JPS6342520B2 - - Google Patents
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Landscapes
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Description
産業上の利用分野
本発明はβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（以下β−
Galと略す）定量用組成物および該組成物を用い
るβ−Galの定量方法に関する。
従来技術および本発明が解決せんとする問題点
β−Galは乳糖をガラクトースとグルコースに
加水分解する酵素でラクターゼ欠損症の治療に有
効であり、また最近では酵素免疫定量法（以下
EIA法と略す）における標識用酵素としても注目
されている。
Ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトピラノ
サイド（以下ONPGと略す）はβ−Galの合成基
質である。
β−Galの定量は基質ONPGにβ−Galを作用
せしめて遊離するＯ−ニトロフエノールの黄色を
比色することにより行われる。
しかし、基質ONPGの水性溶液は容易に非酵
素的加水分解を受けて黄色を呈する。このような
既に黄色を呈したONPG溶液は、いわゆるブラ
ンク値が高いので、β−Galの定量に使用できな
い。そこで従来は、黄色を呈した基質ONPG溶
液は廃棄し、新しく調製し直すことが行われてい
たにすぎず、その安定化について考慮されたこと
はない。
またβ−Galを感度よく効率的に定量するため
にはβ−Galの活性を賦活することが望まれる。
β−Gal活性の賦活化についての報告は散見され
るが、その賦活化の程度は決して十分なものとは
いえない。殊に基質の安定化と関連づけてβ−
Gal活性の賦活化について検討されたことはな
い。
Biochem.Biophy.Acta、403、131〜138（1975）
には、エチレングリコールと構造類似なβ−メル
カプトエタノールの存在下にβ−Galを定量する
ことが報告されている。しかし、β−メルカプト
エタノールは、十分なβ−Gal活性賦活作用を持
たず、ときとして基質ONPGの分解を促進し、
しかも悪臭を発するのでβ−Gal活性賦活剤とし
ての価値は全くない。
また、Biochem.Biophy.Res.Comm.、18（５
−６）725〜734（1965）には、メタノール、ｎ−
プロパノール、プロピレングリコール、グリセロ
ールなどのアルコール類によるβ−Gal活性賦活
作用について報告されている（但し、エチレング
リコールについては言及されていない）。
しかし、これらのアルコール類をβ−Gal活性
賦活剤として用いることは決して有利なことでは
ない。例えばメタノールは、その毒性を考えれば
用手法に不向きである。またその極性溶媒として
の性質ならびにその沸点からすればポリエチレン
チユーブに損傷を与えかねないし、火災の恐れも
あるので高濃度のメタノール溶液は自動分析機器
に適用しにくい。しかも後述のようにメタノール
のβ−Gal活性賦活作用は強いけれどもエチレン
グリコールよりも劣り、なおかつメタノールの基
質ONPG安定化有効濃度範囲はエチレングリコ
ールの場合よりもはるかに狭い。また、ｎ−プロ
パノール、プロピレングリコール、グリセロール
は、β−Gal活性賦活作用ならびにその基質
ONPG安定化有効濃度範囲の広さのいずれにお
いてもエチレングリコールの場合よりも明らかに
劣る。またグリセロールは粘稠なので正確なピペ
ツテングができない。
本発明者らは、このような先行技術を考慮しな
がら種々検討した結果β−Gal活性賦活作用が極
めて強く、しかも広い濃度範囲で優れた基質
ONPG安定化作用を有するとともにβ−Galの定
量に不都合な性質を持たないものとしてエチレン
グリコールを選択することに成功し本発明を完成
した。
発明の構成
本発明は、少なくとも基質ONPGおよびエチ
レングリコールからなるβ−Gal定量用組成物な
らびに該組成物を用いるβ−Galの定量方法に関
する。
本発明の定量用組成物は50℃で２日間放置して
も、室温で３ケ月放置しても黄色を呈することは
ほとんどない。
本発明の定量用組成物はエチレングリコールと
基質ONPGを含有する溶液である。ここにおけ
るエチレングリコールの濃度は極めて広範囲、例
えば５〜100％（Ｖ／Ｖ）の範囲から選択される。
いずれのエチレングリコール濃度でも基質
ONPGの安定化効果は優れているが、特に高濃
度側で優れている。更に本発明の定量用組成物に
はCaイオンの如き２価の金属イオンやNaN3の如
き防腐剤を更に含有せしめてもよい。本発明の定
量用組成物はβ−Galの定量を行うまでの間
Stock−Solutionとして保存される。なお、一般
にStock−Solution中の基質ONPG濃度は0.5〜
1.0％（Ｗ／Ｖ）の範囲内から選択される。
本発明の定量法はβ−Gal活性が十分賦活され
た状態で行われる。第１図に示すようにβ−Gal
の賦活化はエチレングリコール濃度が約６〜７％
（Ｖ／Ｖ）であるとき最高に達する。従つて、本
発明によるβ−Galの定量は、約２〜15％（Ｖ／
Ｖ）、好ましくは約４〜８％、特に好ましくは約
６〜７％のエチレングリコールの存在下に行われ
る。本発明の定量法は、本発明の定量用組成物の
必要量をβ−Gal溶液（検体）に添加し一定時間
一定温度で温置した後アルカリ性緩衝溶液を加え
て酵素反応を停止し、遊離したＯ−ニトロフエノ
ールに基づく黄色の吸光度（410nｍ）を比色す
ることにより実施できる。基質ONPGの定量系
への添加量は従来から行われている定量法の場合
に準じて決定されるが、最終濃度として0.08〜
0.17％（Ｗ／Ｖ）が一般的である。本発明の定量
法はエチレングリコール無添加の従来法に比らべ
て約２〜３倍の感度を有する。
β−Galは、最近EIA法における酵素標識抗原
の標識剤として注目されているが、本発明の定量
法はこのような修飾されたβ−Galの定量にも有
用である。なお、酵素標識抗原はβ−Galの如き
酵素とインスリンの如き抗原とを結合させたもの
である。EIA法はこのような酵素標識抗原の高い
酵素比活性と抗体の有する特異的抗原結合能力と
を組み合せた抗原の超微量定量法である。
具体例
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明す
る。
実施例 １
β−Gal活性の賦活化
0.04Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）−0.9％
（Ｗ／Ｖ）NaCl−β−Gal溶液の0.4mlに種々濃度
（Ｖ／Ｖ）のエチレングリコールまたは比較対照
アルコール類すなわちメタノール、ｎ−プロパノ
ール、プロピレングリコール、グリセロールまた
はβ−メルカプトエタノール）を加え、更に0.8
％（Ｗ／Ｖ）基質ONPG水溶液0.1mlを添加し45
℃で10分間温置する。次に0.1Mリン酸カリウム
緩衝液（PH11.6）2.5mlを加えて反応を停止し、
遊離するＯ−ニトロフエノールの黄色を410nｍ
で比色してβ−Galの相対活性を測定し第１図の
結果を得た。
第１図に示すようにβ−Gal活性はエチレング
リコールの添加により2.5〜3.5倍も賦活化され、
この際のエチレングリコールの最終最適濃度
（Ｖ／Ｖ）は２〜15％、好ましくは４〜８％、特
に好ましくは６〜７％である。比較対照アルコー
ル類のなかにはβ−Gal活性賦活作用の強いもの
もあるが、エチレングリコールよりも明らかに劣
る。
実施例 ２
基質ONPGの安定化
種々濃度（Ｖ／Ｖ）のエチレングリコールまた
は比較対照アルコール類（すなわちメタノール、
ｎ−プロパノール、プロピレングリコールまたは
グリセロール）を含有する水溶液に基質ONPG
を0.8％（Ｗ／Ｖ）となるように溶解し、その一
部について呈色の度合（初発吸光度OD410）を測
定する。溶液を50℃で２日間温置し、その吸光度
（OD410）を測定し、初発吸光度との差（△
OD410）から下記の定義する安定化率（以下同
様）を計算し第２図の結果を得た。なお、対照と
して0.8％（ｗ／ｖ）基質ONPG水溶液（エチレ
ングリコールまたはアルコール類不含）を用い
た。
安定化率＝ａ−ｂ／ａX100
ａ：対照の△OD410
ｂ：エチレングリコールまたは各アルコール類を
含有する場合の△OD412
第２図に示すように基質ONPGの安定化に必
要なエチレングリコールの濃度（Ｖ／Ｖ）は５〜
100％であり、対照のアルコール類よりも遥かに
広い濃度範囲で安定化が図れる。
実施例 ３
作用の持続性
0.8％（Ｗ／Ｖ）ONPG−40％（Ｖ／Ｖ）エチ
レングリコール水溶液を調製する。この溶液の初
発吸光度を測定するとともに、この溶液を用いて
標準検体中のβ−Gal活性を測定する。この溶液
を−20℃、４℃および室温（20〜25℃）で放置す
る。60日および90日後の溶液自身の吸光度を測定
するとともに、放置した溶液を用いて前と同一の
検体中のβ−Gal活性を測定する。なお、対照と
して0.8％（Ｗ／Ｖ）ONPG水溶液を用いた。結
果を次表に示す。
Industrial Application Field The present invention relates to β-D-galactosidase (hereinafter referred to as β-galactosidase).
The present invention relates to a quantitative composition (abbreviated as Gal) and a method for quantifying β-Gal using the composition. Prior Art and Problems to be Solved by the Present Invention β-Gal is an enzyme that hydrolyzes lactose into galactose and glucose, and is effective in the treatment of lactase deficiency.
It is also attracting attention as a labeling enzyme in the EIA method. O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (hereinafter abbreviated as ONPG) is a synthetic substrate for β-Gal. Quantification of β-Gal is carried out by colorimetrically comparing the yellow color of O-nitrophenol released when β-Gal acts on the substrate ONPG. However, an aqueous solution of the substrate ONPG easily undergoes non-enzymatic hydrolysis, resulting in a yellow color. Such an ONPG solution, which already has a yellow color, has a high so-called blank value and cannot be used for the determination of β-Gal. Therefore, in the past, the substrate ONPG solution that turned yellow was simply discarded and freshly prepared, and its stabilization was never considered. Furthermore, in order to efficiently quantify β-Gal with high sensitivity, it is desirable to activate the activity of β-Gal.
Although there are some reports on activation of β-Gal activity, the degree of activation cannot be said to be sufficient. β-
Activation of Gal activity has never been investigated. Biochem.Biophy.Acta, 403 , 131–138 (1975)
reported that β-Gal could be quantified in the presence of β-mercaptoethanol, which has a similar structure to ethylene glycol. However, β-mercaptoethanol does not have a sufficient β-Gal activation effect and sometimes promotes the decomposition of the substrate ONPG.
Moreover, it emits a bad odor, so it has no value at all as a β-Gal activity activator. Also, Biochem.Biophy.Res.Comm., 18 (5
-6) 725-734 (1965) includes methanol, n-
It has been reported that alcohols such as propanol, propylene glycol, and glycerol act to enhance β-Gal activity (however, ethylene glycol is not mentioned). However, it is by no means advantageous to use these alcohols as β-Gal activity activators. For example, methanol is unsuitable for use due to its toxicity. Furthermore, due to its polar nature and boiling point, it may damage the polyethylene tube and may cause a fire, making it difficult to apply highly concentrated methanol solutions to automatic analytical instruments. Furthermore, as will be described later, although methanol has a strong β-Gal activation effect, it is inferior to that of ethylene glycol, and the effective concentration range of methanol for stabilizing the substrate ONPG is much narrower than that of ethylene glycol. In addition, n-propanol, propylene glycol, and glycerol have β-Gal activation activity and its substrate.
It is clearly inferior to ethylene glycol in terms of the breadth of the effective concentration range for ONPG stabilization. Also, glycerol is viscous and cannot be pipetted accurately. As a result of various studies taking into consideration such prior art, the present inventors have found a substrate that has an extremely strong β-Gal activation effect and is excellent over a wide concentration range.
The present invention was completed by successfully selecting ethylene glycol, which has an ONPG stabilizing effect and does not have properties that are inconvenient for quantifying β-Gal. Structure of the Invention The present invention relates to a composition for quantifying β-Gal comprising at least a substrate ONPG and ethylene glycol, and a method for quantifying β-Gal using the composition. The quantitative composition of the present invention hardly exhibits yellow color even if it is left at 50° C. for 2 days or at room temperature for 3 months. The quantitative composition of the present invention is a solution containing ethylene glycol and the substrate ONPG. The concentration of ethylene glycol here is selected from a very wide range, for example from 5 to 100% (V/V).
Substrate at any ethylene glycol concentration
The stabilizing effect of ONPG is excellent, especially at high concentrations. Furthermore, the quantitative composition of the present invention may further contain divalent metal ions such as Ca ions and preservatives such as NaN 3 . The composition for quantitative determination of the present invention is used until the quantitative determination of β-Gal.
Saved as Stock-Solution. Generally, the substrate ONPG concentration in Stock-Solution is 0.5~
Selected from within the range of 1.0% (W/V). The quantitative method of the present invention is carried out in a state where β-Gal activity is sufficiently activated. As shown in Figure 1, β-Gal
The activation of ethylene glycol concentration is about 6-7%.
It reaches its maximum when (V/V). Therefore, the quantification of β-Gal according to the present invention is approximately 2-15% (V/
V), preferably in the presence of about 4 to 8%, particularly preferably about 6 to 7%, of ethylene glycol. The quantitative method of the present invention involves adding the required amount of the quantitative composition of the present invention to a β-Gal solution (sample), incubating it at a constant temperature for a certain period of time, and then adding an alkaline buffer solution to stop the enzyme reaction. This can be carried out by colorimetrically measuring the yellow absorbance (410 nm) based on O-nitrophenol. The amount of substrate ONPG added to the quantitative system is determined according to the conventional quantitative method, but the final concentration is 0.08~
0.17% (W/V) is common. The quantitative method of the present invention has a sensitivity about 2 to 3 times that of the conventional method without the addition of ethylene glycol. β-Gal has recently attracted attention as a labeling agent for enzyme-labeled antigens in EIA methods, and the quantitative method of the present invention is also useful for quantifying such modified β-Gal. Note that the enzyme-labeled antigen is a combination of an enzyme such as β-Gal and an antigen such as insulin. The EIA method is an ultra-microquantitative method for antigens that combines the high specific enzyme activity of enzyme-labeled antigens and the specific antigen-binding ability of antibodies. Specific Examples Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples. Example 1 Activation of β-Gal activity 0.04M sodium phosphate buffer (PH7.0) - 0.9%
Add various concentrations (V/V) of ethylene glycol or control alcohols (methanol, n-propanol, propylene glycol, glycerol or β-mercaptoethanol) to 0.4 ml of (W/V) NaCl-β-Gal solution; Further 0.8
% (W/V) substrate ONPG aqueous solution was added 45
Incubate for 10 minutes at °C. Next, add 2.5ml of 0.1M potassium phosphate buffer (PH11.6) to stop the reaction.
The yellow color of O-nitrophenol released at 410 nm
The relative activity of β-Gal was measured by color comparison, and the results shown in FIG. 1 were obtained. As shown in Figure 1, β-Gal activity was activated by 2.5 to 3.5 times by the addition of ethylene glycol.
The final optimum concentration (V/V) of ethylene glycol in this case is 2 to 15%, preferably 4 to 8%, particularly preferably 6 to 7%. Some comparative alcohols have strong β-Gal activation activity, but they are clearly inferior to ethylene glycol. Example 2 Stabilization of the Substrate ONPG Various concentrations (V/V) of ethylene glycol or control alcohols (i.e. methanol,
Substrate ONPG in an aqueous solution containing n-propanol, propylene glycol or glycerol)
is dissolved to a concentration of 0.8% (W/V), and the degree of coloration (initial absorbance OD 410 ) of a portion of the solution is measured. The solution was incubated at 50℃ for 2 days, its absorbance ( OD410 ) was measured, and the difference from the initial absorbance (△
The stabilization rate defined below (the same applies hereinafter) was calculated from OD 410 ), and the results shown in FIG. 2 were obtained. As a control, a 0.8% (w/v) substrate ONPG aqueous solution (not containing ethylene glycol or alcohol) was used. Stabilization rate = a - b / a Concentration (V/V) is 5~
100%, and can be stabilized over a much wider concentration range than the control alcohols. Example 3 Sustainability of action A 0.8% (W/V) ONPG-40% (V/V) ethylene glycol aqueous solution is prepared. The initial absorbance of this solution is measured, and the β-Gal activity in the standard sample is measured using this solution. The solution is left at -20°C, 4°C and room temperature (20-25°C). After 60 and 90 days, the absorbance of the solution itself is measured, and the β-Gal activity in the same sample as before is measured using the solution that has been left to stand. Note that a 0.8% (W/V) ONPG aqueous solution was used as a control. The results are shown in the table below.
【表】
前表から明らかなようにエチレングリコールの
基質ONPG安定化作用ならびにβ−Gal活性賦活
化作用（相対活性）は20〜25℃（室温）で少なく
とも90日間は持続する。
実施例 ４
β−Galの定量
エチレングリコール添加系
試薬１
0.04Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH7.00）−
0.9％（Ｗ／Ｖ）NaCl
試薬２
１ｍMMgCl2−0.8％（Ｗ／Ｖ）ONPG−
40％（Ｖ／Ｖ）エチレングリコール水溶液
試薬３
0.1Mリン酸カリウム−NaOH緩衝液（PH11.6）
倍数希釈した0.1mlのβ−Gal溶液（検体）と
0.4mlの試薬１とを混和し37℃で温置する。５分
後0.1mlの試薬２を加え更に同温度で10分間温置
し2.5mlの試薬３を加えて反応を停止し吸光度
（OD410）を測定する。
エチレングリコール無添加系
エチレングリコールを含まない試薬２を用いる
ほかは前記と同様にした。
次表にその結果を示めす。[Table] As is clear from the above table, the substrate ONPG stabilizing effect and β-Gal activity activating effect (relative activity) of ethylene glycol persist for at least 90 days at 20 to 25°C (room temperature). Example 4 Determination of β-Gal Ethylene glycol addition system Reagent 1 0.04M sodium phosphate buffer (PH7.00) - 0.9% (W/V) NaCl Reagent 2 1mM MgCl 2 -0.8% (W/V) ONPG- 40 % (V/V) Ethylene glycol aqueous solution reagent 3 0.1M potassium phosphate-NaOH buffer (PH11.6) 0.1ml of diluted β-Gal solution (sample)
Mix with 0.4 ml of Reagent 1 and incubate at 37°C. After 5 minutes, 0.1 ml of Reagent 2 is added, and the mixture is further incubated at the same temperature for 10 minutes, and 2.5 ml of Reagent 3 is added to stop the reaction, and the absorbance (OD 410 ) is measured. Ethylene glycol-free system The same procedure as above was used except that Reagent 2, which does not contain ethylene glycol, was used. The results are shown in the table below.
【表】
前表から明らかなようにエチレングリコール添
加系は無添加系の約３倍の感度を有する。無添加
系では希釈率が1/8での定量は不可能である。
実施例 ５
EIAへの応用
本実施例は、β−Galを標識用酵素とするEIA
法によりウシインスリンを定量する場合に本発明
方法を応用したものである。
試薬Ａ
倍数希釈されたウシインスリン溶液（検体；非
標識抗原）
試薬Ｂ
J.Biocheam.79、233（1976）に開示された方法
により調製したβ−Galとウシインスリンとの結
合物（酵素標識抗原）を含有する溶液
試薬Ｃ
米国特許第4166767号に開示された方法に準じ
で調製したラクトバチルス プランタラムATCC
−8014の細胞壁片と抗ウシインスリン モルモツ
ト抗体との結合物（不溶性抗体）の分散溶液
試験管に0.1mlの試薬Ａ、0.5mlの試薬Ｂおよび
0.2mlの試薬Ｃを添加し５℃で15時間放置して競
合的抗原抗体反応に付した後、抗原抗体複合物
（沈殿）を遠心分離（2000×ｇ、10分）する。次
いで沈殿中のβ−Gal活性を、実施例４と同様に
エチレングリコール添加系ならびに無添加系で測
定し次の結果を得た。[Table] As is clear from the above table, the ethylene glycol-added system has about three times the sensitivity of the non-additive system. Quantification at a dilution rate of 1/8 is impossible in an additive-free system. Example 5 Application to EIA This example describes EIA using β-Gal as the labeling enzyme.
The method of the present invention is applied to quantify bovine insulin by the method. Reagent A A multiple-diluted bovine insulin solution (sample; unlabeled antigen) Reagent B A conjugate of β-Gal and bovine insulin (enzyme-labeled antigen) prepared by the method disclosed in J.Biocheam. 79 , 233 (1976) ) Lactobacillus plantarum ATCC prepared according to the method disclosed in U.S. Pat. No. 4,166,767
A dispersion solution of a conjugate (insoluble antibody) of -8014 cell wall fragments and anti-bovine insulin guinea pig antibody In a test tube, 0.1 ml of reagent A, 0.5 ml of reagent B and
After adding 0.2 ml of Reagent C and allowing the mixture to stand at 5°C for 15 hours for competitive antigen-antibody reaction, the antigen-antibody complex (precipitate) is centrifuged (2000 x g, 10 minutes). Next, the β-Gal activity in the precipitate was measured in the same manner as in Example 4, with and without the addition of ethylene glycol, and the following results were obtained.
【表】
前表から明らかなように本発明を利用したEIA
法はエチレングリコール無添加系の約２倍の感度
を有する。[Table] As is clear from the previous table, EIA using the present invention
The method is approximately twice as sensitive as the ethylene glycol-free system.
第１図はアルコール類によるβ−Galの活性賦
活作用を、第２図はアルコール類による基質
ONPGの安定化作用をそれぞれ示す。なお第１
図における横軸は対数目盛である。
Figure 1 shows the activation of β-Gal by alcohols, and Figure 2 shows the activation of β-Gal by alcohols.
Each shows the stabilizing effect of ONPG. Note that the first
The horizontal axis in the figure is on a logarithmic scale.
Claims (1)
ラクトピラノサイドおよびエチレングリコールか
らなるβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ定量用組成物。 ２ ５〜100％（Ｖ／Ｖ）濃度のエチレングリコ
ールにＯ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノサイドを溶解してなる特許請求の範囲第１項
記載の組成物。 ３ Ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトピラ
ノサイドにβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを作用せし
めて遊離するＯ−ニトロフエノールの黄色を比色
することからなるβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの定
量法において、Ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノサイドとエチレングリコールとを含
有する溶液を定量系に添加することを特徴とする
β−Ｄ−ガラクトシダーゼの定量方法。 ４ ５〜100％（Ｖ／Ｖ）濃度のエチレングリコ
ールにＯ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノサイドを溶解せしめた溶液を該エチレングリ
コール濃度が２〜15％となるように定量系に添加
する特許請求の範囲第３項記載の定量方法。 ５ 35〜60％（Ｖ／Ｖ）濃度のエチレングリコー
ル水溶液にＯ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラク
トピラノサイドを0.5〜1.0％（Ｗ／Ｖ）溶解せし
めた溶液を定量系に該エチレングリコール濃度が
４〜８％であり、かつＯ−ニトロフエニル−β−
Ｄ−ガラクトピラノサイド濃度が0.08〜0.17％
（Ｗ／Ｖ）となるように添加する特許請求の範囲
第３項記載の定量方法。[Scope of Claims] 1. A β-D-galactosidase quantitative composition comprising at least O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside and ethylene glycol. 2. The composition according to claim 1, wherein O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside is dissolved in ethylene glycol at a concentration of 5 to 100% (V/V). 3 In a method for quantifying β-D-galactosidase, which involves colorimetrically measuring the yellow color of O-nitrophenol released by allowing β-D-galactosidase to act on O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside, O- 1. A method for quantifying β-D-galactosidase, which comprises adding a solution containing nitrophenyl-β-D-galactopyranoside and ethylene glycol to a quantitative system. 4 Add a solution of O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside dissolved in ethylene glycol at a concentration of 5 to 100% (V/V) to the quantitative system so that the concentration of ethylene glycol is 2 to 15%. The quantitative method according to claim 3. 5 A solution of 0.5 to 1.0% (W/V) O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside dissolved in an ethylene glycol aqueous solution with a concentration of 35 to 60% (V/V) was added to the quantitative system to measure the ethylene glycol concentration. is 4 to 8%, and O-nitrophenyl-β-
D-galactopyranoside concentration 0.08-0.17%
(W/V).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4591279A JPS55138399A (en) | 1979-04-13 | 1979-04-13 | Composition for determining beta-d-galactosidase and method thereof |
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|---|---|
| JPS55138399A JPS55138399A (en) | 1980-10-29 |
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52134087A (en) * | 1976-03-17 | 1977-11-09 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid coenzyme composition |
| JPS5352685A (en) * | 1976-09-13 | 1978-05-13 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid enzyme and coenzyme composition and production thereof |
-
1979
- 1979-04-13 JP JP4591279A patent/JPS55138399A/en active Granted
Patent Citations (2)
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| JPS5352685A (en) * | 1976-09-13 | 1978-05-13 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid enzyme and coenzyme composition and production thereof |
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