JPWO2005090412A1

JPWO2005090412A1 - Natural rubber latex from which protein has been removed, its production method and its use

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Publication number: JPWO2005090412A1
Application number: JP2006511339A
Authority: JP
Inventors: 田中　康之; 康之田中; ジタラッダ・サクダピパニッチ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-03-24
Filing date: 2005-03-22
Publication date: 2008-01-31
Anticipated expiration: 2025-03-22
Also published as: MY149882A; JP5140272B2; CN1946744A; CN100487001C; WO2005090412A1

Abstract

ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法により１４、３１および４５ｋＤａのそれぞれのバンドで特定されるタンパク質を実質的に含まない天然ゴムラテックス、および天然ゴムラテックスを界面活性剤の存在下に水酸化アルカリによりケン化して上記の如き天然ゴムラテックスを製造する方法。上記天然ゴムラテックスはＩ型アレルギーを発現する原因物質である上記の如きタンパク質を実質的に含有しないのでカテーテル、ゴム手袋、コンドーム、発泡体等の製品の製造に好適に用いられる。Natural rubber latex substantially free of proteins specified by the respective bands of 14, 31 and 45 kDa by SDS-PAGE method, and natural rubber latex saponified with alkali hydroxide in the presence of a surfactant as described above A method for producing such natural rubber latex. Since the natural rubber latex does not substantially contain the above-mentioned protein which is a causative substance that develops type I allergy, it is suitably used for the manufacture of products such as catheters, rubber gloves, condoms and foams.

Description

本発明はタンパク質が除去された天然ゴムラテックス、その製造法および用途に関する。さらに詳しくは、天然ゴムラテックスに特有の特定の分子量のタンパク質を実質的に含まない天然ゴムラテックス、その製造法およびその用途に関する。 The present invention relates to a natural rubber latex from which protein has been removed, its production method and use. More specifically, the present invention relates to a natural rubber latex substantially free from a protein having a specific molecular weight specific to natural rubber latex, a production method thereof and use thereof.

従来より、天然ゴムは、自動車用タイヤ、航空機用タイヤ、ベルトなどの工業用製品に幅広く利用されている。かかる天然ゴムは、ゴム分のほか、水、タンパク質、無機塩類などを含むラテックスとして採取され、このラテックスを凝固して生ゴム（クレープゴムまたはスモークドシートゴム）が得られる。この生ゴムから、素練り、配合剤の配合、成形、加硫を経て目的とするゴム製品が製造される。また、天然ゴムラテックスそのものからも多くの工業製品が製造されている。例えば、玩具用風船、ゴム手袋やカテーテルやコンドームなどの医療用品、発泡体（フォームラバー）、ゴム糸、ゴム管、接着剤、紙加工用コート剤などの製造に利用されている。
天然ゴムの新鮮ラテックスは、ゴム分約２８〜３０％（ｗｅｉｇｈｔ／ｖｏｌｕｍｅ）の外にタンパク質、脂質、糖質、無機物などの非ゴム成分を含んでいる。この新鮮ラテックスをギ酸で凝固して得た固形天然ゴム（生ゴム）には約６重量％の非ゴム成分が含まれている。これらの非ゴム成分は天然ゴムが特有の物性を示す上で重要なことが知られている。しかしながら、１９９０年頃から天然ゴムラテックス製品特に手袋に含まれるタンパク質の一部がＩ型の即時型アレルギーを引き起こすことが社会的な問題になり、米国ＦＤＡはラテックス製品から溶出タンパク質を低減するようにゴム製品の製造業者に警告を発した。
ラテックス中のタンパク質の低減方法としては、ラテックスを（ｉ）繰り返し遠心分離する方法（ｉｉ）タンパク質分解酵素で処理する方法あるいは（ｉｉｉ）アルカリで処理する方法が知られている。しかしながら、これらの方法でタンパク質を除去したラテックスには、まだかなりの窒素分が含有され、耐アレルギー性は未だ十分ではなかった。
本発明者は天然ゴムラテックス中のタンパク質について詳細に研究したところ、天然ゴム中のタンパク質は、ラテックスの奬液（セラム）とゴム粒子表面に存在し、ラテックス中のゴム粒子は表面を脂質とタンパク質の二重膜で安定化されていることそして通常のタンパク質分解酵素ではタンパク質の全てを除去することは困難であることを見出した。
そのため、ラテックスを遠心分離する方法（ｉ）ではセラム中のタンパク質は除去できるがゴム粒子表面のタンパク質は除去できない。一方、ラテックスをタンパク質分解酵素で処理する方法（ｉｉ）では、タンパク質分解酵素でゴム粒子表面のタンパク質をある程度分解できるが、十分ではなく微量のタンパク質が残存すること、および使用したタンパク質分解酵素をラテックスから完全には取り除くことができず、何らかのアレルゲンとなる可能性のあるタンパク質が残存する恐れがあった。さらにアルカリで処理する方法（ｉｉｉ）ではゴム粒子表面のタンパク質を分解することができるが、その処理の際ゴム粒子の凝固が起るため、ラテックスの状態で安定にこれらの反応を行うことは困難であった。
かかる状況に鑑み、本発明者の一人は鋭意研究を重ねた結果、タンパク質含有率の指標となる窒素含有率を０．０２％以下に低減した天然ゴムを製造する方法を見出し、既に特許出願した（特開平６−５６９０２号公報参照）。その方法は、天然ゴムラテックスを界面活性剤とタンパク質分解酵素で処理をした後、遠心分離によって濃縮と洗滌を１ないし２回行なう方法である。この方法では、この天然ゴムラテックスを凝固すると得られる天然ゴムの窒素含有率は０．０２％以下である。この事実は、このラテックスのクリーム相に含まれるゴムが固形分換算で窒素分を０．０２％以下含有しているということである。従って、天然ゴムラテックスを界面活性剤とタンパク質分解酵素で処理をし、遠心分離によって濃縮と洗滌を行ったラテックスはタンパク質が高度に除去されているので、この低タンパク質の天然ゴムラテックスを用いて作製された手袋ではアレルギー発現が減少した。
しかしながら、この脱タンパク質の方法で得られた低タンパク質の天然ゴムラテックスにより作製されたゴム手袋は、より厳格な試験法であるスクラッチ法による臨床試験によってはまだ約８％の患者にＩ型アレルギーに陽性を示すことが認められ、その意味から言えばまだ、完全ではなかった（Ｒ．Ｈａｙａｋａｗａ，ｅｔａｌ．，Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，６，１０（１９９９）参照）。Conventionally, natural rubber has been widely used in industrial products such as automobile tires, aircraft tires, and belts. Such natural rubber is collected as a latex containing water, protein, inorganic salts, etc. in addition to the rubber component, and the latex is coagulated to obtain a raw rubber (crepe rubber or smoked sheet rubber). From this raw rubber, the intended rubber product is manufactured through mastication, compounding, molding and vulcanization. Many industrial products are also produced from natural rubber latex itself. For example, it is used for the production of toy balloons, medical supplies such as rubber gloves, catheters and condoms, foams (foam rubber), rubber yarns, rubber tubes, adhesives, and paper processing coating agents.
Fresh latex of natural rubber contains non-rubber components such as proteins, lipids, carbohydrates, and inorganic substances in addition to a rubber content of about 28-30% (weight / volume). Solid natural rubber (raw rubber) obtained by coagulating the fresh latex with formic acid contains about 6% by weight of non-rubber components. These non-rubber components are known to be important for natural rubber to exhibit specific physical properties. However, since around 1990, it has become a social problem that some of the proteins contained in natural rubber latex products, especially gloves, cause type I immediate allergies, and the US FDA has decided to reduce the amount of protein eluted from latex products. A warning was issued to the manufacturer of the product.
Known methods for reducing proteins in latex include (i) a method of repeatedly centrifuging latex, (ii) a method of treating with latex, and (iii) a method of treating with latex. However, latexes from which proteins have been removed by these methods still contain a considerable amount of nitrogen, and allergic resistance has not been sufficient.
The present inventor has studied in detail the protein in the natural rubber latex. The protein in the natural rubber exists in the latex serum and the surface of the rubber particle, and the rubber particle in the latex has a lipid and protein surface. It was found that it was difficult to remove all of the protein with a normal proteolytic enzyme.
Therefore, in the method (i) of centrifuging latex, proteins in the serum can be removed, but proteins on the rubber particle surface cannot be removed. On the other hand, in the method (ii) in which the latex is treated with a proteolytic enzyme, the protein on the rubber particle surface can be degraded to some extent by the proteolytic enzyme, but not enough, a trace amount of protein remains, and the used proteolytic enzyme is converted into the latex. There was a risk that proteins that could not be completely removed from the cells and could become allergens remained. Furthermore, in the method (iii) of treating with an alkali, proteins on the surface of rubber particles can be decomposed. However, since the rubber particles are coagulated during the treatment, it is difficult to carry out these reactions stably in a latex state. Met.
In view of such a situation, one of the inventors of the present invention has intensively studied, and as a result, has found a method for producing natural rubber having a nitrogen content that is an index of protein content reduced to 0.02% or less, and has already filed a patent application. (See JP-A-6-56902). In this method, natural rubber latex is treated with a surfactant and a proteolytic enzyme, and then concentrated and washed by centrifugation once or twice. In this method, the nitrogen content of the natural rubber obtained by coagulating the natural rubber latex is 0.02% or less. This fact means that the rubber contained in the cream phase of the latex contains 0.02% or less of nitrogen in terms of solid content. Therefore, natural rubber latex is treated with a surfactant and proteolytic enzyme, and concentrated and washed by centrifugation, so protein is highly removed, so this low protein natural rubber latex is used. Allergic expression was reduced in the worn gloves.
However, the rubber gloves made from the low protein natural rubber latex obtained by this deproteinization method still have type I allergy in about 8% of patients according to the clinical test by the scratch method, which is a stricter test method. It was found to be positive, and in that sense, it was still not complete (see R. Hayakawa, et al., Environ. Dermatol., 6, 10 (1999)).

それ故、本発明の目的は、Ｉ型アレルギーが発現する原因物質を究明し、その究明事実に基づいてその原因物質を除去した天然ゴムラテックスを提供することにある。
本発明の他の目的は、本発明の上記天然ゴムラテックスの工業的に有利な製造法を提供することにある。
本発明のさらに他の目的は、本発明の上記天然ゴムからなるカテーテル、ゴム手袋、コンドーム、発泡体等の製品を提供することにある。
本発明のさらに他の目的および利点は、以下の説明から明らかになろう。
本発明によれば、本発明の上記目的および利点は、第１に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法により１４、３１および４５ｋＤａのそれぞれのバンドで特定されるタンパク質を実質的に含まないことを特徴とする天然ゴムラテックスによって達成される。
また、本発明によれば、本発明の上記目的および利点は、第２に、天然ゴムラテックスを界面活性剤の存在下に水酸化アルカリによりケン化することを特徴とする本発明の天然ゴムラテックスの製造方法によって達成される。
最後に、本発明によれば、本発明の上記目的および利点は、第３に、本発明の上記天然ゴムラテックスを用いて製造されたカテーテル、ゴム手袋、コンドームまたは発泡体によって達成される。Therefore, an object of the present invention is to investigate a causative substance that causes type I allergy and to provide a natural rubber latex from which the causative substance is removed based on the investigation fact.
Another object of the present invention is to provide an industrially advantageous process for producing the natural rubber latex of the present invention.
Still another object of the present invention is to provide products such as catheters, rubber gloves, condoms, foams and the like made of the natural rubber of the present invention.
Still other objects and advantages of the present invention will become apparent from the following description.
According to the present invention, the above objects and advantages of the present invention are as follows. First, a natural protein characterized in that it is substantially free of proteins identified by the respective bands of 14, 31 and 45 kDa by SDS-PAGE. Achieved with rubber latex.
According to the present invention, the above object and advantage of the present invention are as follows. Secondly, the natural rubber latex of the present invention is characterized in that natural rubber latex is saponified with alkali hydroxide in the presence of a surfactant. This is achieved by the manufacturing method.
Finally, according to the present invention, the above objects and advantages of the present invention are achieved thirdly by a catheter, rubber glove, condom or foam produced using the above natural rubber latex of the present invention.

図１は実施例１のケン化天然ゴムラテックスのＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定結果を示している。
図２は新鮮天然ゴムラテックスのＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定結果を示している。
図３はタンパク質分解酵素で脱タンパク質した天然ゴムラテックスのクリーム相のＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定結果を示している。
図４は実施例２〜４で得られたケン化天然ゴムラテックスのクリーム相のＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定結果を示している。
図５はケン化天然ゴムラテックスから作製した手袋の一部（図５の１）および脱タンパク質した天然ゴムラテックスから作成した手袋の一部（図５の２）を示している。FIG. 1 shows the results of SDS-PAGE measurement of the saponified natural rubber latex of Example 1.
FIG. 2 shows the results of SDS-PAGE measurement of fresh natural rubber latex.
FIG. 3 shows the results of SDS-PAGE measurement of the cream phase of natural rubber latex deproteinized with proteolytic enzymes.
FIG. 4 shows the results of SDS-PAGE measurement of the cream phase of the saponified natural rubber latex obtained in Examples 2-4.
FIG. 5 shows a part of a glove made from saponified natural rubber latex (1 in FIG. 5) and a part of a glove made from deproteinized natural rubber latex (2 in FIG. 5).

以下、本発明について詳述する。まず、本発明の天然ゴムラテックスの製造法について説明する。採取された新鮮天然ゴムラテックスは約３０％ＤＲＣ（ドライラバーコンテント）の濃度である。このラテックスに界面活性剤を加えて、ある条件で水酸化アルカリと反応させて、タンパク質を加水分解し、次いで、遠心分離によって約６０％ＤＲＣに濃縮し（この過程を濃縮、洗滌と表現する）、各種の工業製品を製造するためのラテックスを製造し、販売あるいは工業的原料に用いる。
本発明者の一人らがすでに提案したタンパク質分解酵素による低窒素含有天然ゴムラテックスの製法は、ラテックスとタンパク質分解酵素の反応を１０％ＤＲＣ程度の濃度のラテックスで行う必要があり、この点で本発明とは大きく異なり、製造プロセス上からも本方法が優れている。さらに、特定分子量の脱タンパク質の程度も本方法の方がはるかに優れている。
以下、本発明の製造法について説明する。
本発明の天然ゴムラテックスの製造方法はカチオン界面活性剤、アニオン界面活性剤および非イオン界面活性剤よりなる群から選ばれる少なくとも１種の界面活性剤の存在下で、水酸化アルカリで天然ゴムラテックスをケン化した後、例えばケン化により脱離されたタンパク質を遠心分離により脱離、洗浄を行うことによって実施される。
水酸化アルカリで天然ゴムラテックスをケン化するときに、上記の如く、カチオン界面活性剤、アニオン界面活性剤または非イオン界面活性剤を用いることにより、ラテックスの凝固を防止することができる。しかしながら、好ましくは非イオン界面活性剤および／またはアニオン界面活性剤が用いられる。
用いられる非イオン界面活性剤としては、例えばポリオキシアルキレンエーテル系、ポリオキシアルキレンエステル系、多価アルコール脂肪酸エステル系、糖脂肪酸エステル系、アルキルポリグリコシド系などが挙げられる。さらに具体的には、ポリオキシアルキレンエーテル系非イオン界面活性剤としては、例えばポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシアルキレンポリオールアルキレンエーテル、ポリオキシアルキレンスチレン化フェノールエーテル、ポリオキシアルキレンジスチレン化フェノールエーテル、ポリオキシアルキレントリスチレン化フェノールエーテルなどが挙げられる。
前記ポリオキシアルキレンポリオールアルキレンエーテルのポリオキシアルキレンポリオールとしては、炭素数２〜１２の多価アルコールが挙げられる。その例としては、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、シュクロース、ペンタエリスリトール、ソルビタンなどが挙げられる。
ポリオキシアルキレンエステル系非イオン界面活性剤としては、例えばポリオキシアルキレン脂肪酸エステルなどが挙げられる。
多価アルコール脂肪酸エステル系非イオン界面活性剤としては、例えば炭素数２〜１２の多価アルコールの脂肪酸エステルまたはポリオキシアルキレン多価アルコールの脂肪酸エステルが挙げられる。より具体的には、例えばソルビトール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、脂肪酸ジグリセライド、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどが挙げられる。また、これらのポリアルキレンオキサイド付加物例えばポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレングリセリン脂肪酸エステルなども使用可能である。
糖脂肪酸エステル系非イオン界面活性剤としては、例えばショ糖、グルコース、マントース、フラクトース、多糖類の脂肪酸エステルなどが挙げられ、これらのポリアルキレンオキサイド付加物も使用可能である。
アルキルポリグリコシド系非イオン界面活性剤としては、例えばアルキルグルコシド、アルキルポリグルコシド、ポリオキシアルキレンアルキルグルコシド、ポリオキシアルキレンアルキルポリグルコシドなどが挙げられる。また、これらのポリアルキレンオキサイド付加物も使用可能である。
前記多価アルコール脂肪酸エステル系および糖脂肪酸エステル系界面活性剤の脂肪酸としては、たとえば炭素数４〜３０の直鎖または分岐した飽和または不飽和脂肪酸が好ましく挙げられる。
界面活性剤におけるアルキル基としては、例えば炭素数４〜３０のアルキル基が挙げられる。また、ポリオキシアルキレン基としては、炭素数２〜４のアルキレン基を有するものが挙げられ、例えば酸化エチレンの付加モル数が１〜５０モル程度のものが挙げられる。
アニオン界面活性剤としては、例えばカルボン酸系、スルホン酸系、硫酸エステル系、リン酸エステル系などの界面活性剤が挙げられる。
カルボン酸系界面活性剤としては、例えば炭素数６〜３０の脂肪酸塩、多価カルボン酸塩、ロジン酸塩、トール油脂肪酸塩などが挙げられ、好ましくは炭素数１０〜２０のカルボン酸塩である。炭素数が６未満ではタンパク質および不純物の分散・乳化が不充分であり、炭素数が３０を超えると水に分散し難くなる。
スルホン酸系界面活性剤としては、例えばアルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ジフェニールエーテルスルホン酸塩等が挙げられる。
硫酸エステル系界面活性剤としては、例えばアルキル硫酸エステル塩、ポリオキシアルキレンアルキル硫酸エステル塩、ポリオキシアルキレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、トリスチレン化フェノール硫酸エステル塩、ポリオキシアルキレンジスチレン化フェノール硫酸エステル塩などが挙げられる。これらの化合物の塩としては、金属塩例えばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｚｎ塩等、アンモニア塩、アミン塩例えばトリエタノールアミン塩等が挙げられる。
リン酸エステル系界面活性剤としては、例えばアルキルリン酸エステル塩、ポリオキシアルキレンリン酸エステル塩などが挙げられる。これらの化合物の塩としては金属塩例えばＮａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｚｎ塩等、アンモニア塩、アミン塩例えばトリエタノールアミン塩等などが挙げられる。
上記の如き界面活性剤の使用量は、ゴムラテックスに対して０．０１〜５．０％（ｗ／ｖ）の割合で添加するのが好ましく、さらに好ましい範囲は０．０３〜３．０％であり、特に好ましくは０．０５〜２．０％である。下限より少ないと界面活性剤の作用が十分でなく、上限より多いと無駄な使用になる。
界面活性剤は天然ゴムラテックスを濃縮後、天然ゴムラテックスの保存時に安定性を高めるために、必要量を追加して添加することができる。
また、水酸化アルカリとしては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが好ましく用いられる。水酸化アルカリの使用量は、ゴムラテックスに対して０．１〜１０％（ｗ／ｖ）の量が好ましい。０．１％より少ないと、反応に時間がかかりすぎるし、１０％を超えると凝固反応が起こり易くなる傾向がある。さらに好ましい量は０．３〜８％である。
水酸化アルカリと界面活性剤で鹸化処理する天然ゴムラテックスは、新鮮な天然ゴムラテックスでも、高アンモニアラテックスでもかまわない。
反応時間としては特に制限はないが、反応は数分から１日程度行うことが好ましい。また、その間ラテックスは攪拌してもよいし、静置でもかまわないが、反応の促進上からは攪拌が好ましい。また、必要に応じて温度調節を行ってもよく、好適な温度としては５℃から９０℃、より好ましくは２０℃から７０℃である。
反応後、この脱タンパク質天然ゴムラテックスを５０〜７０％程度まで濃縮する。この過程によって、加水分解されたタンパク質は水に可溶化し、濃縮の度合いが高いほどセラム中に多く移行してラテックスから除去される。濃縮手段は特に問わないが、加熱濃縮、遠心分離、透析、限外ろ過などの手段が用いられる。必要に応じて、この濃縮された天然ゴムラテックスをもう一度１０数％程度に希釈して、さらに濃縮することにより、十分に残存するタンパク質分解物を除去して精製天然ゴムラテックスを得ることができる。しかし、残存する加水分解されたタンパク質は通常は製品化にあたり特別の処置は特に必要としない。これらの過程において、天然ゴムラテックスの安定性が十分に保たれる必要があり、その意味で用いる界面活性剤の種類と量は重要な因子である。通常、市販の天然ゴムラテクッスの安定性を示す指標としてＭＳＴ値（Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｓｔａｂｉｌｉｔｙｔｉｍｅ − ＡＳＴＭＤ１０７６−９７）があり、ケン化天然ゴムラテックスも商品としては、天然ゴムラテックスのＭＳＴと同等かそれ以上のＭＳＴを有していることが必要であり、そのため界面活性剤の種類と量の選択が非常に重要である。
上記本発明方法により製造されたタンパク質が分解された天然ゴムラテックスは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ−ＰｏｌｙａｒｃｙｌａｍｉｄＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ法）により分析すると１４、３１および４５ｋＤａのそれぞれのバンドにより特定されるタンパク質が実質的に含有されていない点で特徴的であり、この点で従来知られた窒素含有量の低減された天然ゴムラテックスと異なっている。
ここで、天然ゴムラテックスに特定のタンパク質が含有されていないこととは次のことを意味する。すなわち、この天然ゴムラテックスをＳＤＳ水溶液（Ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ）で抽出し、抽出液をカットオフ分子量３．５ｋＤａの膜で透析し、透析液に１０％トリクロロ酢酸を含むアセトンを加えてタンパク質を沈殿させ、これを遠心分離で集めてアセトンで洗滌後、尿素水溶液に溶解し、６倍の濃縮に相当する抽出液としてＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＰｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｇｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｓｉｓ）を用いて測定して、タンパク質が検出されないことである。
すなわち、従来の方法である界面活性剤とタンパク質分解酵素による処理により製造した窒素含有量が低減された天然ゴムラテックスには、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法の分析では、窒素分を０．０２％以下にしてもこれらのバンドが現れ、特定のタンパク質が完全に除去されていないことが判明した。具体的には同一レベルの窒素分含有量で比較すると、本発明の天然ゴムラテックスは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法で分析すると、１４、３１および４５ｋＤａの各バンドがいずれも実質的にあるいは完全に消失しているが、上記従来法により得られた天然ゴムラテックスでは極く僅かではあるが上記バンドが存在していることがわかった。また、上記従来法のタンパク質分解酵素により処理した天然ゴムラテックスを遠心分離すると、そのセラム相には明らかに天然ゴムラテックスに特有のタンパク質のバンドが見出され、未分解のタンパク質が残存することを裏付けるが、一方、本発明方法で処理した天然ゴムラテックスを遠心分離した際のセラム相にはこのようなバンドが見出されず、従って反応処理後の天然ゴムラテックスの凝固物には残存タンパク質がないことが容易に確認される。
また、本発明者らの研究によれば、窒素分を多少多く含有していても、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法で分析したときに１４、３１および４５ｋＤａの各バンドがいずれも実質的に存在しない天然ゴムラテックスであればＩ型アレルギーの患者に対しても、安全に使用して問題のないカテーテル、ゴム手袋、コンドームなどを提供することができることが判明した。
従来の天然ゴムラテックスと異なる上記の如き本発明の天然ゴムラテックスが提供されるのは、タンパク質分解酵素で脱タンパク質を達成した天然ゴムラテックスでは、ゴムとタンパク質の一部の結合がタンパク質分解酵素で選択的に切れることにより窒素含有量が低減されるのに対し、本発明の水酸化アルカリを用いたケン化による脱タンパク質はゴムとタンパク質の結合が非選択的に且つ化学量論的に切断されると同時にタンパク質自体も加水分解され低分子量化するによるものと判明した。従って、本発明の天然ゴムラテックスはその残存窒素含有率に制限されることなく、天然ゴムラテックスに特有のＳＤＳ−ＰＡＧＥ法で分析したときの１４、３１および４５ｋＤａの各バンドのタンパク質を実質的に含有していない点で特徴的である。
また、本ラテックスを用いてゴム手袋を作製すると、その手袋は非常になめらかで肌ざわりが良い良質の手袋が作製できることが判明した。これは新鮮天然ゴムラテックスから作製したゴム手袋となんら変わらない品質のものである。しかしながら、タンパク質分解酵素で脱タンパクした天然ゴムラテックスを用いて作製したゴム手袋は図５に示したように虎縞が発生し、これは品質上からも好ましくなく、この点でもケン化天然ゴムラテックスが優れている。
以下に実施例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はなんらこれらの実施例に制限されるものではない。Hereinafter, the present invention will be described in detail. First, the manufacturing method of the natural rubber latex of this invention is demonstrated. The fresh natural rubber latex collected has a concentration of about 30% DRC (Dry Rubber Content). A surfactant is added to the latex to react with alkali hydroxide under certain conditions to hydrolyze the protein, and then concentrated to about 60% DRC by centrifugation (this process is expressed as concentration and washing). The latex for producing various industrial products is manufactured and used for sales or industrial raw materials.
The method for producing a low nitrogen-containing natural rubber latex using a proteolytic enzyme that has already been proposed by one of the present inventors requires that the reaction between the latex and the proteolytic enzyme be carried out with a latex having a concentration of about 10% DRC. This method is significantly different from the invention, and this method is superior from the viewpoint of the manufacturing process. Furthermore, the degree of deproteinization of a specific molecular weight is much better with this method.
Hereinafter, the production method of the present invention will be described.
The method for producing the natural rubber latex of the present invention comprises a natural rubber latex with an alkali hydroxide in the presence of at least one surfactant selected from the group consisting of a cationic surfactant, an anionic surfactant and a nonionic surfactant. After the saponification, for example, the protein desorbed by saponification is desorbed by centrifugation and washed.
When a natural rubber latex is saponified with an alkali hydroxide, as described above, coagulation of the latex can be prevented by using a cationic surfactant, an anionic surfactant or a nonionic surfactant. However, preferably nonionic surfactants and / or anionic surfactants are used.
Examples of the nonionic surfactant used include polyoxyalkylene ethers, polyoxyalkylene esters, polyhydric alcohol fatty acid esters, sugar fatty acid esters, alkyl polyglycosides, and the like. More specifically, examples of the polyoxyalkylene ether-based nonionic surfactant include polyoxyalkylene alkyl ether, polyoxyalkylene alkyl phenyl ether, polyoxyalkylene polyol alkylene ether, polyoxyalkylene styrenated phenol ether, polyoxyalkylene ether Examples include alkylene distyrenated phenol ether and polyoxyalkylene tristyrenated phenol ether.
Examples of the polyoxyalkylene polyol of the polyoxyalkylene polyol alkylene ether include polyhydric alcohols having 2 to 12 carbon atoms. Examples thereof include propylene glycol, glycerin, sorbitol, sucrose, pentaerythritol, sorbitan and the like.
Examples of polyoxyalkylene ester nonionic surfactants include polyoxyalkylene fatty acid esters.
Examples of the polyhydric alcohol fatty acid ester nonionic surfactant include fatty acid esters of polyhydric alcohols having 2 to 12 carbon atoms or fatty acid esters of polyoxyalkylene polyhydric alcohols. More specifically, for example, sorbitol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, fatty acid monoglyceride, fatty acid diglyceride, polyglycerin fatty acid ester and the like can be mentioned. These polyalkylene oxide adducts such as polyoxyalkylene sorbitan fatty acid esters and polyoxyalkylene glycerin fatty acid esters can also be used.
Examples of the sugar fatty acid ester-based nonionic surfactant include sucrose, glucose, mannose, fructose, polysaccharide fatty acid esters, and the like, and these polyalkylene oxide adducts can also be used.
Examples of the alkyl polyglycoside nonionic surfactant include alkyl glucoside, alkyl polyglucoside, polyoxyalkylene alkyl glucoside, polyoxyalkylene alkyl polyglucoside and the like. These polyalkylene oxide adducts can also be used.
Preferred examples of the fatty acid in the polyhydric alcohol fatty acid ester surfactant and sugar fatty acid ester surfactant include linear or branched saturated or unsaturated fatty acids having 4 to 30 carbon atoms.
Examples of the alkyl group in the surfactant include an alkyl group having 4 to 30 carbon atoms. Moreover, what has a C2-C4 alkylene group is mentioned as a polyoxyalkylene group, For example, the thing whose addition mole number of ethylene oxide is about 1-50 mol is mentioned.
Examples of the anionic surfactant include carboxylic acid-based surfactants, sulfonic acid-based surfactants, sulfate ester-based surfactants, and the like.
Examples of the carboxylic acid surfactant include a fatty acid salt having 6 to 30 carbon atoms, a polyvalent carboxylate, a rosin acid salt, and a tall oil fatty acid salt, and preferably a carboxylate having 10 to 20 carbon atoms. is there. When the number of carbon atoms is less than 6, protein and impurities are not sufficiently dispersed and emulsified. When the number of carbon atoms exceeds 30, it becomes difficult to disperse in water.
Examples of the sulfonic acid surfactant include alkylbenzene sulfonate, alkyl sulfonate, alkyl naphthalene sulfonate, naphthalene sulfonate, and diphenyl ether sulfonate.
Examples of sulfate surfactants include alkyl sulfates, polyoxyalkylene alkyl sulfates, polyoxyalkylene alkyl phenyl ether sulfates, tristyrenated phenol sulfates, polyoxyalkylene distyrenated phenol sulfates. Etc. Examples of salts of these compounds include metal salts such as Na, K, Ca, Mg, and Zn salts, ammonia salts, and amine salts such as triethanolamine salt.
Examples of the phosphate ester surfactant include alkyl phosphate ester salts and polyoxyalkylene phosphate ester salts. Examples of salts of these compounds include metal salts such as Na, K, Ca, Mg, and Zn salts, ammonia salts, and amine salts such as triethanolamine salt.
The amount of the surfactant used is preferably 0.01 to 5.0% (w / v) with respect to the rubber latex, and more preferably 0.03 to 3.0%. And particularly preferably 0.05 to 2.0%. If it is less than the lower limit, the action of the surfactant is not sufficient, and if it is more than the upper limit, it becomes useless.
The surfactant may be added in an additional amount after the natural rubber latex is concentrated in order to increase the stability during storage of the natural rubber latex.
Further, as the alkali hydroxide, for example, sodium hydroxide and potassium hydroxide are preferably used. The amount of alkali hydroxide used is preferably 0.1 to 10% (w / v) based on the rubber latex. If it is less than 0.1%, the reaction takes too much time, and if it exceeds 10%, the coagulation reaction tends to occur. A more preferred amount is 0.3 to 8%.
The natural rubber latex saponified with alkali hydroxide and a surfactant may be a fresh natural rubber latex or a high ammonia latex.
Although there is no restriction | limiting in particular as reaction time, It is preferable to carry out reaction for several minutes to about 1 day. In the meantime, the latex may be stirred or may be left standing, but stirring is preferable for promoting the reaction. Moreover, you may adjust temperature as needed, and as suitable temperature, they are 5 to 90 degreeC, More preferably, it is 20 to 70 degreeC.
After the reaction, the deproteinized natural rubber latex is concentrated to about 50 to 70%. By this process, the hydrolyzed protein is solubilized in water, and the higher the degree of concentration, the more it migrates into the serum and is removed from the latex. The concentration means is not particularly limited, and means such as heat concentration, centrifugation, dialysis, and ultrafiltration are used. If necessary, this concentrated natural rubber latex is once again diluted to about several tens of percent, and further concentrated to remove sufficiently remaining proteolysate to obtain a purified natural rubber latex. However, the remaining hydrolyzed protein usually does not require any special treatment for commercialization. In these processes, the stability of the natural rubber latex needs to be sufficiently maintained, and the type and amount of the surfactant used in that sense are important factors. Usually, there is an MST value (Mechanical stability time-ASTM D1076-97) as an index indicating the stability of commercially available natural rubber latex, and saponified natural rubber latex is an MST equivalent to or higher than that of natural rubber latex. Therefore, the selection of the type and amount of the surfactant is very important.
The natural rubber latex in which the protein produced by the method of the present invention is decomposed is analyzed by SDS-PAGE (SDS-Polycyclamide Gel Electrophoresis method), and the proteins specified by the respective bands of 14, 31 and 45 kDa are substantially It is characteristic in that it is not contained, and this point is different from the conventionally known natural rubber latex having a reduced nitrogen content.
Here, that a specific protein is not contained in the natural rubber latex means the following. That is, this natural rubber latex is extracted with an aqueous SDS (Sodium dodecyl sulfate), the extract is dialyzed with a membrane having a cutoff molecular weight of 3.5 kDa, and acetone containing 10% trichloroacetic acid is added to the dialysate to precipitate proteins. This is collected by centrifugation, washed with acetone, dissolved in an aqueous urea solution, measured using SDS-PAGE (Polyacrylamid gel Electrophoresis) as an extract corresponding to 6-fold concentration, and no protein is detected. is there.
That is, the natural rubber latex produced by treatment with a surfactant and a proteolytic enzyme, which is a conventional method and having a reduced nitrogen content, has a nitrogen content of 0.02% or less in the SDS-PAGE analysis. These bands also appeared, and it was found that specific proteins were not completely removed. Specifically, when compared at the same level of nitrogen content, the natural rubber latex of the present invention, when analyzed by the SDS-PAGE method, each band of 14, 31 and 45 kDa disappeared substantially or completely. However, in the natural rubber latex obtained by the above conventional method, it was found that the band was present although it was very slight. In addition, when natural rubber latex treated with the above-mentioned conventional proteolytic enzyme is centrifuged, a protein band characteristic of natural rubber latex is clearly found in the serum phase, and undegraded protein remains. On the other hand, such a band is not found in the serum phase when the natural rubber latex treated by the method of the present invention is centrifuged, and therefore the coagulated product of the natural rubber latex after the reaction treatment has no residual protein. Is easily confirmed.
In addition, according to the study by the present inventors, natural rubber which does not substantially contain any of the 14, 31 and 45 kDa bands when analyzed by the SDS-PAGE method even though it contains a little nitrogen. It has been found that latex can provide safe catheters, rubber gloves, condoms, etc. for patients with type I allergies and can be used safely.
The natural rubber latex of the present invention as described above, which is different from the conventional natural rubber latex, is provided in the case of natural rubber latex that has been deproteinized with a proteolytic enzyme. While the nitrogen content is reduced by selective cleavage, deproteinization by saponification using the alkali hydroxide of the present invention results in non-selective and stoichiometric cleavage of the rubber-protein bond. At the same time, it was found that the protein itself was hydrolyzed to lower the molecular weight. Therefore, the natural rubber latex of the present invention is not limited by the residual nitrogen content, and the proteins in the bands of 14, 31 and 45 kDa when analyzed by the SDS-PAGE method specific to natural rubber latex are substantially reduced. It is characteristic in that it does not contain.
It was also found that when a rubber glove was produced using this latex, it was possible to produce a good quality glove that was very smooth and had a good texture. This is of the same quality as rubber gloves made from fresh natural rubber latex. However, a rubber glove produced using a natural rubber latex deproteinized with a proteolytic enzyme produces tiger stripes as shown in FIG. 5, which is not preferable in terms of quality, and also in this respect, a saponified natural rubber latex. Is excellent.
The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.

実施例１
３０％ＤＲＣ（ＤｒｙＲｕｂｂｅｒＣｏｎｔｅｎｔ）に調節した新鮮ラテックス（ＦＬラテックスと略記）１．９Ｌに水酸化ナトリウム３０ｇを含む水溶液１００ｍＬとノニオン型界面活性剤、Ｅｍｕｌｇｅｎ−７０（Ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅｎｏｎｙｌｐｈｅｎｙｌｅｔｈｅｒ）４ｇを加えて７０℃で３時間ケン化反応を行った。このラテックス溶液を１３，０００ｒｐｍで８分間遠心分離を行いクリーム相を分離した後、クリーム相に水を加えて６０％ＤＲＣに調節した。そして、０．５ｇのアンモニウムラウレート（Ａｍｍｏｎｉｕｍｌａｕｒａｔｅ）を加えた。
この様にして調製したケン化天然ゴムラテックスのクリーム相とセラム相に存在するタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ法で測定した。
クリーム相中に含まれるタンパク質は次のようにして測定した。
クリーム相１７ｇを２％のＳＤＳ１７ｍＬを用いて室温、２４時間抽出した。抽出液をカットオフ分子量３．５ｋＤａの透析膜を用いて冷水中攪拌しながら、室温で２４時間透析した。この液３００μＬに１０％のトリクロロ酢酸を含むアセトン１００μＬを加えてタンパク質を沈殿させ、これを遠心分離で集めてアセトンで洗滌後に８Ｍの尿素水溶液５０μＬに溶解し、６倍の濃縮に相当する抽出液とした。この液をＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定試料とした。なお、セラム相のタンパク質の分析も同様に行った。この測定結果を図１に示した。図１中、レーン１は標準分子量マーカー、レーン２は上記クリーム相、レーン３は上記セラム相の測定結果である。比較のために新鮮天然ゴムラテックスを同様の条件で遠心分離して得たクリーム相とセラム相のＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定の結果を図２に示した。また、新鮮天然ゴムラテックスを１０％ＤＲＣに調整したものに、タンパク質分解酵素Ａｌｃａｌａｓｅ２．０Ｔ（ＮＯＶＯＮｏｒｄｉｓｋＢｉｏｉｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．）と１．０％ＳＤＳを加え、室温で２４時間反応した後に１５，０００ｒｐｍで遠心分離し６０％ＤＲＣへの濃縮と洗滌を２回行った。この脱タンパク天然ゴムラテックスからクリーム相を分離してＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定を行った。この結果を図３に示した。
図１のレーン２（クリーム相）は天然ゴムラテックス中のタンパク質に特有のバンド（図２のレーン３参照）を示さず、このケン化天然ゴムラテックスのクリーム相にはＳＤＳ−ＰＡＧＥ法による１４、３１および４５ｋＤａの各バンドが示すタンパク質を含有していないことが明らかとなった。また、図１のレーン３（セラム相）は低分子量領域にバンドが現れているが、これはケン化反応によって天然ゴムラテックス中のタンパク質が水酸化ナトリウムによる加水分解によってより低分子量のタンパク質に分解されて水中に溶出していることを意味しているものと考えられる。
図３中のタンパク質分解酵素による脱タンパクした天然ゴムラテックスのクリーム相にはごく僅かではあるが、３１および４５ｋＤａの各バンドの存在が認められた。
実施例２〜４
天然ゴムラテックスのケン化の条件を変化させた実施例を示す。
ケン化の条件は表１に示した。実験はケン化の条件を除いて実施例１と同様な条件で行った。これらのケン化天然ゴムラテックスのクリーム相は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定の結果、１４、３１および４５ｋＤａの各バンドのいずれも示さなかった。

表中、ケン化の条件はＮａＯＨの濃度（ｗ／ｖ％）、反応温度、反応時間を示す。
得られたラテックスのクリーム相のＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定の結果を実施例１と同様な条件にて行った結果を図４に示した。実施例２〜４の条件では１４、３１、４５のバンドは全く現れなかった。これらのケン化の条件で完全にこれらのタンパク質は除去されていることがわかった。
図４中、レーン１は標準分子量マーカーである。レーン２、３、４は順にそれぞれ実施例２、３、４でケン化した天然ゴムラテックスのクリーム相のＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定図である。
実施例５〜６
実施例１と同様に実施した。ただし、界面活性剤として、Ｅｍｕｌｇｅｎ−７０の代わりに表２の化合物を用いた。結果はいずれの実施例のラテックスもＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定により１４、３１および４５ｋＤａの各バンドのタンパク質を含有しないことがわかった。

実施例７
ケン化脱タンパク質天然ゴムラテックス（ＳＡＰ−ＮＲ）のアレルギー試験を実施した。即時型のＩ型アレルギー抗原を含むかどうかを確認した。
実験はＦＩＴＢＩＯＴＥＣＨ社製のＦＩＴＫｉｔを用いて酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によるケン化天然ゴムラテックスのタンパク質の分析を行った。結果を表３に示した。
比較の対象として、天然ゴムラテックス（ＦＬ−ＮＲ）も同様の条件でテストした。

結果は、ケン化によって脱タンパクした天然ゴムラテックスではタンパク質が検出されず、アレルギーの心配はないことが確認された。
実施例８
天然ゴムラテックスはラテックスとして市場で取引されており、ラテックスの保存安定性は重要な指標である。本発明のラテックスの安定性測定の結果を示す。天然ゴムラテックスのケン化時にＥｍａｌＥ７０ＣおよびＥｍｕｌｇｅｎ−７０の界面活性剤を用いて実験を行った。
３０％ＤＲＣに調節した新鮮ラテックス（ＦＬラテックスと略記）１．９Ｌに水酸化ナトリウム３０ｇを含む水溶液１００ｍＬと上記界面活性剤４ｇを加えて７０℃で３時間ケン化反応を行った。このラテックスを１３，０００ｒｐｍで８分間遠心分離してクリーム相を分離した後、クリーム相に水を加えて６０％ＤＲＣに調節した。このラテックスに０．５ｇのアンモニウムラウレートと１２ｇのアンモニア水（２８ｗ／ｖ％）を添加した。このラテックスのＺｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌ（ｍＶ）はＥｍａｌＥ７０Ｃでは−４４ｍＶおよびＥｍｕｌｇｅｎ−７０では−４４ｍＶであった。なお、天然ゴムラテックスのＺｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌは−４６ｍＶであり、ケン化天然ゴムラテックスのコロイド的性質は何ら天然ゴムラテックスと変わりないことが確認された。さらに、このラテックスを１３日間、室温で保存した後、ＭＳＴ（ＭｅｃｈａｎｉｃａｌＳｔａｂｉｌｉｔｙＴｅｓｔ−ＡＳＴＭＤ１０７６−９７）を測定したところ、ＥｍａｌＥ７０Ｃでは１，２３０ｓｅｃおよびＥｍｕｌｇｅｎｘ−７０では６５７ｓｅｃであった。高アンモニア天然ゴムラテックスの同一の保存条件におけるＭＳＴは５２０ｓｅｃであり、ケン化天然ゴムラテックスは天然ゴムラテックス以上の安定性を示すことが確認された。
実施例９
ケン化天然ゴムラテックスから得られた加硫ゴムフィルムの性質を示す。
ケン化天然ゴムラテックスから作製したフィルム（Ｆ−１）並びに表４に示す組成を持つコンパウンドケン化天然ゴムラテックスから作製したフィルム（Ｆ−２）の性質を調べた。ケン化天然ゴムラテックスは実施例１と同様に作製した。
Ｆ−１は、ケン化天然ゴムラテックスをガラス基板上にキャストしてフィルムを作製した。Ｆ−２は表４の配合処方で配合したコンパウンドラテックスを室温で２日間かけプレ加硫した。このコンパウンドラテックスをガラス基板上でキャストし、２日間保存して薄いフィルムを作製した。乾燥フィルムを１５分間、１２０℃で加熱して加硫した。
フィルムＦ−１およびＦ−２の性質をそれぞれ表５および表６に示した。

実施例１０
ケン化天然ゴムラテックスを用いてゴム手袋を作製した。作製方法は実施例９の配合ラテックス（Ｆ−２）を２日間プレ加硫し、凝固剤（硝酸カルシウム）水溶液に２０秒間浸漬した後１００℃で乾燥したモールドを、前加硫した配合ラテックスに２５秒間浸漬して取り出し、１２０℃で３０分間熱処理（ポスト加硫）を行った。３０から６０秒間水洗しモールドから取り外した。得られたゴム手袋の写真を図５の１に示した。比較のために原料として、タンパク質分解酵素で脱タンパクした天然ゴムラテックスを用いて同様な方法で作製したゴム手袋を図５の２に示した。この手袋には虎縞が明暸に認められる。Example 1
Add 100 mL of an aqueous solution containing 30 g of sodium hydroxide to 1.9 L of fresh latex (abbreviated as FL latex) adjusted to 30% DRC (Dry Rubber Content) and 4 g of a nonionic surfactant, Emulgen-70 (Polyoxyethylene nonphenyl ether). The saponification reaction was performed at 70 ° C. for 3 hours. This latex solution was centrifuged at 13,000 rpm for 8 minutes to separate the cream phase, and then water was added to the cream phase to adjust to 60% DRC. Then 0.5 g of ammonium laurate was added.
Proteins present in the cream phase and the serum phase of the saponified natural rubber latex thus prepared were measured by the SDS-PAGE method.
The protein contained in the cream phase was measured as follows.
17 g of the cream phase was extracted with 17 mL of 2% SDS at room temperature for 24 hours. The extract was dialyzed for 24 hours at room temperature while stirring in cold water using a dialysis membrane having a cutoff molecular weight of 3.5 kDa. 100 μL of acetone containing 10% trichloroacetic acid is added to 300 μL of this solution to precipitate the protein, which is collected by centrifugation, washed with acetone, dissolved in 50 μL of 8M aqueous urea solution, and an extract corresponding to 6-fold concentration. It was. This solution was used as an SDS-PAGE measurement sample. The analysis of the serum phase protein was performed in the same manner. The measurement results are shown in FIG. In FIG. 1, lane 1 is the standard molecular weight marker, lane 2 is the cream phase, and lane 3 is the serum phase. For comparison, the results of SDS-PAGE measurement of a cream phase and a serum phase obtained by centrifuging fresh natural rubber latex under the same conditions are shown in FIG. In addition, a fresh natural rubber latex adjusted to 10% DRC was added with proteolytic enzyme Alcalase 2.0T (NOVO Nordisk Bioindustry Co.) and 1.0% SDS, reacted at room temperature for 24 hours, and then at 15,000 rpm. Centrifugation and concentration to 60% DRC and washing were performed twice. The cream phase was separated from the deproteinized natural rubber latex and subjected to SDS-PAGE measurement. The results are shown in FIG.
Lane 2 (cream phase) in FIG. 1 does not show a band characteristic of protein in natural rubber latex (see lane 3 in FIG. 2), and the cream phase of this saponified natural rubber latex has 14, 14 by SDS-PAGE method. It became clear that the protein which each band of 31 and 45 kDa shows does not contain. In addition, in lane 3 (serum phase) of FIG. 1, a band appears in the low molecular weight region. This is because the protein in the natural rubber latex is decomposed into a lower molecular weight protein by hydrolysis with sodium hydroxide by the saponification reaction. It is thought to mean that it has been eluted in water.
In the cream phase of the natural rubber latex deproteinized by the proteolytic enzyme in FIG. 3, the presence of bands of 31 and 45 kDa was recognized although it was very slight.
Examples 2-4
The Example which changed the conditions of saponification of natural rubber latex is shown.
The saponification conditions are shown in Table 1. The experiment was performed under the same conditions as in Example 1 except for the saponification conditions. The cream phase of these saponified natural rubber latex did not show any of the 14, 31 and 45 kDa bands as a result of SDS-PAGE measurement.

In the table, saponification conditions indicate NaOH concentration (w / v%), reaction temperature, and reaction time.
The result of SDS-PAGE measurement of the cream phase of the obtained latex under the same conditions as in Example 1 is shown in FIG. Under the conditions of Examples 2 to 4, bands of 14, 31, and 45 did not appear at all. It was found that these proteins were completely removed under these saponification conditions.
In FIG. 4, lane 1 is a standard molecular weight marker.

Lanes

2, 3, and 4 are SDS-PAGE measurement diagrams of the cream phase of natural rubber latex saponified in Examples 2, 3, and 4, respectively.
Examples 5-6
The same operation as in Example 1 was performed. However, as a surfactant, the compounds in Table 2 were used instead of Emulgen-70. The results showed that none of the latexes of Examples contained protein of each band of 14, 31 and 45 kDa by SDS-PAGE measurement.

Example 7
An allergy test of saponified and deproteinized natural rubber latex (SAP-NR) was performed. Whether or not it contains an immediate type I allergen was confirmed.
In the experiment, protein of saponified natural rubber latex was analyzed by enzyme immunoassay (ELISA) using FIT Kit manufactured by FIT BIOTECH. The results are shown in Table 3.
For comparison, natural rubber latex (FL-NR) was also tested under the same conditions.

As a result, it was confirmed that no protein was detected in natural rubber latex deproteinized by saponification, and there was no worry of allergy.
Example 8
Natural rubber latex is marketed as latex, and the storage stability of latex is an important indicator. The result of stability measurement of the latex of the present invention is shown. Experiments were performed using Emal E 70C and Emulgen-70 surfactants during saponification of natural rubber latex.
100 mL of an aqueous solution containing 30 g of sodium hydroxide and 4 g of the above surfactant were added to 1.9 L of fresh latex (abbreviated as FL latex) adjusted to 30% DRC and subjected to saponification reaction at 70 ° C. for 3 hours. The latex was centrifuged at 13,000 rpm for 8 minutes to separate the cream phase, and water was added to the cream phase to adjust to 60% DRC. To this latex, 0.5 g of ammonium laurate and 12 g of aqueous ammonia (28 w / v%) were added. The latex had a Zeta potential (mV) of -44 mV for Emal E 70C and -44 mV for Emulgen-70. The natural potential of natural rubber latex was −46 mV, and it was confirmed that the colloidal nature of saponified natural rubber latex was no different from that of natural rubber latex. Furthermore, after this latex was stored at room temperature for 13 days, MST (Mechanical Stability Test-ASTM D1076-97) was measured, and it was 1,230 sec for Emal E 70C and 657 sec for Emulgen x-70. The MST of the high ammonia natural rubber latex under the same storage conditions was 520 sec, and it was confirmed that the saponified natural rubber latex exhibits a stability higher than that of the natural rubber latex.
Example 9
The property of the vulcanized rubber film obtained from saponified natural rubber latex is shown.
The properties of the film (F-1) prepared from the saponified natural rubber latex and the film (F-2) prepared from the compound saponified natural rubber latex having the composition shown in Table 4 were examined. A saponified natural rubber latex was prepared in the same manner as in Example 1.
F-1 cast a saponified natural rubber latex on a glass substrate to produce a film. F-2 was pre-vulcanized for 2 days at room temperature with a compound latex formulated according to the formulation shown in Table 4. This compound latex was cast on a glass substrate and stored for 2 days to produce a thin film. The dried film was vulcanized by heating at 120 ° C. for 15 minutes.
The properties of films F-1 and F-2 are shown in Tables 5 and 6, respectively.

Example 10
Rubber gloves were prepared using saponified natural rubber latex. The production method was as follows. The compounded latex (F-2) of Example 9 was pre-vulcanized for 2 days, immersed in a coagulant (calcium nitrate) aqueous solution for 20 seconds, and then dried at 100 ° C. into the prevulcanized compounded latex. It was immersed for 25 seconds and removed, and heat treatment (post vulcanization) was performed at 120 ° C. for 30 minutes. It was washed with water for 30 to 60 seconds and removed from the mold. A photograph of the resulting rubber glove is shown in FIG. For comparison, rubber gloves produced by the same method using natural rubber latex deproteinized with a proteolytic enzyme as a raw material are shown in FIG. Tiger stripes are clearly recognized on this glove.

Claims

A natural rubber latex characterized by being substantially free of proteins identified by respective bands of 14, 31, and 45 kDa by SDS-PAGE.

The natural rubber latex according to claim 1, wherein the nitrogen content is 0.02 to 0.3% by weight based on the rubber component contained in the latex.

The method for producing a natural rubber latex according to claim 1, wherein the natural rubber latex is saponified with an alkali hydroxide in the presence of a surfactant.

A rubber glove, catheter, condom or foam produced using the natural rubber latex of claim 1.