JPWO2007013370A1 - 核酸の塩基配列を決定する方法及び装置 - Google Patents
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Abstract
Description
(A)試料核酸の識別の対象となる塩基配列を持つ部分を伸長した状態で基板表面上に固定する工程、
(B)前記基板表面上に固定された該核酸の前記部分に対し、データベース用の物理信号を取得したときと同じ条件で、該核酸を構成する個々の塩基を前記プローブを用いて測定し、各塩基に固有の物理信号を塩基単位で取り出す工程、及び
(C)取り出した物理信号を前記データベース内の物理信号と照合して各塩基の塩基種を同定して塩基配列を決定する工程。
前記測定部は前記プローブと塩基間に電界を加えることができ、その電界に対する電気的応答を測定することのできる走査型プローブ顕微鏡を構成しているものが好ましい。この場合、前記電気的応答を前記物理信号として用いる。
解析の手段として光を用いないため、蛍光体や修飾ヌクレオチド等の高価な試薬が不要となり、解析コストを大幅に低減することが可能となる。
測定部としての走査型プローブ顕微鏡は、その構成要素として先端に探針をもつ微小プローブ2と、制御装置4を備えている。試料の核酸6は少なくとも表面が導電性の基板8の表面上に固定されて走査型プローブ顕微鏡内のステージ上に載置される。制御装置4はプローブ2と基板8の表面との間にバイアス電圧Vsを印加し、プローブ2から試料核酸6に流れるトンネル電流Itを検出するとともに、プローブ2の位置制御を行ない、試料核酸6から構成塩基単位でその塩基種に固有の物理信号Sを取り出す。
そのような電気的応答のさらに他の例は、バイアス電圧Vsが交流成分を含んでいるときのそのバイアス電圧の変化に対するプローブ2と塩基との間の静電容量の変化である。
データ処理部12と記憶部10はこの走査型プローブ顕微鏡に専用のコンピュータにより実現することもできるし、汎用のパーソナルコンピュータにより実現することもできる。
走査型プローブ顕微鏡として走査型トンネル顕微鏡を用い、微小プローブと塩基間におけるトンネル電流のバイアス電圧依存性の一例として塩基高さのバイアス電圧依存性を物理信号として塩基配列を決定する方法の測定例を以下に示す。
まず、走査型トンネル顕微鏡の通常の測定モードにより、プローブ2の探針と基板8との間に一定の直流バイアス電圧が印加され、プローブ2がX,Y方向に走査される。X,Y方向の走査中に、プローブ2の探針が核酸6にnm程度に接近すると、トンネル効果によりプローブ2の探針と核酸6との間にトンネル電流が流れる。制御装置4はこのトンネル電流を増幅し、それが一定になるようにプローブ2のZ方向のピエゾ素子を駆動するZ方向制御電圧 が印加されてプローブ2の探針の高さが制御されることにより、核酸6の画像が取得され、その画像中での塩基の位置が特定される。
4 制御装置
6 核酸
8 基板
10 記憶部
12 データ処理部
Claims (11)
- 微小プローブを用いて核酸を構成する各塩基種に固有の物理信号を取得し、それらの物理信号からなるデータベースを構築しておき、以下の工程(A)から(C)を備えて試料核酸の塩基配列を決定する塩基配列決定方法。
(A)試料核酸の識別の対象となる塩基配列を持つ部分を伸長した状態で基板表面上に固定する工程、
(B)前記基板表面上に固定された該核酸の前記部分に対し、データベース用の物理信号を取得したときと同じ条件で、該核酸を構成する個々の塩基を前記プローブを用いて測定し、各塩基に固有の物理信号を塩基単位で取り出す工程、及び
(C)取り出した物理信号を前記データベース内の物理信号と照合して各塩基の塩基種を同定して塩基配列を決定する工程。 - 前記基板として少なくとも核酸を固定する表面が導電性をもつものを使用し、
前記プローブを備えた測定装置として走査型プローブ顕微鏡を使用し、前記物理信号としてそのプローブと塩基間に加えられた電界に対する電気的応答を取り出す請求項1に記載の塩基配列決定方法。 - 前記電界は前記プローブと塩基間に印加されたバイアス電圧であり、前記電気的応答はプローブと塩基との間に流れるトンネル電流が一定になるようにフィードバック制御したときのそのバイアス電圧の変化に対する塩基像の高さの変化である請求項2に記載の塩基配列決定方法。
- 前記電界は前記プローブと塩基間に印加されたバイアス電圧であり、前記電気的応答は、プローブと塩基間の距離を固定したときの、そのバイアス電圧の変化に対するプローブと塩基との間に流れるトンネル電流の変化である請求項2に記載の塩基配列決定方法。
- 前記電界は前記プローブと塩基間に印加されたバイアス電圧であり、かつこのバイアス電圧は交流成分を含み、
前記電気的応答はそのバイアス電圧の変化に対するプローブと塩基との間の静電容量の変化である請求項2に記載の塩基配列決定方法。 - 基板の表面に固定された核酸を微小プローブによって塩基単位で認識することができるとともに、認識した塩基に固有の物理信号を取り出すことのできる測定部と、
前記プローブを用いて取得した核酸構成塩基種に固有の物理信号からなるデータベースを記憶した記憶部と、
前記プローブを用いて取得した試料核酸の物理信号を前記データベース内の物理信号と照合して各塩基の塩基種を同定して塩基配列を決定し出力するデータ処理部と、
を備えた塩基配列決定装置。 - 前記データ処理部は決定された塩基配列を出力するための表示部を備えている請求項6に記載の塩基配列決定装置。
- 前記測定部は前記プローブと塩基間に電界を加えることができ、その電界に対する電気的応答を測定することのできる走査型プローブ顕微鏡を構成しており、前記電気的応答を前記物理信号として用いる請求項6又は7に記載の塩基配列決定装置。
- 前記電界として前記プローブと塩基間にバイアス電圧を印加し、プローブと塩基間に流れるトンネル電流が一定になるようにフィードバック制御し、そのバイアス電圧の変化に対する塩基の高さの変化を前記電気的応答として測定する請求項8に記載の塩基配列決定装置。
- 前記電界として前記プローブと塩基間にバイアス電圧を印加し、プローブと塩基間の距離を固定し、前記バイアス電圧の変化に対するプローブと塩基との間に流れるトンネル電流の変化を前記電気的応答として測定する請求項8に記載の塩基配列決定装置。
- 前記電界として前記プローブと塩基間に交流成分を含むバイアス電圧を印加し、そのバイアス電圧の変化に対するプローブと塩基との間の静電容量の変化を前記電気的応答として測定する請求項8に記載の塩基配列決定装置。
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