JPS63502593A

JPS63502593A - マノアリド類似体

Info

Publication number: JPS63502593A
Application number: JP62501564A
Authority: JP
Inventors: ジヤコブス，ロバート　エス; フォ−クナ−，ジョン　ディ−．
Original assignee: ザ　リ−ジェンツ　オブ　ザ　ユニバ−シティ　オブ　カリフォルニア
Priority date: 1986-02-19
Filing date: 1987-02-19
Publication date: 1988-09-29
Also published as: AU7083187A; WO1987005019A1; EP0258407A4; EP0258407A1; KR880700799A; US4789749A; AU612566B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】翌二」健本発明はナショナル　オセアニック＆アトモスフェリツクアトミニストレージョンから授与されたシーグランドＮｏ、　Ｎ６８０　ＡＡ−Ｄ−００１２０、プロジェクトＮｏ、　Ｒ／ＭＰ−２１に基づき、政府の援助で行われた。政府は本発明に対し正当な権利を有する。

本出願は、　１９８４年６月１８日に出願された米国特許出願第６２１．８７９号の部分継続出願であり、この米国特許出願第６２１．８７９号は１９８３年８月３日に出願された米国特許出願第５１９．８５３号の部分継続出願である。

皿米及± 海綿から分離された化合物は９次式で示されるマノアリド（以下余白）これらの化合物は、　５ｉｌｖａ、　Ｅ、Ｄ、ら、　Ｔｅｔ　Ｌｅｔｔ　（１９８１）　２２　：３１４７−３１５０およびＴｅｔ　Ｌｅｔｔ　（１９８０）　２１　：１６１１−１６１４により開示された。これらの化合物、および単離中に人工的に生じた類イ以体である。デヒドローセコーマノアリド：の抗炎症および免疫抑制活性が、米国特許出願番号第５１９，８５３号と同日に出願された米国特許出願番号第４．４４７．４４５号に開示されている。

本発明は、マノアリドと同じ範囲で抗炎症活性を有する。

すなわちインドメタシンの抗炎症活性より大きく、ヒドロコルチゾンの抗炎症活性より低い、マノアリドの合成類似体に関する。用途としては、慢性関節リュウマチ、骨関節炎、リウマチ性心臓炎、さらに重症筋無力症、アレルギー疾患、気管支喘息などの自己免疫疾患、および目や皮膚の炎症性疾患の治療を含む。これらの薬物はまた。器官移植および組織移植に関連した補助治療法として有用である。そして、それらはホスホリパーゼＡ２を阻害するので、主要成分が酵素ホスホリパーゼＡ２であるいかなる毒に対しても局所治療法として有用である。さらに、マノアリド類似体は、ホスホリパーゼＡ２を阻害する能力の故に免疫抑制剤である。マノアリド類似体はオキサシロン−誘発性炎症を阻止するので、これらの化合物はアレルギー性接触皮膚炎（毒カシまたは毒ツタによるような）の治療に有用である。これらはまた抗増殖剤でもある。

生主尻ｑ皿丞本発明は、抗炎症剤として、免疫抑制剤として、そして抗増殖剤として有用な海洋天然産物マノアリドに関連する化合物を開示する。従って、ある局面では２本発明は次式（１）で表される化合物に関連する：、：：こｒ、ｘはＣＨ３，ＣＨ２０Ｈ，ＣＨＯ，またはＣ０ＯＨ；点線は単結合、もしくはＥ立体配置またはＺ立体配置のいずれかであり得る二重結合を表す；Ｙは、該点線が単結合の場合は、ＨまたはＯＨであり。

該点線が二重結合の場合は存在しない；および２はＨまたはＯＨ：および、Ａは３〜１５個の炭素原子を有する。飽和または不飽和炭化水素基であって、環状部分を含むか、あるいは含まず、そして特に次式で表される基を包含する：ＹがＯＨであり、そして２がＣＩＯまたはＣ０ＯＨである場合１式（１）の化合物は、それぞれへミアセクールまたはδ−ラクトンを包含する。

ＸがＣ０ＯＨである場合１式（１）の化合物は、対応するアルキル（１−６）エステル、アルキル（１−６）アミドを含むアミド、または薬学的に容認される塩の形であり得る。ＸがＣＨ，ＯＨであり、および／またはＹがＯＨであり、および／またはＺがＯＨである場合１式（１）の化合物は、そのアシルエステル（１ −６Ｃ）の形であり得る。総合的に、これらは″“薬学的に容認されるエステル ”である。

ある実施態様は本発明の化合物から除外される：すなわちＡがＲ１，ＸがＣＨＯ，ＹおよびＺがＯＨ，そして点線が単結合を表す場合のもの、および八がＲ，、ＸがＣＨ２０Ｈ，ＹがＯＨ，ＺがＨ２そして点線が単結合を表す場合のもの。

別の局面では１本発明は、活性な成分として本発明の化合物を含む薬学的組成物に、そして本発明の化合物および組成物およびマノアリド天然産物を用いる炎症の治療、望ましくない免疫応答の変更、または細胞の増殖の遅延の方法に関する。

オ溌護目０１ゴｌ弐ましい　１　の云ゝ■ アルコール類を包含する本発明の化合物は、１〜６炭素原子からなるアシル基を用いて、当該分野における標準方法により、都合よくエステル化され得る。適当なアシル基としては、アセチル基、プロパノイル基、ｎ−ヘキサノイル基、４− メチルペンタノイル基、などが含まれる。該アシル基はまた。

不飽和であって、そしてまたアクリロイル基、メチルアクリロイル基、３−メチルブテン−２−オイル基、などを含み得る。

さらに、Ｘがカルボキシル基であり、ラクトン形ではない実施態様については、エステル、アミド、そして遊離カルボキシル基の塩もまた本発明に包含される。

エステルは１例えばエタノール、ｎ−ブタノール、シクロヘキサノール、シクロペンタノール、３−メチルブテン−２−オール、ｉ−プロパツールなどの飽和または不飽和アルコールを含む；アミドはアンモニアから、およびエチルアミン、ｎ−ブチルアミン。

ヘキシルアミン、ジ−イソプロピルアミンなどのアルキルアミンから得られるものを含む。薬学的に許容される塩には。

有機および無機塩基から形成されるものがある。

アルコール成分を包含する式（Ｄの化合物のエステルは９本発明のアルコールを包含する化合物を、三フッ化ホウ素、塩化水素、または硫酸のような強酸の存在下で所望のアシル基に対して遊離酸の形をした酸とともに処理するような、標準技術で調製され得る。（上記のエステルは、また塩化アシルのようなアシル基の活性型から形成され得る。）この反応は。

上記の遊離酸およびアルコールが可溶である不活性な有機溶媒中で実施され得る。このような有機溶媒は９例えば、シクロオクタン、シクロヘキサン、またはベンゼンのような炭化水素溶媒、クロロホルムまたはジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素溶媒、またはジエチルエーテルまたはテトラヒドロフランのようなエーテル溶媒である。この反応は約Ｏ℃から反応混合物の還流温度まで、好ましくは塩化水素を触媒として用い、１５°Ｃ〜３５°Ｃという反応混合物の温度で行われる。

式（１）に包含されるカルボキシル基、すなわちＸがＣ０ＯＨ，のエステルは適当なアルコールを試薬として用いる以外、同様な方法で調製される。アミドは、カルボン酸成分９例えば塩化スルホニルでの活性化に引き続き、適当なアミンとの処理により調製される。

塩は遊離酸を、無機塩基１例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、または水酸化カルシウム；あるいは有機塩基９例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、リジン、カフェイン。

プロカイン、コリン、ベタイン、テオブロミン、ポリアミン樹脂などのような、薬学的に許容される塩基の適当量での処理により調製される。反応を水のみで、または不活性で水と不混和性の有機溶媒と水との混合で、約０°Ｃから約１００ °Ｃ９好ましくは室温で行う。

塩の誘導体は前記塩を酸、好ましくは無機酸９例えば塩酸。

で約０°Ｃから約５０°Ｃ２好ましくは室温で、酸性化することにより、それらの対応する遊離酸に再変換できる。

生成物は反応混合物を水で希釈し、そして適当なｐｉで水と不混和性の有機溶媒で抽出する。簡便法で単離される。

本発明のある化合物はキラル中心を含み、従って鏡像異性体の混合物またはジアステレオマーの混合物として、または光学的に純粋な形で調製され得る。ここで特に明示しない限り、該調製物は各キラル中心における。または２つのキラル体のいずれかのラセミ体であり得る。しかし１本発明の範囲はラセミ体および混合体に限定されるものでなく、該化合物の各光学異性体をも包含する。キラル中心が天然産物の類似体におけるキラル中心に対応する場合には、自然に存在するキラリティが好ましい。

同様に、二重結合はＺ形またはＥ形、またはそれらの混合物として存在し得る。

しかし、類似の天然産物のそれに対応する立体化学が好ましい。

Ａで表されるアルキル基は、３〜１５Ｃの飽和または不飽和炭化水素２例えばイソプロピル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘキシ−３−エニル、シクロヘキシル　メチル、４−メチルシクロヘキシル　メチル、３−（４−メチルシクロヘキシル）−プロピルなど、のいずれでも良い。Ｒ７およびＲ５で表されるような。

天然由来の、または人工的に生成される類似体、および一般に天然由来の化合物のテルペノイド体から生じるアルキル基の実施態様が好ましい。

請求の範囲に記載の化合物のある実施態様は１本発明の化合物から除外される。

これらはマノアリド、セコーマノアリド、およびマノアリドジオールが包含される。

狂裏ρ公爽施且様以下の化合物は１本発明の特に好ましい実施態様の例証となる。以下の表に、置換基および、（存在するなら）これらの置換基に関連した慣用名を示す。いくつかの場合、開いた鎖状、および環状（ラクトンまたはへミアセクール）の両方が包含される。記号Ｒ１およびＲ５は、上述のテルペン基を表す。

（以下余白）遣ニー１Ａ　Ｘ　ＹＺ−ユニニー　ｊｌ！ＪＬ：距−”Ｒ，Ｃｌ２０ＨＯＨＨ単結合　マノ７すＦジオールＲ，ＣＨＯ−ＯＨ二重結合（Ｅ）　ダヒＦトセコー７ノ７すＦＲ−ＣＨ３０）１　二重結合（Ｅ）□ Ｒ，ＣＨ３１（ＯＨ単結合　ルファリＸ　ＩＩ　ＩＪ　ＦＲ，ＣＨ３０ＨＨ単結合　− “Ｒ，ＣＩ（ＯＯＨＯＨ単結合　セコ−マノ７すＦＲＬ　ＣＨｚＯＨＯＨＨ単結合　− Ｒ１Ｃ０ＯＨＯＨＯＨ単結合　− （遊離酸）Ｒｔ　ＣＨＯ−ｏｎ　二重結合（Ｅ）−１本発明の化合物ではない。

入−ｄＡ　Ｘ　Ｙ　Ｚ　−−−−−−−−−■■匿−ＲＬ　Ｃ１ｈ　ＯＨ二重結合（Ｅ）− Ｒ，ＣＩｌ、　ＨＯＨ単結合　− Ｒｔ　ＣＨｆｆ　ＯＨＨ単結合　− Ｒ，ＣＩＯＯＨＯｆ（単結合　ルファ９ニリン　Ａ（ヘミアセタール）Ｒ，ＣＨＯＯＨＯＨ単結合　ルファリエリン　Ｂｉ−ブチル　ＣＨｚＯＨＯＨＨ単結合ｉ−ブチル　ＣＨＯ−ＯＨ二重結合（Ｅ）−シク■ヘキシル−Ｃ）１３　−　ＯＨ二重結合（Ｅ）　−メチルｉ−ブチル　ＣＨ，ＨＯ）Ｉ　単結合　−ｎ−ヘキシル　Ｃ１，ＯＨＨ単結合　 −１−ブチル　ＣＩＯＯＨＯＨ単結合　−シクロへキシル−Ｃ）１０　０ＨＯＨ単結合　−メチル馴ｌ践■１弐以下の実施例１および２は、酸化および還元によってマノアリドを別の形へ変換する方法を概説している。

Ｘ、Ｙ、Ｚの多様な実施態様、および点線は、酸化、還元。

および脱水によるマノアリドまたはその類似体の対応する実施態様に関連している。マノアリド自身では、ＸはＣＨＯ（ヘミアセクール）であり、ＹはＯＨであり、２はＯＨであり、そして点線は、単結合を表している。マノアリドのより高度に酸化された形（ＸがＣ０ＯＨ（ラクトン））への変換を、実施例１に概説する。同様の方法は、ＡがＲｍ以外であるような本発明の化合物を酸化するのに使用し得る。マノアリドの還元形（ここで、Ｘは、ＣＨ２０Ｈであり、ＺはＨである）への変換を実施例２に概説する。ＸをＣＨ３に変換、および／またはＹあるいはＨを還元するのには、より厳密な条件下でさらに還元する。当該分野で知られているように２条件を適当に調節することによって、Ｘの酸化状態を保ったまま、Ｙおよび２を選択的に還元し得る。これらの変換も、ＡがＲｎ＋以外であるような本発明の化合物に使用し得る。最後に、ＹがＯＨであるような本発明のいかなる化合物も、適当な触媒または脱水剤の存在下で脱水することにより９点線で示した位置に二重結合を有するような、対応する化合物に変換し得る。

要約すると、マノアリドおよびその明白な置換体に対して以下に概説するような酸化、還元、および脱水反応は、Ａが。

ここで定義したいかなる置換基であっても、非マノアリド類似体に対して適用し得る。

への多様な実施態様に対する所望のマノアリドの実施態様は、マノアリドおよびセコーマノアリドの調製に用いられたメチルトランス−７，８−ジヒドロ−β− イオニリデンアセテートを適当な出発物質に置き換えることによって調製し得る。

該マノアリドおよびセコーマノアリドの調製はＫａｔｓｕｍｕｒａ。

Ｓ、、ら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ　（１９８５）　２６　：　５８２７−５８３０に記述され、ここに参照文献として引用する。そのような合成では。

式で表される出発物質（すなわち、星印の炭素が酸化され、エステル化されているＲｍ）をＬｉＡｌＨ４で還元した後、臭化を行う（ＰＢｒ３／ピリジン）。これは９次いでビルブアルデヒドジメチルアセクールのＮ、Ｎ−ジメチルヒドラゾンのりチウムアニオンと縮合させることによって１式Ｒｍ−ＣＨｚＣＯＣＨ（ＯＭｅ）　２．またはより一般的にＡ−ＣＨｚＣＯＣＨ（ＯＭｅ）　ｚで表される化合物を得る。

合成の残りの部分は９反応図１に要約する：（以下余白）ｍｔ＋＊　ｔ＋す／二’　ＶＷ＋ｙ　ｗ　ｌ＋　７　＃　ＩルＪ−ｓ　ｌ−ｙｒ　ＧＪ　”２：　１ｗ　Ｗ！　＋７９’！＝　＋ｍ反応図１段階ｌ〜６そ行う際に用いる粂汗および試楽に闇する計則は、　Ｋａｔｓｕｍｕｒａら（前出）に述べられている。

反応図１のＲｍＣＨｚｃＯｃＨ（ＯＭｅ）　＊の代わりに、弐ＡＣＨｔＣＯＣＲ（ＯＭｅ）　：で表される化合物（ここで、Ａは９例えば、Ｒ１，シクロヘキシルメチル、２−ブテニル、ドデカニル、３−メチルデカニル、２−シクロヘキシルエチル、または他の３〜１５Ｃ飽和または不飽和炭化水素基）を用いることによって、対応するマノアリド類似体を調製し得る。これらを必要に応じて酸化。

還元、または脱水することによって、所望の誘導体イ（得られる。

これらの出発物質は２例えばＭ　ｅ　ＯＣ００Ｍ　ｅ　、ぐ）ＣＯＯＭｅ。

ＣＨ３またはぐ）ＣＨｚｃＯＯＭｅを、メチルトランス−７，８−ジヒドロ−β−イオニリデンアセテートに関して上述した方法で反応させることによって調製される。

（以下余白）つ！本発明の化合物は、抗炎症活性、免疫抑制活性、および抗、増殖活性を有する化合物であることが以下に示されている。

それ故、これらの化合物は、炎症を制御し、免疫系を抑制して望ましくない応答を防止し、そして制御できない増殖を止めるのに有用である。このような利用として２本発明の化合物はヒトを含む哺乳動物に対し１体重１ｋｇ当たり１日に０．０５〜５０■の有効量が投与される。この量は、もちろん治療条件。

発病度、薬剤の投与経路、および患者の性質に依存する。この薬剤は、経口的、非経口的または他の標準的な投与経路によって投与され得る。

非経口投与は、一般的に注射、すなわち皮下注射、筋肉注射または静脈注射のいずれかにより行われる。注射剤は通常の懸濁液または溶液の形で、乳剤としであるいは再構成するのに適した固体の形として調製され得る。適当な賦形剤は。

例えば水１食塩水、デキストロース、ハンクス溶液、リンガ−溶液、グリセロールなどである。さらに本発明は、湿潤剤または乳化剤、あるいはｐＨ緩衝剤などのような非中毒性の補助物質の少量を含有し得る。このような種類の薬剤を処方するための標準的な方法は、２まヱ上２■果工、マック　ハフリッシング　カンパニイー、イーストン、ＰＡ（最新版）に見い出し得る。

経口投与に対して適当な賦形剤には、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、グルコース、炭酸マグネシウムなどが含まれる。経口組成物は。

溶液、懸濁液、顆粒剤９錠剤、カプセル剤、粉末剤、持続放出性製剤などの形を取る。

以下の実施例は本発明を例証することを意図しているものであり、限定するものではない。部および百分率は、特に明示しない限り重量によって与えられる。

夫旌拠上３．７−ビス　ヒドロオキシメチル　−４−ヒドロキシ−１１−メチル−１３− ２，６，６−ドリメチルシクロへキセニル　−２゜６．１０−）リデカトリエノイック　アシッド　Ｔ−ラクトン（ヱ又７１Ｊ）’二漫り叶シｋ）　（７）既製Ａ、過剰のホウ水素化ナトリウム（３００■、　７．０ｍＭ）をマノアリド（１３６ｍｇ、　０．３３ｍＭ）のイソプロパツール（２０ｍｆｆｉ）撹拌溶液に、０°Ｃにて少量ずつ添加した。この混合物はＯ″Ｃにて１時間攪拌した。過剰の試薬は水素の発生が止むまで、２％の塩酸を滴下して添加することにより分解した。生成物は水（１００ｍｌ）およびエーテル（２Ｘ　１００ｍｆ）中に分配させた。エーテル抽出物は硫酸ナトリウム上で乾燥させ１次いで溶媒を除去し、油状物質を得た。この生成物を）ＩＰＬＣによって精製し、ジオールを得た。収量は７５ｍｇ（理論収率５５％）；油状物質８　；’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１ｉ）　δ ０．９９（ｓ、　６Ｈ）、　１．６０（ｓ、　３）＋）。

１．６５（ｓ、　３Ｈ）、　４．ＩＨｄ、　１）１．　Ｊ＝１４Ｈｚ）、　４．１７（ｄ、　１）１゜Ｊ＝１４Ｈｚ）、　５．３９（ｔ、　１）１．　Ｊ＝　７Ｈｚ）、　５．９８（ｂｒ　ｓ、　１８）；ＨＲＭＳ、　ｍ／ｚ　４０２．２７７０．　ＣＺＳＨ３１１０４として４０２．２７７０゜Ｂ、項Ａで調製されたマノアリドジオールを塩基の存在下で、３倍過剰のモル数の無水酢酸に溶解する。

この混合物は室温にて数時間撹拌する。次いで、溶媒を除去し、残渣をエーテルに溶解し、そして濾過することにより透明な濾液を得る。ジアセテートの結晶は、この濾液から得られる。無水酢酸に換えて適当なカルボン酸の酸ハロゲン化物を用いること以外は同様にして、プロピオナート、ジプロピオナート、ヘキサノエートおよびジペンタノエートを２周製する。

実施■又二ノ１」」ノ≧づＬと）乙Δ翳製ジョーンズ試薬（無水クロム酸（６，７ｇ）と硫酸〔６ｄ〕から調製）の溶液をマノアリド（３０■、　０．０７ｍＭ）の蒸留アセトン（２０ｍｆｆｉ）撹拌溶液に、２５°Ｃにてこの溶液が褐色を維持するまで滴下して添加した。５分後、この反応混合物をシリカゲルの短いカラムに通して濾過し、そして溶媒を蒸発させて油状物質を得た。この生成物をＨＰＬＣによるクロマトグラフィーにかけて、マノアジドδ−ラクトンを２つのジアステレオ異性体の混合物として得た。収量は１５■（理論収率５０％）；油状物質１　； ’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ：Ｉ）　６０．９９（ｓ、　６Ｈ）、　１．６０（ｓ、　３Ｂ）、　１．６５（ｓ。

３０）、　５．１０（ｍ、　１８）、　５．２６（ｄｄ、　０．５Ｈ，Ｊ＝１２．　５）１ｚ）、　５．３７（ｄｄ。

０．５Ｈ，−ツー１２，５七）、　６．１５　（ｓ、　０．５８）、　６．２０（ｄ、　０．５Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　６．２３　（ｓ、　０．５Ｈ）　、　６．３５（ｄ、　０．５Ｈ，Ｊ＝　７Ｈｚ）、　６．６２（ｍ、　０．５Ｈ）、　６．６５（ｍ、　０．５Ｈ）　；ＨＲＭＳ、　ｍ／ｚ　４１４．２３８４．　ＣｚｓＨｚ４０ｓとして４１４．２４０６゜マノアジドδ−ラクトンは、ヘミアセクールの炭素原子におけるエピマー化によって生じるジアステレオ異性体の分離不可能な１：１混合物である。

”ＩＲ（フィルム）　３３００．１７７０．１７４０ｃｍ−’　；ＵＶ　（ＭｅＯＨ）　２０８．５Ｈｍ（ｅ　１０．３５０）災施田主マノアリド　δ−ラクトン　アセテートのＢＡ、マノアリド　δ−ラクトン（１５■、　０．０４ｍＭ）を無水酢酸（０，５ｍ（りおよびピリジン（１，０ｄ）に溶解し、そしてこの混合物を２５°Ｃにて４時間撹拌した。溶媒を高真空下で除去し。

残渣をエーテルに溶解させ、そしてシリカゲルプラグに通して濾過し、透明な油状物質を得た。この油状物質を）ＩＰＬｃによるクロマトグラフィーにかけて、ジアステレオ異性体のアセテートの混合物を得た。収量１６■（定量的）−油状物質ビ’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　６０．９９（ｓ、　３Ｈ）、　１．５９（ｓ、　３Ｈ）、　１．６５（ｓ。

３Ｈ）、　２．１８（ｓ、　３）ｔ）、　５．１０（ｔ、　ＩＨ，Ｊ＝７）ｆｚ）、　５．２０ｍ、　ＩＨ）。

６．２６（ｓ、　０．４Ｈ）、　６．３４（ｓ、　０．６Ｈ）、６．６０ｍ、　ＩＨ）、　６．９８（ｓ。

ＩＨ）；ＨＲＭＳ、　ｍ／Ｚ　４５６．２５１４．　ＣｚｒＨｓｂＯｈとして４５６．２５１２゜マノアジドδ−ラクトン　アセテートは、２つのジアステレオ異性体の６：４混合物である。このジアステレオ異性体は分離し得るが９分析された物質は異性体の混合物であった。

”ＩＲ（フィルム）　１８８０．１７７０．１７２５ｃｍ−’　；ＵＶ　（ＭｅＯＨ）　２０８ｎｍ（ｅ　１０．６００）Ｂ、無水酢酸に換えてプロピオン酸、ブタノン酸、ペンタノン酸またはヘキサノン酸の、酸無水物または酸塩化物を用いること以外は項Ａに記載されているのと同様にして、対応するマノアリドδ− ラクトン　プロピオナートブタノエート、ペンタノエートおよびヘキサノエートを調製する。

実長号ロエデヒドローセコーマノアリドの単一および海綿ルファリエラ　パリアビリスの粗製抽出物のＵｖおよび’ＨＮＭＲデータを調べると、これらの抽出物をクロマトグラブ　イーで精製している間に、おそらく酸の触媒作用によるマノアリドのシリカ上における脱水によって、デヒドローセコーマノアリドが形成されるということが明らかになる。

マノアリドの単離および精製には、シリカゲル上でのクロマトグラフィーによる分離を２または３回利用し得る。マノアリドより先に溶離したフラクションを集め、いくつかのフラクションを’ＨＮＭＲスペクトルによって識別して合わせた。

この合力せたフラクションは２μｍポラシル（μｍＰｏｒａｓｉｌ）上でＬＣによるクロマトグラフィーにかけ、溶離剤としてジエチルエーテルを用いることにより、デヒドローマノアリドを粘性のある黄色の油状物質として得た。収量は一定しない。

ＵＶ　（ＥｔＯＨ）　３１６ｎｍ（ｔ　１２，０００）、　２０５ｎｍ（ε１０，３００）；ＵＶ　（ＥｔＯＨ＋Ｎａ０Ｈ）　４６１ｎｍ（ｔ　２５．０００）、　２８０ｎｍ（ｅ　１６００）、　２４６（ε２０００）　；ＩＲ（ＣＯＣｌ２）　１７４５ｃｍ−’　、　１６７０ｃｍ−’　；’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）　δ０．９６（ｓ、　６Ｈ）、　１．５６（ｓ、　３Ｈ）、　１．６０（ｓ。

３Ｂ）、　５．ＩＨｂｒ　ｔ、　ＬＨ，Ｊ＝　’Ｎ（Ｚ）、　６．１４（Ｓ、　ＩＨ）、　６．３２（ｅ：、　ＩＨ）。

６．８２（ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝１５．５七）＋　６．９Ｈｄ、　ＩＨ，Ｊ＝６七）、　７．３４（ｄｄ。

ＩＨ，Ｊ−１５，５，６Ｈｚ）、９．５２（ｓ、１Ｂ）；１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　６１９４．３（ｄ）、１７１．５（ｓ）。

１６０．０（ｄ）、１４６．３（ｓ）、１４５．８（ｄ）、１．３７．８（ｓ）、１３６．８（ｓ）、１３３．８（ｓ）、１２８．３（ｄ）、１２６．９（ｓ）、１２１．８（ｄ）、１１９．５（ｄ）、９７．８（ｄ）。

４０．１（ｔ）、３９．７（ｔ）、３４．８（ｓ）、３２．６（ｔ）、２９．５（ｔ）、２８．５（ｑ）。

２８．５（ｑ）、２７．７（ｔ）、２４．６（ｔ）、１９．７（ｑ）、１９．４（ｔ）、１６．０（ｑ）；マススペクトル、　ｍ／ｚ（％）、　３９８（３）、　３８０（３）、　２５１（６）、　１３７質量測定、ｍ／ｚ＝３９８．２４２９．　ＣｚｓＨｚ４０４として３９８．２４５７゜実施例３の項Ｂの方法に類似の方法（この方法は当該分野における標準的方法である）を用いて、デヒドローセコーマノアリドの酢酸エステル、ギ酸エステル、ヘキサン酸エステルおよびペンタン酸エステルを調製する。

尖施拠豆３−４，８−ジメチル−１０−２，６，６−）リスチルシクロヘキセニル　−デカ　７−ジェニル°−４−ヒドロキシブテノリド（ルファリエロリド　の単１および。

１９８５年１月、パラオのウェスタン力ロライン諸島（Ｗｅｓ　ｔｅｒｎＣａｒｏｌｉｎｅ　ｌ５ｌａｎｄｓ）にて、まだ同定されていない海綿をスキ・ユーバダイビング（水深１５〜２０ｍ）により手で採集し、そして冷凍保存した。この標本を解凍し、高速ブレングー中でヘキサン（７００ｄ）と２時間ブレンドした。得られた懸濁液を３０分間激しく撹拌し１次いで濾過した。新しいヘキサン（７００ｍｆ）を添加し、この混合物を再び３０分間撹拌し、そして濾過した。

合わせたヘキサン抽出液をエバボレートシ、褐色の油状物質（１４，４３ｇ）を得た。この油状物質の一部をシリカ上のクロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）にかけ、溶離剤としてヘキサン：酢酸エチル（４：１）を用いることにより、ルファリエロリド（ｌｕｆｆａｒｉｅｌｌｏｌｉｄｅ）を無色の油状物質として得た。

ＵＶ：（ＣＨ３０Ｈ）　２１４ｎｍ　（ｔ　１０．０００）、（ＣＨ３０Ｈ１０Ｈ−）２５３ｎｍ　（ε４４００）　； ’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ＋）　δ６．０１（ｂｒ　ｓ、　ＩＨ）、　５．８５（ｂｒ　ｓ、ＩＨ）、　５．１４（ｂｒ　ｔ、　２Ｈ，Ｊ＝　７Ｈｚ）、　１．６４（ｂｒ　ｓ、　６８）、　１．６０（ｂｒ　ｓ、　３Ｈ）。

０．９９（ｓ、　６８）　； ”ＣＮＭＲ（ＣＤＣｈ）　６１７１．９（ｓ）、　１６９．９（ｓ）、　１３６．９　（ｓＬ　１３６．８（ｓ）、　１３６．０（ｓ）、　１２６．６（ｓ）、　１２３．１（ｄ）、１２１．９（ｄ）、　１１７．Ｑ（ｓ）。

９９．５（ｄ）、　４０．１（ｔ）、　３９．７（ｔ）、　３９．５（ｔ）、　３４．８（ｓ）、　３２．６（ｔ）。

２８．５（ｑ）、　２７．８（ｔ）、　２７．７（ｔ）、　２６．４（ｔ）、　２４．９（ｔ）、　１９．７（ｑ）。

１９．４（ｔ）、　１６．０（ｑ）、　１５．９（ｑ）；高分解能マススペクトル、実測値ｍ／ｚ　３８６．２８２１．　Ｃ２５Ｈ３８０３として３８６．２８２１゜実ｊＵ生影ルファ１ニリンＡおよびルファリエリンＢの　および１９８５年１月９日から１９８５年１月２３日までの期間にバラオで採集したルファｉ工°”　パリアビ１スの標本のうち約５％に２つの新しい化合物、すなわち通常の代謝物質であるマノアリドおよびセコーマノアリドに代わる。ルファリエリンＡ　（１ｕｆｆａｒｉｅｌｌｉｎＡ）およびルファリエリンＢ　（ｌｕｆｆａｒｉｅｌｌｉｎＢ　）が含有されていた。

これらの標本は各標本の少量を抽出し、そして粗抽出物の’ＨＮＭＲスペクトルを分析することにより同定された。

冷凍された海綿はメタノールに一晩浸漬し１次いでこのメタノールを傾瀉し、そして濾過した。この操作を３回反復した。合わせた抽出液をエバポレートし、そして得られたスラリーを水およびジクロロメタン（５Ｘ　２５０ｍｆｆ１）中に分配させた。合わせた抽出液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、エバポレートすることにより褐色の油状物質（６７０■）を得た。この油状物質を、ヘキサン／酢酸エチル（１：　１）を含むシリカゲルの短いカラムに通して濾過し２次いでローバーＢ　（Ｌｏｂａｒ　Ｂ）シリカ上のクロマトグラフィーにかけ、溶離剤として２５％の酢酸エチルを含むヘキサン、次いで酢酸エチル／ヘキサン（１：　１）を用いることにより、ルファリエリンＡ　（１２６■）およびルファリエリンＢ（６３■）を得た。

ルファリエリンＡ：油状物質；ＩＲ（ＣＨＣ１３）　３３１０（ｂｒ）、１７８０，１７６２　ｃｍ−慮；ＵＶ　（ＭｅＯＨ）　２３０ｒ＋ｍ　（４８００）　；’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　６０．７０（ｄ、　３Ｈ，Ｊ＝　７ｌ−ｔｚ）、　１．５９（ｓ、　３Ｅｌ）。

１．６８（ｓ、　３Ｂ）、　４．６４（ｓ、　１）１）、　４．８２　（ｓ、　ＩＨ）、　４．８５（ｍ、　ＩＨ）。

５．０９（ｂｒ　ｔ＋　ＩＨ，Ｊ＝　７Ｈｚ）、　５．３４（ｓ、　１８）、　５．７０（ｓ、　ＩＨ）、　６．０８（ｓ、　ＩＨ）；１′３ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ１７２．０／１７１．８（ｓ）、　１６９．０／１６８．３（ｓ）、　１４８．０（ｓ）。

１３７．２／１３７．０（ｓ）、　１３６．７（ｓ）、　１２２．６（ｄ）、　１２０．９／１２０．６（ｄ）。

１１７．８／１１６．７（ｄ）、　１１１．６　（ｔ）、　９８．３／９７．８（ｄ）、　９１．３／９１．Ｈｄ）。

６３．１／６２．３（ｄ）、　５５．０ｓ）、　４１．８（ｄ）、　３９．６／３９．４（ｔ）、　３４．８（ｔ）。

３４．３（ｔ）、３２．４（ｔ）、　３１．０（ｔ）、　２９．４（ｔ）、　２５．９（ｔ）、　２０．７　（ｔ）。

２０．７（ｑ）、　１８．Ｈｑ）、　１６．２（ｑ）；マススペクトルｍ／ｚ　３９８（Ｍ−８２０）。

ルファリエリンＢ：油状物質；ＩＲ（Ｃ）ＩｃＩ：ｌ）　３３５０（ｂｒ）、　１７６２．１６８６　ｃｍ−’ 　；ＵＶ　（ＭｅＯＨ）　２２６ｎｍ（１０，’０００）；’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｈ）　６０．７０（ｄ、　３Ｈ，Ｊ＝　７Ｈｚ）、　１．５５　（ｓ、　３Ｈ）。

９．４０（ｓ、　ＩＨ）　；１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｈ）　６１９５．２（ｄ）、　１７１．２（ｓ）、　１７０．４／ＩＥｊ９．３（ｓ）。

１４８．３／１４８．２（ｓ）、　１４５．７／１４５．６（ｄ）、　１３７．４　（ｓ）、　１２２．２（ｄ）。

１１８．３（ｄ）、　１１７．７（ｔ）、　９８．３／９７．９（ｄ）、　６６．８／６６．３（ｄ）、　５５．１（ｓ）。

４１．９（ｄ）、　３４．８（２Ｃ，ｔ）、　３１．０（ｔ）、　２９．１（ｔ）、　２６．８（ｔ）、　２４．５（ｔ）。

２０．７（ｔ）、　２０．７（ｑ）、１Ｂ、Ｈａ）、１６．３（ｑ）；ＭＳ、　ｔａ／ｚ　３９Ｂ（Ｍ−ｔｈＯ）（以下余白）実ＪｌＩＬマウスの　の−谷症＼テスト化合物およびフォルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ　）を、同時にマウスの左耳の耳介に局所的に塗布する。

右の耳にはＰＭＡのみを塗布する。塗布して３時間２０分後にマウスを殺し、左右の耳を除去し９標準サイズの穴を穿孔する。

浮腫（炎症）を、左耳と右耳との重量の差として測定する。

（Ｖａｎ　Ａｒｍａｎ、　Ｃ，Ｇ、、　Ｃ１１ｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ（１９７４）１６　：　９００−９０４〕。

独立の、同様の実験の結果を以下に示す（＊＝統計学的有意差あり）。

表１の測定では、ＰＭＡは１．５μｇ／耳であった；未処理のマウスの耳の平均重量は９．３■（１００％阻害）であり、ＰＭＡのみで処理した耳の平均重量は２３ｍｇ（０％阻害）である。

高濃度のＰＭＡ　（５，０Ｈｇ／耳）を使用した個別の試験で、マノアジドδ− ラクトンアセテートとマノアリドを比較すると。

どちらも活性であることがわかった（表２）。

マノアリド　３００−０　１７．４６　”別の個別の試験で、デヒドローセコーマノアリドの効果を測定した（ＰＭＡ　＝　１．５μｇ／耳）。

なし　２４．６０用量／応答分析のデータは、マノアリドそれ自身に対するデヒドローセコーマノアリドの相対力価が１．３２であることを示している。

ＰＭＡが１．５■／耳である１個別の同様の試験において、耳の重量の相対的増加をＰＭＡのみ（０，６１８±０．１１３）と比較すると。

ルファリエリンＡおよびＢ（５０Ｈｇ／耳）は統計学的な有意差をもたらした（それぞれ、０．３０８±０．０６５および０．２６２±０．０５３）　；　ＰＭＡのみ（０，９２９±０．２００）と比較すると、５０μｇルファリエロリド（０，２２１±０．０６８）であった。

ス１１津影ホスホリパーゼＡの精製されたハチ毒ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２　）への本発明の化合物の効果を、マノアリドによるこの酵素の阻害と比較した。　ｐＨ７，４、４１’Ｃ，１，３６ｍＭ　ホスファチジルコリン（ジパルミトイル）　、　２．７６ｍＭ　）リドンＸ−１００，および１．０ｍＭ　Ｃａ”。

という標準の分析条件を用いた１つの分析で、ホスホリパーゼＡＸ活性を放射計ｐＨスタットで測定すると２次のような結果が得られた。

標識した基質を用いた別の分析は、以下のとおりである。

標識していないジパルミトイルホスファチジルコリン（１，３６ｍＭ）　、および２．７６ｍＭ　トリトンＸ−１００，１０ｍＭ　トリス、１ｍＭＣａＣ１ｇを、　ｐＨ７，４、４１°Ｃで、　Ｗｈｅａｔｏｎのガラスホモジナイザーとテフロン乳棒を用いて分散させ２次に３０秒間音波処理して、均一な単一分子の基質を調製した。音波処理後に、１−バルミトイル−２（９，１０（ｎ）　’ＩＩ　）バルミトイル−Ｌ−３−ホスファチジルコリンを、標識していないホスファチジルコリンに、最終的な活性が０．５ｄ基質あたり０．０１４μＣｉ　（１２，０００ｃｐｍ）となるように添加した。

酵素を添加する前に、標識した基質の１部０．５戚を、４１°Ｃで１０分間平衡化した。酵素を最終濃度が０．４９５単位／ｄとなるように添加し、続けて加水分解を３０秒間行った。

反応を停止させ、（’ｌ−パルミチン酸を次のように抽り７　：　０．５Ｍ　Ｈ２ＳＯ４，４０：　１０　：　Ｉ　Ｖ／Ｖ／Ｖ）を添加して反応を停止させ、攪拌した。層を分離させるために、４容量（２，０ｉｊりのｎ−へブタンと２容量（１，０ＩｎＱ）のＨ２Ｏを添加し、攪拌した。

層を透明にさせるために、混合液をＩ　Ｅ　Ｃｙ＝床用達心機で２分間低速遠心し；上層のへブタン層１　ｍｌを採り、ｎ−へブタン１　、０　ｍｌで希釈し；　１００〜１５０　ｍｇのシリカゲル６０ＨＲ（メルク）を添加し、攪拌し、８００Ｘｇで５分間遠心してシリカゲルを沈澱させた。ヘプタン上清１．Ｍを採り、ヒドロフルオロシンチレーションカフテール（Ｈｙｄｒｏｆｌｕｏｒ　５ｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎｃｏｃｋｔａｉｌ）　１０成を添加し、パラカードのトリーカーブ液体シンチレーションカウンターでカウントした。

最終カウント数は１通常のバックグランドについて、および〔３Ｈ〕−パルミチン酸とともに抽出されたどの（３Ｈ）　−ＰＣについても補正を行った。コントロールの分析（酵素なし）において、抽出前に（１４ｃ）−パルミチン酸を添加することにより、抽出率を測定した。

ルファリエロリドと０．４９５単位／　ｍｌのハチ毒ＰＬＡ　ＺをｐＨ７，４゜４１℃で用いると５次のような結果が得られた。

災嵐開工Ｃ）ｊＱ　への六チャイニーズハムスターの卵巣に１細胞を、３６°Ｃで９５％空気および５％ＣＯ□の下でデュルベッコの改変イーグル培地で維持した。細胞を３５ｍｍ培養皿に移し、２４時間付着させ、その後薬剤を含有する培地に試験の間中接触させた。最初に薬剤に接触させてから、　２４．４８．および７２時間後に、付着した細胞の数をかぞえた。

成長は、４２μＨルフアリエロリドにより、２４時間で６３％。

４８時間で７４％、そして７２時間で７１％阻害された。

国際調査報告１ｍ″ａ＋″ａｗｌ　Ａｓｓ″””””　Ｄｒ〒＃＋（１１７／ｎｎｍＱｎ

Claims

【特許請求の範囲】

１．次式（１）で表される化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，および塩：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで，Ａは３〜１５個の炭素原子を有する，飽和または不飽和炭化水素基であって，環状部分を含むか，あるいは含まず，そして特に次式で表される基を包含する：▲数式、化学式、表等があります▼Ｒｍおよび▲数式、化学式、表等があります▼Ｒ１および，ＸはＣＨ３，ＣＨ２ＯＨ，ＣＨＯ，またはＣＯＯＨ；点線は単結合，もしくはＥ立体配置またはＺ立体配置のいずれかであり得る二重結合を表す；Ｙは，該点線が単結合の場合は，ＨまたはＯＨであり，該点線が二重結合の場合は存在しない；およびＺはＨまたはＯＨ；および，ＹがＯＨであり，ＸがＣＨＯの場合，式（１）の化合物は，開環した鎖状の形であるか，あるいはこれらの置換基によって形成されるヘミアセタールとして存在し得る；および，ＹがＯＨであり，ＸがＣＯＯＨの場合，式（１）の化合物は，開環した鎖状の形であるか，あるいはこれらの置換基によって形成されるラクトンとして存在し得る；ただし，ＡがＲｍであり，ＸがＣＨＯであり，該点線が単結合を表し，そしてＹがＯＨである場合，ＺはＨでなければならない；さらにまた，ＡがＲｍであり，ＸがＣＨ２ＯＨであり，該点線が単結合であり，そしてＹがＯＨである場合，ＺもＯＨでなければならない。
２．ＡがＲｍである，式（１）の化合物。
３．ＸがＣＯＯＨであり，ＹがＯＨであり，そしてＺがＯＨである請求の範囲第２項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，および塩。
４．マノアリドδ−ラクトンである，請求の範囲第３項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル。
５．マノアリドδ−ラクトンアセテートである，請求の範囲第４項に記載の化合物。
６．ＸがＣＨ３であり，ＹがＨであり，そしてＺがＯＨである請求の範囲第２項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル。
７．ルファリエロリドである請求の範囲第６項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル。
８．ＸがＣＨＯであり，前記点線が二重結合を表し，そしてＺがＯＨである請求の範囲第２項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル。
９．デヒドロ−セコ−マノアリドである請求の範囲第７項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル。
１０．ＡがＲＬである，式（１）の化合物。
１１．ルファリエリンＡまたはルファリエリンＢである請求の範囲第１０項に記載の化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル。
１２．マノアリドジオールの薬学的に容認されるエステルである化合物。
１３．哺乳動物において痛みおよび／または炎症を緩和するための薬剤組成物であって，請求の範囲第１項に記載の化合物，あるいは該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，または塩；もしくはマノアリドジオール，あるいは該マノアリドジオールの薬学的に容認されるエステルまたはジエステル，の薬学的に有効な量を，薬学的に容認される賦形剤との混合物として含有する，薬剤組成物。
１４．哺乳動物において免疫抑制を行うための薬剤組成物であって，次式（１）で表される化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，および塩，の薬学的に有効な量を，薬学的に容認される賦形剤との混合物として含有する，薬剤組成物： ▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで，Ａは３〜１５個の炭素原子を有する，飽和または不飽和炭化水素基であって，環状部分を含むか，あるいは含まず，そして特に次式で表される基を包含する：▲数式、化学式、表等があります▼Ｒｍおよび▲数式、化学式、表等があります▼ＲＬおよび，ＸはＣＨ３，ＣＨ２ＯＨ，ＣＨＯ，またはＣＯＯＨ；点線は単結合，もしくはＥ立体配置またはＺ立体配置のいずれかであり得る二重結合を表す；Ｙは，該点線が単結合の場合は，ＨまたはＯＨであり，該点線が二重結合の場合は存在しない；およびＺはＨまたはＯＨ；および，ＹがＯＨであり，ＸがＣＨＯの場合，式（１）の化合物は，開環した鎖状の形であるか，あるいはこれらの置換基によって形成されるヘミアセタールとして存在し得る；および，ＹがＯＨであり，ＸがＣＯＯＨの場合，式（１）の化合物は，開環した鎖状の形であるか，あるいはこれらの置換基によって形成されるラクトンとして存在し得る。
１５．哺乳動物において抗増殖活性を有する薬剤組成物であって，次式（１）で表される化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，および塩，の薬学的に有効な量を，薬学的に容認される賦形剤との混合物として含有する，薬剤組成物： ▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで，Ａ，Ｘ，Ｙ，およびＺは，請求の範囲第１４項と同じ定義である。
１６．鎮痛活性および／または抗炎症活性を有する薬剤を必要としている，ヒトを含む哺乳動物を治療する方法であって，該哺乳動物に，活性な薬剤として，請求の範囲第１項に記載の化合物，あるいは該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，または塩，もしくはマノアリドジオール，あるいは該マノアリドジオールの薬学的に容認されるエステルまたはジエステル，の鎮痛量および／または抗炎症量；またはこの活性成分の薬剤組成物を投与することを包含する，治療方法。
１７．免疫抑制活性を有する薬剤を必要としている，ヒトを含む哺乳動物を治療する方法であって，次式（１）で表される化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，および塩，の免疫抑制量；またはこの活性成分の薬剤組成物を投与することを包含する，治療方法： ▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで，Ａ，Ｘ，Ｙ，およびＺは，請求の範囲第１４項と同じ定義である。
１８．抗増殖活性を有する薬剤を必要としている，ヒトを含む哺乳動物を治療する方法であって，該哺乳動物に，次式（１）で表される化合物，および該化合物の薬学的に容認されるエステル，アミド，および塩，の抗増殖量；またはこの活性成分の薬剤組成物を投与することを包含する，治療方法： ▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで，Ａ，Ｘ，Ｙ，およびＺは，請求の範囲第１４項と同じ定義である。