JPS6249584B2 - - Google Patents

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Publication number
JPS6249584B2
JPS6249584B2 JP52073055A JP7305577A JPS6249584B2 JP S6249584 B2 JPS6249584 B2 JP S6249584B2 JP 52073055 A JP52073055 A JP 52073055A JP 7305577 A JP7305577 A JP 7305577A JP S6249584 B2 JPS6249584 B2 JP S6249584B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
solution
silicone
acid
test piece
amino
Prior art date
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Expired
Application number
JP52073055A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JPS547993A (en
Inventor
Kazumoto Numata
Hiroshi Motobayashi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Terumo Corp
Original Assignee
Terumo Corp
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Publication date
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Publication of JPS547993A publication Critical patent/JPS547993A/en
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  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]

本発明は体液、殊に尿中のアセト酢酸またはア
セトン(以下、「ケトン体」という)を検出する
ための試験片に関するものである。 糖尿病、腎不全、消化器疾患、尿毒症等により
ケトージスが生起したアセト酢酸、アセトン等の
ケトン体が血液中に増加し尿中に大量に排泄され
る。従つて、尿中のケトン体を測定することによ
つて上記の如き各種疾患の有無の判定あるいは予
後の判定をすることができる。 従来、体液中のケトン体を検出するため種々の
試薬や方法が提案されたが、その多くはニトロプ
ルシド塩を反応試薬として含有する試験片あるい
は組成物をアルカリ性条件下でケトン体と反応さ
せるものであつた。しかしニトロプルシド塩はPH
7以下でのみ安定でPH8以上では分解してしまう
が、ニトロプルシド塩をケトン体検出のために使
用するにはPH8以上のアルカリ性媒体中でないと
作用しないので試験紙上でアルカリ性物質から保
護することが必要となり、これを解決するために
ポリビニルピロリドン酢酸ビニル共重合体、メチ
ルエチルエーテル−無水マレイン酸共重合体等の
有機フイルム形成物質によりニトロプルシド塩を
保護する方法やアルカリ性物質にアミン、アミノ
酸、アルコールアミン等を使用してニトロプルシ
ド塩を安定化する方法が知られているが、これら
は耐湿性、耐熱性が悪い。 本発明は上記事情を鑑みなされたもので、その
目的とするところは湿気、アルカリ性物質に対し
て安定でしかも検出感度のよい製造の容易なケト
ン体検出用試験片を提供することにある。 上記目的を達成するものは、アルカリ性緩衝物
質および水溶性アミノ酸の乾燥物を含む吸水性担
体に、シリコーンを介してニトロプルシドナトリ
ウムおよび有機溶媒に可溶な有機酸の乾燥物を設
けたアセト酢酸またはアセトン検出用試験片であ
る。また、前記シリコーンが、アルコキシ系、ア
ミノ系、ハロゲン系、メタクリル系シリコーンで
あることが好ましい。 本発明に係る試験片は以下のような方法によつ
て製造することができる。まず、紙、ガラス繊
維紙等の吸収性担体をアルカリ性緩衝剤及びアミ
ノ酸溶液に浸し乾燥する。第2にこうして処理し
た担体をシリコーン溶液に浸し、さらにニトロプ
ルシドナトリウム及び有機溶媒に可溶な有機酸の
溶液に浸し乾燥して作製する。第1の処理に使用
される緩衝剤はPH8〜10を与えるものでとくに有
用なものとしてはリン酸三ナトリウム、リン酸二
ナトリウム、ホウ酸塩、炭酸塩エチレンジアミン
四酢酸等で、アミノ酸としては水溶性アミノ酸で
あれば何でもよいが好ましくはグリシンあるいは
アラニンである。その際、含浸液100ml中緩衝剤
は20〜40g、アミノ酸は10〜20gを含有するのが
適当である。 第2の処理をしない、すなわちシリコーン処理
をしない試験片は、多湿でない地域で使用する場
合は、充分使用が可能であるが、多湿地域で使用
する場合は、耐湿性に問題がある。シリコーン
は、湿気に対して有効に作用するもので、アルコ
キシ系、アミノ系、ハロゲン系、メタクリル系な
どのシランカツプリング剤が好ましい。例えば、
アミノ系シリコーン、アルコキシシラン系シリコ
ーンなどが好適に使用できる。 さらに、本発明では有機溶媒に可溶な有機酸を
使用することにより、貯蔵中、ニトロプルシドナ
トリウムをアルカリ性物質の有害作用から保護す
ることが可能となつた。有機溶媒に可溶な有機酸
のうちでも特に塩基度が3以上の物質、例えばク
エン酸、エチレンジアミン四酢酸、ピロメリツト
酸などが有効である。 ニトロプルシドナトリウムと有機酸は有機溶
剤、例えばメタノール、ジメチルスルホキシド、
エタノール、ジメチルホルムアミド及びその混合
物に溶かして用いるが、含浸液100ml中ニトロプ
ルシドナトリウムは1〜5g、有機酸は0.5〜5
gを含有するのが適当である。 本発明に係る試験片は、ケトン体特に尿中アセ
ト酢酸濃度5mg%以上で紫色に呈色、陽性呈色反
応は15秒以内におこる。そして、アセト酢酸を含
まない正常尿では、何ら変色せず試験片そのもの
の色である微かつ色のままである。 一般的貯蔵の室温状態(温度10〜20℃、湿度20
〜50%)では、いずれも良好な安定性を保持でき
る。 以下、実施例をもつて本発明を詳細に説明す
る。 実施例 1 溶液 リン酸三ナトリウム・12H2O 10g リン酸二ナトリウム・12H2O 10g グリシン 10g 蒸留水 50ml 溶液 ヘキサアルキルシラザン系シリコーン 2g クロロホルム 8ml 溶液 ニトロプルシドナトリウム 0.1g クエン酸・1H2O 0.08g ジメチルスルホキシド 10ml 紙に溶液を含浸し、100℃で乾燥する。乾
燥後、溶液を含浸し、さらに溶液を含浸し80
℃で乾燥する。この試験片で、尿100ml中のアセ
ト酢酸5mgを15秒以内に紫色の呈色によつて検出
することができた。また、正常尿では何ら変色せ
ず試験片のそのものの色である微かつ色のままで
あつた。そして一般的貯蔵で変色しない試験片が
得られる。 実施例 2 溶液 リン酸三ナトリウム・12H2O 10g リン酸二ナトリウム・12H2O 10g グリシン 10g 蒸留水 50ml 溶液 アミノ系シリコーン 1g メタノール 100ml 溶液 ニトロプルシドナトリウム 0.1g ピロメリツト酸 0.05g エタノール 5ml ジメチルスルホキシド 5ml 実施例 3 溶液 リン酸三ナトリウム・12H2O 10g リン酸二ナトリウム・12H2O 10g グリシン 10g 蒸留水 50ml 溶液 アルコキシシラン系シリコーン 1g 水 100ml 溶液 ニトロプルシドナトリウム 0.08g マレイン酸 0.13g ジメチルスルホキシド 5ml エタノール 5ml 実施例 4 溶液 エチレンジアミンテトラ酢酸四ナトリウム塩
1.5g グリシン 1g 蒸留水 5ml 溶液 アルコキシシラン系シリコーン 1g メタノール 100ml 溶液 ニトロプルシドナトリウム 0.1g クエン酸 0.1g ジメチルスルホキシド 5ml エタノール 7ml 上記実施例2〜4による試験片の製造は、実施
例1に記載の方法で行なう。検出感度、安定性に
おいて実施例1と同程度の試験片が得られる。 そして、本願発明の試験片の耐熱性、耐湿性試
験の結果を以下の比較例とともに記載する。 比較例 溶液A リン酸三ナトリウム・12H2O 10g リン酸二ナトリウム・12H2O 10g グリシン 10g 蒸留水 50ml 溶液B ニトロプルシドナトリウム 0.1g ジメチルスルホキシド 10ml 紙に溶液Aを含浸し、100℃で乾燥する。乾
燥後、溶液Bを含浸し80℃で乾燥させたものを比
較例とする。 尚、耐熱性試験は、37℃オーブン中に放置して
行い、耐湿性試験は室温25℃、湿度70%に放置し
て行つた。
The present invention relates to a test piece for detecting acetoacetic acid or acetone (hereinafter referred to as "ketone bodies") in body fluids, particularly in urine. Ketone bodies such as acetoacetic acid and acetone, which are caused by ketosis due to diabetes, renal failure, digestive disorders, uremia, etc., increase in the blood and are excreted in large quantities in the urine. Therefore, by measuring ketone bodies in urine, it is possible to determine the presence or absence of various diseases as described above or to determine the prognosis. In the past, various reagents and methods have been proposed for detecting ketone bodies in body fluids, but most of them involve reacting test pieces or compositions containing nitroprusside salts as a reaction reagent with ketone bodies under alkaline conditions. It was hot. However, nitroprusside salt has a PH
It is stable only at pH 7 or lower and decomposes at pH 8 or higher, but when using nitroprusside salt to detect ketone bodies, it only works in an alkaline medium with pH 8 or higher, so it is necessary to protect it from alkaline substances on the test paper. To solve this problem, the nitroprusside salt is protected by organic film-forming substances such as polyvinylpyrrolidone-vinyl acetate copolymer and methyl ethyl ether-maleic anhydride copolymer, and alkaline substances such as amines, amino acids, alcohol amines, etc. It is known that nitroprusside salts are stabilized using The present invention was made in view of the above circumstances, and its purpose is to provide a test piece for detecting ketone bodies that is stable against moisture and alkaline substances, has good detection sensitivity, and is easy to manufacture. What achieves the above purpose is acetoacetic acid or acetone, in which sodium nitroprusside and a dry organic acid soluble in an organic solvent are provided on a water-absorbing carrier containing an alkaline buffer substance and a dry water-soluble amino acid via silicone. This is a test piece for detection. Further, it is preferable that the silicone is an alkoxy silicone, an amino silicone, a halogen silicone, or a methacrylic silicone. The test piece according to the present invention can be manufactured by the following method. First, an absorbent carrier such as paper or glass fiber paper is soaked in an alkaline buffer and an amino acid solution and dried. Second, the thus treated carrier is immersed in a silicone solution, further immersed in a solution of sodium nitroprusside and an organic acid soluble in an organic solvent, and dried. The buffer used in the first treatment is one that gives a pH of 8 to 10, and particularly useful ones include trisodium phosphate, disodium phosphate, borates, carbonates, ethylenediaminetetraacetic acid, etc., and amino acids are water-soluble. Any amino acid may be used, but glycine or alanine is preferred. In this case, it is appropriate that 100 ml of the impregnating solution contain 20 to 40 g of the buffer and 10 to 20 g of the amino acid. A test piece that is not subjected to the second treatment, that is, without silicone treatment, can be used satisfactorily when used in a region that is not humid, but has a problem in moisture resistance when used in a humid region. The silicone has an effective effect on moisture, and is preferably an alkoxy-based, amino-based, halogen-based, or methacrylic-based silane coupling agent. for example,
Amino silicones, alkoxysilane silicones, and the like can be suitably used. Furthermore, in the present invention, by using an organic acid soluble in an organic solvent, it has become possible to protect sodium nitroprusside from the harmful effects of alkaline substances during storage. Among organic acids soluble in organic solvents, substances with basicity of 3 or more, such as citric acid, ethylenediaminetetraacetic acid, and pyromellitic acid, are particularly effective. Sodium nitroprusside and the organic acid are mixed in an organic solvent such as methanol, dimethyl sulfoxide,
It is used by dissolving it in ethanol, dimethylformamide, or a mixture thereof. Sodium nitroprusside is 1 to 5 g, and organic acid is 0.5 to 5 g in 100 ml of impregnating solution.
It is appropriate to contain g. The test piece according to the present invention turns purple when the concentration of ketone bodies, especially urinary acetoacetic acid, is 5 mg% or more, and a positive color reaction occurs within 15 seconds. In addition, normal urine that does not contain acetoacetic acid does not change color at all and remains the same faint color as the test piece itself. General storage room temperature conditions (temperature 10~20℃, humidity 20℃)
~50%), all can maintain good stability. Hereinafter, the present invention will be explained in detail with reference to Examples. Example 1 Trisodium phosphate solution 12H 2 O 10g Disodium phosphate 12H 2 O 10g Glycine 10g Distilled water 50ml Solution Hexaalkylsilazane silicone 2g Chloroform 8ml Solution Sodium nitroprusside 0.1g Citric acid 1H 2 O 0.08g Dimethyl Impregnate 10 ml of sulfoxide paper with the solution and dry at 100℃. After drying, impregnate with solution and further impregnate with solution 80
Dry at °C. With this test strip, 5 mg of acetoacetic acid in 100 ml of urine could be detected within 15 seconds by purple coloration. In addition, normal urine did not change color at all and remained the same faint color as the test piece itself. A test piece that does not discolor during general storage is obtained. Example 2 Trisodium phosphate solution 12H 2 O 10g Disodium phosphate 12H 2 O 10g Glycine 10g Distilled water 50ml Solution Amino silicone 1g Methanol 100ml Solution Sodium nitroprusside 0.1g Pyromellitic acid 0.05g Ethanol 5ml Dimethyl sulfoxide 5ml Example 3 Trisodium phosphate solution 12H 2 O 10g Disodium phosphate 12H 2 O 10g Glycine 10g Distilled water 50ml Solution Alkoxysilane silicone 1g Water 100ml Solution Sodium nitroprusside 0.08g Maleic acid 0.13g Dimethyl sulfoxide 5ml Ethanol 5ml Example 4 Solution ethylenediaminetetraacetic acid tetrasodium salt
1.5g Glycine 1g Distilled water 5ml Solution alkoxysilane silicone 1g Methanol 100ml Solution Sodium nitroprusside 0.1g Citric acid 0.1g Dimethyl sulfoxide 5ml Ethanol 7ml The test pieces according to Examples 2 to 4 above were manufactured by the method described in Example 1. Let's do it. A test piece with detection sensitivity and stability comparable to that of Example 1 was obtained. The results of the heat resistance and moisture resistance tests of the test pieces of the present invention will be described together with the following comparative examples. Comparative Example Solution A Trisodium phosphate 12H 2 O 10g Disodium phosphate 12H 2 O 10g Glycine 10g Distilled water 50ml Solution B Sodium nitroprusside 0.1g Dimethyl sulfoxide 10ml Paper is impregnated with Solution A and dried at 100°C. After drying, the sample was impregnated with solution B and dried at 80°C as a comparative example. The heat resistance test was performed by leaving the product in an oven at 37°C, and the moisture resistance test was performed by leaving the product at a room temperature of 25°C and a humidity of 70%.

【表】【table】

【表】【table】

Claims (1)

【特許請求の範囲】 1 アルカリ性緩衝物質および水溶性アミノ酸の
乾燥物を含む吸水性担体に、シリコーンを介して
ニトロプルシドナトリウムおよび有機溶媒に可溶
な有機酸の乾燥物を設けたことを特徴とするアセ
ト酢酸またはアセトン検出用試験片。 2 前記シリコーンが、アルコキシ系、アミノ
系、ハロゲン系、メタクリル系シリコーンである
特許請求の範囲第1項に記載のアセト酢酸または
アセトン検出用試験片。
[Scope of Claims] 1. A water-absorbing carrier containing an alkaline buffer substance and a dried water-soluble amino acid is provided with sodium nitroprusside and a dried organic acid soluble in an organic solvent via silicone. Test piece for detecting acetoacetic acid or acetone. 2. The test piece for detecting acetoacetic acid or acetone according to claim 1, wherein the silicone is an alkoxy-based, amino-based, halogen-based, or methacrylic silicone.
JP7305577A 1977-06-20 1977-06-20 Test piece for detecting keton member Granted JPS547993A (en)

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JPS547993A JPS547993A (en) 1979-01-20
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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DE2733426C3 (en) * 1977-07-23 1981-08-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Diagnostic agent for the detection of ketone bodies in liquids and process for its manufacture
JPH01224667A (en) * 1988-03-03 1989-09-07 Kokusai Shiyaku Kk Appliance for detecting ketone body

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JPS547993A (en) 1979-01-20

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