JPS6371197A - 結合型シアル酸測定用標準組成物 - Google Patents
結合型シアル酸測定用標準組成物Info
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- JPS6371197A JPS6371197A JP61216735A JP21673586A JPS6371197A JP S6371197 A JPS6371197 A JP S6371197A JP 61216735 A JP61216735 A JP 61216735A JP 21673586 A JP21673586 A JP 21673586A JP S6371197 A JPS6371197 A JP S6371197A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野コ
本発明は、体液中のシアル酸を測定する際に標準組成物
として利用される結合型シアル酸測定用標準組成物に関
するものである。
として利用される結合型シアル酸測定用標準組成物に関
するものである。
［従来の技術］
シアル酸（以下、結合型シアル酸と呼ぶ）は、多数の哺
乳類の糖蛋白質中或はごく少量の細菌の細胞壁中に見出
されている。この様な結合型シアル酸は、例えば哺乳類
では複雑な反応経通によって肝臓で合成されるものと考
えられている。また結合型シアル酸は、人間の体液中に
も種々の量で含まれており１１体調や健康状態によって
様々に変動するものである。従って体液中に存在する結
合型シアル酸の量を測定することは、炎症診断や病状の
経通観察等に有用な情報を与えるものであり、臨床的意
義の極めて高いものである。
乳類の糖蛋白質中或はごく少量の細菌の細胞壁中に見出
されている。この様な結合型シアル酸は、例えば哺乳類
では複雑な反応経通によって肝臓で合成されるものと考
えられている。また結合型シアル酸は、人間の体液中に
も種々の量で含まれており１１体調や健康状態によって
様々に変動するものである。従って体液中に存在する結
合型シアル酸の量を測定することは、炎症診断や病状の
経通観察等に有用な情報を与えるものであり、臨床的意
義の極めて高いものである。
この様な結合型シアル酸を測定するに当たって□は、そ
の標準組成物（結合型シアル酸測定用標準組成物）が必
要となるのであるが、従来一般的に用いられる標準組成
物は血清から得られたものである。しかしながら試料と
なる血清は比較的入手が困難であり、またその成分が一
定しておらず、更には高価であるといった種々の欠点を
含んだものであった。
の標準組成物（結合型シアル酸測定用標準組成物）が必
要となるのであるが、従来一般的に用いられる標準組成
物は血清から得られたものである。しかしながら試料と
なる血清は比較的入手が困難であり、またその成分が一
定しておらず、更には高価であるといった種々の欠点を
含んだものであった。
この様な欠点が存在するにも拘らず、今までに何ら技術
的改良はなされておらず、又新しい標準組成物の開発も
なされていないのが現状である。
的改良はなされておらず、又新しい標準組成物の開発も
なされていないのが現状である。
［発明が解決しようとする問題点］
本発明はこうした現状に鑑みてなされたものであって、
その目的とするところは原料となる試料が比較的容易に
入手でき、品質が安定しており且つ安価な結合型シアル
酸測定用標準組成物を提供することにある。
その目的とするところは原料となる試料が比較的容易に
入手でき、品質が安定しており且つ安価な結合型シアル
酸測定用標準組成物を提供することにある。
［問題点を解決する為の手段］
本発明者らは上記目的を達成する為に鋭意研究したとこ
ろ、比較的安価で容易に入手できる乳蛋白質、該乳蛋白
質由来の糖蛋白質又はこれらの酵素分解物を原料とする
ことにより、品質の安定した結合型シアル酸測定用標準
組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至
った。即ち上記目的を達成し得た本発明とは、乳蛋白質
、該乳蛋白質由来の糖蛋白質又はこられの酵素分解物を
含む点に要旨を有する結合型シアル酸測定用標準組成物
である。
ろ、比較的安価で容易に入手できる乳蛋白質、該乳蛋白
質由来の糖蛋白質又はこれらの酵素分解物を原料とする
ことにより、品質の安定した結合型シアル酸測定用標準
組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至
った。即ち上記目的を達成し得た本発明とは、乳蛋白質
、該乳蛋白質由来の糖蛋白質又はこられの酵素分解物を
含む点に要旨を有する結合型シアル酸測定用標準組成物
である。
［作用］
本発明で用いられる乳蛋白質としては、カゼイン又はホ
エーが最も好ましい。例えば脱脂乳、ソーダカゼイン、
酸カゼイン等のカゼイン類や、チーズホエー、酸ホエー
等のホエー類を挙げることができ、これらを濃縮或は乾
燥したものを用いればよい。また単位重量当たりの結合
型シアル酸含量を高めるといフた観点からすれば、上記
蛋白質資源から糖蛋白質を分画して取出し、それを標準
組成物として用いることもできる。更に蛋白質分解酵素
を用い限定分解を行なって糖ペプチドを取り出し、これ
を標準組成物として利用することも可能である。
エーが最も好ましい。例えば脱脂乳、ソーダカゼイン、
酸カゼイン等のカゼイン類や、チーズホエー、酸ホエー
等のホエー類を挙げることができ、これらを濃縮或は乾
燥したものを用いればよい。また単位重量当たりの結合
型シアル酸含量を高めるといフた観点からすれば、上記
蛋白質資源から糖蛋白質を分画して取出し、それを標準
組成物として用いることもできる。更に蛋白質分解酵素
を用い限定分解を行なって糖ペプチドを取り出し、これ
を標準組成物として利用することも可能である。
牛乳中のＷ蛋白質としては、ホエー中に含まれる免疫グ
ロブリン、β−ラクトグロブリン、ラクトフェリン、及
びカゼイン中に含まれるに一カゼイン等が知られている
。これらの糖蛋白質又はその混合物を乳蛋白質から分画
するには公知の方法を用いればよく、例えばｒ Ｍ ｉ
ｌｋ Ｐ ｒａｔｅｉｎＪ（Ｈ、Ａ 、 Ｍ ｃｋｅｎ
ｘｉｅ編）、特開昭５８−２８２３３号公報又は特開昭
５９−９１８４８号公報等に開示された方法が挙げられ
る。
ロブリン、β−ラクトグロブリン、ラクトフェリン、及
びカゼイン中に含まれるに一カゼイン等が知られている
。これらの糖蛋白質又はその混合物を乳蛋白質から分画
するには公知の方法を用いればよく、例えばｒ Ｍ ｉ
ｌｋ Ｐ ｒａｔｅｉｎＪ（Ｈ、Ａ 、 Ｍ ｃｋｅｎ
ｘｉｅ編）、特開昭５８−２８２３３号公報又は特開昭
５９−９１８４８号公報等に開示された方法が挙げられ
る。
限定分解に用いられる酵素については、蛋白質分解酵素
であれば良く何ら限定するものではないが、例えばトリ
プシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、キモシ
ン、バンクレアチン等或はこれらの混合物を挙げること
ができる。
であれば良く何ら限定するものではないが、例えばトリ
プシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、キモシ
ン、バンクレアチン等或はこれらの混合物を挙げること
ができる。
また上記酵素の処理条件についても特に限定されるもの
ではなく、夫々の酵素における最適条件を選べばよい。
ではなく、夫々の酵素における最適条件を選べばよい。
例えばβ−ラクトグロブリンをトリプシンで処理する場
合は、ｐＨ７〜８のトリス緩衝液にＥ／Ｓ比（酵素−基
質比）が１／１００〜１／２０００程度となる様にトリ
プシンを添加し、３０〜４０℃にて１５分〜６時間酵素
反応を進行させればよい。又に一カゼインをキモシンで
処理する場合は、ｐＨ５，ｓ〜７の酢酸緩衝液にＥ／Ｓ
比が１／１００〜１／２０００となる様にキモシンを添
加し、２５〜５０℃にて５分〜３時間酵素反応を進行さ
せればよい。
合は、ｐＨ７〜８のトリス緩衝液にＥ／Ｓ比（酵素−基
質比）が１／１００〜１／２０００程度となる様にトリ
プシンを添加し、３０〜４０℃にて１５分〜６時間酵素
反応を進行させればよい。又に一カゼインをキモシンで
処理する場合は、ｐＨ５，ｓ〜７の酢酸緩衝液にＥ／Ｓ
比が１／１００〜１／２０００となる様にキモシンを添
加し、２５〜５０℃にて５分〜３時間酵素反応を進行さ
せればよい。
環ペプチドを分画採取する方法としては、ゲル濾過、イ
オン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラ
フィ、クロマトフオーカシング等を挙げることができ、
これらの方法の１種又は２種以上を採用すれば良い。或
はトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加し、沈殿物を除去し
た後、上澄な脱塩する様にしてもよい。更にに一カゼイ
ンから糖ペプチドを得る方法としては、カルシウムを添
加しく５ミソｍｏｊ２以上）沈殿物を除去した後、その
上澄を採取する方法が挙げられる。
オン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラ
フィ、クロマトフオーカシング等を挙げることができ、
これらの方法の１種又は２種以上を採用すれば良い。或
はトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加し、沈殿物を除去し
た後、上澄な脱塩する様にしてもよい。更にに一カゼイ
ンから糖ペプチドを得る方法としては、カルシウムを添
加しく５ミソｍｏｊ２以上）沈殿物を除去した後、その
上澄を採取する方法が挙げられる。
尚本発明の標準組成物には、必要により界面活性剤、防
腐剤及び安定化剤等を添加することも可能である。また
調製した標準組成物の保存形態としては、水溶液に溶融
させた状態での冷温保存や凍結乾燥させた状態での保存
等が挙げられ、いずれも品質の安定した長期の保存が可
能である。
腐剤及び安定化剤等を添加することも可能である。また
調製した標準組成物の保存形態としては、水溶液に溶融
させた状態での冷温保存や凍結乾燥させた状態での保存
等が挙げられ、いずれも品質の安定した長期の保存が可
能である。
一方本発明に係る結合型シアル酸測定用標準組成物を使
用する結合型シアル酸の測定方法としては、（ａ）ノイ
ラミニダーゼ、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ
、乳酸脱水素酵素及びＮＡＤＨを用い、ＮＡＤＨの減少
で結合型シアル酸の量を測定する方法、（ｂ）ノイラミ
ニダーゼ、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ、ピ
ルビン酸オキシダーゼを用いて測定する方法、（ｃ）
Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ、アシルグル
コサミンエピメラーゼ、Ｎ−アセチルへキソサミンオキ
シダーゼを用いて測定する方法等があり、適宜選定すれ
ばよい。
用する結合型シアル酸の測定方法としては、（ａ）ノイ
ラミニダーゼ、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ
、乳酸脱水素酵素及びＮＡＤＨを用い、ＮＡＤＨの減少
で結合型シアル酸の量を測定する方法、（ｂ）ノイラミ
ニダーゼ、Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ、ピ
ルビン酸オキシダーゼを用いて測定する方法、（ｃ）
Ｎ−アセチルノイラミン酸アルドラーゼ、アシルグル
コサミンエピメラーゼ、Ｎ−アセチルへキソサミンオキ
シダーゼを用いて測定する方法等があり、適宜選定すれ
ばよい。
［実施例］
夫五■ユ
まずβ−ラクトグロブリン（シグマ社製）１ｇをｐＨ８
のトリス１ｙｉ街液１００ｍＪＺに溶解した。
のトリス１ｙｉ街液１００ｍＪＺに溶解した。
別に、掻く少量の脱イオン水にトリプシン（シグマ社製
）ＩＢを溶解したものを準備した。次に、双方の溶解液
を３５℃にインキニーベートした後混合し、３５℃にて
３時間反応させた。反応液に１２％ＴＣＡを添加して１
０分間放置した後、回転数３００ Ｏｒｐｍで１０分間
遠心分離して上澄液を得た。次に、この上澄液を脱イオ
ン水に対して透析した後凍結乾燥し、約０．２ｇの粉末
を得た。この粉末中に含まれる結合型シアル酸は、１．
５重量％であることが確認された。
）ＩＢを溶解したものを準備した。次に、双方の溶解液
を３５℃にインキニーベートした後混合し、３５℃にて
３時間反応させた。反応液に１２％ＴＣＡを添加して１
０分間放置した後、回転数３００ Ｏｒｐｍで１０分間
遠心分離して上澄液を得た。次に、この上澄液を脱イオ
ン水に対して透析した後凍結乾燥し、約０．２ｇの粉末
を得た。この粉末中に含まれる結合型シアル酸は、１．
５重量％であることが確認された。
五旌里ユ
ソーダカゼインにュージーランド産）を１０％となる様
にｐＨ７のイミダゾール１ｉＪｔ街液に溶解し、２℃に
て１時間冷却した。同じ緩衝液で平衡化され、２℃に冷
却されたセファデックスＧ−１００（ファルマシア社製
）のカラム（直径２ｃｍ、高さ９０ｃｍ）を予め準備し
ておき、このカラムに上記カゼイン溶液５１ＱＪＺを投
入し、同じ緩衝液で溶出した１次にボイドボリュームに
溶出された両分を集め、脱イオン水に対して透析した後
、凍結乾燥して８０ｍｇの粉末を得た。この粉末はに一
カゼインを主成分とし、結合型シアル酸含有量は約２重
量％であることが確認された。
にｐＨ７のイミダゾール１ｉＪｔ街液に溶解し、２℃に
て１時間冷却した。同じ緩衝液で平衡化され、２℃に冷
却されたセファデックスＧ−１００（ファルマシア社製
）のカラム（直径２ｃｍ、高さ９０ｃｍ）を予め準備し
ておき、このカラムに上記カゼイン溶液５１ＱＪＺを投
入し、同じ緩衝液で溶出した１次にボイドボリュームに
溶出された両分を集め、脱イオン水に対して透析した後
、凍結乾燥して８０ｍｇの粉末を得た。この粉末はに一
カゼインを主成分とし、結合型シアル酸含有量は約２重
量％であることが確認された。
夫五■ユ
上述の実施例２で得られた粉末を５０ｍｇ脱イオン水に
溶解し、ＰＨを６，４に調整後、０．０４ｍｇのレンネ
ット（ハンセン社製）を添加した。次に、４０℃にて３
０分間反応させた後、２０ミリｍｏｂとなる様にＣａＣ
ｌ２を加え、バラカゼインを沈殿させて上澄液を採取し
た。この上澄をＭ、Ｗ。
溶解し、ＰＨを６，４に調整後、０．０４ｍｇのレンネ
ット（ハンセン社製）を添加した。次に、４０℃にて３
０分間反応させた後、２０ミリｍｏｂとなる様にＣａＣ
ｌ２を加え、バラカゼインを沈殿させて上澄液を採取し
た。この上澄をＭ、Ｗ。
ｃｕｔ−ｏｆｆ １０００の限外濾過膜を備えた限外濾
過装置（アミコン社製）でダイアフィルトレージョンを
行ない、保持液を凍結乾燥して２０ｍｇの粉末を得た。
過装置（アミコン社製）でダイアフィルトレージョンを
行ない、保持液を凍結乾燥して２０ｍｇの粉末を得た。
この粉末中には１．１ｍｇの結合型シアル酸が含まれて
いるのが確認された。
いるのが確認された。
五族里Ａ
実施例３で得られた結合型シアル酸測定用標準組成物と
、血液から得られた標準組成物（従来例）とを被検液と
し、下記の試薬を用いて夫々の反応性を調査した。尚各
被検液中に含まれる結合型シアル酸濃度は、両者とも１
００ ｍｇ／ｄｊ２であった。
、血液から得られた標準組成物（従来例）とを被検液と
し、下記の試薬を用いて夫々の反応性を調査した。尚各
被検液中に含まれる結合型シアル酸濃度は、両者とも１
００ ｍｇ／ｄｊ２であった。
く試薬〉
トリス緩衝液（０，１Ｍ） ｐ Ｈ７，０ノイラミ
ニダーゼ ０．２ Ｕ／ ｍｆＬＮ−アセチ
ルノイラミン酸アルドラーゼ２、ＯＵ／ ｍＡ Ｎ Ａ Ｄ Ｈ０，２ミリｌｌｌ０Ｊ２測定方法は下記
の如くである。即ち各被検液５０μｍに上記試薬３ ｃ
ａｒｔを加えて３７℃で反応させた後、その吸光度を波
長３４０ｎｍで測定し、試薬ブランクを基準として２分
から４分までのΔＯＤ／ｍ１ｎ（光学密度変化）を測定
した。
ニダーゼ ０．２ Ｕ／ ｍｆＬＮ−アセチ
ルノイラミン酸アルドラーゼ２、ＯＵ／ ｍＡ Ｎ Ａ Ｄ Ｈ０，２ミリｌｌｌ０Ｊ２測定方法は下記
の如くである。即ち各被検液５０μｍに上記試薬３ ｃ
ａｒｔを加えて３７℃で反応させた後、その吸光度を波
長３４０ｎｍで測定し、試薬ブランクを基準として２分
から４分までのΔＯＤ／ｍ１ｎ（光学密度変化）を測定
した。
測定結果を下記第１表に示す。
上記第１表の結果からも明らかであるが、本発明の結合
型シアル酸標準組成物は、従来用いられていた血清由来
の標準組成物と比べてもその反応性において何ら遜色の
ない品質の安定したものであることが理解される。
型シアル酸標準組成物は、従来用いられていた血清由来
の標準組成物と比べてもその反応性において何ら遜色の
ない品質の安定したものであることが理解される。
［発明の効果］
以上述べた如く本発明によれば、比較的安価で容易に入
手でき品質の安定な乳蛋白質から結合型シアル酸測定用
標準組成物を得る様にしたので従来の問題を悉く解消し
得ることとなった。
手でき品質の安定な乳蛋白質から結合型シアル酸測定用
標準組成物を得る様にしたので従来の問題を悉く解消し
得ることとなった。
Claims (3)
- （１）乳蛋白質、該乳蛋白質由来の糖蛋白質又はこれら
の酵素分解物を含むことを特徴とする結合型シアル酸測
定用標準組成物。 - （２）乳蛋白質がホエーであることを特徴とする特許請
求の範囲第１項に記載の結合型シアル酸測定用標準組成
物。 - （３）乳蛋白質がカゼインであることを特徴とする特許
請求の範囲第１項に記載の結合型シアル酸測定用標準組
成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61216735A JPH0653077B2 (ja) | 1986-09-12 | 1986-09-12 | 結合型シアル酸測定用標準組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61216735A JPH0653077B2 (ja) | 1986-09-12 | 1986-09-12 | 結合型シアル酸測定用標準組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6371197A true JPS6371197A (ja) | 1988-03-31 |
| JPH0653077B2 JPH0653077B2 (ja) | 1994-07-20 |
Family
ID=16693107
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61216735A Expired - Lifetime JPH0653077B2 (ja) | 1986-09-12 | 1986-09-12 | 結合型シアル酸測定用標準組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0653077B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5135869A (en) * | 1988-07-20 | 1992-08-04 | Meiji Milk Products Company Limited | Selective enzymatic degradation of β-lactoglobulin contained in cow's milk-serum protein |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7321485B2 (en) | 1997-04-08 | 2008-01-22 | X2Y Attenuators, Llc | Arrangement for energy conditioning |
| US9054094B2 (en) | 1997-04-08 | 2015-06-09 | X2Y Attenuators, Llc | Energy conditioning circuit arrangement for integrated circuit |
| US7336468B2 (en) | 1997-04-08 | 2008-02-26 | X2Y Attenuators, Llc | Arrangement for energy conditioning |
| US7630188B2 (en) | 2005-03-01 | 2009-12-08 | X2Y Attenuators, Llc | Conditioner with coplanar conductors |
-
1986
- 1986-09-12 JP JP61216735A patent/JPH0653077B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| J DAIRY SCI=1983 * |
| J DIARY SCI=1976 * |
| J FAC AGRIC HOKKAIDO UNIV=1985 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5135869A (en) * | 1988-07-20 | 1992-08-04 | Meiji Milk Products Company Limited | Selective enzymatic degradation of β-lactoglobulin contained in cow's milk-serum protein |
| US5322773A (en) * | 1988-07-20 | 1994-06-21 | Meiji Milk Products Co., Ltd. | Selective enzymatic degradation of β-lactoglobulin contained in cow's milk-serum protein |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0653077B2 (ja) | 1994-07-20 |
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Legal Events
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