JPWO2014123151A1 - 多系統萎縮症リスクの検査方法、検査キット、及び多系統萎縮症の治療又は予防薬 - Google Patents
多系統萎縮症リスクの検査方法、検査キット、及び多系統萎縮症の治療又は予防薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2014123151A1 JPWO2014123151A1 JP2014560782A JP2014560782A JPWO2014123151A1 JP WO2014123151 A1 JPWO2014123151 A1 JP WO2014123151A1 JP 2014560782 A JP2014560782 A JP 2014560782A JP 2014560782 A JP2014560782 A JP 2014560782A JP WO2014123151 A1 JPWO2014123151 A1 JP WO2014123151A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mutation
- coenzyme
- msa
- coq2
- coq10
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 title claims abstract description 148
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 102
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 16
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 title claims description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 140
- ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q10 Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 101
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 claims abstract description 101
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 claims abstract description 100
- SQQWBSBBCSFQGC-JLHYYAGUSA-N ubiquinone-2 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O SQQWBSBBCSFQGC-JLHYYAGUSA-N 0.000 claims abstract description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 28
- 229940110767 coenzyme Q10 Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 102200125030 rs397514727 Human genes 0.000 claims description 67
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 102100027451 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- 102220587604 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_I97T_mutation Human genes 0.000 claims description 14
- 102220587603 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_M78V_mutation Human genes 0.000 claims description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 102200144714 rs1553666615 Human genes 0.000 claims description 12
- 102220087827 rs28935489 Human genes 0.000 claims description 12
- 102220487780 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_P49H_mutation Human genes 0.000 claims description 11
- 102220487779 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_R69H_mutation Human genes 0.000 claims description 11
- 102220487776 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_S57T_mutation Human genes 0.000 claims description 11
- 102220083789 rs146000958 Human genes 0.000 claims description 11
- 102220076768 rs796052616 Human genes 0.000 claims description 11
- 108010042260 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase Proteins 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 102200042414 rs1064797086 Human genes 0.000 claims description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 6
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 44
- 101150008009 coq-2 gene Proteins 0.000 description 39
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 34
- 101100007300 Caenorhabditis elegans coq-2 gene Proteins 0.000 description 32
- NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N reduced coenzyme Q9 Natural products COC1=C(O)C(C)=C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- QNTNKSLOFHEFPK-UPTCCGCDSA-N ubiquinol-10 Chemical compound COC1=C(O)C(C)=C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC QNTNKSLOFHEFPK-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 21
- 229940040064 ubiquinol Drugs 0.000 description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 101000725614 Homo sapiens 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial Proteins 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 17
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 4-hydroxybenzoate Chemical compound OC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 15
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 14
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 9
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101100084125 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ppt1 gene Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 102220487782 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_L16V_mutation Human genes 0.000 description 6
- 102220569879 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_R337Q_mutation Human genes 0.000 description 6
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100007304 Homo sapiens COQ2 gene Proteins 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 6
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- 229940035936 ubiquinone Drugs 0.000 description 6
- HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2NC(=O)N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 0.000 description 5
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 5
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 5
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 5
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 5
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 5
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102220487778 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_F29L_mutation Human genes 0.000 description 4
- 102220487781 4-hydroxybenzoate polyprenyltransferase, mitochondrial_P22L_mutation Human genes 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 208000021024 autosomal recessive inheritance Diseases 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102220358978 c.1006A>C Human genes 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 4
- 206010008025 Cerebellar ataxia Diseases 0.000 description 3
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 3
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 3
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 3
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 3
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 3
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 3
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- FSCYHDCTHRVSKN-DJNGBRKISA-N (2Z,6Z,10Z,14Z,18Z,22Z,26Z,30Z,34E)-decaprenyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CC\C(C)=C/COP(O)(=O)OP(O)(O)=O FSCYHDCTHRVSKN-DJNGBRKISA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 101000856500 Bacillus subtilis subsp. natto Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 2
- 208000007014 Retinitis pigmentosa Diseases 0.000 description 2
- 101150052870 SHROOM3 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150093014 Scel gene Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000012098 association analyses Methods 0.000 description 2
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003935 denaturing gradient gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 2
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 201000010256 myopathy, lactic acidosis, and sideroblastic anemia Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008557 oxygen metabolism Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000000123 temperature gradient gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- 150000004057 1,4-benzoquinones Chemical class 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGRXBNZMPMGLQI-UHFFFAOYSA-N 2-octyldodecyl tetradecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(CCCCCCCC)CCCCCCCCCC BGRXBNZMPMGLQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1-piperidin-4-ylpyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CC(O)CN1C1CCNCC1 HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 206010061666 Autonomic neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008027 Cerebellar atrophy Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000187656 Eucalyptus cornuta Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- JJWSNOOGIUMOEE-UHFFFAOYSA-N Monomethylmercury Chemical compound [Hg]C JJWSNOOGIUMOEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000009106 Shy-Drager Syndrome Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 description 1
- 102000003802 alpha-Synuclein Human genes 0.000 description 1
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000003221 ear drop Substances 0.000 description 1
- 229940047652 ear drops Drugs 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 102000054767 gene variant Human genes 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 230000002687 intercalation Effects 0.000 description 1
- 230000008863 intramolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007449 liver function test Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- HZZOEADXZLYIHG-UHFFFAOYSA-N magnesiomagnesium Chemical compound [Mg][Mg] HZZOEADXZLYIHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000391 magnesium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052919 magnesium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019792 magnesium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- KRZWEBVPFGCYMY-UHFFFAOYSA-M methylmercury(1+);hydroxide Chemical compound [OH-].[Hg+]C KRZWEBVPFGCYMY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073665 octyldodecyl myristate Drugs 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M sodium polyacrylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C=C NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000009495 sugar coating Methods 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
Abstract
Description
病理学的には、glial cytoplasmic inclusion(GCI)が特徴で、α-シヌクレインが主要成分である。
現在までのところMSAの発症機構はまったく不明であり、治療としては症状に応じた対症療法が行われている。
即ち、本発明は、
〔1〕被検者の多系統萎縮症リスクの検査方法であって、被検者から採取した試料におけるコエンザイムQ10の生合成を低下させる変異を検出する工程を含む、方法;
〔2〕前記コエンザイムQ10の生合成を低下させる変異は、Para-hydroxybenzoate-polyprenyltransferase(コエンザイムQ2)の発現又は機能を抑制する変異である、上記〔1〕に記載の方法;
〔3〕前記コエンザイムQ2の発現又は機能を抑制する変異は、配列番号:1におけるP49H、S57T、R69H、M78V、I97T、P107S、S113F、T267A、S297C、R337Q、R337X、及びV343Aからなる群より選択される、上記〔2〕に記載の方法;
〔4〕前記コエンザイムQ2の発現又は機能を抑制する変異は、V343Aである、上記〔2〕に記載の方法;
〔5〕多系統萎縮症リスクの検査キットであって、以下の(i)から(iii)の少なくとも1つを含むキット:
(i) コエンザイムQ2遺伝子における、コエンザイムQ2タンパク質(配列番号:1)の49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位、及び343位からなる群より選択される部位のアミノ酸をコードする核酸を含む領域にハイブリダイズする核酸;
(ii) コエンザイムQ2遺伝子における、コエンザイムQ2タンパク質(配列番号:1)の49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位、及び343位からなる群より選択される部位のアミノ酸をコードする核酸を含む領域を増幅可能なプライマーセット;及び
(iii) 配列番号:1において、P49H、S57T、R69H、M78V、I97T、P107S、S113F、T267A、S297C、R337Q、R337X、及びV343Aからなる群より選択される少なくとも1つの変異を有するコエンザイムQ2タンパク質と、野生型コエンザイムQ2タンパク質のいずれかのみに交差性なく結合する抗体;
〔6〕コエンザイムQ10を含む多系統萎縮症の予防又は治療剤;
〔7〕コエンザイムQ10を投与する工程を含む、多系統萎縮症の予防又は治療方法;
〔8〕多系統萎縮症の予防又は治療剤のスクリーニング方法であって、
候補化合物と細胞とを接触させてインキュベートする工程と、
細胞内のコエンザイムQ10量を上昇させる候補化合物を選択する工程と、を含む方法;
及び、
〔9〕V343A変異を含むコエンザイムQ2タンパク質をコードする核酸、
に関する。
MSA発症リスクが高いと判断された場合には、CoQ10の補充により発症が抑制されることが期待され、またCoQ10の補充はMSAの治療にも有効である可能性が強く示唆される。
本発明に係るMSAリスクの検査方法は、被検者から採取した試料における、コエンザイムQ10の生合成を低下させる変異を検出する工程を含む。
本明細書において、MSAリスクの検査方法とは、被検者がMSAを発症する可能性の高さを判定したり、被検者にMSA様の症状が見られる場合に実際にMSAであるか否かを判定したりするために必要な情報を収集するために行う検査の方法をいう。本発明に係る検査方法は、検査会社等で実施されうる。
MSAの臨床病型は特に限定されないが、後述するとおり、本発明に係る方法のうち特定の態様は、MSA-Cの特異的な検出に適している。
CoQ10の生合成経路の概略を図3に示す。CoQ2が触媒してパラヒドロキシベンゾエート(PHB)がプレニル化されると、デカプレニルPHBが生じる。このデカプレニルPHBが、さらに多くの補酵素によって様々な修飾を受けてCoQ10が生合成される。
本明細書において、CoQ2は、以下のアミノ酸配列を有する酵素であり、COQ2遺伝子によってコードされる。Para-hydroxybenzoate-polyprenyltransferaseとも呼ばれ、CoQ10の生合成において、デカプレニルピロリン酸からPHBにデカプレニル基を転移する反応を触媒する。
MLGSRAAGFARGLRALALAWLPGWRGRSFALARAAGAPHGGDLQPPACPEPRGRQLSLSAAAVVDSAPRPLQPYLRLMRLDKPIGTWLLYLPCTWSIGLAAEPGCFPDWYMLSLFGTGAILMRGAGCTINDMWDQDYDKKVTRTANRPIAAGDISTFQSFVFLGGQLTLALGVLLCLNYYSIALGAGSLLLVITYPLMKRISYWPQLALGLTFNWGALLGWSAIKGSCDPSVCLPLYFSGVMWTLIYDTIYAHQDKRDDVLIGLKSTALRFGENTKPWLSGFSVAMLGALSLVGVNSGQTAPYYAALGAVGAHLTHQIYTLDIHRPEDCWNKFISNRTLGLIVFLGIVLGNLWKEKKTDKTKKGIENKIEN (配列番号:1)
この4つのATGコドンのうち、4番目を翻訳開始コドンとしたUniProt database(Q96H96, http://www.uniprot.org/uniprot/Q96H96)に従ったものである。
1番目のATGコドンを翻訳開始コドンとするNCBI Reference SequenceのNM_015697.7及びNG_015825.1と、GenBankのBC008804.2のそれぞれを用いて各変異をアノテーションした場合の比較を下表に示す。
核酸の変異を検出する場合、当業者は上述したアミノ酸の変異から、核酸レベルではどのような変異を検出すればよいか容易に特定することができる。
(i) PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)
特定の変異を有する遺伝子は制限酵素による切断によって生じる断片の長さが異なることを利用して、変異を検出する方法であり、例えば以下の手順により行うことができる。被検者から得たゲノムDNAについて、検出しようとする変異を含む領域をPCR法により増幅する。増幅産物に変異部位を認識する制限酵素を作用させ、断片を電気泳動法等により分離、同定する。生じた断片の長さから制限酵素による切断の有無、ひいては変異の有無を確認できる。本方法は、被検者の試料からRNAを抽出し、逆転写酵素によりcDNAを調製して行ってもよい。
変異を含む領域にハイブリダイズするプライマー(allele-specific oligonuceoide: ASO)を用いてPCRを行い、変異を有する場合、当該プライマーと鋳型DNAとの間にミスマッチが生じるため、アニール温度が高い場合に伸長反応が起こらないことを利用する方法である。増幅産物を電気泳動法等により分離、同定し、増幅の有無を確認することによって、試料DNAの変異の有無を知ることができる。
DNAをPCRで増幅した後、一本鎖に解離させると、一本鎖DNAは塩基対形成をはじめとする種々の分子内相互作用で塩基配列に依存した固有の高次構造をとる。安定な二重らせん構造をとる二本鎖DNAに比べ、一本鎖DNAの高次構造は、一塩基の違いが存在しても変化することがある。そのため一本鎖DNAをポリアクリルアミド中で電気泳動すると、高次構造の違いに応じて移動度も異なり、この移動度の違いを検出することによって変異の有無を判定することができる。
具体的には、例えば、被検者から得られた染色体DNAを、32P等で標識したプライマーを用いてPCRにより増幅する。得られた標識DNA断片を加熱変性して一本鎖DNAとし、これをポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離して、オートラジオグラフィーによりバンドの位置変化を検出する。
変性剤による変性は二本鎖DNAにミスマッチが存在すると起こりやすくなること、二本鎖DNAが部分的に融解した状態では電気泳動の移動度が著しく低下することを利用して、変異の有無を検出する方法である。
具体的には、尿素、ホルムアミド等の変性剤の濃度に勾配をつけたポリアクリルアミドゲル上で、必要に応じて制限酵素等で処理した被検者のDNAサンプルと、正常DNA断片と、これらに相補的なプローブ核酸との混合物の電気泳動を行ってサンプルを分離する。変異に起因するミスマッチが存在すると、より低い濃度の変性剤で一本鎖に解離するため、変性剤濃度が低いゲル領域で泳動速度が遅くなる。従って、正常DNAサンプルのバンドと比較することによって、ミスマッチの存在の有無を検出することが可能となり、結果として変異の有無を検出することができる。
変性剤の濃度勾配は、垂直につけてもよいし(垂直勾配法)と平行につけてもよい(平行勾配法)。また、DGGEと類似の原理を利用した温度勾配ゲル電気泳動法(temperature gradient gel electrophoresis: TGGE)も開発されている。
マイクロアレイ上に固定されたプローブDNAと、DNA又はRNAサンプルとの特異的なハイブリダイゼーションを検出して、変異の有無を解析する方法である。ハイブリダイゼーションの有無を検出する方法や、プローブDNAの3'末端を変異の予想される部位にあわせてハイブリダイゼーションさせ、標識したジデオキシヌクレオチドとDNAポリメラーゼを添加して、伸長反応の有無を検出する方法等がある。標識は、蛍光色素、放射性物質、電気化学的に検出できる化合物等各種選択することができる。
なお、特異的なハイブリダイゼーションとは、通常のハイブリダイゼーション条件で、好ましくは高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下における特異的なハイブリダイゼーションを意味する。本明細書において高ストリンジェントな条件とは、例えば、少なくとも約6×SSC及び1%SDSの65℃溶液中でハイブリダイゼーションを行い、最初の洗浄を42℃の20%(v/v)ホルムアミド(0.1×SSC中)で10分、次の洗浄を65℃の0.2×SSC及び0.1%SDSで行う条件とすることができるが、これに限定されず、当業者は適宜条件を選択することができる。
シーケンス反応を化学発光で検出する方法である。被検者由来のDNAをPCRで増幅した後、一本鎖DNAを精製し、適当なプライマーをハイブリダイズさせてからデオキシヌクレオチドを一塩基ずつ添加する。伸長反応に伴って発生するピロリン酸がカスケード反応を開始させ、生じたATPによりルシフェリンを基質としてルシフェラーゼが発光する。この発光を検出することにより被検DNAの塩基配列を決定することができ、高精度に変異を検出できる(Alderborn, A. et al.: Genome Res. (2000) 28:1249-1258)。
標的DNAとプライマーを用いてDNAを合成する際、4種のデオキシリボヌクレオチド(dNTP)とともに1種のジデオキシリボヌクレオチド(ddNTP)のいずれかを加えておき、ddNTPが取り込まれたときに合成が止まるようにして、様々な長さのDNAを合成する。この反応を4種のジデオキシリボヌクレオチドのそれぞれについて行った後、様々な長さを、ポリアクリルアミドゲルによる電気泳動にかけて分離する。ポリアクリルアミドゲルによる電気泳動では1塩基の違いも道程できるので、どの位置で合成が止まったかを検出することにより、標的DNAの塩基配列がわかる。具体的には、各DNAは種々の方法で標識し、サーマルサイクラーを用いたサイクルシーケンス反応等で塩基配列を決定する。DNAの標識方法としては、プライマーを蛍光標識するDye Primer法、ddNTPを蛍光標識するDye Terminator法、基質dNTPを標識するInternal-label法がある。
本発明においては、被検者から得たゲノムDNAを鋳型として、検出しようとする変異を含む領域をPCR法により増幅して標的DNAとすることができる。
本発明では、被検者から得たゲノムDNAを鋳型として、検出しようとする変異を含む領域をPCR法により増幅し、次世代シーケンサーを用いて配列を解析する方法も用いることができる。次世代シーケンサーは、Sanger法を用いるシーケンサーを「第1世代シーケンサー」とし、これと対比して用いられる用語である。原理は様々なものがあるが、超並列的な処理によって、低コストかつ短時間で大量の塩基配列を解析することができる(例えば、Holt R.A. and Jones S.J.: Genome Res., Vol.18 (6):839-864, 2008)。
(i) ノーザンブロット法
被検者に由来する試料から常法に従ってmRNAを取り出し、これをグリオキサール、ホルムアミド、ホルマリン、メチル水銀などを含む溶液中で加熱し、分子内の水素結合をはずして、高次構造を壊して線上にする。その後、ホルマリンを含むアガロースゲルで電気泳動する。ゲルを15〜20×SSCの高塩溶液でナイロンメンブレンやニトロセルロースメンブレンにトランスファーする。ニトロセルロースメンブレンの場合は、80℃で約2時間真空オーブンで処理し、RNAを固定する。ナイロンメンブレンの場合は、たとえば紫外線を照射して架橋によりRNAを固定する。
次に、メンブレン上の特定のmRNAを同定するために、クローン化したcDNAからプローブを作製して標識し、プローブとメンブレンを特定条件下で接触させた後、cDNAプローブが結合したmRNAのみを検出できる。ハイブリダイゼーションの条件は、塩濃度、温度、塩基の長さ、組成等によって、当業者が適宜選択することができる。
標的mRNAが微量の場合は、RT-PCR法を組み合わせることもできる。RNA試料に対して、逆転写酵素とオリゴ(dT)プライマーを用いて逆転写反応を行い、得られたcDNAをPCR法により増幅した後、標識した相補的核酸を使用してcDNAを検出する。
ノーザンブロット法の変法であり、被検者に由来する試料から取り出したmRNAを水酸化メチル水銀法等で変成させた後、様々な濃度でニトロセルロース等のフィルターに点(ドット)としてスポッティングし、放射性標識等で標識したプローブとハイブリダイゼーションさせ、シグナルの強さを検出する。プローブに相同性を有する別のmRNAや、目的mRNAとは長さの異なるものを検出する可能性もあるが、ノーザンブロット法よりも簡便である。
RNaseが標的RNAと完全に一致してハイブリダイズした二本鎖RNAは分解しないが、ミスマッチがあるとそこで切断するという性質を利用する方法である。まず、32P等で標識したmRNAをプローブとして試料RNAとハイブリダイズさせたのち、RNaseによって消化する。反応産物をアガロースゲル又はポリアクリルアミドゲル等で電気泳動し、サイズを測定する。転写産物がプローブRNAと完全に相補的であれば、大きな一つのバンドを示すが、ミスマッチが存在する場合、バンドのサイズが小さくなったり、2本以上のバンドが生じたりするので、目的とするRNAの有無を確認できる。
被検者から得た試料をタンパク質分解酵素や塩酸などで前処理した後、プローブの非特異的な結合を抑えるためにサケ精子DNAやアルブミンなどでブロッキングする。その後、標識物質でラベルしたプローブRNAと組織標本とを約24時間かけてハイブリダイズさせ、その後組織標本を洗浄して、オートラジオグラフィーや免疫組織化学的方法により標的部位を検出する。また、標的mRNAが微量の場合には、in situ RT-PCR法が用いられる。逆転写酵素とオリゴ(dT)プライマーを用いて逆転写反応を行い、得られたcDNAをPCR法により増幅した後、標識した相補的核酸を使用してcDNAを検出する。
リアルタイムPCR法は、PCR増幅産物を蛍光で検出する方法である。SYBR Greenに代表される二本鎖核酸に特異的に挿入する蛍光標識を用いるインターカレート法と、TaqManプローブに代表される蛍光標識した変異配列特異的なプローブを用いる方法がある。リアルタイムPCR法を用いる場合も、試料中のRNAから逆転写酵素でcDNAを得て、これを鋳型とすることができる。
その他、RNAレベルでの検出は、DNAマイクロアレイを用いた方法によっても行うことができる。被検者の試料から全RNAを抽出し、目的とする複数の変異を有するRNAのそれぞれと相補的なDNAを固定したDNAマイクロアレイを用いれば、複数の変異を一度に検出することができる。
CoQ2の機能の低下は、例えば、パラヒドロキシベンゾエートのプレニル化活性の低下を測定して確認することができる。実施例に記載するとおり、CoQ2活性の測定は、PHBを放射性物質で標識し、デカプレニルPHBを検出して行うことができる。
本発明に係るMSAリスクの検査キットは、以下の(i)から(iii)の少なくとも1つを含む。(i) コエンザイムQ2遺伝子における、コエンザイムQ2タンパク質の49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位、及び343位からなる群より選択される部位のアミノ酸をコードする核酸を含む領域にハイブリダイズする核酸;
(ii) コエンザイムQ2遺伝子における、コエンザイムQ2タンパク質の49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位、及び343位からなる群より選択される部位のアミノ酸をコードする核酸を含む領域を増幅可能なプライマーセット;及び
(iii) P49H、S57T、R69H、M78V、I97T、P107S、S113F、T267A、S297C、R337Q、及びR337X、V343Aからなる群より選択される少なくとも1つの変異を有するコエンザイムQ2タンパク質と、野生型コエンザイムQ2タンパク質のいずれかのみに交差性なく結合する抗体。
上記(i)の核酸は、核酸における変異部位に特異的に結合させて、変異の有無を検出することができる。核酸は、例えば5〜100塩基長、10〜50塩基長、15〜30塩基長等とすることができる。核酸の配列は、検出配列に応じて、当業者が適宜設計可能である。
これらの核酸は、固相担体に固定されていてもよい。本明細書において固相担体とは、DNAを固定できる担体であれば特に限定されず、ガラス製、金属製、樹脂製等のマイクロタイタープレート、基板、ビーズ、ニトロセルロースメンブレン、ナイロンメンブレン、PVDFメンブレン等が挙げられる。DNAは、これらの固相担体に公知の方法で固定することが可能である。
なお、当該抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、抗原で免疫した動物から抗体産生細胞を単離し、これを骨髄腫細胞等と融合させてハイブリドーマを作製し、このハイブリドーマに産生させることができる。ポリクローナル抗体は、抗原で免疫した動物の血清等から得ることができる。本発明に係る検査キットに含まれる抗体は、蛍光物質、放射性物質等で標識しておくこともできる。
このようなキットは、例えば、検出用プローブ、逆転写酵素、各種反応・検出試薬、緩衝液、取扱説明書、二次抗体等をさらに備えていてもよい。
本発明は、被検者から採取した試料におけるCoQ10の生合成を低下させる変異を検出するMSAの診断方法も包含する。CoQ10の生合成を低下させる変異の検出は、本発明に係る検査方法と同様に行うことができるので、ここでは説明を省略する。
本発明に係るMSAの治療剤は、有効成分としてCoQ10を含む。また、本発明に係るMSAの予防又は治療方法は、CoQ10を投与する工程を含む。上述のとおり、MSAの一部では、CoQ10の生合成に関与する酵素の変異によりCoQ10量が減少することが発症に関与する。
MSAの投与形態は特に限定されず、経口的投与でも非経口的投与でもよい。非経口投与としては、例えば、筋肉内注射、静脈内注射、皮下注射等の注射投与、経皮投与、経粘膜投与(経鼻、経口腔、経眼、経肺、経膣、経直腸)投与等が上げられる。
CoQ10は、そのまま投与してもよいし、薬学的に許容できる担体、賦形剤、添加剤等を加えて製剤化してもよい。剤形としては、例えば、液剤(例えば注射剤)、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、坐剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤等が挙げられる。
製剤化は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、溶解補助剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、pH調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜使用し、常法により行うことができる。
製剤化に用いられる成分の例としては、精製水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等薬学的に許容される有機溶剤、動植物油、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ソルビトール、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、コーンスターチ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、トラガント、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、高級アルコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、等が挙げられるがこれらに限定されない。
注射剤は、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、アルコール類等を含むことができる。さらに、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤、溶解補助剤、防腐剤等を加えることができる。
CoQ10は、MSAの予防にも有用である。本発明に係る検査方法でMSAリスクが高いと判断された場合、発症していなくてもCoQ10を補充することによって、発症を防止したり、発症を遅らせたりすることが可能である。CoQ10は、いわゆる健康食品にも用いられており、安全性が高く副作用も少ないので、継続的に服用することが可能である。
本発明に係るMSAの予防又は治療薬のスクリーニング方法は、多系統萎縮症の予防又は治療剤のスクリーニング方法であって、候補化合物と細胞とを接触させる工程と、細胞内のコエンザイムQ10量を上昇させる候補化合物を選択する工程と、を含む。
スクリーニング方法に用いられる細胞は、CoQ10が生合成される細胞であれば特に限定されないが、例えば、リンパ芽球様細胞などが挙げられる。
候補化合物も特に限定されず、低分子化合物、高分子化合物、核酸、タンパク質等でありうる。これらの候補化合物と細胞とを接触させてインキュベートする際の温度や時間を含む実験条件は、当業者が適宜決定することができる。例えば、CoQ10の生合成に関与する物質の機能を亢進させる候補化合物や、CoQ10の生合成に関与する物質の機能を低下させる物質の機能を阻害する候補化合物などが考えられる。
細胞内のCoQ10量が上昇するか否かも、当業者が公知の方法にしたがって行うことができる。CoQ10活性を測定して、量を評価してもよい。
V343A変異は日本人に特有のものであり、これを研究することにより、さらに発症のメカニズムを解明し、MSAの治療又は予防方法の研究開発に資すると考えられる。V343A変異を含む核酸は、かかる研究開発に有用である。本発明は、さらに、かかる核酸を含む組換えベクター、当該ベクターを含む形質転換体等も包含する。
1−1.ヒトを対象とする研究の承認
被検者は、東京大学及び他の研究参加機関の審査委員会に承認された研究計画に登録された。全ての被検者から書面によるインフォームドコンセントを得た。
MSAの診断は、現在コンセンサスの得られているMSAの診断基準に基づいて行った(Gilman S, et al. Neurology 2008;71:670-6.)。
本発明者らは、これまでに4つの日本のMSA多発家系(FMSA_1からFMSA_4)について報告した(文献12)。MSAを罹患する2組の兄弟がいる2つの新たな日本のMSA家系(FMSA_8及びFMSA_12)を含めて6つのMSA多発家系が本研究に登録された(図1A)。FMSA_1には血族婚があり(両親がfirst degree cousins)、常染色体劣性遺伝の可能性が示唆された。6つのMSA多発家系の臨床所見を表2に示す。FMSA_1のII-4及びII-8とFMSA_8のII-6に生検を実施し、MSAの確定診断とした。
MSAの診断は、現在コンセンサスが得られている基準に従って行った(Gilman S, et al. Neurology 2008;71:670-6.)。日本人コホートは、Japan Multiple System Atrophy Research Consortium (JAMSAC)から試料提供された195人のMSA患者と113人の健常者を含んだ。さらに、東京大学、高齢者ブレインバンク、東京都健康長寿医療センター、新潟大学脳研究所、北海道大学大学院医学研究科、及び鹿児島大学大学院医歯学総合研究科における168人のMSA患者と407人の対照者を、対象とした。
レプリケーションスタディのための対照者の独立コホート(n=2,383)は、Japanese Genetic Study Consortium for Alzheimer Disease(JGSCAD)及びJapanese Consortium for Amyotrophic Lateral Sclerosis research (JaCALS)から提供された。CoQ2変異体とMSAの関連の特異性を調べるために、他の神経変性疾患(アルツハイマー病(AD)、パーキンソン病(PD)、及び筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者;JGSCADから2,728人のAD患者、東京大学及びJapanese Parkinson Disease Susceptibility Gene Consortiumから659人のPD患者、東京大学及びJaCALSから634人のALS患者)も調査対象とした。
関連解析は、Affymetrix SNP 6.0 arraysを用いて、FMSA_1に対して行った。FMSA_1のII-4のゲノムDNAサンプルを、Illumina Genome Analyzer IIx (100-bp-long paired ends)で4回分析した。ヒトゲノム参照配列(NCBI36/hg18 assembly)に対するアライメント及び変異の検出には、Burrows Wheeler Aligner (BWA)及びSmatoolsを用いた。
COQ2遺伝子の各エクソンを増幅するプライマーペア表4を用いてPCRを行い、続いてヌクレオチド配列解析を行った。
Exon 1 Reverse primer sequence 配列番号:3
Exon 2 Forward primer sequence 配列番号:4
Exon 2 Reverse primer sequence 配列番号:5
Exon 3 Forward primer sequence 配列番号:6
Exon 3 Reverse primer sequence 配列番号:7
Exon 4 Forward primer sequence 配列番号:8
Exon 4 Reverse primer sequence 配列番号:9
Exon 5 Forward primer sequence 配列番号:10
Exon 5 Reverse primer sequence 配列番号:11
Exon 6 Forward primer sequence 配列番号:12
Exon 6 Reverse primer sequence 配列番号:13
Exon 7 Forward primer sequence 配列番号:14
Exon 7 Reverse primer sequence 配列番号:15
野生型ヒトCOQ2遺伝子に対し、表5のプライマー(上から順に、配列番号:16〜47)を用いてPCRによる部位特異的変異導入を行った。続いて野生型と変異型のヒトCOQ2遺伝子cDNAを酵母発現型pAUR123ベクター(Takara社)に挿入した。酵母coq2遺伝子ヌル変異体であるBY4741Δcoq2株を、野生型又は変異型ヒトCOQ2遺伝子cDNAを含むpAUR123ベクターで、Yeastmaker Yeast Transformation System 2(Clontech社)を使って形質転換した。非発酵性炭素源を含む培地(酵母エキス・ペプトン・グリセロール培地)中での増殖を、OD monitor(Titech社)で培地の600nmの吸光度(OD600)をモニターすることにより測定した。
CoQ2(EC 2.5.1.39)の活性は、放射性パラヒドロキシベンゾエート(PHB)のデカプレニルPHBへの取り込みを測定することによりアッセイした。具体的には、QProteome Mitochondria Isolation kit(Qiagen社)を用いてリンパ芽球様細胞から調製したミトコンドリア画分を酵素源とした。Lopez-Martinらの方法(Lopez-Martin JM, et al. Hum Mol Genet 2007;16:1091-7.)に従い、500μgのミトコンドリアリッチ画分、1000μM [14C]PHB (1.85 MBq/μmol)、及び5μMデカプレニルピロリン酸を含む100μLのアッセイ用バッファー(0.05% 3-[(3-クロルアミドプロピル)ジメチルアンモニオ]-1-プロパンスルホネート(CHAPS)を含む)からなる反応液を調製した。反応は37℃で60分行い、1000μLのヘキサンで抽出した。ヘキサン相の放射性物質を液体シンチレーションカウンターTri-Carb 2000CA(PerkinElmer社)で測定した。結果は、9つの独立した実験の平均値で示した。
152人のMSA患者と76人の対照者から樹立したEBウイルス不死化リンパ芽球様細胞(JAMSACより提供を受けた)を、10%ウシ胎児血清を含むRPMI-1640培地で培養した。遊離コレステロールとCoQ10を、約107から108個のリンパ芽球様細胞から4倍量の2プロパノールで抽出するか、3人のMSA患者及び3人の対照者の生検によって調製した小脳の凍結サンプルから9倍量の2プロパノールで抽出した。
抽出物中の遊離コレステロールと総CoQ10濃度(ユビキノン10及びユビキノール10)は、高速液体クロマトグラフィーで測定した。
すべての結果は、平均±標準偏差で示した。キャリアと非キャリアの発症年齢の平均値の有意差は、student t検定で;アレル頻度と分割表の有意差はYates補正カイ2乗検定又はFisherの直接確率検定で、オッズ比と対応する95%信頼区間(CI)はFisherの直接確率検定でそれぞれ評価した。群比較は、Kruskal-Wallis検定とSteel法を用いた。すべての統計は両側検定とし、有意水準はp=0.05とした。
2−1.家族性MSAの原因遺伝子の同定
常染色体劣性遺伝様式の遺伝モデルを使ったFMSA_1のパラメトリックな多点連鎖解析によれば、染色体4、5、6、7、9及び13を含む約80Mbにわたる領域におけるLODスコアの最高値は1.93であった(図1B)。
FMSA_1における患者(II-4)について、ホールゲノムシーケンスを行ったところ、合計で187.5Gbのshort readが得られた。参照ゲノムの平均カバレッジは58倍であった。候補領域に位置する47,830の一塩基変異(SNVs)又は挿入/欠失(indels)から始めて、この家族の変異候補を4つの新規な非同義SNVに絞り込んだ(図1C)。
4つのSNVは、SHROOM3遺伝子(NM_020859, Q8TF72)のc.2120A>G、p.K707R in、COQ2遺伝子(NM_015697, Q96H96)のc.1178T>C, p.V343A、COQ2遺伝子のc.382A>G, p.M78V、及びSCEL遺伝子(NM_144777, O95171)のc.691A>G, p.R231Gであった。
以上の結果から、FMSA_1及びFMSA_12の2家系の家族性MSAでは、M78VとV343Aのホモ接合体、又はR337XとV343Aの複合ヘテロ接合体を有すると、これが十分条件となってMSAが発症することがわかった。
孤発性MSAに対するCOQ2遺伝子変異の関与を調べるため、より大きな日本人コホート(363人のMSA患者と520人の対照者)について、COQ2遺伝子のリシーケンスを行った。dbSNP130に登録された非同義COQ2遺伝子変異体は一つだけであった(L16V、rs6818847)が、本発明者らは、L16Vのアレル頻度が日本人のMSA患者においては0.90、日本人の対照者においては0.88であることを確認したため、この変異体をその後の解析に含めなかった。
COQ2遺伝子のリシーケンスにより、4人のMSA患者が2つの変異を同時に有していたが(1人はI97T/V343A、1人はR337Q/V343A、2人はV343A/V343A)、対照者には2つの変異をCOQ2遺伝子に有する者は存在しないことが明らかとなった(表6)。
AD、PD及びALSを含む他の神経変性疾患のジェノタイピングにより、V343Aのアレル頻度はAD患者において109/5,456 (2.0%)(うち2人はV343Aのホモ接合体を有した)、PD患者において33/1,318 (2.5%)、ALS患者において31/1268 (2.4 %)であった。これらのアレル頻度は、対照者の第一及び第二コホートにおいては有意差が見られず、COQ2遺伝子のV343A変異のMSAに対する特異性が確認できた。
CoQ10の生合成と好気的エネルギー産生に対する、各変異の機能への影響を調べるために、酵母coq2遺伝子ヌル変異体を、野生型又は変異型ヒトCOQ2遺伝子cDNAで形質転換して、機能相補性解析を行った(図2A)。BY4741Δcoq2酵母株の変異COQ2遺伝子(P49H、S57T、R69H、M78V、M78V-V343A、P107S、S113F、R337Q及びR337Xを含む)による形質転換体においては、coq2ヌル株に見られるのと同様に、呼吸依存性増殖が著しく低下した(非常に有害な変異)。さらに、変異型COQ2 cDNA(I97T、T267A及びS297Cを含む)による形質転換体は、野生型CoQ2を発現する形質転換体に比べてかなり低いが、coq2ヌル株よりは高い増殖率を示した(中等度に有害な変異)。変異型COQ2 cDNA(L16V、P22L、F29L、N336H及びV343Aを含む)による形質転換体は、野生型CoQ2を発現する形質転換体と同等の増殖率を示した。
次に、COQ2変異を有するリンパ芽球様細胞が入手できるものについて、V343A変異体との関連でCoQ2活性を測定した。V343Aは、MSAによく関連する変異であり、この変異体がyeast complementation assayにおいて通常の増殖を示したので選択した。CoQ2変異(R337Q/V343A、R337X/V343A、V343A/V343A、またはV343A/wt)のいずれかを有するMSA患者から得たリンパ芽球様細胞と、変異を有しない対照者から得たリンパ芽球様細胞におけるCoQ2活性を測定した。これらの患者におけるCoQ2活性は、変異を有しない対照者と比較して著しく低かった(図2B)。V343A変異体におけるCoQ2活性は、yeast complementation analysisにおいて、V343A変異COQ2 cDNAで形質転換した酵母coq2ヌル株が通常の増殖速度を示したにもかかわらず、著しく減少していた。
COQ2遺伝子変異(yeast complementation assay及びCoQ2活性測定において確認された機能損失したCoQ2)のキャリアである孤発性MSA患者と、非キャリアの孤発性MSA患者の臨床的特徴を表8に示す。
キャリア群のMSA発症年齢の平均は非キャリア群より高く、その差は有意であった。(p=0.0021)。臨床病型は、34人のキャリアがMSA-C、5人のキャリアがMSA-P、1人のキャリアがいずれにも分類されない型であり、468人の非キャリアがMSA-C、209人の非キャリアがMSA-P、42人の非キャリアがいずれにも分類されない型であった。MSA-Pに対するMSA-Cの比は、2×2分割表を用いたFisherの直接確率検定で求めたところ、CoQ2変異のキャリアにおいて非キャリアより有意に高かった(p=0.018)(表8)。
V343AキャリアのMSA患者から得たリンパ芽球様細胞、変異を有しないMSA患者から得たリンパ芽球様細胞、及び変異を有しない対照者から得たリンパ芽球様細胞における細胞内CoQ10濃度を測定した。対象者は(1)2つの変異アレル(R337Q/V343A、R337X/V343A、及びV343A/V343A)のキャリアであるMSA患者、(2)V343Aのヘテロ接合体のキャリアである16人のMSA患者、(3)変異を有しない133人のMSA患者、及び(4)変異を有しない76人の対照者に分けた(表9)。
COQ2変異を有するMSA患者から得られる脳組織の数は限られているが、COQ2変異を有する3人の患者(1人はM78V-V343A/M78V-V343A、2人はV343A/wt)の凍結脳組織と、変異を有しない対照者の凍結脳組織におけるCoQ10濃度を測定した(図2C)。M78V-V343Aのホモ接合体を有するMSA患者におけるCoQ10濃度は、変異を有しない対照者と比較して有意に低かった。
3−1.試験薬と投与方法
家族性MSAの発症者で,COQ2遺伝子のR337X/V343A複合ヘテロ接合性変異を有する患者1例(図1に示すFMSA_12のII-4)を対象として、ユビキノールの臨床試験を行った。
カネカから提供を受けたユビキノール(2-[(2E,6E,10E,14E,18E,22E,26E,30E,34E)-3,7,11,15,19,23,27,31,35,39-decamethyltetraconta-2,6,10,14,18,22,26,30,34,38-decaenyl]-5,6-dimethoxy-3-methylcyclohexa-2,5-diene-1,4-diol)として、120mg含有する安定粉末を、規定の用量(600mg、840mg、1200mg)に従い、胃瘻チューブから朝一回投与した。
対象1例で対照を設定しない非盲検の探索的臨床試験であり、以下の事項の検討を目的として行った。
1.高用量投与の安全性を確認する
2.薬物動態を調べる
3.薬物動態から長期投与の用量を判断する
4.臨床指標を検討する
試験の評価項目は以下のとおりである。
(1) 主要評価項目(Primary endpoint)
・血漿および白血球中,髄液中コエンザイムQ10濃度
・有害事象の有無
(2) 副次的評価項目(Secondary endpoint)
・UMSARS Part II(運動機能の評価)
・尿中8-OHdG
・15O-PETによる酸素代謝能の評価
(3) 安全性評価項目
・肝機能検査(AST,ALT,γ-GTP,ALP,T.Bil)
ラットにコエンザイムQ10を300mg/kg投与したところ,AST,ALTが軽度上昇したという報告があるため。
・自覚症状,身体診察・神経学的診察による他覚所見
・施行される各種検査値の異常
試験のアウトラインを図4に示す。
・有害事象について
試験期間中,自覚症状・他覚症状の有無,臨床検査(血算,生化学的検査:AST,ALT,γ-GTP,ALP,T.Bil, BUN, Cre, Na, K, Cl, Glu, CK)について経時的な観察をした。
試験薬に関連すると判断される有害事象は生じなかった.
血漿CoQ10濃度の測定結果を図5に示す。
ベースの血漿CoQ10濃度は低いレベルであった。1200mg投与で、既報告におけるプラトーに達した。ユビキノンの高用量投与の既報告では、ユビキノンとして2400mg以上の投与によって、7.5〜8.0μg/mlでプラトーに達している。本試験では、ユビキノール1200mgで7.9μg/mlに達しており、既報告のデータに照らしてプラトーと判断された。
単核球中の全CoQ10/遊離コレステロール(nM/μM)の測定結果を図6に示す。ユビキノール投与により、用量依存的に、単核球中の全CoQ10/遊離コレステロールが上昇していることが確認された。
髄液CoQ10濃度(μg/ml)を測定した結果を図7に示す。ユビキノン・ユビキノール投与時の髄液CoQ10濃度の変化は報告がない。ベースの髄液CoQ10濃度は低いレベルであったが、840mg,1200mg投与群でプラトーに達しているように見えた。
尿中8−OHdG(ng/mg-Cre)の測定結果を図8に示す。ベースの尿中8−OHdGは高いレベル(平均8.4, n=500)であったが、ユビキノール投与により低下した。用量依存性は明確には見られなかった。
臨床評価スケールを図9に示す。軽微な変動はあったが、統計的に有意と判断できる変化は認められなかった。担当医、家族(妻)からの呼びかけに対する反応の改善、上肢の拳上の改善、四肢の震えの軽減との感想が得られた。但し、主観的なバイアス、入院中のリハビリ効果など複合的な要素があり、判断は困難であった。
脳血流量と酵素代謝量の測定結果を図10に示す。いずれも投与後に上昇する傾向が見られた。
今回の試験で以下の点が初めて明らかになった。
1.高用量投与においても、ユビキノールはユビキノンに比べ、bioavailabilityが高い。
2.ユビキノール1200mgで、血漿CoQ10はプラトーに達すること。先行研究で観察されている血漿CoQ10のプラトーに一致する結果が観察された。このことは、投与されたCoQ10が血漿へ移行することを示す。
3.ユビキノール投与により、末梢血単核球のCoQ10含量が上昇することが確認できた。このことは、投与されたCoQ10が細胞内に移行することを示す。
4.ユビキノール投与により、髄液CoQ10濃度、正常コントロールの髄液CoQ10濃度を超える値まで上昇することが確認された。このことは、投与されたCoQ10が髄液へ移行することを示す。
5.2〜4.より、投与されたCoQ10が、CoQ10の低下を補うことができることが示された。
5.ユビキノール1200mgの2週間投与で、有害事象は観察されなかった。
6.[15O]O2 PETの評価によって、脳酸素消費量が投与前に比べて明らかに改善した。CoQ10補充により、中枢神経系の機能改善を評価するサロゲートマーカーになる可能性が示唆された。
Claims (9)
- 被検者の多系統萎縮症リスクの検査方法であって、被検者から採取した試料におけるコエンザイムQ10の生合成を低下させる変異を検出する工程を含む、方法。
- 前記コエンザイムQ10の生合成を低下させる変異は、Para-hydroxybenzoate-polyprenyltransferase(コエンザイムQ2)の発現又は機能を抑制する変異である、請求項1に記載の方法。
- 前記コエンザイムQ2の発現又は機能を抑制する変異は、配列番号:1におけるP49H、S57T、R69H、M78V、I97T、P107S、S113F、T267A、S297C、R337Q、R337X、及びV343Aからなる群より選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記コエンザイムQ2の発現又は機能を抑制する変異は、V343Aである、請求項2に記載の方法。
- 多系統萎縮症リスクの検査キットであって、以下の(i)から(iii)の少なくとも1つを含むキット:
(i) コエンザイムQ2遺伝子における、コエンザイムQ2タンパク質(配列番号:1)の49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位、及び343位からなる群より選択される部位のアミノ酸をコードする核酸を含む領域にハイブリダイズする核酸;
(ii) コエンザイムQ2遺伝子における、コエンザイムQ2タンパク質(配列番号:1)の49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位、及び343位からなる群より選択される部位のアミノ酸をコードする核酸を含む領域を増幅可能なプライマーセット;及び
(iii) 配列番号:1において、P49H、S57T、R69H、M78V、I97T、P107S、S113F、T267A、S297C、R337Q、R337X、及びV343Aからなる群より選択される少なくとも1つの変異を有するコエンザイムQ2タンパク質と、野生型コエンザイムQ2タンパク質のいずれかのみに交差性なく結合する抗体。 - コエンザイムQ10を含む多系統萎縮症の予防又は治療剤。
- コエンザイムQ10を投与する工程を含む、多系統萎縮症の予防又は治療方法;
- 多系統萎縮症の予防又は治療剤のスクリーニング方法であって、
候補化合物と細胞とを接触させてインキュベートする工程と、
細胞内のコエンザイムQ10量を上昇させる候補化合物を選択する工程と、を含む方法。 - V343A変異を含むコエンザイムQ2タンパク質をコードする核酸。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013020763 | 2013-02-05 | ||
JP2013020763 | 2013-02-05 | ||
PCT/JP2014/052658 WO2014123151A1 (ja) | 2013-02-05 | 2014-02-05 | 多系統萎縮症リスクの検査方法、検査キット、及び多系統萎縮症の治療又は予防薬 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014123151A1 true JPWO2014123151A1 (ja) | 2017-02-02 |
JP6358962B2 JP6358962B2 (ja) | 2018-07-18 |
Family
ID=51299743
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014560782A Active JP6358962B2 (ja) | 2013-02-05 | 2014-02-05 | 多系統萎縮症リスクの検査方法、検査キット、及び多系統萎縮症の治療又は予防薬 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20160067195A1 (ja) |
JP (1) | JP6358962B2 (ja) |
CN (1) | CN105102621A (ja) |
WO (1) | WO2014123151A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110208231B (zh) * | 2019-06-05 | 2021-12-17 | 宁海县浙工大科学技术研究院 | 基于纳米孔膜/Au@ZIF检测8-羟基脱氧鸟苷的荧光生物传感器的制备方法 |
CN111341452B (zh) * | 2020-04-01 | 2023-07-07 | 四川大学华西医院 | 多系统萎缩失能预测方法、模型建立方法、装置及设备 |
TW202320741A (zh) * | 2021-08-31 | 2023-06-01 | 國立大學法人東京大學 | 多系統萎縮症治療用之醫藥組成物 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007528367A (ja) * | 2003-06-09 | 2007-10-11 | アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 神経変性疾患を治療する方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101103969A (zh) * | 2002-12-24 | 2008-01-16 | 神经化学(国际)有限公司 | 治疗β淀粉样蛋白相关疾病的治疗性制品 |
EP1915333B1 (en) * | 2005-08-10 | 2015-06-03 | DSM IP Assets B.V. | Process for the preparation of ubihydroquinones and ubiquinones |
-
2014
- 2014-02-05 JP JP2014560782A patent/JP6358962B2/ja active Active
- 2014-02-05 US US14/763,794 patent/US20160067195A1/en not_active Abandoned
- 2014-02-05 CN CN201480019831.1A patent/CN105102621A/zh active Pending
- 2014-02-05 WO PCT/JP2014/052658 patent/WO2014123151A1/ja active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007528367A (ja) * | 2003-06-09 | 2007-10-11 | アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 神経変性疾患を治療する方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
DATABASE DDBJ/EMBL/GENBANK [ONLINE], 2012.11.28, ACCESSION NO. Q96H96, JPN7017003269, ISSN: 0003658241 * |
DIOMEDI-CAMASSEI, F. ET AL.: "COQ2 nephropathy: a newly described inherited mitochondriopathy with primary renal involvement.", J. AM. SOC. NEPHROL., vol. 2007, vol.18, JPN6014017073, pages 2773 - 2780, ISSN: 0003809807 * |
LOPEZ-MARTIN, J.M., ET AL.: "Missense mutation of the COQ2 gene causes defects of bioenergetics and de novo pyrimidine synthesis.", HUM. MOL. GENET., vol. 2007, vol.16, no.9, JPN6014017068, pages 1091 - 1097, ISSN: 0003809806 * |
QUINZII, C., ET AL.: "A mutation in para-hydroxybenzoate-polyprenyl transferase (COQ2) causes primary coenzyme Q10 deficie", AM. J. HUM. GENET., vol. 2006, vol.78, JPN6014017063, pages 345 - 349, ISSN: 0003809808 * |
中原康雄, 外: "ゲノムワイド関連解析に基づく多系統萎縮症(MSA)の疾患感受性遺伝子の探索", 臨床神経学, vol. 2010, vol.50, no.12, JPN6014017061, pages 1155 - 22, ISSN: 0003809805 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20160067195A1 (en) | 2016-03-10 |
JP6358962B2 (ja) | 2018-07-18 |
CN105102621A (zh) | 2015-11-25 |
WO2014123151A1 (ja) | 2014-08-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Udar et al. | SOD1: a candidate gene for keratoconus | |
Burdon et al. | Genome-wide association study identifies susceptibility loci for open angle glaucoma at TMCO1 and CDKN2B-AS1 | |
Choi et al. | Brain-derived neurotrophic factor gene polymorphism (Val66Met) and citalopram response in major depressive disorder | |
Ueta et al. | Association between prostaglandin E receptor 3 polymorphisms and Stevens-Johnson syndrome identified by means of a genome-wide association study | |
Safarinejad et al. | The role of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) T‐786C, G894T, and 4a/b gene polymorphisms in the risk of idiopathic male infertility | |
US20140371094A1 (en) | Methods for treating, diagnosing and monitoring alzheimer's disease | |
US20080286796A1 (en) | Genetic polymorphisms associated with neurodegenerative diseases, methods of detection and uses thereof | |
O'Byrne et al. | Association of folate receptor (FOLR1, FOLR2, FOLR3) and reduced folate carrier (SLC19A1) genes with meningomyelocele | |
Bhagyalaxmi et al. | A novel mutation (F71L) in αA-crystallin with defective chaperone-like function associated with age-related cataract | |
He et al. | PRM1 variant rs35576928 (Arg> Ser) is associated with defective spermatogenesis in the Chinese Han population | |
Naz et al. | Association of interleukin 10 (IL-10) gene with type 2 diabetes mellitus by single nucleotide polymorphism of its promotor region G/A 1082 | |
Campbell et al. | Polymorphisms in KCNE1 or KCNE3 are not associated with Meniere disease in the Caucasian population | |
JP2009520460A (ja) | 心筋梗塞に関連する遺伝的多型、その検出方法および使用 | |
JP6358962B2 (ja) | 多系統萎縮症リスクの検査方法、検査キット、及び多系統萎縮症の治療又は予防薬 | |
Li et al. | Apolipoprotein E ε4 allele was associated with Nonlesional mesial temporal lobe epilepsy in Han Chinese population | |
Kasamo et al. | A PRIMPOL mutation and variants in multiple genes may contribute to phenotypes in a familial case with chronic progressive external ophthalmoplegia symptoms | |
Hilal et al. | Screening of CYP1B1 and MYOC in Moroccan families with primary congenital glaucoma: three novel mutations in CYP1B1 | |
Chen et al. | IL1B polymorphism is associated with essential tremor in Chinese population | |
Hsieh et al. | Association between retinoid-X receptor-gamma genetic polymorphisms and diabetic retinopathy | |
Watanabe et al. | Leber's hereditary optic neuropathy with dystonia in a Japanese family | |
Palo et al. | Identification of susceptibility loci at 7q31 and 9p13 for bipolar disorder in an isolated population | |
Rezvani et al. | Fifteen novel mutations in the mitochondrial NADH dehydrogenase subunit 1, 2, 3, 4, 4L, 5 and 6 genes from Iranian patients with Leber’s hereditary optic neuropathy (LHON) | |
US20240026454A1 (en) | Single nucleotide polymorphism marker for predicting risk of alzheimers disease and use thereof | |
Bauer et al. | Absence of spinocerebellar ataxia type 3/Machado–Joseph disease within ataxic patients in the Czech population | |
Meulemans et al. | A new family with the mitochondrial tRNAGLU gene mutation m. 14709T> C presenting with hydrops fetalis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170110 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171006 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20171127 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180125 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180604 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180619 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6358962 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |