JPS62272971A - コクシジウム症に対する抗イデイオタイプワクチン - Google Patents
コクシジウム症に対する抗イデイオタイプワクチンInfo
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
- C07K16/425—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-protozoal Ig
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- A—HUMAN NECESSITIES
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
コクシジウム症は原生動物門の細分である多くのコクシ
ジウム種の１種以上の感染によって引き起こされる疾患
である。コクシジウムは家禽を包含する広範囲の宿主が
感染する細胞内寄生虫である。家禽のコクシジウム感染
は急性で群れの圧倒的大量死を生じるかあるいは慢性で
体重増加がないことが特徴であるかのいずれかである。
ジウム種の１種以上の感染によって引き起こされる疾患
である。コクシジウムは家禽を包含する広範囲の宿主が
感染する細胞内寄生虫である。家禽のコクシジウム感染
は急性で群れの圧倒的大量死を生じるかあるいは慢性で
体重増加がないことが特徴であるかのいずれかである。
いずれの状態でもこの疾患は家禽産業に経済的に完全な
損失を生じる。
損失を生じる。
アイメリア種（εｉｍｅｒｉａ） （Ｓｐｐ、）のいず
れかの弱い感染から回復したニワトリは再感染に防御免
疫を示し、ワクチンの使用によるコクシジウム症の制御
を示唆した。実際にアイメリアテネラＵｅｎｅｌｌａ）
胞子小体の抽出液をワクチン投与した若いブロイラーの
ニワトリは毒性Ｅ、テネラ胞子形成卵母細胞の攻撃を防
御した。さらにその上Ｅ、アセルブリナ（ａｃｅｒｖｕ
ｌｉｎａ）胞子小体から分離した免疫原をワクチン投与
したニワトリはビルレントＥ、テネラ、Ｅ、アセルブリ
ナおよびＥ、マキシマ（ｍａｘｉｍａ）による攻撃に対
して防御した。完全な寄生体あるいは寄生体ポリペプチ
ドのいずれかから調製したワクチンの使用は、ワクチン
産生のために経済的に十分な量で寄生体を増殖させるこ
とが非常に困難なために限定される。
れかの弱い感染から回復したニワトリは再感染に防御免
疫を示し、ワクチンの使用によるコクシジウム症の制御
を示唆した。実際にアイメリアテネラＵｅｎｅｌｌａ）
胞子小体の抽出液をワクチン投与した若いブロイラーの
ニワトリは毒性Ｅ、テネラ胞子形成卵母細胞の攻撃を防
御した。さらにその上Ｅ、アセルブリナ（ａｃｅｒｖｕ
ｌｉｎａ）胞子小体から分離した免疫原をワクチン投与
したニワトリはビルレントＥ、テネラ、Ｅ、アセルブリ
ナおよびＥ、マキシマ（ｍａｘｉｍａ）による攻撃に対
して防御した。完全な寄生体あるいは寄生体ポリペプチ
ドのいずれかから調製したワクチンの使用は、ワクチン
産生のために経済的に十分な量で寄生体を増殖させるこ
とが非常に困難なために限定される。
本発明は、アイメリア特異抗原に対して代用薬として作
用する抗イディオタイプ抗体に基づく別のコクシジウム
症ワ久チンに関する。ハイプリドーマテクノロジーの開
発はコクシジウム症からニワトリを感染防御するワクチ
ンとして使用することができる抗イディオタイプ抗体の
大量産生に一つの手段を提供する。抗原と接触あるいは
結合する抗体分子の部位は抗原結合部位（パラトープ）
と呼ばれる。パラトープの構造配置は可変部のＨ（ｈｅ
ａｖｙ）鎖およびＬ（ｌｉｇｈｔ）鎖両ペプチドを包含
する。イディオトープは抗体分子の可変（Ｖ）部に存在
する抗原決定基として定義される。抗体のイディオタイ
プは、イディオトープの固有の組成を表わす。イディオ
タイプ決定基は、抗原結合部位（パラトープ）の一部で
あってもなくてもよく、しかしながら抗原結合部位に存
在する場合には結合されたパラトープと呼ばれる。逆に
可変部の非抗原結合部位にあるイディオタイプは、非パ
ラトープ結合イディオタイプと呼ばれる。抗イディオタ
イプ抗体（＾ｂ−２）は一般にその生成を誘発する免疫
原に免疫学的に特異的であるモノクローナル抗体（Ａｂ
−１）に由来する。イディオタイプが結合したパラトー
プである場合では、イディオタイプを生じるモノクロー
ナル抗体（Ａｂ−１）は、相補的三次元構造（パラトー
プ）を表わす。Ａｂ−１に対して産生される抗イディオ
タイプ抗体（Ａｂ−２）はたとえ抗イディオタイプと抗
原が化学的に異なるとしても同一の三次元構造の抗原を
有することができる。モノクローナル抗体の誘発のため
に使用される免疫原を試験管内の血清反応中の抗体と反
応させる場合、それを抗原と呼ぶ。マウス誘発モノクロ
ーナル抗体（Ａｂ−１＞は可変部のイディオタイプによ
って免疫原性であり、従って他の種族また動物が異なっ
たイディオタイプを有する場合には同一種族の抗体産生
を誘発することができる。Ａｂ−１のイディオトープが
結合したパラトープである場合、得られた抗体（抗−Ｉ
ｄ、＾ｂ−２）は抗原の内部像を生じる。抗−Ｉｄまた
はＡｂ−２は、イディオトープで初期抗体あるいはＡｂ
−１を結合するパラトープを含有する。＾ｂ−２のイデ
ィオトープをワクチンとして標的動物に注射した場合、
免疫応答を誘発する。Ａｂ−２のイデイオトープが結合
したパラトープである場合には、Ａｂ−１および抗−抗
−ｒｄは互いの内部像となり、共。
用する抗イディオタイプ抗体に基づく別のコクシジウム
症ワ久チンに関する。ハイプリドーマテクノロジーの開
発はコクシジウム症からニワトリを感染防御するワクチ
ンとして使用することができる抗イディオタイプ抗体の
大量産生に一つの手段を提供する。抗原と接触あるいは
結合する抗体分子の部位は抗原結合部位（パラトープ）
と呼ばれる。パラトープの構造配置は可変部のＨ（ｈｅ
ａｖｙ）鎖およびＬ（ｌｉｇｈｔ）鎖両ペプチドを包含
する。イディオトープは抗体分子の可変（Ｖ）部に存在
する抗原決定基として定義される。抗体のイディオタイ
プは、イディオトープの固有の組成を表わす。イディオ
タイプ決定基は、抗原結合部位（パラトープ）の一部で
あってもなくてもよく、しかしながら抗原結合部位に存
在する場合には結合されたパラトープと呼ばれる。逆に
可変部の非抗原結合部位にあるイディオタイプは、非パ
ラトープ結合イディオタイプと呼ばれる。抗イディオタ
イプ抗体（＾ｂ−２）は一般にその生成を誘発する免疫
原に免疫学的に特異的であるモノクローナル抗体（Ａｂ
−１）に由来する。イディオタイプが結合したパラトー
プである場合では、イディオタイプを生じるモノクロー
ナル抗体（Ａｂ−１）は、相補的三次元構造（パラトー
プ）を表わす。Ａｂ−１に対して産生される抗イディオ
タイプ抗体（Ａｂ−２）はたとえ抗イディオタイプと抗
原が化学的に異なるとしても同一の三次元構造の抗原を
有することができる。モノクローナル抗体の誘発のため
に使用される免疫原を試験管内の血清反応中の抗体と反
応させる場合、それを抗原と呼ぶ。マウス誘発モノクロ
ーナル抗体（Ａｂ−１＞は可変部のイディオタイプによ
って免疫原性であり、従って他の種族また動物が異なっ
たイディオタイプを有する場合には同一種族の抗体産生
を誘発することができる。Ａｂ−１のイディオトープが
結合したパラトープである場合、得られた抗体（抗−Ｉ
ｄ、＾ｂ−２）は抗原の内部像を生じる。抗−Ｉｄまた
はＡｂ−２は、イディオトープで初期抗体あるいはＡｂ
−１を結合するパラトープを含有する。＾ｂ−２のイデ
ィオトープをワクチンとして標的動物に注射した場合、
免疫応答を誘発する。Ａｂ−２のイデイオトープが結合
したパラトープである場合には、Ａｂ−１および抗−抗
−ｒｄは互いの内部像となり、共。
に＾ｂ−２のパラトープを結合する。その結果Ａｂ−３
はＡｂ−１とＡｂ−３の鏡像性のためにＡｂ−１の産生
に包含される抗原の結合能を有する。
はＡｂ−１とＡｂ−３の鏡像性のためにＡｂ−１の産生
に包含される抗原の結合能を有する。
従って本発明の目的は、コクシジウム症に対して感染防
御免疫を誘発する抗イディオタイプ抗体を提供すること
である。他の目的はこの抗イディオタイプ抗体ワクチン
を得るための手段を提供することである。さらに他の目
的はモノクローナル抗アイメリア胞子小体抗体を分泌す
ることのできるハイプリドーマを生産することである。
御免疫を誘発する抗イディオタイプ抗体を提供すること
である。他の目的はこの抗イディオタイプ抗体ワクチン
を得るための手段を提供することである。さらに他の目
的はモノクローナル抗アイメリア胞子小体抗体を分泌す
ることのできるハイプリドーマを生産することである。
さらに他の目的はこのワクチンの予防投与のための組成
物を提供することである。さらに他の目的は主に経済頃
失を招くアイメリアの種類に対して感染防御するコクシ
ジウム症ワクチンを提供することがある。本発明のこれ
らのおよび他の目的は次の説明から明白となる。
物を提供することである。さらに他の目的は主に経済頃
失を招くアイメリアの種類に対して感染防御するコクシ
ジウム症ワクチンを提供することがある。本発明のこれ
らのおよび他の目的は次の説明から明白となる。
マウスハイプリドーマがアイメリア胞子小体の表面免疫
原と特異的に反応するモノクローナル抗体を分泌するこ
とを開発する。モノクローナル抗体をウサギおよびニワ
トリの両方に免疫原として使用して抗イデイオタイブ抗
体を産生ずる。抗イディオタイプ抗体はモノクローナル
抗体のパラトープに特異的であり、モノクローナル抗体
結合部位によって認識された寄生体抗原構造の構造像を
有する。従って抗イディオタイプ抗体はアイメリアの代
用免疫原として作用することができる。若いニワトリの
抗イディオタイプ抗体での免疫怒作は次のアイメリア攻
撃感染に対して防御免疫応答を誘発した。抗イディオタ
イプワクチンは抗アイメリア胞子小体抗体を産生じ、Ｗ
腸の病変および可変アイメリア胞子形成卵母細胞での攻
撃に伴う卵母細胞の産生を低減する。
原と特異的に反応するモノクローナル抗体を分泌するこ
とを開発する。モノクローナル抗体をウサギおよびニワ
トリの両方に免疫原として使用して抗イデイオタイブ抗
体を産生ずる。抗イディオタイプ抗体はモノクローナル
抗体のパラトープに特異的であり、モノクローナル抗体
結合部位によって認識された寄生体抗原構造の構造像を
有する。従って抗イディオタイプ抗体はアイメリアの代
用免疫原として作用することができる。若いニワトリの
抗イディオタイプ抗体での免疫怒作は次のアイメリア攻
撃感染に対して防御免疫応答を誘発した。抗イディオタ
イプワクチンは抗アイメリア胞子小体抗体を産生じ、Ｗ
腸の病変および可変アイメリア胞子形成卵母細胞での攻
撃に伴う卵母細胞の産生を低減する。
本発明はアイメリアの胞子小体期の抗原と特異的に反応
するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分泌するハイブリ
ドーマの産生に関する。さらに本発明はアイメリア胞子
小体の表面に存在する免疫原に構造上よく似ｔいる抗イ
ディオタイプ抗体を産生ずるためにモノクローナル抗体
を使用する方法に関する。また本発明は、コクシジウム
症に有効なワクチンとして抗イディオタイプ抗体の用途
に関する。
するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分泌するハイブリ
ドーマの産生に関する。さらに本発明はアイメリア胞子
小体の表面に存在する免疫原に構造上よく似ｔいる抗イ
ディオタイプ抗体を産生ずるためにモノクローナル抗体
を使用する方法に関する。また本発明は、コクシジウム
症に有効なワクチンとして抗イディオタイプ抗体の用途
に関する。
次の説明および具体例はＥ、テネラについて本発明を具
体的に説明しているが本発明が他のアイメリア種に応用
できることは理解されるべきである。他の種としてはＥ
、アセルブリナ、Ｅ、マキシマ、Ｅ、ブルネッチ（ｂｕ
ｒｎｅｔｔｉ）およびＥ、プラエコクス（ｐｒａｅｃｏ
ｘ）を包含するがこれらに限定されない。
体的に説明しているが本発明が他のアイメリア種に応用
できることは理解されるべきである。他の種としてはＥ
、アセルブリナ、Ｅ、マキシマ、Ｅ、ブルネッチ（ｂｕ
ｒｎｅｔｔｉ）およびＥ、プラエコクス（ｐｒａｅｃｏ
ｘ）を包含するがこれらに限定されない。
抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体産生細胞はＥ、テネラ胞子
小体で免疫した近交マウス、好ましくはＢａｌｂ／ｃの
脾臓から得る。マウスを同量の許容されるアジュバント
中０．５ Ｍ当たり約１・×１０４〜約１ｘｌＯ６、好
ましくは約２ Ｘ １０”の無傷胞子小体で腹腔内で免
疫する。かかる許容されるアジュバントはフロイント完
全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョ
ウバン沈降物、コリネバクテリウムパルブム（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒｖｕｍ）およびｔＲＮＡ
を含有する油中水型エマルジョンを包含するがこれらに
限定されない、−次免疫惑作の約１４．２１および６３
日後にマウスにＥ、テネラ胞子小体約２ＸＩＯ’を静豚
内追加免疫投与する。最終追加免疫の約３日後に抗胞子
小体抗体に対してマウスを試験する。抗−Ｅ、テネラ胞
子小体抗体を産生ずる２匹の抗体陽性マウスからの脾臓
細胞をマウス骨髄腫細胞、５Ｐ−２１０と当業界に公知
の技術によって融合する。ハイプリドーマ細胞をヒボキ
サンチン、チミジンおよびアミノプテリン補足ＤＭＥＭ
における増殖によって選択する。抗体産生ハイブリドー
マをティシュ カルチュア メソッズ アンド アプリ
ケーションズ、クルセおよびパターラフ９編集アカデミ
ツクプレス、１９７３年のソフト アガール テクニク
ス マクファーソン（ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、 ５ｏｆ
ｔ ＡｇａｒＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、 ｉｎ Ｔｉ５ｓ
ｕｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄＡｐｐ
ｌｉｃａｔｉｏｎｓ、 Ｋｒｕｓｅ ａｎｄ Ｐａｔｅ
ｒｓｏｎ ＋ Ｅｄｓ、 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、 ｌ ９７３ ）の軟寒天技術を用いてクローンす
る。
小体で免疫した近交マウス、好ましくはＢａｌｂ／ｃの
脾臓から得る。マウスを同量の許容されるアジュバント
中０．５ Ｍ当たり約１・×１０４〜約１ｘｌＯ６、好
ましくは約２ Ｘ １０”の無傷胞子小体で腹腔内で免
疫する。かかる許容されるアジュバントはフロイント完
全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョ
ウバン沈降物、コリネバクテリウムパルブム（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒｖｕｍ）およびｔＲＮＡ
を含有する油中水型エマルジョンを包含するがこれらに
限定されない、−次免疫惑作の約１４．２１および６３
日後にマウスにＥ、テネラ胞子小体約２ＸＩＯ’を静豚
内追加免疫投与する。最終追加免疫の約３日後に抗胞子
小体抗体に対してマウスを試験する。抗−Ｅ、テネラ胞
子小体抗体を産生ずる２匹の抗体陽性マウスからの脾臓
細胞をマウス骨髄腫細胞、５Ｐ−２１０と当業界に公知
の技術によって融合する。ハイプリドーマ細胞をヒボキ
サンチン、チミジンおよびアミノプテリン補足ＤＭＥＭ
における増殖によって選択する。抗体産生ハイブリドー
マをティシュ カルチュア メソッズ アンド アプリ
ケーションズ、クルセおよびパターラフ９編集アカデミ
ツクプレス、１９７３年のソフト アガール テクニク
ス マクファーソン（ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、 ５ｏｆ
ｔ ＡｇａｒＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、 ｉｎ Ｔｉ５ｓ
ｕｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄＡｐｐ
ｌｉｃａｔｉｏｎｓ、 Ｋｒｕｓｅ ａｎｄ Ｐａｔｅ
ｒｓｏｎ ＋ Ｅｄｓ、 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、 ｌ ９７３ ）の軟寒天技術を用いてクローンす
る。
別々のコロニーを培養のために個々の培養プレートのウ
ェルに移入する。培養液を個々のウェルから集めて、抗
−Ｅ、テネラ胞子小体抗体の存在および分泌された免疫
グロブリンのイソタイプを決定するために検定する。培
養液をスクリーニングして抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体
を産生ずるハイブリドーマを明らかにする。Ｅ、テネラ
表面抗原に対して生じた抗体は感染を防御することから
、すべてのハイプリドーマモノクローナル抗体を血清学
的標準操作によって凝集、溶解およびＥ、テネラ胞子小
体の表面への特異的結合能のためにスクリーンされる。
ェルに移入する。培養液を個々のウェルから集めて、抗
−Ｅ、テネラ胞子小体抗体の存在および分泌された免疫
グロブリンのイソタイプを決定するために検定する。培
養液をスクリーニングして抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体
を産生ずるハイブリドーマを明らかにする。Ｅ、テネラ
表面抗原に対して生じた抗体は感染を防御することから
、すべてのハイプリドーマモノクローナル抗体を血清学
的標準操作によって凝集、溶解およびＥ、テネラ胞子小
体の表面への特異的結合能のためにスクリーンされる。
胞子小体表面反応性ｍＡｂを産生ずる２種のハイブリド
ーマは１０７３．１０ （１０７３）および１５−１に
指定され、対応するｍＡｂはｍＡｂ １０７３およびｍ
Ａｂ１５１に指定される。オフテルロニー二重拡散法お
よびヤギ抗マウスイソタイプ血清を利用すると両方のモ
ノクローナル抗体はＩｇＧイソタイプを有するがｍＡｂ
１０７３はサブクラスＩｇＧ、および１５−１はサ
ブクラスＩｇｈを有する。この二つのモノクローンは免
疫螢光検定によって示されるようにＥ、テネラ胞子小体
の表面と特異的に反応する。
ーマは１０７３．１０ （１０７３）および１５−１に
指定され、対応するｍＡｂはｍＡｂ １０７３およびｍ
Ａｂ１５１に指定される。オフテルロニー二重拡散法お
よびヤギ抗マウスイソタイプ血清を利用すると両方のモ
ノクローナル抗体はＩｇＧイソタイプを有するがｍＡｂ
１０７３はサブクラスＩｇＧ、および１５−１はサ
ブクラスＩｇｈを有する。この二つのモノクローンは免
疫螢光検定によって示されるようにＥ、テネラ胞子小体
の表面と特異的に反応する。
両方のモノクローナル抗体は初回抗原刺激（プライミン
グ）の約４８後ハイブリドーマ細胞約２×ｌＯｈ〜約６
Ｘ１０ｈを有する約０．５ＴＭ／１匹（マウス）をブリ
スタン初回抗原刺激を受けたＢａｌｂ／ｃマウスに注射
することによって生体内に産生ずる。腹水を約８〜１２
８目に集め、約３５〜約６０％、好ましくは４５％飽和
度の硫酸アンモニウムで沈降させ、洗浄して、生理的に
許容される緩衝液にｐＨ約７．２で再懸濁させる。かか
る生理的に許容される緩衝液はリン酸塩緩衝食塩水、リ
ン酸塩緩衝食塩水、グルコース緩衝食塩水などを包含す
るが、これらに限定されない。
グ）の約４８後ハイブリドーマ細胞約２×ｌＯｈ〜約６
Ｘ１０ｈを有する約０．５ＴＭ／１匹（マウス）をブリ
スタン初回抗原刺激を受けたＢａｌｂ／ｃマウスに注射
することによって生体内に産生ずる。腹水を約８〜１２
８目に集め、約３５〜約６０％、好ましくは４５％飽和
度の硫酸アンモニウムで沈降させ、洗浄して、生理的に
許容される緩衝液にｐＨ約７．２で再懸濁させる。かか
る生理的に許容される緩衝液はリン酸塩緩衝食塩水、リ
ン酸塩緩衝食塩水、グルコース緩衝食塩水などを包含す
るが、これらに限定されない。
抗−Ｅ、テネラモノクローナル抗体はさらにプロティン
Ａセファロースマトリックスを用いるアフィニティーク
ロマトグラフィおよびエイ （ＥＶ）゛等の技術、イム
ノケミストリー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第
１５巻４２９〜４３６頁（１９７８年）によって精製す
る。精製したモノクローナル抗体を約１Ｍリン酸塩緩衝
液で約ｐｕａ、ｏに中和する。
Ａセファロースマトリックスを用いるアフィニティーク
ロマトグラフィおよびエイ （ＥＶ）゛等の技術、イム
ノケミストリー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第
１５巻４２９〜４３６頁（１９７８年）によって精製す
る。精製したモノクローナル抗体を約１Ｍリン酸塩緩衝
液で約ｐｕａ、ｏに中和する。
ｍＡｂ １０７３約１．５ｍｇ〜約３．５■またはｍ
Ａｂ １５−１約０．６■〜約２．６■を胞子形成卵母
細胞攻撃の約２４および約２時間前に投与した場合、生
体内に産生じた抗−Ｅ、テネラモノクローナル抗体は生
後１日のニワトリにＥ、テネラ感染に対して高程度の受
動感染防御を誘発する。
Ａｂ １５−１約０．６■〜約２．６■を胞子形成卵母
細胞攻撃の約２４および約２時間前に投与した場合、生
体内に産生じた抗−Ｅ、テネラモノクローナル抗体は生
後１日のニワトリにＥ、テネラ感染に対して高程度の受
動感染防御を誘発する。
精製抗−Ｅ、テネラモノクローナル抗体は哺乳類または
鳥類の抗−Ｉｄ抗体を誘発させるために使用する。許容
される哺乳類はマウス、ラット、モルモット、ハムスタ
ー、ヒツジ、ヤギ、好適にはウサギを包含するが、これ
らに限定されない。ニューシーラントホワイト系ウサギ
にアジュバント好ましくはフロイント完全アジュバント
中の精製モノクローナル抗体を注射する。各動物を５０
％アジュバント約ＩＭ、ｍＡｂ １０７３あるいはｍ
Ａｂ １５−１のいずれかを約８０〜約３００ ｐｇ金
含有る５０％抗体混合液で筋肉内（ＩＭ）および皮下（
ＳＣ）の多数部位に免疫する。ウサギにフロイント完全
アジュバント中適当なモノクローナル抗体約８０１！ｇ
で約１週間間隔で３週間ＳＣおよび１Ｍ経路により追加
免疫する。最後のＳＣ−ＩＭ免疫の２週間後、ウサギに
食塩水中はぼ同量の適当なモノクローナル抗体で静脈内
経路によって追加免疫する。最終追加免疫の約７８後ウ
サギに採血し、血清を集める。
鳥類の抗−Ｉｄ抗体を誘発させるために使用する。許容
される哺乳類はマウス、ラット、モルモット、ハムスタ
ー、ヒツジ、ヤギ、好適にはウサギを包含するが、これ
らに限定されない。ニューシーラントホワイト系ウサギ
にアジュバント好ましくはフロイント完全アジュバント
中の精製モノクローナル抗体を注射する。各動物を５０
％アジュバント約ＩＭ、ｍＡｂ １０７３あるいはｍ
Ａｂ １５−１のいずれかを約８０〜約３００ ｐｇ金
含有る５０％抗体混合液で筋肉内（ＩＭ）および皮下（
ＳＣ）の多数部位に免疫する。ウサギにフロイント完全
アジュバント中適当なモノクローナル抗体約８０１！ｇ
で約１週間間隔で３週間ＳＣおよび１Ｍ経路により追加
免疫する。最後のＳＣ−ＩＭ免疫の２週間後、ウサギに
食塩水中はぼ同量の適当なモノクローナル抗体で静脈内
経路によって追加免疫する。最終追加免疫の約７８後ウ
サギに採血し、血清を集める。
許容される鳥類は、ハト、シチメンチョウ、ホロホロチ
ョウ、ヒヨコ好適にはニワトリのヒナを包含するが、こ
れらに限定されない。ニワトリの抗−！ｄ抗体は同量の
アジュバント好ましくはフロイント完全アジュバント中
精製モノクローナル抗体約０．５〜約５曙で１Ｍ経路に
より生後６〜８週間のレグホンニワトリを免疫すること
によって調製する。その鳥に同一のモノクローナル抗体
を同一濃度で２週間追加免疫惑作を与える。最終追加免
疫の約１週間後ニワトリに採血し、血清を集める。
ョウ、ヒヨコ好適にはニワトリのヒナを包含するが、こ
れらに限定されない。ニワトリの抗−！ｄ抗体は同量の
アジュバント好ましくはフロイント完全アジュバント中
精製モノクローナル抗体約０．５〜約５曙で１Ｍ経路に
より生後６〜８週間のレグホンニワトリを免疫すること
によって調製する。その鳥に同一のモノクローナル抗体
を同一濃度で２週間追加免疫惑作を与える。最終追加免
疫の約１週間後ニワトリに採血し、血清を集める。
ウサギとニワトリの抗−Ｉｄ血清は、正常なマウスの免
疫グロブリンおよびｍＡｂ−１０７３とｍＡｂ １５−
１は同じイソタイプを有するマウスのモノクローナル抗
体を結合したセファロース４Ｂでの吸収系列によって単
一特異性を示す。免疫吸着剤はエイ等イムノケミストリ
ー第１５巻、４２９〜４３６頁（１９７８年）の技術に
準じて調製する。単一特異性は酵素結合免疫吸着剤検定
（ＥＬＩＳＡ）および異なった無標識抗−！ｄ製剤によ
るモノクローナル対応抗体に対するアルカリホスファタ
ーゼ（ＡＰ）−結合抗−Ｉｄの競合的阻止結合によって
確認する。過剰の非結合抗−Ｉｄ １０７３は対応ｍＡ
ｂ１０７３に結合するＡＰ−結合抗−Ｉｄ １０７３の
１００％阻止を誘発し、一方過剰の抗−Ｉｄ１５−１は
−Ａｂ１０７３に結合するＡＰ−標識抗−Ｉｄ １０７
３の４３％阻止のみを誘発する。単りローン性抗−Ｅ、
テネラに対して生じた抗−Ｉｄ抗体は対応ｍＡｂの抗−
ｆｄ １０７３あるいは抗１５−１とは競合しない。
疫グロブリンおよびｍＡｂ−１０７３とｍＡｂ １５−
１は同じイソタイプを有するマウスのモノクローナル抗
体を結合したセファロース４Ｂでの吸収系列によって単
一特異性を示す。免疫吸着剤はエイ等イムノケミストリ
ー第１５巻、４２９〜４３６頁（１９７８年）の技術に
準じて調製する。単一特異性は酵素結合免疫吸着剤検定
（ＥＬＩＳＡ）および異なった無標識抗−！ｄ製剤によ
るモノクローナル対応抗体に対するアルカリホスファタ
ーゼ（ＡＰ）−結合抗−Ｉｄの競合的阻止結合によって
確認する。過剰の非結合抗−Ｉｄ １０７３は対応ｍＡ
ｂ１０７３に結合するＡＰ−結合抗−Ｉｄ １０７３の
１００％阻止を誘発し、一方過剰の抗−Ｉｄ１５−１は
−Ａｂ１０７３に結合するＡＰ−標識抗−Ｉｄ １０７
３の４３％阻止のみを誘発する。単りローン性抗−Ｅ、
テネラに対して生じた抗−Ｉｄ抗体は対応ｍＡｂの抗−
ｆｄ １０７３あるいは抗１５−１とは競合しない。
パラトープ結合Ｉｄ決定基は（ａ）プラスチック表面で
固定化した胞子小体抗原へ対応モノクローナル抗体が結
合する抗−Ｉｄの阻止能および（ｂｌｌ対応−Ｉｄ抗体
へモノクローナル抗体が結合する遊離の胞子小体抗原の
阻止能によって検定される。可溶性胞子小体抗原は対応
ｍＡｂに対する抗−Ｉｄ １０７３の結合（５１％）お
よび対応ｍＡｂに対する抗−［ｄ１５−１の結合（３９
％）の部分阻止しか生じない。
固定化した胞子小体抗原へ対応モノクローナル抗体が結
合する抗−Ｉｄの阻止能および（ｂｌｌ対応−Ｉｄ抗体
へモノクローナル抗体が結合する遊離の胞子小体抗原の
阻止能によって検定される。可溶性胞子小体抗原は対応
ｍＡｂに対する抗−Ｉｄ １０７３の結合（５１％）お
よび対応ｍＡｂに対する抗−［ｄ１５−１の結合（３９
％）の部分阻止しか生じない。
従ってｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１５１の両方の
Ｉｄ決定基はパラトープと結合する。
Ｉｄ決定基はパラトープと結合する。
ニワトリにウサギあるいはニワトリのいずれかに生じた
抗−Ｔｄ抗体、抗−Ｉｄ １０７３または抗−Ｉｄ１５
−１を接種して免疫する。生理的に許容される媒質中杭
−Ｉｄ抗体を好適にはミョウバン沈降物である許容され
るアジュバントを存在させであるいは存在させずに投与
する。かかる生理的に許容される媒質は生理食塩水、リ
ン酸塩緩衝食塩水、グルコース緩衝食塩水などを包含す
るが、これらに限定されない。約２日で開始し、約１週
間の間隔で約３週間続けるニワトリの免疫怒作は感染に
対して免疫を生じる。感染防御免疫はニワトリ−羽に対
して抗−Ｉｄ免疫原約２５μｇ〜約４００ ｔｒｇを１
週毎に約１〜約４度投与することによって達成される。
抗−Ｔｄ抗体、抗−Ｉｄ １０７３または抗−Ｉｄ１５
−１を接種して免疫する。生理的に許容される媒質中杭
−Ｉｄ抗体を好適にはミョウバン沈降物である許容され
るアジュバントを存在させであるいは存在させずに投与
する。かかる生理的に許容される媒質は生理食塩水、リ
ン酸塩緩衝食塩水、グルコース緩衝食塩水などを包含す
るが、これらに限定されない。約２日で開始し、約１週
間の間隔で約３週間続けるニワトリの免疫怒作は感染に
対して免疫を生じる。感染防御免疫はニワトリ−羽に対
して抗−Ｉｄ免疫原約２５μｇ〜約４００ ｔｒｇを１
週毎に約１〜約４度投与することによって達成される。
免疫したニワトリは抗−Ｉｄ抗体の免疫感作に伴いまた
攻撃感染後に高レベルの抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体を
産生ずる。
攻撃感染後に高レベルの抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体を
産生ずる。
次の実施例は本発明を具体的に説明するものであるが、
これらに限定されるものではない。
これらに限定されるものではない。
抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体産生細胞をあらかじめＥ、
テネラ胞子小体で免疫したＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓か
ら得た。マウス群を同量のフロイント完全アジュバシト
中０．５寂につきシュマツ（Ｓｃｈｍａ Ｌｘ）等ジュ
ー。プロトゾール（Ｊ、 Ｐｒｏｔｏｚｏｌ、）第３１
巻、１８１〜１９３頁（１９８４年）の方法によりＤＥ
−５２陰イオン交換クロマトグラフイによって精製した
胞子小体２×ＩＯ’で腹腔内免疫した。初期免疫怒作か
ら１４．２１および６３日８にリン酸塩緩衝液中精製し
たＥ、テネラ胞子小体２Ｘ１０’を含有する静脈追加免
疫をマウスに投与した。最終追加免疫の３日後に始まる
抗−Ｅ。
テネラ胞子小体で免疫したＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓か
ら得た。マウス群を同量のフロイント完全アジュバシト
中０．５寂につきシュマツ（Ｓｃｈｍａ Ｌｘ）等ジュ
ー。プロトゾール（Ｊ、 Ｐｒｏｔｏｚｏｌ、）第３１
巻、１８１〜１９３頁（１９８４年）の方法によりＤＥ
−５２陰イオン交換クロマトグラフイによって精製した
胞子小体２×ＩＯ’で腹腔内免疫した。初期免疫怒作か
ら１４．２１および６３日８にリン酸塩緩衝液中精製し
たＥ、テネラ胞子小体２Ｘ１０’を含有する静脈追加免
疫をマウスに投与した。最終追加免疫の３日後に始まる
抗−Ｅ。
テネラ胞子小体抗体に対してマウスを試験した。。
抗−胞子小体抗体産生マウスから脾臓を集め、単個細胞
浮遊液をＲＰ Ｍ Ｉ １６４０培地で調製した。
浮遊液をＲＰ Ｍ Ｉ １６４０培地で調製した。
ハイブリドーマ産生は抗−Ｅ、テネラ胞子小体抗体産生
牌リンパ球とヒボキサンチン−アミノプテリン−チミジ
ン（ＨＡＴ）感受性マウス骨髄腫細胞、５Ｐ−２１０と
ダルベツコ改質イーグル培地（ＤＭＥＭ）中細胞比５：
ｌで混合することによって達成した。細胞融合は分子量
１０００のポリエチレングリコール４０％溶液を脾臓当
たり０．３ Ｍ添加することによって得られ、静かにた
たいて沈澱物を再懸濁させた。細胞を直ちに１．５０Ｏ
ＲＰＭで３分間遠心分離し、上澄み液を除去する前にさ
らに５分間放置した。細胞を新鮮なりＭＥＭＩＯ縦に静
かに再懸濁した。 １． ＯＯＯｒｐｍで７分間遠心分
離した後、上澄み液を除去した後、細胞を１０％ウシ胎
児血清、１０−’Ｍヒボキサンチン、１０４Ｍチミジン
で補足した新鮮なりＭＥＭ６０堀に再懸濁させて１ウエ
ル当たりＯ，Ｓ Ｗにつき２．５Ｘ１０’牌細胞の密度
で２４−ウェル培養皿に平板培養した。３７℃で一晩培
養した後、培地を１０％ウシ胎児血清、１０−’Ｍヒポ
キサンチン、１０−’Ｍチミジンおよび８Ｘ１０−’Ｍ
アミノプテリンを含有するＤＭＥＭに取り替えた。ＨＡ
Ｔ培地のハイブリドーマ選択は７８後終結し、その培養
を抗胞子小体抗体が固相免疫放射線検定法（ＳＰＩＲＡ
）を用いて培養液中に検出されるまでＤＭＥＭで維持し
た。ポリビニルプレー１−（９６ウエル）をＥ、テネラ
胞子小体抗原でコートした。
牌リンパ球とヒボキサンチン−アミノプテリン−チミジ
ン（ＨＡＴ）感受性マウス骨髄腫細胞、５Ｐ−２１０と
ダルベツコ改質イーグル培地（ＤＭＥＭ）中細胞比５：
ｌで混合することによって達成した。細胞融合は分子量
１０００のポリエチレングリコール４０％溶液を脾臓当
たり０．３ Ｍ添加することによって得られ、静かにた
たいて沈澱物を再懸濁させた。細胞を直ちに１．５０Ｏ
ＲＰＭで３分間遠心分離し、上澄み液を除去する前にさ
らに５分間放置した。細胞を新鮮なりＭＥＭＩＯ縦に静
かに再懸濁した。 １． ＯＯＯｒｐｍで７分間遠心分
離した後、上澄み液を除去した後、細胞を１０％ウシ胎
児血清、１０−’Ｍヒボキサンチン、１０４Ｍチミジン
で補足した新鮮なりＭＥＭ６０堀に再懸濁させて１ウエ
ル当たりＯ，Ｓ Ｗにつき２．５Ｘ１０’牌細胞の密度
で２４−ウェル培養皿に平板培養した。３７℃で一晩培
養した後、培地を１０％ウシ胎児血清、１０−’Ｍヒポ
キサンチン、１０−’Ｍチミジンおよび８Ｘ１０−’Ｍ
アミノプテリンを含有するＤＭＥＭに取り替えた。ＨＡ
Ｔ培地のハイブリドーマ選択は７８後終結し、その培養
を抗胞子小体抗体が固相免疫放射線検定法（ＳＰＩＲＡ
）を用いて培養液中に検出されるまでＤＭＥＭで維持し
た。ポリビニルプレー１−（９６ウエル）をＥ、テネラ
胞子小体抗原でコートした。
精製Ｅ、テネラ胞子小体をＤＥ−５２超音波処理し、上
澄み液を０．０５ Ｍ炭酸塩緩衝液ｐｌ＋９．６で蛋白
濃度２５μｇ／ＴＭに希釈することによって抗原を調製
した。抗原１ｏｏｎを各ウェルに添加し、１１００ａ／
ウエル、３７℃で４時間培養した。ウェルを１．５％ウ
マ血ｆ（Ｈ３）で補足したリン酸塩緩衝食塩水（Ｐ Ｂ
Ｓ）で３回洗浄した。ウェルを３７℃で１０％Ｈ３を
含有するＰＢＳ２００１１ｉで４時間遮断した。ハイブ
リドーマ培養の培養液を希釈し、ＰＢＳ／１．５％Ｈ３
中の各適当な希釈液１００ｍを各ウェルに添加し、３７
℃で２時間培養した。ウェルを洗浄し、１２５Ｉ−ヤギ
抗マウス血清のＰＢＳ／１．５％Ｈ８に希釈した１００
．ｆｉを添加し、プレートを２時間培養した。プレート
を洗浄し、ウェルを除去し、計数した。個々のウェルの
抗体産生をティシュ力ルチュアメソソズアンドアプリケ
ーションズ、クルスおよびパターリン、編集アカデミツ
クプレス（１９７３年）のソフトアガールテクニクスの
マクファーソンの方法を用いて軟寒天で希釈および培養
することによってクローンした。抗体産生ハイブリドー
マ細胞を系列希釈して１ウエルにつき１０〜３０個の細
胞を得、ｌＯ％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭの０．
２％寒天に添加した。５％ｃｏ、−９５％空気の雰囲気
中３７℃で１０日間培養した後１２個の別々のコロニー
を選択し、ＤＭＥＭと１０％ウシ胎児血清２００．ｃｃ
Ｑを含有する９６ウエルの各々に移入した。クローンを
７日間培養し、その後培養液を集め５ＰＩＲＡテストで
検定した。これらのクローンの二つを１０７３．１０
（１０７３）および１５−１に指定し、さらに研究に使
用した。
澄み液を０．０５ Ｍ炭酸塩緩衝液ｐｌ＋９．６で蛋白
濃度２５μｇ／ＴＭに希釈することによって抗原を調製
した。抗原１ｏｏｎを各ウェルに添加し、１１００ａ／
ウエル、３７℃で４時間培養した。ウェルを１．５％ウ
マ血ｆ（Ｈ３）で補足したリン酸塩緩衝食塩水（Ｐ Ｂ
Ｓ）で３回洗浄した。ウェルを３７℃で１０％Ｈ３を
含有するＰＢＳ２００１１ｉで４時間遮断した。ハイブ
リドーマ培養の培養液を希釈し、ＰＢＳ／１．５％Ｈ３
中の各適当な希釈液１００ｍを各ウェルに添加し、３７
℃で２時間培養した。ウェルを洗浄し、１２５Ｉ−ヤギ
抗マウス血清のＰＢＳ／１．５％Ｈ８に希釈した１００
．ｆｉを添加し、プレートを２時間培養した。プレート
を洗浄し、ウェルを除去し、計数した。個々のウェルの
抗体産生をティシュ力ルチュアメソソズアンドアプリケ
ーションズ、クルスおよびパターリン、編集アカデミツ
クプレス（１９７３年）のソフトアガールテクニクスの
マクファーソンの方法を用いて軟寒天で希釈および培養
することによってクローンした。抗体産生ハイブリドー
マ細胞を系列希釈して１ウエルにつき１０〜３０個の細
胞を得、ｌＯ％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭの０．
２％寒天に添加した。５％ｃｏ、−９５％空気の雰囲気
中３７℃で１０日間培養した後１２個の別々のコロニー
を選択し、ＤＭＥＭと１０％ウシ胎児血清２００．ｃｃ
Ｑを含有する９６ウエルの各々に移入した。クローンを
７日間培養し、その後培養液を集め５ＰＩＲＡテストで
検定した。これらのクローンの二つを１０７３．１０
（１０７３）および１５−１に指定し、さらに研究に使
用した。
ハイブリドーマ１０７３．１０の試料を１９８６年２月
１１日にアメリカンタイブカルチュアコレクション、１
２３０１パークラウンドライブ、ロックビル、マリ−ラ
ンド２０８５２、ＵＳＡに寄託し、ＡＴＣＣＮＯ，ＨＢ
９０１７が指定されている。またハイプリドーマ１５−
１の試料を１９８６年２月１１日にアメリカンタイプカ
ルチュアコレクションに寄託し、ＡＴＣＣＮＯ，ＨＢ９
０１６に指定されている。
１１日にアメリカンタイブカルチュアコレクション、１
２３０１パークラウンドライブ、ロックビル、マリ−ラ
ンド２０８５２、ＵＳＡに寄託し、ＡＴＣＣＮＯ，ＨＢ
９０１７が指定されている。またハイプリドーマ１５−
１の試料を１９８６年２月１１日にアメリカンタイプカ
ルチュアコレクションに寄託し、ＡＴＣＣＮＯ，ＨＢ９
０１６に指定されている。
モノクローナル抗体のイソタイプをヤギ抗マウスイソタ
イプ血清を使用するラフタロ二−二重拡散テストによっ
て決定した。ハイプリドーマ１０７３によって分泌され
るｓ＋ＡｂはＩｇＧ、イソタイプを示し、一方、１５−
１ハイブリドーマの抗体は１ｇＧ２イソタイプを有した
。
イプ血清を使用するラフタロ二−二重拡散テストによっ
て決定した。ハイプリドーマ１０７３によって分泌され
るｓ＋ＡｂはＩｇＧ、イソタイプを示し、一方、１５−
１ハイブリドーマの抗体は１ｇＧ２イソタイプを有した
。
実施例１のｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１５−１を
産生するハイブリドーマ細胞を１０％ウシ胎児血清でｔ
ｍ当たり約Ｉ Ｘ １０’細胞の細胞密度に補足したＤ
Ｍ Ｅ Ｍで増殖させた。細胞を集め、ＤＭＥＭで３
回洗浄し、ＤＭＥＭにＩＷ当たり４Ｘ１０’細胞の濃度
で再懸濁させた。Ｂａｌｂ／ｃマウスはｌ動物当たりハ
イブリドーマ細胞２Ｘ１０”を腹腔内に注射する４日前
にブリスタン０．５ Ｍで腹腔内に初回抗原刺激を受け
た。ハイブリドーマ注射の後８〜１２日の間に腹水を腹
腔から集めた。腹水を遠心分離していかなる細胞をも除
去し、免疫グロブリン（Ｉｇ）を沈降させた。腹水を飽
和硫酸アンモニウムと混合して４５％飽和度を得た。沈
降物を０℃で２時間放置した後、０．１Ｍホウ酸塩緩衝
７＆ｐＨＢ、２に再溶解させた。その溶液を再可溶化緩
衝液とアジド（０，０２％）およびフェニルメタンスル
ホン酸（ＰＭＳＦ）（０，０ＯＯＩＮ）（緩衝液ｌ）で
透析してさらにエイ等、イムノケミストリー第１５巻４
２９〜４３６頁（１９７８年）の方法を用いるプロティ
ンＡアフィニティークロマトグラフィによって精製した
。プロティン−Ａ観相性マトリックスはＩｇＧ／ｃｎ！
ゲル２０呵の結合能を有した。カラムを緩衝液ｌで平衡
にし、ｍＡｂ試料を適用した。溶出液に２８０ｎｍ吸収
物質がなくなるまでカラムを緩衝液１で洗浄した。ｍＡ
ｂ ＩｇＧを０．２ Ｍグリシン−ＨＣｒ緩衝液、ｐｌ
＋３．０で溶出した。ＩｇＧを含有する留分をプールし
、１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ８，０のｌ／１０容量で中和
した。精製ｍＡｂをリン酸塩緩衝液で透析し、貯蔵した
。
産生するハイブリドーマ細胞を１０％ウシ胎児血清でｔ
ｍ当たり約Ｉ Ｘ １０’細胞の細胞密度に補足したＤ
Ｍ Ｅ Ｍで増殖させた。細胞を集め、ＤＭＥＭで３
回洗浄し、ＤＭＥＭにＩＷ当たり４Ｘ１０’細胞の濃度
で再懸濁させた。Ｂａｌｂ／ｃマウスはｌ動物当たりハ
イブリドーマ細胞２Ｘ１０”を腹腔内に注射する４日前
にブリスタン０．５ Ｍで腹腔内に初回抗原刺激を受け
た。ハイブリドーマ注射の後８〜１２日の間に腹水を腹
腔から集めた。腹水を遠心分離していかなる細胞をも除
去し、免疫グロブリン（Ｉｇ）を沈降させた。腹水を飽
和硫酸アンモニウムと混合して４５％飽和度を得た。沈
降物を０℃で２時間放置した後、０．１Ｍホウ酸塩緩衝
７＆ｐＨＢ、２に再溶解させた。その溶液を再可溶化緩
衝液とアジド（０，０２％）およびフェニルメタンスル
ホン酸（ＰＭＳＦ）（０，０ＯＯＩＮ）（緩衝液ｌ）で
透析してさらにエイ等、イムノケミストリー第１５巻４
２９〜４３６頁（１９７８年）の方法を用いるプロティ
ンＡアフィニティークロマトグラフィによって精製した
。プロティン−Ａ観相性マトリックスはＩｇＧ／ｃｎ！
ゲル２０呵の結合能を有した。カラムを緩衝液ｌで平衡
にし、ｍＡｂ試料を適用した。溶出液に２８０ｎｍ吸収
物質がなくなるまでカラムを緩衝液１で洗浄した。ｍＡ
ｂ ＩｇＧを０．２ Ｍグリシン−ＨＣｒ緩衝液、ｐｌ
＋３．０で溶出した。ＩｇＧを含有する留分をプールし
、１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ８，０のｌ／１０容量で中和
した。精製ｍＡｂをリン酸塩緩衝液で透析し、貯蔵した
。
精製ｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１５１を間接免疫
螢光法および酵素結合免疫検定法の両方で抗原結合特異
性に対して検定した。無傷胞子小体に結合する抗体を１
％ウシ血清アルブミン（Ｂ Ｓ Ａ）を含有するＰＢＳ
／アジド１００犀容量中５Ｘ１０’胞子小体をどちらか
のモノクローナル抗体５μｇと反応させることによって
決定し、４℃で３０分間培養した。胞子小体−ｍＡｂ複
合体を洗浄し、フルオレセイン結合ウサギ抗マウスＩｇ
を添加し、４℃で３０分間培養した。胞子小体を洗浄し
ＰＢＳ／アジド０．５ Ｍに懸濁させフルオレスセンス
アクチベイテフドセルソーター（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎ
ｃｅ ＡｃｔｉｖａｔｅｄＣｅｌｌ ５ｏｒｔｅｒ）で
分析した。 ｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１５−１の
両方が無傷胞子小体の表面と特異的に反応した。モノク
ローナル抗体の胞子小体抗原結合能・は、酵素結合免疫
吸着剤検定（ＥＬＩＳＡ）で証明した。胞子小体抗原は
胞子小体を超音波処理し、その物質を０．０５Ｍ炭酸塩
緩衝液ｐＨ９，６で蛋白質濃度１１Ｍ当たり２５ｇに希
釈することによって調製した。１プレート当たり９６個
のミクロ力価ウェルを超音波処理した胞子小体抗原ｌウ
ェルにつき２．５ ｊｇでコートし、洗浄し、ウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）で遮断し洗浄した。希釈度ｌ：１
０００の適当なｍＡｂを添加し、洗浄し発現剤を添加し
た０発現剤はアルカリ性ホスファターゼ（Ａ Ｐ）結合
ヤギ抗−マウスｔｇｃとした。室温で１時間培養した後
、プレートを洗浄し、結合ＡＰ作用をｐ−ニトロフェニ
ルリン酸二ナトリウム１■／ｍの添加によって検出した
。３７℃で１時間培養した後、反応を自動操作ＥＬＩＳ
Ａリーダーの４０５ｎｍで読み取った０両モノクローナ
ル抗体は可溶性胞子小体抗原への結合に高程度の反応性
を示した。
螢光法および酵素結合免疫検定法の両方で抗原結合特異
性に対して検定した。無傷胞子小体に結合する抗体を１
％ウシ血清アルブミン（Ｂ Ｓ Ａ）を含有するＰＢＳ
／アジド１００犀容量中５Ｘ１０’胞子小体をどちらか
のモノクローナル抗体５μｇと反応させることによって
決定し、４℃で３０分間培養した。胞子小体−ｍＡｂ複
合体を洗浄し、フルオレセイン結合ウサギ抗マウスＩｇ
を添加し、４℃で３０分間培養した。胞子小体を洗浄し
ＰＢＳ／アジド０．５ Ｍに懸濁させフルオレスセンス
アクチベイテフドセルソーター（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎ
ｃｅ ＡｃｔｉｖａｔｅｄＣｅｌｌ ５ｏｒｔｅｒ）で
分析した。 ｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１５−１の
両方が無傷胞子小体の表面と特異的に反応した。モノク
ローナル抗体の胞子小体抗原結合能・は、酵素結合免疫
吸着剤検定（ＥＬＩＳＡ）で証明した。胞子小体抗原は
胞子小体を超音波処理し、その物質を０．０５Ｍ炭酸塩
緩衝液ｐＨ９，６で蛋白質濃度１１Ｍ当たり２５ｇに希
釈することによって調製した。１プレート当たり９６個
のミクロ力価ウェルを超音波処理した胞子小体抗原ｌウ
ェルにつき２．５ ｊｇでコートし、洗浄し、ウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）で遮断し洗浄した。希釈度ｌ：１
０００の適当なｍＡｂを添加し、洗浄し発現剤を添加し
た０発現剤はアルカリ性ホスファターゼ（Ａ Ｐ）結合
ヤギ抗−マウスｔｇｃとした。室温で１時間培養した後
、プレートを洗浄し、結合ＡＰ作用をｐ−ニトロフェニ
ルリン酸二ナトリウム１■／ｍの添加によって検出した
。３７℃で１時間培養した後、反応を自動操作ＥＬＩＳ
Ａリーダーの４０５ｎｍで読み取った０両モノクローナ
ル抗体は可溶性胞子小体抗原への結合に高程度の反応性
を示した。
胞子小体抗原を実施例１に詳述した通り調製し、ナトリ
ウムドデシルスルフェート（Ｓ Ｄ Ｓ）ポリアクリル
アミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）によるサイズに従って
個々のポリペプチドに分離した。
ウムドデシルスルフェート（Ｓ Ｄ Ｓ）ポリアクリル
アミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）によるサイズに従って
個々のポリペプチドに分離した。
抗原５０ｐｔを０．１％ＳＤＳおよび２−メルカプトエ
タノールの存在下３％ポリアクリルアミド積み重ねゲル
をかぶせた５〜２０％線状ポリアクリルアミド勾配で分
離した、ラエムリ （Ｌａｅｍｍｌｉ）、ネイチェア第
２２７巻、６８０〜６８５頁（１９７０年）。
タノールの存在下３％ポリアクリルアミド積み重ねゲル
をかぶせた５〜２０％線状ポリアクリルアミド勾配で分
離した、ラエムリ （Ｌａｅｍｍｌｉ）、ネイチェア第
２２７巻、６８０〜６８５頁（１９７０年）。
ポリペプチドを追跡色素ブロモフェノールブルーが底に
１ｃＩＩ以内になるまで１０〜１２℃で３〜４時間時間
５０マａ気泳動にかけた。分離後エリノクソン（Ｅｒｉ
ｃｋｓｏｎ等ジエー、イム、メソズ、（Ｊ。
１ｃＩＩ以内になるまで１０〜１２℃で３〜４時間時間
５０マａ気泳動にかけた。分離後エリノクソン（Ｅｒｉ
ｃｋｓｏｎ等ジエー、イム、メソズ、（Ｊ。
Ｉｍｓ＋、 Ｍｅｔｈｓ、）第５１巻２４１〜２４９頁
（１９８２年）およびトウビン（Ｔｏｗｂ ｉ ｎ）等
、Ｐ、Ｎ、＾、Ｓ、第７６巻４３５０頁（１９７９年）
の操作に従ってニトロセルロース紙に転移させた。この
転移にバイオラドトランスプロット装置を電圧勾配３．
５ｖ／ｃｍで使用し、１１°Ｃで２１時間適用した。
（１９８２年）およびトウビン（Ｔｏｗｂ ｉ ｎ）等
、Ｐ、Ｎ、＾、Ｓ、第７６巻４３５０頁（１９７９年）
の操作に従ってニトロセルロース紙に転移させた。この
転移にバイオラドトランスプロット装置を電圧勾配３．
５ｖ／ｃｍで使用し、１１°Ｃで２１時間適用した。
各モノクローナル抗体ｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ
１５−１を分離した抗原と反応させた。モノクローナル
抗体を０．２５％ゼラチン−ＴＥＮ（０，０５Ｍ）リス
、０．１４ ＭＮａα、０．００５ Ｍ ＥＤＴＡ 、
０．０５％トリトンＸ １００）で１ ： １００に
希釈した。洗浄後ワサビのペルオキシダーゼに結合させ
たヤギ抗−ウサギＩｇＧを転移ポリペプチドを含有する
ニトロセルロース紙に添加した。ペルオキシダーゼ基質
４クロロ−１−ナフトールをニトロセルロース紙に適用
し、ポリペプチド−抗体複合体の部位で可視反応生成物
が生成した。このテストの条件下でこの抗体が胞子小体
ポリペプチドを認識しないことを示す１０７３プロツト
では可視反応は見られなかった。この所見は１０７３が
胞子小体の表面で見い出される非蛋白抗原を認識するこ
とができることを示唆する。上述した免疫プロット操作
を用いてモノクローナル抗体１５−１が８２ＫＤのＥ、
テネラ胞子小体ポリペプチドと反応することが見い出さ
れる。
１５−１を分離した抗原と反応させた。モノクローナル
抗体を０．２５％ゼラチン−ＴＥＮ（０，０５Ｍ）リス
、０．１４ ＭＮａα、０．００５ Ｍ ＥＤＴＡ 、
０．０５％トリトンＸ １００）で１ ： １００に
希釈した。洗浄後ワサビのペルオキシダーゼに結合させ
たヤギ抗−ウサギＩｇＧを転移ポリペプチドを含有する
ニトロセルロース紙に添加した。ペルオキシダーゼ基質
４クロロ−１−ナフトールをニトロセルロース紙に適用
し、ポリペプチド−抗体複合体の部位で可視反応生成物
が生成した。このテストの条件下でこの抗体が胞子小体
ポリペプチドを認識しないことを示す１０７３プロツト
では可視反応は見られなかった。この所見は１０７３が
胞子小体の表面で見い出される非蛋白抗原を認識するこ
とができることを示唆する。上述した免疫プロット操作
を用いてモノクローナル抗体１５−１が８２ＫＤのＥ、
テネラ胞子小体ポリペプチドと反応することが見い出さ
れる。
各モノクローナル抗体は、ニワトリを胞子形成卯母細胞
の感染価での攻撃に対して受動的に防御することができ
た。生後１日のニワトリにｍＡｂｌＯ？３２．５ｍｇあ
るいはｍＡｂ １５ １１．６ｍｇのいずれかをＥ、テ
ネラ胞子形成卵母細胞での攻撃の２４および２時間前に
注射した。病変を攻撃の６日後に記録した。感染防御し
ない対照のニワトリの盲腸の病変の平均スコアは３．０
であった。 ｍＡｂ １０７３で処理したニワトリは盲
腸病変平均スコア１．８を示し、一方＋ｎＡｂ１５１は
病変スコア１．７を生じ、Ｅ、テネラ感染に対して高レ
ベルの感染防御を示した。
の感染価での攻撃に対して受動的に防御することができ
た。生後１日のニワトリにｍＡｂｌＯ？３２．５ｍｇあ
るいはｍＡｂ １５ １１．６ｍｇのいずれかをＥ、テ
ネラ胞子形成卵母細胞での攻撃の２４および２時間前に
注射した。病変を攻撃の６日後に記録した。感染防御し
ない対照のニワトリの盲腸の病変の平均スコアは３．０
であった。 ｍＡｂ １０７３で処理したニワトリは盲
腸病変平均スコア１．８を示し、一方＋ｎＡｂ１５１は
病変スコア１．７を生じ、Ｅ、テネラ感染に対して高レ
ベルの感染防御を示した。
実施例２の精製抗−Ｅ、テネラ胞子小体モノクローナル
抗体をウサギに使用して抗−Ｉｄ１０７３および抗−Ｉ
ｄ１５−１抗体を産生させた。ＮＺＷウサギにフロイン
ト完全アジェバント中適当なｍＡｂを筋肉内（ＩＭ）お
よび皮下に３回注射して免疫した。
抗体をウサギに使用して抗−Ｉｄ１０７３および抗−Ｉ
ｄ１５−１抗体を産生させた。ＮＺＷウサギにフロイン
ト完全アジェバント中適当なｍＡｂを筋肉内（ＩＭ）お
よび皮下に３回注射して免疫した。
０．５ｖ中ｍＡｂ８０ｊＬｇの全量をフロイント完全ア
ジュバント０．５ Ｍで乳化して油中水型エマルジョン
１ｍを生成した。この注射液を各ウサギの下肢および背
の複数の部位に投与した。動物に１週間隔で３週間フロ
イント完全アジュバント中適当なｍＡｂ８０■をＳＣお
よび１Ｍ経路を組み合わせて追加免疫した。最後のＩＭ
−５Ｃ注射の２週間後、ウサギに緩衝食塩水中適当なｍ
Ａｂ８０μｇを静脈投与した。最終注射の７日後に血清
を集め、処理して凍結した。
ジュバント０．５ Ｍで乳化して油中水型エマルジョン
１ｍを生成した。この注射液を各ウサギの下肢および背
の複数の部位に投与した。動物に１週間隔で３週間フロ
イント完全アジュバント中適当なｍＡｂ８０■をＳＣお
よび１Ｍ経路を組み合わせて追加免疫した。最後のＩＭ
−５Ｃ注射の２週間後、ウサギに緩衝食塩水中適当なｍ
Ａｂ８０μｇを静脈投与した。最終注射の７日後に血清
を集め、処理して凍結した。
抗−ｆｄ抗体をアフィニティーマトリックスとして作用
する種々のグロブリン分画またはモノクローナル抗体と
セファロース４Ｂ免疫吸着剤を使用する一連の吸収によ
って精製した。免疫吸着剤の調製はエイ等、イムノケム
、第１５巻、４２９〜４３６頁（１９７８年）の操作に
よった。吸着剤には抗−Ｉｄを誘発させるために使用さ
れる特異ｍＡｂがイソタイプ、アロタイプおよびＬ鎖特
異性に分けられるプールした正常なマウスのγグロブリ
ン（ＮＭｒｇ）およびｍＡｂが包含される。吸収に使用
されるｍＡｂはＥ、テネラ胞子小体抗原の結合能とは違
った。正常なウサギの血清を対照として同じ方法で調製
した。抗イディオタイプ抗体の均質性をＥＬＩＳＡテス
トで確認した。（実施例２参照）各抗−！ｄ抗体の希釈
液（１００ｍ）を吸着ｍＡｂ抗−胞子小体抗体（５，０
μｇ）を含有するウェルに添加した。抗−Ｉｄ抗体を１
ｖにつき蛋白質０．０１ μｇ〜１００．０００ｐｇを
含有するように希釈した。蛋白濃度をローリ−の方法に
よって定量した。次の結果を得た。
する種々のグロブリン分画またはモノクローナル抗体と
セファロース４Ｂ免疫吸着剤を使用する一連の吸収によ
って精製した。免疫吸着剤の調製はエイ等、イムノケム
、第１５巻、４２９〜４３６頁（１９７８年）の操作に
よった。吸着剤には抗−Ｉｄを誘発させるために使用さ
れる特異ｍＡｂがイソタイプ、アロタイプおよびＬ鎖特
異性に分けられるプールした正常なマウスのγグロブリ
ン（ＮＭｒｇ）およびｍＡｂが包含される。吸収に使用
されるｍＡｂはＥ、テネラ胞子小体抗原の結合能とは違
った。正常なウサギの血清を対照として同じ方法で調製
した。抗イディオタイプ抗体の均質性をＥＬＩＳＡテス
トで確認した。（実施例２参照）各抗−！ｄ抗体の希釈
液（１００ｍ）を吸着ｍＡｂ抗−胞子小体抗体（５，０
μｇ）を含有するウェルに添加した。抗−Ｉｄ抗体を１
ｖにつき蛋白質０．０１ μｇ〜１００．０００ｐｇを
含有するように希釈した。蛋白濃度をローリ−の方法に
よって定量した。次の結果を得た。
抗−イディオタイプ抗体
無関連 １０’ ０．３１ ０．
１８ＮＭＩｇ １０’ ０．２９
０．１７これらの結果は結合が対応ｍＡｂの特異
Ｉｄ決定基に限定されたことを示す。抗−Ｉｄ１０７３
あるいは抗−Ｉｄ１５−１のいずれもｍＡｂ １０７３
またはｍＡｂ １５−１以外の非対応ｍＡｂと反応した
ことは特記すべきである。ｍＡｂ１５−１の抗−Ｉｄ１
０７３とのまたは逆の部分交差反応性は、ｍＡｂ １５
−１とｍＡｂ １０７３にＥ。
１８ＮＭＩｇ １０’ ０．２９
０．１７これらの結果は結合が対応ｍＡｂの特異
Ｉｄ決定基に限定されたことを示す。抗−Ｉｄ１０７３
あるいは抗−Ｉｄ１５−１のいずれもｍＡｂ １０７３
またはｍＡｂ １５−１以外の非対応ｍＡｂと反応した
ことは特記すべきである。ｍＡｂ１５−１の抗−Ｉｄ１
０７３とのまたは逆の部分交差反応性は、ｍＡｂ １５
−１とｍＡｂ １０７３にＥ。
テネラ胞子小体に共通のエピトープが認められることを
示す。
示す。
さらに交差反応性はＡＰ−標識抗−Ｔｄ抗体のＥＬＩＳ
Ａテストの異種無標識抗−Ｉｄ抗体による対応ａＡｂに
結合する競合阻止によって評価した。
Ａテストの異種無標識抗−Ｉｄ抗体による対応ａＡｂに
結合する競合阻止によって評価した。
（実施例２参照）この検定ではｍＡｂ５μｇをウェルの
プラスチック表面に吸収させ、種々の無標識抗−Ｉｄ抗
体の異なった濃度で予め培養したＡＰ−標識抗−Ｉｄｌ
Ｏｊ１１１と反応させた。過剰の無標識抗−Ｉｄ１０７
３による抗−Ｉｄ１０７３の対応涌Ａｂへの結合は１０
０％阻止された。ｍＡｂ１５１を抗−Ｉｄ１０７３と反
応させた場合には抗−Ｉｄ１０７３のｍＡｂ １０７３
への結合は一部阻止４３％が観察された。対応ｍＡｂへ
の抗−Ｉｄ１０７３あるいは抗−Ｉｄ１５−１の結合は
、他の抗−Ｉｄ抗体によって影響されなかった。
プラスチック表面に吸収させ、種々の無標識抗−Ｉｄ抗
体の異なった濃度で予め培養したＡＰ−標識抗−Ｉｄｌ
Ｏｊ１１１と反応させた。過剰の無標識抗−Ｉｄ１０７
３による抗−Ｉｄ１０７３の対応涌Ａｂへの結合は１０
０％阻止された。ｍＡｂ１５１を抗−Ｉｄ１０７３と反
応させた場合には抗−Ｉｄ１０７３のｍＡｂ １０７３
への結合は一部阻止４３％が観察された。対応ｍＡｂへ
の抗−Ｉｄ１０７３あるいは抗−Ｉｄ１５−１の結合は
、他の抗−Ｉｄ抗体によって影響されなかった。
抗−Ｉｄ抗血清のＩｇＧ分画をプロティンＡセファロー
スアフィニティークロマトグラフィ処理によって得た。
スアフィニティークロマトグラフィ処理によって得た。
操作は実施例１に記載される。
バラトープ結合Ｉｄ決定基をｍＡｂがプラスチック表面
で運動抑制された胞子小体抗原に結合する抗−Ｉｄの阻
止能によって評価した。この検定でＥＬＩＳＡで吸光度
の読み取りが０．７〜０．９である予め定量した希釈度
のｍＡｂを４℃で３０分間系列希釈の抗−Ｉｄと培養し
た。次に予め培養した混合液を胞子小体抗原、１０ｐｇ
と反応させた。洗浄および遮断後プレートをＡＰ−標識
ヤギ抗−ウサギＩｇＧと培養し実施例２で記載した通り
基質で発色させた。 ｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１
５１の胞子小体抗原の結合は対応抗−Ｉｄによって特異
的に阻止された。さらに抗−Ｉｄ１５−１によるｍＡｂ
１０７３の結合は一部阻止され、逆も同様であった。
で運動抑制された胞子小体抗原に結合する抗−Ｉｄの阻
止能によって評価した。この検定でＥＬＩＳＡで吸光度
の読み取りが０．７〜０．９である予め定量した希釈度
のｍＡｂを４℃で３０分間系列希釈の抗−Ｉｄと培養し
た。次に予め培養した混合液を胞子小体抗原、１０ｐｇ
と反応させた。洗浄および遮断後プレートをＡＰ−標識
ヤギ抗−ウサギＩｇＧと培養し実施例２で記載した通り
基質で発色させた。 ｍＡｂ １０７３およびｍＡｂ１
５１の胞子小体抗原の結合は対応抗−Ｉｄによって特異
的に阻止された。さらに抗−Ｉｄ１５−１によるｍＡｂ
１０７３の結合は一部阻止され、逆も同様であった。
実施例１に記載される可溶性胞子小体抗原は抗−Ｉｄ１
０７３の対応ｍＡｂへの結合は一部阻止５１％だけであ
った。同様に抗−Ｉｄ１５−１のｍＡｂ１５１への結合
は一部阻止３９％であった。両方の結果はｍＡｂ １０
７３およびｍＡｂ１５１のＩｄ決定基はバラトープと結
合したことを示す。
０７３の対応ｍＡｂへの結合は一部阻止５１％だけであ
った。同様に抗−Ｉｄ１５−１のｍＡｂ１５１への結合
は一部阻止３９％であった。両方の結果はｍＡｂ １０
７３およびｍＡｂ１５１のＩｄ決定基はバラトープと結
合したことを示す。
ＩｄとｍＡｂのパラトープとの結合はｍＡｂが対応抗−
Ｉｄ抗体に結合する遊離の胞子小体抗原の阻止能によっ
て確認した。この結合検定で予め定量した希釈度の抗−
Ｉｄ抗体は、種々の濃度の可溶化胞子小体と予め培養し
、次に反応混合液をプラスチック表面でコートしたｍＡ
ｂと反応させた。さらにこれらの所見はＩｄがｍＡｂの
パラトープと結合したことを確認した。
Ｉｄ抗体に結合する遊離の胞子小体抗原の阻止能によっ
て確認した。この結合検定で予め定量した希釈度の抗−
Ｉｄ抗体は、種々の濃度の可溶化胞子小体と予め培養し
、次に反応混合液をプラスチック表面でコートしたｍＡ
ｂと反応させた。さらにこれらの所見はＩｄがｍＡｂの
パラトープと結合したことを確認した。
実施例２の精製抗−Ｅ、テネラ胞子小体モノクローナル
抗体をニワトリに抗−Ｉｄ１０７３抗体を産生させるた
めに使用した。生後６〜８週のレグホン種のニワトリを
フロイント完全ア、シュバント中ｍＡｂ１０７３を１週
毎に３回筋肉内注射して免疫した。
抗体をニワトリに抗−Ｉｄ１０７３抗体を産生させるた
めに使用した。生後６〜８週のレグホン種のニワトリを
フロイント完全ア、シュバント中ｍＡｂ１０７３を１週
毎に３回筋肉内注射して免疫した。
０、５ ＴＭ 中ｍＡｂ １■全量をフロイント完全ア
ジュバント０．５ Ｍで乳化して油中水型エマルジョン
ＩＪを得た。免疫原を胸の筋肉の複数部位に投与した。
ジュバント０．５ Ｍで乳化して油中水型エマルジョン
ＩＪを得た。免疫原を胸の筋肉の複数部位に投与した。
最後の注射の１週間後、血清を集め処理して凍結させた
。
。
ニワトリの抗−Ｉｄ１０７３を１８％硫酸ナトリウムで
沈降させ、沈降物を１８％硫酸ナトリウムに保持し、Ｐ
ＢＳに再懸濁させ、ＰＢＳで広範囲にわたって透析した
。正常なニワトリの血清を同じ方法で調製し、対照とし
て使用した。ニワトリの抗−Ｉｄ１０７３を実施例３の
ように無関連翔＾ｂ ＩｇＧと１６回吸収させた。これ
は他のモノクローナルとの交差反応性を完全に脱離させ
るには不十分であった。特異性を得るために抗−Ｉｄ１
０７３．５００ ｔｔｔ／ＴＭを無関連ｍＡｂ （５
００ａｇ／Ｍ）と混和した。
沈降させ、沈降物を１８％硫酸ナトリウムに保持し、Ｐ
ＢＳに再懸濁させ、ＰＢＳで広範囲にわたって透析した
。正常なニワトリの血清を同じ方法で調製し、対照とし
て使用した。ニワトリの抗−Ｉｄ１０７３を実施例３の
ように無関連翔＾ｂ ＩｇＧと１６回吸収させた。これ
は他のモノクローナルとの交差反応性を完全に脱離させ
るには不十分であった。特異性を得るために抗−Ｉｄ１
０７３．５００ ｔｔｔ／ＴＭを無関連ｍＡｂ （５
００ａｇ／Ｍ）と混和した。
得られた免疫複合体を遠心分離によって除去した。
また特異性をＥＬＩＳＡテストで確認した。（実施例２
参照）対応ｍＡｂ非対応ａ＋ＡｂまたはＮＭＩｇ５μｇ
を含有する抗−Ｉｄ１０７３の希釈液１００４をウェル
に添加した。抗−［ｄ抗体の希釈は１：５０〜１：３、
２００の範囲であった０次の結果を得た。
参照）対応ｍＡｂ非対応ａ＋ＡｂまたはＮＭＩｇ５μｇ
を含有する抗−Ｉｄ１０７３の希釈液１００４をウェル
に添加した。抗−［ｄ抗体の希釈は１：５０〜１：３、
２００の範囲であった０次の結果を得た。
抗−イディオタイプ抗体１０７３
これらの結果は結合が対応ｍＡｂ １０７３の特異Ｉｄ
決定基に限定されたことを示す、実施例３で記載した競
合的結合検定では、他のｍＡｂは抗−Ｉｄ１０７３のｍ
Ａｂ １０７３への結合を特異的に阻止しなかった。
決定基に限定されたことを示す、実施例３で記載した競
合的結合検定では、他のｍＡｂは抗−Ｉｄ１０７３のｍ
Ａｂ １０７３への結合を特異的に阻止しなかった。
ニワトリの抗−Ｉｄ１０７３のｓＡｂ １０７３への結
合は可溶性Ｅ、テネラ胞子小体抗原をＥＬ Ｉ ＳＡ競
合的阻止検定に添加した場合、阻止しなかった。
合は可溶性Ｅ、テネラ胞子小体抗原をＥＬ Ｉ ＳＡ競
合的阻止検定に添加した場合、阻止しなかった。
ス１１汁Σ
生後２日のニワトリのコクシジウム症に対するウサギ抗
イディオタイプ抗体での 疫惑作ブロイラーのヒナを実
施例３で詳述した種々のウサギ抗−Ｉｄ抗体で筋肉内で
免疫した。抗−Ｉｄ１０７３および抗−Ｉｄ１５−１を
サンチェ（Ｓａｎｃｈｅｚ）等、インフエクト、イムン
、 （Ｉｎｆｅｃｔ、 ｒｍｍｕｎ、）第３０巻、７
２８〜７３３頁（１９８０年）の操作に準じてアルミニ
ウムゲル（ａｌｕｍ）と沈降させた。
イディオタイプ抗体での 疫惑作ブロイラーのヒナを実
施例３で詳述した種々のウサギ抗−Ｉｄ抗体で筋肉内で
免疫した。抗−Ｉｄ１０７３および抗−Ｉｄ１５−１を
サンチェ（Ｓａｎｃｈｅｚ）等、インフエクト、イムン
、 （Ｉｎｆｅｃｔ、 ｒｍｍｕｎ、）第３０巻、７
２８〜７３３頁（１９８０年）の操作に準じてアルミニ
ウムゲル（ａｌｕｍ）と沈降させた。
蛋白質当たりアルミニウムゲルの最終百分率は容量／容
量で２５であった。２日間の最初の注射はａｌｕｍ沈降
抗−ｒｄまたはウサギＩｇＧ （ＲＩｇＧ） ５０
ｔｔｇからなる。この鳥にａｌｕｍ沈降免疫原５０ｐ
ｇで１５日目におよび適当な免疫原２００μｇで２２日
目に追加免疫した。ニワトリの１群を同じ日に実施例１
に記載した可溶性胞子小体免疫原１０ｔｒｇで免疫した
。最後の免疫の２週間後ニワトリ全部を採血し、完全な
ビルレントＥ、テネラ胞子形成卵母細胞５Ｘ１０’を経
口接種で攻撃した。攻撃の６８後ニワトリを殺し、ジッ
ンソンおよびレイド゛（Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｒｅ
Ｉｄ）エクスプ、パラシト（Ｅｘｐ。
量で２５であった。２日間の最初の注射はａｌｕｍ沈降
抗−ｒｄまたはウサギＩｇＧ （ＲＩｇＧ） ５０
ｔｔｇからなる。この鳥にａｌｕｍ沈降免疫原５０ｐ
ｇで１５日目におよび適当な免疫原２００μｇで２２日
目に追加免疫した。ニワトリの１群を同じ日に実施例１
に記載した可溶性胞子小体免疫原１０ｔｒｇで免疫した
。最後の免疫の２週間後ニワトリ全部を採血し、完全な
ビルレントＥ、テネラ胞子形成卵母細胞５Ｘ１０’を経
口接種で攻撃した。攻撃の６８後ニワトリを殺し、ジッ
ンソンおよびレイド゛（Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｒｅ
Ｉｄ）エクスプ、パラシト（Ｅｘｐ。
Ｐａｒａｓｉｔ）第２８巻、３０〜３６頁（１９７０年
）に串して盲腸の病変の程度を定量した。病変を１〜４
の一定のスケールで評点し２．４が最も重い。
）に串して盲腸の病変の程度を定量した。病変を１〜４
の一定のスケールで評点し２．４が最も重い。
対照は実施例３で記載したウサギＩｇＧ （ＲＩｇＧ
）および実施例１で記載した胞子小体免疫原を包含して
いる。次の結果を得た。
）および実施例１で記載した胞子小体免疫原を包含して
いる。次の結果を得た。
抗−Ｉｄ１０７３ ８ １．８５±０．１
３抗−ｒｄ １５−１ ８ １．５０±０．
１８ＲＩｇＧ ４ ３．５０
±０．１４胞子小体免疫原 ８ １．０８
ｆ Ｏ，１６無 ８
３．４０ ± ０．１５これらの結果はＥ、テネ
ラ胞子小体表面抗原と反応するモノクローナル抗体に応
じて産生される特異抗−Ｉｄがコクシジウム症に対して
生後２日のブロイラーを免疫するために使用することが
できることを示す。抗−Ｉｄ１５−１と抗−Ｉｄ１０７
３での免疫感作は攻撃後の免疫鳥類に発現する病変の著
しい低下によって示されるように疾病に対して高レベル
の感染防御を提供する。
３抗−ｒｄ １５−１ ８ １．５０±０．
１８ＲＩｇＧ ４ ３．５０
±０．１４胞子小体免疫原 ８ １．０８
ｆ Ｏ，１６無 ８
３．４０ ± ０．１５これらの結果はＥ、テネ
ラ胞子小体表面抗原と反応するモノクローナル抗体に応
じて産生される特異抗−Ｉｄがコクシジウム症に対して
生後２日のブロイラーを免疫するために使用することが
できることを示す。抗−Ｉｄ１５−１と抗−Ｉｄ１０７
３での免疫感作は攻撃後の免疫鳥類に発現する病変の著
しい低下によって示されるように疾病に対して高レベル
の感染防御を提供する。
２目孤立
生後４日のニワトリのコクシジウム症に対するウサギ「
−イディオタイプ「 での １１作ブロイラーのヒナ
を実施例３で詳述したウサギ抗−Ｉｄ抗体で筋肉内免疫
感作した。そのトリを適当な抗−Ｉｄ抗体５０μｇ、
２００ｐｇおよび２００μｇで４．１８および３０日８
に免疫した。胞子小体免疫原およびＲＩｇＧ濃度は実施
例５と等価にした。
−イディオタイプ「 での １１作ブロイラーのヒナ
を実施例３で詳述したウサギ抗−Ｉｄ抗体で筋肉内免疫
感作した。そのトリを適当な抗−Ｉｄ抗体５０μｇ、
２００ｐｇおよび２００μｇで４．１８および３０日８
に免疫した。胞子小体免疫原およびＲＩｇＧ濃度は実施
例５と等価にした。
最後の免疫感作の２週間後ニワトリ全部に完全なビルレ
ントＥ、テネラ胞子形成卯母細胞５ＸＩＯ’を経口接種
で攻撃した。攻撃の６日後、ニワトリを殺し、盲腸の病
変の程度を前記ジョンソンおよびレイドの方法により定
量した。対照は実施例５で記載した。病変を実施例５で
詳述した通り評点した。次の結果を得た。
ントＥ、テネラ胞子形成卯母細胞５ＸＩＯ’を経口接種
で攻撃した。攻撃の６日後、ニワトリを殺し、盲腸の病
変の程度を前記ジョンソンおよびレイドの方法により定
量した。対照は実施例５で記載した。病変を実施例５で
詳述した通り評点した。次の結果を得た。
抗−Ｉｄ１０７３ １０ １．５０±０．
２８抗−Ｉｄ １５−１ １０ １．７０±
０．２４胞子小体免疫原 １０ １．４０±
０．１５ＲＩｇＧ
１０ ３．４０ ±
０．２２無 １０
３．１０ ± ０．１にれらの結果は抗−［ｄ１０７
３および抗−Ｉｄ１５−１がコクシジウム症に対してニ
ワトリを免疫するために使用することができることを示
す。ニワトリはＥ、テネラ卵母細胞の感染価での攻撃後
の著しい病変の低下によって示されるように高レベルの
免疫を示した。
２８抗−Ｉｄ １５−１ １０ １．７０±
０．２４胞子小体免疫原 １０ １．４０±
０．１５ＲＩｇＧ
１０ ３．４０ ±
０．２２無 １０
３．１０ ± ０．１にれらの結果は抗−［ｄ１０７
３および抗−Ｉｄ１５−１がコクシジウム症に対してニ
ワトリを免疫するために使用することができることを示
す。ニワトリはＥ、テネラ卵母細胞の感染価での攻撃後
の著しい病変の低下によって示されるように高レベルの
免疫を示した。
爽施炭１
生後３日のニワトリのコクシジウム症に対するニワトリ
の −イディオタイプｒ体での 感作ブロイラーのヒ
ナを実施例４で詳述したニワトリの抗−ＩｄｌＱ７３で
筋肉内で免疫した。このトリをａｌｕａ＋に結合させた
抗−Ｉｄ１０７３５０ ｔｔｇで３，１０および１７日
８に免疫した。実施例５参照。胞子小体免疫原を実施例
５でのように投与し、一方正常なニワトリの血清（ＮＣ
３）を抗−Ｉｄ抗体と同じレベルで投与した。最終免疫
感作の２週間後ニワトリ全部に完全なビルレントＥ、テ
ネラ胞子形成卵母細胞ｌＸｌ０’を経口接種で攻撃した
。攻撃の６８後ニワトリを殺し、盲腸の病変の程度を前
記ジョンソンおよびレイドの方法により定量した。
の −イディオタイプｒ体での 感作ブロイラーのヒ
ナを実施例４で詳述したニワトリの抗−ＩｄｌＱ７３で
筋肉内で免疫した。このトリをａｌｕａ＋に結合させた
抗−Ｉｄ１０７３５０ ｔｔｇで３，１０および１７日
８に免疫した。実施例５参照。胞子小体免疫原を実施例
５でのように投与し、一方正常なニワトリの血清（ＮＣ
３）を抗−Ｉｄ抗体と同じレベルで投与した。最終免疫
感作の２週間後ニワトリ全部に完全なビルレントＥ、テ
ネラ胞子形成卵母細胞ｌＸｌ０’を経口接種で攻撃した
。攻撃の６８後ニワトリを殺し、盲腸の病変の程度を前
記ジョンソンおよびレイドの方法により定量した。
病変を実施例５で詳述した通り評点した。対照は実施例
４で調製した正常なニワトリの血清（ＮＣ８）および実
施例１で記載した胞子小体免疫原を包含している０次の
結果を得た。
４で調製した正常なニワトリの血清（ＮＣ８）および実
施例１で記載した胞子小体免疫原を包含している０次の
結果を得た。
抗−Ｉｄ１０７３ ８ ２．１０±０．５
９ＮＣＳ ８ ３．９０±０
．０９胞子小体Ａｇ ８ １．６０±
０．３９無 ８
３．６０ ± ０．２にれらの結果は、ニワトリに生
じた抗−Ｉｄ１０７３がコクシジウム症に対してニワト
リを免疫するために使用することができることを示す。
９ＮＣＳ ８ ３．９０±０
．０９胞子小体Ａｇ ８ １．６０±
０．３９無 ８
３．６０ ± ０．２にれらの結果は、ニワトリに生
じた抗−Ｉｄ１０７３がコクシジウム症に対してニワト
リを免疫するために使用することができることを示す。
ニワトリはＥ、テネラ卵母細胞の感染ドースでの攻撃後
病変の程度の低下によって示される通り高レベルの免疫
を示した。
病変の程度の低下によって示される通り高レベルの免疫
を示した。
叉範■１
生後３日のニワトリのコクシジウム症に対してニワトリ
の抗イディオタイプｒ体での 感作ブロイラーのヒナ
を実施例４で詳述したニワトリの抗−Ｉｄ１０７３で筋
肉内免疫した。そのトリを抗−ｒｄ１０７３５０μｇで
３．ｌＯおよび１７日８に免疫した。胞子小体免疫原を
実施例５の通りおよび実施例７のＮＣ３を投与した。最
終免疫の１週間後全部のニワトリにビルレントＥ、テネ
ラ胞子形成卯母細胞Ｉ Ｘ １０’を経口接種で攻撃し
た。攻撃の６８後ニワトリを殺し、盲腸の病変の程度を
前記ジョンソンおよびレイドの方法により定量した。
の抗イディオタイプｒ体での 感作ブロイラーのヒナ
を実施例４で詳述したニワトリの抗−Ｉｄ１０７３で筋
肉内免疫した。そのトリを抗−ｒｄ１０７３５０μｇで
３．ｌＯおよび１７日８に免疫した。胞子小体免疫原を
実施例５の通りおよび実施例７のＮＣ３を投与した。最
終免疫の１週間後全部のニワトリにビルレントＥ、テネ
ラ胞子形成卯母細胞Ｉ Ｘ １０’を経口接種で攻撃し
た。攻撃の６８後ニワトリを殺し、盲腸の病変の程度を
前記ジョンソンおよびレイドの方法により定量した。
病変を実施例５で詳述した通り評点した。対照は実施例
７で記載した。次の結果を得た。
７で記載した。次の結果を得た。
抗−Ｉｄ１０７３ Ｂ ０．７０±０
．１３ＮＣＳ ８
１．８３ ± ０．２５胞子小体１ａ＋
８ １ 、００±０．１８無
８ １．２５ ± ０．１
９これらの結果は、ニワトリに生じた抗−Ｉｄ１０７３
がコクシジウム症に対してニワトリを免疫するために使
用することができることを示す、ニワトリはＥ、テネラ
卵母細胞の感染価での攻撃後病変がほとんどないことに
よって示されるように高レベルの免疫を示した。
．１３ＮＣＳ ８
１．８３ ± ０．２５胞子小体１ａ＋
８ １ 、００±０．１８無
８ １．２５ ± ０．１
９これらの結果は、ニワトリに生じた抗−Ｉｄ１０７３
がコクシジウム症に対してニワトリを免疫するために使
用することができることを示す、ニワトリはＥ、テネラ
卵母細胞の感染価での攻撃後病変がほとんどないことに
よって示されるように高レベルの免疫を示した。
大施斑主
生後３日のニワトリのコクシジウム症に対するニワトリ
の抗イディオタイプ での 感作゛ブロイラーのヒ
ナを実施例４で記載したニワトリの抗−Ｉｄ１０７３で
筋肉内に免疫した。このトリを実施例５のようにａｌｕ
−に結合させた抗−［ｄ１０７３１００ Ｉ！ｇで３．
１０および１７日目に免疫した。
の抗イディオタイプ での 感作゛ブロイラーのヒ
ナを実施例４で記載したニワトリの抗−Ｉｄ１０７３で
筋肉内に免疫した。このトリを実施例５のようにａｌｕ
−に結合させた抗−［ｄ１０７３１００ Ｉ！ｇで３．
１０および１７日目に免疫した。
胞子小体免疫原を実施例５の通りおよび実施例７のＮＣ
３を投与した。最終免疫の１週間後全部のニワトリに完
全なビルレントＥ、テネラ胞子形成卵母細胞３．５Ｘ１
０’・を経口接種で攻撃した。攻撃の６日後、ニワトリ
を殺し、盲腸の病変の程度を前記ジョンソンおよびレイ
ドの方法により定量した。病変を実施例５で詳述した通
り評点した。
３を投与した。最終免疫の１週間後全部のニワトリに完
全なビルレントＥ、テネラ胞子形成卵母細胞３．５Ｘ１
０’・を経口接種で攻撃した。攻撃の６日後、ニワトリ
を殺し、盲腸の病変の程度を前記ジョンソンおよびレイ
ドの方法により定量した。病変を実施例５で詳述した通
り評点した。
対照は実施例７に記載されている０次の結果を得た。
抗−Ｉｄ１０７３ ８ １．５６±０．１
ＯＮＣＳ ８ ２．３５±０
．２０胞子小体１ａ＋ ８ １．００
±０．２２無 ８
２．５０ ± ０．１７これらの結果はニワトリに生
じた抗−Ｉｄ１０？３が広範囲の適量のコクシジウム症
に対してニワトリを免疫するために使用することができ
ることを示す。抗−Ｉｄ抗体は正常にビルレント感染し
た後免疫鳥類の病変程度の低下によって示されるように
疾病に対して高レベルの感染防御を生じる。
ＯＮＣＳ ８ ２．３５±０
．２０胞子小体１ａ＋ ８ １．００
±０．２２無 ８
２．５０ ± ０．１７これらの結果はニワトリに生
じた抗−Ｉｄ１０？３が広範囲の適量のコクシジウム症
に対してニワトリを免疫するために使用することができ
ることを示す。抗−Ｉｄ抗体は正常にビルレント感染し
た後免疫鳥類の病変程度の低下によって示されるように
疾病に対して高レベルの感染防御を生じる。
異種移植抗−Ｉｄ （ａｂ２）で免疫したニワトリ（ａ
ｂ３゜抗−抗−Ｉｄ）によって産生した抗体は抗−１６
が生じるＩｄのｍＡｂ （Ａｂｌ）に関連がある。こ
れはニワトリを免疫した抗−Ｉｄの血清の実施例１で記
載した胞子小体抗原への結合能を分析することによって
定量した。血清を実施例３で記載した卵母細胞の攻撃前
におよび実施例５および６の病変検定前に集めた。直径
３μのカルボキシル化ミクロスフェア１２．５■／１Ｍ
を氷上で１時間培養することによってＰＢＳ中胞子小体
抗原１．８■／ｙでコートした。抗原コートしたミクロ
スフェア１５Ｉｔｉをニワトリの免疫血清、正常な対照
血清およびＥ、テネラ胞子小体に対して生じたニワトリ
の標準高度免疫血清の適当な希釈液で培養した。１％Ｂ
ＳＡを含有するＰＢＳ （ＰＢＳ−ＢＳＡ）で洗浄した
後ミクロスフェアを４℃で１時間フルオレセイン標識ウ
サギ抗ニワト１月ｇＧ 、 Ｆ （ａｂ）ｚの希釈液（
カペルラホ゛ラドリース（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ））１００ｍで培養した。ミクロスフェア
をＰＢＳ−ＢＳＡで洗浄し、ＰＢＳ０．５Ｍ、ミクロス
フェア２０．０００に懸濁させ、ＦＡＣ３ＩＶ流動細胞
計測器（ベクトンディキンソン）によって螢光測定した
。次の結果を得た。
ｂ３゜抗−抗−Ｉｄ）によって産生した抗体は抗−１６
が生じるＩｄのｍＡｂ （Ａｂｌ）に関連がある。こ
れはニワトリを免疫した抗−Ｉｄの血清の実施例１で記
載した胞子小体抗原への結合能を分析することによって
定量した。血清を実施例３で記載した卵母細胞の攻撃前
におよび実施例５および６の病変検定前に集めた。直径
３μのカルボキシル化ミクロスフェア１２．５■／１Ｍ
を氷上で１時間培養することによってＰＢＳ中胞子小体
抗原１．８■／ｙでコートした。抗原コートしたミクロ
スフェア１５Ｉｔｉをニワトリの免疫血清、正常な対照
血清およびＥ、テネラ胞子小体に対して生じたニワトリ
の標準高度免疫血清の適当な希釈液で培養した。１％Ｂ
ＳＡを含有するＰＢＳ （ＰＢＳ−ＢＳＡ）で洗浄した
後ミクロスフェアを４℃で１時間フルオレセイン標識ウ
サギ抗ニワト１月ｇＧ 、 Ｆ （ａｂ）ｚの希釈液（
カペルラホ゛ラドリース（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ））１００ｍで培養した。ミクロスフェア
をＰＢＳ−ＢＳＡで洗浄し、ＰＢＳ０．５Ｍ、ミクロス
フェア２０．０００に懸濁させ、ＦＡＣ３ＩＶ流動細胞
計測器（ベクトンディキンソン）によって螢光測定した
。次の結果を得た。
攻撃前の卵母細胞
抗−Ｉｄ１０７３ Ｂ １９．０±３．
５抗−Ｉｄ１５−１ ８ ２０．５±３．５
ＮＲ１ｇＧ ４ ２．０±０．９
胞子小体Ｉｍ ５ １９．５±４攻撃後
の卵母細胞 抗−Ｉｄ１０７３ ８ ４９．３±７抗−Ｉ
ｄ１５−１ ８ ５８．０±１ＯＮＲＩｇＧ
４ ３．０±１．３胞子小体Ｉ
ｍ ５ ４５．０±１７これらの結果は
抗−Ｉｄ１０７３および抗−Ｉｄ１５−１がニワトリを
免疫して中レベルの循環抗−抗−Ｉｄ抗体を産生ずるこ
とができることを示す、可変卵母細胞での攻撃は抗体レ
ベルに著しい増加を賦活する。
５抗−Ｉｄ１５−１ ８ ２０．５±３．５
ＮＲ１ｇＧ ４ ２．０±０．９
胞子小体Ｉｍ ５ １９．５±４攻撃後
の卵母細胞 抗−Ｉｄ１０７３ ８ ４９．３±７抗−Ｉ
ｄ１５−１ ８ ５８．０±１ＯＮＲＩｇＧ
４ ３．０±１．３胞子小体Ｉ
ｍ ５ ４５．０±１７これらの結果は
抗−Ｉｄ１０７３および抗−Ｉｄ１５−１がニワトリを
免疫して中レベルの循環抗−抗−Ｉｄ抗体を産生ずるこ
とができることを示す、可変卵母細胞での攻撃は抗体レ
ベルに著しい増加を賦活する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、マウスを精製アイメリアテネラ胞子小体で免疫し、
得られた抗体産生脾臓細胞をマウス骨髄腫細胞と融合さ
せ、ハイブリドーマ細胞を選択することを特徴とする無
傷胞子小体の表面に結合し、ニワトリをコクシジウム症
から受動的に感染防御させることができるＩｇＧモノク
ローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞の調製方法
。 ２、抗体産生脾臓細胞を免疫したＢａｌｂ／ｃマウスか
ら得る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、マウス骨髄腫細胞が非免疫グロブリン産生マウスＳ
Ｐ−２／０細胞である特許請求の範囲第１項記載の方法
。 ４、１０７３．１０に指定され、ＡＴＣＣ ＮＯ．ＨＢ
９０１７を有する特許請求の範囲第１項記載のハイブリ
ドーマ。 ５、１５−１に指定され、ＡＴＣＣ ＮＯ．ＨＢ９０１
６を有する特許請求の範囲第１項記載のハイブリドーマ
。 ６、Ｅ．テネラの非ペプチド表面成分に免疫学的に結合
し、サブクラスＩｇＧ＿３を有し、ｍＡｂ１０７３に指
定されたモノクローナル抗体。 ７、分子量８２ＫＤを有するＥ．テネラ胞子小体表面ポ
リペプチドに免疫学的に結合し、サブクラスＩｇＧ＿２
を有し、ｍＡｂ１５−１に指定されたモノクローナル抗
体。 ８、哺乳類または鳥類の１種を特許請求の範囲第６項の
モノクローナル抗体で免疫し、原抗原に特異的なモノク
ローナル抗体のパラトープとだけ免疫学的に反応する抗
イディオタイプ抗体を分離精製する、抗イディオタイプ
抗体の調製方法。 ９、抗−Ｉｄ１０７３に指定された特許請求の範囲第８
項記載の抗イディオタイプ抗体。 １０、哺乳類または鳥類の１種を特許請求の範囲第７項
のモノクローナル抗体で免疫し、原抗原に特異的な単ク
ローン性抗体のパラトープとだけ免疫学的に反応する抗
イディオタイプ抗体を分離精製する、抗イディオタイプ
抗体の調製方法。 １１、抗Ｉｄ１５−１に指定された特許請求の範囲第１
０項記載の抗イディオタイプ抗体。 １２、哺乳類または鳥類を抗アイメリア胞子小体モノク
ローナル抗体で免疫し、アイメリア抗原に特異的なモノ
クローナル抗体のパラトープとだけ免疫学的に反応する
抗イディオタイプ抗体を分離精製することによって生じ
た抗イディオタイプ抗体。 １３、特許請求の範囲第６項のモノクローナル抗体およ
び生理学的に許容される媒質を包含している組成物。 １４、特許請求の範囲第７項のモノクローナル抗体およ
び生理学的に許容される媒質を包含している組成物。 １５、特許請求の範囲第９項の抗イディオタイプ抗体お
よび生理学的に許容される媒質を包含している組成物。 １６、特許請求の範囲第１１項の抗イディオタイプ抗体
および生理学的に許容される媒質を包含している組成物
。 １７、特許請求の範囲第１２項のモノクローナル抗体お
よび生理学的に許容される媒質を包含している組成物。 １８、特許請求の範囲第６項のモノクローナル抗体の抗
コクシジウム有効服用量を投与することを特徴とするコ
クシジウム症に対するニワトリの受動的感染防御方法。 １９、特許請求の範囲第７項のモノクローナル抗体の抗
コクシジウム有効量を投与することを特徴とするコクシ
ジウム症に対するニワトリの受動的感染防御方法。 ２０、特許請求の範囲第９項の抗イディオタイプ抗体の
抗コクシジウム有効量を投与することを特徴とするコク
シジウム症に対するニワトリの免疫方法。 ２１、抗イディオタイプ抗体を約２５μｇ〜約４００μ
ｇの量で存在させる特許請求の範囲第２０項記載の方法
。 ２２、抗イディオタイプ抗体を約５０μｇ〜約３５０μ
ｇの量で存在させる特許請求の範囲第２１項記載の方法
。 ２３、特許請求の範囲第１１項の抗イディオタイプ抗体
の抗コクシジウム有効量を投与することを特徴とするコ
クシジウム症に対するニワトリの免疫方法。 ２４、抗イディオタイプ抗体を約２５μｇ〜約４００μ
ｇの量で存在させる特許請求の範囲第２３項記載の方法
。 ２５、抗イディオタイプ抗体を約５０μｇ〜約３５０μ
ｇの量で存在させる特許請求の範囲第２４項記載の方法
。 ２６、特許請求の範囲第１２項の抗イディオタイプ抗体
の抗コクシジウム有効量を投与することを特徴とするコ
クシジウム症に対するニワトリの免疫方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US83940986A | 1986-03-13 | 1986-03-13 | |
| US839409 | 1986-03-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62272971A true JPS62272971A (ja) | 1987-11-27 |
Family
ID=25279659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62057005A Pending JPS62272971A (ja) | 1986-03-13 | 1987-03-13 | コクシジウム症に対する抗イデイオタイプワクチン |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0241139A3 (ja) |
| JP (1) | JPS62272971A (ja) |
| AU (1) | AU6995787A (ja) |
| ZA (1) | ZA871797B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4973551A (en) * | 1988-01-15 | 1990-11-27 | Merck & Co., Inc. | Vector for the expression of fusion proteins and protein immunogens |
| US5824656A (en) * | 1988-01-15 | 1998-10-20 | Merck & Co., Inc. | Recombinant and native group B eimeria tenella immunogens useful as coccidiosis vaccines |
| EP0370090B1 (en) * | 1988-05-13 | 1996-07-10 | University Patents, Inc. | Immunogens and biologically active peptides derived from shared sequences from antigens and anti-idiotypic antibodies or antibodies specific for cellular receptors of the antigens |
| ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
| US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
| US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
| JPS60155133A (ja) * | 1983-11-09 | 1985-08-15 | シンビオテイツクス コ−ポレイシヨン | アンチ−イデイオタイプのモノクロナル抗体を採用したアンチ−イデイオタイプワクチン |
| CA1340520C (en) * | 1984-06-05 | 1999-05-04 | Karel Z. Newman Jr. | Antigenic proteins and vaccines containing them and protective antibodies directed to them for prevention of coccidiosis caused by eimeria tenella and eimeria necatrix |
-
1987
- 1987-03-09 EP EP87302011A patent/EP0241139A3/en not_active Withdrawn
- 1987-03-12 ZA ZA871797A patent/ZA871797B/xx unknown
- 1987-03-12 AU AU69957/87A patent/AU6995787A/en not_active Abandoned
- 1987-03-13 JP JP62057005A patent/JPS62272971A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0241139A3 (en) | 1989-04-19 |
| ZA871797B (en) | 1987-09-01 |
| EP0241139A2 (en) | 1987-10-14 |
| AU6995787A (en) | 1987-09-17 |
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