JPS63109781A - ｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クロ−ン抗体とを併用した簡便なＤル−プ生成法 - Google Patents
ｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クロ−ン抗体とを併用した簡便なＤル−プ生成法Info
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- JPS63109781A JPS63109781A JP25499386A JP25499386A JPS63109781A JP S63109781 A JPS63109781 A JP S63109781A JP 25499386 A JP25499386 A JP 25499386A JP 25499386 A JP25499386 A JP 25499386A JP S63109781 A JPS63109781 A JP S63109781A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、閉環状二重鎖ＤＮＡにＤループ構造を形成す
る方法に関する。更に詳しくはｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗
ｒｅｃ Ａ蛋白様蛋白単クローン抗体とを併用するＤル
ーズの形成方法に関する。
る方法に関する。更に詳しくはｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗
ｒｅｃ Ａ蛋白様蛋白単クローン抗体とを併用するＤル
ーズの形成方法に関する。
Ｄループは、第１図に示すように、互いに共通の塩基配
列をもつ二重鎖ＤＮＡと単鎖ＤＮＡとから形成される複
合体である。二重鎖ＤＮＡの一方の鎖と単鎖ＤＮＡとの
間で塩基対を作りへテロ二重鎖と呼ばれる二重１１構造
を作り、一方相手を失った二重鎖Ｄ Ｎ Ａの他方の鎖
がループ状になっている。このＤループは、クローニン
グした遺伝子の任意の部分に突然変異を導入する技術に
用いられている（Ｓｈｏｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ、 （
１９８０） Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
列をもつ二重鎖ＤＮＡと単鎖ＤＮＡとから形成される複
合体である。二重鎖ＤＮＡの一方の鎖と単鎖ＤＮＡとの
間で塩基対を作りへテロ二重鎖と呼ばれる二重１１構造
を作り、一方相手を失った二重鎖Ｄ Ｎ Ａの他方の鎖
がループ状になっている。このＤループは、クローニン
グした遺伝子の任意の部分に突然変異を導入する技術に
用いられている（Ｓｈｏｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ、 （
１９８０） Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、ＵＳＡ ７７： ５３７５． Ｇ
ｒｅｅｎ ａｎｄ Ｔｉｂｂｅｔｔｓ（１９８０） Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ
７７： ２４５５）。
ｒｅｅｎ ａｎｄ Ｔｉｂｂｅｔｔｓ（１９８０） Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ
７７： ２４５５）。
また、この構造を高い頻度で作ることができれば、遺伝
子の構造研究、遺伝子診断などに役立つ特別な塩基配列
をもつＤＮＡを拾い出す技術などが実現できる。端の全
（無い、いわゆる閉環状二重鎖ＤＮＡで天然に存在する
型のものは右巻きの（負の）超ラセンを持っている。こ
の負の超ラセンを持つ閉環状二重鎖ＤＮＡの上のＤルー
プは、通常の二重ラセンと同じ程度の高度の安定性を持
つ。
子の構造研究、遺伝子診断などに役立つ特別な塩基配列
をもつＤＮＡを拾い出す技術などが実現できる。端の全
（無い、いわゆる閉環状二重鎖ＤＮＡで天然に存在する
型のものは右巻きの（負の）超ラセンを持っている。こ
の負の超ラセンを持つ閉環状二重鎖ＤＮＡの上のＤルー
プは、通常の二重ラセンと同じ程度の高度の安定性を持
つ。
遺伝子のクローニングの多くに用いられるプラスミドも
その殆どが負の超ラセンをもつ閉環状二重鎖ＤＮＡであ
り、Ｄループ形成を利用した技術を考える時、その対象
となるＤＮＡは殆どの場合、負の超ラセンをもつ閉環状
二重鎖ＤＮＡである。
その殆どが負の超ラセンをもつ閉環状二重鎖ＤＮＡであ
り、Ｄループ形成を利用した技術を考える時、その対象
となるＤＮＡは殆どの場合、負の超ラセンをもつ閉環状
二重鎖ＤＮＡである。
一方、端を持つ二重１！ Ｄ Ｎ Ａの上のＤループは
非常に不安定である。
非常に不安定である。
〔発明が解決しようとする問題点〕
大腸菌のｒｅｃ Ａ蛋白や他生物のｒｅｃ Ａ蛋白類似
蛋白は、Ｄループ生成の反応を、ＡＴＰの助けによって
１０万〜１００万倍も加速する。即ち、これらの蛋白を
利用すると、ごく微量のＤＮＡを用いて、短時間で高い
収率でＤループを作らせる事ができる。（柴田武彦（１
９８６）。ｒｅｃ Ａ蛋白によるＤＮＡ組換え反応、醸
造協会誌８１：８６）ところが、単離状態では非常に安
定な閉環状二重鎖ＤＮＡ上のＤループは、反応液の中で
は、Ｄループ形成を行うｒｅｃ Ａ蛋白そのものの働き
によって、形成の後、二重鎖ＤＮＡと単鎖ＤＮＡとに解
離されてしまう。そこで、高い収率で閉環状二重鎖ＤＮ
Ａの上にＤループを得るには、ｒｅｃ Ａ蛋白の量また
は、反応の時間を、用いる２種類のＤＮＡの量に応じて
厳密に調節しなければならない。この特性は、ｒｅｃ
Ａ蛋白によるＤループ形成を技術として利用する場合、
非常に不利である。
蛋白は、Ｄループ生成の反応を、ＡＴＰの助けによって
１０万〜１００万倍も加速する。即ち、これらの蛋白を
利用すると、ごく微量のＤＮＡを用いて、短時間で高い
収率でＤループを作らせる事ができる。（柴田武彦（１
９８６）。ｒｅｃ Ａ蛋白によるＤＮＡ組換え反応、醸
造協会誌８１：８６）ところが、単離状態では非常に安
定な閉環状二重鎖ＤＮＡ上のＤループは、反応液の中で
は、Ｄループ形成を行うｒｅｃ Ａ蛋白そのものの働き
によって、形成の後、二重鎖ＤＮＡと単鎖ＤＮＡとに解
離されてしまう。そこで、高い収率で閉環状二重鎖ＤＮ
Ａの上にＤループを得るには、ｒｅｃ Ａ蛋白の量また
は、反応の時間を、用いる２種類のＤＮＡの量に応じて
厳密に調節しなければならない。この特性は、ｒｅｃ
Ａ蛋白によるＤループ形成を技術として利用する場合、
非常に不利である。
そこで本発明はこのようなｒｅｃ Ａ蛋白様蛋白の持つ
特性を改良し、容易にＤループを形成する方法を提供す
ることを目的とする。
特性を改良し、容易にＤループを形成する方法を提供す
ることを目的とする。
本発明は、閉環状二重鎖ＤＮＡと該二重鎖ＤＮＡと共通
の塩基配列を有する単鎖ＤＮＡ断片とをｒｅｃ Ａ蛋白
様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クローン抗体とで処理
することからなる閉環状二重ＩＪＩ Ｄ Ｎ ＡにＤル
ープ構造を形成する方法に関する。
の塩基配列を有する単鎖ＤＮＡ断片とをｒｅｃ Ａ蛋白
様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クローン抗体とで処理
することからなる閉環状二重ＩＪＩ Ｄ Ｎ ＡにＤル
ープ構造を形成する方法に関する。
以下本発明について説明する。
本発明において用いる閉環状二重鎖ＤＮＡとしては、既
知、未知を問わずいかなる閉環状二重鎖ＤＮＡであって
もよい。また、単鎖ＤＮＡ断片は、該二重鎖Ｄ Ｎ Ａ
と共通の塩基配列を有するものであれば、ＤＮＡの大き
さ等に特に制限はない。
知、未知を問わずいかなる閉環状二重鎖ＤＮＡであって
もよい。また、単鎖ＤＮＡ断片は、該二重鎖Ｄ Ｎ Ａ
と共通の塩基配列を有するものであれば、ＤＮＡの大き
さ等に特に制限はない。
本発明に用いるｒｅｃＡ蛋白様蛋白としては、例えば大
腸菌ｒｅｃ Ａ蛋白並びに類似蛋白であるＴ４ファージ
由来のｕｖｓ Ｘ蛋白、枯草菌由来のｒｅｃ蛋白及び黒
穂菌（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）由来のｒｅｃ ｌ蛋白等を挙
げることができる。これらの蛋白は例えば（ｒｅｃ Ａ
；５ｈｉｂａｔａ ｅｔ ａｌ、 （１９８３）
！Ｊｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙｌｏｏ
：１９７． ｕｖｓＸ ；Ｙｏｎｅｓａｋｉ ｅｔ ａ
ｌ、 （１９８５）εｕｒ。
腸菌ｒｅｃ Ａ蛋白並びに類似蛋白であるＴ４ファージ
由来のｕｖｓ Ｘ蛋白、枯草菌由来のｒｅｃ蛋白及び黒
穂菌（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）由来のｒｅｃ ｌ蛋白等を挙
げることができる。これらの蛋白は例えば（ｒｅｃ Ａ
；５ｈｉｂａｔａ ｅｔ ａｌ、 （１９８３）
！Ｊｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙｌｏｏ
：１９７． ｕｖｓＸ ；Ｙｏｎｅｓａｋｉ ｅｔ ａ
ｌ、 （１９８５）εｕｒ。
Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １４８：１２７． ｒｅｃ蛋
白；Ｌｏｖｅｔｔ ａｎｄＲｏｂｅｒｔｓ （１９８５
） Ｊ、Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、２６０：３３０５゜ｒ
ｅｃ １；Ｋｍｉｅｃ ａｎｄ Ｈｏｌｌｍａｎ （１
９Ｂ２） Ｃｅ１ｌ ２９：３６７７ 〕の記載に基い
て単離することができる。
白；Ｌｏｖｅｔｔ ａｎｄＲｏｂｅｒｔｓ （１９８５
） Ｊ、Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、２６０：３３０５゜ｒ
ｅｃ １；Ｋｍｉｅｃ ａｎｄ Ｈｏｌｌｍａｎ （１
９Ｂ２） Ｃｅ１ｌ ２９：３６７７ 〕の記載に基い
て単離することができる。
また抗ｒｅｃΔ蛋白様蛋白単クローン抗体の代表例とし
ては、ＡＲＭ１９３が挙げられ、例えば牧野らの方法（
Ｍａｋｉｎｏら（１９８５） Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ
、２６０：１５４０２）によって入手することができる
。
ては、ＡＲＭ１９３が挙げられ、例えば牧野らの方法（
Ｍａｋｉｎｏら（１９８５） Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ
、２６０：１５４０２）によって入手することができる
。
ｒｅｃ Ａ蛋白に対して作った単クローン抗体はそれぞ
れ、ｒｅｃ Ａ蛋白のもつ多種類の活性に対して様々な
異なる挙動を示す（Ｍａｋｉｎｏら（１９８５）Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、２６０ ：１５４０２）。その
中の一群の単クローン抗体（たとえばＡＲＭ１９３）は
、ｒｅｃＡ蛋白によるＤループ形成の反応をあまり阻害
しないが、ｒｅｃＡ蛋白による閉環状二重鎖ＤＮＡ上の
Ｄルーズの解離反応を強く阻害する。
れ、ｒｅｃ Ａ蛋白のもつ多種類の活性に対して様々な
異なる挙動を示す（Ｍａｋｉｎｏら（１９８５）Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、２６０ ：１５４０２）。その
中の一群の単クローン抗体（たとえばＡＲＭ１９３）は
、ｒｅｃＡ蛋白によるＤループ形成の反応をあまり阻害
しないが、ｒｅｃＡ蛋白による閉環状二重鎖ＤＮＡ上の
Ｄルーズの解離反応を強く阻害する。
そこで、ｒｅｃＡ蛋白による負の超ラセンをもつ閉環状
二重鎖ＤＮＡと単鎖ＤＮＡとを基質とするＤループ形成
反応の系に、この抗体くたとえばＡ Ｒ！、（１９３）
をｒｅｃＡ蛋白に対して十分量加えると、Ｄループの解
離を抑え、高い収率でＤループを得ることができるよう
になる。この場合、ｒｅｃ Ａ蛋白の量は単に単鎖ＤＮ
Ａに対して十分量で有れば良く（予測されるＤＮＡ量に
対し余分に加えるだけで良い）、また反応時間も３０分
もあれば十分であり、抗体を使わない時のような蛋白量
、時間の厳密な調節は不要となる。
二重鎖ＤＮＡと単鎖ＤＮＡとを基質とするＤループ形成
反応の系に、この抗体くたとえばＡ Ｒ！、（１９３）
をｒｅｃＡ蛋白に対して十分量加えると、Ｄループの解
離を抑え、高い収率でＤループを得ることができるよう
になる。この場合、ｒｅｃ Ａ蛋白の量は単に単鎖ＤＮ
Ａに対して十分量で有れば良く（予測されるＤＮＡ量に
対し余分に加えるだけで良い）、また反応時間も３０分
もあれば十分であり、抗体を使わない時のような蛋白量
、時間の厳密な調節は不要となる。
以下本発明を実施例により説明する。
実施例
１、材 料
（１） ｒｅｃＡ蛋白、３Ｈで標識したファージｆｄ
複製中間体（ＲＦＩ）ＤＮＡ（負の超ラセンをもつ閉環
状二重鎖ＤＮＡ）、ファージｆｄのファージ粒子の単鎖
ＤＮＡの断片；これらは柴田ら（１９３３）Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｓｙ、 ｖｏｌ、
ＩＱＱ。
複製中間体（ＲＦＩ）ＤＮＡ（負の超ラセンをもつ閉環
状二重鎖ＤＮＡ）、ファージｆｄのファージ粒子の単鎖
ＤＮＡの断片；これらは柴田ら（１９３３）Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｓｙ、 ｖｏｌ、
ＩＱＱ。
ｐｐ、１９７の記述にしたがって調製した。
（２）抗ｒｅｃ Ａ蛋白単クローン抗体；ΔＲＭ１９３
を！Ｊａｋｉｎｏ ｅｔ ａｌ、 （１９８５） Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、 ２６０：１５４０２の記述
にしたがってアフィニティークロマトによって調製して
用いた。
を！Ｊａｋｉｎｏ ｅｔ ａｌ、 （１９８５） Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、 ２６０：１５４０２の記述
にしたがってアフィニティークロマトによって調製して
用いた。
２、反応液
３１ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｊｌ！緩衝液（ｐＨ７，５
）、１３ｍ１化マグネシウム、１．８ｍＭ ジチオスレ
イトール、８８μ／−牛血清アルブミン、１．３ｍＭＡ
ＴＰＳＡＴＰ再生系（７，８ｍＭ リン酸クレアチン、
リン酸タレアチンキナーゼ）、３．７μＭ（ヌクレオチ
ド残基で＞ ［３１１］ ｆｄ ＲＦ Ｉ ＤＮＡ
。
）、１３ｍ１化マグネシウム、１．８ｍＭ ジチオスレ
イトール、８８μ／−牛血清アルブミン、１．３ｍＭＡ
ＴＰＳＡＴＰ再生系（７，８ｍＭ リン酸クレアチン、
リン酸タレアチンキナーゼ）、３．７μＭ（ヌクレオチ
ド残基で＞ ［３１１］ ｆｄ ＲＦ Ｉ ＤＮＡ
。
０．４０μＭ （ヌクレオチド残基で）ｆｄ単鎖ＤＮＡ
断片、０．５０ μＭ ｒｅｃＡ蛋白、０．５０ ／、
ｆＭ ＡＲＭ１９３゜反応液の体積は２１ｐ１２〜０．
２ｍｌ。
断片、０．５０ μＭ ｒｅｃＡ蛋白、０．５０ ／、
ｆＭ ＡＲＭ１９３゜反応液の体積は２１ｐ１２〜０．
２ｍｌ。
３、反 応
ＡＴＰ、塩化マグネシウム、単鎖ＤＮＡ、二重鎖ＤＮＡ
５ＡＴＰ再生系を除いた反応液の中で、ｒｅｃ Ａ蛋白
とＡＲＭ １９３とを３７度で５分間保温した。次に、
塩化マグネシウム、２種類のＤＮＡ５ＡＴＰ再生系（Ａ
ＴＰは無し）を加え、さらに２分間３７度で保温した。
５ＡＴＰ再生系を除いた反応液の中で、ｒｅｃ Ａ蛋白
とＡＲＭ １９３とを３７度で５分間保温した。次に、
塩化マグネシウム、２種類のＤＮＡ５ＡＴＰ再生系（Ａ
ＴＰは無し）を加え、さらに２分間３７度で保温した。
Ｄループ形成反応はＡＴＰを添加することによって開始
した。第２図に示した時間、３７度で保温した後、２０
μβずつサンプルとして採取した。
した。第２図に示した時間、３７度で保温した後、２０
μβずつサンプルとして採取した。
採取したサンプルはＥＤＴＡと５ａｒｋｏｓｙｌとによ
って処理し、蛋白を除いた後、Ｄループアッセイ（柴田
ら（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｓｙ、ｖｏｌ。
って処理し、蛋白を除いた後、Ｄループアッセイ（柴田
ら（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｓｙ、ｖｏｌ。
１００ 、 ｐｐ、 １９７ ）によって、できたＤ
ループの量を測定した。できたＤループの量は、Ｄルー
プとなったＲＦＩＤＮＡの反応系に加えたＲＦＩ ＤＮ
Ａに対する百分率で表した。第２図において・は上記の
反応によってできたＤループの量を示す。Ｏは抗体（Ａ
ＲＭ１９３）を加えなかった時のＤループの量の時間変
化を示す。閣は上記の反応系のｆｄのファージ単鎖Ｄ
Ｎ Ａ断片をφｘ１７４のファージ単鎖ＤＮＡ断片に置
き換えた場合を示す。φＸ１７４とｆｄとは互いに相同
な塩基配列は持たないので、Ｄループはできない。口は
φＸ１７４の単鎖ＤＮＡ断片を用い、更に、ＡＲＭ１９
３を除いた場合を示す。
ループの量を測定した。できたＤループの量は、Ｄルー
プとなったＲＦＩＤＮＡの反応系に加えたＲＦＩ ＤＮ
Ａに対する百分率で表した。第２図において・は上記の
反応によってできたＤループの量を示す。Ｏは抗体（Ａ
ＲＭ１９３）を加えなかった時のＤループの量の時間変
化を示す。閣は上記の反応系のｆｄのファージ単鎖Ｄ
Ｎ Ａ断片をφｘ１７４のファージ単鎖ＤＮＡ断片に置
き換えた場合を示す。φＸ１７４とｆｄとは互いに相同
な塩基配列は持たないので、Ｄループはできない。口は
φＸ１７４の単鎖ＤＮＡ断片を用い、更に、ＡＲＭ１９
３を除いた場合を示す。
抗体が無い場合には一度できたＤループが反応時間の経
過と共に完全に解離されてしまうが、抗体ＡＲＭ １９
３が有る場合には、１０分で５０％の閉環状二重鋼Ｄ
Ｎ ＡがＤループになり、１時間経過してもそのままの
量を保っている。
過と共に完全に解離されてしまうが、抗体ＡＲＭ １９
３が有る場合には、１０分で５０％の閉環状二重鋼Ｄ
Ｎ ＡがＤループになり、１時間経過してもそのままの
量を保っている。
第１図はＤループを形成している閉環状二重鋼ＤＮＡを
示し、第２図は、実施例の結果であるＤループ形成の経
時変化を示す。 単鎖ＤＮＡ１ｆｉ−片 閉環状二Ｍ鎖ＤＮＡ
示し、第２図は、実施例の結果であるＤループ形成の経
時変化を示す。 単鎖ＤＮＡ１ｆｉ−片 閉環状二Ｍ鎖ＤＮＡ
Claims (4)
- （１）閉環状二重鎖ＤＮＡと該二重鋼ＤＮＡと共通の塩
基配列を有する重鎖ＤＮＡ断片とをｒｅｃＡ蛋白様蛋白
と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クローン抗体で処理すること
からなる閉環状二重鎖ＤＮＡにＤループ構造を形成する
方法。 - （２）ｒｅｃＡ蛋白様蛋白が大腸菌ｒｅｃＡ蛋白である
特許請求の範囲第（１）項記載の方法。 - （３）ｒｅｃＡ蛋白様蛋白がＴ４ファージ由来のｕｖｓ
Ｘ蛋白、枯草菌由来のｒｅｃ蛋白又は黒穂菌（Ｕｓｔｉ
ｌａｇｏ）由来のｒｅｃ１蛋白である特許請求の範囲第
（１）項記載の方法。 - （４）抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クローン抗体がＡＲＭ１
９３である特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25499386A JPS63109781A (ja) | 1986-10-27 | 1986-10-27 | ｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クロ−ン抗体とを併用した簡便なＤル−プ生成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25499386A JPS63109781A (ja) | 1986-10-27 | 1986-10-27 | ｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クロ−ン抗体とを併用した簡便なＤル−プ生成法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63109781A true JPS63109781A (ja) | 1988-05-14 |
Family
ID=17272719
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25499386A Pending JPS63109781A (ja) | 1986-10-27 | 1986-10-27 | ｒｅｃＡ蛋白様蛋白と抗ｒｅｃＡ蛋白様蛋白単クロ−ン抗体とを併用した簡便なＤル−プ生成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63109781A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04117237A (ja) * | 1990-09-05 | 1992-04-17 | Nippon Fillester Co Ltd | 採卵装置 |
| EP0687738A1 (en) * | 1993-12-28 | 1995-12-20 | Daikin Industries, Ltd. | IN-SITU HYBRIDIZATION METHOD USING RecA PROTEIN AND RecA PROTEIN HAVING MARKER OR LIGAND FOR USE IN SAID METHOD |
| US7229767B2 (en) | 2001-03-27 | 2007-06-12 | University Of Delaware | Genomics applications for modified OLIGO nucleotides |
-
1986
- 1986-10-27 JP JP25499386A patent/JPS63109781A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04117237A (ja) * | 1990-09-05 | 1992-04-17 | Nippon Fillester Co Ltd | 採卵装置 |
| EP0687738A1 (en) * | 1993-12-28 | 1995-12-20 | Daikin Industries, Ltd. | IN-SITU HYBRIDIZATION METHOD USING RecA PROTEIN AND RecA PROTEIN HAVING MARKER OR LIGAND FOR USE IN SAID METHOD |
| EP0687738A4 (en) * | 1993-12-28 | 1999-05-19 | Daikin Ind Ltd | IN SITU HYBRIDIZATION METHOD USING RECA PROTEIN, WHICH HAS A MARKER OR LIGAND FOR USE IN THIS METHOD |
| US5965361A (en) * | 1993-12-28 | 1999-10-12 | Daikin Industries, Ltd. | In-situ hybridization method using RecA protein and RecA protein having marker or ligand for use in said method |
| US7229767B2 (en) | 2001-03-27 | 2007-06-12 | University Of Delaware | Genomics applications for modified OLIGO nucleotides |
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