JPS63205545A

JPS63205545A - 細胞内カルシウム測定装置

Info

Publication number: JPS63205545A
Application number: JP62037184A
Authority: JP
Inventors: Yoshimitsu Kobiyama; 媚山　義光; Mikitaka Hayashi; 林　幹高
Original assignee: Japan Spectroscopic Co Ltd
Current assignee: Jasco Corp
Priority date: 1987-02-20
Filing date: 1987-02-20
Publication date: 1988-08-25
Anticipated expiration: 2013-02-18
Also published as: JP2717402B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は細胞内カルシウム測定装置に関し、特に現在使
われている各種試薬による測定を１台の装置で実施でき
、その他車小板凝集能の同時測定及び浮遊細胞と組繊細
胞のいずれの測定をも可能とする専用の細胞内カルシウ
ム測定装置に関するものである。

従米生孜歪細胞は生体の中で非常に多様な機能を発揮するが、細胞
内遊離カルシウム濃度（以下（Ｃａ”）　；と略す）は
、その機能発現、及び機能調節に深く関与している。例
えばその代表例として、血小板の凝集、神経の興奮、筋
肉の収縮、ホルモンの分泌、細胞一般の代謝調節などが
あげられる。むしろ、（Ｃａ”）ｉが無関係といえる生
体現象を挙げる方が難しいほど多くの機能に係っている
。本発明は、血清や一般体液中のカルシウム濃度測定で
なく、細胞内のカルシウム濃度を測定するところにその
重要性が存在する。

従来、このような細胞機能とカルシウムとの関りは、細
胞外の環境からＣａ”を除くと反応が起きなくなるとか
、逆にＣａ”＋を増やしてやると増強されるとか、細胞
をすりつぶした生化学的条件下でＣａ”！濃度を操作す
ると問題の酵素活性が変化するというように、間接的な
実験による論拠が多かった。その原因の１つは、反応を
起こしつつある生きた細胞について、まさに今（Ｃａ”
°〕直がどう変化しているのかを測定する技術が未開発
だったことによる。

１９８０年、Ｒｏｖ、Ｔｓｅｉｎ等により開発されたけ
い光性Ｃａ”インジケータであるＱｕｉｎｌｌ、更に１
９８５年に同じ（Ｔｓｅｉｎ等に開発されたＦｕｒａ　
ＩＩは、こうした研究にとって画期的なものであり、急
速に多方面に応用されつつある。そして今日（Ｃａ！＋
）　、め測定は、薬理学、生理学、神経科学を中心とし
た基礎医学から、血小板凝集、免疫応答にかかわるリン
パ球を中心とした臨床医学まで非常に巾広く始められて
いる。

日が”しようとするロ　占Ｑｕｉｎｌｌ、Ｆｕｒａ　Ｉｆが開発される以前の（Ｃ
ａ”）　ｉの測定法としてはエクオリン（Ａｅｑｕｏｒ
ｉｎ）　、アゾ色素（ムレキシド、アルセナド■等）、
カルシウム微小電極等があった。これらの方法には共通
して次のような欠点がある。

■　細胞に機械的な損傷を与えてしまう。

■　応用できる細胞の大きさ、数に制限がある。

■　操作が複雑で熟練を要す。

これに対して、Ｑｕｉｎｌｌ、Ｆｕｒａ　ＩＩは、細胞
に機械的な損傷なく負荷でき、Ｃａの生理的変動範囲で
激しいけい光強度の変化を生じ、感度、Ｃａ特異性、使
いやすさに加えて毒性も低いというきわめて理想的なプ
ローブの１つである。現在（Ｃａ”）ｈ測定の為によく
利用されている試薬は、エクオリン、ＱｕｉｎｌＩ、Ｆ
ｕｒａ　ＩＩである。

次に、これら３種類の試薬について簡単に見ると、エク
オリンは発光クラゲの顆粒に含まれる分子量約２０．０
００のタンパク質で、カルシウムイオンと選択的に結合
し、λｗａｘ　−４６９ｎｍの光を発する。

特長として、自然発光の為励起光の必要がなく、励起光
の変化によるアーチファクトの影響を回避できるが、細
胞内へのｌｏａｄｉｎｇ（注入）が難しく、低濃度測定
に適さない（約ＩＱ−’　Ｍ以下）。

また、Ｑｕｉｎｌｌはカルシウムと選択的にキレートし
、強いけい光を発する。Ｑｕｉｎ　ｎ　−ＡＭは容易に
膜透過して細胞内に入り、細胞内でエステラーゼにより
加水分解され、膜不透過性のＱｕｉｎ［に戻る。

従って、Ｃａ　Ｚ　＋の濃度変化追跡が可能である。但
しＱｕｉｎｎの問題点には次の幾つかがある：■比較的
高い濃度（０，２〜０．５ｍＭ）までＱｕｉｎｌｌを細
胞に入れないと、測定できないことがある；■Ｑｕｉｎ
ＩＩ自身によるＣａ”緩衝作用が細胞質内で働き、生理
的影響を及ぼす可能性がある；■Ｃａ濃度の変化が低め
に抑制される場合がある；■静止レベルのＣａ”″濃度
を測定するには適しているが、１μＭ付近では飽和に近
くなり変化が良く見えなくなる。

Ｆｕｒａ　Ｉｔの原理と操作は基本的にＱｕｉｎ　ＩＩ
と同じだ、次のような特長を有する。ＱｕｉｎＩＩに比
して螢光強度が約３０倍大きく、従って細胞内への注入
の量を減らすことができる。３４０ｎａ＋付近で励起し
た場合はＣａ”８１度上昇に伴い螢光強度が増大するの
に対し、３７０〜３８０ｎｍで励起した時は逆にけい光
強度が顕著に減少するため２波長の北側光が可能である
。

一方（Ｃａ”）Ｈの測定の場合には一般に、各けい光試
薬が特に温度等の環境因子に高い依存性を持ち、また各
細胞の励起光に対する感受性や螢光状態に達するまでを
観測したい場合があるため、精度の良い温度制御、励起
光照射時間の制御、細胞の均一な攪拌、外部からの刺激
剤注入、雰囲気のガス置換等が必要であるが、汎用の分
光けい光光度計では、これらの機能が準備されていない
。

更に、心筋や平滑筋、血管壁等の場合は組織そのままの
状態での測定が必要であるが、従来装置では全（対応不
可能である。又、現在利用されているエクオリン、Ｑｕ
ｉｎＩＩ、Ｆｕｒａ　ＩＩそれぞれの長所短所が議論さ
れており、相互の相関をとることも必要である。その他
、（Ｃａ”°〕直は血小板の凝集にも寄与しているため
、血小板内の（Ｃａ”）　＋濃度を測定するのと同時に
、その凝集能の測定が要求されることもよくある。

このように、細胞内カルシウム測定ではそれぞれ異なる
測定条件の各種試薬が使われ、特にＦｕｒａ■を用いる
場合には２波長励起の比測定が必要である他、さまざま
な付帯条件が要求されるにもかかわらず、汎用分光けい
光光度計を個々の用途に合わせて改良し使用しているの
が現状であり、次のような機能を１台で果せる細胞内カ
ルシウム測定装置が強く望まれている。

■　エクオリン（従来から行なわれている発光蛋白質）
　、Ｑｕｉｎ　ＩＩ　、Ｆｕｒａ　ＩＩなどそれぞれ測
定原理（手法）の異なる試薬に適応できる； ■　血小板凝集能と（Ｃａ”）６の同時測定ができる； ■　浮遊細胞、組織いずれの測定も可能である；■　温
度制御、雰囲気ガスの置換、試料の攪拌又は２又は３次
元移動等が可能である；及び■　各細胞励起光に対する
感受性や螢光状態に達するまでを観測できる。

本発明による細胞内カルシウム測定装置は上記第１の要
求を満たすため、励起光を放射する光源と、励起光を試
料保持装置内にセットした試料へ導く励起用光学系と該
励起用光学系の光路内に配置された波長選択又は２波長
時分割選択機構と、試料が内部にセントされる試料保持
装置と、試料からの発光または螢光を検出器に導く測定
用光学系と、該測定用光学系の光路内に配置された測定
波長選択機構と、１つ又は２つの検出器と該検出器から
の出力信号を電気的に処理して試料に関する所望の情報
を得る手段とを備え、試薬としてエクオリンを試料に注
入するときは励起光を試料に導かず、測定波長選択機構
で４６９ｎｍ付近の発光を選択的に透過してエクオリン
試薬によるカルシウム測定を可能とし、試薬としてＱｕ
ｉｎ　ＩＩを試料に注入するときは励起波長選択機構を
介して励起光を試料に導き、励起波長選択機構を一波長
側に固定して３４０ｎｍ付近の励起光を選択的に透過さ
せ、測定波長選択機構で５００ｎｍ付近の螢光を選択的
に透過してＱｕｉｎ　ＩＩ試薬によるカルシウム測定を
可能とし、試薬としてＦｕｒａ　Ｕを試料に注入すると
きは同じく励起波長選択機構を介して励起光を試料に導
き、励起波長選択機構によって３４０ｎｍ付近と３７０
〜３８０ｎｍ付近の２波長励起光を交互に透過させ、測
定波長選択機構で５０５ｎｍ付近の螢光を選択的に透過
してＦｕｒａ　ＩＩ試薬による２波長比のカルシウム測
定を可能とすることを特徴とするものである。

また上記第２の要求を満たすため、本発明の装置は励起
波長選択装置から濁度測定用に特定の波長の光を選択的
に試料へ導くか又は別個の濁度測定用の光源、該光源か
らの光を選択的に試料へ導く光路選択手段、試料の透過
光が入射する検出器を更に備え、試料内の血小板凝集能
の測定を可能とすることを特徴とするものである。

更に上記第３及び第４の要求を満たすため、本装置では
試料保持装置が交換可能で、撹拌機能を備えた浮遊細胞
用試料保持装置と２又は３次元移動機能を備えた組繊細
胞用試料保持装置などから成り、これら試料保持装置が
温度制御、雰囲気のガス置換、外部からの試薬注入のう
ち所要の機能を更に備えたことを特徴とするものである
。

更に上記第５の要求を満たすため、本発明の装置は励起
用光学系の光路中に動作制御可能な光遮断装置を備え、
励起光の照射時間を制御可能としたことを特徴とするも
のである。

更に又エクオリン、Ｆｕｒａ　ＩＩ及びＱｕｉｎＩＩ以
外の試薬への対応を考慮し測定用光学系は複数波長同時
測定が行えるように測定用波長選択装置が考慮されてい
る。

人施■ 以下本発明の簡単な一実施例を、添付の図面に沿って詳
しく説明する。

まず、第１図の光学系の配置と第２図の電気系のブロッ
ク図を参照して、本発明による細胞内カルシウム測定装
置の基本構成を説明する。

例えばＸｅランプ等の励起用光源ＳＯ，からの光は後方
のおう面鏡Ｍ１により集光しグイクロイックミラー〇Ｍ
、で紫外光が反射され（可視光は透過）、後述のごとく
チョッパーの機能も果す励起波長選択装置（この図では
簡単のためバンドパスフィルタで代表させである）　Ｂ
Ｓ上の干渉フィルタ（Ｆｌ。

Ｆ２）上に収束される。励起波長選択装置ＢＳの前方に
シャッタＳＨが配置され、励起光の断続及び照射時間を
制御する。干渉フィルタＦ、又はＦ、を透過した励起光
はレンズＬ、で平行光にされ、レンズＬｔで試料保持装
置ｌｓＡ内にセットした試料Ｓに当てられ励起する。第
１図においてはＳＯ＋、　ＤＭＥ、　Ｌ＋及びＦ２が励
起用光学系を構成している。尚Ａは光量調節用絞りであ
る。

試料Ｓの発するけい光は、励起光に対して直角方向から
レンズＬ、で取り込まれて平行光束となり、測定波長選
択機構（この図では簡単のためバンドパスフィルタで代
表させである）　ＭＳの干渉又はカットフィルタＦ４を
透過した後、レンズし＃で光電子増倍管等の検出器ＰＭ
に収束され電気信号となる。

第１図ではＬａ、Ｆ４が測定用光学系を構成する。

第１図中Ｓ（ｈは°血小板の凝集能測定に用いる光源で
、該光源からの光は光路選択手段ＬＳを構成するグイク
ロイックミラーロｈで反射されて励起光と同一光路に導
かれ、試料Ｓを照射する。励起光はグイクロイックミラ
ーＤＭ！を透過する。試料Ｓを透過した光は、対向配置
された検出器ｐｃに入射し、試料の濁度つまり血小板の
凝集能に関する情報を与える。検出器ｐｃの前方にフィ
ルタＦ４が置かれている。

以上の光学系に対応する部分は第２図中左側に示してあ
り、ＰＳは光源ＳＯＩ用の電源で、図示のごとくグイク
ロイックミラー〇Ｍ、からの一部の光を電源制御に使う
こともできる。

検出器ＰＭからの電気信号はプリアンプＰ＾とメインア
ンプＭＡで増幅された後、２波長比測定の場合には、干
渉フィルタＦ、、　Ｆ２に応じた各励起波長の信号に分
離されサンプルホールド回路Ｆ、／Ｈ，Ｆ、／Ｈにホー
ルドされる。ホールド信号は、チョッパとしての励起波
長選択機構ＥＳからの同期信号に基づきホールド信号発
生器Ｈ３から発生される。ホールドされた各信号は個々
に、あるいは割算器Ｆ＋／Ｆ２を経てアナログスイッチ
ＡＳで選択され、インタフェースＩＮＴからアナログ／
デジタルコンバータＡ／Ｄでデジタル信号に変換される
。変換されたデジタル信号は、ＣＰＵとデジタル表示器
ＬＥＤによって所望の情報の形で表示される。

上記の他、ＳＨＣはシャッタ制御器、ＲＣとＴＣはそれ
ぞれ試料の回転、温度制御器、ＨＴＣは検出器である光
電子増倍管用の高圧制御器、ＯＳＣはオシロスコープ観
測用の出力端子、Ｒ，Ｃ，ＯＵＴはレコーダ用の出力端
子、ＴＡは透過光測定検出器ｐｃからの電気信号を増巾
して適切なメータへ送る増巾器である。

次に、各構成部分について更に詳しく説明する。

まず励起波長選択機構ＥＳについて見ると、前述のごと
（Ｐｕｒａ　ＩＩを用いる場合には３４０ｎ−付近と３
７０〜３８０ｎｍの２波長で励起し比測定を行なうため
、２枚の干渉フィルタＦ　ｒ　（３４０＋ｖ）　　とＦ
　ｔ　（３８０ｎ＋ｍ）を使用し、交互に励起光中へ切
換配置して両フィルタの透過期間の間がダーク（Ｄ）と
なるようにする必要がある。第１図に示した機構ＥＳは
両フィルタＦｔ、ｈを離間して備えた非透過性の円板１
とモータ２を備え、モータ２の回転が円板１の回転軸に
伝えられて円板１が回転するのに伴い、フィルタＦＩ　
Ｆｔが交互に励起光中に入る。これに代え第３図に示す
ごとく、両フィルタＦ、、　Ｆｔを離間して備えた矩形
板３をガイド４に沿って並進移動可能に構成し、モータ
２の回転に伴い連結ロッド５を介して矩形板３を往復動
させ両フィルタＦ、Ｐｉを交互に励起光に入れるように
してもよい、いずれの場合にせよ、モータ２を５０Ｈｚ
で回転すれば、励起波長選択機構Ｉ！Ｓを透過した後の
励起光は第４図のように示される。尚、フィルタＦ、が
励起光中にある状態でモータ２を停止したままにしてお
けば、３４０ｎｍの励起光が連続的に得られるのは勿論
である。

シャッタＳＨは励起光をオン、オフすると共にその時間
制御を行なうもので、第５（ａ）、（ｂ）図に示すごと
く、回転可能な羽根６と該羽根６の回転を制御して例え
ば０．１〜９．９秒の間を０．１秒毎にシャッタ駆動す
る駆動装置７から成る。駆動装置７への駆動信号はシャ
ッタ制御器ＳＨＣから与えられる。

通常測定の場合には、シャッタＳＲを開いたまま測定す
る。浮遊細胞や組繊細胞価々の励起光に対する感受性や
螢光状態に達するまでの挙動を観測したいときは、シャ
ッタＳＨをオン／オフ駆動しながら、オシロスコープま
たは高速レコーダで観測記録する。

試料保持装置Ｓ＾は交換可能で、浮遊細胞用試料保持装
置と組繊細胞試料保持装置などを用意し、浮遊細胞用試
料保持装置がエクオリン使用時の自然発光測定用試料保
持装置も兼ねる。

第６図は浮遊細胞用試料保持装置ＳＡＩを示し、アルミ
ブロック８から成る恒温槽内に試験管９が装着される。

試験管９内の浮遊細胞試料Ｓは、試料内に入れた攪拌子
１０のアルミブロック８下方に配置されマグネット１１
を回転するステッピングモータ１２とから成るスターラ
ーで攪拌されると共に、アルミブロック８の側面に設け
たペルチェ素子１３で温度制御される。１４はフィンで
ある。　ＯＡは例えば光学ベースＯＢから高さ８０ｍ１
の光軸で、アルミブロック８には光透過用の窓孔が適宜
形成され、ステッピングモータ１２とペルチェ素子１３
は第２図中の制御器ＲＣ，ＴＣからの信号によって制御
される。

また、試料保持装置内のスペースは例えばＮ２ガスによ
ってガス置換され、試料の蒸発及び外部物質との反応を
抑える。さらに、試験管の真上等外部からマイクロシリ
ンジ１６によって刺激剤を注入し、試料の反応を測定で
きるようにしである。１７はマイクロシリンジガイドで
ある。

第７（ａ）、（ｂ）図は組繊細胞用試料保持装置ＳＡ２
のそれぞれ平面図と側面図を示し、組繊細胞（血管その
他）の試料Ｓを栄養液１８の入うたアルミブロックから
成る容器１９にセントする。容器１９をＸ−Ｙ（又はＸ
−Ｙ−Ｚ）ステージ２０に載せ、不図示の周知な機構に
よって前後左右方向（又は前後、左右、上下方向）に駆
動され、試料Ｓは２次元平面内で例えば最大±１０ｍま
で移動可能である。試料への励起光の照射は容器１９の
下方から行なわれ、同方向からけい光から取り出す。こ
のため図中光軸０＾の位置にグイクロイックミラー〇Ｍ
３が置かれ、第８図に分り易く示すように、励起光はそ
こで上方に反射されて試料Ｓに垂直入射する一方、試料
からのけい光はグイクロイックミラー〇Ｍ３を透過し、
ミラー２１で反射されて検出器ＰＭに入る。浮遊細胞用
試料保持装置の場合と比べ検出器に入る光の光軸が下が
るので、検出器はホルダー全体を上下方向に移動可能に
構成される。また、組織は紫外線を照射すると刺激され
伸縮するので、その伸縮度を外部からトランスジュース
し測定可能とするスペースを確保しておくのが好ましい
。２２は容器１９の底に取り付けた窓板である。

次に、本装置を用いて測定する場合の動作について説明
する。まずエクオリン試薬を使う場合は、浮遊細胞用試
料保持装置ＳＡＩを設置するが、励起光源ＳＯ，は消灯
したままで、試料からの自然発光を検出器で受ける。次
に、Ｑｕｉｎ　ＩＩ試薬を使う場合は、励起波長選択機
構ＥＳのフィルタＰ　Ｉ（３４０ｎｍ）を励起光中に入
れたままとし、測定波長選択機構ＭＳに干渉フィルタＦ
４（５００ｎｍ）を設置した状態で光源Ｏ３＋を点灯し
て測定を行なう。Ｆｕｒａ　ＩＩ試薬を使う場合は、励
起波長選択機構ＥＳを駆動して両フィルタ（３４０ｎｍ
と３８０ｎｏ＋）を交互に励起光中に入れ、２波長の比
測定を行なう。

血小板の（Ｃａ”］　＝測定と同時にその凝集能を測定
したいときは、濁度測定用の光源ＯＳｔを点灯し、試料
の透過光を検出器ｐｃで測定する。

また浮遊細胞でなく血管壁、各種臓器、培養細胞、モル
−ヤ等の固体状組織を測定したいときは、浮遊細胞用試
料保持装置ＳＡＩを取り外して組繊細胞用試料保持装置
！ＳＡ２を装着すれば、前述のようにして各試薬を用い
た測定を行なえる。さらに、上記いずれの励起光を使う
測定でも、シャッタＳＨを断続的にオン／オフすれば浮
遊細胞や組繊細胞の励起光に対する感受性及び螢光状態
に達するまでの挙動を観測できる。

特に説明はしなかったが励起波長選択装置及び測定波長
選択装置に多波長分光器を用いれば試料の励起スペクト
ル、けい光スペクトルの他に、ここで述べた試薬以外の
試薬にも対応できる汎用細胞内カルシウム測定装置が構
成できることは明らかである。

】フレ８九果以上述べたように本発明によれば、細胞内カルシウム測
定の分野で現在要求されている多種多様な機能を全て１
台で達成し得る細胞内カルシウム測定装置が得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による細胞内カルシウム測定装置の光学
系のブロック図、第２図は電気処理系のブロック図、第
３図１８）、　ｔｂ）は励起波長選択機構の別の実施例
の概略図、第４図は２波長測定時における励起光のタイ
ムチャート、第５図（ａ）、　（ｂ）はそれぞれシャッ
タの正面図と側面図、第６図は浮遊細胞用試料保持装置
を示す概略図、第７図（ａ）、　（ｂ）はそれぞれ組繊
細胞用試料保持装置の概略平面図と側面図、第８図は組
繊細胞用試料保持装置の光学系を分り易く示す斜視図で
ある。ＳＯ，・・・励起用光源、ＳＯＷ・・・濁度測定用光源
、Ｍ＋、ＤＭ＋、Ｌ＋、Ｌｘ・・・励起用光学系、ＳＲ
・・・シャッタ、ＢＳ・・・励起波長選択機構、ＬＳ・
・・光路選択手段、Ｓ・・・試料、ＳＡ・・・試料アタ
ッチメント（ＳＡＩ・・・浮遊細胞アタッチメント、Ｓ
Ａ２・・・組繊細胞アタッチメント）ＬＳ、　Ｌ、・・
・測定用光学系、ＭＳ・・・測定波長選択機構、Ｆ１〜
Ｆ９・・・フィルタ、ＰＭ・・・検出器、ｐｃ・・・濁
度測定用検出器、８・・・アルミブロック（恒温槽）　
、１０．１１゜１２・・・スターラー、１３・・・ペル
チェ素子、１５・・・Ｎ２ガス、１９・・・アルミブロ
ック容器、２０・・・Ｘ−Ｙステージ。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）励起光を放射する光源と、励起光を試料保持装置
に導入する励起用光学系と、該励起用光学系内に配置さ
れた少くとも２つの特定された波長を測定目的に応じて
特定の１波長に選択して、又は２波長を時分割的に試料
に投射する励起可能な励起波長選択装置と、被測定試料
をセットする試料保持装置と、試料からのけい光を１又
は２つの検出器に導く測定用光学系と、該測定用光学系
の光路内に配置された１又は２つの測定波長選択装置と
、検出器と該検出器からの信号を電気的に処理して、試
料に関する所望の情報を得る手段とを備えたことを特徴
とする細胞内カルシウム測定装置。
（２）特許請求の範囲第１項記載の励起波長選択装置か
ら濁度測定用に特定の波長の光を選択的に試料へ導く光
路選択手段、又は別個の濁度測定用光源を設置し、該光
源からの光を選択的に試料へ導く光路選択手段、及び試
料の透過光が入射する検出器を備え、試料内の血小板凝
集能の測定を可能とすることを特徴とする特許請求の範
囲第１項記載の細胞内カルシウム測定装置。
（３）前記試料保持装置が測定目的に応じて着脱又は交
換可能であり、撹拌機能、温度制御機能、試料雰囲気の
ガス置換可能機能及び外部から試料への試薬注入機能の
うち所要な機能を更に備えたことを特徴とする浮遊細胞
を対称とする特許請求の範囲第１項、第２項記載の細胞
内カルシウム測定装置。
（４）前記試料保持装置が組繊細胞用であり、栄養塩循
環機能、撹拌機能、温度制御機能、試料雰囲気のガス置
換可能機能及び試料への試薬注入機能のうち、所要な機
能を更に備えたことを特徴とする特許請求の範囲第１項
、第２項記載の細胞内カルシウム測定装置。
（５）前記励起用光学系の光路中に動作制御可能な光遮
断装置を備え励起光の照射時間を制御可能としたことを
特徴とする特許請求の範囲第１項、２項記載の細胞内カ
ルシウム測定装置。
（６）特定条件の下において試料自からが微弱発光する
場合、検出器の位置を調整し、高いＳ／Ｎで信号を得る
手段を備えた特許請求の範囲第１項、２項記載の細胞内
カルシウム測定装置。
（７）前記微弱発光測定に際し信号処理系にフォトンカ
ウンティング用手段を備えた特許請求の範囲第１項、２
項、６項記載の細胞内カルシウム測定装置。