JPS6359107B2 - - Google Patents
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- JPS6359107B2 JPS6359107B2 JP58221675A JP22167583A JPS6359107B2 JP S6359107 B2 JPS6359107 B2 JP S6359107B2 JP 58221675 A JP58221675 A JP 58221675A JP 22167583 A JP22167583 A JP 22167583A JP S6359107 B2 JPS6359107 B2 JP S6359107B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
(イ) 産業上の利用分野
この発明はシリカを担体とする化学結合型逆相
カラムの高速液体クロマトグラフイを用いポスト
カラム反応としてトリヒドロキシインドール法を
利用し高感度でカテコールアミンを分析する方法
に関する。
カラムの高速液体クロマトグラフイを用いポスト
カラム反応としてトリヒドロキシインドール法を
利用し高感度でカテコールアミンを分析する方法
に関する。
(ロ) 従来技術
血漿、尿などの生体試料中のカテコールアミン
の分析法としては、試料中のカテコールアミンを
固相抽出し、次いで酸で溶離し、これをシリカを
担体とする化学結合型逆相カラムを用いる高速液
体クロマトグラフイに付して分離し次いで分離さ
れたカテコールアミン類を反応試薬によつてトリ
ヒドロキシインドール類に変換して螢光分析する
方法が知られているが、この分析法は従来、生体
試料、特に血漿中のカテコールアミンを測定する
際には充分に感度が得られなかつた。
の分析法としては、試料中のカテコールアミンを
固相抽出し、次いで酸で溶離し、これをシリカを
担体とする化学結合型逆相カラムを用いる高速液
体クロマトグラフイに付して分離し次いで分離さ
れたカテコールアミン類を反応試薬によつてトリ
ヒドロキシインドール類に変換して螢光分析する
方法が知られているが、この分析法は従来、生体
試料、特に血漿中のカテコールアミンを測定する
際には充分に感度が得られなかつた。
(ハ) 発明の目的
この発明は上記問題点を改善するためになされ
たもので、高感度で血漿や尿などの生体試料中の
カテコールアミンを分析する方法を提供するのを
目的とするものである。
たもので、高感度で血漿や尿などの生体試料中の
カテコールアミンを分析する方法を提供するのを
目的とするものである。
(ニ) 発明の構成
この発明は、試料中のカテコールアミン類を固
相抽出し次いで酸で溶離し、この酸性溶離液をシ
リカを担体とする化学結合型逆相カラムを用い酸
性緩衝液の移動相で溶出する高速液体クロマトグ
ラフイに付して分離し、次いで第１、２及び３反
応試薬でトリヒドロキシインドールに変換して螢
光分析するカテコールアミン分析法であつて； 移動相流量と反応試薬流量との比率が４〜
1.5：１、第１反応試薬が0.02〜0.06w／ｖ％のフ
エリシアン化カリウム含有のPH６〜７の緩衝溶
液、第２反応試薬が0.02〜0.08w／ｖ％のアスコ
ルビン酸と0.3v／ｖ％以下のメルカプトエタノー
ルとを含有する水溶液、第３反応試薬が５〜10規
定の水酸化ナトリウム溶液、並びに第１、２及び
３反応試薬それぞれの反応時間が５〜20秒、５〜
15秒及び５〜10秒であることを特徴とするカテコ
ールアミン分析法を提供するものである。
相抽出し次いで酸で溶離し、この酸性溶離液をシ
リカを担体とする化学結合型逆相カラムを用い酸
性緩衝液の移動相で溶出する高速液体クロマトグ
ラフイに付して分離し、次いで第１、２及び３反
応試薬でトリヒドロキシインドールに変換して螢
光分析するカテコールアミン分析法であつて； 移動相流量と反応試薬流量との比率が４〜
1.5：１、第１反応試薬が0.02〜0.06w／ｖ％のフ
エリシアン化カリウム含有のPH６〜７の緩衝溶
液、第２反応試薬が0.02〜0.08w／ｖ％のアスコ
ルビン酸と0.3v／ｖ％以下のメルカプトエタノー
ルとを含有する水溶液、第３反応試薬が５〜10規
定の水酸化ナトリウム溶液、並びに第１、２及び
３反応試薬それぞれの反応時間が５〜20秒、５〜
15秒及び５〜10秒であることを特徴とするカテコ
ールアミン分析法を提供するものである。
この発明は上記の特徴を有するが移動相流量と
反応試薬流量との比率の４〜1.5：１の範囲より
はずれて移動相流量が多くても感度が低下する。
また第１、第２及び３反応試薬の濃度は上記の範
囲より大きくても小さくても感度の低下がみられ
る。さらに第１、２及び３反応試薬の反応時間は
上記の範囲より短かくても長くしても感度が低下
し好ましくない。
反応試薬流量との比率の４〜1.5：１の範囲より
はずれて移動相流量が多くても感度が低下する。
また第１、第２及び３反応試薬の濃度は上記の範
囲より大きくても小さくても感度の低下がみられ
る。さらに第１、２及び３反応試薬の反応時間は
上記の範囲より短かくても長くしても感度が低下
し好ましくない。
また第１反応試薬のPHはリン酸塩緩衝液などで
この試薬の反応に最適であることが知られている
PH６〜７の範囲に調整される。
この試薬の反応に最適であることが知られている
PH６〜７の範囲に調整される。
この発明において試料中のカテコールアミンの
固相抽出及び溶離には公知の方法を用いることが
できる。すなわち試料をアルミナなどで処理して
カテコールアミンとの錯体を形成させて抽出し、
次いで酢酸溶液、塩酸溶液などを用いて溶離され
る。
固相抽出及び溶離には公知の方法を用いることが
できる。すなわち試料をアルミナなどで処理して
カテコールアミンとの錯体を形成させて抽出し、
次いで酢酸溶液、塩酸溶液などを用いて溶離され
る。
またシリカを担体とする化学結合型逆相カラム
も公知のものを用いることができ例えばゾルバツ
クスCDS（デユポン社製）が挙げられる。また移
動相としてはPH2.0〜5.0の緩衝液が用いられる
が、これには保持時間調節用の有機溶媒とか、イ
オンペア試薬としてアルキル硫酸ナトリウム、ア
ルカンスルホン酸ナトリウム、強酸強塩基の塩な
どが適宜添加される。
も公知のものを用いることができ例えばゾルバツ
クスCDS（デユポン社製）が挙げられる。また移
動相としてはPH2.0〜5.0の緩衝液が用いられる
が、これには保持時間調節用の有機溶媒とか、イ
オンペア試薬としてアルキル硫酸ナトリウム、ア
ルカンスルホン酸ナトリウム、強酸強塩基の塩な
どが適宜添加される。
(ホ) 実施例
次にこの発明の方法を実施例によつて説明す
る。試料として、ノルアドレナリンとアドレナリ
ンをそれぞれ100pｇ含有する0.4規定の酢酸100μ
を用いこれを第１図に系統図を示す分析装置に
よつて下記条件で分析した。
る。試料として、ノルアドレナリンとアドレナリ
ンをそれぞれ100pｇ含有する0.4規定の酢酸100μ
を用いこれを第１図に系統図を示す分析装置に
よつて下記条件で分析した。
カラム：ゾルバツクスCDS（4.6mmφ×15cm）
移動相：２ｍＭのペンタンスルホン酸ナトリウム
含有の20ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（PH
2.35） 移動相流量：0.6ml／min 第１反応試薬：0.04w／ｖ％のフエリシアン化カ
リウム含有の0.2Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH6.8）、反応時間13.2秒。
含有の20ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（PH
2.35） 移動相流量：0.6ml／min 第１反応試薬：0.04w／ｖ％のフエリシアン化カ
リウム含有の0.2Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH6.8）、反応時間13.2秒。
第２反応試薬：0.04w／ｖ％アスコルビン酸及び
0.2v／ｖ％の２−メルカプトエタノール含有の
水溶液、反応時間9.6秒。
0.2v／ｖ％の２−メルカプトエタノール含有の
水溶液、反応時間9.6秒。
第３反応試薬：10規定の水酸化ナトリウム溶液、
反応時間8.3秒。
反応時間8.3秒。
各反応試薬流量：0.3ml／min
各反応管：0.5mm内径×１ｍ
カラム及び反応部の温度：40℃
検出器：島津RF500LCA螢光検出器（Ex410nｍ、
Em520nｍ） 次に分析操作を第１図によつて説明する。まず
１の移動相をポンプ２で全分析系統に供給して定
常状態になつてから第１、２及び３反応試薬を順
次注入する。次いで試料を試料注入部３から注入
し、１１の螢光検出器で分析する。その結果第２
図に示す螢光分析クロマトグラムが得られた（図
中NAとＡはそれぞれノルアドレナリンとアドレ
ナリンのピークである。以下同様）。検出限界は
約4pｇである。
Em520nｍ） 次に分析操作を第１図によつて説明する。まず
１の移動相をポンプ２で全分析系統に供給して定
常状態になつてから第１、２及び３反応試薬を順
次注入する。次いで試料を試料注入部３から注入
し、１１の螢光検出器で分析する。その結果第２
図に示す螢光分析クロマトグラムが得られた（図
中NAとＡはそれぞれノルアドレナリンとアドレ
ナリンのピークである。以下同様）。検出限界は
約4pｇである。
次に各条件について検討した結果を述べる。
(i) 第１反応試薬中フエリシアン化カリウムの濃
度 前記実施例の条件のうちフエリシアン化カリ
ウムの濃度のみを変えて分析し、その濃度と比
螢光強度との関係を示すグラフを第３図に示し
た。その結果0.02〜0.06w／ｖ％の範囲でノル
アドレナリン、アドレナリンが良好な感度で分
析されることが分かる。
度 前記実施例の条件のうちフエリシアン化カリ
ウムの濃度のみを変えて分析し、その濃度と比
螢光強度との関係を示すグラフを第３図に示し
た。その結果0.02〜0.06w／ｖ％の範囲でノル
アドレナリン、アドレナリンが良好な感度で分
析されることが分かる。
(ii) 第２反応試薬中のアスコルビン酸の濃度
前記実施例の条件のうち上記の濃度のみを変
えて分析した結果を第４図に示した。その結果
0.02〜0.08w／ｖ％の範囲でノルアドレナリン
とアドレナリンが良好な感度で分析できること
が分かる。
えて分析した結果を第４図に示した。その結果
0.02〜0.08w／ｖ％の範囲でノルアドレナリン
とアドレナリンが良好な感度で分析できること
が分かる。
(iii) 第２反応試薬中の２−メルカプトエタノール
の濃度 前記実施例の条件のうち上記の濃度のみを変
えて分析した結果を第５図に示した。その結果
0.3v／ｖ％以下の濃度であればノルアドレナリ
ン、アドレナリンが良好な感度で分析できるこ
とを示している。
の濃度 前記実施例の条件のうち上記の濃度のみを変
えて分析した結果を第５図に示した。その結果
0.3v／ｖ％以下の濃度であればノルアドレナリ
ン、アドレナリンが良好な感度で分析できるこ
とを示している。
(iv) 第３反応試薬中の水酸化ナトリウムの濃度
前記実施例の条件のうち上記の濃度のみを変
えて分析した結果を第６図に示した。その結果
５〜10規定の範囲であればノルアドレナリン、
アドレナリンが良好な感度で分析することが分
かる。
えて分析した結果を第６図に示した。その結果
５〜10規定の範囲であればノルアドレナリン、
アドレナリンが良好な感度で分析することが分
かる。
(ヘ) 発明の効果
この発明の分析法によれば100pｇ／100μと
いうような極めて低い濃度のカテコールアミンで
も良好な感度で分析できる。
いうような極めて低い濃度のカテコールアミンで
も良好な感度で分析できる。
第１図はこの発明の方法に用いられる分析装置
の一例の系統図、第２図はこの発明の方法の一実
施例のカテコールアミン分析のクロマトグラム、
第３〜６図は、第１反応試薬のフエリシアン化カ
リウムの濃度、第２反応試薬のアスコルビン酸濃
度、同試薬の２−メルカプトエタノール濃度及び
第３反応試薬の水酸化ナトリウム濃度のそれぞれ
と、螢光分析で得られたクロマトグラムの比螢光
強度との関係を示すグラフである。 １……移動相、２，１４……ポンプ部、３……
試料注入部、４……逆相カラム、５……第１反応
試薬、６……第２反応試薬、７……第３反応試
薬、８……第１反応試薬反応管、９……第２反応
試薬反応管、１０……第３反応試薬反応管、１１
……螢光検出器、１２……分析データ処理器及
び、１３……分析液排出管路。
の一例の系統図、第２図はこの発明の方法の一実
施例のカテコールアミン分析のクロマトグラム、
第３〜６図は、第１反応試薬のフエリシアン化カ
リウムの濃度、第２反応試薬のアスコルビン酸濃
度、同試薬の２−メルカプトエタノール濃度及び
第３反応試薬の水酸化ナトリウム濃度のそれぞれ
と、螢光分析で得られたクロマトグラムの比螢光
強度との関係を示すグラフである。 １……移動相、２，１４……ポンプ部、３……
試料注入部、４……逆相カラム、５……第１反応
試薬、６……第２反応試薬、７……第３反応試
薬、８……第１反応試薬反応管、９……第２反応
試薬反応管、１０……第３反応試薬反応管、１１
……螢光検出器、１２……分析データ処理器及
び、１３……分析液排出管路。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 試料中のカテコールアミン類を固相抽出し次
いで酸で溶離し、この酸性溶離液をシリカを担体
とする化学結合型逆相カラムを用い酸性緩衝液の
移動相で溶出する高速液体クロマトグラフイに付
して分離し、次いで第１、２及び３反応試薬でト
リヒドロキシインドールに変換して螢光分析する
カテコールアミン分析法であつて； 移動相流量と反応試薬流量との比率が４〜
1.5：１、第１反応試薬が0.02〜0.06w／ｖ％のフ
エリシアン化カリウム含有のPH６〜７の緩衝溶
液、第２反応試薬が0.02〜0.08w／ｖ％のアスコ
ルビン酸と0.3v／ｖ％以下のメルカプトエタノー
ルとを含有する水溶液、第３反応試薬が５〜10規
定の水酸化ナトリウム溶液、並びに第１、２及び
３反応試薬それぞれの反応時間が５〜20秒、５〜
15秒及び５〜10秒であることを特徴とするカテコ
ールアミン分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58221675A JPS60113152A (ja) | 1983-11-24 | 1983-11-24 | カテコ−ルアミン分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58221675A JPS60113152A (ja) | 1983-11-24 | 1983-11-24 | カテコ−ルアミン分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60113152A JPS60113152A (ja) | 1985-06-19 |
| JPS6359107B2 true JPS6359107B2 (ja) | 1988-11-17 |
Family
ID=16770506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58221675A Granted JPS60113152A (ja) | 1983-11-24 | 1983-11-24 | カテコ−ルアミン分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60113152A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0449474Y2 (ja) * | 1988-12-12 | 1992-11-20 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1366015A4 (en) * | 2001-03-01 | 2008-03-26 | Tech Resources Pty Ltd | BENZENE-1 2-DIOL MANNICH BASES, LIGANDS, POLYMERS, AND SELECTIVE METAL ION REMOVAL METHOD |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5827062A (ja) * | 1981-08-12 | 1983-02-17 | Sekisui Chem Co Ltd | カテコ−ルアミン測定用液体クロマトグラフ |
-
1983
- 1983-11-24 JP JP58221675A patent/JPS60113152A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5827062A (ja) * | 1981-08-12 | 1983-02-17 | Sekisui Chem Co Ltd | カテコ−ルアミン測定用液体クロマトグラフ |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0449474Y2 (ja) * | 1988-12-12 | 1992-11-20 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60113152A (ja) | 1985-06-19 |
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