JPS62150163A - 血漿溶液の調製方法およびこれに使用する装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は流体からの巨大分子のｄ’ｉＭ、荷に。

＝、ｅｄ’過”じｔｈｅｒ（ｌｏ　ｆｉｌｔｒａｔｉｏ
ｎ　”　）と呼ば、しる方法による血漿溶液からの好ま
しくない巨大分子の除去に関する・ 血漿のｔ１過により血少から好ましくない溶質を分離す
ることは、一般に、毒素、過度の抗体および他の代謝成
分のごとき血漿溶質が好ましくない高い水準で存在する
ことに起因する病気を処置するための公知の方法である
。かかる病気の処置に成功している方法においては、膜
濾過（ｍｅｍｂ　ｒ　ａｎ　ｅｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　
１により血漿から好ましくない血漿溶質を除去している
Ｏ カスケードｒ過法、二重ｒ過法および低温ｆ１過法（ｃ
ｒｙｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　）を金色する種々の血漿
濾過法が開発されているＯしかしながら・これらの方法
はその利用を制限する多くの好ましくない特徴を有する
・ 本発明者はモジュール　デザイン、膜の特性。

血漿の組成および血漿および濾過湿度を包含する。

１過性能に関連する種々の・ぐラメ−ターに注目した。

流動動力学および従って濾過性能に影＠を与えるモジュ
ールの特性としては１表面積・流体およびフィルムの寸
法（ｄｉｒｎｅｎｓｉｏｎ　）ならびにｉ合体の種類、
および・孔径、孔の曲り（ｔｏｒｔｕｏｓｉｔｙ）。

孔の長さおよび孔の数のごとき微細構造的特徴を包含す
る分離膜の特性が挙げられる。

血漿の組成の変化もそのｒ過に影響を与える＠病状の異
る患者または巨大分子保有量の異る患者から採取した血
漿は・異ったｒ過特性を有する。

閉または・電解質組成を変化させるための血漿の処理お
よびへ・クリンのごとき抗凝血物質またはポリエチレン
グリコールのごとき他の巨大分子凝集用添加剤の添加も
ｒ過性能に影響を与えるであろう６通常、かかる処理は
巨大分子の凝集または沈澱による。血漿からの１種また
は１群の溶質の分離を促進させることを目的として行わ
れる。

ｒ過性能に影響を与える多数のノ４ラメ−ターが存在す
るために・温度の選択とその制御が流体分離におけるキ
ー・譬ラメーターであるとされている。

特定の範囲の巨大分子を選択的に除去するためには・適
度な占度範凹で操作を行うことが極めて重要である・こ
の点に関して１周囲温度附近で操作を行うカスケード法
および二重ｒ過性と、一定の生理学的温度で操作を行う
低温ｒ過性との間には。

同等のｔ５５過件（類似する操作流率、モジュールの形
式および血漿の種類）について重大な相違のあることが
知られている。

温度制御は制御が最も容易な物理的・（ラメ−ターであ
シまた巨大分子の除去についての感度と増大させるため
の種々の錯化剤の使用と組合せて行い得るという点にお
いて・他のパラメーターと比較して多くの利点を有する
。温度制御の利点の特定の例は低温ｆ過について示すこ
とができ、この場合にはへａＪ？　ＩＪンを添加するこ
とにより、２５℃以下の温度でフィブロネクチンおよび
フィブリノ−ダンとの錯体が形成されることによってク
リオダル（ｃｒｙｏｇｅｌ　）の形成が促進される。

生理学的温度以下の温度（ａｕｂ　−ｐｈｙｓｉｏｌｏ
ｇｉｃｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　）でのろ過は、大きさ
は類似するが温度感受性の異る血漿成分の除去に有効で
ある・文献に記載されるごとく、多数の自己免疫疾患を
この方法で処置し得る−この処置の有効性は自己免疫疾
患症状に伴う高濃度の巨大分子からなるクリオｒルの形
成と除去によるものである＠すなわち、低温ｒ過におけ
る分離は生理学的温度での分子の大きさに基づくもので
はなく、低減させた温度での分子の大きさに・基づくも
のであるＯしかしながら・低減させた温度での操作は、
実際には１寸法の差が大きい場合には、低減させた温度
では小さい分子の凝集または錯体の形成も生起するため
１分子の分離の選択性を減少させる０従って、生理学的
温度での寸法の差に基づく分離については・クリオｒル
の生成を避けることがより有利であり得る０ 本発明の目的は血漿から効果的でかつ効率的な方法で巨
大分子を除去することにより・巨大分子を含有していな
り血漿溶液の調製方法を提供することにある〇 本発明によれば。

ａ、除去すべき巨大分子を含有する血漿溶液を準備し： ｂ、上記血漿溶液を・正常体温に近い温度またはそれよ
り高い温度であるが該血漿溶液の沸点より低い温度に加
熱し： ｃ、　　７ＩＯ熱された血漿溶液を、正常体温に近い温
度またはそれより高い温度であるが血漿溶液の沸点よシ
低い温度において膜フィルターを用いてｒ過することに
より血漿溶液から巨大分子を選択的に除去すること：を
更に有する、１選択された巨大分子を含有しＣいない血
漿溶液の調製方法が提供される６なお、血漿溶液を加熱
することにより、血漿溶液中に存在する種々の巨大分子
が不活性になるかまたは変性され、血漿１過によるその
選択的除去が促進される。

本発明によれば・更に・ ３０人以外の生吻体から血液流を採取し：ｂ、上記血液
流を濃縮縄胞成分流と除去すべき巨大分子を含有する血
漿侃とに分離し；Ｃ２除去すべき巨大分子を含有する上
記血漿流を、正常体温に近い温度またはそれより高い温
度であるが上記血漿流の沸点より低い温度に加熱しｄ−
加熱された血漿流を、正常体温に近い温度またはそれよ
り高い湿度であるが血漿流の沸点より低い温度において
膜フィルターを用いて１過することにより血漿Ｈ液から
巨大分子を選択的に除去することにより、濾過された血
漿流？形成させ：ついで ｅ、上記ｒ過血漿流と前記細胞成分流と全−緒にするこ
とにより加工血漿流を形成させること；を更に有する、
１選択された巨大分子を含有していない血漿溶液の調製
方法が提供されるＯ本発明によれば、更に、 ａ、巨大分子を含有する血漿含有溶液を濃縮細胞成分流
と血漿流とに分割するための装置：ｂ、上記血漿流を正
常体温より高いが血漿流の沸点より低い温度に加熱する
ための装置：ｃ、　加熱血漿流を一過して巨大分子を選
択的に除去するための装置： ｄ、ｒ過血漿流と前記濃縮細胞成分流とを混合して・選
択された巨大分子を実質的に含有していない加工血漿流
を形成させるための装置：とからなる・血漿流から選択
された巨大分子を除去するための装置が提供される０上
記の装置は。

前記混合血漿流を正常体温まで冷却し、生物体に還流す
るための装置を更に有し得るａ 本発明者は熱ｔ′過を行うことにより従来から知られて
いる血漿一過を行った場合に比べて多くの利点が得られ
ることを認めだ０熱ｒ過は血漿を正常な生理学的温度に
近いかまたはそれ以上の温度であるが血漿の沸点より高
くない選択された温度に加温しついで加温した血漿？、
所望の巨大分子を除去する孔を有する膜フイルタ−（ｍ
ｅｍｂｒａｎｅｆｉｌｔｅｒ　）　　を用いて一過する
ことにより血漿から巨大分子を除去する操作である。熱
一過によって示される臨界的な利点としては・　よυ高
い温度に暴露された血漿は膜基材上に好ましくない溶質
の沈着物を形成する傾向が少ないため、より高い温度に
おいてはより高い８４の血漿をｒ遇し得ることおよびよ
り高い湯度ンζおいて一過係数（ｓｉｅｖｉｎｇ　ｃｏ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　）の差に基づいて巨大分子がより
選択的に除去されることが皐げられる０フィルター材料
、孔の寸法および構造に基づいて血漿ｒ適用の多敬の膜
フィルターを評価した拮果、クラレ　エパル（Ｋｕｒａ
ｒａｙ　Ｅｖａｌ　’）　　４　Ａ　モジエール（エチ
レンとビニルアルコールとの共重合体、クラレ株式会社
製品）およびこれと同様の性質を有する他のモジュール
は熱一過により血漿醇質を分別するのに特に良く適して
いることが認められた。他の適当なフィルターとしては
／　＋３スルホン、／す７”　ｏ　ｅレン、ナイロン、
ポリエステル・セルロース、アセテート、コラ−ダン等
からなるフィルター基材を用いたものが挙げられる。

本発明者はある種の巨大分子の一過係数はクラレ　エパ
ル４Ａモジュールについテ１ｄ３７℃および４２℃にお
いては２５℃より著しく高いことを認めだ（第１表参照
）。特に、３７℃〜４２℃においてはＨＤＬ、コレステ
ロール、ＩｇＧ、フィブリノ−ダン、全蛋白（ｔｏｔａ
ｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　）およびアルブミンの１過係数が
高いことに注目すべきである＠更に、これらのより高い
温度においてクリオｒルの生成が減少する結果として、
極めて高い容址の血漿を１過し得る・このことは、正常
な生理学的湿度に近いかまたはこれより高い温度におい
ては溶質の凝固が最小限に止り、分離が溶質の分子の大
きさの差によって生ずるものであって凝集組成物によっ
て生ずるものではないということに基づくものである６ 巨大分子は全で同一の血漿源からのものである。

ヘノぐリン添刀口了、ｌ１００ＯＵ／ｚ　　　。

ＴＰ：　　全蛋白直：　Ａｌｂ　：アルグミン：Ｇｌｂ
：グロプリｙ　：　Ｆｔｂ　：フイプリノー’ｙ”７　
：　Ｔ　Ｃｈｏｌ　：　　全コレステロール：　ＬＤｔ
、　：低密度リポ蛋白ｇ　：　ＨＤＬ：高密度リボ蛋白
質二ＴＧニトリグリセリド更に、熱ｒ過は血漿溶液から
ピログロブリンを除去するのに効果的な方法である０ピ
ログロブリンは加熱により沈澱またはｒル化する血清グ
ロブリンである＠通常・ピログロブリンは正常な個体中
では見出されない。ピログロブリンは・多くノ場合、マ
クログロブリン血症および他のリンパ増殖性（ｌｙｍｐ
ｈａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　）疾患またはｔｉ
　ｈの骨髄腫において容易に見出される。

ピログロブリンを含有する血清を５５〜５６℃に加熱す
るとｒルが生成し、これは血漿ｒ過により血清から効果
的に除去し得る。同様に、加熱により効果的に変性しか
つ凝固する蛋白質および他の免疫グロブリンも熱Ｃ過に
よって選択的に除去し得る。

熱ｔ″過は、従来公知の血漿ｒ過性と比較して上述した
ごとき利点を有するため、オン−ラインまたはオフ−ラ
イン血漿処理において血液から病因となる巨大分子を除
去するのに使用することができ、一方、同時に、有益な
血漿蛋白質を通過させ。

還送することができるＯこの形式の処理の利点はコレス
テロールを治療の目的で抑制する場合に明らかに示され
得る０ コレステロールは動脈硬化および高コレステロール血症
ニオける動脈血栓（ａｒｔｅｒｉａｌ　ｐｌａｇｕｅ　
）の形成の主要な成分であると認められているＯコレス
テロールは血液中を循環して、大きな蛋白質分子と結合
する。低密度す？蛋白質（Ｌｌ）Ｌ　）と呼ばれる一方
の形式のコレステロール担持蛋白質は動脈硬化を促進す
ることが知られている。全血液コレステロールの約１７
３またはそれ以上がＬＤＬ中に移行するＯ高密度リボ蛋
白質（ＨＤＬ　）と呼ばれる他方の形式のコレステロー
ル担持蛋白質は動脈硬化から保版することが知られてい
る。従ってＬｌ）Ｌを選択的に除去し、ＨＤＬを保持す
ることは動脈硬化の処置と高コレステロール血症の治療
的抑制にｎ壺である＠ 最近、家族性（ｆａｍｉｌｉａｌ　）　　動脈硬化患者
において血漿を取出し、これを電解質溶液および（また
は）血漿製品で置換するために血漿交換が利用されてい
る・しかしながら、この方法は非選択的であり、低密度
リポ蛋白質（ＬＤＬ　）と共に、これと比例的に・患者
にとって有益な高密度リポ蛋白’ＪＲ（ＨＤＬ　）と他
の血漿賢白質も除去される◎更に・ＬＤＬの選択的除去
を行うために、抗ＬＤＬ−抗本セファｏ−ス（５ａｐｈ
ａｒｏｓｅ　）カラム、オＪ１．び、へ・クリ７の沈殿
と炭酸塩透析との組合せを包含する種々の方法が研究さ
れている・しかしながら。

生物学的相溶性（ｂｉｏ　ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ
　）と処ｒｔ　。

費用効率ということに関して、：ｉ　ｆ’通過法より上
記の方法に比べて多くの利点が提供される〇熱ｒ過性Ｖ
ζよる血漿からのＬＤＬコレステロールの選択的除去は
試験管内および生体外（ｅｘｖｉｖｏ　）の両条件下で
示し得る０試験管内的条沖は実験室的に設定された試１
験の条Ｙトに１丙係し・これに対して、生体外的条件は
生物金柑いて行われる生体外（ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒ
ｅａｌ　）　　での循環条件に関係する・ コレステロールの選択的除去に対する温度の影響を調べ
るため１種々の種類の血漿を試験内試験で使用した。こ
の試験管内ｒ過試験は第１図に示す生体外的循環系に従
って種々の種類の血漿を用いて湿度を変化させて行われ
る。

第１図において、１ｍ／当り１単位のへ一４’　Ｉ７７
　（ヘハリン　ナトリウム注射液、　Ｉｎｖｅｎｅｘ　
Ｌａｂ、　ＯＨ）を血漿ゾール１０に添加し、ここで血
漿を熱制御装置１２および磁気攪拌機１４により約３７
℃に保持する。血漿を血漿ゾール１０から管１６中に取
出しついで血漿ポンプ１８（血漿流基１５ｍ／分）に供
給する。血漿を血漿ポンプ１８からＷ２Ｏに送入しつい
で温度調節器２４により制御されている水浴２２に供給
する。水浴２２内で血漿を熱交換器２６に通送しついで
圧力計２８によりフィルター３０に供給し・ここでＬＤ
Ｌコレステｏ　−ルを残留させ、ＨＤＬコレステロール
とアルブミンを実質的に通過させるａＬＤＬコレステロ
ールを除去されたｔ１過血漿とフィルター３０から管３
２を経てｒ液捕果槽３４に流入させる。

本発明の方法を以下の実施例により更に例示するＯ 実施例■ 遠心血漿交換（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ　ｐｌａｓｍ　
ｅｘｃｈａｎｇｅ）を繰返すことにより家族型■高コレ
ステロール血症血漿（ＦＨＣ）を調製したａ第１図に示
す生体外循環系に従って、ＦＨＣ血漿とクラツ　エパル
４Ａ膜フィルターを用いて４．２５．３７．４２および
４７℃の温度で試験管内ｒ過試験を行った・上記温度で
の平均ｒ遊係数（ＳＣ）、処理血漿容量およびＬＤＬお
よびＨＤ　Ｌコレステロールノ合計量を下記の計算法に
従って算定した：上記の式において０．９〜１のｔ１過
係数は血漿からの巨大分子の分離または除去が僅かしか
あるいは全く行われていないことを示し、０〜０．１の
ｆ通係数は血漿から巨大分子が実質的に全て除去された
ことを示す＠ 除去ｔ（ロ）＝血漿ブール中での濃度Ｃｇ／ａハＸ（＋
−３Ｃ）×処理容量（ｄｌ） 結果 種々の温度での全処理容量および全コレステロール、Ｈ
ＤＬコレステロール、Ｌ、ＤＬコレステロールおよびア
ルブミンについての平均ｒ遊係数を第１表に示す◎これ
らの結果は８５％以上の全コレステロールと９０儂のＬ
ＤＬコレステロールが除去され、これに対して７０襲の
アルブミンと６０％（７）ＨＤＬコレステロールがフィ
ルターを通過したことを示しているＯＨ１）Ｌコレステ
ロールとアルブミンのｆ通係数は温度が上昇するにつれ
て増大するのに対しＬＤＬコレステロールのｆ通係数は
湿度に関係しない・ 第３図はコレステロールの除去ｊは温度の変化により異
ることを示している。３７〜４２℃においてはＬＤＬコ
レステロールの除去量は最大である（４．５！、／／モ
ジュール）。これに対して、　ＨＤＬコレステロールの
除去量ば０．１ｙ以下である。モジュール半りの除去量
は許容される最大Ｐｔｍ（３００ｍｍＨｇ　）　　によ
り制限される。

結論：熱１１過は試Ｊ！ｌ＊管内粂沖下で血漿から多量
のＬＤＬコレステロールを選択的に除去し、一方・有用
なＨＤＬコレステロールとアルブミンを多量残留させる
のに非常に有効である。エパル４Ａフィルターを用いる
Ｆ）（Ｃ血漿の試験管内膜ｒ過によりＬＤＬコレステロ
ールがほぼ完全に除去され・ＨＤＬコレステロールとア
ルブミンが多量に１過されあるいは保持されるσＨＤＬ
コレステロールとアルブミンのｒ過係数は温度の上昇と
共に増大するが、ＬＤＬコレステロールのｒ過係数は全
ての温度において殆んど変化しない＠すなわち・生理学
的温度付近またはそれ以上での膜ｔ１過、すなわち、熱
ｒ過により、ＨＤＬコレステロールおよびアルブミンに
比較して、ＬＤＬコレステロールの選択的除去が改善さ
れる。

更に、熱ｒ過を行うことにより、処理すべき血漿の６置
が増大する・これはクリオグルの生成が減少し・上昇温
度においては除去することを意図していない溶質の除去
量が減少することに基づいている＠また・単位モジュー
ル当り・より晶い容揄の血漿が処理され、より多量のコ
レステロールが除去される。

実施ド１１１Ｉ エパル４Ａ（エチレンとビニルアルコールとの共重合体
二表面積２．□ｍ２）を使用して、健康人血漿（ＮＨＰ
　）と硬化性胆管炎血漿（ｓｅｐ　’）とについて第１
１に示す生体外循環系に従って４°、２５−３７°、４
２°、　Ａ　７’　および５２℃の温度で試験管内ｒ過
試験を行った＠ＮＨＰは東しＰＳ　−０５血漿セパレー
ター（ポリメチルメタクリレート：表面積０．５ｍ、東
し株式会社製品）を使用して従来のクエン酸塩加（ｃｉ
ｔｒａｔｅｄ　）血漿勿３７℃でｒ過することにより調
製した。ｓｅｐは膜血漿交換により調製した。ＳＣＰは
ＮＨＰと比較して１．５倍高い濃度のフィブリノ−ダン
と４倍高い濃度のＬＤＬコレステロールを含有するとい
う点でＮＨＰと相違するが、アルブミンとアンチトロン
ビン■は同一水準で含有しているＯ ｒ過試′＃ｌは全て３０−７分の血漿流を用いて行った
＠膜透過圧力（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｒｅｓ
ｓｕｒｅ　）とこれに対応する反射的膜閉塞（ｒｅｆｌ
ｅｃｔｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｌｕｇｇｉｎｇ　）に基づ
く流入圧力の変化を監視した。

ｒ過前およびｒ通抜に得られた試料についてア／ｌ／７
’ミン（Ａｔｂ）、フイクリ／−ｙ：ｙ　（Ｆｉｂ　）
、全コレステロール（ＴＣｈｏｌ　）、　　ＬＤＬ：Ｉ
Ｌ／ステロール（ＬＤＬ、　Ｃｈｏｌ　）、　ＨＤＬ−
＋レステａ−ル（ＨＤＬ　Ｃｈｏｌ　）　、　　アンチ
トロンビン１ｌｌ（ＡＴｌｌＩ”ｌ　　およびへａＪ？
　Ｉｌンを包含する種々の生化学的溶質を分析した。ア
ルブミンは自動分析装置（ＳＭＡ　−ＩＩ　。

Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ　）
を使用してプｏムクレゾール　グリーン法により測定し
た。フイグリノーデンはフィブロシステム（ＢＢｔ、　
０ｃｋｅｙｓｖｉｌｌｅ。

ＭＤ）　　により測定した。全コレステロールとトリグ
リセリドは自動分析装置（ＡＡ　Ｉｌ、Ｔｅｃｈｎｉｃ
ｏｎＩｎａｔ、　Ｃｏ　）ｆ使用して、コレステロール
　オキシダーゼ−（ルオギシダーゼ酵素法に従って測定
した。ＬＤＬ：ＩレスチロールはＴ　Ｃｈｏｌ　−ＨＤ
［。

Ｃｈｏｌ　−１１５トリグリセリドとして計算した。

ＨＤＬコレステロールハテキストランーサルフエ−）　
−Ｍｇ　　沈澱法により測定した。アンチトロンビン■
とヘノぐリンパクロトノ母ス（Ｐｒｏｔｏｐａｔｈ　）
アンチトロンビンＩＩＩ　ｊ？よびへ・（リン合成基λ
評価法（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄａｄｅ、　Ｍｉａｒｎｉ
、　Ｆｌ　）　　により測定したー 結果 第４Ａ南および第４Ｂ図は４°〜５２℃の温度節回にお
いてＮＨＰおよびＳＣＰをｒ過した場合の処理容ｔｋと
１過係数を示している。いずれの血漿の場合にも温度が
４℃から５２℃Ｋ上昇するにっルてより冒い容量の血漿
が処理された＠しかしながら・処理４醸は４２℃以上の
温度では増υ口せず。

５２℃で著しく低ドした。ＡｌｂのＩ’　ｉｈ”々（処
理）容４．１は温度が４℃から４２℃に上昇するにつれ
て増加しその後、同様に低ドした。同様の傾向がフイグ
リノーｒンにも認められた。４〜４２℃の温度範囲にお
いてはＨＤ　Ｌ　Ｃｈｏｌ　　のｒ過容址の著しい増加
が認められたが、この温度範囲でばＬＤＬＣｈｏ　ｌ　
　のｒ過容艦には大きな変化は認められなかった。ＨＤ
　Ｌ　Ｃｈｏｌ　　の１過容量も５２℃で低下した。Ｌ
　Ｄ　Ｌ　Ｃｈｏｌ　　の全除去せおよび、ＨＤＬＣｈ
ｏｌおよびＡｌｂの除去量とＬ　Ｄ　Ｌ　Ｃｈｏｌ　　
の除去量の比率を第■表に示した・Ｌ　Ｄ　Ｌ　Ｃｈｏ
ｌ　　の最大除去量およびＬ　Ｄ　Ｌ　Ｃｈｏｌ　　除
去量に対するＨ　Ｄ　Ｌ　ＣｈｏｌとＡｌｂの最少除去
量は４２℃で得られた＠結論：　これらの績呆は生理学
的温度以下で操作を行うことにより・生理学的温度以下
で生ずる。

へ・ダリンにより誘発される凝固および分子と分離する
ために孔径のより小さい膜を使用した場合Ｖにれらの沈
着物によって生ずるフィルターの閉塞が防止されること
を示している。、ｉＡＡ図および第４Ｂ図に示されるご
とく、生理学的温度以上（但し４７℃まで）での１過に
より、より高い容量を処理することができ、より多量の
アルブミンとＨＤ　Ｌ　Ｃｈ、ｏｌ　　が膜を通過する
＠これらの結果は３７″Ｃ付近またはそれ以上での血漿
ｒ過、すなわち熱ｒ過を行うことにより１分子の大きさ
の差に基づく血漿溶質の分離（すなわち、ＬＤＬの選択
的分離対ＨＤＬの篩分）を治療的用途に使用できること
を示している＠ ■、生生体外通過　Ｅｘ　Ｖｉｖｏ　Ｆｉｌｔｒａｔｉ
ｏｎ　）生体外ｒ過は生物体を使用する血漿の連続的オ
ン−ラインｆ過で必る＠第２図に示す生体外回路に従っ
て生体外ｒ過を３７℃で行った＠第２図においては、血
液を生物体の動脈から管３６中に取出しついでポンプ３
８中に送入し、このポンプから血液を管４０に送入しつ
いで圧力計４２を通過させて血漿セ・母レータ−４４に
送入しここで血漿と血液細胞成分とを分離する。濃縮さ
几た血液細胞成分を管４６に供給し、一方、血漿は管４
８に供給する０血漿は管４８からポン７’５０を経て管
５２に送入し・ここで血漿は温度制御装置５６によって
制御される水浴５４内に入る６水浴５４内で血漿は熱交
換器５８を通過しついで圧力計６０によりフィルター６
２に流入し、このフィルター上にＬＤＬコレステロール
は実質的ンこ残留サレ、）ＩＤＬコレステロール、アル
ブミンおよび他の低分子量の巨大分子はフィルターを実
質的に通過する＠ ＬＤＬコレステロールｔ−実質的に含有していないｒ過
血漿はフィルター６２から管６４に流入させついで管４
６の血液細胞成分と混合する。ついで混合物は熱交換器
６６内で体温まで冷却するかまたはＷ２Ｂに通送し・圧
力１ｉ−７０を経て管７２に送入しついで連続法におけ
る生物体の静脈に還流させる０ 本発明を更に以下の実施例により説明する。

実施例■ す／蛋白質が類似しておりかつ体の大きさがオンーライ
ンｒ過に適しているため、過コレステロール症の犬を生
体外ｒ過を行うためモデルに使用した０甲状腺を切除し
／食餌を規制した犬のそデルを十分に飼育しかつ種々の
横歪を行った０このモデルを使用して６００＋＋ｙ／ｄ
ｊまで（正常値：１２０η／ｄｔ’ｌの３種のコレステ
ロール濃度について検討した。

体重が２４〜４０ゆの２匹の健康な雑種犬に動静脈（Ａ
Ｖ）瘤を形成させた。対照としての犬には通常の餌（Ｌ
ａｂ　Ｃａｎ１ｎｅ　Ｄｉｅｔ　５００６　：　Ｌａｂ
　Ｃｈｏｗ社製品）を与えた０中間コレステロール濃度
のモデルとしての犬には外科的に甲状腺を切除した後、
同一の餌を与えた・高コレステロール濃度のモデルとし
ての犬には、甲状腺を切除した後、通常の餌に４慢の水
添ココヤシ油と０．７５％のコール酸を添加した特殊な
餌（ＴＤ　７５３３７．　Ｔａｋｌａｄ　　社製品）を
与えた。

種々のコレステロール濃度の犬に亜酸化窒素ガスとネプ
チュラル注射液〔ネデチュラル（Ｎｅｂｔｕｒａｌ　）
　　ナトリウム溶液、　Ａｂｏｔｔ　Ｌａｂ　ＩＬＩを
用いる通常の麻酔を行ってから生体外ｒ過試験を行った
。ＡＶ瘤は血液の疎通性（ｂｌｏｏｄ　ａｃｃｅｓｓ）
のために使用し、２００単位／に９のへＩＪ？　ＩＪン
を凝固防止剤として注射し九。血漿は膜血漿セ・ｅレー
タ−（三菱６０ＴＷ、１ｆ！リエチレン、三菱レーヨン
社製品）を使用してオンーライン生体外ｒ過系で分離し
た・分離した血漿は、試験管内ｒ過（３７℃）と同一の
方法でｒ過し、ついでｒ過した血漿を一緒にし、犬に還
流させた（第３図）。使用した血液と血漿の流率は、そ
れぞれ６０および１５−７分であった。一つの所定の容
ぜ°の血漿を−ｆ′遇した＠生体外循環を行う間、　ｇ
ｏｏ〜１０００−の乳酸加すンｒル溶液を静脈内に注入
した◎１／２および１容債が処理されたとき・フィルタ
ーの入口と出口の動脈管および血漿管から同時に試料を
採取し、前処理と後処理を行った。処理後。

１時間およびｌ、３，７．１４および２１日目に。

１４〜１６時間の絶食後、血液試料を採取した。

犬にｒ過前と同一の餌を任意の量与えた。生牝孝的測定
としてコレステロールおよびトリグリセリドの分析（自
動分析装置ＡＡＩ　ＩＩ　Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ　Ｉｎｓ
ｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ、＋　）、　ＨＤ　Ｌ　＝ｙレス
チロール（デキストラン　サルフェート　ＭｇＣｌ２　
沈澱法）の分析。

更に、慣用の血清多重分析（ＳＭＡ・■系。

Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ　Ｉｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ、　）
および血液学的分析（自動細胞カウンター、　Ｃｏｕｔ
ｌｅｒ　ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓＩｎｃ、、　ＦＬ　）
　　を行った・ 人の血清のＬＤＬコレステロール濃度は式：全コレステ
ａ−ルーＨＤＬコレステロールー１７５トリグリセリド
を使用して算定した。犬のＬＤＬ−ＶＬＤＬコレステロ
ール濃度はつぎのどとくして算定しり：全コレステロー
ルーＨＤＬコレステロール。分析用のリポ蛋白質画分を
調製超遠心分離により調製した（人ＬＤＬ　：　１．０
０６　＜　ｄ　＜　１．０６３　、人ＨＤＬ　：　１．
０６３　（ｄ　（１，２＋　、犬ＬＤＬ　−ＶＬＤＬ　
：　　ｄ　（＋、０６３　、犬ＨＤＬ　：　１．０ε７
＜ｄ＜　１．２１　：　ｄ＝密度）。

ＩＪ　４蛋白′ｉ粒子の太き、！はネがティグ染色１子
顕微鏡写真により測定した。これらの犬リポ蛋白質の両
分は均スではないが、沈殿法により得られる画分に匹敵
する。

結果 第１■表にモデルの犬の種々の段階におけるコレステロ
ール濃度を示す。全コレステロール、荷にＬ　Ｄ　Ｌ　
−ＶＬ［）ハコレスチロールが増大し、また、Ｌ　Ｄ　
Ｌ　−ＶＬＤＬ　コレＸ７ｏ−Ａ／対ＨＬ）ハコレスチ
ロールの比率は１０倍以上に増大した＠アルブミンは顕
著な変化を示さなかった。オン−ライン血漿濾過を各々
のコレステロール濃度で行った。血漿七′臂レータ−の
膜透過圧力（Ｐｔｍ　”）、は処理を通じて安定でおっ
た。アルブミンおよび全コレステロールおよび他の巨大
分子のｒ過係数は９５％以上であった・巨大分子フィル
ターのＰｔｍは還流中に徐々に増大した。処理した１血
漿容量におけるＰｔｍ値はＩ　Ｏ〜２５６　ｍｍＨｇ　
　であった＠ＰＬｍ（１）ｆ化における顕著な差はコレ
ステロール濃度に無関係であった。

第Ｖ光に種々のコレステロール濃度での平均ｒ過係数を
示す・Ｌ　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＩ）ハコレスチロールは血漿
ｒ過により多量に除去され一方、アルグミンとＨＤＬコ
レステロールは高いｒ過性を示した。

Ｌ　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＤＬ　２　Ｌ／　ｘ　ｆ　ｏ　−ル
ＣＱ　ｆ’過係ｆｉ（ＳＣ）ハコレスチロールが増加す
るにつれて減少したａ第５図は種々のコレステロール濃
度を有ｆルＦＨＣ血漿と犬の血漿ｌこついてのリポ蛋白
質の粒度分布を示す・ＦＨＣ血漿のＨＤＬとＬＤＬの大
きさの差は犬の血漿のそれより大きい・犬の血漿中のＬ
　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＤＬの粒子径と偏差も増大するが。

人の血漿についての程度はど大きくない。ＨＤＬの大き
さは群の間では余り変りはなかった。

第５図はＨＤＬ−ＶＬＤＬオ、ｌ：びＨＤＬコレステロ
ールの処理後の回復（ｒｅｃｏｖｅｒｙ　）　　を示す
。

Ｌ　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＤＬコレステロールの回復はより高
いコレステロール濃度の群におりては長時間を要した０
群■および１■については処理前の値にもどるのに約２
週間を要したａ　ＨＤＬコレステロールの回復は一定で
あり・全ての群について７日以内に処理前の値にもどっ
た。Ｉ第６図はＬ　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＤＬコレステロール
／　ＨＤ　Ｌコレステロ−ルノ比率ノ変化を示す。この
比率は後ｔ１過（ｐｏｒｔｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ１期間
中に減少し、１４日間低い値に保持された。

前処理または後処理値と比較して長期間について比率が
より多く減少する傾向は、コレステロール濃度の最も高
い群■においてより大きい。

結論：上記データーはリポ蛋白質粒子の大きさと１過係
数はコレステａ−ル濃度に大きく依存することを示して
いる。コレステロール濃度が増大するにつれてリポ蛋白
質粒子（特に、ＬＤＬ−ＶＬＤＬ　）の大きさが増大し
、ｒ過係数が減少しそして全コレステロール（Ｌ　Ｄ　
Ｌ　−ＶＬＤＬコレステロール）除去量が増大する＠ ｒ過係数の比較から犬のＬ　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＤＬのｒ過
動率は人のＬＤＬの１過係数より大きいことが判る。こ
の関係は人の場合に比べて犬のリポ蛋白質を分離するこ
とを困難にしている、犬のＬＤＬ−ＶＬＤＬとＨＤＬと
の間でのより大きな偏差と退役を示す１粒子の大きさの
検討により説明される◎これらの結果は熱ｒ過はり／蛋
白質の選択的除去に関して人の場合に極めて効果的であ
ることを示している。

更に、前記のデーターは高コレステロール血症がより進
行した段階でのＬ　Ｄ　Ｌ　−ＶＬＤＬの回復にはより
長時間を要し、一方、ＨＤＬコレステロ−ルの回復は比
較的正常であることを示している。

ｉｉｆ’過によるＬＤＬコレステロールの減少とＨＤＬ
コレステロールの保存オ、！：　（ｊ　Ｌ　Ｄ　Ｌ　−
Ｖ［、ＤＬ　コレステロールの長時間の回収と低いＬＤ
Ｌ／８１）Ｌの比の保持は、す？蛋白質の異常の処置に
有効な方法であることを明らかに示しているＯ実施例【
Ｖ 二次性高コレステロール血症患者について初期臨床熱ｐ
適法を行った。この試験のために選択された患者は３９
才の男性であり、この患者は硬化性胆管炎の胆汁分泌停
止のため、高いコレステロール濃度（２１０〜４５　Ｃ
ＨＩ／ｄｉ　）と極めて高いＬＤＬ／ＨＤＬコレステロ
ール比（１５−３０）を有していた＠ 熱ｒ過試験は第２図に示すオン−ライン系に従って行っ
た。血液の流率はｌｏｏｍ／分に設定し。

血漿の減車は３ＯＮ＠ｔ／分に設定した・血漿セ・ぐレ
ータ−として東しＰＳ　−０５（東し製品）およびアサ
ヒ　グラズマフｏ　（Ａｓａｈｉ　Ｐｌａｓｍａｆｌｏ
　’）　（ＡＰＱ５１１　：　　アサヒ　メディカル製
品）を使用し、血漿フィルターとしてエパル４Ａ２．Ｏ
ｍ　　（クラレ製品）を使用した。フィルターと加湿板
（＃ａ　ｒｒｎｅ　ｒｐｌａｔｅ　）をｔ熱・讐ツドで
包んでクリオ　マックス（Ｃｒｙｏｍａｘ　）　（Ｃｒ
ｙｏｍａｘ　３６０　：　Ｐａｒｌｃｅｒ　Ｂｉ。

ｍｅｄｉｃａ１社製品）の低温室（Ｃｒｙｏｃｈａｍｂ
ｅｒ　）中で３７℃の温度に保持した。凝固防止のため
、生体外循環全行う前に５００００　　のへ・ｅ　＋Ｊ
ンを塊（ｂｏ’１ｕｓ）として注入した・処理血漿容量
と膜透過圧力を工程を通じて監視した。ｆ′過は血漿フ
ィルターの膜透過圧力（Ｐｔｍ　）が５００　ｍｔｎ）
Ｉｇ　に到達するまで行った。Ｐｔｍが１５０および３
００　ｍｍＨｇ　に到達したとき、試料をフィルターの
血漿入口管と出口管とから同時に採用して　ｔ５過係数
（ＳＣ）を算定した◎溶ｄｆ’過係数はｆ’ｌ＆中の濃
度を血漿フィルターに流入する血漿中の濃度で除するこ
とにより算定した。生化学的測定としてコレステロール
とトリグリセリドの分析（自動分析装ｆｊ！ＬＡＡ１１
゜Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ、
　）およびＨＤＬ：ＩＬ／ステロールの分析（デキスト
ラン　サルフェートＭｇＣｌ２　沈澱法）ならびに慣用
の血清多重分析（ＳＭＡ−■、　　Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ
　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ、）を行った・フィルタ
ーを閉塞後１回路から取出し、置換流体として５チアル
プミン溶液を使用して血漿搬出工程（Ｐｌａａｍａｐｈ
ｅｒｅｓｉｓ　）を血漿交換工程（ｐ　ｌ　ａ　ｓｍａ
ｅｘｃｈａｎｇｅ　）に切換えた。血漿交換は、−計算
血漿容１（２８９３ｄ）が血漿交換だけで処理されるま
で行ったー 実施例１と同一のフィルター、同一の温度および同一の
患者からの血漿を使用して、試験管内ｒ過試験を行った
０ 結果 上記のｒ過試験に患者は十分に耐性であり・有害な反応
は認められなかった。熱ｒ渦中は置換流体は使用しなか
った。５００　ｒｒｒｎＨｇ　（ＯＰｔｍに達するまで
に１３５５±２７５ｄ（１１６０および１５４０ｍ／）
の血漿がｒ過されそして３００　ｍｍＨｇのＰｔｍに達
するまでに１１１７±＋８３ｄ（９８０および＋２５３
．ｄ）の血漿がｒ過された。　Ｐｔｒｎとｒ過容量との
関係はこの患者について行った試験内試験におけるもの
−ｒ過容敬：　３００　ｍｍＨｇ　　のＰｔｍまでに１
０６０−が処理された−と同等であった。

Ｌ　Ｄ　Ｌ　＋　ＶＬＤＬコレステａ−ルばほぼ完全に
除去され（５Ｃ＝０．０２　）、多量のアルブミン（Ｓ
Ｃ＝　０．７５　）　　およびＨＤＬコレステロール（
ＳＣ＝０．７８　）　　が通過した。これらの結果は試
験管内ｒ過の結果と同等である（第■表参照）１１ｖ　
　　　　Ｑ 結論 ＬＤＩ、コレステロールの濾過係数（０，０２）。

ＨＤＬのＣ過係数（０，７８）およびアルブミンの１過
係数（０，７５）は熱濾過の選択性を示している。これ
らの結果は同一患者の血漿を使用した試験管内濾過試験
の結果と同一である。血漿交換と比べた場合の熱濾過の
利点は）ＩＤＬ〔抗動脈硬化性（ａｎｔｉａｔｈｅｒｏ
ｇｅｎｉｃ　）リポｆｆ１Ｆｌ］オ！び血漿交換では排
棄される他の重要な血漿溶質が保持されることである・
熱濾過法は湯度制御を行わない膜濾過に比べてより選択
的であり、かつ、他の血漿処理工程または潜在的に有害
な化学的添加剤の添加を必要としないため、容易に適用
し得る０更に。

異常な濃度の種々の蛋白質（例えば免疫グロブリン）も
熱濾過により容易に除去し得る□

【図面の簡単な説明】

第１図は試験管内濾過に使用される回路を示す０４２図
は生体外または臨床的濾過に使用される生体外回路を示
す。 第３図は試験管内濾過についての種々の温度で除去され
るコレステロールのｍを示す。 第４図は種々の血漿の平均ｆ１’過係数を示す。 第５図はコレステロール濃度の異るＦＨＣ血漿と大血漿
についてのす？蛋白質の粒度分布を示す一５ｇ６図は犬
ニオはルＬ　ｏ　［、−ＶＬ［）Ｌ　オヨヒＨｏｔ。 コレステロールの後処理回復量を示す・第１図において
・ １０・・・血漿プール、　１２・・・熱制御装置、１８
・・・血漿−ノブ、　　２２・・・水浴、　　２４・・
・温度―節器・　２６・・・熱交換器、　２８・・・圧
力ｉ、　　３０・・・フィルター、　　３４・・・ｒ液
捕集槽 である・ 第２図において・ ３８・・・ポンプ、　４２・・・圧力計、　４４・・・
血漿セノセレーター、　　　５０・・・ポンプ、　　５
４・・・水浴、　　５６・・・温度制御装置５　５８・
・・熱交換器・　　６０・・・圧力計、　　６２・・・
フィルター。 ６６・・・熱交換器、　７０・・・圧力計６ＦＩＧ、Ｉ ＦＩＧ、２ 二　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＬＤＬ　　
　　　　　　ＨＤＬ（℃Ｉ ＦＩＧ、３ ＦＩＧ、４Ｂ ＦＩＧ、５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ａ、除去すべき巨大分子を含有する血漿溶液を準備
   し： ｂ、上記血漿溶液を、正常体温に近い温度 またはそれより高い温度であるが該血漿溶液の沸点より
   低い温度に加熱し： ｃ、加熱された血漿溶液を、正常体温に近 い温度またはそれより高い温度であるが血漿溶液の沸点
   より低い温度において膜フィルターを用いてろ過するこ
   とにより血漿溶液から巨大分子を選択的に除去すること
   ：を特徴とする、選択された巨大分子を含有していない
   血漿溶液の調製方法。 ２、加熱は５５〜６０℃の温度で行う、特許請求の範囲
   第１項記載の方法。 ３、加熱は３７〜５２℃の温度で行う、特許請求の範囲
   第２項記載の方法。 ４、膜フィルターは血漿溶液から除去すべき選択された
   巨大分子の大きさより小さい孔径を有する、特許請求の
   範囲第１項記載の方法。 ５、巨大分子は上昇温度でのろ過係数の差異に基づいて
   血漿溶液から分離される、特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 ６、除去すべき巨大分子は低密度リポ蛋白質（ＬＤＬ）
   、ピログロブリン、高分子量蛋白質およびこれらの混合
   物からなる群から選ばれる、特許請求の範囲第１項記載
   の方法。 ７、血漿は正常血漿、硬化性胆管炎血漿およびIIａ型高
   コレステロール血症血漿を包含する、特許請求の範囲第
   １項記載の方法。 ８、ａ、人以外の生物体から血液流を採取し：ｂ、上記
   血液流を濃縮細胞成分流と除去す べき巨大分子を含有する血漿流とに分離し：ｃ、除去す
   べき巨大分子を含有する上記血 漿流を、正常体温に近い温度またはそれより高い温度で
   あるが上記血漿流の沸点より低い温度に加熱し： ｄ、加熱された血漿流を、正常体温に近い 温度またはそれより高い温度であるが血漿流の沸点より
   低い濃度において膜フィルターを用いてろ過することに
   より血漿溶液から巨大分子を選択的に除去することによ
   り、ろ過された血漿流を形成させ：ついで ｅ、上記ろ過血漿流と前記細胞成分流とを 一緒にすることにより加工血漿流を形成させること：を
   特徴とする、選択された巨大分子を含有していない血漿
   溶液の調製方法。 ９、上記ろ過血漿流は前記細胞成分流と一緒にする前に
   冷却する、特許請求の範囲第８項記載の方法。 １０、加工血漿流を人以外の生物体に還送する、特許請
   求の範囲第８項記載の方法。 １１、人以外の生物体からの血液は別の流れを形成させ
   る前に圧入する、特許請求の範囲第８項記載の方法。 １２、血液流の濃縮細胞成分流と血漿流への分離は膜フ
   ィルターまたは遠心分離により行う、特許請求の範囲第
   ８項記載の方法。 １３、血漿流の加熱は３５〜６０℃で行う、特許請求の
   範囲第８項記載の方法。 １４、上記の加熱は３７〜５２℃の温度で行う、特許請
   求の範囲第１３項記載の方法。 １５、前記膜フィルターは血漿溶液から除去すべき選択
   された巨大分子の大きさより小さい孔径を有する、特許
   請求の範囲第８項記載の方法。 １６、選択された巨大分子は上昇温度でのろ過係数の差
   に基づいて血漿溶液から分離する、特許請求の範囲第８
   項記載の方法。 １７、除去すべき選択された巨大分子は低密度リポ蛋白
   質（ＬＤＬ）、ピログロブリン、高分子量蛋白質または
   これらの混合物である、特許請求の範囲第８項記載の方
   法。 １８、処理工程は連続的である、特許請求の範囲第８項
   記載の方法。 １９、ａ、巨大分子を含有する血漿含有溶液を濃縮細胞
   成分流と血漿流とに分割するための装置：ｂ、上記血漿
   流を正常体温より高いが血漿 流の沸点より低い温度に加熱するための装置：ｃ、加熱
   血漿流をろ過して巨大分子を選択 的に除去するための装置： ｄ、ろ過血漿流と前記濃縮細胞成分流とを 混合して、選択された巨大分子を実質的に含有していな
   い加工血漿流を形成させるための装置：とからなる、血
   漿流から選択された巨大分子を除去するための装置。 ２０、前記混合血漿流を正常体温まで冷却し、生物体に
   還流するための装置を更に有する、特許請求の範囲第１
   ９項記載の装置。 ２１、前記加熱装置を使用して血漿流を３５〜６０℃に
   加温する、特許請求の範囲第１９項記載の装置。