JPS6330579B2 - - Google Patents
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- JPS6330579B2 JPS6330579B2 JP56158629A JP15862981A JPS6330579B2 JP S6330579 B2 JPS6330579 B2 JP S6330579B2 JP 56158629 A JP56158629 A JP 56158629A JP 15862981 A JP15862981 A JP 15862981A JP S6330579 B2 JPS6330579 B2 JP S6330579B2
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- G01N33/6812—Assays for specific amino acids
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- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Description
本発明は先天性アミノ酸代謝異常症の一種であ
るヒスチジン血症診断用の標準血液紙に関す
る。さらに詳しくは、長期保存に耐える、血中ヒ
スチジン濃度測定用標準血液紙に関する。 フエニルケトン尿症、ヒスチジン血症、高メチ
オニン血症等の先天性アミノ酸代謝異常症は、見
過せば精神薄弱、肝硬変等悲惨な病状に発展する
恐しい病気であるが、近年、乳児期の早期に発見
し、食餌療法等適切な治療を施せば、患者の一生
を救うことができるようになつた。 しかしこのためには、出産後1週間以内に新生
児の血中アミノ酸濃度を測定し、異常高濃度を発
見する簡便なスクリーニング検査法の開発が切望
されている。この目的に現在最も多く使用されて
いる検査法はガスリー法
(Guthries′ Bioinhibition Assay)であり、その
原理は、枯草菌の発育に必要なアミノ酸に対する
代謝阻害剤を適当量含んだ寒天培地中で枯草菌を
培養すると菌のアミノ酸代謝がおさえられ殆んど
発育しないが、この寒天培地の上に血液を浸み込
ませた紙片を置いて培養すると、菌は血液中の
アミノ酸を利用して発育し、含まれているアミノ
酸量に対応した枯草菌の発育円を生ずる。これを
既知量のアミノ酸を含む血液を浸み込ませた紙
片(標準血液紙)により生ずる発育円の大きさ
と比較して、目的とするアミノ酸の濃度を半定量
するものである。さらに具体的な手法および測定
条件については「臨床病理24(12)962〜973,1976」
に詳しい。 本法において再現性の高い、安定した測定結果
を得るためには、表示通りのアミノ酸量が経時的
に安定して含有されている、長時間保存可能な標
準血液紙を対照として使用することが必須要件
であるが、従来の血中ヒスチジン測定用標準血液
紙は含有されるヒスチジンが、保存中に速かに
変性を受けるため、−20℃で保存しても、製造後
3ケ月以上経過した製品は、未使用のまま廃棄せ
ざるを得ないという欠点を有し、実用上大きな障
害となつていた。 本発明の目的は、これら実用上の問題点を解決
し、長期保存に耐える新規な、ヒスチジン測定用
標準血液紙を提供することにある。 本発明者らは、かかる目的を達成すべく、種々
研究の結果、亜ニチオン酸塩(Dithionite),二
亜硫酸塩(Disulfite),亜硫酸水素塩
(Bisulfihe)のごとき塩類が、血中ヒスチジン量
の指標となる枯草菌の生育に何ら影響を与えず、
乾燥血中のヒスチジンの変性を有効に防止し得る
ことを知り、本発明を完成した。 本発明に使用し得る、塩類としては、亜二チオ
ン酸塩,二亜硫酸塩,亜硫酸水素塩があげられ、
これら塩類の陽イオンとしてはナトリウムまたは
カリウムが好ましい。 本発明にかかる標準血液紙の調製は、以下の
要領で行われる。まづ原料として、健常人の廃血
を用い、これに上記塩類を最終濃度10mM乃至
50mM、好ましくは15mM乃至25mMとなるよう
に添加溶解する。次いでL―ヒスチジンをそれぞ
れ種類に応じ、最終濃度2mg/dl,4mg/dl,6
mg/dl,8mg/dl,10mg/dl,12mg/dl,16mg/
dl,20mg/dlとなるように添加溶解する。全体を
ゆるく撹拌した後、室温で2時間静置し、添加し
た前記塩類およびL―ヒスチジンの拡散による原
料血液の均一化をはかる。これを特別に作られた
市販のPKU用紙に滴下し、直径11mmに浸み込
ませ風乾し、これを標準血液紙とする。検査者
は、被験血液中にL―ヒスチジン測定時に、適当
なデイスクパンチヤーを用い、直径3mmの血液
紙片を打抜き、ガスリー法の対照として用いる。 このようにして調製した標準血液紙は、従来
品と異なり、−20℃で1年以上、(4℃で6ケ月以
上)の保存に耐える。すなわちこの期間内であれ
ば枯草菌の生育、血液の色調等、ガスリー法によ
るヒスチジン濃度判定のための諸要因には、何ら
悪影響を与えず、表示されたL―ヒスチジン濃度
に対応する生育円を与える。 先ず本発明品の範囲とする保存剤と他の保存剤
との、原料血液と枯草菌の生育に及ぼす影響と、
影響を与えない添加量におけるL―ヒスチジンの
安定性に及ぼす効果の優劣を比較し、第1表に示
す。
るヒスチジン血症診断用の標準血液紙に関す
る。さらに詳しくは、長期保存に耐える、血中ヒ
スチジン濃度測定用標準血液紙に関する。 フエニルケトン尿症、ヒスチジン血症、高メチ
オニン血症等の先天性アミノ酸代謝異常症は、見
過せば精神薄弱、肝硬変等悲惨な病状に発展する
恐しい病気であるが、近年、乳児期の早期に発見
し、食餌療法等適切な治療を施せば、患者の一生
を救うことができるようになつた。 しかしこのためには、出産後1週間以内に新生
児の血中アミノ酸濃度を測定し、異常高濃度を発
見する簡便なスクリーニング検査法の開発が切望
されている。この目的に現在最も多く使用されて
いる検査法はガスリー法
(Guthries′ Bioinhibition Assay)であり、その
原理は、枯草菌の発育に必要なアミノ酸に対する
代謝阻害剤を適当量含んだ寒天培地中で枯草菌を
培養すると菌のアミノ酸代謝がおさえられ殆んど
発育しないが、この寒天培地の上に血液を浸み込
ませた紙片を置いて培養すると、菌は血液中の
アミノ酸を利用して発育し、含まれているアミノ
酸量に対応した枯草菌の発育円を生ずる。これを
既知量のアミノ酸を含む血液を浸み込ませた紙
片(標準血液紙)により生ずる発育円の大きさ
と比較して、目的とするアミノ酸の濃度を半定量
するものである。さらに具体的な手法および測定
条件については「臨床病理24(12)962〜973,1976」
に詳しい。 本法において再現性の高い、安定した測定結果
を得るためには、表示通りのアミノ酸量が経時的
に安定して含有されている、長時間保存可能な標
準血液紙を対照として使用することが必須要件
であるが、従来の血中ヒスチジン測定用標準血液
紙は含有されるヒスチジンが、保存中に速かに
変性を受けるため、−20℃で保存しても、製造後
3ケ月以上経過した製品は、未使用のまま廃棄せ
ざるを得ないという欠点を有し、実用上大きな障
害となつていた。 本発明の目的は、これら実用上の問題点を解決
し、長期保存に耐える新規な、ヒスチジン測定用
標準血液紙を提供することにある。 本発明者らは、かかる目的を達成すべく、種々
研究の結果、亜ニチオン酸塩(Dithionite),二
亜硫酸塩(Disulfite),亜硫酸水素塩
(Bisulfihe)のごとき塩類が、血中ヒスチジン量
の指標となる枯草菌の生育に何ら影響を与えず、
乾燥血中のヒスチジンの変性を有効に防止し得る
ことを知り、本発明を完成した。 本発明に使用し得る、塩類としては、亜二チオ
ン酸塩,二亜硫酸塩,亜硫酸水素塩があげられ、
これら塩類の陽イオンとしてはナトリウムまたは
カリウムが好ましい。 本発明にかかる標準血液紙の調製は、以下の
要領で行われる。まづ原料として、健常人の廃血
を用い、これに上記塩類を最終濃度10mM乃至
50mM、好ましくは15mM乃至25mMとなるよう
に添加溶解する。次いでL―ヒスチジンをそれぞ
れ種類に応じ、最終濃度2mg/dl,4mg/dl,6
mg/dl,8mg/dl,10mg/dl,12mg/dl,16mg/
dl,20mg/dlとなるように添加溶解する。全体を
ゆるく撹拌した後、室温で2時間静置し、添加し
た前記塩類およびL―ヒスチジンの拡散による原
料血液の均一化をはかる。これを特別に作られた
市販のPKU用紙に滴下し、直径11mmに浸み込
ませ風乾し、これを標準血液紙とする。検査者
は、被験血液中にL―ヒスチジン測定時に、適当
なデイスクパンチヤーを用い、直径3mmの血液
紙片を打抜き、ガスリー法の対照として用いる。 このようにして調製した標準血液紙は、従来
品と異なり、−20℃で1年以上、(4℃で6ケ月以
上)の保存に耐える。すなわちこの期間内であれ
ば枯草菌の生育、血液の色調等、ガスリー法によ
るヒスチジン濃度判定のための諸要因には、何ら
悪影響を与えず、表示されたL―ヒスチジン濃度
に対応する生育円を与える。 先ず本発明品の範囲とする保存剤と他の保存剤
との、原料血液と枯草菌の生育に及ぼす影響と、
影響を与えない添加量におけるL―ヒスチジンの
安定性に及ぼす効果の優劣を比較し、第1表に示
す。
【表】
【表】
すなわち、第1表において原料血液を凝固する
ものは血液が紙上に均一に吸収されず、本発明
の目的を達成しない。又、ガスリー法による枯草
菌生育状態の比較観察に際し、標準血液紙の血
液の色調が、被験血液と著しく異るもの、また、
枯草菌の生育に阻止円の生ずるものは、判定結果
に重大な誤りを与える恐れがあり、実用上好まし
くない。 ヒスチジンを安定化する効果が認められても枯
草菌の生育自体を阻害し、又は、ヒスチジン濃度
に対応しない生育を与える保存剤も、使用に耐え
ないものであることは論をまたない。 以上の考察より第1表で検討された保存剤のう
ち、本発明の目的に合致するものは、亜二チオン
酸塩,二亜硫酸塩および亜硫酸水素塩のみであ
る。 ついで、これらの保存剤を添加し調製した、標
準血液紙中のL―ヒスチジン安定性について、
37℃苛酷試験により検討した結果を第2表にまと
める。なお同表中、残存L―ヒスチジンの定量は
乳酸菌によるバイオアツセイ(Bio assay)によ
つた。
ものは血液が紙上に均一に吸収されず、本発明
の目的を達成しない。又、ガスリー法による枯草
菌生育状態の比較観察に際し、標準血液紙の血
液の色調が、被験血液と著しく異るもの、また、
枯草菌の生育に阻止円の生ずるものは、判定結果
に重大な誤りを与える恐れがあり、実用上好まし
くない。 ヒスチジンを安定化する効果が認められても枯
草菌の生育自体を阻害し、又は、ヒスチジン濃度
に対応しない生育を与える保存剤も、使用に耐え
ないものであることは論をまたない。 以上の考察より第1表で検討された保存剤のう
ち、本発明の目的に合致するものは、亜二チオン
酸塩,二亜硫酸塩および亜硫酸水素塩のみであ
る。 ついで、これらの保存剤を添加し調製した、標
準血液紙中のL―ヒスチジン安定性について、
37℃苛酷試験により検討した結果を第2表にまと
める。なお同表中、残存L―ヒスチジンの定量は
乳酸菌によるバイオアツセイ(Bio assay)によ
つた。
【表】
37℃苛酷試験において、14日間経過後なお80%
以上のL―ヒスチジン残存率を有する標準血液
紙は、−20℃では一年以上保存しても、ガスリー
法の判定において支障なく使用出来ることが、経
験的に知られている。従つて、第2表の結果は、
亜二チオン酸塩,二亜硫酸塩を20mMまたは亜硫
酸水素塩を25mM添加した血液より製造したヒス
チジン測定標準血液紙は、充分、−20℃で一年
以上の保存に耐えることを示している。 つぎに、保存剤添加量と、保存効果の関係を第
2表と同じ条件で検討した結果を第3表に示す。
以上のL―ヒスチジン残存率を有する標準血液
紙は、−20℃では一年以上保存しても、ガスリー
法の判定において支障なく使用出来ることが、経
験的に知られている。従つて、第2表の結果は、
亜二チオン酸塩,二亜硫酸塩を20mMまたは亜硫
酸水素塩を25mM添加した血液より製造したヒス
チジン測定標準血液紙は、充分、−20℃で一年
以上の保存に耐えることを示している。 つぎに、保存剤添加量と、保存効果の関係を第
2表と同じ条件で検討した結果を第3表に示す。
【表】
第3表より明らかなごとく、亜硫酸塩類20mM
以上の添加区においては、紙中のL―ヒスチジ
ンはいずれも80%以上の残存率を示し、本発明の
目的に充分な保存効果を有することがわかる。 次に実施例によつてこの発明をさらに具体的に
説明する。 実施例 1 廃血となつた健常人の血液(ヘマトクリツト値
42%)6を遠心分離機にて2000RPM,20分処
理し、上清の血漿402mlを吸引除去し、ヘマトク
リツト値(Hematocrit Value)55%に調製し
た。次いで5のメスフラスコに、亜硫酸水素ナ
トリウム2.5M/生理食塩水溶液50mlを採取し、
これに前述のヘマトクリツト値55%の全血を注加
して正確に5とした。この場合亜硫酸水素ナト
リウムの血中濃度は25mM/となる。この血液
中のL―ヒスチジン濃度をアミノ酸自動測定機で
測定したところ1.3mg/dlであつた。つぎに100ml
メスフラスコに、それぞれ最終濃度が2ml/dl,
4ml/dl,6mg/dl,8mg/dl,10mg/dl,12
mg/dl,16mg/dl,20mg/dlとなるよう前述の血
中濃度を差引いた計算量のL―ヒスチジンを含む
濃厚溶液を1mlを添加しておき、これに前述の保
存剤を含有した調製血液を注加し、正確に100ml
とした。これをゆるく撹拌した後、添加したL―
ヒスチジンが、全血中に充分拡散するまで室温に
2時間放置した。次いで東洋紙(株)製PKU用
紙に50μずつ滴下した。血液は紙に吸着され
直径11mmの円形となる。これを室温で約2時間乾
燥し、さらに真空乾燥機で十分に乾燥後、ラミネ
ート包装し製品とした。 本製品を−20℃で、6ケ月および1年保存後ガ
スリー法にて、枯草菌の生育円の直径を従来品と
比較したところ次の第4表に示す結果を得た。
以上の添加区においては、紙中のL―ヒスチジ
ンはいずれも80%以上の残存率を示し、本発明の
目的に充分な保存効果を有することがわかる。 次に実施例によつてこの発明をさらに具体的に
説明する。 実施例 1 廃血となつた健常人の血液(ヘマトクリツト値
42%)6を遠心分離機にて2000RPM,20分処
理し、上清の血漿402mlを吸引除去し、ヘマトク
リツト値(Hematocrit Value)55%に調製し
た。次いで5のメスフラスコに、亜硫酸水素ナ
トリウム2.5M/生理食塩水溶液50mlを採取し、
これに前述のヘマトクリツト値55%の全血を注加
して正確に5とした。この場合亜硫酸水素ナト
リウムの血中濃度は25mM/となる。この血液
中のL―ヒスチジン濃度をアミノ酸自動測定機で
測定したところ1.3mg/dlであつた。つぎに100ml
メスフラスコに、それぞれ最終濃度が2ml/dl,
4ml/dl,6mg/dl,8mg/dl,10mg/dl,12
mg/dl,16mg/dl,20mg/dlとなるよう前述の血
中濃度を差引いた計算量のL―ヒスチジンを含む
濃厚溶液を1mlを添加しておき、これに前述の保
存剤を含有した調製血液を注加し、正確に100ml
とした。これをゆるく撹拌した後、添加したL―
ヒスチジンが、全血中に充分拡散するまで室温に
2時間放置した。次いで東洋紙(株)製PKU用
紙に50μずつ滴下した。血液は紙に吸着され
直径11mmの円形となる。これを室温で約2時間乾
燥し、さらに真空乾燥機で十分に乾燥後、ラミネ
ート包装し製品とした。 本製品を−20℃で、6ケ月および1年保存後ガ
スリー法にて、枯草菌の生育円の直径を従来品と
比較したところ次の第4表に示す結果を得た。
【表】
実施例 2
1にメスフラスコに亜二チオン酸ナトリウム
2M/生理食塩水溶液10mlをとり、実施例1で
調製したヘマトクリツト値55%の全血を注加、正
確に1とした。保存剤の濃度は20mMとなる。
以下実施例1と同様に所定のL―ヒスチジンを添
加し、PKU紙に滴下、乾燥して標準血液紙
の製品を調製した。実施例1と同様−20℃におけ
る保存試験を行つた結果は第5表の通りであつ
た。 実施例 3 1メスフラスコに二亜硫酸ナトリウム2M/
の生理食塩水溶液10.0mlをとり、以下実施例2
と同様に調整を行なつた。 実施例1,2と同様−20℃におけ保存試験成績
は第6表の通りであつた。
2M/生理食塩水溶液10mlをとり、実施例1で
調製したヘマトクリツト値55%の全血を注加、正
確に1とした。保存剤の濃度は20mMとなる。
以下実施例1と同様に所定のL―ヒスチジンを添
加し、PKU紙に滴下、乾燥して標準血液紙
の製品を調製した。実施例1と同様−20℃におけ
る保存試験を行つた結果は第5表の通りであつ
た。 実施例 3 1メスフラスコに二亜硫酸ナトリウム2M/
の生理食塩水溶液10.0mlをとり、以下実施例2
と同様に調整を行なつた。 実施例1,2と同様−20℃におけ保存試験成績
は第6表の通りであつた。
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 亜二チオン酸塩,二亜硫酸塩,亜硫酸水素塩
の一種または二種以上を含有するヒスチジン測定
用標準血液紙。 2 原料血液中に添加する上記塩類濃度が10mM
乃至50mMである特許請求の範囲第1項記載の標
準血液紙。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56158629A JPS5860257A (ja) | 1981-10-07 | 1981-10-07 | ヒスチジン測定用標準血液濾紙 |
US06/424,096 US4393134A (en) | 1981-10-07 | 1982-09-27 | Standard blood filter paper for use in diagnosis of histidinemia |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56158629A JPS5860257A (ja) | 1981-10-07 | 1981-10-07 | ヒスチジン測定用標準血液濾紙 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5860257A JPS5860257A (ja) | 1983-04-09 |
JPS6330579B2 true JPS6330579B2 (ja) | 1988-06-20 |
Family
ID=15675880
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP56158629A Granted JPS5860257A (ja) | 1981-10-07 | 1981-10-07 | ヒスチジン測定用標準血液濾紙 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4393134A (ja) |
JP (1) | JPS5860257A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH039487U (ja) * | 1989-06-19 | 1991-01-29 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4877683B2 (ja) * | 2001-05-11 | 2012-02-15 | 株式会社リコー | 電子写真装置 |
ATE444491T1 (de) * | 2005-05-20 | 2009-10-15 | Germediq Forsch & Entw Ges Mbh | Verfahren zur bestimmung von kardiovaskulären risikofaktoren |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3245882A (en) * | 1962-04-16 | 1966-04-12 | Guthrie Robert | Bacteriologic testing method and means therefor |
JPS5754864A (en) * | 1980-09-19 | 1982-04-01 | Fujirebio Inc | Standard blood filtering paper for measurement of methionine |
-
1981
- 1981-10-07 JP JP56158629A patent/JPS5860257A/ja active Granted
-
1982
- 1982-09-27 US US06/424,096 patent/US4393134A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH039487U (ja) * | 1989-06-19 | 1991-01-29 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5860257A (ja) | 1983-04-09 |
US4393134A (en) | 1983-07-12 |
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