JPS6261999A

JPS6261999A - Substance 135

Info

Publication number: JPS6261999A
Application number: JP60201183A
Authority: JP
Inventors: Koushiyou Kiyo; 許　鴻章; Sekiriyou Shiyou; 庄　錫亮; Teruyoshi Marunaka; 丸中　照義; Akira Kajitani; 亮梶谷; Eiji Matsushima; 英司松島; Yoshinori Minami; 南　慶典
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1985-09-10
Filing date: 1985-09-10
Publication date: 1987-03-18
Also published as: JPH0360840B2

Abstract

NEW MATERIAL:Substance 135 and its salt. Its acetate has the following physical and chemical properties. Neutral white powder. Melting point: showing no clear melting point. Molecular weight: 1,170-1,440. Solubility: soluble in hydrous dimethyl sulfoxide and DMF, slightly soluble in water, insoluble in acetone, ethyl acetate, chloroform, and ether. Color reaction: positive in biuret reaction, Tollens's reaction, xanthoprotein reaction and Sakaguchi reaction and negative in ninhydrin reaction, Molish reaction, Benedict reaction, anthrone reaction, Ehrlich reaction and nitroprusside reaction. Elemental analysis: H 6.62-7.12%, C 45.65-46.40%, N 14.99-15.41%. Containing glycine, alanine, threonine, aspartic acid, an unknown amino acid and further a compound shown by the formula. USE:An antibacterial agent especially against Gram-positive bacteria and acid-fast bacteria. PREPARATION:For example, Streptomyces polycarbophilus novel species (FERM P-788) capable of producing substance 135 is cultivated.

Description

【発明の詳細な説明】１１」二Δ泗」し交互本発明は医薬として有用な新規化合物に関する。[Detailed description of the invention] 11"2Δ泗" and alternate The present invention relates to novel compounds useful as pharmaceuticals.

従来の技術本発明の化合物は、文献未載の新規化合物である。Conventional technology The compound of the present invention is a novel compound that has not been described in any literature.

発明が解決しようとする問題点本発明は、抗菌作用、殊にスタフィロコッカス屈、サル
シナ属、バチイルス属等のダラム陽性菌、マイコバクテ
リウム属等の抗酸性菌等に対して抗菌作用を有する新規
物質を提供することを目的とする。Problems to be Solved by the Invention The present invention has an antibacterial effect, particularly against Durham-positive bacteria such as Staphylococcus spp., Sarcina spp., and Bacillus spp., and acid-fast bacteria such as Mycobacterium spp. The purpose is to provide new substances.

問題点を解決するための手段本発明者は、ストレプトミセス属に属する菌株の培養液
中に抗菌作用を有する１３５物質と称する抗生物質が生
産されていることを見出し、さらに詳細なる・研究の結
果、１３５物質より性状類似の４つの新規抗生物質１３
５−Ａ！、１３５−Ａ２．１３５ＣＩ及び１３５Ｃ２を
分離することに成功し、本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventor discovered that an antibiotic called 135 substance with antibacterial activity was produced in the culture solution of a strain belonging to the genus Streptomyces, and as a result of further detailed research. , 4 new antibiotics with properties similar to those of 135 substances 13
5-A! , 135-A2.135CI and 135C2 were successfully separated, and the present invention was completed.

即ち本発明は、酢酸塩が下記理化学的性質を有する１３
５物質及びその塩に係る。That is, the present invention provides an acetate having the following physical and chemical properties.
5 substances and their salts.

（イ）外観：白色粉末。(a) Appearance: White powder.

（ロ）融点：明瞭な融点を示さない。(b) Melting point: Does not show a clear melting point.

（ハ）公刊１：　１１７０〜１４４０（ファースト　ア
トム　　ボンバードメント　マス　スペクトル法）。(c) Publication 1: 1170-1440 (First Atom Bombardment Mass Spectrometry).

（ニ）溶解性：含水メタノール、ジメヂルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。(d) Solubility: Soluble in aqueous methanol, dimyl sulfoxide, and dimethylformamide. Poorly soluble in water. acetone,
Insoluble in ethyl acetate, chloroform and ether.

（ホ）呈色反応：ビウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、モリッシュ反応、ベネデイクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。(e) Color reaction: Positive for biuret reaction, Tollens reaction, xanthoprotein reaction, and Sakaguchi reaction. Negative for ninhydrin reaction, Morisch reaction, Benedikt reaction, Anthrone reaction, Pauli reaction, Ehrlich reaction, and nitroprusside reaction.

くべ）元素分析値二ｌ−１；６．６２〜７．１２％、Ｃ
：４５．６５〜４６．４０％、Ｎ：１４．９９〜１５．４１％。) Elemental analysis value 2l-1; 6.62-7.12%, C
:45.65-46.40%, N:14.99-15.41%.

（ト）塩基性、酸性、中性の区別：中性。(g) Distinction between basic, acidic, and neutral: neutral.

（チ）構成成分：グリシン、アラニン、スレオニン、ア
スパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を含み、更に式％式％で表わされる化合物を含む（酸加水分解による）。(H) Constituent components: Contains glycine, alanine, threonine, aspartic acid, and one type of unknown amino acid, and further includes a compound represented by the formula % (by acid hydrolysis).

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｒ＋＋＋＋に末端
吸収を示す。(S) Ultraviolet absorption spectrum: Shows terminal absorption at λ220r++++.

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４００．１６５５．１
５２０ＣＩｌｌ−’にペプチド特有の吸収を示す。(N) Infrared absorption spectrum Niji 3400.1655.1
520CIll-' shows absorption specific to the peptide.

（ル）高速液体クロマトグラフィ：下記分析条件におい
て保持時間５．０〜１３．０分にビ一りを与える。(l) High performance liquid chromatography: Under the following analysis conditions, a retention time of 5.0 to 13.0 minutes is given.

分析条件カラム；「マイクロボンダパック（μｍＢｏｎｄａｐａ
ｋ）　Ｃ１ａ　Ｊ　　（３，９Ｘ３００ｍｍ）（ウォー
ターズ社製、商標）。Analysis conditions Column: “Micro Bondapack (μmBondapa)
k) C1a J (3,9X300mm) (manufactured by Waters, trademark).

移動相：３５％アセトニトリル１０．１Ｍ塩化アンモニ
ウム溶液。Mobile phase: 35% acetonitrile in 10.1M ammonium chloride solution.

流速：２．０ｍ１ｌｌ／分。Flow rate: 2.0ml/min.

検出；ｕｖ−２２０ｒｖ。Detection; uv-220rv.

１３５物質は、Ａ＋　、Ａ２　、Ｃ＋及びＣ２の４種の
物質を総称するものであり、これら４種の物質は、それ
ぞれスタフィロコッカス　アウレウス２０９°Ｐ　＜５
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ　　２０
９Ｐ）、サルシナ　ルティア（Ｓａｒｃｉｎａ　１ｕｔ
ｅａ　）、バチイルス　ズブティリス　６６３３　（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ　　６６３３）及びマ
イコ　バクテリウム６０７　（Ｈｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ　　６０７）に対して抗菌作用を示した。従って、
１３５物質は医薬として有用である。135 substances is a general term for four types of substances, A+, A2, C+, and C2, and these four types of substances are respectively related to Staphylococcus aureus 209°P <5
taphylococcus aureus 20
9P), Sarcina rutia (Sarcina 1ut)
ea), Bacillus subtilis 6633 (B
acillus subtilis 6633) and Mycobacterium 607 (Hycobacterium 607)
um 607). Therefore,
135 substances are useful as medicines.

１３５物質は、その理化学的研究の結果、塩基性のペプ
チド抗生物質に属し、グリシン、アラニン、スレオニン
、アスパラギン酸を含む他に、１種の未知アミノ酸と式で表わされる化合物を含有するＦｒ規抗生物質群である
ことが確認された。As a result of its physical and chemical research, Substance 135 belongs to basic peptide antibiotics, and in addition to containing glycine, alanine, threonine, and aspartic acid, it also contains one unknown amino acid and a compound represented by the formula. It was confirmed that it is a substance group.

１３５物質の理化学的性質を下記に示す。The physical and chemical properties of the 135 substances are shown below.

（り１３５　　Ａ＋動物質酢酸塩）（イ）外観：白色粉末。(Ri135 A+Animal Acetate) (a) Appearance: White powder.

（ロ）＠点：明瞭な融点を示さない。(b) @ point: Does not show a clear melting point.

（ハ）分子！：１２２７（ファースト　アトムボンバー
ドメント　マス　スペクトル法）。(c) Molecules! :1227 (First Atom Bombardment Mass Spectrometry).

〈二）溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水にｎ溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。(2) Solubility: Soluble in aqueous methanol, dimethyl sulfoxide, and dimethyl formamide. Soluble in water. acetone,
Insoluble in ethyl acetate, chloroform and ether.

（ホ）呈色反応：ビウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、モリツシユ反応、ベネデイクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。(e) Color reaction: Positive for biuret reaction, Tollens reaction, xanthoprotein reaction, and Sakaguchi reaction. Negative for ninhydrin reaction, Moritshu reaction, Benedikt reaction, Anthrone reaction, Pauli reaction, Ehrlich reaction, and nitroprusside reaction.

（へ）元素分析値：）Ｉ；６．６２％、Ｃ；４５．６５
％、Ｎ：１５．１６％。(f) Elemental analysis values:) I; 6.62%, C; 45.65
%, N: 15.16%.

（ト）塩基性、酸性、中性の区別：中性、但し遊離体は
塩基性。(g) Distinction between basic, acidic, and neutral: Neutral, but the free form is basic.

（チ）構成成分：グリシン、アラニン、スレオニン、ア
スパラギン酸及び１種の未知アミノ酸を含み、更に式で表わされる化合物を含む（酸加水分解による）。(H) Constituent components: Contains glycine, alanine, threonine, aspartic acid, and one type of unknown amino acid, and further includes a compound represented by the formula (by acid hydrolysis).

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｎｍに末端吸収を
示す。メタノール中、０．９００ｍＭ１０−の濃度で測
定したチャートを、第１図に示す。(S) Ultraviolet absorption spectrum: Shows terminal absorption at λ220nm. The chart measured at a concentration of 0.900 mM 10- in methanol is shown in FIG.

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４’０Ｏ１１６５５，
１５２０ｃｒＡ−’　ニヘ７チト特ａ（Ｄ吸収を示す。(nu) Infrared absorption spectrum niji 34'0O11655,
1520crA-' Nihe7cytospecial a (shows D absorption.

チャートを第５図に示す。A chart is shown in FIG.

（ル）高速液体クロマトグラフィ：下記分析条件におい
て保持時間５．０〜６．０分にピークを与える。(l) High performance liquid chromatography: Gives a peak at a retention time of 5.0 to 6.0 minutes under the following analysis conditions.

分析条件カラム：［マイクロボンダパック（μ−Ｂｏｎｄａｐａ
ｋ）　ｃｌ　ｓ　Ｊ　　（３，９Ｘ３００ｎ＋＋ｎ）（
ウォーターズ社製、商標）。Analysis conditions Column: [Micro Bondapak (μ-Bondapa
k) cl s J (3,9X300n++n) (
Manufactured by Waters, trademark).

流速；２．０ｍ１２／分。Flow rate: 2.0 m12/min.

検出：ＵＶ−２２０ｎ１１゜（ｉｉ）１３５−Ａ２物質（酢酸塩）（イ）外観：白色粉末。Detection: UV-220n11° (ii) 135-A2 substance (acetate) (a) Appearance: White powder.

（ハ）分子１ｉ：１１７０（ファースト　アトムボンバ
ードメント　マス　スペクトル法）。(c) Molecule 1i: 1170 (first atom bombardment mass spectrometry).

（ニ）溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。(d) Solubility: Soluble in aqueous methanol, dimethyl sulfoxide, and dimethyl formamide. Poorly soluble in water. acetone,
Insoluble in ethyl acetate, chloroform and ether.

（ホ）呈色反応：とウレット反応、トレンス反応、キサ
ントプロティン反応、坂口反応に陽性。ニンヒドリン反
応、モリッシュ反応、ベネディクト反応、アンスロン反
応、パウリ反応、エールリッヒ反応、ニトロプルシド反
応に陰性。(e) Color reaction: Positive for uret reaction, Tollens reaction, xanthoprotein reaction, and Sakaguchi reaction. Negative for ninhydrin reaction, Morisch reaction, Benedict reaction, Anthrone reaction, Pauli reaction, Ehrlich reaction, and nitroprusside reaction.

（へ）元素分析値ニド１：６．７８％、Ｃ：４６．１１
％、Ｎ：１４．９９％。(f) Elemental analysis value Nido 1: 6.78%, C: 46.11
%, N: 14.99%.

（ヂ）構成成分：グリシン、アラニン、スレオニン及び
１種の未知アミノ酸を含み、更に式％式％で表わされる化合物を含む（Ｍ加水分解による〉。(di) Constituent components: Contains glycine, alanine, threonine, and one type of unknown amino acid, and further includes a compound represented by the formula % (by M hydrolysis).

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｎｍに末端吸収を
示す。メタノール中、０．９３０ｍＭ１０田の濃度で測
定したチャートを、第２図に示す。(S) Ultraviolet absorption spectrum: Shows terminal absorption at λ220nm. The chart measured at a concentration of 0.930mM in methanol is shown in FIG.

（ヌ）赤外吸収スペクトルニジ３４００．１６５５．１
５２０ｃｍ−＋にペプチド特有の吸収を示す。チャート
を第６図に示す。(N) Infrared absorption spectrum Niji 3400.1655.1
It shows absorption peculiar to the peptide at 520 cm-+. The chart is shown in FIG.

（ル）高速液体クロマトグラフィ：上記（ｉ）に示した
条件において保持時間６．５〜７．５分にピークを示す
。(l) High performance liquid chromatography: Under the conditions shown in (i) above, a peak is shown at a retention time of 6.5 to 7.5 minutes.

（ｉｉｉ）１３５−Ｃ＋物質（酢酸塩）（イ）外観：白
色粉末。(iii) 135-C+ substance (acetate) (a) Appearance: white powder.

（ハ）分子ｆｆｉ：１４４０（ファースト　アトムボン
バードメント　マス　スペクトル法）。(c) Molecule ffi: 1440 (first atom bombardment mass spectrometry).

（へ）元素分析値：Ｈニア、０７％、Ｃ：４６．０２％、Ｎ：１５．４１％。(f) Elemental analysis value: H near, 07%, C: 46.02%, N: 15.41%.

（す）紫外吸収スペクトル：λ２２０ｎｍに末端吸収を
示す。メタノール中、１．１２２ｍｇ／１０鵬の濃度で
測定したチャートを、第３図に示す。(S) Ultraviolet absorption spectrum: Shows terminal absorption at λ220nm. A chart of measurements at a concentration of 1.122 mg/10 min in methanol is shown in FIG.

（ヌ）赤外吸収スペクトル法１〜ル００．１６５５．１
５２０ｃｎｒ’にペプチド特有ノ吸収を示す。チＡ７−
トを第７図に示す。(NU) Infrared absorption spectroscopy 1 to 00.1655.1
A peptide-specific absorption is shown at 520cnr'. Chi A7-
The diagram is shown in Figure 7.

（ル）高速液体クロマトグラフィ：上記（ｉ）に示した
条件にて保持時間ｉｏ、ｏ〜１１．０分にピークを示す。(l) High performance liquid chromatography: Under the conditions shown in (i) above, peaks are shown at retention times io and o to 11.0 minutes.

（ｉｖ）１３５−Ｃ２物質（酢Ｂ塩）（イ）外観：白色粉末。(iv) 135-C2 substance (vinegar B salt) (a) Appearance: White powder.

（口〉融点：明瞭な融点を示さない。(Melting point: Does not show a clear melting point.

（ハ）分子ｆｆｉ：１３８３（ファースト　アトムボン
バードメント　マス　スペクトル法）。(c) Molecule ffi: 1383 (first atom bombardment mass spectrometry).

（二〉溶解性：含水メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミドに可溶。水に難溶。アセトン、
酢酸エチル、クロロホルム、エーテルに不溶。(2) Solubility: Soluble in water-containing methanol, dimethyl sulfoxide, dimethyl formamide. Slightly soluble in water. Acetone,
Insoluble in ethyl acetate, chloroform and ether.

（へ）元素分析値：Ｈニア、１２％、Ｃ：４６．４０％、Ｎ；１５．１１％。(f) Elemental analysis value: H near, 12%, C: 46.40%, N: 15.11%.

（チ）構成成分：グリシン、アラニン、スレオニン及び
１種の未知アミノ酸を含み、更に式％式％で表わされる化合物を含む（酸加水分解による）。(h) Constituent components: Contains glycine, alanine, threonine, and one type of unknown amino acid, and further includes a compound represented by the formula % (by acid hydrolysis).

（す）紫外吸収スペクトル：２２２０ｎｌｌｌに末端吸
収を示す。メタノール中、１．０４０ｍＭ１０鵬の濃度
で測定したチャー１−を、第４図に示す。(S) Ultraviolet absorption spectrum: Shows terminal absorption at 2220nllll. Char 1- measured in methanol at a concentration of 1.040 mM 10 is shown in FIG.

（ヌ〉赤外吸収スペクトルニジ３４００．１６５５．１
５２０ｃｍ−’にペプチド特有の吸収を示す。チャート
を第８図に承り。(NU) Infrared absorption spectrum Niji 3400.1655.1
A peptide-specific absorption is shown at 520 cm-'. The chart is shown in Figure 8.

（ル）高速液体クロマトグラフィ：上記（ｉ）に示した
条件にて保持時間１１．５〜１３．０分にピークを示す。(l) High performance liquid chromatography: Shows a peak at a retention time of 11.5 to 13.0 minutes under the conditions shown in (i) above.

本発明の１３５物質は、１３５物質生産菌を培地に培養
し、得られる培養物から、１３５物質を分離、採取する
ご仁により製造することができる。The 135 substance of the present invention can be produced by culturing the 135 substance producing bacteria in a medium and separating and collecting the 135 substance from the resulting culture.

１３５物質生産菌の一例として、発明者らが中華人民共
和国広東省湛江市の土壌から新たに分離したストレプト
ミセス属に属する菌株を挙げることができる。この１３
５物質生産菌の菌学的性質は次の通りである。An example of the 135 substance-producing bacteria is a strain belonging to the genus Streptomyces that was newly isolated by the inventors from the soil of Zhanjiang City, Guangdong Province, People's Republic of China. This 13
The mycological properties of the bacteria producing the five substances are as follows.

Ａ　形態学的性質（ａ）胞子形成菌糸の分技法二単純分枝。A Morphological properties (a) Division technique of spore-forming hyphae Two simple branching.

（ｂ）胞子形成の形態：直鎖状、あるいは鉤状、輪生技
は認められない。(b) Morphology of sporulation: Straight chain or hooked, no whorl formation observed.

（Ｃ）胞子の数：約３〜１８個。(C) Number of spores: about 3-18.

（ｄ）胞子の表面構造：平滑。(d) Spore surface structure: smooth.

（ｅ）胞子の大きさ二０．５〜０．８×０．８〜１．０
ミクロン。(e) Spore size 2 0.5-0.8 x 0.8-1.0
micron.

（ｆ）鞭毛胞子の有無：認められない。(f) Presence or absence of flagellar spores: Not observed.

（ｇ）胞子のうの有無：認められない。(g) Presence or absence of sporangia: Not observed.

（ｈ）胞子柄の着生位置：気菌糸上。(h) Spore stalk epiphyte location: on aerial hyphae.

（ｉ）菌核形成性の有無：認められない。(i) Presence or absence of sclerotia formation: Not observed.

Ｂ　各種培地上の性状および生態学的性質（ａ）シュク
ロース・１Ｉ７１１１ｉ１２塩寒天培地発育：良好。B Properties and ecological properties on various media (a) Sucrose/1I7111i12 salt agar medium Growth: Good.

気中菌糸の色：わずかに淡紅色を帯びた淡黄白色。Color of aerial mycelium: pale yellowish white with a slight pinkish tinge.

畢生菌糸の色：明るい赤味茶。Color of mycelium: Bright reddish brown.

可溶性色素：わずかに赤味茶を帯びる程度。Soluble pigment: Slightly reddish brown.

（ｂ）グルコース・アスパラギン寒天培地発育：普通。(b) Growth on glucose-asparagine agar medium: normal.

気中菌糸の色：着生せず。Color of aerial mycelium: No epiphyte.

畢生菌糸の色：薄黄茶。Color of hyphae: Light yellowish brown.

可溶性色素：産生けず。Soluble pigment: production waste.

（Ｃ）グリセリン・アスパラギン寒天培地＜ｌ５ＰＮｏ
、５）発育：普通。(C) Glycerin-asparagine agar medium <l5PNo
, 5) Growth: Normal.

気中菌糸の０二着生せず。No epiphyte of aerial hyphae.

畢生菌糸の色：薄黄茶。Color of hyphae: Light yellowish brown.

可溶性色素：産生ぜず。Soluble pigment: production.

（ｄ）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、４
）発育：貧弱。(d) Starch/inorganic salt agar medium (ISP No. 4
) Development: Poor.

気中菌糸の色：わずかに白色。Color of aerial mycelium: slightly white.

畢生菌糸の色：無色。Color of hyphae: Colorless.

可溶性色素：産生せず。Soluble pigment: Not produced.

（ｅ）チロシン寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、７）発育：
良好。(e) Tyrosine agar medium (ISP No. 7) Growth:
Good.

（［）栄養寒天培地発育：良好。([) Nutrient agar medium Growth: Good.

気中菌糸の色：＠生ぜず。Color of aerial hyphae: ＠No growth.

畢生菌糸の色：薄黄茶。Color of hyphae: Light yellowish brown.

可溶性色素：産生せず。Soluble pigment: Not produced.

（ａ）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、２）
発育：良好。(a) Yeast/malt agar medium (ISP No. 2)
Growth: Good.

畢生菌糸の色二明るい赤味茶。The color of mycelium is bright reddish brown.

（ｈ）オートミール寒天培地（ＩＳＰ　　Ｎｏ、３）発
育：中等度。(h) Oatmeal agar medium (ISP No. 3) Growth: Moderate.

気中菌糸の色：白色。Color of aerial mycelium: white.

畢生菌糸の色：無色。Color of hyphae: Colorless.

可溶性色素：産生せず。Soluble pigment: Not produced.

ｍクラシニコフＮ　ｏ、　１寒天培地発育：良好。mKrashnikov N o, 1 agar medium Growth: Good.

気中菌糸の色：淡黄白色。Color of aerial hyphae: pale yellowish white.

畢生菌糸の色：明るい苦役。Color of hyphae: Bright drudgery.

可溶性色素：産生せず。Soluble pigment: Not produced.

（ｊ）ベネット寒天培地発育：良好。(j) Bennett agar medium Growth: Good.

可溶性色素：産生せず。Soluble pigment: Not produced.

Ｃ生理学的諸性質（ａ）生育温度範囲＝１５〜３７℃（至適温度＝２７〜
３０℃）。C Physiological properties (a) Growth temperature range = 15-37°C (optimal temperature = 27-37°C
30℃).

（ｂ）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラチン
培地上）：陰性。(b) Liquefaction of gelatin (on glucose-peptone gelatin medium): negative.

（Ｃ）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
上）：陽性。(C) Hydrolysis of starch (on starch/inorganic salt agar medium): Positive.

（ｄ）セルロースの分解＝ｗＡ性。(d) Decomposition of cellulose = wA property.

（ｅ）　ｍ脂乳の凝固：陽性（弱い）。(e) Coagulation of fatty milk: positive (weak).

（ｆ）脱脂乳のペプトン化：陽性（強い）。(f) Peptonization of skim milk: positive (strong).

（０）硝酸塩の還元：陽性。(0) Nitrate reduction: Positive.

（ｈ）メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地及びペ
プトン・イースト鉄寒天培地上）：いずれも陰性。(h) Production of melanin-like pigment (on tyrosine agar medium and peptone yeast iron agar medium): Negative in both cases.

（ｉ）硫化水素の産生（ペプトン・イースト鉄寒天培地
上）：陰性。(i) Production of hydrogen sulfide (on peptone yeast iron agar): negative.

Ｄ　各炭素源の利用性（ブリドハム・ゴドリーブ寒天培
地上）（ａ）　Ｌ−アラビノース：＋。D Availability of each carbon source (on Bridham-Godelive agar medium) (a) L-arabinose: +.

（ｂ）　Ｄ−キシロース：＋。(b) D-xylose: +.

（ｃ）　Ｄ−グルコース：＋。(c) D-glucose: +.

（ｄ）　Ｄ−フラクトース：＋。(d) D-fructose: +.

（ｅ）シュクロース；→−０（ｆ）イノシトール：十。(e) Sucrose; →-0 (f) Inositol: 10.

（Ｕ）　Ｌ−ラムノース：＋。(U) L-rhamnose: +.

（ｈ）ラフィノースニート。(h) Raffinose neat.

（ｉ）　Ｄ−マンニツト二十。(i) D-Mannit 20.

上記において、＋は利用Ｊることを示す。In the above, + indicates use.

Ｅ　全菌体加水分解物中にり、Ｌ−ジアミノピメリン酸
が存在する。E L-diaminopimelic acid is present in the whole bacterial cell hydrolyzate.

以上のような菌学的性質を有する１３５物質生産菌につ
いて、シェージングらのインターナショナル　ジャーナ
ル　システマテイク　バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　　Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）１里、３１３−３４０
．１９６６、同じく１８，３４２．１９６８、同じく１
旦、４４７．１９６９．同じく２２．２９６．１９７２
、ワックスマンのアクチノマイセテス（Ｔｈｅ＾ｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　）　２．１９６１、バッハマンの
バーシーズ　マニュアル　オブ　デイタミネイティブ　
バクテリオロジー第８版（Ｂｅｒｇｅｙ’　５ｔ４ａｎ
ｕａｌ　　ｏｆ　　Ｄｅｔｅｒｌｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ。The 135 substance-producing bacteria with the above-mentioned mycological properties were described in the International Journal Systematic Bacteriology (International Journal of Systematic Bacteriology) by Schersing et al.
ational Journal Systemat
icBacteriology) 1ri, 313-340
．． 1966, also 18,342.1968, also 1
Dan, 447.1969. Also 22.296.1972
, Waxman's Actinomycetes (The＾cti
nomycetes) 2.1961, Bachmann's Manual of Determinants
Bacteriology 8th edition (Bergey' 5t4an
ual of Deterlnative Bac
teriology.

８ｔｈ　　ｅｄｉｔｉｏｎ　）により検索した。その結
果、１３５物質生産菌は、ストレプトミセス属に属する
ことが明らかになった。また、１３５物質生産菌に特に
近縁するものと［）ては、ストレプトミセス　ロンジス
ボロフラバス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｏｎｇｉｓ
ｐδｒｏＮａｖｕｓ）　、ストレプトミセス　ロンジシ
ミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓ　　Ｉｏｎｇｉｓｓｉ
ｎ＋ｕｓ　）及びストシブｌヘミセス　フルビシミス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｕｌｖｉｓｓｉｍｕｓ　）
が挙げられるが、これらと１３５物質生産菌とは以下の
諸点において異なることも明らかになった。8th edition). As a result, it was revealed that the 135 substance-producing bacteria belonged to the genus Streptomyces. In addition, Streptomyces longis boroflavas (Streptomyces longis) is particularly closely related to 135 substance-producing bacteria.
pδroNavus), Streptomycas Iongissi
n+us) and Stociblhemyces fluvicimis (
Streptomyces fulvissimus)
However, it was also revealed that these and the 135 substance-producing bacteria differ in the following points.

これらの各国の比較を下記第１表に示す。A comparison of these countries is shown in Table 1 below.

第１表中の炭素源の利用性において、＋は利用すること
を、士はおそらく利用することを、−は利用しないこと
を、それぞれ示す。Regarding the availability of carbon sources in Table 1, + indicates that the carbon source will be used, ≦ indicates that it will probably be used, and - indicates that it will not be used.

第１表から明らかな通り、１３５物質生産菌は、ストレ
プトミセス　ロンジスボロフラバスとの比較では胞子形
成の形態、ゼラチンの液化、炭素源の利用性（シュクロ
ース、ラフィノース）において、ストレプトミセス　ロ
ンジシミスとの比較ではメラニン様色素の生成（ペプト
ン・イースト鉄寒天培地）、可溶性色素の産生において
、またストレプトミセス　フルビシミスとの比較ではメ
ラニン様色素の生成（ペプトン・イースト鉄寒天培地）
、硫化水素の産生、炭素源の利用性（Ｄ−キシロース、
ラフィノース）において、それぞれ明確に相違している
。As is clear from Table 1, the 135-substance producing bacterium is superior to Streptomyces longissimis in sporulation form, gelatin liquefaction, and carbon source availability (sucrose, raffinose) when compared with Streptomyces longisboroflabus. production of melanin-like pigments (peptone-yeast iron agar) and soluble pigments, and production of melanin-like pigments (peptone-yeast iron agar) in comparison with Streptomyces fluvicimis.
, hydrogen sulfide production, carbon source availability (D-xylose,
Raffinose) are clearly different from each other.

これらの結果から、本発明者は、１３５物質生産菌をス
トレプトミセス属に属する新種であると認め、ストレプ
トミセス　ポリ力ルポフイルスノーベル　スピーシーズ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉ
ｌｕｓ　　ｎｏｖｅｌ　５ｐｅｃｉｅｓ　）と命名した
。Based on these results, the present inventor recognized the 135 substance-producing bacterium as a new species belonging to the genus Streptomyces, and identified it as Streptomyces polycarbophylnobel sp.
lus novel 5pecies).

この１３５物質生産菌は、工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号微工研条寄第７８８号（ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−７８８）として寄託されている。　本発明で使用す
る上記１３５物質生産菌は、例えばＸ線、紫外線等の照
射処理やナイトロジエンマスタード、アザセリン、亜硝
酸、Ｎ−メヂル−Ｎ’　−二トローＮ−ニトロソグアニ
ジン（ＮＴＧ）、２−アミノプリン等の変異誘起剤処理
、形質導入、形質転換、接合等の通常用いられる変異処
理によって１３５物質の生産能力を高めることができる
。These 135 substance-producing bacteria were given accession number 788 (FERM B) to the Institute of Microbial Technology, Agency of Industrial Science and Technology.
P-788). The above-mentioned 135 substance-producing bacteria used in the present invention are treated with irradiation such as X-rays and ultraviolet rays, nitrogen mustard, azaserine, nitrous acid, N-medyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG), 2- The production capacity of the 135 substance can be increased by commonly used mutation treatments such as treatment with a mutagenic agent such as aminopurine, transduction, transformation, and conjugation.

次に、本発明の１３５物質を例えば上記のようなストレ
プトミセス属に属する１３５物質生産菌を培地に培養す
ることによって製造する場合について説明する。Next, a case will be described in which the 135 substance of the present invention is produced by culturing, for example, the above-mentioned 135 substance producing bacteria belonging to the genus Streptomyces in a medium.

培養方法は、原則的には一般微生物の培養方法に準する
が、通常は液体培地による撹拌通気培養法が有利である
。培養に用いられる培地としては１３５物質生産菌が利
用し得る栄養源を含有する培地であればよい。すなわち
、合成培地、半合成培地或いは天然培地が使用できる。The culture method is basically based on the culture method of general microorganisms, but a stirring aeration culture method using a liquid medium is usually advantageous. The medium used for culturing may be any medium containing a nutrient source that can be used by the 135 substance-producing bacteria. That is, a synthetic medium, a semi-synthetic medium or a natural medium can be used.

培地の組成は、炭素源としては例えばグルコース、マン
ノース、グリセリン、シュクロース、糖蜜、澱粉、液化
澱粉等が用いられ、窒素源としては肉エキス、カザミノ
酸、ペプトン、グルテンミール、コーンミール、綿実油
、大豆粉、コースチーブリカー、乾燥酵母、リン酸アン
モニウム、硫酸アンモニウム、尿素等が用いられる。ま
た、例えばリン酸水素二ナトリウ゛ム、リン酸二水素カ
リウム、炭酸カルシウム、塩化マグネシウム等の金属の
リン酸塩、炭酸塩、塩化物等の無ｖ１塩も必要に応じて
添加される。また、培養中発泡の著しい時には、例えば
大豆油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テト
ラデカノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール類
、シリコン化合物等の消泡剤を適宜添加してもよい。１
３５物質生産菌は、２０〜３７℃で生育する。１３５物
質の産生のためには、２５〜３７℃の範囲で培養するの
が好ましい。本培養の培養時間は、５０〜１００時間程
度が適当であり、培地の濃厚化に従って培養時間を更に
延長してもよい。撹拌通気培養で通常行なわれるように
培地へ滅菌空気を吹き込むのがよい。微生物の効率的生
育のためには、タンク培養に用いる空気最を１分間あた
り栄養培地１容全部に対して０．３〜０．６容足部程度
用い、毎分２００〜４００回転程度で撹拌すればよい。The composition of the medium includes, for example, glucose, mannose, glycerin, sucrose, molasses, starch, liquefied starch, etc. as carbon sources, and meat extract, casamino acids, peptone, gluten meal, corn meal, cottonseed oil, etc. as nitrogen sources. Soy flour, coarse liquor, dry yeast, ammonium phosphate, ammonium sulfate, urea, etc. are used. In addition, non-V1 salts such as metal phosphates, carbonates, and chlorides, such as disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, calcium carbonate, and magnesium chloride, may also be added as necessary. In addition, when foaming is significant during culture, antifoaming agents such as vegetable oils such as soybean oil and linseed oil, higher alcohols such as octadecanol, tetradecanol, and heptadecanol, and silicon compounds may be added as appropriate. . 1
35 substance-producing bacteria grow at 20-37°C. For production of the 135 substance, it is preferable to culture at a temperature in the range of 25 to 37°C. The culture time for the main culture is suitably about 50 to 100 hours, and the culture time may be further extended as the medium becomes more concentrated. Sterile air may be blown through the medium as is commonly done in aerated aerated culture. For efficient growth of microorganisms, the amount of air used for tank culture should be used at about 0.3 to 0.6 volumes per minute per full volume of nutrient medium, and stirred at about 200 to 400 revolutions per minute. do it.

以上述べた培養条件は使用菌株の特性に応じてそれぞれ
ＲＡの条件を選択して適用される。The culture conditions described above are applied by selecting RA conditions depending on the characteristics of the bacterial strain used.

次に、このようにして得られた１３５物質生産菌の培養
物から１３５物質を分離、精製する方法について述べる
。１３５物質の分離、精製は、微生物の培養物から抗生
物質を分離、精製する公知の手段を適宜選択し組合せる
ことにより行なうことができる。すなわち減圧濃縮、凍
結乾燥、溶媒抽出、液性交換例えば陽イオン交換樹脂、
隙イオン交換樹脂、非イオン交換性吸着樹脂等の樹脂に
よる処理、活性炭、けい酸、シリカゲル、アルミナ等の
吸着剤による処理、あるいは結晶化、再結晶等の各種手
段を単独あるいは任意の順序に組合せまた反復して用い
ることにより、１３５物質の分離、精製を行なうことが
できる。Next, a method for separating and purifying Substance 135 from the thus obtained culture of Substance 135-producing bacteria will be described. The separation and purification of the 135 substances can be carried out by appropriately selecting and combining known means for separating and purifying antibiotics from microbial cultures. i.e. vacuum concentration, freeze drying, solvent extraction, liquid exchange such as cation exchange resin,
Treatment with resins such as ion-exchange resins and non-ion-exchange adsorption resins, treatment with adsorbents such as activated carbon, silicic acid, silica gel, alumina, and various methods such as crystallization and recrystallization may be used singly or in combination in any order. Moreover, by repeated use, 135 substances can be separated and purified.

１３５物質は遊離体または各種塩の形態とすることがで
きる。１３５物賀に用いられる塩としては、医薬上で通
常用いる塩を意味し、例えばナトリウム、カリウム、リ
チウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム
等のアルカリ土類金属塩、及びトリメチルアミン、トリ
エチルアミン等の有機アミン塩等を、また用いられる酸
としては塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸塩あるいはギ酸、
酢酸、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、パラ
トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の石礫酸塩等
を挙げることができる。The 135 substance can be in the form of an educt or various salts. The salts used in 135 Monoga refer to salts commonly used in medicine, such as alkali metal salts such as sodium, potassium, and lithium, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium, and organic salts such as trimethylamine and triethylamine. Amine salts, etc., and acids used include inorganic acid salts such as hydrochloric acid, nitric acid, and sulfuric acid, or formic acid,
Examples include pelagic acid salts such as acetic acid, oxalic acid, maleic acid, succinic acid, tartaric acid, p-toluenesulfonic acid, and trifluoroacetic acid.

実　　施　　例次に、実施例及び参考例を挙げて本発明をより具体的に
説明する。EXAMPLES Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples and Reference Examples.

参考例１中華人民共和国広東省湛江市にて地表より５〜１５ｃｍ
の深さの土壌的１〜２ｇを採取した。この土壌０．５ｇ
を試験管に入れ、５鵬の滅菌生理食塩水を加えてよく振
り混ぜ、静置した後、上清液１滴を滅菌生理食塩水１ｍ
１２の入ったシャーレに加えた。更にあらかじめ加温溶
解して約４５℃に調整したマルトース−酵母エキス寒天
培地１０鵬を加えてよく混和し、放冷凝固させた。この
平板を２７℃で４日間培養し、顕微鏡下で放線菌を選択
して採取し、寒天培地で２７℃で純培養を行ない、１３
５物質生産菌（ストレプトミセス　ポリカルボフィルス
　ノーへル　スピーシーズ、微工研条寄第７８８号）を
得た。Reference example 1 5 to 15 cm from the ground surface in Zhanjiang City, Guangdong Province, People's Republic of China
1 to 2 g of soil was collected at a depth of . 0.5g of this soil
into a test tube, add 5 liters of sterile physiological saline, shake well, let stand, then add 1 drop of supernatant to 1 ml of sterile physiological saline.
It was added to a petri dish containing No. 12. Further, 10 pieces of maltose-yeast extract agar medium, which had been heated and dissolved in advance and adjusted to about 45°C, were added, mixed well, and allowed to cool and solidify. This plate was cultured at 27°C for 4 days, and actinomycetes were selected and collected under a microscope, and pure culture was performed at 27°C on an agar medium.
5 substance-producing bacteria (Streptomyces polycarbophilus Norhele species, FEIKEN JOKYO No. 788) were obtained.

実施例１グルコース１．０％、大豆粉１．０％、塩化ナトリウム
０．５％、炭酸カルシウム０．１％の組成を有する液体
培地１００ｗ＋＋２に上記ストレプトミセス　ポリカル
ボフィルス　ノーベル　スピーシーズを接種し、２８℃
で７２時間ｉｎ培養し、前培養液を作製した。Example 1 The above Streptomyces polycarbophilus Nobel sp. ℃
The cells were cultured for 72 hours to prepare a preculture solution.

魚粉１．５％、グルコース１．０％、スターチ１．０％
、硫酸アンモニウム０．５％、塩化ナトリウム０．５％
、炭酸カルシウム０．５％の組成を有する液体培地１０
０Ｑを２００Ｑ容のＰｆＪ醇槽に入れ、これに前記の前
培養液１Ｑを接種し、２８℃で９６時間培養を行なった
。通気量は６０Ｑ／分、回転数は２５　Ｏｒ、ｐ、ｍ、
である。Fish meal 1.5%, glucose 1.0%, starch 1.0%
, ammonium sulfate 0.5%, sodium chloride 0.5%
, liquid medium 10 having a composition of 0.5% calcium carbonate
0Q was placed in a 200Q volume PfJ tank, inoculated with the pre-culture solution 1Q, and cultured at 28°C for 96 hours. Airflow rate is 60Q/min, rotation speed is 25 Or, p, m,
It is.

以下、スタフィロコッカス　アウレウス２０９Ｐに対す
る抗菌活性を指標として、活性物質を分離した。Hereinafter, active substances were separated using antibacterial activity against Staphylococcus aureus 209P as an index.

培′Ｍ終了後、＠養物をシュウ酸でｐＨ２，０に調整し
、激しく撹拌した。濾過した後、５Ｎ水酸化ナトリウム
溶液にてｐＨ６，５に調整し、沈殿物を除去した。滑液
を陽イオン交換樹脂［ダウエックス５０ＷＸ８Ｊ　　（
ダウケミカル社製、商標）のカラムに通じ活性物質を吸
着させた。After completing the culture, the pH of the culture was adjusted to 2.0 with oxalic acid, and the mixture was vigorously stirred. After filtration, the pH was adjusted to 6.5 with 5N sodium hydroxide solution, and the precipitate was removed. Synovial fluid was treated with cation exchange resin [DOWEX 50WX8J (
The active substance was adsorbed through a Dow Chemical Company (trademark) column.

少量の水にて洗浄した後、０．４％の酢酸を含むアセ１
ヘンにて活性物質を溶出さけた。アセトンを減圧留去し
た後再度５Ｎ＊酸化ナトリウム溶液にてｐｉ−１３，２
に調整し、遠心分離にて沈１股物を除去した。更に、こ
の上清液を５Ｎ水酸化ナトリウムにてｐＨ７，５に調整
ししばらく放置すると、活性物質が析出した。沈澱物を
炉別し、０．０５Ｎ塩酸に再溶解して不溶物を除いた。After washing with a small amount of water, add Ace1 containing 0.4% acetic acid.
The active substance was eluted at 100 ml. After distilling off the acetone under reduced pressure, pi-13,2 was added again with 5N* sodium oxide solution.
The precipitate was removed by centrifugation. Furthermore, this supernatant liquid was adjusted to pH 7.5 with 5N sodium hydroxide and left for a while to precipitate the active substance. The precipitate was separated in a furnace and redissolved in 0.05N hydrochloric acid to remove insoluble materials.

この酸性溶液に陰イオン交換樹脂［７ンバーライトｒ　
ＲＡ−４１１Ｊ（ＯＨ型）（ローム　アンド　ハース社
製、商標〉を加えてｐｌ−１４，０に調整し、溶液を凍
結乾燥して白色粗粉末３．２５ｇを得た。Add anion exchange resin [7 Amberlite R] to this acidic solution.
RA-411J (OH type) (manufactured by Rohm and Haas, trademark) was added to adjust the PL to 14.0, and the solution was freeze-dried to obtain 3.25 g of white coarse powder.

実施例２実施例１で得られた粗粉末１ｇを陽イオン交換樹脂ｒＣ
Ｍ−トヨパールＪ　　（ＮＨ４÷型）　（東洋四速工業
（ｔｌＪ、商標）のカラムに通じ、塩化アンモニウムの
０．１Ｎから１．ＯＮまでの勾配溶出を行なうと、活性
のみられるＡ画分とＣ画分がそれぞれ分離して溶出した
。Ａ画分及びＣ画分をそれぞれ独立にクロマトグラフィ
用樹脂ｒＭｃ　Ｉｇｅｌ　Ｃ１−ＩＰ−２０ｐＪ　　（
三菱化成工業ｖＬＪ製、商標）に通じて吸着させた。水
洗した後０．２５％のトリフルオロ酢酸を含む７０％ア
セトニトリル水溶液にて溶出するとＡ画分からは１３５
　　Ａ＋物質と１３５Ａ２物質とが分離して溶出し、ま
たＣ画分からは１３５−Ｃ＋物質と１３５−Ｃ２物質と
が分離して溶出した。これら４つの活性物質をそれぞれ
集めて、凍結乾燥し１３５−Ａ＋＋質３０ｍｇ、１３５
　　Ａ２物質２０ｍ！＋、１３５−Ｃ＋物物質５０ｍ反
び１３５　　Ｃ２物質２０ｍｇをそれぞれトリフルオロ
酢酸塩として得た。Example 2 1 g of the coarse powder obtained in Example 1 was added to a cation exchange resin rC.
M-Toyopearl J (NH4÷ type) (Toyo Yosso Kogyo Co., Ltd. (tlJ, trademark)) When gradient elution is performed from 0.1N to 1.ON of ammonium chloride, active A fraction and C The fractions were separated and eluted.The A fraction and C fraction were each independently chromatographic resin rMc Igel C1-IP-20pJ (
Mitsubishi Chemical Industries vLJ (trademark) was used for adsorption. After washing with water and eluting with a 70% acetonitrile aqueous solution containing 0.25% trifluoroacetic acid, 135
A+ substance and 135A2 substance were separated and eluted, and from the C fraction, 135-C+ substance and 135-C2 substance were separated and eluted. These four active substances were each collected and lyophilized to give 30 mg of 135-A++ substance, 135
A2 material 20m! +, 135-C+ substance and 50 mg of 135-C2 substance were each obtained as trifluoroacetate.

実施例３実施例１で得られた粗粉末１ｇを前記ｒＣＭ−トヨパー
ル」のカラムに通じ、塩化アンモニウムの０．ＩＮから
１．ＯＮまでの勾配溶出により活性のみられるＡ画分と
Ｃ画分の粗精製品を得た。Example 3 1 g of the crude powder obtained in Example 1 was passed through the rCM-Toyopearl column, and 0.0 g of ammonium chloride was added. 1 from IN. By gradient elution up to ON, crude products of fraction A and fraction C, which showed activity, were obtained.

これらをそれぞれ３０％アセトニトリル水溶液にて１０
ｍ１Ｕ／ｍ１２の濃度に溶解し、高速液体クロマトグラ
フに付して活性のみられるピークを分取精製した。用い
た分取条件は次の通りである。These were each mixed with 30% acetonitrile aqueous solution for 10
It was dissolved at a concentration of m1U/m12 and subjected to high performance liquid chromatography to separate and purify the active peak. The preparative separation conditions used were as follows.

カラム＝「ラジアルバック（Ｒａｄｉａｌ　−ＰＡＫ　
）Ｃ＋ａＪ（ウォーターズ社製、商標）（８×１００ｍ
ｎ＋）ａ移動相：２５％アセトニトリル１０．１Ｍ塩化アンモニ
ウム（Ａ画分の場合）。３２％アセ］へニトリル１０．
１ＭｊＷ化アンモニウム（Ｃ画分の場合）。Column = “Radial-PAK
) C+aJ (manufactured by Waters, trademark) (8 x 100 m
n+)a Mobile phase: 25% acetonitrile 10.1M ammonium chloride (for A fraction). 32% ace]henitrile 10.
1MjW ammonium (for C fraction).

流速＝１．５鵬／ｍｉｎ。Flow rate = 1.5p/min.

検出二Ｕ■−２２ＯｎＩｉ０Ａ画分については１２〜１４分及び１４〜１６分の溶出
液を分取し、それぞれＡ１両分及びＡ２画分とした。ま
たＣ画分については１１〜１３分及び１３〜１５分の溶
出液を分取し、それぞれＣ１画分および及び０２両分と
した。これら４種の溶出液は、ロータリーエバポレータ
にてアセトニトリルを留去した後、それぞれ独立に前記
［ＭＣ’　ＩΩ８１　　ＣＨＰ〜２０ｐＪのカラムに通
じて吸着させた。水洗を十分に行なった後、アセトニト
リル／酢酸／水（４０：０．５：６０）にて活性成分を
それぞれ溶出させた。各溶出液をロータリーエバポレー
タにてアセトニトリルを留去した後、凍結乾燥すること
により、１３５−Ａ＋＋質１０ｍｇ、１３５　　Ａ２物
質６ａａ、１３５−Ｃ＋物物質１６ｍ尺び１３５　　Ｃ
２物質８ｍａをそれぞれ酢酸塩として得た。As for the detection 2U■-22OnIi0 A fraction, the eluates from 12 to 14 minutes and from 14 to 16 minutes were fractionated and designated as A1 fraction and A2 fraction, respectively. Regarding the C fraction, eluates from 11 to 13 minutes and from 13 to 15 minutes were fractionated and designated as C1 fraction and 02 fraction, respectively. After distilling acetonitrile off from these four eluates using a rotary evaporator, they were each independently adsorbed through the [MC' IΩ81 CHP~20 pJ column. After thorough washing with water, the active ingredients were eluted with acetonitrile/acetic acid/water (40:0.5:60). After distilling off acetonitrile from each eluate using a rotary evaporator, lyophilization was performed to obtain 10 mg of 135-A++ substance, 6 aa of 135 A2 substance, and 16 m long 135 C+ substance.
Two substances, 8 ma, were obtained as acetate salts, respectively.

[Brief explanation of drawings]

第１〜４図は、それぞれ１３５−Ａ＋動物質１３５Ａ２
物質、１３５−Ｃ＋物質及び１３５Ｃ２物質の各酢酸塩
のメタノール中での紫外吸収スペクトルを示す。第５〜
８図は、それぞれ１３５　　Ａ＋動物質１３５　　Ａ２
物質、１３５−Ｃ１物質及び１３５　　Ｇ２物質の各酢
酸塩の臭化カリウム錠で測定した赤外吸収スペクトルを
示す。（以　上）第１図ジ皮号（ｎｍ）第２図ミ皮　表（ｎｍ）第３図仮長（ｎｍ）第４図Figures 1 to 4 are 135-A + animal matter 135A2, respectively.
1 shows the ultraviolet absorption spectra of acetate salts of the substance, 135-C+ substance, and 135C2 substance in methanol. 5th~
Figure 8 shows 135 A + animal matter 135 A2, respectively.
2 shows infrared absorption spectra measured on potassium bromide tablets of acetate salts of Substance 135-C1 and Substance 135-G2. (That's all) Figure 1 Dimensions (nm) Figure 2 Dimensions (nm) Figure 3 Temporary length (nm) Figure 4

Claims

[Scope of Claims] [1] 135 substances and their salts whose acetates have the following physical and chemical properties. (a) Appearance: White powder. (b) Melting point: Does not show a clear melting point. (c) Molecular weight: 1170 to 1440 (first atom bombardment mass spectrometry). (d) Solubility: Soluble in aqueous methanol, dimethyl sulfoxide, and dimethyl formamide. Poorly soluble in water. acetone,
Insoluble in ethyl acetate, chloroform and ether. (e) Color reaction: Positive for Biuret reaction, Tollens reaction, xanthoprotein reaction, and Sakaguchi reaction. Negative for ninhydrin reaction, Moritshu reaction, Benedikt reaction, Anthrone reaction, Pauli reaction, Ehrlichi reaction, and nitroprusside reaction. (f) Elemental analysis values: H: 6.62-7.12%, C: 4
5.65-46.40%, N; 14.99-15.41%. (g) Distinction between basic, acidic, and neutral: neutral. (h) Constituent components: Contains glycine, alanine, threonine, aspartic acid, and one unknown amino acid, and also contains a compound represented by the formula ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼ (by acid hydrolysis). (li) Ultraviolet absorption spectrum: Shows terminal absorption at λ220 nm. (N) Infrared absorption spectrum: Shows peptide-specific absorption at ν3400, 1655, and 1520 cm^-^1. (l) High performance liquid chromatography: Gives a peak at a retention time of 5.0 to 13.0 minutes under the following analysis conditions. Analysis conditions column; "Micro Bondapak C_1_8" (3.9 x 300 mm
) (manufactured by Waters, trademark). Mobile phase: 35% acetonitrile/0.1M ammonium chloride solution. Flow rate: 2.0ml/min. Detection; uv-220nm. [2] The molecular weight is 1227, the elemental analysis values are H: 6.62%, C: 45.65%, N: 15.16%, and the retention time in high performance liquid chromatography is 5.0 to 6.0 minutes. Claim 1
135 substances and their salts described in Section 1. [3] The molecular weight is 1170, the elemental analysis values are H: 6.78%, C: 46.11%, N: 14.99%, and the retention time in high performance liquid chromatography is 6.5 to 7.5 minutes. Claim 1
135 substances and their salts described in Section 1. [4] The molecular weight is 1440, the elemental analysis values are H: 7.07%, C: 46.02%, N: 15.41%, and the retention time of high performance liquid chromatography is 10.0 to 11.0 minutes. 135 substance and its salt as set forth in claim 1. [5] The molecular weight is 1383, the elemental analysis values are H: 7.12%, C: 46.40%, N: 15.11%, and the retention time in high performance liquid chromatography is 11.5 to 13.0 minutes. 135 substance and its salt as set forth in claim 1.