JPWO2020201230A5

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Publication number: JPWO2020201230A5
Application number: JP2021557802A
Authority: JP
Publication date: 2023-04-18
Anticipated expiration: 2040-03-30

Claims

患者におけるHvG疾患の処置における使用のための、HLA-A^*02に対する特異性を有するキメラ抗原受容体(CAR-A^*02)を形成する、一本鎖可変断片抗体ドメイン(scFv)、ヒンジ、膜貫通ドメイン、細胞内hCD28シグナル伝達ドメイン及び細胞内hCD3ζ(hCD3ゼータ)シグナル伝達ドメインを含む融合タンパク質であって、前記一本鎖可変断片抗体ドメイン(scFv)が、配列番号9又は配列番号11であるアミノ酸配列を有することを特徴とする、融合タンパク質。
前記ヒンジ及び前記膜貫通ドメインが、配列番号1のアミノ酸配列を有し、前記hCD28シグナル伝達ドメインが、配列番号2のアミノ酸配列を有し、前記hCD3ζ(hCD3ゼータ)シグナル伝達ドメインが、配列番号3のアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項1に記載の使用のための融合タンパク質。
前記ヒンジが、配列番号4のアミノ酸配列を有するhΔFc IgGドメインであることを特徴とする、請求項1に記載の使用のための融合タンパク質。
前記ヒンジ及びCD8膜貫通ドメインである前記膜貫通ドメインが、配列番号1のアミノ酸配列を有し、前記hCD28シグナル伝達ドメインが、配列番号2のアミノ酸配列を有し、hCD3ζドメインが、配列番号3のアミノ酸配列を有するか、又は前記hCD3ζシグナル伝達ドメインを含む前記hCD28シグナル伝達ドメインが、配列番号5のアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、CD4⁺CD25⁺CD127^lowHLA-A^*02陰性のヒト制御性T(Treg)細胞において発現されることを特徴とする、請求項1から4のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、外因性ヒトFOXP3を発現するように遺伝子操作されたTreg細胞において発現される、請求項1から5のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記患者が、HLA-A^*02陰性であること、及び前記患者が、HLA-A^*02陽性である固形組織移植片を含有するか、又はそれを含有することが意図されることを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
配列番号10のシグナルペプチドが、配列番号9又は配列番号11のN末端に配置されることを特徴とする、請求項1から7のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、N末端からC末端に、配列番号9若しくは配列番号11のアミノ酸配列を有する1つのscFvドメイン、配列番号1のアミノ酸配列を有するヒンジ及び膜貫通ドメイン、配列番号2のアミノ酸配列を有するhCD28シグナル伝達ドメイン、並びに配列番号3のアミノ酸配列を有するhCD3ζ(hCD3ゼータ)シグナル伝達ドメインを含むか、又はそれらからなることを特徴とする、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、N末端からC末端に、配列番号9若しくは配列番号11のアミノ酸配列を有する1つのscFvドメイン、配列番号4のアミノ酸配列を有するヒンジとしてのhΔFc IgGドメイン、配列番号5のアミノ酸配列を有するhCD28膜貫通ドメイン及びhCD28/hCD3シグナル伝達ドメインを含むか、又はそれらからなることを特徴とする、請求項1から9のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、N末端に配列番号10のシグナルペプチドを追加的に含むことを特徴とする、請求項9又は10に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、前記融合タンパク質をコードする核酸配列から発現されることを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、N末端分泌リーダーペプチドを追加的に含むことを特徴とする、請求項12に記載の使用のための融合タンパク質。
前記融合タンパク質が、追加のN末端分泌リーダーペプチド及び配列番号6のアミノ酸配列を有する追加のC末端P2A-hFOXP3を有する融合タンパク質をコードする核酸配列から発現されることを特徴とする、請求項1から13のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
リーダーペプチドが、配列番号8のアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項12から14のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
HLA-A^*02陽性の固形の存在下で、CD4⁺CD25⁺CD127^lowHLA-A^*02陰性のヒト制御性T(Treg)細胞に対する抑制活性を提供することを特徴とする、請求項1から15のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
CD4⁺CD25⁺CD127^lowHLA-A^*02陰性のヒト制御性T(Treg)細胞における二次リンパ器官へのホーミング能力を提供することを特徴とする、請求項1から16のいずれか一項に記載の使用のための融合タンパク質。
HLA-A^*02陽性の固形組織の存在下で抑制活性を有するヒト制御性T(Treg)細胞を提供するための方法であって、
a.血液試料から、CD4⁺CD25⁺CD127^lowヒト制御性T(Treg)細胞を単離して、単離されたTreg細胞を生成する工程、
b.請求項1から15のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコード及び発現する核酸配列を、前記単離されたTreg細胞に導入して、前記融合タンパク質を発現するTreg細胞を生成する工程
を含み、
前記融合タンパク質を発現する前記Treg細胞が、インビトロ培養で増えない、方法。
前記ヒト制御性T細胞を単離することが、HLA-A^*02陰性のヒト制御性T細胞を単離することであることを特徴とする、請求項18に記載の方法。
前記核酸配列が、レトロウイルス粒子にパッケージされるレトロウイルスベクターに含まれ、形質導入によって前記単離されたTreg細胞に導入されることを特徴とする、請求項18又は19に記載の方法。
工程b.の後、前記Treg細胞が、培養を24時間維持され、続いて前記融合タンパク質を発現するTreg細胞を単離することを特徴とする、請求項18から20のいずれか一項に記載の方法。
前記Treg細胞が、低用量のIL-2を含有する培地中で培養を維持され、培地が、Treg細胞の増殖を刺激する作用物質を含有しないことを特徴とする、請求項21に記載の方法。
請求項1から17のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする核酸構築物を含有するTreg細胞。