chain variable region that has at least about 80% sequence identity to the sequence SEQ ID NO: 85 and/or has at least about 80% sequence identity to the sequence SEQ ID NO: 87. 227. A recombinant nucleic acid according to item 226, comprising a heavy chain variable region having sequence identity.
[Item 234] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, wherein the nucleic acid is selected from the group consisting of DNA and RNA.
[Item 235] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, wherein the nucleic acid is mRNA.
[Item 236] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, wherein the nucleic acid is circRNA.
[Item 237] The recombinant nucleic acid of any one of the preceding items, wherein the recombinant nucleic acid comprises a nucleic acid analog, and the nucleic acid analog is not in the coding sequence of the recombinant nucleic acid.
[Item 238] The nucleic acid analogue is 2'-O-methyl, 2'-O-methoxyethyl (2'-O-MOE), 2'-O-aminopropyl, 2'-deoxy, T-deoxy- 2'-fluoro, 2'-O-aminopropyl (2'-O-AP), 2'-O-dimethylaminoethyl (2'-O-DMAOE), 2'-O-dimethylaminopropyl (2'- O-DMAP), T-O-dimethylaminoethyloxyethyl (2'-O-DMAEOE), 2'-O-N-methylacetamide (2'-O-NMA) modification, locked nucleic acid (LNA), ethylene nucleic acid (ENA), peptide nucleic acid (PNA), 1',5'-anhydrohexitol nucleic acid (HNA), morpholino, methylphosphonate nucleotide, thiolphosphonate nucleotide, and 2'-fluoroN3-P5'-phosphoramidite. The recombinant nucleic acid according to item 237, selected from the group consisting of.
[Item 239] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, further comprising a leader sequence.
[Item 240] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, further comprising a promoter sequence.
[Item 241] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, further comprising a sequence encoding a poly(A) tail.
[Item 242] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, further comprising a 3'UTR sequence.
[Item 243] The recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items, wherein the nucleic acid is an isolated nucleic acid or a non-naturally occurring nucleic acid.
[Item 244] The recombinant nucleic acid molecule according to any one of the preceding items, wherein the nucleic acid is an in vitro transcribed nucleic acid.
[Item 245] A vector comprising the recombinant nucleic acid according to any one of the preceding items.
[Item 246] The vector is selected from the group consisting of DNA, RNA, plasmid, lentiviral vector, adenoviral vector, adeno-associated virus vector (AAV), Rous sarcoma virus (RSV) vector, or retroviral vector. Vector according to item 245.
[Item 247] The vector according to item 245 or 246, wherein the vector is an AAV6 vector.
[Item 248] The vector according to any one of items 245 to 247, further comprising a promoter.
[Item 249] The vector according to any one of items 245 to 248, wherein the vector is an in vitro transcribed vector.
[Item 250] A modified T cell comprising the recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 244 or the vector according to any one of items 245 to 249, wherein the modified T cell has an endogenous TCR. The modified T cell comprising functional disruption of.
[Item 251] The sequence encoding the TFP of the nucleic acid according to any one of items 1 to 244, or encoded by the sequence of the nucleic acid according to any one of items 1 to 244 encoding TFP. said modified T cell comprising said TFP, said modified T cell comprising functional disruption of an endogenous TCR.
[Item 252] The sequence encoding TFP according to any one of items 1 to 244, or the sequence encoded by the sequence of the nucleic acid according to any one of items 1 to 244 encoding TFP. Modified allogeneic T cells containing TFP.
[Item 253] The T cell further comprises a heterologous sequence encoding a TCR constant domain, and the TCR constant domain is a TCRγ constant domain, a TCRδ constant domain, or a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain. The modified T cell according to any one of the above.
[Item 254] The T cell further comprises a heterologous sequence encoding a TCR constant domain, and the TCR constant domain is a TCRα constant domain, a TCRβ constant domain, or a TCRα constant domain and a TCRβ constant domain. The modified T cell according to any one of the above.
[Item 255] The TCR constant domain, for example, the TCRα constant domain, the TCRβ constant domain, or the TCRα constant domain and the TCRβ constant domain, is a mouse TCRγ constant domain, for example, a mouse TCRα constant domain, a mouse TCRβ constant domain, or the modified T cell according to item 254, which is a mouse TCRα constant domain and a mouse TCRβ constant domain.
[Item 256] The endogenous TCR that is functionally disrupted is an endogenous TCRα chain, an endogenous TCRβ chain, or an endogenous TCRα chain and an endogenous TCRβ chain, according to any one of items 250 to 255. modified T cells.
[Item 257] According to any one of items 250 to 256, wherein the functionally disrupted endogenous TCR has reduced binding to MHC peptide complexes compared to that of an unmodified control T cell. Modified T cells as described.
[Item 258] The modified T cell according to any one of items 250 to 257, wherein the functional disruption is disruption of a gene encoding the endogenous TCR.
[Item 259] The modified T cell according to item 258, wherein the disruption of the gene encoding the endogenous TCR is the removal of the sequence of the gene encoding the endogenous TCR from the genome of the T cell.
[Item 260] The T cell is a CD4 cell, a CD8 cell, a naive T cell, a memory stem T cell, a central memory T cell, a double negative T cell, an effector memory T cell, an effector T cell, a Th0 cell, a Tc0 cell, Th1 cells, Tc1 cells, Th2 cells, Tc2 cells, Th17 cells, Th22 cells, α/β T cells, γ/δ T cells, natural killer (NK) cells, natural killer T (NKT) cells, hematopoietic stem cells, and pluripotent The modified T cell according to any one of items 250 to 259, which is a human T cell selected from stem cells.
[Item 261] The T cell is CD8 + T cells or CD4 + The modified T cell according to any one of items 250 to 260, which is a T cell.
[Item 262] The modified T cell according to any one of items 250 to 261, wherein the T cell is an allogeneic T cell.
[Item 263] An item further comprising a nucleic acid encoding an inhibitory molecule comprising a first polypeptide comprising at least a portion of the inhibitory molecule associated with a second polypeptide comprising a positive signal from an intracellular signaling domain. The modified T cell according to any one of Nos. 250 to 262.
[Item 264] The modified T cell according to item 263, wherein the inhibitory molecule comprises a first polypeptide comprising at least a portion of PD1 and a second polypeptide comprising a costimulatory domain and a primary signaling domain. .
[Item 265] (a) The modified T cell according to any one of items 250 to 264,
(b) a pharmaceutically acceptable carrier.
[Item 266] A method for producing the modified T cell according to any one of items 250 to 264, comprising:
(a) disrupting an endogenous TCR gene encoding a TCRα chain, a TCRβ chain, or a TCRα chain and a TCRβ chain, thereby producing a T cell containing a functional disruption of the endogenous TCR gene;
(b) Transducing a T cell containing a functionally disrupted endogenous TCR gene with the recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 244 or the vector according to any one of items 245 to 249 The method described above, comprising:
[Item 267] The disruption transduces the T cell with a nuclease protein, or a nucleic acid sequence encoding a nuclease protein, that targets the TCRα chain, the TCRβ chain, or the endogenous genes encoding the TCRα and TCRβ chains. The method of item 266, comprising:
[Item 268] A method for producing a modified T cell according to any one of items 250 to 264, comprising adding any one of items 1 to 244 to a T cell containing functional disruption of an endogenous TCR gene. The method described above, comprising transducing the recombinant nucleic acid according to item 245 or the vector according to any one of items 245 to 249.
[Item 269] The T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR gene is a T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR gene encoding a TCRα chain, a TCRβ chain, or a TCRα chain and a TCRβ chain. , the method described in item 268.
[Item 270] The method according to any one of items 266 to 269, wherein the T cell is a human T cell.
[Item 271] The method of items 266 to 270, wherein said T cell containing a functional disruption of an endogenous TCR gene has reduced binding to MHC-peptide complexes compared to that of an unmodified control T cell. The method described in any one of the above.
[Item 272] According to any one of items 267 to 271, wherein the nuclease is a meganuclease, a zinc finger nuclease (ZFN), a transcription activator-like effector nuclease (TALEN), a CRISPR/Cas nuclease, or a megaTAL nuclease. Method described.
[Item 273] The sequence contained in the recombinant nucleic acid or the vector is inserted into the endogenous TCR subunit gene at the cleavage site, and the insertion of the sequence into the endogenous TCR subunit gene 273. The method of any one of items 266-272, wherein the sexual TCR subunit is functionally disrupted.
[Item 274] The method according to any one of items 267 to 271, wherein the nuclease is a meganuclease.
[Item 275] The meganuclease includes a first subunit and a second subunit, the first subunit binds to a first recognition half site of the recognition sequence, and the second subunit binds to a first recognition half site of the recognition sequence. 275. The method of item 274, wherein the method binds to a second recognition half site of the recognition sequence.
[Item 276] The method of item 275, wherein the meganuclease is a single-stranded meganuclease that includes a linker, and the linker covalently bonds the first subunit and the second subunit.
[Item 277] A method of treating cancer in a subject in need of treatment, the method comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition according to Item 265.
[Item 278] A method for treating cancer in a subject in need of treatment, comprising (a) modified T cells produced according to the method according to any one of items 266 to 276, and (b) a pharmaceutically and a carrier acceptable to said subject.
[Item 279] A method for treating cancer in a subject in need of treatment, the method comprising (a) modified T cells produced according to the method according to any one of items 266 to 276, and (b) pharmaceutical and a carrier acceptable to said subject.
[Item 280] The method according to any one of items 277 to 279, wherein the modified T cell is an allogeneic T cell.
[Item 281] The method of any one of items 277-280, wherein less cytokines are released in the subject compared to a subject to which an effective amount of unmodified control T cells is administered.
[Item 282] Compared to a subject to whom an effective amount of modified T cells containing the recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 244 or the vector according to any one of items 245 to 249 was administered, 282. The method of any one of items 277-281, wherein less cytokines are released in the subject.
[Item 283] The method of any one of items 277-282, wherein the method comprises administering the pharmaceutical composition in combination with an agent that increases the effectiveness of the pharmaceutical composition.
[Item 284] The method of any one of items 277-283, wherein the method comprises administering the pharmaceutical composition in combination with an agent that ameliorates one or more side effects associated with the pharmaceutical composition. Method.
[Item 285] The method according to any one of items 277 to 284, wherein the cancer is solid cancer, lymphoma, or leukemia.
[Item 286] The cancer is selected from the group consisting of renal cell carcinoma, breast cancer, lung cancer, ovarian cancer, prostate cancer, colon cancer, cervical cancer, brain cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, and gastric cancer. The method according to any one of items 277 to 285.
[Item 287] According to any one of items 277 to 286, less cytokines are released in the subject compared to a subject to which an effective amount of autologous T cells expressing TFP according to items 1 to 244 is administered. Method described.
[Item 288] The method of any one of items 277-287, wherein the method does not induce graft-versus-host disease.
[Item 289] Items 277 to 289, wherein the risk of the subject developing graft-versus-host disease is reduced compared to a subject to which an effective amount of autologous T cells expressing TFP according to items 1 to 244 is administered. 288. The method of any one of 288.
[Item 290] Recombinant nucleic acid according to any one of items 1 to 244, vector according to any one of items 245 to 249, items 250 to 264 for use as a pharmaceutical or in the preparation of a pharmaceutical. or the pharmaceutical composition according to item 265.

Claims (1)

（ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする配列であって、
（ｉ）以下：
（１）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（２）膜貫通ドメイン
を含むＴＣＲサブユニットと
（ｉｉ）抗原結合ドメインを含む抗体と
を含む前記配列と、
（ｂ）ＴＣＲ定常ドメインをコードする配列であって、前記ＴＣＲ定常ドメインが、ＴＣＲγ定常ドメイン若しくはＴＣＲδ定常ドメインである前記配列か、又はＴＣＲγ定常ドメイン及びＴＣＲδ定常ドメインをコードする配列とを含み、
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体が機能的に連結されており、
かつ
内因性ＴＣＲの機能的破壊を含む改変Ｔ細胞で発現すると前記ＴＦＰがＴＣＲ複合体に機能的に組み込まれる、組換え核酸。 (a) a sequence encoding a T cell receptor (TCR) fusion protein (TFP),
(i) Below:
(1) at least a portion of a TCR extracellular domain; and (2) a TCR subunit comprising a transmembrane domain; and (ii) an antibody comprising an antigen-binding domain.
(b) a sequence encoding a TCR constant domain, the TCR constant domain comprising the aforementioned sequence which is a TCRγ constant domain or a TCRδ constant domain, or a sequence encoding a TCRγ constant domain and a TCRδ constant domain;
the TCR subunit and the antibody are operably linked;
and a recombinant nucleic acid which, when expressed in a modified T cell comprising a functional disruption of an endogenous TCR, functionally incorporates said TFP into a TCR complex.
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