JPS63202368A - 細胞融合用微小容器 - Google Patents
細胞融合用微小容器Info
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- JPS63202368A JPS63202368A JP3325987A JP3325987A JPS63202368A JP S63202368 A JPS63202368 A JP S63202368A JP 3325987 A JP3325987 A JP 3325987A JP 3325987 A JP3325987 A JP 3325987A JP S63202368 A JPS63202368 A JP S63202368A
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- cell fusion
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
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- C12M23/12—Well or multiwell plates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は雑種細胞を効率的に作成するための細胞融合装
置に関するものである。
置に関するものである。
細胞融合では遺伝的に異なったＡ、８２種類の細胞から
雑種細胞ＡＢを効率的に作り出す必要がある。従来の方
法によれば、細胞融合時に雑種細胞としてＡＢのみを作
り出すだけではなく、同種細胞同士の融合ＡＡ、ＢＢを
はじめ種々の組み合せの融合細胞を生成する。このため
ＡＢの融合細胞のみが残ることのできる培地を使って、
ＡＢのみを選択する選択培地法が広く利用されている。
雑種細胞ＡＢを効率的に作り出す必要がある。従来の方
法によれば、細胞融合時に雑種細胞としてＡＢのみを作
り出すだけではなく、同種細胞同士の融合ＡＡ、ＢＢを
はじめ種々の組み合せの融合細胞を生成する。このため
ＡＢの融合細胞のみが残ることのできる培地を使って、
ＡＢのみを選択する選択培地法が広く利用されている。
しかしこの方法は対象細胞が限定されていたり、成功例
が限られていたりして、−膜性がない。細胞を顕微鏡下
でマイクロピペットで選択する方法もあるが、手作業の
ため能率が非常に悪いという問題がある。
が限られていたりして、−膜性がない。細胞を顕微鏡下
でマイクロピペットで選択する方法もあるが、手作業の
ため能率が非常に悪いという問題がある。
これに対し、雑種細胞を選択的に生成する方法として、
一対の細胞を微小容器の中に注入し、融合剤を与えるこ
とにより、ＡＢの組み合せのみを生成する装置が提案さ
れている。たとえば公開特許公報（Ａ）昭６０−２５１
８７７細胞融合装置がその−例である。
一対の細胞を微小容器の中に注入し、融合剤を与えるこ
とにより、ＡＢの組み合せのみを生成する装置が提案さ
れている。たとえば公開特許公報（Ａ）昭６０−２５１
８７７細胞融合装置がその−例である。
しかしこれらの特許では容器の構造に関する規定がない
ため、細胞融合が確実に行われる保証がとぼしい。
ため、細胞融合が確実に行われる保証がとぼしい。
細胞融合法には現在ポリエチレングリコール等を融合剤
として使用する化学的手法と、電気的手法がある。いず
れの方法においても一対の細胞の接触状態を作り出すこ
とが前提となる。細胞間の距離が離れていると、細胞融
合は無効となる。本発明の目的は細胞を注入する微小容
器の構造を工夫することにより、この容器内で確実に細
胞融合を行わせることにある。
として使用する化学的手法と、電気的手法がある。いず
れの方法においても一対の細胞の接触状態を作り出すこ
とが前提となる。細胞間の距離が離れていると、細胞融
合は無効となる。本発明の目的は細胞を注入する微小容
器の構造を工夫することにより、この容器内で確実に細
胞融合を行わせることにある。
一対の細胞を接触状態とするため、各細胞が重力、もし
くは重力＋吸収力によって垂直下方に落下させ、相互間
距離が最終的には零に近づくような容器の構造を採用す
る。
くは重力＋吸収力によって垂直下方に落下させ、相互間
距離が最終的には零に近づくような容器の構造を採用す
る。
各細胞は微小容器内で相互に接触できるならば、融合剤
の添加、もしくは電気パルスの印加により容易に融合が
促進される。
の添加、もしくは電気パルスの印加により容易に融合が
促進される。
まず、本発明の全体構成を第１図をもちいて説明する。
注入ノズル１より試料液を噴出し、細胞２を容器３へ注
入する。容器の底面にフィルタ４があり、試料液の液体
部分はフィルタを抜けて、吸引ノズル５から構成される
装置全体は緩衝液の中に浸漬している。注入ノズルの特
定個所を細胞が通過したことは、レーザ光源６から発射
されたビームを細胞が散乱したことを検知器７で判断す
ることによって行なわれる。検知器の出力は制御器８に
入り、容器の駆動時期を判断する。細胞の落下速度に合
せて容器駆動装置９を動かすことによって、細胞を容器
にキャッチすることができる；注入ノズルからＡ細胞、
続いてＢ細胞を注入することによって、多数の容器から
なる二次元平面板上にＡＢ一対の細胞群を多数セットす
ることができる。
入する。容器の底面にフィルタ４があり、試料液の液体
部分はフィルタを抜けて、吸引ノズル５から構成される
装置全体は緩衝液の中に浸漬している。注入ノズルの特
定個所を細胞が通過したことは、レーザ光源６から発射
されたビームを細胞が散乱したことを検知器７で判断す
ることによって行なわれる。検知器の出力は制御器８に
入り、容器の駆動時期を判断する。細胞の落下速度に合
せて容器駆動装置９を動かすことによって、細胞を容器
にキャッチすることができる；注入ノズルからＡ細胞、
続いてＢ細胞を注入することによって、多数の容器から
なる二次元平面板上にＡＢ一対の細胞群を多数セットす
ることができる。
この状態からたとえばポリエチレングリコールのような
融合剤を平面上に散布するか、もしくは別の注入ノズル
を使って各容器に融合剤を添加すれば、各容器に入った
一対の細胞が融合する。電気融合の場合は容器の各壁に
一対の電極を設けるか、もしくは電極棒を容器の真上＆
きセットし、容器との間に電気パルスを印加する。この
ような融合を可能にするには細胞同士が接触状態をとる
ことが必要である。本発明はこ九を実現するための容器
の構造に関するものである。
融合剤を平面上に散布するか、もしくは別の注入ノズル
を使って各容器に融合剤を添加すれば、各容器に入った
一対の細胞が融合する。電気融合の場合は容器の各壁に
一対の電極を設けるか、もしくは電極棒を容器の真上＆
きセットし、容器との間に電気パルスを印加する。この
ような融合を可能にするには細胞同士が接触状態をとる
ことが必要である。本発明はこ九を実現するための容器
の構造に関するものである。
以下本発明の実施例を図を使って説明する６第２図は容
器の形状を矩形にしたものであり、第（ａ）は上面図、
（ｂ）は断面図を示す底面に三本の長形上のフィルタを
設けている。Ａ、８２種の細胞の直径をそれぞれｒｌ
、ｒＺとすれば、底面の一辺ｄがｄ＜ｒｔ、＋ｒｚの条
件を満足する限り、一対の細胞は容器の底で相互に接触
する。
器の形状を矩形にしたものであり、第（ａ）は上面図、
（ｂ）は断面図を示す底面に三本の長形上のフィルタを
設けている。Ａ、８２種の細胞の直径をそれぞれｒｌ
、ｒＺとすれば、底面の一辺ｄがｄ＜ｒｔ、＋ｒｚの条
件を満足する限り、一対の細胞は容器の底で相互に接触
する。
この場合細胞の比重と緩衝液の比重の差が大きいならば
細胞は重力によって自然に落下するが、比重差が小さい
と、緩衝液中を浮遊するため融合完了時点まで吸引ノズ
ルで細胞同士を吸着しておく必要がある。
細胞は重力によって自然に落下するが、比重差が小さい
と、緩衝液中を浮遊するため融合完了時点まで吸引ノズ
ルで細胞同士を吸着しておく必要がある。
第３図は容器の底面に傾斜を設けた実施例を示し、（ａ
）はその上面図、（ｂ）は断面図である。
）はその上面図、（ｂ）は断面図である。
ノズルから注入された細胞３１．３２は一方の壁面に向
って移動するため、最終的には図３のように容器の最下
端で両者の細胞は確実に接触する。
って移動するため、最終的には図３のように容器の最下
端で両者の細胞は確実に接触する。
第４図は容器をお椀状にした実施例を示し。
（ａ）は上面図、（ｂ）は断面図である。お椀の底はク
シ形の歯状のフィルタを設けている。細胞４１．４２は
お椀の底に重力によって沈殿するとき、最下端で接触す
る。
シ形の歯状のフィルタを設けている。細胞４１．４２は
お椀の底に重力によって沈殿するとき、最下端で接触す
る。
以上、第２図、第３図、第４図によって細胞が接触する
容器の構造の例を示した。これらの容器を製作する手段
としてたとえば半導体基板を使った微細加工技術を利用
する方法があげられる。第３図のような傾斜した底面を
作り出すには基板の結晶軸を傾斜した状態のものを切り
出せばよい。
容器の構造の例を示した。これらの容器を製作する手段
としてたとえば半導体基板を使った微細加工技術を利用
する方法があげられる。第３図のような傾斜した底面を
作り出すには基板の結晶軸を傾斜した状態のものを切り
出せばよい。
また図４のような細いフィルタを作るには半導体の異方
性エツチナグ加工によって可能である。
性エツチナグ加工によって可能である。
以上記述したように本発明によれば、微小容器の中に注
入した一対の細胞が確実に接触するので、容器内で融合
処理を行う際、融合細胞の生産性が向上する。
入した一対の細胞が確実に接触するので、容器内で融合
処理を行う際、融合細胞の生産性が向上する。
第１図は本発明の応用対象となる装置を説明する構成図
、第２図〜第４図は本発明の詳細な説明する図で上部は
平面図、下部は断面図を示す。 １・・・ノズル、２・・・細胞、３・・・微小容器、４
・・・フイ第７図 芽２図 （幻 第３図 （ａ−）
、第２図〜第４図は本発明の詳細な説明する図で上部は
平面図、下部は断面図を示す。 １・・・ノズル、２・・・細胞、３・・・微小容器、４
・・・フイ第７図 芽２図 （幻 第３図 （ａ−）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、細胞を注入するノズルと、一対の細胞を収容する微
小容器と、融合剤の注入機構もしくは電気融合手段をそ
なえた細胞融合装置において、上記微小容器は上記一対
の細胞の直径の合計より小さな長さを一辺とする矩形型
底面を有することを特徴とする細胞融合用微小容器。 ２、細胞を注入するノズルと、一対の細胞を収容する微
小容器と、融合剤の注入機構もしくは電気融合手段をそ
なえた細胞融合装置において、上記微小容器は、上記一
対の細胞の直径の合計より小さな長さを短辺とする長方
形の底面を有し、かつその底面は長方形の長辺の方向に
傾むいていることを特徴とする細胞融合用微小容器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3325987A JPS63202368A (ja) | 1987-02-18 | 1987-02-18 | 細胞融合用微小容器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3325987A JPS63202368A (ja) | 1987-02-18 | 1987-02-18 | 細胞融合用微小容器 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63202368A true JPS63202368A (ja) | 1988-08-22 |
Family
ID=12381514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3325987A Pending JPS63202368A (ja) | 1987-02-18 | 1987-02-18 | 細胞融合用微小容器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63202368A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993002178A1 (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-04 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
-
1987
- 1987-02-18 JP JP3325987A patent/JPS63202368A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993002178A1 (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-04 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
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