JPS62106901A - Diglucosyl-beta-cyclodextrin and its production - Google Patents
Diglucosyl-beta-cyclodextrin and its productionInfo
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- JPS62106901A JPS62106901A JP60246279A JP24627985A JPS62106901A JP S62106901 A JPS62106901 A JP S62106901A JP 60246279 A JP60246279 A JP 60246279A JP 24627985 A JP24627985 A JP 24627985A JP S62106901 A JPS62106901 A JP S62106901A
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- diglucosyl
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
i先り正札」釈」
本発明は、新規な分岐サイクロデキストリンおよびその
製造方法に関し、更に詳細には、ノグルコシルーβ−サ
イクロテ゛キストリンおよびその製造方法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a novel branched cyclodextrin and a method for producing the same, and more particularly to noglucosyl-β-cyclodextrin and a method for producing the same.
倣迷!月支庸−
サイクロデキストリンはグルコース残基がβ−1,4−
結合により環状に結合したオリゴ糖であって、グルコー
ス残基6個からなるα−サイクロデキストリン、7個か
らなるβ−サイクロデキストリン、8個からなるγ−サ
イクロデキストリンなどが一般に知られている。Imitate me! Lunar branch - Cyclodextrin has glucose residues in β-1,4-
Oligosaccharides bonded in a cyclic manner through bonds, such as α-cyclodextrin consisting of 6 glucose residues, β-cyclodextrin consisting of 7 glucose residues, and γ-cyclodextrin consisting of 8 residues, are generally known.
サイクロデキストリンは、その構造から内部に空隙があ
り、この空隙内部は親油性領域となっているので各種の
油性物質を取り込むことができる。Cyclodextrin has voids inside due to its structure, and since the inside of these voids is a lipophilic region, it can take in various oily substances.
そのため、このような性質を利用して■不安定物質の安
定化■揮発性物質の保持■異臭のマスキング■難・不溶
性物質の可溶化など、種々の用途が考えられているが、
これらサイクロデキストリンは一般的に高価であり、こ
のことがサイクロデキストリンの利用拡大を妨げている
大きな要因ともなっている。もっとも、これらの中でも
β−サイクロデキストリンは、他のサイクロデキス最も
強力なことから、利用面において有望視されているもの
であるが、低温域(室温以下)での水に対する溶解度が
極めて低い(i、s s%;20℃)という欠点があり
、この点における改良が待たれていた。Therefore, various applications are being considered by utilizing these properties, such as: - Stabilization of unstable substances - Retention of volatile substances - Masking of off-flavors - Solubilization of difficult or insoluble substances.
These cyclodextrins are generally expensive, and this is a major factor hindering the expansion of their use. However, among these, β-cyclodextrin is the most powerful of the other cyclodextrins and is considered promising for use, but its solubility in water at low temperatures (below room temperature) is extremely low (i, ss%; 20° C.), and improvements in this respect have been awaited.
明が しようとする ヴ
本発明者らは、先にβ−サイクロデキストリンの溶解性
の向上を目的として、β−サイクロデキストリンとマル
トースとをプルラナーゼの存在下に反応させることによ
り、マルトシル残基を分校に有する分岐β−サイクロデ
キストリンを得ることに成功したが(特願昭60−37
694号、同60−77598号)、更に検討を重ねた
ところ、これら分岐β−サイクロデキストリン、就中ジ
マルトシル−β−サイクロデキストリンにグルコアミラ
ーゼを作用させることにより、ノズルコシルーβ−サイ
クロデキストリンが生成することを見出し、本発明を完
成するに至った。In order to improve the solubility of β-cyclodextrin, the present inventors first separated maltosyl residues by reacting β-cyclodextrin with maltose in the presence of pullulanase. However, we succeeded in obtaining a branched β-cyclodextrin having
No. 694, No. 60-77598), and after further investigation, it was found that by allowing glucoamylase to act on these branched β-cyclodextrins, especially dimaltosyl-β-cyclodextrin, nozzulcosyl-β-cyclodextrin was produced. They discovered this and completed the present invention.
ヴを するための
−kflRRIl:j ッ11− 1− S/
Il−−7? −→ト イ ’7 m F
番 @トリアにグルコアミラーゼを作用させて、ジグル
コシル−β−サイクロデキストリンを生成させることか
ら成るジグ用コシルーβ−サイクロデキストリンの製造
方法およびかくして得られるジグ用コシルーβ−サイク
ロデキストリンに関する。-kflRRIl:j 11-1-S/
Il--7? -→Toy '7 m F
The present invention relates to a method for producing cosyl-β-cyclodextrin for jigs, which comprises reacting glucoamylase to triglyceride to produce diglucosyl-β-cyclodextrin, and to the thus obtained cosyl-β-cyclodextrin for jigs.
本発明により得られるジグ用コシルーβ−サイクロデキ
ストリンは、下記の理化学的性質を有する新規化合物で
ある。The cosyl-β-cyclodextrin for jigs obtained by the present invention is a new compound having the following physical and chemical properties.
1)分子式 CS 4 H!。0452)分子量
1459
質量分析測定法(Secondary
Ion Mass Spectrometry;S1M
S法)(こより測定。(第1図参照)
3)融 点 277.5℃(非結晶;分解)4)比旋
光度 [a12D’+169.3(C=0,2;11□
0)
5〉ペーパーク・ロマFグラフィー
1−ブタノール:1−プロパノール:水=3 :5 :
4の7ilrgi溶媒を使用してペーパー上に展開した
後、ヨウ素溶液を用いる発色および粗グルコアミラーゼ
で前処理した後硝酸銀を用いる発色により呈色させると
き、それぞれ1スポットを示す。1) Molecular formula CS 4 H! . 0452) Molecular weight
1459 Secondary Ion Mass Spectrometry; S1M
S method) (measured from this. (See Figure 1) 3) Melting point 277.5°C (amorphous; decomposed) 4) Specific optical rotation [a12D'+169.3 (C=0,2; 11□
0) 5>Paperk Roma F-Graphy 1-butanol:1-propanol:water=3:5:
One spot is shown in each case, after development on paper using 7ilrgi solvent of 4, color development using iodine solution and color development using silver nitrate after pretreatment with crude glucoamylase.
6)薄層クロマトグラフィー
■インプロバノール:エタ/−ル:水=5:5:2 ■
1−ブタノール:ピリノン:水=6:4:3もしくは■
1−ブタノール:エタノール:水= 5 :5 :2の
各展開溶媒を使用して薄層板(DC−Fertigpl
atten Kiese1ge160(メルク社製))
上に展開した後、ヨウ素溶液を用いる発色およびリンモ
リブデン酸/硫酸を用いる発色により呈色させるとき、
それぞれ1スボツ)(Rf値は、それぞれ■0.41■
0.54■0.25)を示す。6) Thin layer chromatography ■ Improbanol: ethanol: water = 5:5:2 ■
1-butanol:pyrinone:water = 6:4:3 or ■
A thin layer plate (DC-Fertigpl) was prepared using each developing solvent of 1-butanol:ethanol:water=5:5:2.
atten Kiese1ge160 (manufactured by Merck & Co.)
After developing on top, when coloring is carried out by color development using iodine solution and color development using phosphomolybdic acid/sulfuric acid,
1 slot each) (Rf value is 0.41 for each)
0.54■0.25).
7)高速液体クロマトグラフィー
(条件1)
カラムサイズ:6φ×50mm
担体: Nucleosil−5NH2(ナーデル社製
)溶媒ニアセトニトリル:水=70:30流連: 2.
Oat/+in
検出器:示差屈折計ERC7520型(エルマ光宇株式
会社製)
(条件2)
カラムサイズ:6φ×150mm
担体: 5pherisorb 0DS−11(7x−
ズセップ社製)
溶媒:メタノール:水=8:92
流速、検出器は条件1と同じ。7) High performance liquid chromatography (conditions 1) Column size: 6φ x 50mm Support: Nucleosil-5NH2 (manufactured by Nadel) Solvent Niacetonitrile:Water = 70:30 flow rate: 2.
Oat/+in Detector: Differential refractometer ERC7520 type (manufactured by Elma Kou Co., Ltd.) (Condition 2) Column size: 6φ x 150 mm Support: 5pherisorb 0DS-11 (7x-
(Manufactured by Zsep) Solvent: Methanol: Water = 8:92 Flow rate and detector were the same as Condition 1.
本品は、上記各条件でそれぞれ1ピークを示す。This product shows one peak under each of the above conditions.
8)溶解性 水に易溶、エタノールに難溶。8) Solubility Easily soluble in water, slightly soluble in ethanol.
9)性 状 粉末は白色であり、水溶液は無色。9) Sexual condition The powder is white and the aqueous solution is colorless.
10)赤外線吸収スペクトル(第2図参照)ν” 3y
400cm−1、2,930cm−1、 1,150c
m−’1.030cm −’ に吸収を認める。10) Infrared absorption spectrum (see Figure 2) ν” 3y
400cm-1, 2,930cm-1, 1,150c
Absorption is observed at m-'1.030 cm-'.
11)1″C核磁気共鳴スペクトル(第3図参照)δ
([)20)
QQQ/IQ*嚢ムyI’)
100.6 (1−6結合のC,)
12)メチル化分析
箱守法にしたがいメチル化した後、メチル化物の加水分
解を行い、生成した加水分解物を還元、アセチル化して
フルディドール−アセテートに誘導し〃スクロマトグラ
フイーにより同定すると、2,3,4.6−テトラ−0
−メチルグルコース、2,3.6−)ツー0−メチルグ
ルコース、2.3−ジ−O−メチルグルコースのモル比
は、1.9:5.0:1゜9を示す。11) 1″C nuclear magnetic resonance spectrum (see Figure 3) δ
([)20) QQQ/IQ*YI') 100.6 (C of 1-6 bond,) 12) Methylation analysis After methylation according to the Hakomori method, the methylated product was hydrolyzed to produce The hydrolyzate was reduced and acetylated to induce fludidol-acetate, which was identified by chromatography as 2,3,4,6-tetra-0.
The molar ratio of -methylglucose, 2,3.6-) to 0-methylglucose and 2,3-di-O-methylglucose is 1.9:5.0:1°9.
なお、上記理化学的性質を有するジグ用コシルーβ−サ
イクロデキストリンは、β−サイクロデキストリンを構
成する環状のグルコース残基(6位)にグルコシル基が
2個、それぞれ別々の位置にα−1,6−結合した構造
から成るものであることが、メチル化分析および分子量
(質量分析)により示された。In addition, cosyl-β-cyclodextrin for jigs having the above-mentioned physicochemical properties has two glucosyl groups in the cyclic glucose residue (6th position) that constitutes β-cyclodextrin, and α-1, 6 glucosyl groups in separate positions. - It was shown by methylation analysis and molecular weight (mass spectrometry) to consist of a linked structure.
本発明によれば、斯かるジグ用コシルーβ−サイクロデ
キストリンは次の如くして製造される。According to the present invention, such cosyl-β-cyclodextrin for jigs is produced as follows.
即ち、ジマルトシル−β−サイクロデキストリンを固形
分濃度(基質濃度)5〜35%溶液に調製した後、グル
コアミラーゼを所定量加え、液の温度、p l(などを
酵素の好適作用範囲に維持し、1乃至24時開反応を行
いジグルコシル−β−サイクロデキストリンを生成させ
、次いで、所望によりクロマトグラフィーなどの方法に
よって反応液ケら分離、採取することにより製造される
。That is, after preparing a solution of dimaltosyl-β-cyclodextrin with a solid concentration (substrate concentration) of 5 to 35%, a predetermined amount of glucoamylase is added, and the temperature and PL of the solution are maintained within the enzyme's preferred action range. , 1 to 24 hours to produce diglucosyl-β-cyclodextrin, and then, if desired, the reaction solution is separated and collected by a method such as chromatography.
未発明において使用されるグルコアミラーゼとしては、
リゾプス・ニベアス(Rhizopus n1veus
)、リゾプス−デレマー(R1+1zopus del
emar)などの微生物由来の市販製品が挙げられ、こ
れら酵素の使用量は基質の品質あるいは反応の実施形式
などにより多少の違いはあるが、通常の場合、ジマルト
シル−β−サイクロデキストリン1g当り5単位以上用
いられる。Glucoamylase used in the uninvention is as follows:
Rhizopus n1veus
), Rhizopus delemer (R1+1zopus del
commercially available products derived from microorganisms, such as Dimaltosyl-β-Cyclodextrin, and the amount of these enzymes used varies depending on the quality of the substrate and the method of reaction, but in general, it is 5 units per gram of dimaltosyl-β-cyclodextrin. Used above.
また、本発明の原料として使用されるジマルトシル−β
−サイクロデキストリンは、新規な物質であり、例えば
、β−サイクロデキストリンとマルトースとをプルラナ
ーゼの存在下に反応させ、該反応液中から分離、採取す
ることにより取得することができる。In addition, dimaltosyl-β used as a raw material of the present invention
- Cyclodextrin is a new substance, and can be obtained, for example, by reacting β-cyclodextrin and maltose in the presence of pullulanase, and separating and collecting it from the reaction solution.
本発明の反応は、基本的にはノマルトシルーβ−サイク
ロテ゛キストリン(こグルコアミラーゼをイ乍用させる
ことにより実施されるが、場合により、β−サイクロデ
キストリンとマルトースとをプルラナーゼの存在下に反
応させ、生成するジマルトシル−β−サイクロデキスト
リンを単離することなく、引き続きこの反応液に直接グ
ルコアミラーゼを作用させて、ノズルフシルーβ−サイ
クロデキストリンを生成させることも可能である。The reaction of the present invention is basically carried out by using normaltosyl-β-cyclodextrin (with glucoamylase), but in some cases, β-cyclodextrin and maltose are reacted in the presence of pullulanase, It is also possible to produce nozzle fusyl-β-cyclodextrin by subsequently allowing glucoamylase to directly act on this reaction solution without isolating the produced dimaltosyl-β-cyclodextrin.
本発明の方法によれば、反応はグルコアミラーゼの作用
条件に適合させて実施され、反応温度、反応pHなどは
使用される酵素の種類(起源)によって多少の差はある
が、一般に30〜60°C,p)13.5〜6.5の範
囲内で行われることが望ましい。According to the method of the present invention, the reaction is carried out in accordance with the action conditions of glucoamylase, and the reaction temperature, reaction pH, etc. vary somewhat depending on the type (origin) of the enzyme used, but are generally 30 to 60%. It is desirable that the temperature is within the range of 13.5 to 6.5 °C, p).
生成したジグルコシル−β−サイクロデキストリンを反
応液から分離するには、例えば、トヨパールHW−4O
3を用いたカラムクロマトグラフィーあるいはワットマ
ン17クロムによるペーパークロマトグラフィーなどを
用いることにより容易に行うことができるが、工業的に
は特にコスト上の理由からイオン交換樹脂クロマトグラ
フィー、大量デルろ過分離性などを用いるのが有利であ
る。To separate the produced diglucosyl-β-cyclodextrin from the reaction solution, for example, Toyopearl HW-4O
Although this can be easily carried out by using column chromatography using 3 or paper chromatography using Whatman 17 chromium, industrially, for reasons of cost, ion exchange resin chromatography, large-scale del filtration, etc. It is advantageous to use
免」二立及
本発明により得られる新規な分岐サイクロデキストリン
は、公知のβ−サイクロデキストリンと同程度の強い抱
接力を有し、かつ、その溶解性において格段に優れてい
るので、医薬品、食品、化粧品その他一般の化学工業分
野でのサイクロデキス) l)ンの用途開発に寄与する
ところが大きい。The novel branched cyclodextrin obtained by the present invention has a strong adhesion force comparable to that of the known β-cyclodextrin, and is much superior in solubility, so it can be used in pharmaceuticals and foods. It will greatly contribute to the development of applications for cyclodextrin in cosmetics and other general chemical industry fields.
実1L−
次に参考例及び実施例を示し、本発明を更に詳細かつ具
体的に説明する。EXAMPLE 1L Next, the present invention will be explained in more detail and concretely by referring to Reference Examples and Examples.
参考例(ジマルトシル−β−サイクロデキストリンの製
造)
マルトース(日本澱粉工業KK5!!、純度99%)2
.00gとβ−サイクロデキストリン(日本食品化工K
K?!、純度98%)0.40gに、p)(540,5
0InM酢酸ナトリウム緩衝液0.63m1を加え沸騰
浴中加熱溶解する。冷却後、これにバシラス・sp (
Bacillus sp)の耐熱性プルラナーゼ(/ボ
・インダストリー・ジャパン社製、200単位/[1)
400mgを加え、60°Cで72時間反応させる。Reference example (manufacture of dimaltosyl-β-cyclodextrin) Maltose (Nippon Starp Industry KK5!!, purity 99%) 2
.. 00g and β-cyclodextrin (Nihon Shokuhin Kako K
K? ! , purity 98%) to 0.40 g, p) (540,5
Add 0.63 ml of 0 InM sodium acetate buffer and dissolve by heating in a boiling bath. After cooling, add Bacillus sp (
Bacillus sp) thermostable pullulanase (/manufactured by Bo Industry Japan, 200 units/[1)
Add 400 mg and react at 60°C for 72 hours.
終了後、この反応液をトヨバールHW−4OSを充填し
たカラム(4,5X 100c+n:2本)によりデル
ろ過クロマトグラフィーにかけて分離精製を打う。試料
負荷後13〜14時間後に溶出されてくる7ラクシヨン
を集め、ロータリーエバポレーターで濃縮乾燥して、ジ
マルトシル−β−サイクロデキストリンの白色粉末13
4Bを得る。After the completion of the reaction, the reaction solution was subjected to Delfiltration chromatography using columns (4,5X 100c+n: 2 columns) packed with Toyovar HW-4OS for separation and purification. The 7 lactyone eluted 13 to 14 hours after loading the sample was collected and concentrated and dried using a rotary evaporator to obtain a white powder of dimaltosyl-β-cyclodextrin.
Get 4B.
実施例1゜
ジマルトシル−β−サイクロデキストリン粉末5.0g
を、pH540,50mM酢酸ナトリウム11衝液10
0+nlに溶解し、これにリゾプス・ニベアス(Rbi
zopus n1veus)のグルコアミラーゼ(生化
学工業KK製33.6単位/TI1g)25単位加え、
40°C″c24時間反応させた後、加熱を行い酵素反
応を停止する。Example 1 Dimaltosyl-β-cyclodextrin powder 5.0g
, pH 540, 50mM sodium acetate 11 buffer solution 10
0+nl and add Rhizopus niveas (Rbi
zopus n1veus) glucoamylase (manufactured by Seikagaku Kogyo KK, 33.6 units/TI1g) was added,
After reacting at 40°C for 24 hours, heat is applied to stop the enzyme reaction.
反応液を冷却した後、メンブランフィルタ−(来洋ろ紙
KK製、セルロースニドレイ) T M−2,0,45
μメツシユ)を用いてろ過し、さらに濃度を10%に調
整し、この溶液10m1をトヨバールHW−40Sを充
填したカラム(4,5X 100c+++:2本)によ
りゲルろ過クロマトグラフィーにかけて分離精製を行い
、ジグ用コシルーβ−サイクロデキストリンを740m
g得る。After cooling the reaction solution, use a membrane filter (manufactured by Raiyo Filter Paper KK, Cellulose Nidrei) T M-2,0,45.
The concentration was further adjusted to 10%, and 10 ml of this solution was subjected to gel filtration chromatography using a column (4,5X 100c+++: 2 columns) packed with Toyovar HW-40S for separation and purification. 740m of Kosilu β-cyclodextrin for jigs
g get.
このものの元素分析値並びに質量分析値は、次の通りで
あった。The elemental analysis values and mass spectrometry values of this product were as follows.
元素分析値(C54H,、○1.)
計算値C=、i4,45% l+=6.22% 0=4
9.34%実測値C=44.51% H=6.24%質
主分析値(SIMS法)
分子量1459.2924 質量1458.4748
m/z1459に(M 十H)イオンを検出した。Elemental analysis value (C54H, ○1.) Calculated value C=, i4, 45% l+=6.22% 0=4
9.34% Actual value C = 44.51% H = 6.24% Quality Main analysis value (SIMS method) Molecular weight 1459.2924 Mass 1458.4748
A (M 1 H) ion was detected at m/z 1459.
また、このものは277.5℃で分解した。Moreover, this product decomposed at 277.5°C.
実施例2゜
ジマルトシル−β−サイクロデキストリン粉末20gを
、pHs、o、50mM酢酸ナトリウム緩衝1100m
lに溶解し、これにリゾプス・ニベアス(Rbizop
us n1veus)のグルコアミラーゼ(生化学工業
KK製33.6単位/丁時)200単位加え、40℃で
10時間反応させた後、加熱を行い酵素反応を停止する
。Example 2 20g of dimaltosyl-β-cyclodextrin powder was added to 1100mM of 50mM sodium acetate buffer at pHs, o.
Rhizopus niveas (Rbizop
200 units of glucoamylase (manufactured by Seikagaku Kogyo KK, 33.6 units/h) were added, and the mixture was allowed to react at 40°C for 10 hours, followed by heating to stop the enzymatic reaction.
反応液を冷却した後、メンブランフィルタ−(東洋ろ紙
KKlil、セルロースニドレイトTM−2,0,45
μメツシユ)を用いてろ過し、さらに濃度を10%に3
1!!’ L、この溶液10m1をトヨバールHW−4
O3を充填したカラム(4,5X 100cm:2本)
によりゲルろ過クロマトグラフィーにかけて分離精製を
行い、ノズルフシルーβ−サイクロデキストリンを71
0mH得る。After cooling the reaction solution, filter it using a membrane filter (Toyo Roshi KKlil, Cellulose Nidorate TM-2,0,45).
3 μm mesh) to further reduce the concentration to 10%.
1! ! 'L, 10ml of this solution was added to Toyobar HW-4
Column packed with O3 (4,5X 100cm: 2 columns)
Separation and purification was performed by gel filtration chromatography using
Obtain 0mH.
実施例3゜
ジマルトシル−β−サイクロデキストリン粉末10gを
、pH540,50mM酢酸ナトリウムIfc衝110
0mlに溶解し、これにリゾプス・ニベアス(Rhiz
opus n1veus)のグルコアミラーゼ(生化学
工業KK製33.6単位/…8)200単位加え、50
℃で5時間反応させた後、加熱を行い酵素反応を停止す
る。Example 3 10g of dimaltosyl-β-cyclodextrin powder was added to pH 540, 50mM sodium acetate Ifc solution 110
Dissolve in 0ml and add Rhizopus niveas (Rhiz
opus n1veus) glucoamylase (Seikagaku KK 33.6 units/...8), add 200 units, and add 50
After reacting at ℃ for 5 hours, heating is performed to stop the enzyme reaction.
反応液を冷却した後、メンブランフィルタ−(東洋ろ紙
KK製、セルロースニドレイ)TM−2,0,45μメ
ツシユ)を用いてろ過し、ろ液10m1をトヨバールH
W−4O8を充填したカラム(4゜5 X 100cm
:2本)によりゲルろ過クロマトグラフィーにかけて分
離精製を行い、ジグ用コシルーβ−サイクロデキストリ
ンを72On+g得る。After cooling the reaction solution, it was filtered using a membrane filter (manufactured by Toyo Roshi KK, Cellulose Nidrei TM-2, 0, 45μ mesh), and 10 ml of the filtrate was filtered using Toyovar H.
Column packed with W-4O8 (4゜5 x 100cm
: 2 bottles) for separation and purification by gel filtration chromatography to obtain 72 On+g of cosyl-β-cyclodextrin for jigs.
第1図は、ジグ用コシルーβ−サイクロデキストリンの
質量スペクトルを示し、第2図は、ジグ用コシルーβ−
サイクロデキストリンの赤外線吸収スペクトルを示し、
fjS3図は、ジグルコシル−β−サイクロデキストリ
ンのI’C核磁気共鳴スペクトルを示す。Fig. 1 shows the mass spectrum of cosyl-β-cyclodextrin for jig, and Fig. 2 shows the mass spectrum of cosyl-β-cyclodextrin for jig.
Showing the infrared absorption spectrum of cyclodextrin,
Figure fjS3 shows the I'C nuclear magnetic resonance spectrum of diglucosyl-β-cyclodextrin.
Claims (1)
サイクロデキストリン。 1)分子式C_5_4H_9_0O_4_52)分子量
1459 質量分析測定法(Secondary Ion Mass Spectrometry;SIM
S法)により測定。(第1図参照) 3)融点277.5℃(非結晶;分解) 4)比旋光度[α]^2^0_D+169.3(C=0
.2;H_2O) 5)ペーパークロマトグラフィー 1−ブタノール:1−プロパノール:水=3:5:4の
展開溶媒を使用してペーパー上に展開した後、ヨウ素溶
液を用いる発色および粗グルコアミラーゼで前処理した
後硝酸銀を用いる発色により呈色させるとき、 それぞれ1スポットを示す。 6)薄層クロマトグラフィー (1)イソプロパノール:エタノール:水=5:5:2
(2)1−ブタノール:ピリジン:水=6:4:3もし
くは(3)1−ブタノール:エタノール:水=5:5:
2の各展開溶媒を使用して薄層板(DC−Fertig
platten Kieselgel60(メルク社製
))上に展開した後、ヨウ素溶液を用いる発色およびリ
ンモリブデン酸 /硫酸を用いる発色により呈色させるとき、それぞれ1
スポット(Rf値は、それぞれ(1)0.41(2)0
.54(3)0.25)を示す。 7)高速液体クロマトグラフィー (条件1) カラムサイズ:6φ×50mm 担体:Nucleosil−5NH_2(ナーゲル社製
)溶媒:アセトニトリル:水=70:30 流速:2.0ml/min 検出器:示差屈祈計ERC7520型(エルマ光学株式
会社製) (条件2) カラムサイズ:6φ×150mm 担体:Spherisorb ODS−II(フェーズセ
ップ社製) 溶媒:メタノール:水=8:92 流速、検出器は条件1と同じ。 本品は、上記各条件でそれぞれ1ピークを示す。 8)溶解性 水に易溶、エタノールに難溶。 9)性状 粉末は白色であり、水溶液は無色。 10)赤外線吸収スペクトル(第2図参照)ν=3,4
00cm^−^1、2,930cm^−^1)、1,1
50cm^−^11,030cm^−^1に吸収を認め
る。 11)^1^3C核磁気共鳴スペクトル(第3図参照)
δ(D_2O) 68.2(1−6結合のC_6) 100.5(1−8結合のC_1) 12)メチル化分析 箱守法にしたがいメチル化した後、メチル化物の加水分
解を行い、生成した加水分解物を還元、アセチル化して
アルディトール−アセテートに誘導しガスクロマトグラ
フィーにより同定すると、2,3,4,6−テトラ−O
−メチルグルコース、2,3,6−トリ−O−メチルグ
ルコース、2,3−ジ−O−メチルグルコースのモル比
は、1.9:5.0:1.9を示す。 (2)ジマルトシル−β−サイクロデキストリンにグル
コアミラーゼを作用させて、ジグルコシル−β−サイク
ロデキストリンを生成させることを特徴とするジグルコ
シル−β−サイクロデキストリンの製造方法。[Scope of Claims] (1) Diglucosyl-β- having the following physical and chemical properties
cyclodextrin. 1) Molecular formula C_5_4H_9_0O_4_52) Molecular weight 1459 Secondary Ion Mass Spectrometry (SIM)
Measured by S method). (See Figure 1) 3) Melting point 277.5°C (amorphous; decomposed) 4) Specific rotation [α]^2^0_D+169.3 (C=0
.. 2; H_2O) 5) Paper chromatography After developing on paper using a developing solvent of 1-butanol: 1-propanol: water = 3:5:4, color development using iodine solution and pretreatment with crude glucoamylase When the color is developed using silver nitrate, one spot is shown for each spot. 6) Thin layer chromatography (1) Isopropanol:ethanol:water=5:5:2
(2) 1-butanol:pyridine:water = 6:4:3 or (3) 1-butanol:ethanol:water = 5:5:
A thin layer plate (DC-Fertig
platten Kieselgel 60 (manufactured by Merck & Co., Ltd.), and then color development using iodine solution and phosphomolybdic acid/sulfuric acid, respectively.
Spot (Rf value is (1) 0.41 (2) 0, respectively)
.. 54(3)0.25). 7) High performance liquid chromatography (conditions 1) Column size: 6φ x 50mm Support: Nucleosil-5NH_2 (manufactured by Nagel) Solvent: acetonitrile:water = 70:30 Flow rate: 2.0ml/min Detector: Differential refractometer ERC7520 Type (manufactured by Elma Optical Co., Ltd.) (Condition 2) Column size: 6φ x 150 mm Support: Spherisorb ODS-II (manufactured by Phase Sep Co., Ltd.) Solvent: Methanol: Water = 8:92 Flow rate and detector are the same as Condition 1. This product shows one peak under each of the above conditions. 8) Solubility: Easily soluble in water, poorly soluble in ethanol. 9) Properties The powder is white and the aqueous solution is colorless. 10) Infrared absorption spectrum (see Figure 2) ν=3,4
00cm^-^1, 2,930cm^-^1), 1,1
Absorption is observed at 50cm^-^11,030cm^-^1. 11)^1^3C nuclear magnetic resonance spectrum (see Figure 3)
δ(D_2O) 68.2 (C_6 of 1-6 bond) 100.5 (C_1 of 1-8 bond) 12) Methylation analysis After methylation according to the box-mori method, the methylated product was hydrolyzed to produce When the hydrolyzate was reduced and acetylated to induce alditol-acetate and identified by gas chromatography, it was found that 2,3,4,6-tetra-O
The molar ratio of -methylglucose, 2,3,6-tri-O-methylglucose, and 2,3-di-O-methylglucose is 1.9:5.0:1.9. (2) A method for producing diglucosyl-β-cyclodextrin, which comprises reacting dimaltosyl-β-cyclodextrin with glucoamylase to produce diglucosyl-β-cyclodextrin.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60246279A JPS62106901A (en) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Diglucosyl-beta-cyclodextrin and its production |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60246279A JPS62106901A (en) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Diglucosyl-beta-cyclodextrin and its production |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62106901A true JPS62106901A (en) | 1987-05-18 |
JPH0412881B2 JPH0412881B2 (en) | 1992-03-06 |
Family
ID=17146173
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60246279A Granted JPS62106901A (en) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Diglucosyl-beta-cyclodextrin and its production |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62106901A (en) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6327440A (en) * | 1986-07-18 | 1988-02-05 | Sanraku Inc | Glucosylated branched cyclodextrin-containing composition |
FR2631342A1 (en) * | 1988-05-13 | 1989-11-17 | Director National Food Researc | PROCESS FOR THE PREPARATION OF BRANCHED CYCLODEXTRINS BY MULTIPLE GLUCOSYL GROUPS |
US5017566A (en) * | 1987-12-30 | 1991-05-21 | University Of Florida | Redox systems for brain-targeted drug delivery |
US5024998A (en) * | 1987-12-30 | 1991-06-18 | University Of Florida | Pharmaceutical formulations for parenteral use |
US5332582A (en) * | 1990-06-12 | 1994-07-26 | Insite Vision Incorporated | Stabilization of aminosteroids for topical ophthalmic and other applications |
US5730969A (en) * | 1988-10-05 | 1998-03-24 | Chiron Corporation | Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins |
-
1985
- 1985-11-05 JP JP60246279A patent/JPS62106901A/en active Granted
Cited By (7)
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US5730969A (en) * | 1988-10-05 | 1998-03-24 | Chiron Corporation | Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins |
US5997856A (en) * | 1988-10-05 | 1999-12-07 | Chiron Corporation | Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins |
US5332582A (en) * | 1990-06-12 | 1994-07-26 | Insite Vision Incorporated | Stabilization of aminosteroids for topical ophthalmic and other applications |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0412881B2 (en) | 1992-03-06 |
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