JPS6226709B2 - - Google Patents

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JPS6226709B2
JPS6226709B2 JP55129149A JP12914980A JPS6226709B2 JP S6226709 B2 JPS6226709 B2 JP S6226709B2 JP 55129149 A JP55129149 A JP 55129149A JP 12914980 A JP12914980 A JP 12914980A JP S6226709 B2 JPS6226709 B2 JP S6226709B2
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JP
Japan
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blood
paper
methionine
concentration
growth
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JP55129149A
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JPS5754864A (en
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Yoshisada Saito
Akira Yano
Yasushi Kasahara
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Fuji Rebio Kk
Original Assignee
Fuji Rebio Kk
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Publication date
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Priority to GB08128345A priority patent/GB2114735B/en
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6806—Determination of free amino acids
    • G01N33/6812—Assays for specific amino acids
    • G01N33/6815—Assays for specific amino acids containing sulfur, e.g. cysteine, cystine, methionine, homocysteine
    • G—PHYSICS
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    • Y10S435/805—Test papers
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    • Y10S435/832—Bacillus
    • Y10S435/839—Bacillus subtilis

Description

【発明の詳細な説明】
本発明は先天性アミノ酸代謝異常症の一種であ
る高メチオニン血症診断用の標準血液紙に関す
る。さらに詳しくは、長期保存に耐える、血中メ
チオニン濃度測定用標準血液紙に関する。 フエニルケトン尿症、ヒスチジン血症、高メチ
オニン血症等の先天性アミノ酸代謝異常症は、見
過せば精神薄弱、肝硬変等悲惨な病状に発展する
恐しい病気であるが、近年、乳児期の早期に発見
し、食餌療法等適切な治療を施せば、患者の一生
を救うことができるようになつた。 しかしこのためには、出産後１週間以内に新生
児の血中アミノ酸濃度を測定し、異常高濃度を発
見する簡便なスクリーニング検査法の開発が切望
されている。この目的に現在最も多く使用されて
いる検査法はガスリー法
（Guthries′ Bioinhibition Assay）であり、その
原理は、枯草菌の発育に必要なアミノ酸に対する
代謝阻害剤を適当量含んだ寒天培地中で枯草菌を
培養すると菌のアミノ酸代謝がおさえられ殆んど
発育しないが、この寒天培地の上に血液を浸み込
ませた紙片を置いて培養すると、菌は血液中の
アミノ酸を利用して発育し、含まれているアミノ
酸量に対応した枯草菌の発育円を生ずる。これを
既知量のアミノ酸を含む血液を浸み込ませた紙
片（標準血液紙）により生ずる発育円の大きさ
と比較して、目的とするアミノ酸の濃度を半定量
するものである。さらに具体的な手法および測定
条件については「臨床病理24（12）962〜973，
1976」に詳しい。 本法において再現性の高い、安定した測定結果
を得るためには、表示通りのアミノ酸量が経時的
に安定して含有されている、長期間保存可能な標
準血液紙を対照として使用することが必須要件
であるが、従来の血中メチオニン測定用標準血液
紙は含有されるメチオニンが保存中に速かに酸
化変性されるため、−20℃で保存しても、製造後
４ケ月以上経過した製品は、末使用のまゝ廃棄せ
ざるを得ないという欠点を有し、実用上大きな障
害となつていた。 本発明の目的は、これら実用上の問題点を解決
し、長期保存に耐える新規な、メチオニン測定用
標準血液紙を提供することにある。 本発明者らは、かゝる目的を達成すべく、種々
研究の結果、β―チオジグリコール（β―thio―
diglycol）、β―チオジプロパノール（β―
thiodipropanol）のごときスルフイド構造を有す
る水溶性有機含硫抗酸化剤が、血中メチオニン量
の指標となる枯草菌の生育に何ら影響を与えず、
乾燥血中のメチオニンの酸化変性を有効に防止し
得ることを知り、本発明を完成した。 本発明に使用し得る、スルフイド構造を有する
水溶性有機含硫抗酸化剤としては、β―チオジグ
リコール，β―チオジプロパノールがあげられ
る。 本発明にかゝる標準血液紙の調製は、以下の
要領で行われる。まづ原料として、健常人の廃血
を用い、これに上記有機含硫抗酸化剤を最終濃度
30mM乃至120mM、好ましくは35mM乃至60mM
となるように添加溶解する。次いでＬ―メチオニ
ンをそれぞれ種類に応じ、最終濃度１mg／dl，２
mg／dl，４mg／dl，８mg／dl，12mg／dl，16mg／
dl，20mg／dlとなるように添加溶解する。全体を
ゆるく撹拌した後、室温で２時間静置し、添加し
た抗酸化剤およびＬ―メチオニンの拡散による原
料血液の均一化をはかる。これを特別に作られた
市販のPKU用紙に滴下し、直径11mmに浸み込
ませ風乾し、これを標準血液紙とする。検査者
は、被験血液中のＬ―メチオニン測定時に、適当
なデイスクパンチヤーを用い、直径３mmの血液
紙片を打抜き、ガスリー法の対照として用いる。 このようにして調製した標準血液紙は、従来
品と異なり、−20℃で１年以上、（４℃で６ケ月以
上）の保存に耐える。すなわちこの期間内であれ
ば枯草菌の生育、血液の色調等、ガスリー法によ
るメチオニン濃度判定のための諸要因には、何ら
悪影響を与えず、表示されたＬ―メチオニン濃度
に対応する生育円を与える。 先ず本発明品と他の抗酸化剤を使用した製品と
の標準血液紙調製時及びガスリー法による枯草
菌生育状況判定時における優劣を比較し、第１表
に示す。
【表】
【表】 すなわち、第１表において原料血液を凝固する
ものは血液が紙上に均一に吸収されず、本発明
の目的を達成しない。又、ガスリー法による枯草
菌生育状態の比較観察に際し、標準血液紙の血
液の色調が、被験血液と著しく異るもの、また、
枯草菌の生育に阻止円の生ずるものは、判定結果
に重大な誤りを与える恐れがあり、実用上好まし
くない。 枯草菌の生育自体を阻害し、又は、メチオニン
濃度に対応しない生育を与える抗酸化剤も、使用
に耐えないものであることは論をまたない。 以上の考察より第１表で検討された抗酸化剤の
うち、本発明の目的に合致するものは、β―チオ
ジグリコールおよびβ―チオジプロパノールのみ
である。 ついで、これらの抗酸化剤を添加し調製した、
標準血液紙中のＬ―メチオニン安定性につい
て、37℃苛酷試験により検討した結果を第２表に
まとめる。なお同表中、残存Ｌ―メチオニンの定
量は乳酸菌によるバイオアツセイ（Bio assay）
によつた。
【表】 37℃苛酷試験において、14日間経過後なお80％
以上のＬ―メチオニン残存率を有する標準血液
紙は、−20℃では一年以上保存しても、ガスリー
法の判定において支障なく使用出来ることが、経
験的に知られている。従つて、第２表の結果は、
β―チオジグリコールまたはβ―チオジプロパノ
ールを50mM添加した血液より製造したメチオニ
ン測定用標準血液紙は、充分、−20℃で一年以
上の保存に耐えることを示している。 つぎに、抗酸化剤添加量と、保存効果の関係を
第２表と同じ条件で検討した結果を第３表に示
す。
【表】 第３表より明らかなごとく、抗酸化剤30mM以
上の添加区においては、紙中のＬ―メチオニン
はいづれも80％以上の残存率を示し、本発明の目
的に充分な保存効果を有することがわかる。 次に実施例によつてこの発明をさらに具体的に
説明する。 実施例 １ 廃血となつた健常人の血液（ヘマトクリツト値
42％）６を遠心分離機にて2000RPM、20分処
理し、上清の血漿402mlを吸引除去し、ヘマトク
リツト値（Hematocrit Value）55％に調整し
た。次いで５のメスフラスコに、純度98％のβ
―チオジグリコール25mlを採取し、これに前述の
ヘマトクリツト値55％の全血を注加して正確に５
とした。この場合β―チオジグリコールの血中
濃度は49mM／となる。この血液中のＬ―メチ
オニン濃度をアミノ酸自動測定機で測定したとこ
ろ0.25mg／dlであつた。つぎに100mlメスフラス
コに、それぞれ最終濃度が１mg／dl，２mg／dl，
４mg／dl，８mg／dl，12mg／dl，16mg／dl，20
mg／dlとなるよう前述の血中濃度を差引いた計算
量のＬ―メチオニンを含む濃厚溶液１mlを添加し
ておき、これに前述の抗酸化剤を含有した調製血
液を注加し、正確に100mlとした。これをゆるく
撹拌した後、添加したＬ―メチオニンが、全血中
に充分拡散するまで室温に２時間放置した。次い
で東洋紙(株)製PKU用紙に50μずつ滴下し
た。血液は紙に吸着され直径11mmの円形とな
る。これを室温で約２時間乾燥し、さらに真空乾
燥機で乾燥後、ラミネート包装し製品とした。 本製品を−20℃で、６ケ月および１年保存後ガ
スリー法にて、枯草菌の生育円の直径を従来品と
比較したところ次の結果を得た。
【表】 実施例 ２ １メスフラスコににβ―チオジプロパノール
7.0mlをとり、実施例１で調製したヘマトクリツ
ト値55％の全血を注加、正確に１とした。抗酸
化剤の濃度は50mMとなる。以下実施例１と同様
に所定のＬ―メチオニンを添加し、PKU紙に
滴下、乾燥して標準血液紙の製品を調製した。 実施例１と同様−20℃における保存試験を行つ
た結果は次表の通りであつた。
【表】

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で表わされる水溶性有機含硫抗酸化剤の一種また
    は二種以上を含有するメチオニン測定用標準血液
    紙。 ２ 原料血液中に添加する水溶性有機含硫抗酸化
    剤濃度が30mM乃至120mMである特許請求範囲第
    １項記載の標準血液紙。
JP55129149A 1980-09-19 1980-09-19 Standard blood filtering paper for measurement of methionine Granted JPS5754864A (en)

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JP55129149A JPS5754864A (en) 1980-09-19 1980-09-19 Standard blood filtering paper for measurement of methionine
US06/300,753 US4367286A (en) 1980-09-19 1981-09-10 Reference blood filter paper for measuring the concentration of methionine in the blood
FR8117488A FR2490827A1 (fr) 1980-09-19 1981-09-16 Papier filtre temoin destine a mesurer la concentration de methionine dans le sang
GB08128345A GB2114735B (en) 1980-09-19 1981-09-18 Reference filter paper for use in diagnosis of homocystinuria
DE3137237A DE3137237C2 (de) 1980-09-19 1981-09-18 Testblut-Filterpapier zur Verwendung als Standard bei der Messung der Methioninkonzentration im Blut

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Also Published As

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JPS5754864A (en) 1982-04-01
DE3137237A1 (de) 1982-06-03
DE3137237C2 (de) 1984-01-12
FR2490827B1 (ja) 1985-03-15
GB2114735A (en) 1983-08-24
GB2114735B (en) 1984-08-22
US4367286A (en) 1983-01-04

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