JPS62500380A - 抗ウィルスペプチド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗ウイルスペプチド類 ペプチド類含有組成雰、並びにウィルス感染症の治療をはじめとする使用方法に 関する。

背景技術 一般に、抗ウイルス療法は、二つの異なるけれども相関々係のある経路で行なわ れてきた。第一は、ウィルス／宿主細胞間の相互作用に直接影響を及ぼすことに より感染阻止手段として作用する化合物の発展である。第二は、宿主生物のレベ ルにおいてウィルスの進入を防止するか、あるいはウィルスクリアランス能を筒 めるように宿主免疫機能を改善するものであって、更に広範囲にわたる。両アブ 四−チともに、間顧どなっている具体的なウィルスを特定することが必要であっ て、細胞レベルでの分子間相互作用および宿主全体・ニー・シーおよびウォリン スキー・ジェイ・ニス、ヒト運動神経疾患（Ｓｅｒｖｅｒ、ム、　Ｏ，ａｎｄ　 Ｗｏｌｉｎｓｋｙ。

Ｊ、８．、　Ｈｕｍａｎ　Ｍｏｔｏｒ　Ｎｅｕｒｏｎ　Ｄｉｓｅａａｅｅ）、ル ィｘ−ビーーｅｔ−ランド（Ｌｅｗｉｇ　Ｐ、Ｒｏｗｌａｎｄ）出版（レイブン ・ブＬ／ス（Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ）　、二ｓ、−ヨーク。

１９８２年）、１抗ウイルス療法へのアプローチ（ムｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔｏ 　ＡｎｔｉｖｉｒａユＴｈｅｒａｐｙ）”と領する章、第５１９−５４６頁を参 照〕。

具体的な抗ウイルス化学療法剤としては、ウィルスが宿主細胞に吸着し、侵入し 、更に脱外被するのを阻害する薬剤がある。多数の宿主内過程を利用する前での これらの早期ウィルス複製段階で阻害すると、限られた宿主毒性しか示さなくな る。しかしながら、ウィルス感染のこれらの段階で作用する薬剤についてはほと んど明らかにされていなかった。それらの中には、ヘパリン、アマンタジンおよ び若干のオリゴペグチド類が含まれる。

数種のカルボベンズオキシオリゴペプチド類は、数種類のヘルペスウィルス、オ ルトミクンウイルス（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｕｓ　）およびバラミクソウィ ルス（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ　）群による感染を阻害するが、それはピリ オンの侵入防止によって作用するらしいと言われてきた。培養菌に対するこれら の薬剤の活性が１９６８年にいくつかのグループから別々に報告された。

例えは、ミラー・エフ・ニーら、応用機生物学、第１６巻、第１４８９−１４９ ６頁、１９６８年〔Ｍｌｌｌｏｒ、Ｆ、Ａ、ｅ、ｔ　ａｌ、、Ａｐｐｌｉｅｄ　 ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＯｇｙ１６　：　１４８９−１４９６（１９６８））　：　 または、ニコライデス・イーら、ジャーナル・オプ・メディシナル・ケミストリ イ、第１１巻、第７４−７９頁％１９６８年〔Ｎ１ｃａｌａｉｄｅｓ＋、Ｆｉ、 ａｔ　ａｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ＯｆＭｅａｉＱｉｎａｌ　ｏｈｅｍｉｓｔｒｙ 　１１ニア４−７９（１９６８）］参照。カルボベンズオキシ−Ｄ−フェニルア ラニン−Ｌ−フェニルアラニルーニトローＬ−アルギニン（ＳＶ−４８１４）　 はこれらの薬剤中で最・も有効なものの一つであり、その最大活性は麻疹ウィル スに対して示されている（前記ミラー・エフ・ニーら）。麻疹ウィルス感染を阻 害するこの薬剤の作用部位が明らかＫされた〔ノルビー・イー、ウィルス学、第 ４４巻、第５５９−６０８頁、１９７１年（Ｎｏｒｒｂｙ、　ｉ、、　Ｖｉｒｏ ｌｏｇｙ４４　：　５５９−６０８（１９］１））〕。ＢＹ−４８１４はウィル ス吸着またはウィルス防導型面球凝集に対しては効果がないが、吸着されたピリ オンが細胞外抗体による中和作用に対し感受性をもつ期間を著しく伸ばす。

したがってその薬剤は、麻疹の場合ではピリオン外被と宿主細胞膜との融合によ って起きると考えられているピリオンの侵入を阻害するものであると結論づけら れた。薬剤活性は一般に、その配列が、融合を媒介するウィルスタンパク質（融 合もしくは？タンパク質）のアミノ末端との間に相同性を有しているためである と考えられている。例えば、リチャードソン（Ｒｌａｈａｒｄｓｏｎ）ら〔ウィ ルス学、第１０５巻、第２０−２２２　（１９８０）　）　：ｌは、ｓ　Ｖ　− ４８１４オ！ヒソｔＬＫ極めて関連するオリゴペプチド類によるパラミクソウィ ルス活性の阻害はアミノ酸配列特異性によるものであることを明らかＫした。例 えは、センダイウィルスの場合に最も有効な阻害剤は、ウィルス融合タンパク質 のアミノ末端に対して最も似た配列相同性をもつオリゴペプチドであった。

臨床用抗ウィルス剤としてのこれらのペプチド類の究極的価値はいまだに研究中 であるが、予備研究では、従来のこれらの阻害剤はインビトロでのｔ性が低かっ たため、実験動物に対し安全に経口投与できることが判明している。上記リチャ ードソンらは、麻疹ウィルスおよびその他のパラミクンウィルス並びに少なくと も１種のオルトミクンウィルス（ム型インフルエンザ）に対して活性なオリゴペ プチド類は合成が可能であることも明らかにし、これらの薬剤の優れた可能性を 示唆した。

本発明において請求の範囲に記載されたものと関連するオリゴペプチド類として は、０ｂｚ−Ｄ−Ｐｈ・−Ｌ　−Ｐｈｅ−Ｇ１７（Ｏｂｇはカルボベンズオキシ 基である）、ＯｂＭ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｐｈｅ、０１＋１ｉ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ− Ｐｈｅ−Ｌ−（Ｎｏ、）ムｒｇ　、Ｏｂｇ−Ｇｌｙ−Ｉ、−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｐｈｅ および０ｂｉｉ−Ｇｌｙ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙが挙げられる（前記 サーバーおよびウオリンスキー、第５２３頁参照）。これらのオリゴペプチド類 はセンダイウィルス活性の阻害剤である。　０ｂｚ−Ｐｈｅ−Ｄ−ムユａ　につ いても麻疹ウィルスおよびヘルペスウィルスに対して試験されたＣｆｍ記二コラ イデス・イーら参照）。

耳下腺炎ウィルスをはじめとする他のウィルス種に対して従来の抗ウイルスペプ チドの発見を発展させることは）要な意義をもつ。

耳下腺炎ウィルスの融合（Ｐ）タンパク質は、二つのジスルフィド結合糎ペプチ ド類、即ちＩＰ、およびＦ２からなり、これらは前駆体の（ＦＯ）糖ペプチド鎖 のタンパク質開裂によって得られる〔例えば、リマら、ジャーナル・オン・ジェ ネティック・パイラロジー、第４６巻、第５０１−５０５頁、１９８０年（Ｒｌ ｍａ、　ｅｔａユ＋Ｉ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｖｉｒｏｌｏ ｇｙ　４６：　５０１−５０５　（１９８０）　）、またはメルクら、同上、第 ６４巻、第１４５７−１４６７頁、１９８３年（Ｍａｒｇ、　ｅｔａｌ、、ｘｂ ｉａ　６４　：　１４５７−１４６７　（１９８３））参照〕。

耳下腺炎ウィルスのＦＩＮ末端の研究については、充分量の精製タンパク旬を得 ることが困難であるという問題があった。

しかしながら、臨床的に更に有効な抗ウイルスペプチド類を提供するために、耳 下腺炎ウィルスの研究を開始し、完遂することは極めて価値があるのである。

発明の開示 本発明は下記式： ％式％ からなるペプチドに関する。

ここで、２は水素ｓ　’１−　Ｃ＠のアシル、アルイルまたはアミノ保護基、例 えば、べｙジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、トシル、トリチル 、フタロイルまたはトリフルオロアセチルであり；Ｙは Ｉｃｅ。

エユｅ−ムｌａ。

Ｉｃｅ−ム１ａ−Ｉｃｅ。

ｌｌ５−ムｌａ−工１ａ−ｏｌｙ。

エユ・−ム１ａ−エユｅ−Ｇｌｙ−工１ｅ。

工１ｅ−ム１ａ−エユｅ−Ｇｌｙ−工Ｉｓ−ムｌａ。

工ｌｅ−ム１ａ−工１ｓ−Ｇｌｙ−工１ｅ−ム１ａ−ムｌｈ。

工１ｅ−ムユａ−工１ｓ−Ｇユｙ−工１ｅ−ムユａ−Ａユａ−Ｌｅｕ、　・エユ θ−ムユａ−Ｘユｅ−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ａｌａ−ム１ａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ。

エユｅ−ム１ａ−Ｉユｅ−Ｇｌｙ−工１ｅ−ム１ａ−ム１ａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− Ｖａｌ。

工１ｅ−ムユａ−工ｌ５−Ｇａｙ−エユｅ−ム１ａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− Ｖａｌ−ムｌａ。

工１θ−ムｌａ−工１ｓ−ｏユｙＪ１ｅ−Ａｌａ−ム１ａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｖ ａ１−ム１ａ−Ｔｈｒ、　、’ｌユｅ−ムｌａ−エユｅ−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ａｌ ａ−ム１ａ−Ｌｅｕ−Ｇ、Ｎｙ−Ｖａｌ−ムユａ−Ｔｈｒ−ムｌａ。

Ｉｃｅ−ムｌａ−エユｅ−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ａｌａ−ムユａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− Ｖａ１−ム１ａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−ＡＩＩＬ。

１１ｅ−ム１ａ−工ｌ５−Ｇａｙ−工１ｅ−ム１ａ−ム１ａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− Ｖａｌ−ムユａ−Ｔｈｒ−Δｌｈ−ム１ａ−Ｇｌｕ。

工１ｅ−Ａｌａ−工１ｅ−Ｇｌｙ−工１ｅ−ム１ａ−ムユａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− ？ａニーＡｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Δ１ａ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ。

およ・び １１ｅ−ム１ａＪ１ａ−ＧニアーＩユｅ−Ａユａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇユｙ−Ｖ ａニーΔ１ａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−ムユａ−Ｇユｕ−ＶａニーＴｈｒ からなる群より選択される。

上記ペプチド類のいずれかのカルボキシ末端に相当するアミノ酸残基は、カルボ キシ末端そのものでも、またはその塩、エステルもしくはアミドであってもよく 、あるいはそれは更にアミノ酸残基（類）と結合していてもよい。即ち、上記ペ プチド類はより長いオリゴもしくはポリペプチド類の一部分であつ゛〔もよい。

同様のことが上記ペプチド類のアミノ末端にもあてはまる。上す己Ｎ末端または 上記Ｃ末端のいずれかまたは双方が別のペプチド配列と結合している場合は、全 体のポリペプチドは天然のＦｌまたはＸＰｏ耳下腺炎ウィルスタンパク質と同一 ではないことが好ましい。

好ましくは、Ｃ末端残基は次式： ％式％ 上記式中、Ｙは前記と同義であり、 Ｒ１はＯＭまたはＮＲ”Ｒ’であって、ここで、Ｍは水素、薬学上許容される塩 、またはＯｌ−Ｃ，の分岐状もしくはＫｅＡ状アルキルエステルで素、Ｃ，−ａ ６の分岐状もしくは直鎖状アルキルからなる群より選択されるか、あるいは窒素 原子に一緒に結合したＲ２およびＲ３は５もしくは６員へテロ環を形成している 。

これらのペプチド類は、それ自体でまたは相合せて、即ち単独でまたは適切な組 成物とすることによって、抗ウィルス剤として使用される。それらは、例えば予 防接種するために、適切は相体分子またはアジ瓢バントと混合されまたは結合せ しめられた場合においては、抗血清を展進するための免疫原としても使用される 。

本発明のペプチド類のもう一つの用途は、耳下腺炎ウィルス等のウィルスを検出 する競合免疫試験操作のための樟識化された抗原類似物としての用途である。

図面の簡単な説明 第１図は耳下腺炎ウィルスＦタンパク質のイムノアフィニティ精與について示す グラフである。

第２図は還元条件下での８ＤＥｌ−ポリアクリルアミドゲル電気法＠（ＰＡＧＥ ）のフルオログラフを示す。

耳下腺炎ウィルスのタンパク質はＶ列に示されている。

ポリペプチドバンドを分類するために用いられたＶ列の左側の標示は次のとおり であるｉ　ＮＰ：ヌクレオカブシドタンパク質；Ｆ、：Ｆタンパク質のＦｌポリ ペプチド鎖；Ｐ：ボリメラーゼ；Ｍ：膜夕／バクｇａｙ。

：Ｆタンパク質のＰ２ポリペグチド伴。既知分子量のタンパク質碑単の電気泳動 移動度はｎ列の右仰に示されている。使用された標漁は、ミオシンＢ錯（２ｏｏ 、。

ｋＤＡ）；ホスホリラーゼＢ　（９２，５ｋＤＡ）；牛崩清アルブミン（６８， ０ｋＤＡ　）　：卵白アルブミン（４３，ＯｋＤＡ　）　；　α−キモトリプシ ノーゲン（２５，７ｋＤム）；β−ラクトグロビン（１８，４ｋＤＡ　）　；お よびチトクロームＯ（１２，３ｋＤＡ　）であった。

第３図は、高性能サイズ排除クロットゲラフイーによる耳下腺炎ウィルス７タン パク質から１Ｆ、およびＦ２ポリペプチド鎖への分離について示すグラフである 。

第４図は、第３図の両分について還元条件下で行なわれた８Ｄ８−ポリアクリル アミドゲル電気泳輛のフルオログラムを示す。０列は、ＦｌおよびＦ２ポリペプ チド鎖に分離される前の耳下腺炎ウィルス！タンパク質を示す。プール■および Ｈの一部についてはそれぞれ１列および■列に示されている。既知分子量のタン パク質＠準の電気泳動移動度（第２図参照）は、■列の右側に示されている。

第５図は、耳下腺炎ウィルスＦｌポリペプチドの　１末端配列と他の３種のバラ ミクソウィルスの該配列とを比較したものである。ダラシｚ＃３！は耳下腺炎ウ ィルスの配列と同一であることを示す、ｓｖ５、センダイウィルスおよびＮＤＶ についての配列データはリチャードソンら（前記、１９８０年）から引用してい る。

発明を実施するための最良の態様 本発明のペプチド配列はフェニルアラニンである第一のアミノ酸残基（１位）を 含む。この残基はＤ−もしくはＬ−配置のいずれであってもよいが、Ｄ−配置の 方が好ましい。残りのアミノ酸残基はＬ−配置であることが好ましい。１位のフ ェニルアラニン残基は、更に、遊離アミノ型（即ち、２が水素）でも、あるいは アシル化または保護されたアミノ型であってもよい。

アセチル、トリフルオロアセチル、プロピオニル、ブチリルまたはベンゾイルの ようなａ、　−Ｃ，のアシル基が用いられる。フェニルアラニン残基の７ミノ基 は、しかしながら、適切なアミン保護基によって保積することもできる。好まし い保護基としては、ベンジルオキシカルボニル（Ｏｂｚ）、ｔ−ブトキシカルボ ニル、トシル、トリチル、フタロリルまたはトリフにオロアセチルがある。

配列中のカルボキシ末端残基は、前記のようＫいずれであってもよく、遊離型（ Ｒ１がＯＨ）であるか、あ形である。ａ、　−Ｏ，の分岐状もしくは直鎖状アル キルエステル類が好ましく１、更には一級または二級のＣ３−Ｃ，の分岐状もし くは直鎖状アルキルアミド類も好ましい。あるいは、ピペリジンおよびピロリジ ンのような環状アミド類も利用することができる。エステル類またはアきド類も 、本発明ペプチド類の中間体または安定型として用いることができる。周知の加 水分解が、化学的または酵素的のいずれであっても、この場合に％遊離酸または 塩を生成させるために用いることができる。

好ましい薬学上許容される塩としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビ ジウム、セシウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン、バリウムのヨウナア ルカリおよびアルカリ土類金属の塩、または亜鉛、銅のような他の金属類等があ る。その他の薬学上許容される塩には、−級、二級または三級アミン類から得ら れるアミン陽イオン類がある。−級アミン類の例としては、メチルアミン、ジメ チルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジブチルアミン、トリエタノー ルアミン、Ｎ−メチルヘキシルアミン、デシルアミン、アリルアミン、シクロペ ンチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、ベンジルアミン、ジベンジルアミン、 α−フェニルエチルアミン、β−フェニルエチルアミン、エチレンジアミン、ジ エチレントリアミンその他がある。約１８以下の災素原子を有する脂肪族、環式 脂肪族およびアリール脂肪族アミン類：並びにへ？ｃ＋Ｒ式アミン類、例えばピ ペリジン、モルホリン、ピロリジン、ピペラジン、更にそれらの低級アルキル訪 導体、例えば１−メチルピペリジン、４−エチルモルホリン、ｌ−イソプロピル ピロリジン、２−メチルピロリジン、１．４−ジメチルピペラジン：この他に、 七ノー、ジーもしくはトリエタノールアミン、エピネフリン、プロカイ７等のよ うな水溶性または親水性基を有するアミン類が使用可能である。

適切な薬理学上許容される四級アンモニウム陽イオンには、テトラメチルアンモ ニウム、テトラエチルアンモニウム、ベンジルトリエチルアンモニウム、フェニ ルトリエチルアンモニウムその他がある・ペプチド類はそのままの形でも、ある いはハロゲン化水素酸、カルボン酸等のような酸類の酸付加塩の一部であっても よい。適切なハロゲン化水素酸としては、！ｉ０１．　ＨＢｒ、　ＨＦがある。

適切なカルボン酸としては、酢酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸等がある。

ペプチド類はそのままの形でも、あるいはより長い配列中の一部であってもよい 。即ち、これらのペプチド類に相当する配列は、より長いペプチド類の一部であ る場合にあっても本発明の範囲Ｋｍし、特に本明細書に記載されたものと同様の 作用を有しているならばそのように解釈すべきである。

本発明の好ましいペプチド類としては、０ｂｚ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ− Ｇｌｙ　ＨＣｂｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−ム１ａ−Ｌ−Ｇ１ｙ−Ｌ−工ｌｅＨおよび Ｏｂｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−ム１ａ−Ｌ−Ｇｌｙ−Ｌ−エユｅ−Ｌ−Ａｌａがある 。

本発明のペプチド類は抗ウィルス化合物として利用することができる。抗ウィル ス活性は、耳下腺炎ウィルスに対してだけではなく、センダイウィルス、５ｖ− ５ウイルス、麻疹ウィルス等のような他のウィルス種に対しても適用可能である 。後者のウィルス類は。

それらのＦ１タンパク質の　Ｎ末端が本発明で述べた耳下腺ウィルスのＮ末端と 実質的に類似した配列相同性を有している。

本発明のペプチド類のもう一つの用途は、それ自体での、あるいは、好ましくは 適切な担体および／またはアジユバントと共有もしくは非共有結合した形での免 疫原としての用途である。牛血清アルブミン、ヒト血清アルプきン、キーホール アオガイ（Ｋθｙｈｏｌｅ１１ｍｐｅｔ　）ヘモシアニン、破傷風菌ｐ素、ジフ テリア菌責素、チログロブリン、卵白アルブミンおよび精製タンパク質銹導体の ような標準的担体が使用可能であり、ペプチド類はそれらと結合される。適切な プロトコール下で適切な宿主に接種すると、宿主はそれらに対する抗体を産出す る。抗体は、しかる後、受ト１免疫、イムノアフィニティ精製、免疫試験掃作等 のような各種の操作に用いることができる。宿主から得られるリンパ球は公知の 融合技術によって処理され、適切なハイプリドーマを産生ずることができる。ペ プチド類および／または担体もしくはアジユバントを用いた免疫は最初の予防接 種段階で適用することもでき、この歩合における本発明のペプチド類はワクチン 組成物の一部を構成していてもよい。

更に、本発明のペプチド類のもう一つの用途は、免疫試ｒｉｌｌ操作における抗 原類似物としての用途である。

本発明のペプチドは、例えば酵素（例えば、アルカリホスファターゼまたは西洋 ワサビペルオキシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、１４ｃまたはａｎ）また はケイ光色素（フルオレセイン）に共有結合させて標識化することにより、競合 免疫試験に用いることができる。

所定の抗体の活性部位に対して本発明の標詳；化ペプチドと耳下腺炎ウィルス（ またはペプチドと腎接な相同関係がある他のすべてのウィルス〕との間で競合せ しめ、更に標識物を鉗終的に測定することによって、試料中に存在するウィルス 芦を定量測定することができる。免疫試験繰作は当業者間では周知である。

ζこともでき、試料中の抗ウイルス性抗体を測定するための凝集操作に使用する ことができる。

抗ウィルス剤として使用する場合は、ペプチド類は適切な担体と一緒に処方され る。それらは１錠剤、カプセル、粉末包または沼状の溶液、Ｐ濁液もしくはエリ キシルのような投与形謔で用いることができる。”溶液または懸濁液のよ５な無 菌液体処方剤は非経口的用途用として調製することができる。このような組成物 において、活性成分は通常組成物全重量の０．５重量係から９９．９　重１に％ 以下の量で存在する〇投与方法はそれらの抗ウィルス作用を直ちに発揮させる手 段であればいかなるものであってもよい。化合物は、非経口的、皮下的、ＩＩ＄ 脈内、筋肉内、腹腔内、注輸的または局所的に投与することができる。投与量は 、患者の年令、健康度および体重、実施している場合はその併用療法の種類、治 ＃頻度、並びに望まれる効果の度合に依存する。一般に、活性成分化合物の１日 の経口投与量は体７ｋｇあたり約５０〜１５０ｍｇである。

ペプチド類はポリペプチド合成技術として周知の方法により製造することができ る〔例えば、ボダンスキー・エムら、１ペプチド合ａ（第２版）”、ジー・ニー ・オラー編集（ジ冒ン・ウィリー・アンド・サンズ、ニューヨーク、１９７６年 ）　（Ｂｏｄａｎｓｇｋｙ、Ｍ、。

ａｔ　ａｌ、、’Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　（Ｓｅｃｏｎｄ　１ｄ ｉｔｉｏｎ）−Ｇ、ム、　０１ａｈ、　Ｒａ１ｔｏｒ　（Ｊｏｈｎ　ｆｉｌｍｙ 　＆８ｏｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９７６））、またはコンシジン。

１化学的加工技術辞典＠（Ｏｏｎｓｉａｉｎｅ、”Ｏｈｅｍｉｃａｌａｎｄ　Ｐ ｒｏｃｅｓｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ＩＣｎｃｙｃｌＯｐａａｉａ″）、欧州 特許出願第２２−８２４号参照〕。合成が均一相で行なわれる場合は、ペプチド は、アミノ酸もしくは遊離カルボキシ基含有ペプチドとアミノ酸もしくは遊離ア ミノ基含有ペプチドとを縮合させて得られる。一定限度の配列は、該配列に続く 個々のアミノ酸喪基との縮合を繰返して逐次延長させるか、あるいはある場合に おいて二つの既製ペプチド断片間で縮合させることにより製造することができる 。このような縮合において、反応に関与しないアミノ基およびカルボキシ基は保 護する必妾がある。保護基は、容易に導入でき、縮合反応に対して安定で、しか も完成ペプチドから選択的に除去できるものでなければならない。

アミノ基は広汎な試率類によって保護することができる。ベンジルもしくはｔ− ブチルクロロカーボネートによるＮ−アルコキシカルボニル化が最も一般的に利 用されるが、その理由は、保護基が氷酢酸中ＨＢｒとともに加熱されると容易に 分解されるからである。アミノ基保護の他の例としては、プロピル化、トリチル 化、フタロイル化またはトリフルオロアセチル化がある。カルボキシ基は通常エ ステルの形成によって保護される。ベグチド結合が一旦形成されると、エステル 結合は希アルカリ溶液中室温で選択的に加水分解される。水酸基もペプチド縮合 反応中に適切に保護される必要がある。保護基は逐次縮合するためのα−アミノ 基またはα−カルボキシ基の脱マスク化に対して安定であって、最終段階で容易 に除去されるものでなければならない。アミノおよびカルボキシ成分からのペプ チド結合形成は、力ｙポキシ底分を酸ノーライド、無水物またはエステルにして 活性化することにより行なわれる。ペプチド合成は、固相担体（メリフィールド ）合瓜法を適用することにより既に０勲化されている。

したがって、均一および不均一合成操作はいずれも本発明のペプチド類を製造す るために用いることができる。

最終生成物は、シリカゲル、アルミナゲル、ゲル浸透、イオン交換、高性能液体 クロマトグラフィー、疎水性クロマトクラフィー等のような各種クロマトグラフ ィー操作によって精製することができる。

他の合成法は１本発明のいずれかの望ましいペプチドについてコードする遺伝子 配列を発現させる方法である。遺伝子配列は、微生物、即ち細菌もしくは酵母の ような適切な宿主中に、または組織培す宿主中に存在していてもよい。いずれか の望ましいペプチドについてコードする遺伝子配列はプラスミドその他のベクタ ーのような適切な運搬体に組込んで一つにすることができ、望ましい宿主に形質 転換させることができる。

以上のように本発明を概括的に説明してきたが、これは特定の具体例を参考にす ると更に良く理解されるようＫなり、一方この具体例は他に断わりのない限り説 明するだけの目的であって、制限するためのものではない。

Ｉ・　耳下腺炎ウィルス１１Ｐｌタンパク％のアミノ末端配列の決定 Ａ、物質および方法 ウィルス：耳下腺炎ウィルスのキルハム（Ｋｉｌｈａｍ）株〔キルハム・エル、 ジャーナル・オン・ザ・アメリカン・メディカル・アソシェーシッン、第１４６ 巻、第１２３１−１２３２頁、１９５１年（＋１Ｌｉｌｈａｍ、Ｌ、。

、Ｔｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａｓ５ ｏｃｉａ、ｔｉｏｎ１４６　：　１２３１−１２３２　（１９５１））］を、〔 ］８Ｒ〕−ロイシの存在下ｃｖ−１細胞内で増殖させ、サーバー（ｓｅｒｖｅｒ ）ら〔感染と免疫、第３５巻、第１７９−１８６頁、１９８２年（Ｉｎｆｅｃｔ ｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ３５　：　１７９−１８６　（１９８２）） 　”ｌに記載されたようにして分離した。

イムノアフィニティクロマトグラフィー：耳下腺炎ウィルスの糖タンパク費に対 するモノクローナル抗体を産生じたが、これは前記サーバーらに記載されている ような特徴を有していた。抗体をマウス腹水から硫酸アン七ニウムによって沈澱 させ、ステへリンら、ジャーナル・オン・バイオロジカル・ケミストリイ、第２ ５６巻、第９７５０−９７５４頁、１９８１年（８ｔａｅｈｅｌｉｎｅｔ　ａｌ 、、　、Ｔｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉＱａｌ　Ｏｈｅｍｉｓｔｒｙ２ ５６　：　９７５０−９７５４　（１９８１）　）の方法に従い、活性アフィニ ティ押体のアフィゲル−Ｉ　Ｑ　（Ａｆｆｉｇｅｌ−１０）〔バイオ−ラッド社 （Ｂｉｂ−Ｒａｄ）　］に結合させた。

イムノアフ、ニティクロマトグラフイーを、上記ステへリンらの方法を修正して 行なった。精製された耳下腺炎ライ＃　７．を、Ｑ、１５　Ｍ　Ｎａ１ｌ　、　 ０．１％ｆ３Ｄ８゜１．０％（ｗ／ｖ　）デ；ｊ　’Ｐ　’／　：ｆｆ　−／ｌ ／酸ナトリウム、１．０％（ｗ／ｖ））リドンＸ−１００，０，００２Ｍフェニ ルメチルースルホニルフルオリドおよび１００カリクレイン阻害剤単位／ｍｌの アプロチニン〔シグマ社（Ｓｉｇｍ＆）〕を含有したｐＨ７，５の０．０２５　 Ｍ　）リスＨＯＩ　（緩衝液ム）中で破壊した。ウイルスリゼイトを９５，００ ０×ｇで１時間遠心分離し、上澄を流速１０ｍ１／ｈｒでイムノアフィニティカ ラム（層容稜３ｍ１）に供した。

クイルスリゼイトを供した後、カラムを、緩衝液Ａ（１３層容量部）、緩衝液Ｂ 　（Ｑ、５　Ｍ　ＮａＯユおよび０．２ト ％）ＩＪ、１ｙＸ−Ｚｏｏを含有シタＩＩＨ７，５（＋）　０．０２５Ｍトリス ＥＬ０１）（２６層容量部）および緩衝液０　（０，１係トリトンｘ−ｉｏｏ含 有Ｑ、１５　Ｍ　ＮａＣユ）（１０層容量部）により流速３０ｍ１／ｈｒで洗っ た。特異的に結合したウィルス糖タンパク質を、Ｑ、１５　Ｍ　Ｎａ（３１およ び０．１４　）！Ｊ）ンＸ−１００を含有シｆ、：、ｐＨ２，５ｔｖｏ、２Ｎ酢 Ｉｖ（緩衝液Ｄ）により流速１０℃ユ／　ｈ　ｒでカラムから溶出させ、更に緩 衝液りかも沈澱させ：タンパク鋼溶液１容倉部をメタノールニア七ト：／（１： 　１ｖ／ｖ）４容量部と漣合し、３７℃で２分間加熱し、しかる後タンパク質沈 澱物を１０，０００　Ｘ　ｇで３０分間遠心分離することによりペレット状にし た。

７／ｌ／キル化および還元：耳下腺炎ウィルス融合タンパク質を、０．００５　 Ｍ　Ｉ　Ｄ　Ｔムを含有したｐＨ８，２の７Ｍグアニジン−ＨｏＩｌｏ−５Ｍ　 ）リス−１０１中において４．７　ｍＭジチオスレイトールにより３７℃で９０ 分分間光した６過剰のヨード酢酸を加え１反応を３７℃で１時間インキ−ベート した後氷酢酸の添加により停止アルキル化された鎖状物の混合物を凍結乾燥し、 ７．５係トリフルオロ酢酸／９２．５％溶離緩衝液（ｖ／ｖ）に再溶解した。鎖 状物を、ＳＷプレカラム〔ペックマン社（Ｂｅｃｋｍａｎ）　）　（０，７５Ｘ 　１０　Ｑｍ　）　を備えたセファロケルＴ８に一８Ｗ３０００分析用カラム（ ベックマフ社）　（０，７５Ｘ　３　ｏ　ａｍ　）により、氷ｈＲ／７’ｏＡン ー２−オール／水（２０／１５／６５、ｖ／ｖ／ｖ）の緩衝液を用い〔ブラウン ら９分析生化学、第１１２−＄、第１２８−１３４頁、１９８１年（Ｂｒｏｗｎ 、　ａｔ　ａｌ、。

Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１１２　：　１２８−１３ ４（１９８１）　）　〕、２８０　ｎｍで検知しながら、流速０．５ｍｌ／ｒｎ ｉｎで分離させた。

れた管〔パイレックス社（Ｐｙｒｅｘ）、５ｘ５Ｑｍｍ〕内の試料について＄ｙ 中のＨｏｌ（０，０２５ｍｌ）　（ピアス社（ｐｌｅｒｃｏ）、セファナル等級 （８ｅｑｕａｎａｌ　ｇｒａｄｅ　）〕中１００℃で２４時ｍ１酸加水分解した 後、とニーしットーパッカード（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）　３３９０ 　Ａ積分器を備えたベックマｙ６３００分析装詮により決定した〔ムーブ・ニス 、ペプチド類の化学と生物学。

マイエンホラファー・ジェイ編集（アナ−バーサイエンス、アナ−・パー、ミシ ガン、１９７２年）、第６２９−６５３頁（Ｍｏｏｒｅ、　Ｅｌ、、　Ｃｈｅｍ ｉｓｔｒｙ　ａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｍｅｉｅｎｈ ｏｆｅｒ、Ｊ、、　ｅｅＬ。

（Ａｎｎ　Ａｒ’ｂｏｒ　５ｃｉｅｎｃｅ、Ａｎｎ　ムｒｂｏｒ、Ｍ工、　１９ ７２）　、　ｐｐ、　６２９−６５３　）］。ニンヒドリンを用い、二つのチャ ンネル（４４０および５７０　ｎｍ　）　で積分することにより、１００　ｐｍ ｏｌ／アζノ酸における信頼値１〜７俤、最小検出限界２５　ｐｍｏｌで、トリ プトファン、システィン、アスパラギン、グルタミン以外のすべてのアミノ酸に ついて分析した。

タンパクη配列分析：耳下腺炎ウィルス融合タンパク’％１（Ｆｘ−ｔ）並びに 分離されたＦｌおよびＦ−鎖のタンパク負配列分析をアプライド・バイオシステ ムズ（ムｐｐｌｉｅｃｌ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍａ）　４７０　Ａタンパク質配列 分析装置により行なった。連続プログラム〔ヒーライック・アール・エムら、ジ ャーナル・オプ・バイオロジカル・ケミストリイ、第２５６％、第７９９０−７ ９９７頁、１９８１年（Ｈｅｗｉｃｋ、　Ｒ６Ｍ、、　ａｔ　ａｌ、。

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｌｓｔｒｙ　２５６　 ：　７９９０−７９９７　（１９８１））　’ｌには、一つのカップリング工程 （４４℃、２６分間）、一つの開裂（４４℃、６．７分間）、および２５％トリ フルオロ酢酸を用いる２−アニリツー５−チアゾリノン誘導体（ｐｔｈ−アミノ 酸）への自動変換が含まれている。ポリブレン〔タール・ジー・イーら１分析生 化学、第８４巻、第６２２−６２７頁　（Ｔａｒｒ、Ｇ、ＩＣ，、ｅｔ　ａユ、 、　ムｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈａｍｉｓｔｒ７８４　：　６２２−６２７ 　）　；　クラッパ−・デー・ジーら１分析生化学、第８５巻、第１２６−１３ １頁、１９７８年（Ｋｌａｐｐｓｒ、Ｄ、Ｇ、　、　ａｔ　ａよ、　。

Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　８５　：　１２６−１３１ 　（１９７８））　〕をガラスフィルター板にのせ、ポリブレン由来汚染物負の 影ｑを少な（するために連続サイクルを５回繰返した。ｐｔｈ−アミノ酸を、１ ５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（′ｐＨ５，８）とアセトニトリル／メタノール（ ９２，５：　７．５　、Ｖ／ｖ　）の複合傾斜とを用いて。

よりＭシアノカラムでの高性能液体クロマトグラフィーにより同定した〔へンカ ピラー・エム・ダブルおよびフッド・エル・イー、酵素学的方法、第９１巻、第 ４８６−４９３頁（Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ、　Ｍ、Ｗ、　ａｎｃｌｌｌｏｏａ 、　Ｌ、Ｂ、、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｏｆ　ＲｎｚｙｍＯＩＯｇ７９１　：４８６ −４９３）　］。

５Ｄ８−ＰＡＧＥを、レムリΦニー・ケー、ネーチャー（ロンドン）、第２２７ 巻、第６８０−６８５頁、１９７０年（Ｌａｅｍｍｌｉ、　０．に、、　Ｎａｔ ｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）２２７　：　６８０−６８５　（１９７０））の方法に 従い、還元条件下で行なった。ｍ、気泳動後、ポナー・ダブル・エムおヨヒラス キー・アール・ニー、ヨーロピアン・ジャーナル・オン・バイオケミストリイ、 第４６巻、詔８３−８８頁、１９７４年〔Ｂｏｎｎｓｒ、Ｗ、Ｍ、ａｎｄゲルを フルオログラフィーに供した。予め染色されたタンパク質標本（バイオラッド社 ）を分子量測定のために用いた。

Ｂ、結果 放射線標識がなされた耳下腺炎ウィルスを緩衝液Ａ中において界面活性剤で破壊 し、ウィルス糖タンパク質を連続的に抽出するために用いた（第１図）。ＨＨ糖 タンパク質を、抗ＨＮモノクローナル抗体を用いたイムノアフィニティクロマト グラフィーにより定量的に除去した（第２図、■および０列）。残留耳下腺炎ウ ィルスタンパク質を含有した第一のカラムからの溶出液を、抗Ｆモノクローナル 抗体を含有した第二のイムノアフィニティカラムに供した（第１．２図）。第２ 図で示したようＫ、ウィルスタンパク質混合物からの？タンパク質の除去は不完 全であったが（０および１列）、残留Ｆタンパク質はカラムに溶出液を再度供す ることＫよって除去することができた。酸性ｐＨでカラムから溶出したＦタンパ ク質（第１図、ピーク■）は、放射Ｍ標識がなされた他のウィルスタンパク質に 由来する検出可能な汚染物質を含有していなかった（第２図、■列）。更に、ウ ィルスタンパク質を供する前に、カラムからの溶離液についてアミノ酸分析を行 なったが、測定可能な程度の量の抗体が酸で溶出中のイムノアフィニティマトリ ックスから失なわれずに残存していることが示された。精製された？タンパク質 を、還元およびアルキル化または配列分析の前に、メタノ−／Ｉ／／アセトンに より洗剤含有尋詐液から沈澱還元し、変性条件下でアルキル化した。試料を、酢 酸／プロパン−２−オール／水（２０／　１５／６５．　ｖ／ｖ／マ）で平衡化 された高性能サイズ排除クロマトグラフィーカラムに供した。三つのピークが２ ８０　ｎｍでのＯｖ吸光度測定により検出された（第３図）。総容量（１２〜１ ９ｍユ）の時点で溶出した広いピークは。

還元アルキル化緩衝液からのグアニジン−１１ＣＩを含むものであって、タンパ ク質を含んでいないことが判明した。他の二つのピークからの両分をプールし、 各プールの一部を８ＤＢ−ＰＡＧＥによって分析した。第４図に示したように、 Ｐｌおよび？、鎖を互いに分離した：プールＩは？、を含有しく１列）、プール ■はＦ２を含有していた（■列）。

ＰｌおよびＦ２鎖のタンパク質配列分析：精裂された１におよび１２ペグチド鎖 を、ガス相アミノ酸配列分析装置での自動エドマン分解法により配列決定した（ 第１表第　■　表 Ｆ８およびｙ、ペプチド鎖並びにＦタンハク質についての配列データ Ｉ　Ｐｈｅ　８１　Ｖａ１７９７　Ｐｈａ１８０　Ｖａ１３０７　１２　Ａｌａ 　５５　ム８ｎ６７５　Ａｌａ　２３０　Ａｓｎ　２５５　２３　Ｇｌｙ　７１ 　１１ｅ２７０　Ｇｌｙ　１９０　１１ｅ　２５７　３４　エユｅ　６４　ムａ ｎ　５７４　工１ｅ２２６　Ａａｎ１９１　４５　Ａｌａ　５５　工１ｅ　３０ １　Ａｌａ　１９３　エユθ　３０１　５６　エユｅ　８６　Ｌｅｕ２７４　エ ユｅ　２７２　Ｌｅｕ　１９５　６７　Ｇｌｙ　３５　Ｇ１ｎ３２１−Ｇｌｙ１ ６４　Ｇ１ｎ１４２　７Ｂ　Ｌｌｅ　４８　Ｇ１ｎ３８ｏ　Ｌｌｅ１９３Ｇｌｎ ２０８　８９　Ａｌａ　５１　工１　４２８　Ａｌａ　１６８　工１８２１２　 ９１０　Ａｈａ　６０　Ｇ１７３７７　Ａｌａ１９０　Ｇｌｙ１９６　１０１１ 　Ｌｅｕ　ａｓ　Ｔ７ｒ３９５　Ｌｅｕ１６３　Ｔｙｒ１７１　１１１２　Ｇａ ｙ　１３４　Ｘ１θ　２０３　Ｇ１７　１４ＯＬｌｅ　５）　１２１３　Ｖａｎ 　ｓｓ　Ｌｙｓ　７５　Ｖａｌ１３８　Ａｒｇ　５３　１３１４　Ａｌａ　３１ 　Ｇ１ｎ１１７　Ａｌａ　１２９　Ｇｉｎ　６７　１４１５　Ｔｈｒ　１５　Ｇ １ｎ１８３　Ｔｈｒ　５４　Ｇ１ｎ１０７　１５１６　ムｌａ　２２　Ｖａｌ１ ８７　Ａｌａ　９６　Ｖａｎ　５６　１６１７　Ａｘ＆　１５　ムｒｇ　２７７ 　ｍｌａ　１１８　Ａｒｇ、　６３　１７１８　Ｇｉｎ　１６　Ｇｌｎ　７４　 Ｇｉｎ　１０９　１８１９　Ｖａｌ　２８　Ｌｅｕ１２８　Ｍａｌ　９２　Ｌｅ ｕ　７８　１９２０　Ｔｈｒ　１３　Ｂｓｒ　６７　Ｔｈｒ　３５　Ｓｅｒ　１ ８　２０２１　ムｌａ　１：ｌ　Ｔｙｒ　９１　ムｌａ　７１　Ｔｙｒ　７８　 ２１２２　Ａｌａ　２３　Ｔｙｒ１３４　ムユａ　９１　Ｔｙｒ　１０７　２２ ２３　Ｍａｌ　９　８ｅｒ　２５　Ｖａｎ　６０　Ｓｅｒ　９　２３ＡＬｂ２１ ３　８５８　４５３ ＲＸ”　９５．３％　９４．３％　９５．錘　リ３．２壬ａ３−フェニルー２− チオヒダントイン（Ｐｔｈ）アミノ酸＋フェニルチオカルバミル（ＰｔＣ）アミ ノ酸（存在していれば）−バックグラウンドの相当アミノ酸で示される収量ピコ モル ｂＡＬ−アミノ酸分析値（本発明）および推定分子量〔ハーラーおよびカンバン ズ、ウィルス学、第４７巻、第３５４−３６２頁、１９８３年（Ｈｅｒｒｌｅｒ ａｎｄ　ｏｏｍｐａｎｇ、　ＶｉｒｏｌＯｇ７４７　：　３５４−３６２　（１ ９８３））　］　に基づく計算量 ’ＲＹ−代表的な安定したＰｔｈ−アミノ酸の収量から計算された繰返収率 ２３個のアミノ酸残基から、６鎖について下記の配列のように決定された： ＦＩ　Ｎｕ、−Ｐｈｅ−ｆｌａ−ＧｌｙＪｌｅ−Ａｌａ−Ｉユｅ−Ｇｌｙ−工１ ８−ム１ａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ｉａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｌａ −Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−ム１ａ−ム１ａ−ＶＬ！Ｌニー】５２０ ７２　Ｎｕ２−Ｖａｌ−Ａｓｎ−１１ｅ−ムａｎ−工１ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇ ｌｎ−１ユｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−エユｅ−Ｌｙｓ−Ｇ１ｎ−Ｇｉｎ−Ｖａｌ−Ａ ｒｇ−ＧＩｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−８ｅｒ−完全な？タンパク少 の分析では、各分解サイクル毎に。

？、およびＦ２鎖残基に相当する二つの残基の混合配列を示した（第１表）。

■、耳下腺炎ウつルスＦ１タンパク質のアミノ末端に相当するペプチド類の合成 耳下腺炎ウィルス式タンパク質のアミノ末端配列に相当する５個および１４個の アミノ酸のペプチド類は。

アミノ末端のＬ　−ＰｈｅまたはＤ　−Ｐｈｅから合成が開始された。標漁的固 相法〔バラニー・ジーおよびメリフィールド・アール・ビー、１９８０年−ペプ チド類１（クロス・イーおよびマイエンホラファー・ジエイ編集）第２巻、アカ デミツク、ニューヨーク（Ｂａｒａｌ１７＋Ｇ、、　ａｎｄ　Ｍｓｒｒｉｆｉｅ ｌｄ、　Ｒ，Ｂ、（１９８０）工ｎ：１Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉａｅｅ”　（Ｇｒｏ ｓｓ、　Ｂ、　ａｎａ　Ｍｅｉｓｎｈｏｆｅｒ）。

Ｊ、、　凡ｃＬｉｔｏｒＩｉ）　Ｖｏｌｕｍｅ　２．　Ａｃａｄｅｍｉｃ、　Ｎ ｅｗＹｏｒｋ）　Ｈローセンプラット・エム、ボルツマン・デー、フートマン・ エッチ・チー、トレギアー・ジー・ダブルおよびボッツ・ジェイ・チー・ジ瓢エ ア、１９７６年、ジャーナル・オン・バイオロジカル・ケミストリー、第２５１ 巻、第１５９−１６４頁（Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ。

Ｍ、、　Ｇｏｌｔｇｍａｎ、　Ｄ、、　Ｋｅｕｔｍａｎｎ、　Ｈ６Ｔ、、Ｔｒｅ ｇｅａｒ。

Ｇ、Ｗ、ａｎｄ　Ｐｏｔｔｓ、　Ｊ、Ｔ、、　Ｊｒ、（１９７５）Ｊｏｕｒｎａ ｌｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２５１　：　１５９−１ ６４）〕ヲ用いて、ペプチド類を、Ｂｏａ−ムｌａ　（０，１５〜０．４ミリ当 量アラニン／ｇ）で予め誘導されたヒドロキシメチル樹脂固体押体〔ペニンシエ ラ社（Ｐｅｎｉｎｅｕｌａ）〕上で、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中ジシク ロヘキシルカルボジイミドおよびジメチルアミノピリジンの存在下カップリング させることにより合成した。

アミノ末端のｔ−ブトキシカルボニ／ｌ／（ＢＯＯ）保護基の脱保腰化を環境温 度下で３０分間ジクロロメタン中の４０係トリフルオロ酢酸（ｘｏｍｘ／ｇ）に より行なうた。ジクロロメタン（３Ｘ　１０　ｒｎｌ／ｇｍ脂）テ洗ツタ後、ジ クロロメタン中の２５係ジイソプロピルエチルアミン（１０ｍｌ／ｇ樹脂）で中 和した。更にジクロロメｐ７　（３ｘ　１０　ｍｌ／ｇｉｌｄ脂）で洗った後１ 次のＢｏｃ−アミノ酸（３モル過剰）を、ジシクロへキシルカルボジイミド（３ ，３モル過剰）を用いＤＭＦ（１０ｍｌ／ｇ極脂）中室淵で２時間カップリング させた。樹脂を最初にＤＭＦで、次いでジクロロメタン（３Ｘ１０ｍｌ／ｇ＠脂 ）で洗い、未反応Ｂｏａ−アミノ酸を除去した。次のＢｏｃ−アミノ酸を加えて 掃作を繰返した。最後のＮ末端のアミノ酸を加え、Ｂｏａ保護基を除去した後、 ｅ＋脂をエタノールで洗い、減圧乾燥させた。ペプチドを、０℃で６０分間ＨＦ （１０ｍユ／ｇ樹脂）およびアニソ−／ｌ／　（１ｍｌ／ｇ　樹脂）によって樹 脂から切り離した〔サカキバラ・ニス、１９７１年１アミノ酸。

ペプチドおよびタンパク質の化学と生物学ａ（ビー・ウェインシェタイン編集） 、第１巻、第５１−８５頁、デツカ−、ニューヨーク（日ａｋａｋｌｂａｒａ、 ８．（１９７１）　ｉｎ　’Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏ ｆ　Ａｍ１ｎ。

ムａｉｄｓ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、ａｎｄ　Ｐｒｏｔｏｉｎｓ”　（Ｂ。

Ｗｅｌｎａｔｅｉｎ、Ｅｄｉｔｏｒ）、Ｖｏｌｕｍｅユ、　ｐａｇｅ８５１−８ ５．　Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）　）。樹脂を減圧乾燥した後、残留ア ニソールをジエチルエーテルから抽出し、ペプチドを氷酢酸によって樹脂から抽 出した。ペプチド類を、蒸留水で希釈された米酢ｈｔ（ｔ：ｉｏ。

で保諭した〔バーブマン・エムおよびザーバス・エル、１９３２年（Ｂｅｒｇｍ ａｎｎ、　Ｍ、、　ａｎｄ　Ｚｅｒｖａｓ、　Ｌ。

（１９３２）　Ｂｅｒ＋Ｄｔａａｈ、Ｏ：ｈｅｍ、　Ｇｒ＋６５　：　１１９２ −１２０１）］。ペプチド類の特徴を、アミノ酸分析および分析用逆相高性能ク ロマトグラフィーによって明らかにした。選択されたペプチド類の配列はタンノ くり質配列分析によって確認された〔ヘクイック・アール・エム、へンカビラー ・エム・ダブル、フッド・エル・イーおよびドライヤー・ダブル・ジエイ、１９ ８１年。

ジャーナル・オン・バイオロジカル・ケミストリー。

第２５６巻、第７９９０−７９９７頁（Ｒθｗｉｃｋ、　Ｒ。

Ｍ、、　Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ、　Ｍ、Ｗ、、　Ｈｏｏｄ、　Ｌ、Ｅ、、　ａ ｎｄＤｒｙｅｒ、　Ｗ、Ｊ、（］９３１）　Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　Ｂｉｏｌｏ ｇｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２５６　：　７９９０−７９９７）　］。

ナノモル量以下の耳下腺炎ウィルスＦタンパク質を。

抗Ｆモノクローナル抗体を用いたイムノアフイニテイクロマトグラフィーにより 得た。モノクローナル抗体の使用により維持される高度の％異性によって、検出 可能な汚染物質を含むことなく精製された？タンパク質を単離することができた 。この物費を還元およびアルキル化の前後においてアミノ酸配列分析に供し、Ｉ Ｆタンパク偶の各ペプチド鎖のＮ末端からの２３個のアミノ酸を同定した。耳下 腺炎ウィルスＹ１鎖のＮ末端は、８Ｖ−５、センダイウィルスおよびＨＤＶｆ） ＩＦタンパク質の相当領吠に対して高度の配列相同性を示している（第５図）。

　？、％Ｍ末端における榔初０２０個のアミノ酸残基の５ち１４個は４種類のウ ィルス間に保存されている；アミノＭｌｔ［は、それが起こったとしても、配列 中の２．４，５，８．９および１９位においては変動しない。

以上のように本発明の詳細な説明してきたが１本発明は、その精神もしくは１団 またはその態様に影響を及ぼさない限り、パラメーター、１？造および条件に関 し広汎かつ同等のＰ回内でブＬ施可絆であることが駈識されるであろう。

ン浄書（内容に変更なし） 画分番号 ０ＩＩＩ 溶出！　（ｍｌ） ＩＩＩ 手続７市　正　＋＜、：　（方式） 昭和６１年１１月２８１］ 特訂庁長官　黒　１）明　雌　殿 １、事件の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　８５１０１６６４ ２、発明の名称 抗ウイルスペプチド類 ３、補正をする者 事ｆ［との関係　特１１出願人 ザ　ゼネラル　ホスピタル　コーポレーション４、代　理　人　（郵便番号１０ ０） 東京都千代田区丸の内圧丁目２番３号 電話東京（２１１）２３２１人代表 昭　和　６１年　１０月　１６日 （発送日　昭和６１年１０月２１日） ６、補正の対象 特許法第１８４条の５第１項の規定による円面の特許出願人の欄、委任状、図面 の翻訳文。

国際調査報告 １°＋ｕｎａａａ″ｅ＋　Ａ９１１１（°”Ｍ′”　ＰＣＴ／ｌＪｓ８５１０１ ６６４ＡＴＴＡＣＨＭＥＮＴ 工、　ＣＬＡＳＳ工Ｆ工ＣＡＴ工ＯＮ　ＯＦ　５ＵＢＪＥＣＴ　ＭＡＴＴＥＲ： ■ｎｔ、Ｃ１，４Ｃ０７Ｋ　７１０６．　Ｃ０７Ｋ　７１０８．　ＣｏフＫ　７ ／ユＯＵＳ、Ｃ１５工４／エフ、５１４／１１３．　２１５０／↓ユ２．５Ｋ待 人昭６２−５００３８０（１２）

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．下記配列： 【配列があります】 〔上記式中、ＸはＤ−または▲数式、化学式、表等があります▼であって、 ここで、Ｚは水素、Ｃ１−Ｃ６のアシル、アロイルまたはアミノ保護基であり； 更に Ｙは 【配列があります】 および 【配列があります】 からなる群より選択される〕 を含むペプチド。
2. ２．Ｘが▲数式、化学式、表等があります▼である、請求の範囲第１項記載のペ プチド。
3. ３．Ｘが▲数式、化学式、表等があります▼である、請求の範囲第 １項記載のペプチド。
4. ４．ＹがＩｌｅである、請求の範囲第１、２または３項のいずれか一項に記載の ペプチド。
5. ５．ＹがＩｌｅ−Ａｌａである、請求の範囲第１、２または３項のいずれか一項 に記載のペプチド。
6. ６．ＹがＩｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅである、請求の範囲第１、２または３項のいず れか一項に記載のペプチド。
7. ７．ＹがＩｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙである、請求の範囲第１、２または３ 項のいずれか一項に記載のペプチド。
8. ８．前記ペプチドのＧ末端が次式： Ｙ−ＣＯ−Ｒ１ 〔上記式中、Ｙは前記のとおりであり：Ｒ１はＯＭまたはＮＲ２Ｒ３であって； ここでＭは水素、薬学上許容される塩、またはＣ１−Ｃ６の分岐状もしくは直鎖 状アルキル基であり；更に Ｒ２およびＲ３は同一でも異なっていてもよく、水素、Ｃ１−Ｃ６の分岐状もし くは直鎖状アルキルからなる群より選択されるか、あるいは窒素原子に一緒に結 合したＲ２およびＲ３は５もしくは６員ヘテロ環を形成する〕 で示される、請求の範囲第１項記載のペプチド。
9. ９．Ｒ１がＯＭである、請求の範囲第８項記載のペプチド。
10. １０．ＭがＨまたは薬学上許容される塩である、請求の範囲第９項記載のペプチ ド。
11. １１．次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔上記式中、Ｍは水素または薬学上許容される塩である〕 の化合物。
12. １２．次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔上記式中、Ｍは水素または薬学上許容される塩である〕 の化合物。
13. １３．有効量の請求の範囲第１項記載のペプチドおよび薬理学上不活性な担体を 含む抗ウイルス療法用の組成物。
14. １４．被治療体におけるウイルス感染症の治療方法であって、該被治療体に抗ウ ィルス活性有効量の請求の範囲第１項記載のペプチドを投与することを含む治療 方法。