JPWO2020132177A5 - - Google Patents
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Description
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、以下の態様であってもよい。
項目1
アデノ随伴ウイルス(AAV)ウイルスベクターの自動産生方法であって、
(a)人工哺乳類AAVウイルス産生細胞を完全密閉式細胞工学システムに導入することであって、前記人工哺乳類AAVウイルス産生細胞が、そのゲノムに組み込まれた、
i.第1の抑制解除プロモータの制御下のE2AおよびE4Orf6遺伝子を含むアデノウイルスヘルパー遺伝子、
ii.第2の抑制解除プロモータの制御下のRepおよびCap遺伝子を含むAAV遺伝子、
iii.第3の抑制解除プロモータの制御下のウイルス関連非コードRNA、ならびに
iv.前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータの抑制要素、を含む、導入することと、
(b)対象遺伝子をコードするベクターで前記哺乳類AAVウイルス産生細胞を形質導入して、形質導入ウイルス産生細胞を産生することと、
(c)前記抑制要素の結合パートナーで前記哺乳類AAVウイルス産生細胞を治療することと、
(d)前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータを活性化することと、
(e)前記形質導入ウイルス産生細胞を増殖させ、前記形質導入ウイルス産生細胞内で前記AAVウイルスベクターを産生することと、
(f)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(f)が、閉鎖型自動化プロセスで行われる、方法。
項目2
前記人工哺乳類AAVウイルス産生細胞が、哺乳類細胞培養物である、項目1に記載の方法。
項目3
前記哺乳類細胞培養物が、懸濁培養物である、項目2に記載の方法。
項目4
前記人工哺乳類AAVウイルス産生細胞が、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞である、項目1~3のいずれか一項に記載の方法。
項目5
前記人工哺乳類AAVウイルス産生細胞が、ヒト細胞である、項目1~3のいずれか一項に記載の方法。
項目6
前記ヒト細胞が、ヒト胚腎臓(HEK)細胞である、項目5に記載の方法。
項目7
前記抑制解除プロモータの各々が、機能的プロモータおよび2つのテトラサイクリンオペレータ配列(TetO
2
)を含み、前記抑制要素が、テトラサイクリン抑制タンパク質である、項目1~6のいずれか一項に記載の方法。
項目8
前記治療することが、ドキシサイクリンで治療することを含む、項目7に記載の方法。
項目9
前記対象遺伝子が、治療対象遺伝子である、項目1~8のいずれか一項に記載の方法。
項目10
産生されたAAVウイルスベクターの量が、少なくとも約10
10
個のウイルスベクターである、項目1~9のいずれか一項に記載の方法。
項目11
前記閉鎖型自動化プロセスが、
(a)温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
(b)温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、項目1~10のいずれか一項に記載の方法。
項目12
前記形質導入することが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、または膜破壊を含む、項目1~11のいずれか一項に記載の方法。
項目13
アデノ随伴ウイルス(AAV)ウイルスベクターの自動産生方法であって、
(a)TetRおよび/またはTetR-KRABをコードする1つ以上の核酸を安定的に発現する哺乳類細胞を、
i.第1の抑制解除プロモータの制御下でE2A遺伝子、E4Orf遺伝子、およびウイルス関連非コードRNAを含むアデノウイルスヘルパー遺伝子をコードする第1の核酸、
ii.第2の抑制解除プロモータの制御下でRepおよびCap遺伝子を含むAAV遺伝子をコードする第2の核酸、および
iii.任意選択で、第3の抑制解除プロモータの制御下で対象遺伝子をコードする第3の核酸によって形質導入することと、
(b)前記哺乳類細胞を前記TetRの結合パートナーで治療することと、
(c)前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータを活性化することと、
(d)前記形質導入細胞を増殖させ、前記形質導入細胞内で前記AAVウイルスベクターを産生することと、
(e)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(e)が、閉鎖型自動化プロセスで行われる、方法。
項目14
前記哺乳類細胞が、哺乳類細胞培養物である、項目13に記載の方法。
項目15
前記哺乳類細胞培養物が、懸濁培養物である、項目14に記載の方法。
項目16
前記哺乳類細胞が、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞である、項目12~15のいずれか一項に記載の方法。
項目17
前記哺乳類細胞が、ヒト細胞である、項目12~15のいずれか一項に記載の方法。
項目18
前記ヒト細胞が、ヒト胚腎臓(HEK)細胞である、項目17に記載の方法。
項目19
前記治療することが、ドキシサイクリンで治療することを含む、項目12~18のいずれか一項に記載の方法。
項目20
前記対象遺伝子が、治療対象遺伝子である、項目12~19のいずれか一項に記載の方法。
項目21
産生されたAAVウイルスベクターの量が、少なくとも約10
10
個のウイルスベクターである、項目12~20のいずれか一項に記載の方法。
項目22
前記閉鎖型自動化プロセスが、
(a)温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
(b)温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、項目12~21のいずれか一項に記載の方法。
項目23
前記形質導入することが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、または膜破壊を含む、項目12~22のいずれか一項に記載の方法。
項目24
レンチウイルスベクターの自動産生方法であって、
(a)人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞を完全密閉式細胞工学システムに導入することであって、前記人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞が、そのゲノムに組み込まれた、
i.第1のプロモータの制御下のビリオンタンパク質(REV)遺伝子の発現のレンチウイルス調節因子、
ii.第2のプロモータの制御下のレンチウイルスエンベロープ遺伝子、ならびに
iii.ともに第3のプロモータの制御下のレンチウイルス群特異抗原(GAG)遺伝子およびレンチウイルスポリメラーゼ(POL)遺伝子、を含み、
核酸配列が、トランスポゾン特異的逆方向末端反復(ITR)の組換えから生じる配列によって5’末端および3’末端の両方に隣接されている、導入することと、
(b)対象遺伝子をコードするベクターで前記哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞を形質導入して、形質導入ウイルス産生細胞を産生することと、
(c)前記第1、第2、および第3のプロモータを活性化することと、
(d)前記形質導入ウイルス産生細胞を増殖させ、前記形質導入ウイルス産生細胞内で前記レンチウイルスベクターを産生することと、
(e)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(e)が、閉鎖型自動化プロセスで行われる、方法。
項目25
前記人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞が、哺乳類細胞培養物である、項目24に記載の方法。
項目26
前記哺乳類細胞培養物が、懸濁培養物である、項目25に記載の方法。
項目27
前記人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞が、ヒト細胞である、項目24~26のいずれか一項に記載の方法。
項目28
前記ヒト細胞が、ヒト胚腎臓(HEK)細胞である、項目27に記載の方法。
項目29
前記GAG遺伝子が、HIV GAG遺伝子であり、前記POL遺伝子が、HIV POL遺伝子である、項目24~28のいずれか一項に記載の方法。
項目30
前記レンチウイルスエンベロープ遺伝子が、水疱口炎ウイルス糖タンパク質(VSV-G)遺伝子である、項目24~29のいずれか一項に記載の方法。
項目31
前記第1のプロモータ、第2のプロモータ、および第3のプロモータが、抑制解除プロモータである、項目24~30のいずれか一項に記載の方法。
項目32
前記人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞が、前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータの抑制要素をそのゲノムに組み込むことをさらに含む、項目31に記載の方法。
項目33
前記抑制解除プロモータの各々が、機能的プロモータおよびテトラサイクリンオペレータ配列(TetO)を含み、前記抑制要素が、テトラサイクリン抑制タンパク質である、項目32に記載の方法。
項目34
前記テトラサイクリン抑制タンパク質をコードする配列に続く、クルッペル会合ボックス配列をさらに含む、項目33に記載の方法。
項目35
前記トランスポゾン特異的ITRが、レピドプテラントランスポゾン(PIGGYBAC (登録商標)) ITRである、項目24~34のいずれか一項に記載の方法。
項目36
前記対象遺伝子が、治療対象遺伝子である、項目24~35のいずれか一項に記載の方法。
項目37
産生されたレンチウイルスベクターの量が、少なくとも約10
10
個のウイルスベクターである、項目24~36のいずれか一項に記載の方法。
項目38
前記閉鎖型自動化プロセスが、
(a)温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
(b)温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、項目24~37のいずれか一項に記載の方法。
項目39
前記形質導入することが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、または膜破壊を含む、項目24~38のいずれか一項に記載の方法。
項目40
レンチウイルスベクターの自動産生方法であって、
(a)完全密閉式細胞工学システムに哺乳類細胞を導入することと、
(b)哺乳類細胞を、
i.第1のプロモータの制御下のビリオンタンパク質(REV)遺伝子の発現のレンチウイルス調節因子ならびに第2のプロモータの制御下のエンベロープ糖タンパク質遺伝子をコードする第1の核酸、
ii.第3のプロモータの制御下の対象遺伝子をコードする第2の核酸、および
iii.第4のプロモータの制御下のレンチウイルス群特異抗原(GAG)遺伝子ならびにレンチウイルスポリメラーゼ(POL)遺伝子の両方をコードする第3の核酸によって形質導入することと、
(c)前記形質導入細胞を増殖させ、前記形質導入細胞内で前記レンチウイルスベクターを産生することと、
(d)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(d)が、閉鎖型自動化プロセスで行われる、方法。
項目41
前記哺乳類細胞が、哺乳類細胞培養物である、項目40に記載の方法。
項目42
前記哺乳類細胞培養物が、懸濁培養物である、項目41に記載の方法。
項目43
前記哺乳類細胞が、ヒト細胞である、項目40~42のいずれか一項に記載の方法。
項目44
前記ヒト細胞が、ヒト胚腎臓(HEK)細胞である、項目43に記載の方法。
項目45
前記GAG遺伝子が、HIV GAG遺伝子であり、前記POL遺伝子が、HIV POL遺伝子である、項目40~44のいずれか一項に記載の方法。
項目46
前記エンベロープ糖タンパク質遺伝子が、水疱口炎ウイルス糖タンパク質(VSV-G)遺伝子であり、前記VSV-G遺伝子および前記REV遺伝子が、コドン最適化される、項目40~46のいずれか一項に記載の方法。
項目47
前記対象遺伝子が、治療対象遺伝子である、項目40~46のいずれか一項に記載の方法。
項目48
産生されたレンチウイルスベクターの量が、少なくとも約10
10
個のウイルスベクターである、項目40~47のいずれか一項に記載の方法。
項目49
前記閉鎖型自動化プロセスが、
(a)温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
(b)温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、項目40~48のいずれか一項に記載の方法。
項目50
前記形質導入することが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、または膜破壊を含む、項目40~49のいずれか一項に記載の方法。
項目51
項目1~23のいずれか一項に記載の方法によって産生されるAAVウイルスベクター。
項目52
項目14~50のいずれか一項に記載の方法によって産生されるレンチウイルスベクター。
項目53
AAVベクターによる治療方法であって、
a.哺乳類対象に項目51に記載のAAVベクターを投与することを含む、方法。
項目54
前記投与することが、吸入、注射、または静脈内投与を含む、項目53に記載の方法。
項目55
レンチウイルスベクターによる治療方法であって、
a.哺乳類対象に項目52に記載のレンチウイルスベクターを投与することを含む、方法。
項目56
前記投与することが、吸入、注射、または静脈内投与を含む、項目55に記載の方法。
All publications, patents, and patent applications referred to in this specification are to the same extent as if each individual publication, patent, or patent application was specifically and individually indicated to be incorporated by reference. , incorporated herein by reference.
The present invention may have the following aspects.
Item 1
A method for automated production of an adeno-associated virus (AAV) viral vector, comprising:
(a) introducing an artificial mammalian AAV virus-producing cell into a completely closed cell engineering system, wherein said artificial mammalian AAV virus-producing cell is integrated into its genome;
i. an adenoviral helper gene comprising the E2A and E4Orf6 genes under the control of a first derepressed promoter;
ii. an AAV gene comprising the Rep and Cap genes under the control of a second derepressed promoter;
iii. a virus-associated non-coding RNA under control of a third derepressed promoter, and
iv. introducing, comprising repressing elements of said first, second and third derepressed promoters;
(b) transducing said mammalian AAV virus-producing cells with a vector encoding a gene of interest to produce transduced virus-producing cells;
(c) treating said mammalian AAV virus-producing cell with a binding partner of said inhibitory element;
(d) activating said first, second and third derepressed promoters;
(e) propagating said transduced virus-producing cells to produce said AAV viral vectors within said transduced virus-producing cells;
(f) isolating the viral vector;
A method wherein (a)-(f) are performed in a closed automated process.
Item 2
2. The method of item 1, wherein the artificial mammalian AAV virus-producing cell is a mammalian cell culture.
Item 3
3. The method of item 2, wherein the mammalian cell culture is a suspension culture.
Item 4
4. The method of any one of items 1-3, wherein the artificial mammalian AAV virus-producing cells are Chinese Hamster Ovary (CHO) cells.
Item 5
4. The method of any one of items 1-3, wherein the artificial mammalian AAV virus-producing cells are human cells.
Item 6
6. The method of item 5, wherein said human cells are human embryonic kidney (HEK) cells.
Item 7
A method according to any one of items 1 to 6, wherein each of said derepressed promoters comprises a functional promoter and two tetracycline operator sequences (TetO 2 ) and said repressible element is a tetracycline repressor protein.
Item 8
8. The method of item 7, wherein said treating comprises treating with doxycycline.
Item 9
9. The method according to any one of items 1 to 8, wherein the target gene is a therapeutic target gene.
Item 10
10. The method of any one of items 1-9, wherein the amount of AAV viral vectors produced is at least about 10 10 viral vectors.
Item 11
said closed automated process comprising:
(a) monitoring with one or more of temperature sensors, pH sensors, glucose sensors, lactose sensors, oxygen sensors, carbon dioxide sensors, and optical density sensors;
(b) automatically adjusting one or more of temperature, pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density. The method described in section.
Item 12
12. The method of any one of items 1-11, wherein said transducing comprises viral infection, electroporation, liposome transfection, or membrane disruption.
Item 13
A method for automated production of an adeno-associated virus (AAV) viral vector, comprising:
(a) a mammalian cell stably expressing one or more nucleic acids encoding TetR and/or TetR-KRAB,
i. a first nucleic acid encoding an adenoviral helper gene comprising an E2A gene, an E4Orf gene, and a virus-associated non-coding RNA under control of a first derepressed promoter;
ii. a second nucleic acid encoding an AAV gene comprising the Rep and Cap genes under the control of a second derepressed promoter; and
iii. optionally transducing with a third nucleic acid encoding the gene of interest under control of a third derepressed promoter;
(b) treating said mammalian cell with a binding partner of said TetR;
(c) activating said first, second and third derepressed promoters;
(d) propagating the transduced cell to produce the AAV viral vector within the transduced cell;
(e) isolating the viral vector;
A method wherein (a)-(e) are performed in a closed automated process.
Item 14
14. The method of item 13, wherein said mammalian cell is a mammalian cell culture.
Item 15
15. The method of item 14, wherein said mammalian cell culture is a suspension culture.
Item 16
16. The method of any one of items 12-15, wherein said mammalian cells are Chinese Hamster Ovary (CHO) cells.
Item 17
16. The method of any one of items 12-15, wherein said mammalian cells are human cells.
Item 18
18. The method of item 17, wherein said human cells are human embryonic kidney (HEK) cells.
Item 19
19. The method of any one of items 12-18, wherein said treating comprises treating with doxycycline.
Item 20
20. The method according to any one of items 12 to 19, wherein the target gene is a therapeutic target gene.
Item 21
21. The method of any one of items 12-20, wherein the amount of AAV viral vectors produced is at least about 10 10 viral vectors.
Item 22
said closed automated process comprising:
(a) monitoring with one or more of temperature sensors, pH sensors, glucose sensors, lactose sensors, oxygen sensors, carbon dioxide sensors, and optical density sensors;
(b) automatically adjusting one or more of temperature, pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density. The method described in section.
Item 23
23. The method of any one of items 12-22, wherein said transducing comprises viral infection, electroporation, liposome transfection, or membrane disruption.
Item 24
A method for automated production of a lentiviral vector, comprising:
(a) introducing an artificial mammalian lentiviral vector-producing cell into a fully closed cell engineering system, wherein the artificial mammalian lentiviral vector-producing cell has integrated into its genome;
i. a lentiviral regulator of expression of the virion protein (REV) gene under the control of the first promoter;
ii. a lentiviral envelope gene under the control of a second promoter, and
iii. a lentiviral group-specific antigen (GAG) gene and a lentiviral polymerase (POL) gene, both under the control of a third promoter;
introducing a nucleic acid sequence flanked at both the 5′ and 3′ ends by sequences resulting from recombination of transposon-specific inverted terminal repeats (ITRs);
(b) transducing said mammalian lentiviral vector-producing cell with a vector encoding a gene of interest to produce a transduced virus-producing cell;
(c) activating said first, second and third promoters;
(d) growing said transduced virus-producing cells to produce said lentiviral vector within said transduced virus-producing cells;
(e) isolating the viral vector;
A method wherein (a)-(e) are performed in a closed automated process.
Item 25
25. The method of item 24, wherein said artificial mammalian lentiviral vector-producing cell is a mammalian cell culture.
Item 26
26. The method of item 25, wherein said mammalian cell culture is a suspension culture.
Item 27
27. The method of any one of items 24-26, wherein said artificial mammalian lentiviral vector-producing cells are human cells.
Item 28
28. The method of item 27, wherein said human cells are human embryonic kidney (HEK) cells.
Item 29
29. The method of any one of items 24-28, wherein the GAG gene is the HIV GAG gene and the POL gene is the HIV POL gene.
item 30
30. The method of any one of items 24-29, wherein the lentiviral envelope gene is the vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSV-G) gene.
Item 31
31. The method of any one of items 24-30, wherein said first promoter, second promoter and third promoter are derepressed promoters.
Item 32
32. The method of item 31, wherein said artificial mammalian lentiviral vector-producing cell further comprises integrating repressible elements of said first, second and third derepressed promoters into its genome.
Item 33
33. The method of item 32, wherein each of said derepressed promoters comprises a functional promoter and a tetracycline operator sequence (TetO) and said repressible element is a tetracycline repressor protein.
Item 34
34. The method of item 33, further comprising a Kruppel-associated box sequence following the sequence encoding said tetracycline inhibitory protein.
Item 35
35. The method of any one of items 24-34, wherein said transposon-specific ITR is a lepidopteran transposon (PIGGYBAC®) ITR.
Item 36
36. The method according to any one of items 24 to 35, wherein the target gene is a therapeutic target gene.
Item 37
37. The method of any one of items 24-36, wherein the amount of lentiviral vector produced is at least about 10 10 viral vectors.
Item 38
said closed automated process comprising:
(a) monitoring with one or more of temperature sensors, pH sensors, glucose sensors, lactose sensors, oxygen sensors, carbon dioxide sensors, and optical density sensors;
(b) automatically adjusting one or more of temperature, pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density. The method described in section.
Item 39
39. The method of any one of items 24-38, wherein said transducing comprises viral infection, electroporation, liposome transfection, or membrane disruption.
Item 40
A method for automated production of a lentiviral vector, comprising:
(a) introducing a mammalian cell into a fully closed cell engineering system;
(b) a mammalian cell,
i. a first nucleic acid encoding a lentiviral regulator of expression of a virion protein (REV) gene under control of a first promoter and an envelope glycoprotein gene under control of a second promoter;
ii. a second nucleic acid encoding a gene of interest under control of a third promoter; and
iii. transducing with a third nucleic acid encoding both a lentiviral group-specific antigen (GAG) gene under the control of a fourth promoter as well as a lentiviral polymerase (POL) gene;
(c) growing said transduced cells to produce said lentiviral vector within said transduced cells;
(d) isolating the viral vector;
A method, wherein (a)-(d) are performed in a closed automated process.
Item 41
41. The method of item 40, wherein said mammalian cell is a mammalian cell culture.
Item 42
42. The method of item 41, wherein said mammalian cell culture is a suspension culture.
Item 43
43. The method of any one of items 40-42, wherein said mammalian cells are human cells.
Item 44
44. The method of item 43, wherein said human cells are human embryonic kidney (HEK) cells.
Item 45
45. The method of any one of items 40-44, wherein the GAG gene is the HIV GAG gene and the POL gene is the HIV POL gene.
Item 46
47. Any one of items 40-46, wherein the envelope glycoprotein gene is the vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSV-G) gene, and wherein the VSV-G gene and the REV gene are codon optimized. the method of.
Item 47
47. The method according to any one of items 40 to 46, wherein the target gene is a therapeutic target gene.
Item 48
48. The method of any one of items 40-47, wherein the amount of lentiviral vector produced is at least about 10 10 viral vectors.
Item 49
said closed automated process comprising:
(a) monitoring with one or more of temperature sensors, pH sensors, glucose sensors, lactose sensors, oxygen sensors, carbon dioxide sensors, and optical density sensors;
(b) automatically adjusting one or more of temperature, pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density. The method described in section.
item 50
50. The method of any one of items 40-49, wherein said transducing comprises viral infection, electroporation, liposome transfection, or membrane disruption.
Item 51
An AAV viral vector produced by the method of any one of items 1-23.
Item 52
A lentiviral vector produced by the method of any one of items 14-50.
Item 53
A method of treatment with an AAV vector, comprising:
a. A method comprising administering the AAV vector of item 51 to a mammalian subject.
Item 54
54. The method of item 53, wherein said administering comprises inhalation, injection, or intravenous administration.
Item 55
A method of treatment with a lentiviral vector, comprising:
a. 53. A method comprising administering the lentiviral vector of item 52 to a mammalian subject.
Item 56
56. The method of item 55, wherein said administering comprises inhalation, injection, or intravenous administration.
Claims (26)
(a)人工哺乳類AAVウイルス産生細胞を完全密閉式細胞工学システムに導入することであって、前記人工哺乳類AAVウイルス産生細胞が、そのゲノムに組み込まれた、
i.第1の抑制解除プロモータの制御下のE2AおよびE4Orf6遺伝子を含むアデノウイルスヘルパー遺伝子、
ii.第2の抑制解除プロモータの制御下のRepおよびCap遺伝子を含むAAV遺伝子、
iii.第3の抑制解除プロモータの制御下のウイルス関連非コードRNA、ならびに
iv.前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータの抑制要素、を含む、ことと、
(b)対象遺伝子をコードするベクターで前記哺乳類AAVウイルス産生細胞を形質導入して、形質導入ウイルス産生細胞を産生することと、
(c)前記抑制要素の結合パートナーで前記哺乳類AAVウイルス産生細胞を治療することと、
(d)前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータを活性化することと、
(e)前記形質導入ウイルス産生細胞を増殖させ、前記形質導入ウイルス産生細胞内で前記AAVウイルスベクターを産生することと、
(f)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(f)が、閉鎖型自動化プロセスで行われ、並びに、
前記形質導入することが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクションまたは、膜破壊を含む、方法。 A method for automated production of an adeno-associated virus (AAV) viral vector, comprising:
(a) introducing an artificial mammalian AAV virus-producing cell into a completely closed cell engineering system, wherein said artificial mammalian AAV virus-producing cell is integrated into its genome;
i. an adenoviral helper gene comprising the E2A and E4Orf6 genes under the control of a first derepressed promoter;
ii. an AAV gene comprising the Rep and Cap genes under the control of a second derepressed promoter;
iii. a virus-associated non-coding RNA under the control of a third derepressed promoter, and iv. repression elements of said first, second and third derepressed promoters;
(b) transducing said mammalian AAV virus-producing cells with a vector encoding a gene of interest to produce transduced virus-producing cells;
(c) treating said mammalian AAV virus-producing cell with a binding partner of said inhibitory element;
(d) activating said first, second and third derepressed promoters;
(e) propagating said transduced virus-producing cells to produce said AAV viral vectors within said transduced virus-producing cells;
(f) isolating the viral vector;
(a)-(f) are performed in a closed automated process , and
A method, wherein said transducing comprises viral infection, electroporation, liposome transfection or membrane disruption .
(a)人工哺乳類AAVウイルス産生細胞を完全密閉式細胞工学システムに導入することであって、前記人工哺乳類AAVウイルス産生細胞が、そのゲノムに組み込まれた、
i.第1の抑制解除プロモータの制御下のE2AおよびE4Orf6遺伝子を含むアデノウイルスヘルパー遺伝子、
ii.第2の抑制解除プロモータの制御下のRepおよびCap遺伝子を含むAAV遺伝子、
iii.第3の抑制解除プロモータの制御下のウイルス関連非コードRNA、ならびに
iv.前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータの抑制要素、を含む、ことと、
(b)対象遺伝子をコードするベクターで前記哺乳類AAVウイルス産生細胞を形質導入して、形質導入ウイルス産生細胞を産生することと、
(c)前記抑制要素の結合パートナーで前記哺乳類AAVウイルス産生細胞を治療することと、
(d)前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータを活性化することと、
(e)前記形質導入ウイルス産生細胞を増殖させ、前記形質導入ウイルス産生細胞内で前記AAVウイルスベクターを産生することと、
(f)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(f)が、閉鎖型自動化プロセスで行われ、並びに、
前記閉鎖型自動化プロセスがさらに、
温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、方法。 A method for automated production of an adeno-associated virus (AAV) viral vector, comprising:
(a) introducing an artificial mammalian AAV virus-producing cell into a completely closed cell engineering system, wherein said artificial mammalian AAV virus-producing cell is integrated into its genome;
i. an adenoviral helper gene comprising the E2A and E4Orf6 genes under the control of a first derepressed promoter;
ii. an AAV gene comprising the Rep and Cap genes under the control of a second derepressed promoter;
iii. a virus-associated non-coding RNA under control of a third derepressed promoter, and
iv. repression elements of said first, second and third derepressed promoters;
(b) transducing said mammalian AAV virus-producing cells with a vector encoding a gene of interest to produce transduced virus-producing cells;
(c) treating said mammalian AAV virus-producing cell with a binding partner of said inhibitory element;
(d) activating said first, second and third derepressed promoters;
(e) propagating said transduced virus-producing cells to produce said AAV viral vectors within said transduced virus-producing cells;
(f) isolating the viral vector;
(a)-(f) are performed in a closed automated process, and
said closed automated process further comprising:
monitoring with one or more of a temperature sensor, a pH sensor, a glucose sensor, a lactose sensor, an oxygen sensor, a carbon dioxide sensor, and an optical density sensor;
automatically adjusting one or more of temperature , pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level , and optical density.
(a)TetRおよび/またはTetR-KRABをコードする1つ以上の核酸を安定的に発現する哺乳類細胞を、
i.第1の抑制解除プロモータの制御下でE2A遺伝子、E4Orf遺伝子、およびウイルス関連非コードRNAを含むアデノウイルスヘルパー遺伝子をコードする第1の核酸、
ii.第2の抑制解除プロモータの制御下でRepおよびCap遺伝子を含むAAV遺伝子をコードする第2の核酸、および
iii.任意選択で、第3の抑制解除プロモータの制御下で対象遺伝子をコードする第3の核酸によって形質導入することと、
(b)前記哺乳類細胞を前記TetRの結合パートナーで治療することと、
(c)前記第1、第2、および第3の抑制解除プロモータを活性化することと、
(d)前記形質導入細胞を増殖させ、前記形質導入細胞内で前記AAVウイルスベクターを産生することと、
(e)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(e)が、閉鎖型自動化プロセスで行われ、並びに、
前記形質導入することが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクションまたは、膜破壊を含む、方法。 A method for automated production of an adeno-associated virus (AAV) viral vector, comprising:
(a) a mammalian cell stably expressing one or more nucleic acids encoding TetR and/or TetR-KRAB,
i. a first nucleic acid encoding an adenoviral helper gene comprising an E2A gene, an E4Orf gene, and a virus-associated non-coding RNA under control of a first derepressed promoter;
ii. a second nucleic acid encoding an AAV gene comprising the Rep and Cap genes under the control of a second derepressed promoter; and iii. optionally transducing with a third nucleic acid encoding the gene of interest under control of a third derepressed promoter;
(b) treating said mammalian cell with a binding partner of said TetR;
(c) activating said first, second and third derepressed promoters;
(d) propagating the transduced cell to produce the AAV viral vector within the transduced cell;
(e) isolating the viral vector;
(a)-(e) are performed in a closed automated process , and
A method, wherein said transducing comprises viral infection, electroporation, liposome transfection or membrane disruption .
温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、請求項11~15のいずれか一項に記載の方法。 said closed automated process further comprising:
monitoring with one or more of a temperature sensor, a pH sensor, a glucose sensor, a lactose sensor, an oxygen sensor, a carbon dioxide sensor, and an optical density sensor;
automatically adjusting one or more of temperature , pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density. The method described in .
(a)人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞を完全密閉式細胞工学システムに導入することであって、前記人工哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞が、そのゲノムに組み込まれた、
i.第1のプロモータの制御下のビリオンタンパク質(REV)遺伝子の発現のレンチウイルス調節因子、
ii.第2のプロモータの制御下のレンチウイルスエンベロープ遺伝子、ならびに
iii.ともに第3のプロモータの制御下のレンチウイルス群特異抗原(GAG)遺伝子およびレンチウイルスポリメラーゼ(POL)遺伝子、を含み、
核酸配列が、トランスポゾン特異的逆方向末端反復(ITR)の組換えから生じる配列によって5’末端および3’末端の両方に隣接されている、導入することと、
(b)対象遺伝子をコードするベクターで前記哺乳類レンチウイルスベクター産生細胞を形質導入して、形質導入ウイルス産生細胞を産生することと、
(c)前記第1、第2、および第3のプロモータを活性化することと、
(d)前記形質導入ウイルス産生細胞を増殖させ、前記形質導入ウイルス産生細胞内で前記レンチウイルスベクターを産生することと、
(e)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(e)が、閉鎖型自動化プロセスで行われ、並びに、
前記閉鎖型自動化プロセスがさらに、
温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、、方法。 A method for automated production of a lentiviral vector, comprising:
(a) introducing an artificial mammalian lentiviral vector-producing cell into a fully closed cell engineering system, wherein the artificial mammalian lentiviral vector-producing cell has integrated into its genome;
i. a lentiviral regulator of expression of the virion protein (REV) gene under the control of the first promoter;
ii. a lentiviral envelope gene under the control of a second promoter, and iii. a lentiviral group-specific antigen (GAG) gene and a lentiviral polymerase (POL) gene, both under the control of a third promoter;
introducing a nucleic acid sequence flanked at both the 5′ and 3′ ends by sequences resulting from recombination of transposon-specific inverted terminal repeats (ITRs);
(b) transducing said mammalian lentiviral vector-producing cell with a vector encoding a gene of interest to produce a transduced virus-producing cell;
(c) activating said first, second and third promoters;
(d) growing said transduced virus-producing cells to produce said lentiviral vector within said transduced virus-producing cells;
(e) isolating the viral vector;
(a)-(e) are performed in a closed automated process , and
said closed automated process further comprising:
monitoring with one or more of a temperature sensor, a pH sensor, a glucose sensor, a lactose sensor, an oxygen sensor, a carbon dioxide sensor, and an optical density sensor;
automatically adjusting one or more of temperature, pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density .
(a)完全密閉式細胞工学システムに哺乳類細胞を導入することと、
(b)哺乳類細胞を、
i.第1のプロモータの制御下のビリオンタンパク質(REV)遺伝子の発現のレンチウイルス調節因子ならびに第2のプロモータの制御下のエンベロープ糖タンパク質遺伝子をコードする第1の核酸、
ii.第3のプロモータの制御下の対象遺伝子をコードする第2の核酸、および
iii.第4のプロモータの制御下のレンチウイルス群特異抗原(GAG)遺伝子ならびにレンチウイルスポリメラーゼ(POL)遺伝子の両方をコードする第3の核酸によって形質導入することと、
(c)前記形質導入細胞を増殖させ、前記形質導入細胞内で前記レンチウイルスベクターを産生することと、
(d)前記ウイルスベクターを単離することと、を含み、
(a)~(d)が、閉鎖型自動化プロセスで行われ、並びに、
前記閉鎖型自動化プロセスがさらに、
温度センサ、pHセンサ、グルコースセンサ、ラクトースセンサ、酸素センサ、二酸化炭素センサ、および光学密度センサのうちの1つ以上で監視することと、
温度、pHレベル、グルコースレベル、ラクトースレベル、酸素レベル、二酸化炭素レベル、および光学密度のうちの1つ以上を自動的に調節することと、を含む、方法。 A method for automated production of a lentiviral vector, comprising:
(a) introducing a mammalian cell into a fully closed cell engineering system;
(b) a mammalian cell,
i. a first nucleic acid encoding a lentiviral regulator of expression of a virion protein (REV) gene under control of a first promoter and an envelope glycoprotein gene under control of a second promoter;
ii. a second nucleic acid encoding a gene of interest under control of a third promoter, and iii. transducing with a third nucleic acid encoding both a lentiviral group-specific antigen (GAG) gene under the control of a fourth promoter as well as a lentiviral polymerase (POL) gene;
(c) growing said transduced cells to produce said lentiviral vector within said transduced cells;
(d) isolating the viral vector;
(a)-(d) are performed in a closed automated process , and
said closed automated process further comprising:
monitoring with one or more of a temperature sensor, a pH sensor, a glucose sensor, a lactose sensor, an oxygen sensor, a carbon dioxide sensor, and an optical density sensor;
automatically adjusting one or more of temperature, pH level, glucose level, lactose level, oxygen level, carbon dioxide level, and optical density .
An AAV viral vector produced by the method of any one of claims 1-8 .
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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IL68218A (en) | 1983-03-23 | 1985-12-31 | Univ Ramot | Compositions for cartilage repair comprising embryonal chondrocytes |
US5902741A (en) | 1986-04-18 | 1999-05-11 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional cartilage cultures |
PT84991B (en) | 1986-06-06 | 1990-03-08 | Genentech Inc | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF BIOLOGICALLY ACTIVE PLASMINOGENE ACTIVITY |
US5041138A (en) | 1986-11-20 | 1991-08-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Neomorphogenesis of cartilage in vivo from cell culture |
US6022742A (en) | 1986-11-26 | 2000-02-08 | Kopf; Henry B. | Culture device and method |
US5081036A (en) | 1987-01-23 | 1992-01-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method and apparatus for cell culture |
EP0345588A1 (en) | 1988-06-03 | 1989-12-13 | Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH (GBF) | Method and device for monitoring a biological growth process |
CA2000181A1 (en) | 1988-10-14 | 1990-04-14 | Chung-Faye Chao | Process for producing cultured epidermal sheet, product and method of use |
JPH02119772A (en) | 1988-10-29 | 1990-05-07 | Shimadzu Corp | Cell culturing device |
US4939151A (en) | 1988-10-31 | 1990-07-03 | Baxter International Inc. | Adherent cell culture flask |
US5240854A (en) | 1989-06-05 | 1993-08-31 | Berry Eric S | Continuous high-density cell culture system |
DE4021123A1 (en) | 1989-10-07 | 1991-04-11 | Sartorius Gmbh | Cross-flow membrane filtration of cells from liq. - which is propelled by gas pressure from alternately operated containers |
CA2067348A1 (en) | 1989-10-10 | 1991-04-11 | Mark E. Huntley | Process and apparatus for the production of photosynthetic microbes |
GB9010356D0 (en) | 1990-05-09 | 1990-06-27 | Ciba Geigy Ag | Maturation of hemopoietic cells |
AU667680B2 (en) | 1991-08-07 | 1996-04-04 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Proliferation of hepatocyte precursors |
JPH0654678A (en) | 1992-08-07 | 1994-03-01 | Chuo Setsubi Eng Kk | Method for automatic feed culture of microorganism |
DE4306661C2 (en) | 1993-03-03 | 1995-04-20 | Michael Dipl Biol Sittinger | Process for producing an implant from cell cultures |
JP3453161B2 (en) | 1993-03-18 | 2003-10-06 | 宇宙開発事業団 | Liquid culture unit |
US5424209A (en) | 1993-03-19 | 1995-06-13 | Kearney; George P. | Automated cell culture and testing system |
US5478479A (en) | 1994-05-20 | 1995-12-26 | Haemonetics Corporation | Two-stage cell wash process controlled by optical sensor |
US5549134A (en) | 1994-05-27 | 1996-08-27 | Marcvalve Corporation | Diaphragm valve |
JP3549949B2 (en) | 1994-06-17 | 2004-08-04 | 山陽電子工業株式会社 | Low oxygen incubator |
US6297046B1 (en) | 1994-10-28 | 2001-10-02 | Baxter International Inc. | Multilayer gas-permeable container for the culture of adherent and non-adherent cells |
US5906934A (en) | 1995-03-14 | 1999-05-25 | Morphogen Pharmaceuticals, Inc. | Mesenchymal stem cells for cartilage repair |
US6121042A (en) | 1995-04-27 | 2000-09-19 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Apparatus and method for simulating in vivo conditions while seeding and culturing three-dimensional tissue constructs |
US5846828A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-08 | Advanced Tissue Sciences | Apparatus and method for sterilizing, seeding, culturing, storing, shipping, and testing tissue, synthetic, or mechanical heart valves orvalve segments |
US5792603A (en) | 1995-04-27 | 1998-08-11 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Apparatus and method for sterilizing, seeding, culturing, storing, shipping and testing tissue, synthetic or native, vascular grafts |
US5985653A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-16 | Aastrom Biosciences, Inc. | Incubator apparatus for use in a system for maintaining and growing biological cells |
US5728581A (en) | 1995-06-07 | 1998-03-17 | Systemix, Inc. | Method of expanding hematopoietic stem cells, reagents and bioreactors for use therein |
US6228635B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-05-08 | Aastrom Bioscience, Inc. | Portable cell growth cassette for use in maintaining and growing biological cells |
WO1996040858A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Aastrom Biosciences, Inc. | Apparatus and method for maintaining and growing biological cells |
US6238908B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-05-29 | Aastrom Biosciences, Inc. | Apparatus and method for maintaining and growth biological cells |
US5688687A (en) | 1995-06-07 | 1997-11-18 | Aastrom Biosciences, Inc. | Bioreactor for mammalian cell growth and maintenance |
WO1996039992A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Apparatus and method for sterilizing, seeding, culturing, storing, shipping, and testing replacement cartilage tissue constructs |
US6096532A (en) | 1995-06-07 | 2000-08-01 | Aastrom Biosciences, Inc. | Processor apparatus for use in a system for maintaining and growing biological cells |
ES2236746T3 (en) | 1995-09-01 | 2005-07-16 | Millenium Biologix Inc. | STABILIZED ARTIFICIAL COMPOSITION OF CALCIUM PHOSPHATE PHASES PARTICULARLY ADAPTED AS SUPPORT OF THE ACTIVITY OF OSE CELLS. |
EP0866849B1 (en) | 1995-10-06 | 2004-08-18 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Solid support for use in cell cultivation, especially for the cultivation of liver cells, biological reactor containing said solid support and the use thereof in a bio-artificial liver system |
WO1997017426A1 (en) | 1995-11-08 | 1997-05-15 | Trustees Of Boston University | Cellular physiology workstations for automated data acquisition and perfusion control |
US5842477A (en) | 1996-02-21 | 1998-12-01 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Method for repairing cartilage |
US5827729A (en) | 1996-04-23 | 1998-10-27 | Advanced Tissue Sciences | Diffusion gradient bioreactor and extracorporeal liver device using a three-dimensional liver tissue |
AU6467796A (en) | 1996-04-24 | 1997-05-15 | Claude Fell | Cell separation system for biological fluids like blood |
US6008010A (en) | 1996-11-01 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Method and apparatus for holding cells |
US6399375B2 (en) | 1997-01-08 | 2002-06-04 | Demtek A/S | Method and apparatus for culturing cells and tissues |
US5928936A (en) | 1997-04-09 | 1999-07-27 | Huntington Medical Research Institutes | Cell culture container that self-seals after cannula penetration made of porous sheets |
US5786207A (en) | 1997-05-28 | 1998-07-28 | University Of Pittsburgh | Tissue dissociating system and method |
US5922604A (en) | 1997-06-05 | 1999-07-13 | Gene Tec Corporation | Thin reaction chambers for containing and handling liquid microvolumes |
EP1627914A3 (en) | 1997-09-25 | 2006-03-01 | Cytomatrix, LLC | Methods and devices for the long-term culture of hematopoietic progenitor cells |
ATE227338T1 (en) | 1998-03-18 | 2002-11-15 | Massachusetts Inst Technology | VASCULARIZED PERFUSED ARRANGEMENTS FOR MICRO TISSUES AND MICRO ORGANS |
US5882929A (en) | 1998-04-07 | 1999-03-16 | Tissue Engineering, Inc. | Methods and apparatus for the conditioning of cartilage replacement tissue |
US5989913A (en) | 1998-07-02 | 1999-11-23 | Charles Daniel Anderson | Culture vessel for growing or culturing cells, cellular aggregates, tissues and organoids and methods for using the same |
NZ513303A (en) | 1999-02-04 | 2003-03-28 | Technion Res & Dev Foundation | Three dimensional plug flow bioreactor, and its use for the maintenance and expansion of hemopoietic stem cells and/or progenitor cells |
WO2001000783A2 (en) | 1999-06-25 | 2001-01-04 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Monitorable three-dimensional scaffolds and tissue culture systems |
US6632651B1 (en) | 1999-07-06 | 2003-10-14 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Tissue maintenance system that applies rhythmic pulses of pressure |
US6402941B1 (en) | 2000-02-07 | 2002-06-11 | Wastewater Biological Solutions, Corp | Apparatus for biological treatment of environmental contaminants and waste |
JP3865354B2 (en) | 2000-03-02 | 2007-01-10 | 高木産業株式会社 | Cell or tissue culture method |
JP4402249B2 (en) | 2000-03-31 | 2010-01-20 | 正仁 田谷 | Cell culture method, cell culture apparatus and recording medium |
GB0009960D0 (en) | 2000-04-25 | 2000-06-14 | Oncoprobe Limited | Electrochemical sensing |
US7585323B2 (en) | 2000-05-05 | 2009-09-08 | Medlden, Llc | In vitro mechanical loading of musculoskeletal tissues |
US6485963B1 (en) | 2000-06-02 | 2002-11-26 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Growth stimulation of biological cells and tissue by electromagnetic fields and uses thereof |
EP1309719B2 (en) | 2000-08-14 | 2022-09-07 | University of Maryland at Baltimore County | Bioreactor and bioprocessing technique |
US6864084B2 (en) | 2000-08-18 | 2005-03-08 | Levitronix Llc | Bioreactor and method for fluidly suspending a product |
US20020146817A1 (en) | 2000-10-02 | 2002-10-10 | Cannon Thomas F. | Automated bioculture and bioculture experiments system |
US7270996B2 (en) | 2000-10-02 | 2007-09-18 | Cannon Thomas F | Automated bioculture and bioculture experiments system |
DE10049437A1 (en) | 2000-10-06 | 2002-04-25 | Fraunhofer Ges Forschung | Bioreactor for growing phototropic microorganisms comprises trough of transparent material fitted with septa that create meandering flow path |
US7198940B2 (en) | 2000-10-25 | 2007-04-03 | Shot Hardware Optimization Technology, Inc. | Bioreactor apparatus and cell culturing system |
EP1355860A1 (en) | 2001-01-09 | 2003-10-29 | Wastewater Biological Solutions Corp. | Apparatus and method for biological treatment of environmental contaminants and waste |
US20050130297A1 (en) | 2001-04-26 | 2005-06-16 | Societe Nouvelle Cell Tissue Progress | Cell and tissue culture device with temperature regulation |
FR2824071B1 (en) | 2001-04-26 | 2003-08-01 | Cell Tissue Progress | THERMAL REGULATION CELL AND TISSUE CULTURE DEVICE |
US7169578B2 (en) | 2001-07-27 | 2007-01-30 | Surface Logix, Inc. | Cell isolation and screening device and method of using same |
US6673595B2 (en) | 2001-08-27 | 2004-01-06 | Biocrystal, Ltd | Automated cell management system for growth and manipulation of cultured cells |
GB0121986D0 (en) | 2001-09-11 | 2001-10-31 | Isis Innovation | Method and structure for growing living organic tissue |
US7348175B2 (en) | 2002-03-15 | 2008-03-25 | St3 Development Corporation | Bioreactor with plurality of chambers for conditioning intravascular tissue engineered medical products |
AU2003218572B2 (en) | 2002-04-08 | 2009-08-20 | Octane Biotech, Inc. | Automated tissue engineering system |
US20030215935A1 (en) | 2002-05-14 | 2003-11-20 | Coon David James | Apparatus and method for isolating living cells from an encapsulated organ tissue sample |
EP1649056A1 (en) | 2003-07-02 | 2006-04-26 | Caliper Life Sciences, Inc. | Methods for amplifying and detecting nucleic acids in microfluidic devices under continuous and non-continuous flow conditions. |
AU2005247967B2 (en) | 2004-05-26 | 2011-09-01 | Octane Biotech, Inc. | Advanced tissue engineering system |
ES2640216T3 (en) | 2007-12-07 | 2017-11-02 | Miltenyi Biotec Gmbh | Systems and methods for cell processing |
CA2833001C (en) | 2010-04-21 | 2020-06-23 | Yves Larcher | Automated cell culture system |
KR102238226B1 (en) | 2013-05-14 | 2021-04-09 | 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 | Human application of engineered chimeric antigen receptor (car) t-cells |
KR20160113295A (en) | 2014-02-04 | 2016-09-28 | 카이트 파마 인코포레이티드 | Methods for producing autologous t cells useful to treat b cell malignancies and other cancers and compositions thereof |
CN113046312A (en) | 2014-04-23 | 2021-06-29 | 朱诺治疗学股份有限公司 | Methods of isolating, culturing and genetically engineering immune cell populations for adoptive therapy |
JP6661544B2 (en) | 2014-04-24 | 2020-03-11 | ミルテニイ バイオテック ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Automatic generation of genetically modified T cells |
DK3134095T3 (en) | 2014-04-25 | 2020-06-29 | Bluebird Bio Inc | IMPROVED PROCEDURES FOR THE PREPARATION OF ADOPTIVE CELL THERAPIES |
CA2966035A1 (en) | 2014-10-31 | 2016-05-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods of stimulating and expanding t cells |
MA40318A (en) | 2014-11-05 | 2017-09-13 | Juno Therapeutics Inc | CELL TRANSDUCTION AND TREATMENT PROCESSES |
KR20170093254A (en) | 2014-12-29 | 2017-08-14 | 노파르티스 아게 | Methods for producing chimeric antigen receptor-expressing cells |
EP3247808B1 (en) | 2015-01-21 | 2021-05-05 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Point-of-care and/or portable platform for gene therapy |
CA2982759A1 (en) | 2015-04-13 | 2016-10-20 | Maxcyte, Inc. | Methods and compositions for modifying genomic dna |
GB201508752D0 (en) | 2015-05-21 | 2015-07-01 | Mason Christopher And Veraitch Farlan S | Cell culture device, system and methods of use thereof |
MA45489A (en) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics Gmbh | CELL CULTURE PROCESSES, ASSOCIATED KITS AND APPARATUS |
CN108884446A (en) | 2016-01-29 | 2018-11-23 | 西里昂生物技术有限责任公司 | Condition expression system based on AAV |
GB201603374D0 (en) * | 2016-02-26 | 2016-04-13 | Ucl Business Plc | Packaging cell |
US20210284948A1 (en) | 2016-07-21 | 2021-09-16 | Celyad | Method and apparatus for automated independent parallel batch-processing of cells |
CA3034452A1 (en) | 2016-08-21 | 2018-03-01 | Adva Biotechnology Ltd. | Bioreactor and methods of use thereof |
US20190367876A1 (en) | 2017-01-18 | 2019-12-05 | F1 Oncology, Inc. | Methods of transducing and expanding immune cells and uses thereof |
CA3058970A1 (en) * | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Methods for adeno-associated viral vector production |
KR20220104847A (en) | 2017-06-30 | 2022-07-26 | 인스크립타 인코포레이티드 | Automated cell processing methods, modules, instruments, and systems |
CN114958772A (en) | 2017-09-01 | 2022-08-30 | 隆萨沃克斯维尔股份有限公司 | End-to-end cell therapy automation |
US11603527B2 (en) | 2017-12-27 | 2023-03-14 | Global Life Sciences Solutions Usa Llc | Method and kit for viral vector isolation |
-
2019
- 2019-12-19 US US16/720,227 patent/US11718833B2/en active Active
- 2019-12-19 CN CN201980085230.3A patent/CN113195725A/en active Pending
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2023
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