JPWO2020198397A5 - - Google Patents
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Description
本開示の主題の態様は、すべての形態で具体化し得るものであり、これ以後に続く説明は、単に、こうした形態のいくつかを、本開示が包含する主題の具体例として開示することを意図するものにすぎない。したがって、本開示の主題は、そのように説明される形態または態様に限定されないものとする。
項１
移植のための個別化された、ヒト化された、移植可能な細胞、組織、及び臓器のリポジトリを生成及び保存するための生物学的システムであって、前記生物学的システムが、生物学的に活性及び代謝的に活性であり、前記生物学的システムが、ヒトレシピエントへの移植のために非ヒト動物において遺伝的に再プログラムされた細胞、組織、及び臓器を含み、
前記非ヒト動物が、遺伝的に再プログラムされたブタから単離された細胞、組織、及び／または臓器の異種移植のための前記遺伝的に再プログラムされたブタであり、前記遺伝的に再プログラムされたブタが、野生型ブタの主要組織適合性複合体の複数のエクソン領域中の複数のヌクレオチドを、ヒト捕捉参照配列からの複数の合成ヌクレオチドで置き換えるように再プログラムされている核ゲノムを含み、
前記遺伝的に再プログラムされたブタの細胞が、アルファ－Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ｇｃ、及びＳＤ
ａ
から選択される１つ以上の表面糖鎖エピトープを提示せず、
アルファ－１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ、シチジン一リン酸－Ｎ－アセチルノイラミン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＭＡＨ）、及びβ１，４－Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼをコードする遺伝子が、前記遺伝的に再プログラムされたブタが、前記遺伝子によってコードされる表面糖鎖エピトープの機能的発現を欠くように改変され、
前記再プログラムされたゲノムが、以下：ｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、及びＳＬＡ－３のうちの少なくとも１つ、ならびにｉｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８のうちの少なくとも１つ、ならびにｉｉｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＲ及びＨＬＡ－ＤＱのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－ＤＲ及びＳＬＡ－ＤＱのうちの少なくとも１つの、エクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含み、
前記再プログラムされたゲノムが、以下のＡ～Ｃ：
Ａ）再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ヒト捕捉参照配列からの既知のヒトβ２－ミクログロブリンのオルソロガスなエクソンからのヌクレオチドでの、前記野生型ブタのβ２－ミクログロブリンのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む；
Ｂ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるベータ２ミクログロブリン糖タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるヒト化ベータ２ミクログロブリン（ｈＢ２Ｍ）ポリペプチド配列であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む；
Ｃ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ブタの内因性β２－ミクログロブリン遺伝子座において、前記核ゲノムが、前記ヒトレシピエントのβ２－ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むように再プログラムされているように、再プログラムされている；のうちの少なくとも１つを含み、
前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記遺伝的に再プログラムされたブタが前記野生型ブタの内因性β２－ミクログロブリンポリペプチドの機能的発現を欠くように再プログラムされており、
前記再プログラムが、いかなるフレームシフトまたはフレーム破壊も導入しない、前記生物学的システム。
項２
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、非トランスジェニックである、項１に記載の生物学的システム。
前記野生型ブタのゲノムのイントロン領域が、再プログラムされていない、項１または項２に記載の生物学的システム。
項３
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、少なくとも以下：Ａｓｃａｒｉｓ種、ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ種、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｓ ｓｔｅｒｏｃｏｌｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ種、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ブタ生殖器呼吸器症候群、仮性狂犬病、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｍｉｃｒｏｐｈｙｔｏｎ種、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ種、ブタインフルエンザ、ブタサイトメガロウイルス、アルテリウイルス、コロナウイルス、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、及び家畜関連メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの病原体を含まない、項１～３のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項４
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、バイオバーデン低減手順に従って維持され、前記手順が、隔離された閉鎖群中で前記ブタを維持することを含み、前記隔離された閉鎖群中のすべての他の動物が、前記病原体を含まないことが確認され、前記ブタが、前記隔離された閉鎖群の外部の任意の非ヒト動物及び動物収容施設との接触から隔離される、項１～４のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項５
前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつＳＬＡ－３、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、ＳＬＡ－８、ＳＬＡ－ＤＱ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＥＰＣＲ、ＴＢＭ、ＴＦＰＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンをコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ－２－ミクログロブリン、ＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、及びＳＬＡ－ＤＲの機能的発現を欠く、項１～４のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項６
前記野生型ブタゲノムが、ＣＴＬＡ－４プロモーター及びＰＤ－Ｌ１プロモーターのうちの１つ以上において再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ＣＴＬＡ－４プロモーター及び前記ＰＤ－Ｌ１プロモーターのうちの１つ以上が、前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４及びＰＤ－Ｌ１の内因性発現と比較して、再プログラムされたＣＴＬＡ－４及び再プログラムされたＰＤ－Ｌ１のうちの１つまたは両方の発現を増加させるように再プログラムされる、項１～５のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項７
前記合成されたヌクレオチドの総数が、前記合成されたヌクレオチドで前記野生型ブタの前記ゲノムを再プログラムした後に、ヌクレオチドの数に正味の損失または正味の利得がないように、前記置換されたヌクレオチドの総数に等しい、項１～６のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項８
前記複数の合成ヌクレオチドによる前記再プログラムが、前記野生型ブタＭＨＣ配列と前記ヒト捕捉参照配列との間で保存されるアミノ酸をコードするコドン領域におけるヌクレオチドの置換を含まない、項１～７のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項９
前記再プログラムされたゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列由来のオルソロガスなヌクレオチドでの、前記野生型ブタの前記主要組織適合性複合体におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～８のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１０
部位特異的変異原性置換が、前記非ヒト動物を産生するために使用される生殖細胞において作製される、項１～９のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１１
前記ヒト捕捉参照配列が、ヒト患者捕捉配列、ヒト集団特異的ヒト捕捉配列、またはアレル群特異的ヒト捕捉配列である、項１～１０のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１２
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ａ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１１のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１３
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ｂ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－２のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１２のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１４
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ｃ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－３のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１３のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１５
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ｅ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－６のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１４のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１６
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ｆ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－７のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１５のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１７
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ｇ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－８のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１６のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１８
前記再プログラムされたゲノムが、前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩ鎖関連２（ＭＩＣ－２）のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１７のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項１９
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、ＳＬＡ－ＤＲ、またはそれらの組み合わせの機能的発現を欠く、項１～１８のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２０
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－ＤＱＡ１捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来する、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＱＡのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～１９のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２１
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－ＤＱＢ１捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来する、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＱＢのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～２０のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２２
前記再プログラムされたゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＲＡ１及びＳＬＡ－ＤＲＢ１のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＲＡ及びＳＬＡ－ＤＲＢ１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含むか、または前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－ＤＲＡ及びＳＬＡ－ＤＲＢ１の機能的発現を欠く、項１～２１のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２３
前記再プログラムされたゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＱＡ１及びＨＬＡ－ＤＱＢ１のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＱＡ及びＳＬＡ－ＤＱＢ１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～２２のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２４
前記ヌクレオチドの部位特異的変異原性置換が、前記野生型ブタの核ゲノムと既知のヒト配列との間で保存されないコドンにある、項１～２３のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２５
前記再プログラムされたゲノムが、既知のヒトＢ２－ミクログロブリンのオルソロガスなエクソンに由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＢ２－ミクログロブリンのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～２４のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２６
前記再プログラムされたブタ核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるベータ２ミクログロブリン糖タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるヒト化ベータ２ミクログロブリン（ｈＢ２Ｍ）ポリペプチド配列であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、項１～２５のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２７
前記核ゲノムが、前記遺伝的に再プログラムされたブタが前記野生型ブタの内因性β２－ミクログロブリンポリペプチドの機能的発現を欠くように再プログラムされている、項１～２６のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２８
前記核ゲノムが、前記ブタの内因性β２－ミクログロブリン遺伝子座において、前記核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列のβ２－ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むように再プログラムされているように、再プログラムされている、項１～２７のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項２９
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－３、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、ＳＬＡ－８、及びＭＩＣ－２のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～２８のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３０
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－ＤＱ及びＭＩＣ－２のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～２９のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３１
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－３、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、ＳＬＡ－８、ＳＬＡ－ＤＱ、及びＭＩＣ－２におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～３０のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３２
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－ＤＲ、ＳＬＡ－１、及び／またはＳＬＡ－２の機能的発現を欠く、項１～３１のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３３
前記核ゲノムが、前記エクソン領域のスカーレス交換を使用して再プログラムされ、フレームシフト、挿入変異、欠失変異、ミスセンス変異、及びナンセンス変異が存在しない、項１～３２のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３４
前記核ゲノムが、フレームシフト、ナンセンス、またはミスセンス変異を介してタンパク質発現の破壊を引き起こし得る、いかなる正味の挿入、欠失、切断、または他の遺伝子改変も導入せずに再プログラムされる、項１～３３のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３５
前記核ゲノムのイントロン領域におけるヌクレオチドが改変されない、項１～３４のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３６
前記核ゲノムが、前記再プログラムされたエクソン領域においてホモ接合であるように再プログラムされる、項１～３５のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３７
前記核ゲノムが、ポリペプチドの細胞外、表現型表面発現がヒトレシピエントにおいて免疫寛容性であるように再プログラムされる、項１～３６のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３８
前記核ゲノムが、ＣＴＬＡ－４プロモーター配列を再プログラムすることによって、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）の発現が増加するように再プログラムされる、項１～３７のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項３９
前記再プログラムされたゲノムが、ヒト捕捉参照配列ＣＴＬＡ－４のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ＣＴＬＡ－４のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～３８のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項４０
前記再プログラムされた核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるＣＴＬＡ－４と少なくとも９５％同一であるヒト化ＣＴＬＡ－４ポリペプチド配列であるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、項１～３９のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項４１
前記核ゲノムが、ＰＤ－Ｌ１プロモーター配列を再プログラムすることによって、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現が増加するように再プログラムされる、項１～４０のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項４２
前記再プログラムされたゲノムが、既知のヒトＰＤ－Ｌ１のオルソロガスなエクソンに由来するヌクレオチドでの、前記野生型ＰＤ－Ｌ１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項１～４１のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項４３
前記再プログラムされた核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるＰＤ－Ｌ１と少なくとも９５％同一であるヒト化ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列であるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、項１～４２のいずれか１項に記載の生物学的システム。
項４４
項１～４３のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた、遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝活性な、非ヒト細胞、組織、または器官。
項４５
前記遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝的に活性な非ヒト細胞が、幹細胞、胚性幹細胞、多能性幹細胞、または分化幹細胞である、項４４に記載の、遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝的に活性な非ヒト細胞、組織、または臓器。
項４６
前記幹細胞が、造血幹細胞である、項４５に記載の、遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝活性な非ヒト細胞、組織、または臓器。
項４７
前記遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝的に活性な非ヒト組織が、神経、骨、または皮膚である、項４４に記載の、遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝的に活性な非ヒト細胞、組織、または臓器。
項４８
前記遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝的に活性な非ヒト臓器が、固形臓器である、項４４に記載の、遺伝的に再プログラムされた、生物学的に活性及び代謝的に活性な非ヒト細胞、組織、または臓器。
項４９
アルファ－Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ｇｃ、及びＳＤ
ａ
から選択される表面糖鎖エピトープの機能的発現を欠き、かつヒト捕捉参照配列のヒト化表現型を発現するように遺伝的に再プログラムされる核ゲノムを含む、遺伝的に再プログラムされたブタを調製する方法であって、
ｆ．ブタ胎児線維芽細胞、ブタ接合体、ブタ誘導多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）、またはブタ生殖細胞を得ることと、
ｇ．ａ）中の前記細胞を、機能的アルファ－１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ、シチジン一リン酸－Ｎ－アセチルノイラミン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＭＡＨ）、及びβ１，４，Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼを欠くように遺伝子的に改変することと、
ｈ．ｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、及びＳＬＡ－３のうちの少なくとも１つの、ならびにｉｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８のうちの少なくとも１つの、ならびにｉｉｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＲ及びＨＬＡ－ＤＱのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－ＤＲ及びＳＬＡ－ＤＱのうちの少なくとも１つの、エクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換のために、規則的な間隔でクラスター化した短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）を用いて、ｂ）中の前記細胞を遺伝的に再プログラムすることと、
ここで、前記野生型ブタのゲノムのイントロン領域は再プログラムされておらず、
前記再プログラムされたゲノムは、以下のＡ～Ｃ：
Ａ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ヒト捕捉参照配列からの既知のヒトβ２－ミクログロブリンのオルソロガスなエクソンからのヌクレオチドでの、前記野生型ブタのβ２－ミクログロブリンのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む；
Ｂ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるベータ２ミクログロブリンと少なくとも９５％同一であるヒト化ベータ２ミクログロブリン（ｈＢ２Ｍ）ポリペプチド配列であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む；
Ｃ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記遺伝的に再プログラムされたブタが、前記野生型ブタの内因性β２－ミクログロブリンポリペプチドの機能的発現を欠くように再プログラムされ、前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、ブタの内因性β２－ミクログロブリン遺伝子座において、前記核ゲノムが、前記ヒトレシピエントのβ２－ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むように再プログラムされている；の少なくとも１つを含み、
前記再プログラムは、いかなるフレームシフトまたはフレーム破壊も導入しておらず、
ｉ．ｃ）中の前記遺伝的に再プログラムされた細胞から胚を生成することと、
ｊ．前記胚を代用ブタに移植し、前記移植された胚を前記代用ブタ内で成長させることと、を含む、前記方法。
項５０
ステップ（ａ）が、前記ヒト捕捉参照配列からの主要な組織適合性複合体配列のオルソロガスなエクソン領域からのヌクレオチドでの、野生型ブタの主要な組織適合性複合体の複数のエクソン領域における複数のヌクレオチドの置き換えをさらに含み、前記置き換えが、いかなるフレームシフトまたはフレーム破壊も導入しない、項４９に記載の方法。
項５１
前記置き換えが、前記既知のヒト主要組織適合性複合体配列に由来するオルソロガスなヌクレオチドでの、前記野生型ブタの前記主要組織適合性複合体におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９または５０に記載の方法。
項５２
前記ヒト捕捉参照配列が、ヒト患者捕捉配列、ヒト集団特異的ヒト捕捉配列、またはアレル群特異的ヒト捕捉配列である、項４９～５１のいずれか１項に記載の方法。
項５３
前記オルソロガスなエクソン領域が、前記野生型ブタの主要組織適合性複合体の１つ以上の多型糖タンパク質である、項４９～５２のいずれか１項に記載の方法。
項５４
Ａ）前記代理ブタに前記胚を埋め込み、前記胚を妊娠させ、帝王切開によって前記代理ブタから子ブタを出産させることと、
Ｂ）少なくとも下記：
（ｉ）糞便物質中のＡｓｃａｒｉｓ種、ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ種、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｓ ｓｔｅｒｏｃｏｌｉｓ、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、
（ｉｉ）抗体力価を決定することによる、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）、仮性狂犬病、伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥ）／ブタ呼吸器コロナウイルス、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ Ｇｏｎｄｉｉ、
（ｉｉｉ）ブタインフルエンザ、
（ｉｖ）細菌培養によって決定される以下の細菌病原体：Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｃｅｐｔｉｃａ、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌、家畜関連メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＬＡ ＭＲＳＡ）、Ｍｉｃｒｏｐｈｙｔｏｎ、及びＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ．、
（ｖ）ブタサイトメガロウイルス、ならびに
（ｖｉ）Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、の人畜共通感染症病原体を前記子ブタが含まないことを確認することと、
Ｃ）バイオバーデン低減手順に従って前記子ブタを維持することであって、前記手順が、隔離された閉鎖群中で前記子ブタを維持することを含み、前記隔離された閉鎖群中のすべての他の動物が、前記人畜共通感染症病原体を含まないことが確認され、前記子ブタが、前記隔離された閉鎖群の外部の任意の非ヒト動物及び動物収容施設との接触から隔離される、前記維持することと、をさらに含む、項４９～５３のいずれか１項に記載の方法。
項５５
前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつＳＬＡ－３、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、ＳＬＡ－８、ＳＬＡ－ＤＱ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＥＰＣＲ、ＴＢＭ、ＴＦＰＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンをコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ－２－ミクログロブリン、ＳＬＡ－ＤＲ、ＳＬＡ－１、及びＳＬＡ－２の機能的発現を欠く、項４９～５４のいずれか１項に記載の方法。
項５６
前記野生型ブタゲノムが、ＣＴＬＡ－４プロモーター及びＰＤ－Ｌ１プロモーターのうちの１つ以上において再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ＣＴＬＡ－４プロモーター及び前記ＰＤ－Ｌ１プロモーターのうちの１つ以上が、前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４及びＰＤ－Ｌ１の内因性発現と比較して、再プログラムされたＣＴＬＡ－４及び再プログラムされたＰＤ－Ｌ１のうちの１つまたは両方の発現を増加させるように再プログラムされる、項４９～５５のいずれか１項に記載の方法。
項５７
前記合成されたヌクレオチドの総数が、前記合成されたヌクレオチドで前記野生型ブタのゲノムを再プログラムした後に、ヌクレオチドの数に正味の損失または正味の利得がないように、前記置換されたヌクレオチドの総数に等しい、項４９～５６のいずれか１項に記載の方法。
項５８
前記複数の合成ヌクレオチドによる前記再プログラムが、前記野生型ブタＭＨＣ配列と前記ヒト捕捉参照配列との間で保存されるアミノ酸をコードするコドン領域におけるヌクレオチドの置換を含まない、項４９～５７のいずれか１項に記載の方法。
項５９
前記再プログラムされたゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列由来のオルソロガスなヌクレオチドでの、前記野生型ブタの前記主要組織適合性複合体におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～５８のいずれか１項に記載の方法。
項６０
部位特異的変異原性置換が、前記非ヒト動物を産生するために使用される生殖細胞において作製される、項４９～５９のいずれか１項に記載の方法。
項６１
前記ヒト捕捉参照配列が、ヒト患者捕捉配列、ヒト集団特異的ヒト捕捉配列、またはアレル群特異的ヒト捕捉配列である、項４９～６０のいずれか１項に記載の方法。
項６２
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ａ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～６１のいずれか１項に記載の方法。
項６３
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－Ｂ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－２のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～６２のいずれか１項に記載の方法。
項６４
前記再プログラムされたゲノムが、前記野生型ブタのＳＬＡ－３のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換と、ＨＬＡ－Ｃ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドとを含む、項４９～６３のいずれか１項に記載の方法。
項６５
前記再プログラムされたゲノムが、前記野生型ブタのＳＬＡ－６のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換と、ＨＬＡ－Ｅ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドとを含む、項４９～６４のいずれか１項に記載の方法。
項６６
前記再プログラムされたゲノムが、前記野生型ブタのＳＬＡ－７のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換と、ＨＬＡ－Ｆ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドとを含む、項４９～６５のいずれか１項に記載の方法。
項６７
前記再プログラムされたゲノムが、前記野生型ブタのＳＬＡ－８のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換と、ＨＬＡ－Ｇ捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドとを含む、項４９～６６のいずれか１項に記載の方法。
項６８
前記再プログラムされたゲノムが、前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩ鎖関連２（ＭＩＣ－２）のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～６７のいずれか１項に記載の方法。
項６９
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、ＳＬＡ－ＤＲ、またはそれらの組み合わせの機能的発現を欠く、項４９～６８のいずれか１項に記載の方法。
項７０
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－ＤＱＡ１捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来する、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＱＡのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～６９のいずれか１項に記載の方法。
項７１
前記再プログラムされたゲノムが、ＨＬＡ－ＤＱＢ１捕捉参照配列のオルソロガスなエクソン領域に由来する、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＱＢのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～７０のいずれか１項に記載の方法。
項７２
前記再プログラムされたゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＲＡ１及びＨＬＡ－ＤＲＢ１のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＲＡ及びＳＬＡ－ＤＲＢ１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～７１のいずれか１項に記載の方法。
項７３
前記再プログラムされたゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＱＡ１及びＨＬＡ－ＤＱＢ１のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＱＡ及びＳＬＡ－ＤＱＢ１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～７２のいずれか１項に記載の方法。
項７４
前記ヌクレオチドの部位特異的変異原性置換が、前記野生型ブタの核ゲノムと前記既知のヒト配列との間で保存されないコドンにある、項４９～７３のいずれか１項に記載の方法。
項７５
前記再プログラムされたゲノムが、既知のヒトＢ２－ミクログロブリンのオルソロガスなエクソンに由来するヌクレオチドでの、前記野生型ブタのＢ２－ミクログロブリンのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～７４のいずれか１項に記載の方法。
項７６
前記再プログラムされたブタ核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるベータ２ミクログロブリン糖タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるヒト化ベータ２ミクログロブリン（ｈＢ２Ｍ）ポリペプチド配列であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、項４９～７５のいずれか１項に記載の方法。
項７７
前記核ゲノムが、前記遺伝的に再プログラムされたブタが前記野生型ブタの内因性β２－ミクログロブリンポリペプチドの機能的発現を欠くように再プログラムされている、項４９～７６のいずれか１項に記載の方法。
項７８
前記核ゲノムが、前記ブタの内因性β２－ミクログロブリン遺伝子座において、前記核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列のβ２－ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むように再プログラムされるように、再プログラムされている、項４９～７７のいずれか１項に記載の方法。
項７９
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－３、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、ＳＬＡ－８、及びＭＩＣ－２のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～７８のいずれか１項に記載の方法。
項８０
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－ＤＱ及びＭＩＣ－２のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～７９のいずれか１項に記載の方法。
項８１
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－３、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、ＳＬＡ－８、ＳＬＡ－ＤＱ、及びＭＩＣ－２におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～８０のいずれか１項に記載の方法。
項８２
前記再プログラムされたゲノムが、ＳＬＡ－ＤＲ、ＳＬＡ－１、及び／またはＳＬＡ－２の機能的発現を欠く、項４９～８１のいずれか１項に記載の方法。
項８３
前記核ゲノムが、フレームシフト、挿入変異、欠失変異、ミスセンス変異、及びナンセンス変異が存在しない、前記エクソン領域のスカーレス交換を使用して再プログラムされる、項４９～８２のいずれか１項に記載の方法。
項８４
前記核ゲノムが、フレームシフト、ナンセンス、またはミスセンス変異を介してタンパク質発現の破壊を引き起こし得る、いかなる正味の挿入、欠失、切断、または他の遺伝子改変も導入せずに再プログラムされる、項４９～８３のいずれか１項に記載の方法。
項８５
前記核ゲノムのイントロン領域におけるヌクレオチドが改変されない、項４９～８４のいずれか１項に記載の方法。
項８６
前記核ゲノムが、前記再プログラムされたエクソン領域においてホモ接合であるように再プログラムされる、項４９～８５のいずれか１項に記載の方法。
項８７
前記核ゲノムが、ポリペプチドの細胞外、表現型表面発現がヒトレシピエントにおいて免疫寛容性であるように再プログラムされる、項４９～８６のいずれか１項に記載の方法。
項８８
前記核ゲノムが、ＣＴＬＡ－４プロモーター配列を再プログラムすることによって、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）の発現が増加するように再プログラムされる、項４９～８７のいずれか１項に記載の方法。
項８９
前記再プログラムされたゲノムが、ヒト捕捉参照配列ＣＴＬＡ－４のオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、前記野生型ＣＴＬＡ－４のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～８８のいずれか１項に記載の方法。
項９０
前記再プログラムされた核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるＣＴＬＡ－４と少なくとも９５％同一であるヒト化ＣＴＬＡ－４ポリペプチド配列であるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、項４９～８９のいずれか１項に記載の方法。
項９１
前記核ゲノムが、ＰＤ－Ｌ１プロモーター配列を再プログラムすることによって、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現が増加するように再プログラムされる、項４９～９０のいずれか１項に記載の方法。
項９２
前記再プログラムされたゲノムが、既知のヒトＰＤ－Ｌ１のオルソロガスなエクソンに由来するヌクレオチドでの、前記野生型ＰＤ－Ｌ１のエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む、項４９～９１のいずれか１項に記載の方法。
項９３
前記再プログラムされた核ゲノムが、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるＰＤ－Ｌ１と少なくとも９５％同一であるヒト化ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列であるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、項４９～９２のいずれか１項に記載の方法。
項９４
レシピエントヒトにおける、異種移植細胞、組織、または臓器に対する少なくとも部分的な免疫寛容を誘導する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつ前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩｂ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンをコードする１つ以上のエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ－２－ミクログロブリンの機能的発現を欠く、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項９５
異種移植片のナチュラルキラー細胞媒介性拒絶反応を低減する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつ前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩｂ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ２－ミクログロブリンの機能的発現を欠き、前記野生型ブタゲノムが、前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４及びＰＤ－Ｌ１のうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含む、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項９６
異種移植片の細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球媒介性拒絶反応を低減する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつ前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩｂ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ２－ミクログロブリンの機能的発現を欠き、前記野生型ブタゲノムが、前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４及びＰＤ－Ｌ１のうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含む、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項９７
レシピエントヒトにおける、異種移植細胞、組織、または臓器に対する凝固性及び／または血栓性虚血を予防または低減する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつ前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩｂ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ２－ミクログロブリンの機能的発現を欠き、前記野生型ブタゲノムが、前記野生型ブタの内皮細胞タンパク質Ｃ受容体（ＥＰＣＲ）、トロンボモジュリン（ＴＢＭ）、及び組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）のうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含む、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項９８
異種移植片のＭＨＣクラスＩａ媒介性拒絶反応を低減する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつＳＬＡ－３及び前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩｂ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ－２－ミクログロブリン、ＳＬＡ－１、及びＳＬＡ－２の機能的発現を欠く、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項９９
異種移植片のＭＨＣクラスＩｂ媒介性拒絶反応を低減する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８、ならびに前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ－２－ミクログロブリンの機能的発現を欠く、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項１００
異種移植片のＭＨＣクラスＩＩ媒介性拒絶反応を低減する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつＳＬＡ－ＤＲ及びＳＬＡ－ＤＱの少なくとも１つ、ならびに前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩｂ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ－２－ミクログロブリンの機能的発現を欠く、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項１０１
異種移植片のアポトーシス細胞媒介性拒絶反応を阻害する方法であって、
ａ．項１～４８のいずれか１項に記載の生物学的システムから得られた非ヒト細胞、組織、または臓器を産生するかまたは得ることであって、前記野生型ブタゲノムが、前記ヒト捕捉参照配列を使用して、ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子において、かつ前記野生型ブタのＭＨＣクラスＩａ、ＭＨＣクラスＩｂ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びベータ－２－ミクログロブリンのうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含み、前記ヒト細胞、組織、または臓器が、ブタベータ２－ミクログロブリンの機能的発現を欠き、前記野生型ブタゲノムが、前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４及びＰＤ－Ｌ１のうちの１つ以上をコードするエクソン領域において、再プログラムされたヌクレオチドを含む、前記産生するかまたは得ることと、
ｂ．前記非ヒト細胞、組織、または臓器を前記レシピエントヒトに移植することと、を含む、前記方法。
項１０２
異種移植のためのドナーブタ組織または臓器を産生する方法であって、前記ドナーブタ組織または臓器の細胞が、
ａ．有望なヒト移植レシピエントからＤＮＡを含有する生体試料を得ることと、
ｂ．前記生体試料の全ゲノム配列決定を行って、ヒト捕捉参照配列を得ることと、
ｃ．前記ヒト捕捉参照配列を、遺伝子座（ｉ）～（ｖ）：
（ｉ）ＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、及びＳＬＡ－３のうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域；
（ｉｉ）ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８のうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域；
（ｉｉｉ）ＳＬＡ－ＤＲ及びＳＬＡ－ＤＱのうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域；
（ｉｖ）ベータ２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）をコードする１つ以上のエクソン；
（ｖ）ＳＬＡ－ＭＩＣ－２遺伝子、ならびにＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＥＰＣＲ、ＴＢＭ、及びＴＦＰＩのうちの少なくとも１つをコードする遺伝子のエクソン領域で前記ドナーブタの前記野生型ゲノムと比較することと、
ｄ．前記遺伝子座（ｉ）～（ｖ）のうちの１つ以上について１０～３５０塩基対の長さの合成ドナーブタヌクレオチド配列を作成することであって、前記合成ドナーブタヌクレオチド配列が、ブタ遺伝子座（ｉ）～（ｖｉ）にそれぞれ対応するオルソロガスな遺伝子座（ｖｉ）～（ｘ）：
（ｖｉ）ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域；
（ｖｉｉ）ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域；
（ｖｉｉｉ）ＨＬＡ－ＤＲ及びＨＬＡ－ＤＱのうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域；
（ｉｘ）ヒトベータ２ミクログロブリン（ｈＢ２Ｍ）をコードする１つ以上のエクソン；
（ｘ）前記ヒト捕捉参照配列からのＭＩＣ－Ａ、ＭＩＣ－Ｂ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＥＰＣＲ、ＴＢＭ、及びＴＦＰＩのうちの少なくとも１つをコードするエクソン領域における前記ヒト捕捉参照配列と少なくとも９５％同一である、前記作成することと、
ｅ．（ｉ）～（ｖ）のヌクレオチド配列を前記合成ドナーブタヌクレオチド配列で置き換えることと、
ｆ．前記合成ドナーブタヌクレオチド配列を有する遺伝的に再プログラムされたブタから、異種移植のための前記ブタ組織または臓器を得ることと、を含む、レシピエント特異的表面表現型によって特徴付けられるように遺伝的に再プログラムされる、前記方法。
項１０３
前記合成ドナーブタヌクレオチド配列を有する前記遺伝的に再プログラムされたブタが、少なくとも以下：
（ｉ）糞便物質中のＡｓｃａｒｉｓ種、ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ種、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｓ ｓｔｅｒｏｃｏｌｉｓ、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、
（ｉｉ）抗体力価を決定することによる、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）、仮性狂犬病、伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥ）／ブタ呼吸器コロナウイルス、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ Ｇｏｎｄｉｉ、
（ｉｉｉ）ブタインフルエンザ、
（ｉｖ）細菌培養によって決定される以下の細菌病原体：Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｃｅｐｔｉｃａ、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌、家畜関連メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＬＡ ＭＲＳＡ）、Ｍｉｃｒｏｐｈｙｔｏｎ、及びＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ．、
（ｖ）ブタサイトメガロウイルス、ならびに
（ｖｉ）Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、の人獣共通病原体を含まないことを確認することをさらに含む、項１０２に記載の方法。
項１０４
バイオバーデン低減手順に従って前記遺伝的に再プログラムされたブタを維持することをさらに含み、前記手順が、隔離された閉鎖群中で前記遺伝的に再プログラムされたブタを維持することを含み、前記隔離された閉鎖群中のすべての他の動物が、前記人獣共通病原体を含まないことが確認され、前記遺伝的に再プログラムされたブタが、前記隔離された閉鎖群の外部の任意の非ヒト動物及び動物収容施設との接触から隔離される、項１０２または１０３に記載の方法。
項１０５
前記ブタから生物学的製品を収集することをさらに含み、前記収集することが、前記ブタを安楽死させること、及び前記ブタから前記生物学的製品を無菌的に取り出すことをさらに含む、項１０２～１０４のいずれか１項に記載の方法。
項１０６
３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）還元アッセイによって決定される５０％未満の細胞生存度に細胞生存度を低下させない滅菌プロセスを使用する収集後の滅菌を含む前記生物学的製品を加工することをさらに含む、項１０２～１０５のいずれか１項に記載の方法。
項１０７
細胞生存度を保存する貯蔵条件下で滅菌容器中で前記生物学的製品を貯蔵することをさらに含む、項１０２～１０６のいずれか１項に記載の方法。
項１０８
項１～４９のいずれか１項に記載の核ゲノムを含む、前記遺伝的に再プログラムされたブタにおけるオフターゲット編集またはゲノム改変についてスクリーニングする方法であって、
ｅ．前記ドナーブタ核ゲノムの遺伝的な再プログラムを行う前に、ドナーブタからのＤＮＡを含有する生体試料について全ゲノム配列決定を行い、それによって、第１の全ゲノム配列を取得すること、
ｆ．前記ドナーブタ核ゲノムの再プログラム後に、全ゲノム配列決定を行って、第２の全ゲノム配列を取得すること、
ｇ．前記第１の全ゲノム配列及び前記第２の全ゲノム配列を整列させて、配列アラインメントを取得すること、
ｈ．前記配列アラインメントを分析して、オフターゲット部位における前記ブタのゲノムに対する任意のミスマッチを識別することを含む、前記方法。
項１０９
野生型ブタＭＨＣクラスＩａ由来の野生型ブタイントロン領域を有し、ＳＬＡ－３と、ヒト捕捉参照配列由来のＨＬＡ－Ｃとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来のＨＬＡ－Ｃのコドンを用いて前記野生型ブタのＳＬＡ－３をコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１１０
前記野生型ブタのＳＬＡ－１及びＳＬＡ－２がそれぞれ、終止コドンを含む、項１０９に記載の合成ヌクレオチド配列。
項１１１
野生型ブタＭＨＣクラスＩｂ由来の野生型ブタイントロン領域を有し、ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８と、ヒト捕捉参照配列由来のＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇそれぞれとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇそれぞれのコドンを用いて前記野生型ブタの前記ＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８をコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１１２
項１０９及び１１１の両方、または項１１０及び１１１の両方に記載の合成ヌクレオチド配列を有する、合成ヌクレオチド配列。
項１１３
合成ヌクレオチド配列であって、野生型ブタＭＨＣクラスＩＩ由来の野生型ブタイントロン領域を有し、ＳＬＡ－ＤＱと、ヒト捕捉参照配列由来のＨＬＡ－ＤＱそれぞれとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＨＬＡ－ＤＱのコドンをそれぞれ用いて前記野生型ブタの前記ＳＬＡ－ＤＱをコードするエクソン領域で再プログラムされ、前記野生型ブタのＳＬＡ－ＤＲが終止コドンを含む、前記合成ヌクレオチド配列。
項１１４
項１０９及び１１３の両方、項１１０及び１１３の両方、または項１１２及び１１３の両方に記載の合成ヌクレオチド配列を有する、合成ヌクレオチド配列。
項１１５
合成ヌクレオチド配列であって、野生型ブタベータ２－ミクログロブリン由来の野生型ブタイントロン領域を有し、野生型ブタのベータ２－ミクログロブリンと、ヒト捕捉参照配列由来のベータ２－ミクログロブリンとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来のベータ２－ミクログロブリンのコドンを用いて前記野生型ブタのベータ２－ミクログロブリンをコードするエクソン領域で再プログラムされ、前記合成ヌクレオチド配列が、前記野生型ブタのβ２－ミクログロブリンポリペプチドの機能的発現を欠くように、エクソン領域内に少なくとも１つの終止コドンを含む、前記合成ヌクレオチド配列。
項１１６
野生型ブタＭＩＣ－２由来の野生型ブタイントロン領域を有し、ＭＩＣ－２と、ヒト捕捉参照配列由来のＭＩＣ－ＡまたはＭＩＣ－Ｂとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＭＩＣ－ＡまたはＭＩＣ－Ｂのコドンを用いて前記野生型ブタのＭＩＣ－２のエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１１７
野生型ブタＣＴＬＡ－４由来の野生型ブタイントロン領域を有し、前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４と、ヒト捕捉参照配列由来のＣＴＬＡ－４との間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＣＴＬＡ－４のコドンを用いて前記野生型ブタのＣＴＬＡ－４をコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１１８
野生型ブタＰＤ－Ｌ１由来の野生型ブタイントロン領域を有し、前記野生型ブタのＰＤ－Ｌ１と、ヒト捕捉参照配列由来のＰＤ－Ｌ１との間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＰＤ－Ｌ１のコドンを用いて前記野生型ブタのＰＤ－Ｌ１をコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１１９
野生型ブタＥＰＣＲ由来の野生型ブタイントロン領域を有し、前記野生型ブタのＥＰＣＲと、ヒト捕捉参照配列由来のＥＰＣＲとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＥＰＣＲのコドンを用いて前記野生型ブタのＥＰＣＲをコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１２０
野生型ブタＴＢＭ由来の野生型ブタイントロン領域を有し、前記野生型ブタのＴＢＭと、ヒト捕捉参照配列由来のＴＢＭとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＴＢＭのコドンを用いて前記野生型ブタのＴＢＭをコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
項１２１
野生型ブタＴＦＰＩ由来の野生型ブタイントロン領域を有し、前記野生型ブタのＴＦＰＩと、ヒト捕捉参照配列由来のＴＦＰＩとの間で保存されていないアミノ酸をコードする前記ヒト捕捉参照配列由来の前記ＴＦＰＩのコドンを用いて前記野生型ブタのＴＦＰＩをコードするエクソン領域で再プログラムされた、合成ヌクレオチド配列。
Aspects of the disclosed subject matter may be embodied in all forms, and the description that follows is intended to disclose only some of these forms as examples of the subject matter encompassed by this disclosure. It is nothing more than something to do. Accordingly, the subject matter of this disclosure is not to be limited to the forms or aspects so described.
Item 1
1. A biological system for generating and storing a personalized, humanized, transplantable cell, tissue, and organ repository for transplantation, said biological system comprising: biologically active and metabolically active, said biological system comprising cells, tissues, and organs genetically reprogrammed in a non-human animal for transplantation into a human recipient;
said non-human animal is said genetically reprogrammed pig for xenotransplantation of cells, tissues, and/or organs isolated from said genetically reprogrammed pig; A programmed pig has a nuclear genome that has been reprogrammed to replace multiple nucleotides in multiple exon regions of the wild-type pig major histocompatibility complex with multiple synthetic nucleotides from a human capture reference sequence. including
said genetically reprogrammed porcine cells do not present one or more surface carbohydrate epitopes selected from alpha-Gal, Neu5Gc, and SDa ;
Genes encoding alpha-1,3 galactosyltransferase, cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase (CMAH), and β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase are genetically reprogrammed. a pig that has been modified to lack functional expression of a surface carbohydrate epitope encoded by said gene;
The reprogrammed genome comprises: i) a wild-type pig SLA- 1, at least one of SLA-2 and SLA-3, and ii) with nucleotides derived from the respective orthologous exon regions of HLA-E, HLA-F and HLA-G of said human capture reference sequence. and iii) each orthologous exon region of HLA-DR and HLA-DQ of said human capture reference sequence. site-directed mutagenic substitution of a nucleotide in an exon region of at least one of wild-type pig SLA-DR and SLA-DQ with a nucleotide that is
wherein said reprogrammed genome comprises the following A-C:
A) The reprogrammed porcine nuclear genome contains nucleotides in the exon region of said wild-type porcine β2-microglobulin with nucleotides from known human β2-microglobulin orthologous exons from said human capture reference sequence. including site-directed mutagenic substitution;
B) said reprogrammed porcine nuclear genome is a humanized beta 2 microglobulin (hB2M) polypeptide sequence that is at least 95% identical to the amino acid sequence of beta 2 microglobulin glycoprotein expressed by said human capture reference genome; comprising a polynucleotide encoding a polypeptide;
C) said reprogrammed porcine nuclear genome comprises, at said porcine endogenous β2-microglobulin locus, said nuclear genome comprising a nucleotide sequence encoding a β2-microglobulin polypeptide of said human recipient; reprogrammed, as reprogrammed, including at least one of;
wherein said reprogrammed porcine nuclear genome has been reprogrammed such that said genetically reprogrammed pig lacks functional expression of the endogenous β2-microglobulin polypeptide of said wild-type pig;
Said biological system, wherein said reprogramming does not introduce any frameshifts or frame-breaks.
Item 2
2. The biological system of paragraph 1, wherein said genetically reprogrammed pig is non-transgenic.
3. The biological system of paragraph 1 or paragraph 2, wherein the intron regions of the wild-type pig genome have not been reprogrammed.
Item 3
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、少なくとも以下：Ａｓｃａｒｉｓ種、ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ種、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｓ ｓｔｅｒｏｃｏｌｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ種、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ブタ生殖器呼吸器症候群、仮性狂犬病、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｍｉｃｒｏｐｈｙｔｏｎ Trichophyton sp., swine influenza, porcine cytomegalovirus, arterivirus, coronavirus, Bordetella bronchiseptica, and livestock-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus pathogens. system.
Item 4
The genetically reprogrammed pig is maintained according to a bioburden reduction procedure, the procedure comprising maintaining the pig in an isolated, closed herd, and all others in the isolated, closed herd. are confirmed to be free of said pathogen, and said pigs are isolated from contact with any non-human animals and animal containment facilities outside said isolated closed herd or the biological system according to claim 1.
Item 5
said wild-type pig genome, using said human capture reference sequence, in the SLA-MIC-2 gene and SLA-3, SLA-6, SLA-7, SLA-8, SLA-DQ, CTLA-4, PD - containing reprogrammed nucleotides in the exon regions encoding L1, EPCR, TBM, TFPI, and beta-2-microglobulin, wherein said human cell, tissue, or organ is porcine beta-2-microglobulin, SLA- 5. The biological system of any one of paragraphs 1-4, wherein the biological system lacks functional expression of 1, SLA-2, and SLA-DR.
Item 6
wherein the wild-type pig genome comprises reprogrammed nucleotides in one or more of the CTLA-4 promoter and the PD-L1 promoter, wherein one or more of the CTLA-4 promoter and the PD-L1 promoter reprogrammed CTLA-4 and reprogrammed PD-L1 to increase expression of one or both of reprogrammed CTLA-4 and reprogrammed PD-L1 compared to the endogenous expression of CTLA-4 and PD-L1 in wild-type pigs. 6. The biological system of any one of paragraphs 1-5, which is programmed.
Item 7
of the substituted nucleotides such that there is no net loss or net gain in the number of nucleotides after reprogramming the genome of the wild-type pig with the synthesized nucleotides. 7. The biological system of any one of clauses 1-6, equal to the total number.
Item 8
8. Any of paragraphs 1-7, wherein said reprogramming with said plurality of synthetic nucleotides does not involve replacement of nucleotides in codon regions encoding amino acids that are conserved between said wild-type porcine MHC sequence and said human capture reference sequence. or the biological system according to claim 1.
Item 9
Paragraphs 1-8, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in said major histocompatibility complex of said wild-type pig with orthologous nucleotides derived from said human capture reference sequence. A biological system according to any one of the preceding claims.
Item 10
Clause 10. The biological system of any one of Clauses 1-9, wherein the site-directed mutagenic substitution is made in germ cells used to produce said non-human animal.
Item 11
11. The biological system of any one of paragraphs 1-10, wherein the human capture reference sequence is a human patient capture sequence, a human population-specific human capture sequence, or an allele group-specific human capture sequence.
Item 12
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine SLA-1 with nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-A capture reference sequence; 12. The biological system according to any one of Items 1-11.
Item 13
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-2 with nucleotides from orthologous exon regions of HLA-B capture reference sequences; 13. The biological system according to any one of Items 1-12.
Item 14
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-3 with nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-C capture reference sequence; 14. The biological system according to any one of Items 1-13.
Item 15
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine SLA-6 with nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-E capture reference sequence; 15. The biological system according to any one of Items 1-14.
Item 16
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine SLA-7 with nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-F capture reference sequence; Clause 16. The biological system according to any one of clauses 1-15.
Item 17
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine SLA-8 with nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-G capture reference sequence; Clause 17. The biological system according to any one of clauses 1-16.
Item 18
18. Any one of paragraphs 1 to 17, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of MHC class I chain-related 2 (MIC-2) of said wild-type pig. A biological system as described.
Item 19
Clause 19. The biological system of any one of Clauses 1-18, wherein said reprogrammed genome lacks functional expression of SLA-1, SLA-2, SLA-DR, or a combination thereof.
Item 20
Sections 1-, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-DQA derived from orthologous exon regions of an HLA-DQA1 capture reference sequence. 20. A biological system according to any one of 19.
Item 21
Sections 1-, wherein said reprogrammed genome is derived from an orthologous exon region of an HLA-DQB1 capture reference sequence, comprising site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine SLA-DQB; 21. A biological system according to any one of Clauses 20.
Item 22
nucleotides in the exon regions of SLA-DRA and SLA-DRB1 of the wild-type pig with nucleotides from the orthologous exon regions of HLA-DRA1 and SLA-DRB1 of the human capture reference sequence in which the reprogrammed genome is or said reprogrammed genome lacks functional expression of SLA-DRA and SLA-DRB1. system.
Item 23
nucleotides in exon regions of SLA-DQA and SLA-DQB1 of said wild-type pig, with nucleotides from said reprogrammed genome from orthologous exon regions of HLA-DQA1 and HLA-DQB1 of said human capture reference sequence; 23. The biological system according to any one of items 1 to 22, comprising a site-directed mutagenic substitution of
Item 24
24. The biological system of any one of paragraphs 1-23, wherein said site-directed mutagenic substitution of nucleotides is in codons that are not conserved between the nuclear genome of said wild-type pig and known human sequences. .
Item 25
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine B2-microglobulin with nucleotides from known human B2-microglobulin orthologous exons. 25. The biological system according to any one of items 1 to 24.
Item 26
wherein said reprogrammed porcine nuclear genome is a humanized beta 2 microglobulin (hB2M) polypeptide sequence that is at least 95% identical to the amino acid sequence of beta 2 microglobulin glycoprotein expressed by said human capture reference genome 26. The biological system of any one of Items 1-25, comprising a polynucleotide encoding a peptide.
Item 27
27. Any one of paragraphs 1-26, wherein said nuclear genome is reprogrammed such that said genetically reprogrammed pig lacks functional expression of endogenous β2-microglobulin polypeptide of said wild-type pig. A biological system according to clause.
Item 28
wherein said nuclear genome is reprogrammed at the porcine endogenous β2-microglobulin locus such that said nuclear genome comprises a nucleotide sequence encoding a β2-microglobulin polypeptide of said human capture reference sequence. 28. The biological system of any one of paragraphs 1-27, wherein the biological system is reprogrammed to .
Item 29
29. Any of paragraphs 1-28, wherein the reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of SLA-3, SLA-6, SLA-7, SLA-8, and MIC-2. or the biological system according to claim 1.
Item 30
30. The biological system of any one of paragraphs 1-29, wherein the reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of SLA-DQ and MIC-2.
Item 31
31. The method of paragraphs 1-30, wherein the reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in SLA-3, SLA-6, SLA-7, SLA-8, SLA-DQ, and MIC-2. A biological system according to any one of claims 1 to 3.
Item 32
32. The biological system of any one of paragraphs 1-31, wherein said reprogrammed genome lacks functional expression of SLA-DR, SLA-1 and/or SLA-2.
Item 33
33. The method of any one of paragraphs 1-32, wherein the nuclear genome is reprogrammed using scarless exchange of the exon regions and is free of frameshifts, insertion mutations, deletion mutations, missense mutations, and nonsense mutations. biological system.
Item 34
wherein said nuclear genome is reprogrammed without introducing any net insertions, deletions, truncations, or other genetic alterations that can cause disruption of protein expression via frameshift, nonsense, or missense mutations; 34. The biological system according to any one of 1-33.
Item 35
35. The biological system of any one of paragraphs 1-34, wherein the nucleotides in the intron regions of the nuclear genome are not modified.
Item 36
36. The biological system of any one of paragraphs 1-35, wherein said nuclear genome is reprogrammed to be homozygous in said reprogrammed exon region.
Item 37
37. The biological system of any one of paragraphs 1-36, wherein said nuclear genome is reprogrammed such that extracellular, phenotypic surface expression of the polypeptide is tolerogenic in a human recipient.
Item 38
38. Any of paragraphs 1-37, wherein the nuclear genome is reprogrammed to increase expression of cytotoxic T lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4) by reprogramming the CTLA-4 promoter sequence. 2. The biological system of paragraph 1.
Item 39
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type CTLA-4 with nucleotides derived from orthologous exon regions of human capture reference sequence CTLA-4. 39. The biological system according to any one of 1-38.
Item 40
Clauses 1-, wherein said reprogrammed nuclear genome comprises a polynucleotide encoding a protein that is a humanized CTLA-4 polypeptide sequence that is at least 95% identical to CTLA-4 expressed by said human capture reference genome. 40. A biological system according to any one of 39.
Item 41
41. The method of any one of paragraphs 1-40, wherein the nuclear genome is reprogrammed to increase expression of programmed cell death ligand 1 (PD-L1) by reprogramming the PD-L1 promoter sequence. biological system.
Item 42
Sections 1-, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type PD-L1 with nucleotides derived from known orthologous exons of human PD-L1. 42. A biological system according to any one of clauses 41 to 41.
Item 43
Clauses 1-, wherein said reprogrammed nuclear genome comprises a polynucleotide encoding a protein that is a humanized PD-L1 polypeptide sequence that is at least 95% identical to PD-L1 expressed by said human capture reference genome. 43. A biological system according to any one of Clauses 42.
Item 44
44. A genetically reprogrammed, biologically and metabolically active, non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of paragraphs 1-43.
Item 45
45. The genetic A biologically and metabolically active non-human cell, tissue, or organ that has been reprogrammed to
Item 46
46. The genetically reprogrammed, biologically and metabolically active non-human cell, tissue, or organ of Paragraph 45, wherein said stem cells are hematopoietic stem cells.
Item 47
45. The genetically reprogrammed biology of Paragraph 44, wherein said genetically reprogrammed biologically and metabolically active non-human tissue is nerve, bone, or skin. Non-human cells, tissues, or organs that are both genetically and metabolically active.
Item 48
45. The genetically reprogrammed, biologically active and Non-human cells, tissues, or organs that are metabolically active.
Item 49
comprising a nuclear genome that lacks functional expression of surface carbohydrate epitopes selected from alpha-Gal, Neu5Gc, and SDa and that is genetically reprogrammed to express a humanized phenotype of a human capture reference sequence , a method of preparing a genetically reprogrammed pig, comprising:
f. obtaining porcine fetal fibroblasts, porcine zygotes, porcine induced pluripotent stem cells (IPSCs), or porcine germ cells;
g. a) deficient in functional alpha-1,3 galactosyltransferase, cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase (CMAH), and β1,4,N-acetylgalactosaminyltransferase. genetically modifying to
h. i) Wild-type porcine SLA-1, SLA-2, and SLA-3 at nucleotides from the respective orthologous exon regions of HLA-A, HLA-B, and HLA-C of said human capture reference sequence. and ii) a wild-type porcine SLA-6 with nucleotides from the respective orthologous exon regions of HLA-E, HLA-F, and HLA-G of said human capture reference sequence; SLA of wild-type pigs with nucleotides from at least one of SLA-7 and SLA-8 and iii) orthologous exon regions of HLA-DR and HLA-DQ, respectively, of said human capture reference sequence. - using regularly spaced clustered short repeat palindromic sequences (CRISPR/Cas) for site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of at least one of DR and SLA-DQ and b) genetically reprogramming the cell in
wherein the intron regions of the wild-type pig genome have not been reprogrammed;
The reprogrammed genome comprises the following A-C:
A) The reprogrammed porcine nuclear genome comprises nucleotides in the wild-type porcine β2-microglobulin exon region with nucleotides from known human β2-microglobulin orthologous exons from the human capture reference sequence. including the site-directed mutagenic substitution of
B) said reprogrammed porcine nuclear genome encodes a polypeptide that is a humanized beta2 microglobulin (hB2M) polypeptide sequence that is at least 95% identical to beta2 microglobulin expressed by said human capture reference genome; comprising a polynucleotide that
C) said reprogrammed porcine nuclear genome is reprogrammed such that said genetically reprogrammed pig lacks functional expression of an endogenous β2-microglobulin polypeptide of said wild-type pig; The programmed porcine nuclear genome is reprogrammed at the porcine endogenous β2-microglobulin locus such that said nuclear genome comprises a nucleotide sequence encoding a β2-microglobulin polypeptide of said human recipient. including at least one of
said reprogramming did not introduce any frameshifting or frame corruption;
i. c) generating an embryo from the genetically reprogrammed cells in
j. and implanting the embryo into a foster pig, and growing the implanted embryo in the foster pig.
Item 50
step (a) is performed in multiple exon regions of the wild-type porcine major histocompatibility complex sequence at nucleotides from orthologous exon regions of the major histocompatibility complex sequence from the human capture reference sequence; 50. The method of Paragraph 49, further comprising a nucleotide replacement of , wherein said replacement does not introduce any frameshift or framebreak.
Item 51
wherein said replacement comprises site-directed mutagenic replacement of a nucleotide in said major histocompatibility complex of said wild-type pig with an orthologous nucleotide derived from said known human major histocompatibility complex sequence. The method according to 49 or 50.
Item 52
52. The method of any one of paragraphs 49-51, wherein the human capture reference sequence is a human patient capture sequence, a human population-specific human capture sequence, or an allele group-specific human capture sequence.
Item 53
53. The method of any one of paragraphs 49-52, wherein said orthologous exon region is one or more polymorphic glycoproteins of said wild-type porcine major histocompatibility complex.
Item 54
A) implanting the embryo in the surrogate, impregnating the embryo and delivering piglets from the surrogate by caesarean section;
B) at least:
(i) Ascaris species, cryptosporidium species, Echinococcus, Strongyloids sterocolis, and Toxoplasma gondii in fecal matter;
(ii) Leptospira species, Mycoplasma hyopneumoniae, porcine genital and respiratory syndrome virus (PRRSV), pseudorabies, infectious gastroenteritis virus (TGE)/porcine respiratory coronavirus, and Toxoplasma Gondii by determining antibody titers;
(iii) swine flu,
(iv) the following bacterial pathogens as determined by bacterial culture: Bordetella bronchisceptica, coagulase-positive staphylococci, coagulase-negative staphylococci, livestock-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus (LA MRSA), Microphyton, and Trichophyton spp. ,
(v) porcine cytomegalovirus, and
(vi) confirming that the piglets are free of the zoonotic agent of Brucella suis;
C) maintaining said piglets in accordance with a bioburden reduction procedure, said procedures comprising maintaining said piglets in an isolated closed herd, wherein all other piglets in said isolated closed herd are confirmed to be free of said zoonotic agent, and said piglets are isolated from contact with any non-human animals and animal containment facilities outside said isolated closed herd, said 54. The method of any one of paragraphs 49-53, further comprising: maintaining.
Item 55
said wild-type pig genome, using said human capture reference sequence, in the SLA-MIC-2 gene and SLA-3, SLA-6, SLA-7, SLA-8, SLA-DQ, CTLA-4, PD - containing reprogrammed nucleotides in the exon regions encoding L1, EPCR, TBM, TFPI, and beta-2-microglobulin, wherein said human cell, tissue, or organ is porcine beta-2-microglobulin, SLA- 55. The method of any one of paragraphs 49-54, wherein the method lacks functional expression of DR, SLA-1 and SLA-2.
Item 56
wherein the wild-type pig genome comprises reprogrammed nucleotides in one or more of the CTLA-4 promoter and the PD-L1 promoter, wherein one or more of the CTLA-4 promoter and the PD-L1 promoter reprogrammed CTLA-4 and reprogrammed PD-L1 to increase expression of one or both of reprogrammed CTLA-4 and reprogrammed PD-L1 compared to the endogenous expression of CTLA-4 and PD-L1 in wild-type pigs. 56. The method of any one of paragraphs 49-55, which is programmed.
Item 57
The total number of synthesized nucleotides is such that there is no net loss or net gain in the number of nucleotides after reprogramming the wild-type pig genome with the synthesized nucleotides. 57. The method of any one of clauses 49-56, wherein is equal to
Item 58
58. Any of paragraphs 49-57, wherein said reprogramming with said plurality of synthetic nucleotides does not comprise replacement of nucleotides in codon regions encoding amino acids conserved between said wild-type porcine MHC sequence and said human capture reference sequence. or the method according to item 1.
Item 59
Paragraphs 49-58, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in said major histocompatibility complex of said wild-type pig with orthologous nucleotides derived from said human capture reference sequence. A method according to any one of
Item 60
60. The method of any one of paragraphs 49-59, wherein the site-directed mutagenic substitution is made in germ cells used to produce said non-human animal.
Item 61
61. The method of any one of paragraphs 49-60, wherein the human capture reference sequence is a human patient capture sequence, a human population-specific human capture sequence, or an allele group-specific human capture sequence.
Item 62
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine SLA-1 with nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-A capture reference sequence; Item 62. The method of any one of Items 49-61.
Item 63
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-2 with nucleotides from orthologous exon regions of HLA-B capture reference sequences; Item 63. The method of any one of Items 49-62.
Item 64
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-3 and nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-C capture reference sequence; Item 64. The method of any one of Items 49-63.
Item 65
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-6 and nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-E capture reference sequence; Item 65. The method of any one of Items 49-64.
Item 66
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-7 and nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-F capture reference sequence; Item 66. The method of any one of Items 49-65.
Item 67
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of said wild-type pig SLA-8 and nucleotides from orthologous exon regions of an HLA-G capture reference sequence; Item 67. The method of any one of Items 49-66.
Item 68
68. Any one of paragraphs 49 to 67, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of MHC class I chain-related 2 (MIC-2) of said wild-type pig. described method.
Item 69
69. The method of any one of paragraphs 49-68, wherein said reprogrammed genome lacks functional expression of SLA-1, SLA-2, SLA-DR, or a combination thereof.
Item 70
Paragraph 49-, wherein said reprogrammed genome comprises a site-directed mutagenic substitution of a nucleotide in an exon region of said wild-type pig SLA-DQA derived from an orthologous exon region of an HLA-DQA1 capture reference sequence 70. The method of any one of 69.
Item 71
Paragraph 49-, wherein said reprogrammed genome comprises a site-directed mutagenic substitution of a nucleotide in an exon region of said wild-type porcine SLA-DQB derived from an orthologous exon region of an HLA-DQB1 capture reference sequence. 70. The method of any one of clauses 70.
Item 72
nucleotides in the exon regions of SLA-DRA and SLA-DRB1 of the wild-type pig with nucleotides from the orthologous exon regions of HLA-DRA1 and HLA-DRB1 of the human capture reference sequence in which the reprogrammed genome is 72. The method of any one of paragraphs 49-71, comprising the site-directed mutagenic substitution of
Item 73
nucleotides in exon regions of SLA-DQA and SLA-DQB1 of said wild-type pig, with nucleotides from said reprogrammed genome from orthologous exon regions of HLA-DQA1 and HLA-DQB1 of said human capture reference sequence; 73. The method of any one of paragraphs 49-72, comprising the site-directed mutagenic substitution of
Item 74
74. The method of any one of paragraphs 49-73, wherein the site-directed mutagenic substitution of nucleotides is in a codon that is not conserved between the nuclear genome of the wild-type pig and the known human sequence.
Item 75
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type porcine B2-microglobulin with nucleotides from known human B2-microglobulin orthologous exons. , paragraphs 49 to 74.
Item 76
wherein said reprogrammed porcine nuclear genome is a humanized beta 2 microglobulin (hB2M) polypeptide sequence that is at least 95% identical to the amino acid sequence of beta 2 microglobulin glycoprotein expressed by said human capture reference genome 76. The method of any one of paragraphs 49-75, comprising a polynucleotide encoding a peptide.
Item 77
77. Any one of paragraphs 49-76, wherein said nuclear genome is reprogrammed such that said genetically reprogrammed pig lacks functional expression of endogenous β2-microglobulin polypeptide of said wild-type pig. The method described in section.
Item 78
such that the nuclear genome is reprogrammed at the endogenous β2-microglobulin locus of the pig to include a nucleotide sequence encoding the β2-microglobulin polypeptide of the human capture reference sequence. , is reprogrammed.
Item 79
79. Any of paragraphs 49-78, wherein the reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of SLA-3, SLA-6, SLA-7, SLA-8, and MIC-2. or the method according to item 1.
Item 80
80. The method of any one of paragraphs 49-79, wherein the reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in exon regions of SLA-DQ and MIC-2.
Item 81
81. The method of paragraphs 49-80, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitutions of nucleotides in SLA-3, SLA-6, SLA-7, SLA-8, SLA-DQ, and MIC-2. A method according to any one of paragraphs.
Item 82
82. The method of any one of paragraphs 49-81, wherein said reprogrammed genome lacks functional expression of SLA-DR, SLA-1 and/or SLA-2.
Item 83
83. Any one of paragraphs 49 to 82, wherein said nuclear genome is reprogrammed using scarless exchange of said exon regions free of frameshifts, insertion mutations, deletion mutations, missense mutations, and nonsense mutations. described method.
Item 84
wherein said nuclear genome is reprogrammed without introducing any net insertions, deletions, truncations, or other genetic alterations that can cause disruption of protein expression via frameshift, nonsense, or missense mutations; The method of any one of 49-83.
Item 85
85. The method of any one of paragraphs 49-84, wherein the nucleotides in the intron regions of the nuclear genome are not modified.
Item 86
86. The method of any one of paragraphs 49-85, wherein said nuclear genome is reprogrammed to be homozygous in said reprogrammed exon regions.
Item 87
87. The method of any one of paragraphs 49-86, wherein said nuclear genome is reprogrammed such that extracellular, phenotypic surface expression of the polypeptide is tolerogenic in a human recipient.
Item 88
88. Any of paragraphs 49-87, wherein the nuclear genome is reprogrammed to increase expression of cytotoxic T lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4) by reprogramming the CTLA-4 promoter sequence. 1. The method according to item 1.
Item 89
wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type CTLA-4 with nucleotides derived from orthologous exon regions of human capture reference sequence CTLA-4. 89. The method of any one of 49-88.
Item 90
Paragraphs 49-, wherein said reprogrammed nuclear genome comprises a polynucleotide encoding a protein that is a humanized CTLA-4 polypeptide sequence that is at least 95% identical to CTLA-4 expressed by said human capture reference genome. 89. The method of any one of 89.
Item 91
91. Any one of paragraphs 49-90, wherein the nuclear genome is reprogrammed to increase expression of programmed cell death ligand 1 (PD-L1) by reprogramming the PD-L1 promoter sequence. the method of.
Item 92
Paragraph 49-, wherein said reprogrammed genome comprises site-directed mutagenic substitution of nucleotides in exon regions of said wild-type PD-L1 with nucleotides from known orthologous exons of human PD-L1 91. The method of any one of clauses 91.
Item 93
Paragraphs 49-, wherein said reprogrammed nuclear genome comprises a polynucleotide encoding a protein that is a humanized PD-L1 polypeptide sequence that is at least 95% identical to PD-L1 expressed by said human capture reference genome. 92. The method of any one of clauses 92.
Item 94
A method of inducing at least partial immune tolerance to a xenografted cell, tissue, or organ in a recipient human, comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and in one or more exon regions encoding MHC class Ia, MHC class Ib, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild type pig. said producing or obtaining said human cell, tissue or organ comprising programmed nucleotides lacking functional expression of porcine beta-2-microglobulin;
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 95
A method of reducing natural killer cell-mediated rejection of a xenograft comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and in exon regions encoding one or more of MHC class Ia, MHC class Ib, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild-type pig using , comprising reprogrammed nucleotides, wherein said human cell, tissue, or organ lacks functional expression of porcine beta2-microglobulin, and said wild-type porcine genome comprises CTLA-4 and PD-L1 of said wild-type porcine; said producing or obtaining comprising reprogrammed nucleotides in exon regions encoding one or more of
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 96
A method of reducing cytotoxic T-cell lymphocyte-mediated rejection of a xenograft comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and in exon regions encoding one or more of MHC class Ia, MHC class Ib, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild-type pig using , comprising reprogrammed nucleotides, wherein said human cell, tissue, or organ lacks functional expression of porcine beta2-microglobulin, and said wild-type porcine genome comprises CTLA-4 and PD-L1 of said wild-type porcine; said producing or obtaining comprising reprogrammed nucleotides in exon regions encoding one or more of
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 97
A method of preventing or reducing coagulative and/or thrombotic ischemia to a xenografted cell, tissue, or organ in a recipient human, comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and in exon regions encoding one or more of MHC class Ia, MHC class Ib, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild-type pig using , reprogrammed nucleotides, wherein said human cell, tissue or organ lacks functional expression of porcine beta-2-microglobulin, and said wild-type porcine genome comprises endothelial cell protein C receptor (EPCR) of said wild-type porcine ), thrombomodulin (TBM), and tissue factor pathway inhibitor (TFPI), comprising reprogrammed nucleotides in exon regions encoding one or more of:
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 98
A method of reducing MHC class Ia-mediated rejection of a xenograft comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and in the exon regions encoding SLA-3 and one or more of MHC class Ib, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild-type pig using said producing or obtaining, comprising reprogrammed nucleotides, said human cells, tissues or organs lacking functional expression of porcine beta-2-microglobulin, SLA-1 and SLA-2;
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 99
A method of reducing MHC class Ib-mediated rejection of a xenograft comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and among SLA-6, SLA-7, and SLA-8, and MHC class Ia, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild-type pigs using said producing or obtaining said human cell, tissue or organ lacks functional expression of porcine beta-2-microglobulin comprising reprogrammed nucleotides in an exon region encoding one or more of ,
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 100
A method of reducing MHC class II-mediated rejection of a xenograft comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene, and at least one of SLA-DR and SLA-DQ, and of MHC class Ia, MHC class Ib, and beta-2-microglobulin of said wild-type pig said producing or obtaining, said human cell, tissue, or organ comprising reprogrammed nucleotides in one or more encoding exon regions, lacking functional expression of porcine beta-2-microglobulin;
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 101
A method of inhibiting apoptotic cell-mediated rejection of a xenograft comprising:
a. Clause 49. Producing or obtaining a non-human cell, tissue or organ obtained from the biological system of any one of Clauses 1-48, wherein said wild-type porcine genome comprises said human capture reference sequence in the SLA-MIC-2 gene and in exon regions encoding one or more of MHC class Ia, MHC class Ib, MHC class II, and beta-2-microglobulin of said wild-type pig using , comprising reprogrammed nucleotides, wherein said human cell, tissue, or organ lacks functional expression of porcine beta2-microglobulin, and said wild-type porcine genome comprises CTLA-4 and PD-L1 of said wild-type porcine; said producing or obtaining comprising reprogrammed nucleotides in exon regions encoding one or more of
b. and transplanting said non-human cells, tissues, or organs into said recipient human.
Item 102
A method of producing a donor porcine tissue or organ for xenotransplantation, wherein cells of the donor porcine tissue or organ are
a. Obtaining a biological sample containing DNA from a potential human transplant recipient;
b. performing whole genome sequencing of the biological sample to obtain a human capture reference sequence;
c. The human capture reference sequences are located at loci (i)-(v):
(i) exon regions encoding at least one of SLA-1, SLA-2, and SLA-3;
(ii) exon regions encoding at least one of SLA-6, SLA-7, and SLA-8;
(iii) an exon region encoding at least one of SLA-DR and SLA-DQ;
(iv) one or more exons encoding beta2 microglobulin (B2M);
(v) comparing the exon regions of the SLA-MIC-2 gene and genes encoding at least one of PD-L1, CTLA-4, EPCR, TBM, and TFPI to said wild-type genome of said donor pig; and,
d. generating a synthetic donor porcine nucleotide sequence 10-350 base pairs in length for one or more of said loci (i)-(v), wherein said synthetic donor porcine nucleotide sequence comprises a porcine locus; Orthologous loci (vi)-(x) corresponding to (i)-(vi) respectively:
(vi) exon regions encoding at least one of HLA-A, HLA-B, and HLA-C;
(vii) exon regions encoding at least one of HLA-E, HLA-F, and HLA-G;
(viii) an exon region encoding at least one of HLA-DR and HLA-DQ;
(ix) one or more exons encoding human beta2 microglobulin (hB2M);
(x) said human capture reference sequence in an exon region encoding at least one of MIC-A, MIC-B, PD-L1, CTLA-4, EPCR, TBM, and TFPI from said human capture reference sequence; is at least 95% identical; and
e. replacing the nucleotide sequences of (i)-(v) with said synthetic donor porcine nucleotide sequence;
f. obtaining said porcine tissue or organ for xenotransplantation from a genetically reprogrammed pig having said synthetic donor porcine nucleotide sequence. dynamically reprogrammed.
Item 103
said genetically reprogrammed pig having said synthetic donor porcine nucleotide sequence comprising at least:
(i) Ascaris species, cryptosporidium species, Echinococcus, Strongyloids sterocolis, and Toxoplasma gondii in fecal matter;
(ii) Leptospira species, Mycoplasma hyopneumoniae, porcine genital and respiratory syndrome virus (PRRSV), pseudorabies, infectious gastroenteritis virus (TGE)/porcine respiratory coronavirus, and Toxoplasma Gondii by determining antibody titers;
(iii) swine flu,
(iv) the following bacterial pathogens as determined by bacterial culture: Bordetella bronchisceptica, coagulase-positive staphylococci, coagulase-negative staphylococci, livestock-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus (LA MRSA), Microphyton, and Trichophyton spp. ,
(v) porcine cytomegalovirus, and
103. The method of Paragraph 102, further comprising: (vi) confirming that it is free of the zoonotic pathogen of Brucella suis.
Item 104
further comprising maintaining said genetically reprogrammed pigs according to a bioburden reduction procedure, said procedure comprising maintaining said genetically reprogrammed pigs in an isolated closed herd; All other animals in the isolated closed herd were confirmed to be free of said zoonotic pathogen and said genetically reprogrammed pigs were free of any non-human animals outside of said isolated closed herd. 104. The method of paragraphs 102 or 103, isolated from contact with human animals and animal containment facilities.
Item 105
Paragraph 102, further comprising collecting a biological product from said pig, said collecting further comprising euthanizing said pig and aseptically removing said biological product from said pig. 104. The method of any one of claims 1 to 104.
Item 106
Use a sterile process that does not reduce cell viability to less than 50% as determined by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction assay 106. The method of any one of paragraphs 102-105, further comprising processing said biological product including post-harvest sterilization.
Item 107
107. The method of any one of paragraphs 102-106, further comprising storing said biological product in a sterile container under storage conditions that preserve cell viability.
Item 108
50. A method of screening for off-target editing or genomic alterations in said genetically reprogrammed pig comprising the nuclear genome of any one of paragraphs 1-49, comprising:
e. performing whole-genome sequencing on a biological sample containing DNA from a donor pig prior to genetically reprogramming the donor pig nuclear genome, thereby obtaining a first whole-genome sequence;
f. performing whole genome sequencing after reprogramming the donor pig nuclear genome to obtain a second whole genome sequence;
g. aligning the first whole genome sequence and the second whole genome sequence to obtain a sequence alignment;
h. analyzing said sequence alignment to identify any mismatches to said porcine genome at off-target sites.
Item 109
from said human capture reference sequence having a wild-type porcine intron region from said wild-type porcine MHC class Ia and encoding amino acids not conserved between SLA-3 and HLA-C from said human capture reference sequence A synthetic nucleotide sequence reprogrammed with the exon region encoding SLA-3 of said wild-type pig using the codons of HLA-C.
Item 110
110. The synthetic nucleotide sequence of Paragraph 109, wherein said wild-type pig SLA-1 and SLA-2 each comprise a stop codon.
Item 111
SLA-6, SLA-7 and SLA-8 with wild-type porcine intron regions from wild-type porcine MHC class Ib and HLA-E, HLA-F and HLA-G from human capture reference sequences, respectively The SLA-6, SLA- 7, and a synthetic nucleotide sequence reprogrammed with exon regions encoding SLA-8.
Item 112
A synthetic nucleotide sequence comprising a synthetic nucleotide sequence according to both paragraphs 109 and 111, or both paragraphs 110 and 111.
Item 113
A synthetic nucleotide sequence having a wild-type porcine intronic region from wild-type porcine MHC class II and encoding amino acids not conserved between SLA-DQ and each HLA-DQ from a human capture reference sequence reprogrammed in the exon region encoding said SLA-DQ of said wild-type pig using the codons of said HLA-DQ from said human capture reference sequence, respectively, wherein said SLA-DR of said wild-type pig comprises a stop codon , said synthetic nucleotide sequence.
Item 114
A synthetic nucleotide sequence comprising a synthetic nucleotide sequence according to both paragraphs 109 and 113, both paragraphs 110 and 113, or both paragraphs 112 and 113.
Item 115
A synthetic nucleotide sequence having a wild-type porcine intron region derived from wild-type porcine beta2-microglobulin and between wild-type porcine beta2-microglobulin and beta2-microglobulin from a human capture reference sequence reprogrammed with exon regions encoding said wild-type porcine beta2-microglobulin using codons of beta2-microglobulin from said human capture reference sequence that encode amino acids not conserved in said synthetic nucleotide sequence contains at least one stop codon within an exon region such that it lacks functional expression of said wild-type porcine β2-microglobulin polypeptide.
Item 116
said human capture having a wild-type porcine intron region from wild-type porcine MIC-2 and encoding amino acids not conserved between MIC-2 and MIC-A or MIC-B from the human capture reference sequence A synthetic nucleotide sequence reprogrammed in the exon regions of said wild-type porcine MIC-2 using said MIC-A or MIC-B codons from a reference sequence.
Item 117
said human having a wild-type porcine intron region from wild-type porcine CTLA-4 and encoding amino acids not conserved between said wild-type porcine CTLA-4 and CTLA-4 from a human capture reference sequence A synthetic nucleotide sequence reprogrammed with the exon region encoding said wild-type porcine CTLA-4 using the codons of said CTLA-4 from the capture reference sequence.
Item 118
said human having a wild-type porcine intron region from a wild-type porcine PD-L1 and encoding amino acids not conserved between said wild-type porcine PD-L1 and a PD-L1 from a human capture reference sequence A synthetic nucleotide sequence reprogrammed with the exon region encoding said wild-type porcine PD-L1 using the codons of said PD-L1 from the capture reference sequence.
Item 119
said human capture reference sequence having a wild-type porcine intron region from said wild-type porcine EPCR and encoding amino acids not conserved between said wild-type porcine EPCR and an EPCR derived from a human capture reference sequence; A synthetic nucleotide sequence reprogrammed with the exon regions encoding said wild-type pig EPCR using the EPCR codons.
Item 120
said human capture reference sequence having a wild-type porcine intron region from said wild-type porcine TBM and encoding amino acids not conserved between said wild-type porcine TBM and a TBM derived from a human capture reference sequence; A synthetic nucleotide sequence reprogrammed with the TBM-encoding exon region of said wild-type pig using the codons of TBM.
Item 121
said human capture reference sequence having a wild-type porcine intron region from said wild-type porcine TFPI and encoding amino acids not conserved between said wild-type porcine TFPI and a TFPI derived from a human capture reference sequence; A synthetic nucleotide sequence reprogrammed in the exon region encoding TFPI of said wild-type pig using the codons of TFPI.
Claims (19)
前記非ヒト動物が、野生型ブタの主要組織適合性複合体の複数のエクソン領域中の複数のヌクレオチドを、ヒト捕捉参照配列からの複数の合成ヌクレオチドで置き換えるように再プログラムされている核ゲノムを含む、遺伝的に再プログラムされたブタであり、
前記遺伝的に再プログラムされたブタの細胞が、アルファ－Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ｇｃ、及びＳＤａから選択される１つ以上の表面糖鎖エピトープを提示せず、
アルファ－１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ、シチジン一リン酸－Ｎ－アセチルノイラミン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＭＡＨ）、及びβ１，４－Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼをコードする遺伝子が、前記遺伝的に再プログラムされたブタが、前記遺伝子によってコードされる表面糖鎖エピトープの機能的発現を欠くように改変され、
前記再プログラムされたゲノムが、以下：ｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２、及びＳＬＡ－３のうちの少なくとも１つ、ならびにｉｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－６、ＳＬＡ－７、及びＳＬＡ－８のうちの少なくとも１つ、ならびにｉｉｉ）前記ヒト捕捉参照配列のＨＬＡ－ＤＲ及びＨＬＡ－ＤＱのそれぞれのオルソロガスなエクソン領域に由来するヌクレオチドでの、野生型ブタのＳＬＡ－ＤＲ及びＳＬＡ－ＤＱのうちの少なくとも１つの、エクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含み、
前記再プログラムされたゲノムが、以下のＡ～Ｃ：
Ａ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ヒト捕捉参照配列からの既知のヒトβ２－ミクログロブリンのオルソロガスなエクソンからのヌクレオチドでの、前記野生型ブタのβ２－ミクログロブリンのエクソン領域におけるヌクレオチドの部位特異的変異原性置換を含む；
Ｂ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ヒト捕捉参照ゲノムによって発現されるβ２ミクログロブリン糖タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるヒト化β２ミクログロブリン（ｈＢ２Ｍ）ポリペプチド配列であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む；
Ｃ）前記再プログラムされたブタ核ゲノムは、前記ブタの内因性β２－ミクログロブリン遺伝子座において、前記核ゲノムが、前記ヒトレシピエントのβ２－ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むように再プログラムされているように、再プログラムされている；
の少なくとも１つを含み、
前記再プログラムされたブタ核ゲノムが、前記遺伝的に再プログラムされたブタが前記野生型ブタの内因性β２－ミクログロブリンポリペプチドの機能的発現を欠くように再プログラムされており、
前記再プログラムが、いかなるフレームシフトまたはフレーム破壊も導入しておらず、
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、少なくとも下記：
（ｉ）糞便物質中のＡｓｃａｒｉｓ種、ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ種、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｓ ｓｔｅｒｏｃｏｌｉｓ、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、
（ｉｉ）抗体力価を決定することによる、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）、仮性狂犬病、伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥ）／ブタ呼吸器コロナウイルス、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、
（ｉｉｉ）ブタインフルエンザ、
（ｉｖ）細菌培養によって決定される以下の細菌病原体：Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｃｅｐｔｉｃａ、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌、家畜関連メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＬＡ ＭＲＳＡ）、Ｍｉｃｒｏｐｈｙｔｏｎ、及びＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ．、
（ｖ）ブタサイトメガロウイルス、ならびに
（ｖｉ）Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、の人獣共通病原体を含まず、
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、バイオバーデン低減手順に従って維持され、前記手順が、隔離された閉鎖群中で前記ブタを維持することを含み、前記隔離された閉鎖群中のすべての他の動物が、前記病原体を含まないことが確認され、前記ブタが、前記隔離された閉鎖群の外部の任意の非ヒト動物及び動物収容施設との接触から隔離され、
前記遺伝的に再プログラムされたブタが、非トランスジェニックである、
生物学的システム。 1. A biological system for use in a method of xenograft therapy of a human recipient , said biological system comprising genetically reprogrammed cells, tissues, and organs in a non- human animal, said biological system is biologically active and metabolically active;
wherein said non-human animal is reprogrammed to replace nucleotides in exon regions of a wild- type porcine major histocompatibility complex with synthetic nucleotides from a human capture reference sequence. are genetically reprogrammed pigs containing
said genetically reprogrammed porcine cells do not present one or more surface carbohydrate epitopes selected from alpha-Gal, Neu5Gc, and SDa ;
Genes encoding alpha-1,3 galactosyltransferase, cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase (CMAH), and β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase are genetically reprogrammed. a pig that has been modified to lack functional expression of a surface carbohydrate epitope encoded by said gene;
The reprogrammed genome comprises: i) a wild-type pig SLA- 1, at least one of SLA-2 and SLA-3, and ii) with nucleotides derived from the respective orthologous exon regions of HLA-E, HLA-F and HLA-G of said human capture reference sequence. and iii) each orthologous exon region of HLA-DR and HLA-DQ of said human capture reference sequence. site-directed mutagenic substitution of a nucleotide in an exon region of at least one of wild-type pig SLA-DR and SLA-DQ with a nucleotide that is
wherein said reprogrammed genome comprises the following A-C:
A) The reprogrammed porcine nuclear genome comprises nucleotides in the wild-type porcine β2-microglobulin exon region with nucleotides from known human β2-microglobulin orthologous exons from the human capture reference sequence. including the site-directed mutagenic substitution of
B) said reprogrammed porcine nuclear genome is a humanized β2 microglobulin (hB2M) polypeptide sequence that is at least 95% identical to the amino acid sequence of β2 microglobulin glycoprotein expressed by said human capture reference genome; comprising a polynucleotide encoding a peptide;
C) said reprogrammed porcine nuclear genome comprises, at said porcine endogenous β2-microglobulin locus, said nuclear genome comprising a nucleotide sequence encoding a β2-microglobulin polypeptide of said human recipient; reprogrammed as reprogrammed;
including at least one of
wherein the reprogrammed porcine nuclear genome is reprogrammed such that the genetically reprogrammed pig lacks functional expression of the endogenous β2-microglobulin polypeptide of the wild-type pig;
said reprogramming did not introduce any frame shifting or frame corruption;
wherein said genetically reprogrammed pig has at least:
(i) Ascaris species, cryptosporidium species, Echinococcus, Strongyloids sterocolis, and Toxoplasma gondii in fecal matter;
(ii) Leptospira species, Mycoplasma hyopneumoniae, porcine genital and respiratory syndrome virus (PRRSV), pseudorabies, infectious gastroenteritis virus (TGE)/porcine respiratory coronavirus, and Toxoplasma gondii by determining antibody titers;
(iii) swine flu,
(iv) the following bacterial pathogens as determined by bacterial culture: Bordetella bronchisceptica, coagulase-positive staphylococci, coagulase-negative staphylococci, livestock-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus (LA MRSA), Microphyton, and Trichophyton spp. ,
(v) porcine cytomegalovirus, and
(vi) free of Brucella suis, zoonotic pathogens;
The genetically reprogrammed pig is maintained according to a bioburden reduction procedure, the procedure comprising maintaining the pig in an isolated, closed herd, and all others in the isolated, closed herd. are confirmed to be free of said pathogen, and said pigs are isolated from contact with any non-human animals and animal containment facilities outside said isolated closed herd;
said genetically reprogrammed pig is non-transgenic;
biological system.
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| JP2023538663A (en) * | 2020-08-24 | 2023-09-08 | ゼノセラピューティクス インコーポレイテッド | Immunologically compatible cells, tissues, organs, and methods for transplantation for silencing, humanization, and individualization with minimal collateral genome disruption |
| WO2022133155A1 (en) * | 2020-12-16 | 2022-06-23 | Xenotherapeutics, Inc. | Humanization of beta2-microglobulin in porcine genome resulting in functional expression of human βeta2-microglobulin within donor cells, tissues, or organs |
| WO2022256294A1 (en) * | 2021-06-01 | 2022-12-08 | University Of Massachusetts | Cas9 nickase-mediated gene editing |
| WO2022256401A1 (en) * | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Xenotherapeutics, Inc. | Xenogeneic nerve transplants and methods |
| CN114574557B (en) * | 2022-05-09 | 2022-09-09 | 上海美迪西生物医药股份有限公司 | General type preclinical biodistribution detection kit for NK cell therapy products |
| CN115236078A (en) * | 2022-07-12 | 2022-10-25 | 黑龙江省农业科学院食品加工研究所 | Method for measuring skin retention degree of processed rice |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL120909A0 (en) | 1997-05-26 | 1997-09-30 | Lrr & D Ltd | Compositions and means for the treatment of burns and other cutaneous traumas |
| US6469229B1 (en) | 1998-08-20 | 2002-10-22 | The General Hospital Corporation | Inbred miniature swine and uses thereof |
| IL137689A0 (en) | 2000-08-03 | 2001-10-31 | L R Res & Dev Ltd | System for enhanced chemical debridement |
| EP1465481A4 (en) | 2001-12-21 | 2007-09-12 | Univ Missouri | Knockout swine and methods for making the same |
| EP1539225B1 (en) | 2002-04-23 | 2012-08-22 | Mediwound, Ltd. | Apparatus and methods for use in enzymatic escharotomy in burn induced compartment syndrome |
| CA2507486A1 (en) | 2002-08-14 | 2004-02-26 | Immerge Biotherapeutics, Inc. | .alpha.(1,3)-galactosyltransferase null cells, methods of selecting and .alpha.(1,3)-galactosyltransferase null swine produced therefrom |
| WO2004028243A2 (en) | 2002-08-21 | 2004-04-08 | Revivicor, Inc. | Porcine animals lacking any expression of functional alpha 1,3 galactosyltransferase |
| JP2007529278A (en) | 2004-03-17 | 2007-10-25 | レビビコア， インコーポレイテッド | Tissue products derived from animals lacking functional α1,3 galactosyltransferase |
| AU2005261276A1 (en) | 2004-07-13 | 2006-01-19 | Mediwound Ltd. | Compositions and methods for dermatological wound healing |
| IL165334A0 (en) | 2004-11-22 | 2006-01-15 | Mediwound Ltd | Debriding composition from bromelain and methods of producing same |
| JP5788323B2 (en) | 2008-10-02 | 2015-09-30 | エル．アール． アールアンドディー リミテッド | Interfacial layer wound dressing |
| WO2013169929A1 (en) | 2012-05-08 | 2013-11-14 | The General Hospital Corporation | Reducing immunogenicity of xenogeneic transplant tissues |
| LT3066201T (en) | 2013-11-07 | 2018-08-10 | Editas Medicine, Inc. | Crispr-related methods and compositions with governing grnas |
| KR102659529B1 (en) | 2014-10-22 | 2024-04-23 | 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 | Triple transgenic pigs suitable for xenograft |
| US11284607B2 (en) | 2015-03-24 | 2022-03-29 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Genetic modification of pigs for xenotransplantation |
| US20180184630A1 (en) | 2015-06-26 | 2018-07-05 | Indiana University Research & Technology Corporation | Transgenic pigs with genetic modifications of sla |
| AU2016319131B2 (en) * | 2015-09-09 | 2022-10-13 | Revivicor, Inc. | Multi-transgenic pig for xenotransplantation |
| WO2019006330A1 (en) * | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Indiana University Research And Technology Corporation | Compositions and methods for detecting sla reactivity |
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