実施例１６
この実施例はクロロフィル、ポリフェノール及び分光分析によって特徴づけられ、定量されるような他の光吸収分子の除去を検討した。精製プロセスの各工程の試料を、精製プロセスを介して分光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｈａｒｍａＳｐｅｃ ＵＶ－１７００；Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）によって特徴づけた。試料を１１００ｎｍから２４５ｎｍに下って走査した。図１８は吸光度スペクトルを示す。画分１のピーク（「Ｆ１」）は最初の液体／固体分離工程後の濾液から検出されたシグナルに相当する。画分４のピーク（「Ｆ４」）は０．２μｍの精密濾過後に採取された試料に相当する。理論によって束縛されることを望まないで、走査分光光度計から検出された吸光度ピークはプロセス全体を通しての光吸収分子の効率的な除去を示したと考えられる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
植物材料から精製したタンパク質標品を作製するプロセスであって、
ａ）還元剤を含む緩衝溶液にて前記植物材料を提供することと；
ｂ）前記植物材料を溶解することと；
ｃ）前記溶解した植物材料を固相と液相に分け、その際、前記液相は可溶性タンパク質とクロロフィルとを含有することと；
ｄ）約３０分以内で第１の設定温度に加熱し、次いで約３０分以内で第２の設定温度に冷却することによって前記液相にて前記クロロフィルを凝固させ、その際、前記冷却は前記液相が前記第１の設定温度に達したときに開始することと；
ｅ）ｄ）の前記液相を凝集剤及び／または吸着剤と接触させ、前記液相にてクロロフィルを凝集させる及び／または前記吸着剤に吸着させるのに十分な時間、混合し、それによって凝集した混合物を形成することと；
ｆ）ｅ）の前記凝集した混合物を固相と液相に分離することと；
ｇ）ｆ）の前記液相を濾過し、精製タンパク質を含有する濾液を得ることとを含む、前記プロセス。
（項目２）
植物材料から精製したタンパク質標品を作製するプロセスであって、
ａ）還元剤を含む緩衝溶液にて前記植物材料を提供することと；
ｂ）前記植物材料を溶解することと；
ｃ）前記溶解した植物材料を固相と液相に分け、その際、前記液相は可溶性タンパク質とクロロフィルとを含有することと；
ｄ）１以上の塩を加えることによって前記液相におけるクロロフィルを凝固させることと；
ｅ）ｄ）の前記液相を凝集剤及び／または吸着剤と接触させ、前記液相におけるクロロフィルを凝集させる及び／または前記吸着剤に吸着させるのに十分な時間、混合し、それによって凝集した混合物を形成することと；
ｆ）ｅ）の前記凝集した混合物を固相と液相に分離することと；
ｇ）ｆ）の前記液相を濾過し、精製タンパク質を含有する濾液を得ることとを含む、前記プロセス。
（項目３）
植物材料から精製したタンパク質標品を作製するプロセスであって、
ａ）還元剤を含む緩衝溶液にて前記植物材料を提供することと；
ｂ）前記植物材料を溶解することと；
ｃ）前記溶解した植物材料を固相と液相に分け、その際、前記液相は可溶性タンパク質とクロロフィルとを含有することと；
ｄ）ポリマー由来の凝固剤を使用して前記液相にて前記クロロフィルを凝固させることと；
ｅ）ｄ）の前記液相を凝集剤及び／または吸着剤と接触させ、前記液相にてクロロフィルを凝集させる及び／または前記吸着剤に吸着させるのに十分な時間、混合し、それによって凝集した混合物を形成することと；
ｆ）ｅ）の前記凝集した混合物を固相と液相に分離することと；
ｇ）ｆ）の前記液相を濾過し、精製タンパク質を含有する濾液を得ることとを含む、前記プロセス。
（項目４）
植物材料から精製したタンパク質標品を作製するプロセスであって、
ａ）還元剤を含む緩衝溶液にて前記植物材料を提供することと；
ｂ）前記植物材料を溶解することと；
ｃ）前記溶解した植物材料を固相と液相に分け、その際、前記液相は可溶性タンパク質とクロロフィルとを含有することと；
ｄ）電気凝固によって前記液相における前記クロロフィルを凝固させることと；
ｅ）ｄ）の前記液相を凝集剤及び／または吸着剤と接触させ、前記液相におけるクロロフィルを凝集させる及び／または前記吸着剤に吸着させるのに十分な時間、混合し、それによって凝集した混合物を形成することと；
ｆ）ｅ）の前記凝集した混合物を固相と液相に分離することと；
ｇ）ｆ）の前記液相を濾過し、精製タンパク質を含有する濾液を得ることとを含む、前記プロセス。
（項目５）
前記植物材料がａ）の前に洗浄される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６）
前記還元剤が、２－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、２－メルカプトエチルアミン－ＨＣＬ、メタ重亜硫酸ナトリウム、システイン塩酸塩、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、グルタチオン、システイン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、第一鉄イオン、発生期水素、ナトリウムアマルガム、シュウ酸、ギ酸、マグネシウム、マンガン、リン酸、カリウムまたはナトリウムである、項目１～４いずれか１項に記載のプロセス。
（項目７）
前記還元剤が亜硫酸塩である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８）
前記亜硫酸塩が亜硫酸ナトリウム、亜硫酸マグネシウムまたはメタ重亜硫酸ナトリウムである、項目７に記載のプロセス。
（項目９）
前記亜硫酸塩が重亜硫酸ナトリウムである、項目７に記載のプロセス。
（項目１０）
ａ）の前記溶液が１以上の緩衝剤を含有する、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１１）
ａ）の前記溶液が１以上のキレート剤を含有する、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１２）
ａ）の前記溶液が１以上のプロテアーゼ阻害剤を含有する、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１３）
ａ）の前記溶液が１以上の緩衝剤、１以上のキレート剤、及び／または１以上のプロテアーゼ阻害剤を含有する、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１４）
ａ）の前記溶液のｐＨが約ｐＨ５．０～約ｐＨ９．０である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１５）
前記溶液の前記ｐＨが約ｐＨ６．０～約ｐＨ７．６である、項目１４に記載のプロセス。
（項目１６）
前記溶液の前記ｐＨが約ｐＨ６．８である、項目１５に記載のプロセス。
（項目１７）
前記植物材料とａ）の前記溶液が約６：１の比である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１８）
前記植物材料とａ）の前記溶液が約３：１の比である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１９）
前記植物材料とａ）の前記溶液が約２：１の比である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２０）
前記植物材料とａ）の前記溶液が約１：１の比である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２１）
前記植物材料の前記溶解が前記溶解物及び／または濾液に１以上の二価のイオン（複数可）を加えること及び／または前記溶解物及び／または濾液にキトサンを加えることを含む、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２２）
前記植物材料の前記溶解が前記溶解物にカルシウムイオンを加えることを含む、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２３）
前記植物材料の前記溶解が前記溶解物に塩化カルシウムを加えることを含む、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２４）
前記植物材料が化学的に、機械的に、及び／または酵素によって溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２５）
前記植物材料が化学的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２６）
前記植物材料が１以上の界面活性剤を使用して化学的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２７）
前記植物材料がＣＨＡＰＳを使用して化学的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２８）
前記植物材料が１以上の酵素を使用して酵素によって溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２９）
前記植物材料がセルラーゼまたはペクチナーゼを使用して溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３０）
前記植物材料が機械的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３１）
前記植物材料がブレンダーを使用して機械的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３２）
前記植物材料がミル、ホモゲナイザー、微細フリューダイザー、機械的圧力またはＳｔｅｐｈａｎカッターを使用して機械的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３３）
前記植物材料がプレス機、超音波破砕機、粉砕機を使用して、パルス電場を使用して、窒素噴出を使用して、超音波エネルギーを使用して、または凍結によって機械的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３４）
前記植物材料が少なくとも１つのミルを使用して機械的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３５）
前記植物材料が少なくとも２つの異なる型のミルを使用して機械的に溶解される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３６）
ｃ）の前記分離することがネジプレス、デカンター、または遠心分離機によって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３７）
ｃ）の前記分離することがディスクスタック遠心分離機、連続遠心分離機、またはバスケット遠心分離機を使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３８）
ｃ）の前記分離することが濾過を使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目３９）
ｃ）の前記分離することがプレス機を使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４０）
ｃ）の前記分離することが濾過を使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４１）
ｃ）の前記分離することが重力沈降を使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４２）
ｃ）の前記分離することがふるい分けを使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目４３）
ｄ）の前記第１の設定温度が約８０℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目４４）
ｄ）の前記第１の設定温度が約６５℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目４５）
ｄ）の前記第１の設定温度が約５５℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目４６）
ｄ）の前記第１の設定温度が約５０℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目４７）
ｄ）の前記第２の設定温度が約２５℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目４８）
ｄ）の前記第２の設定温度が約１５℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目４９）
ｄ）の前記第２の設定温度が約１０℃以下である、項目１に記載のプロセス。
（項目５０）
ｄ）の第１の設定温度に加熱することが約１５分以上かからない、項目１に記載のプロセス。
（項目５１）
ｄ）の第１の設定温度に加熱することが約５分以上かからない、項目１に記載のプロセス。
（項目５２）
ｄ）の第２の設定温度に冷却することが約１５分以上かからない、項目１に記載のプロセス。
（項目５３）
ｄ）の第２の設定温度に冷却することが約５分以上かからない、項目１に記載のプロセス。
（項目５４）
ｄ）の前記１以上の塩が、１以上のカルシウム塩、１以上のマグネシウム塩、１以上のベリリウム塩、１以上の亜鉛塩、１以上のカドミウム塩、１以上の銅塩、１以上の鉄塩、１以上のコバルト塩、１以上のスズ塩、１以上のストロンチウム塩、１以上のバリウム塩、及び／または１以上のラジウム塩を含む、項目２に記載のプロセス。
（項目５５）
ｄ）の前記１以上の塩が、リン酸カリウム及び／または塩酸カルシウムを含む、項目２に記載のプロセス。
（項目５６）
ｄ）の前記１以上の塩が５ｍＭ～２Ｍの濃度で加えられる、項目２に記載のプロセス。
（項目５７）
前記凝集剤が、アルキルアミンエピクロロヒドリン、ポリ塩化ジメチルジアリルアンモニウム、多糖、ポリアミン、デンプン、硫酸アルミニウム、ミョウバン、ポリアクリルアミド、ポリアクロミドまたはポリエチレンイミンである、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目５８）
前記凝集剤がキトサンである、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目５９）
前記凝集剤が活性化キトサンである、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６０）
前記凝集剤が溶液における１～２０％ｗ／ｗの活性化キトサンである、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６１）
ｅ）の前記吸着剤が樹脂である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６２）
ｅ）の前記吸着剤が活性炭、活性化木炭または活性化石炭である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６３）
ｅ）の前記吸着剤が２５０ｍ／ｇを超える表面積、１～１０００μｍの重量平均直径、４００～１，４００ｍｇ／ｇのヨウ素価、１００～５５０の範囲でのモラセスナンバー、及び／または少なくとも１０ｇ／１００ｇのメチレンブルー吸着を有する活性炭である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６４）
ｆ）の前記分離が２５℃以下で実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６５）
ｆ）の前記分離が１５℃以下で実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６６）
ｆ）の前記分離が１０℃以下で実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６７）
ｆ）の前記分離が濾過を使用して実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６８）
ｆ）の前記分離がプレス機を使用して、重力沈降を使用して、またはふるい分けによって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目６９）
ｆ）の前記分離が遠心分離機またはデカンターを使用して、または精密濾過によって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７０）
ｅ）を除くプロセスの全工程が２５℃以下で実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７１）
ｅ）を除くプロセスの全工程が１５℃以下で実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７２）
ｅ）を除くプロセスの全工程が１０℃以下で実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７３）
ｇ）の前記濾過することが膜フィルターによって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７４）
ｇ）の前記濾過することが０．７μｍの膜フィルターによって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７５）
ｇ）の前記濾過することが０．２μｍの膜フィルターによって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７６）
ｇ）の前記濾過することが珪藻土及び／または活性炭によって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７７）
ｇ）の前記濾過することが最大約１０％までの活性炭によって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７８）
ｇ）の前記濾過することが最大約２％までの活性炭によって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目７９）
ｇ）の前記濾過することが０．２μｍの膜フィルターと約２％の活性炭とによって実行される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８０）
さらに、ｇ）の後に、０．２μｍの膜フィルターを介してｇ）の前記濾液を濾過することを含む、項目７３～７９のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８１）
１以上の液相及び／または１以上の濾液が１以上の消泡剤及び／または１以上の泡止め剤を含む、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８２）
小型固形物及び／または微生物を取り除くために１以上の液相及び／または１以上の濾液が濾過される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８３）
１以上の液相及び／または１以上の濾液が滅菌される、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８４）
さらに、前記濾液を濃縮することを含む、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目８５）
前記濾液を濃縮することが限外濾過によって実行される、項目８４に記載のプロセス。
（項目８６）
前記限外濾過がポリエーテルスルホン、ポリプロピレン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアクリロニトリル、セルロースアセテートまたはポリスルホンを介する、項目８５に記載のプロセス。
（項目８７）
前記限外濾過が１００ｋＤａ以下のカットオフでの限外濾過フィルターを使用して実行される、項目８５に記載のプロセス。
（項目８８）
前記限外濾過が５０ｋＤａ以下のカットオフでの限外濾過フィルターを使用して実行される、項目８５に記載のプロセス。
（項目８９）
前記限外濾過が１０ｋＤａ以下のカットオフでの限外濾過フィルターを使用して実行される、項目８５に記載のプロセス。
（項目９０）
前記精製タンパク質の収率が工程ｃ）の前記液相における前記可溶性タンパク質の少なくとも約１０％である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９１）
前記精製タンパク質の前記収率が工程ｃ）の前記液相における前記可溶性タンパク質の少なくとも約２０％である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９２）
前記精製タンパク質の前記収率が工程ｃ）の前記液相における前記可溶性タンパク質の少なくとも約２５％である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９３）
前記精製タンパク質の前記収率が少なくとも約４０％である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９４）
前記精製タンパク質の前記収率が少なくとも約６０％である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９５）
前記精製タンパク質の前記収率が少なくとも約８０％である、項目１～４のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９６）
前記精製タンパク質標品におけるクロロフィルのタンパク質に対する重量比が約１:１０００、約１:１５００、約１:２０００または約１:２５００未満である、項目１～９５のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９７）
１以上の官能特性を付与するまたはそれに関係する前記精製タンパク質標品における１以上の作用物質（複数可）が前記元となった植物材料と比べて減らされるまたは取り除かれる、項目１～９６のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９８）
１以上の官能特性を付与するまたはそれに関係する前記精製タンパク質標品における１以上の作用物質（複数可）が前記元となった植物材料と比べて５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％減らされる、項目１～９６のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目９９）
前記精製タンパク質標品が本質的に無臭である、項目１～９６のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１００）
前記精製タンパク質標品が無臭である、項目１～９６のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１０１）
前記精製タンパク質標品が本質的に偏りのない食味である、項目１～１００のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１０２）
前記精製タンパク質標品が偏りのない食味である、項目１～１００のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１０３）
前記タンパク質がＲｕＢｉｓＣｏである、項目１～１０２のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１０４）
前記植物材料がＬｅｍｎａに由来する、項目１～１０３のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１０５）
前記植物材料がＬｅｍｎｏｉｄｅａｅに由来する、項目１～１０３のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目１０６）
項目１～１０５のいずれか１項に記載のプロセスによって作製される製品。
（項目１０７）
植物材料由来の精製タンパク質標品を含む食物であって、前記タンパク質標品が８０％以下の不純物を含有する、前記食物。
（項目１０８）
前記タンパク質標品がＲｕＢｉｓＣｏを含む、項目１０７に記載の食物。
（項目１０９）
前記植物材料がＬｅｍｎａに由来する、項目１０７または１０８に記載の食物。
（項目１１０）
前記植物材料がＬｅｍｎｏｉｄｅａｅに由来する、項目１０７または１０８に記載の食物。
Example 16
This example examined the removal of chlorophyll, polyphenols and other light absorbing molecules as characterized and quantified by spectroscopic analysis. Samples at each step of the purification process were characterized by a spectrophotometer (Shimadzu PharmaSpec UV-1700; Shimadzu Scientific Instruments Incorporated, Columbia, Maryland) throughout the purification process. The sample was scanned from 1100 nm down to 245 nm. FIG. 18 shows absorbance spectra. The fraction 1 peak ("F1") corresponds to the signal detected from the filtrate after the first liquid/solid separation step. The fraction 4 peak (“F4”) corresponds to a sample taken after 0.2 μm microfiltration. Without wishing to be bound by theory, it is believed that the absorbance peaks detected from the scanning spectrophotometer indicated efficient removal of light absorbing molecules throughout the process.
The present invention provides, for example, the following items.
(Item 1)
A process for producing a purified protein preparation from plant material, comprising:
a) providing said plant material in a buffer solution comprising a reducing agent;
b) dissolving the plant material;
c) dividing the dissolved plant material into a solid phase and a liquid phase, wherein the liquid phase contains soluble proteins and chlorophyll;
d) solidifying said chlorophyll in said liquid phase by heating to a first set temperature within about 30 minutes and then cooling to a second set temperature within about 30 minutes, wherein said cooling is said commencing when the liquid phase reaches the first set temperature;
e) contacting said liquid phase of d) with a flocculant and/or adsorbent and mixing for a time sufficient to cause chlorophyll to flocculate in said liquid phase and/or adsorb to said adsorbent, thereby flocculating; forming a mixed mixture;
f) separating said agglomerated mixture of e) into a solid phase and a liquid phase;
g) filtering said liquid phase of f) to obtain a filtrate containing purified protein.
(Item 2)
A process for producing a purified protein preparation from plant material, comprising:
a) providing said plant material in a buffer solution comprising a reducing agent;
b) dissolving the plant material;
c) dividing the dissolved plant material into a solid phase and a liquid phase, wherein the liquid phase contains soluble proteins and chlorophyll;
d) solidifying chlorophyll in said liquid phase by adding one or more salts;
e) contacting the liquid phase of d) with a flocculant and/or adsorbent and mixing for a time sufficient to cause the chlorophyll in the liquid phase to flocculate and/or adsorb to the adsorbent, thereby flocculating; forming a mixture;
f) separating said agglomerated mixture of e) into a solid phase and a liquid phase;
g) filtering said liquid phase of f) to obtain a filtrate containing purified protein.
(Item 3)
A process for producing a purified protein preparation from plant material, comprising:
a) providing said plant material in a buffer solution comprising a reducing agent;
b) dissolving the plant material;
c) dividing the dissolved plant material into a solid phase and a liquid phase, wherein the liquid phase contains soluble proteins and chlorophyll;
d) coagulating said chlorophyll in said liquid phase using a polymer-derived coagulant;
e) contacting said liquid phase of d) with a flocculant and/or adsorbent and mixing for a time sufficient to cause chlorophyll to flocculate in said liquid phase and/or adsorb to said adsorbent, thereby flocculating; forming a mixed mixture;
f) separating said agglomerated mixture of e) into a solid phase and a liquid phase;
g) filtering said liquid phase of f) to obtain a filtrate containing purified protein.
(Item 4)
A process for producing a purified protein preparation from plant material, comprising:
a) providing said plant material in a buffer solution comprising a reducing agent;
b) dissolving the plant material;
c) dividing the dissolved plant material into a solid phase and a liquid phase, wherein the liquid phase contains soluble proteins and chlorophyll;
d) solidifying said chlorophyll in said liquid phase by electrocoagulation;
e) contacting the liquid phase of d) with a flocculant and/or adsorbent and mixing for a time sufficient to cause the chlorophyll in the liquid phase to flocculate and/or adsorb to the adsorbent, thereby flocculating; forming a mixture;
f) separating said agglomerated mixture of e) into a solid phase and a liquid phase;
g) filtering said liquid phase of f) to obtain a filtrate containing purified protein.
(Item 5)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is washed prior to a).
(Item 6)
The reducing agent is 2-mercaptoethanol (BME), 2-mercaptoethylamine-HCL, sodium metabisulfite, cysteine hydrochloride, dithiothreitol (DTT), glutathione, cysteine, tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP). ), ferrous ion, nascent hydrogen, sodium amalgam, oxalic acid, formic acid, magnesium, manganese, phosphate, potassium or sodium.
(Item 7)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the reducing agent is a sulfite.
(Item 8)
8. The process of item 7, wherein said sulfite is sodium sulfite, magnesium sulfite or sodium metabisulfite.
(Item 9)
8. The process of item 7, wherein said sulfite is sodium bisulfite.
(Item 10)
The process of any one of items 1-4, wherein said solution of a) contains one or more buffering agents.
(Item 11)
The process of any one of items 1-4, wherein said solution of a) contains one or more chelating agents.
(Item 12)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said solution of a) contains one or more protease inhibitors.
(Item 13)
Process according to any one of items 1 to 4, wherein said solution of a) contains one or more buffering agents, one or more chelating agents and/or one or more protease inhibitors.
(Item 14)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the pH of the solution of a) is from about pH 5.0 to about pH 9.0.
(Item 15)
15. The process of item 14, wherein said pH of said solution is from about pH 6.0 to about pH 7.6.
(Item 16)
16. The process of item 15, wherein said pH of said solution is about pH 6.8.
(Item 17)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material and the solution of a) are in a ratio of about 6:1.
(Item 18)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material and the solution of a) are in a ratio of about 3:1.
(Item 19)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material and the solution of a) are in a ratio of about 2:1.
(Item 20)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material and the solution of a) are in a ratio of about 1:1.
(Item 21)
Items 1-, wherein said dissolving of said plant material comprises adding one or more divalent ion(s) to said lysate and/or filtrate and/or adding chitosan to said lysate and/or filtrate 5. The process of any one of 4.
(Item 22)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said lysing of said plant material comprises adding calcium ions to said lysate.
(Item 23)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said lysing of said plant material comprises adding calcium chloride to said lysate.
(Item 24)
5. Process according to any one of items 1 to 4, wherein the plant material is dissolved chemically, mechanically and/or enzymatically.
(Item 25)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is chemically dissolved.
(Item 26)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is chemically dissolved using one or more surfactants.
(Item 27)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is chemically dissolved using CHAPS.
(Item 28)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is enzymatically lysed using one or more enzymes.
(Item 29)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is lysed using cellulase or pectinase.
(Item 30)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is mechanically lysed.
(Item 31)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is mechanically melted using a blender.
(Item 32)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is mechanically lysed using a mill, homogenizer, fine fluidizer, mechanical pressure or a Stephan cutter.
(Item 33)
The plant material is mechanically lysed using a press, a sonicator, a grinder, using a pulsed electric field, using nitrogen spurting, using ultrasonic energy, or by freezing. , items 1-4.
(Item 34)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is mechanically melted using at least one mill.
(Item 35)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the plant material is mechanically melted using at least two different types of mills.
(Item 36)
The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed by a screw press, a decanter, or a centrifuge.
(Item 37)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed using a disc stack centrifuge, a continuous centrifuge, or a basket centrifuge.
(Item 38)
The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed using filtration.
(Item 39)
The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed using a press.
(Item 40)
The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed using filtration.
(Item 41)
The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed using gravity settling.
(Item 42)
The process of any one of items 1-4, wherein said separating of c) is performed using sieving.
(Item 43)
The process of item 1, wherein the first set temperature in d) is about 80°C or less.
(Item 44)
The process of item 1, wherein the first set temperature in d) is about 65°C or less.
(Item 45)
The process of item 1, wherein the first set temperature in d) is about 55°C or less.
(Item 46)
The process of item 1, wherein the first set temperature in d) is about 50°C or less.
(Item 47)
The process of item 1, wherein the second set temperature in d) is about 25°C or less.
(Item 48)
The process of item 1, wherein the second set temperature in d) is about 15°C or less.
(Item 49)
The process of item 1, wherein the second set temperature in d) is about 10°C or less.
(Item 50)
The process of item 1, wherein heating to the first set temperature in d) takes no more than about 15 minutes.
(Item 51)
The process of item 1, wherein heating to the first set temperature in d) takes no more than about 5 minutes.
(Item 52)
The process of item 1, wherein cooling to the second set temperature in d) takes no more than about 15 minutes.
(Item 53)
The process of item 1, wherein cooling to the second set temperature in d) takes no more than about 5 minutes.
(Item 54)
The one or more salts of d) are one or more calcium salts, one or more magnesium salts, one or more beryllium salts, one or more zinc salts, one or more cadmium salts, one or more copper salts, one or more iron salts. Salt, one or more cobalt salts, one or more tin salts, one or more strontium salts, one or more barium salts, and/or one or more radium salts.
(Item 55)
A process according to item 2, wherein said one or more salts of d) comprise potassium phosphate and/or calcium hydrochloride.
(Item 56)
The process of item 2, wherein said one or more salts of d) are added at a concentration of 5mM to 2M.
(Item 57)
5. Any one of items 1 to 4, wherein the flocculant is alkylamine epichlorohydrin, polydimethyldiallylammonium chloride, polysaccharide, polyamine, starch, aluminum sulfate, alum, polyacrylamide, polyacrylamide or polyethyleneimine. process.
(Item 58)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the flocculating agent is chitosan.
(Item 59)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the flocculating agent is activated chitosan.
(Item 60)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the flocculating agent is activated chitosan at 1-20% w/w in solution.
(Item 61)
The process of any one of items 1-4, wherein the adsorbent in e) is a resin.
(Item 62)
The process of any one of items 1-4, wherein the adsorbent of e) is activated carbon, activated charcoal or activated coal.
(Item 63)
The adsorbent of e) has a surface area greater than 250 m/g, a weight average diameter of 1-1000 μm, an iodine value of 400-1,400 mg/g, a molasses number in the range of 100-550, and/or at least 10 g/100 g. 5. The process of any one of items 1-4, wherein the activated carbon has a methylene blue adsorption of .
(Item 64)
The process of any one of items 1-4, wherein said separation of f) is carried out at 25° C. or less.
(Item 65)
The process of any one of items 1-4, wherein said separation of f) is performed at 15° C. or less.
(Item 66)
The process of any one of items 1-4, wherein said separation of f) is carried out at 10° C. or less.
(Item 67)
The process of any one of items 1-4, wherein said separation of f) is performed using filtration.
(Item 68)
The process of any one of items 1-4, wherein said separation of f) is performed using a press, using gravity settling, or by sieving.
(Item 69)
The process of any one of items 1-4, wherein said separation of f) is performed using a centrifuge or decanter, or by microfiltration.
(Item 70)
5. The process of any one of items 1-4, wherein all steps of the process except e) are carried out at 25° C. or below.
(Item 71)
5. The process of any one of items 1-4, wherein all steps of the process except e) are carried out at 15° C. or below.
(Item 72)
A process according to any one of items 1-4, wherein all steps of the process except e) are carried out at 10°C or less.
(Item 73)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed by a membrane filter.
(Item 74)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed with a 0.7 μm membrane filter.
(Item 75)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed with a 0.2 μm membrane filter.
(Item 76)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed with diatomaceous earth and/or activated carbon.
(Item 77)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed with up to about 10% activated carbon.
(Item 78)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed with up to about 2% activated carbon.
(Item 79)
The process of any one of items 1-4, wherein said filtering of g) is performed with a 0.2 μm membrane filter and about 2% activated carbon.
(Item 80)
79. The process of any one of items 73-79, further comprising, after g), filtering said filtrate of g) through a 0.2 μm membrane filter.
(Item 81)
Process according to any one of items 1 to 4, wherein one or more liquid phases and/or one or more filtrates comprise one or more antifoam agents and/or one or more antifoam agents.
(Item 82)
Process according to any one of items 1 to 4, wherein one or more liquid phases and/or one or more filtrates are filtered to remove small solids and/or microorganisms.
(Item 83)
Process according to any one of items 1-4, wherein one or more liquid phases and/or one or more filtrates are sterilized.
(Item 84)
5. The process of any one of items 1-4, further comprising concentrating said filtrate.
(Item 85)
85. The process of item 84, wherein concentrating the filtrate is performed by ultrafiltration.
(Item 86)
86. The process of item 85, wherein said ultrafiltration is via polyethersulfone, polypropylene, polyvinylidene fluoride, polyacrylonitrile, cellulose acetate or polysulfone.
(Item 87)
86. The process of item 85, wherein said ultrafiltration is performed using an ultrafiltration filter with a cutoff of 100 kDa or less.
(Item 88)
86. The process of item 85, wherein said ultrafiltration is performed using an ultrafiltration filter with a cutoff of 50 kDa or less.
(Item 89)
86. The process of item 85, wherein said ultrafiltration is performed using an ultrafiltration filter with a cutoff of 10 kDa or less.
(Item 90)
5. The process of any one of items 1-4, wherein the yield of said purified protein is at least about 10% of said soluble protein in said liquid phase of step c).
(Item 91)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said yield of said purified protein is at least about 20% of said soluble protein in said liquid phase of step c).
(Item 92)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said yield of said purified protein is at least about 25% of said soluble protein in said liquid phase of step c).
(Item 93)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said yield of said purified protein is at least about 40%.
(Item 94)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said yield of said purified protein is at least about 60%.
(Item 95)
5. The process of any one of items 1-4, wherein said yield of said purified protein is at least about 80%.
(Item 96)
96. The process of any one of items 1-95, wherein the weight ratio of chlorophyll to protein in the purified protein preparation is less than about 1:1000, about 1:1500, about 1:2000 or about 1:2500.
(Item 97)
97. Any of items 1-96, wherein one or more agent(s) in said purified protein preparation that impart or relate to one or more sensory properties are reduced or eliminated compared to said source plant material. or the process of claim 1.
(Item 98)
5%, 10%, 15%, 20% of one or more agent(s) in said purified protein preparation that imparts or is associated with one or more organoleptic properties relative to said source plant material; 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% , 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99%.
(Item 99)
97. The process of any one of items 1-96, wherein said purified protein preparation is essentially odorless.
(Item 100)
97. The process of any one of items 1-96, wherein said purified protein preparation is odorless.
(Item 101)
101. The process of any one of items 1-100, wherein said purified protein preparation is essentially of neutral taste.
(Item 102)
101. The process of any one of items 1-100, wherein said purified protein preparation is of neutral taste.
(Item 103)
103. The process of any one of items 1-102, wherein said protein is RuBisCo.
(Item 104)
104. The process of any one of items 1-103, wherein the plant material is derived from Lemna.
(Item 105)
104. The process of any one of items 1-103, wherein the plant material is derived from Lemnoideae.
(Item 106)
A product made by the process of any one of items 1-105.
(Item 107)
A food comprising a purified protein preparation from plant material, said protein preparation containing no more than 80% impurities.
(Item 108)
108. The food of item 107, wherein said protein preparation comprises RuBisCo.
(Item 109)
109. Food according to item 107 or 108, wherein said plant material is derived from Lemna.
(Item 110)
109. Food according to item 107 or 108, wherein said plant material is derived from Lemnoideae.