JPS61500224A - 腫瘍性組織を放射線に対して増感する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 腫瘍性組織を放射線に対して 増感させる方法及び増感物質 背景技術 本発明は腫瘍の放射線療法に関し、更に詳しくは動物、特に人間の腫瘍を増感（ ｓｅｎｓ　ｉ　ｔ　１ｚｅ）するのに適した治療用医薬組成物及び治療方法に関 する゛。上記組成物は腫瘍を放射線に対してより敏感にし、腫瘍性細胞を殺すの に必要な放射線量を顕著に減らし、同時に腫瘍部位のはるかに多くの組織に対し て放射線照射を可能とする。

従来の放射線増感剤は例えば抗フイラリア剤、ミソニゲゾールのような低酸素細 胞の増感剤であったが、これらは人体に用いた場合に神経毒性を有するという複 雑性を示す。５−ハロゲン化ピリミジン類は低酸素細胞増感剤とは相異し、その 作用機構は全く相異する。

我々は培養された哺乳動物の細胞を、ブロモ−２゛−デオキシウリジン（Ｂ　ｒ ｄＵ　）又は他のハロゲン化されたチミジン誘導体に曝露すると、これらの細胞 をＸｍ照射して増感して得られるＤＮＡ中に、その化合物を取り込むことを見い 出した。ＢｒｄＵは急速に異化、分解し、急速に成長する新形成を感作するには 、その臨床効果は限定されたものであった。

我々はＳ−クロＥｊ、２　′−デオキシシチジン゛（ｆｅｌｌΔＣ）る４−アミ ノ基の存在によ１９容易に、は分１４＊セす、相当するｄＵ類とは異なる酵素に よっで：同化（ａｎ　ａ、ｂ、ｏｌ　１ｉ　ｚｅ）されること−を見い出した。

更、にＣ！ｌｄｃ、はＣ，ｌｄＵよりも細胞毒性が少ない。

本発明の目的は急速にしろ徐々にしろ成長する悪性の腫瘍に対して容易に分解、 異化されない安定な選択的な細胞増感剤の１種であって、Ｘ線ビーム（又は他の 放射線源）を腫瘍組織部位に、例えば１７４程度の顕著に少ない放射線量を照射 しても同程度の腫瘍殺りく効果を有し、何らその下部組織に損傷を与えない細胞 増感剤を提供することにある。換言すれば、従来の照射方法に比べて、本発明の 増感物質及び方法を用いる場合には、正常組織にはこれまで以上の損傷を与える ことなく、より攻撃的に腫瘍性組織を殺すことが可能となる。

本発明の目的は皮膚病巣に対しては例えば紫外線、近可視光＃ｉ（３１３ｎｍ） を用いて、固形腫瘍に対してはＸ線、γ線、β線、中性子線、その他の放射線を 用いて、治療する物質及び方法を提供することにある。

本発明の他の目的は開示された物質及び方法を用いて、悪性腫瘍が転移侵入する 可能性のある部位を放射線、特にＸ線に対しで増感することにある。

緩やかに攻撃的な治療により、特に増感剤組成物の前に或いは共に５−フルオロ −２゛＝デオキシウリジン（Ｆ　ｄＵ　）及びＮ−（ホスホンアセチル）−Ｌ− アスパルテー）（ＰＡＬＡ）により治療することにより毒性が現われる場合には 、放射線治療の終りにチミジン又はデオキシシチジンの２つの非毒性代謝産物を 患者に与えるのが良い。これにより化学療法剤の毒性効果が中和もしくは消され ることにより、薬物治療の不利な効果がもしあれば軽減される。

本発明の方法は、まず第１にＸ線又は７ｍ＜例えばＣｏからの）照射と共に用い られる。また皮膚病巣に対効で、更にβ線、中性子線、その他の放射線も有効で ある。増感作用の分子基底（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂａｓｉｓ）は紫外＃ｌ（２ ６０ｎｍ）、近可視光線（３１３ｎ　ｔｎ　）、（共に非透過性）、及びＸ＃！ 、γ線照射において明確に確立されている。

発明の要約 放射線療法が必要な腫瘍を有する患者は、−態様において、好ましくは徐放ベー スで、５−クロロ−２−デオキシシチジン及び／又は５−クロロ−２°−ハロー ２゛−デオキシシチジン（ハロ＝フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨウ素で−あり 、好ましくはクロロである）を投与される。デオキシシチジン化合物は好ましく はテトラハイドロウリジン（Ｈ，Ｕ）及び／又は２°−デオキシテトラハイドロ ウリジン（ｄＨ，Ｕ）のような脱アミノ防止剤と共に、腫瘍組織中に腫瘍組織を 放射線に対し−４　ｉｔ表昭６＋−５ｏｏ：：２４（ａ）で十分増感する量存在 するまでの期間、投与される。

最も好適には、ＣＩｄＣと競合する代謝産物を低下させる前処理システムを適用 するか、或いは同じ目的のために特別の治療食を用いる。薬物治療を中断し、放 射線療法が照射された腫瘍組織を殺すに必要で、一方、その下部組織には顕著な 損傷を与えないか減少する範囲の投与量で開始される。もし増感過程で毒性が発 現したら、放射線治療に続いて直ちに患者にチミジン又はデオキシシチジンを投 与し、選択的な腫瘍殺りくに悪影響を及ぼすことなく毒性を消すのが好ましい。

５−　Ｃｌｄｃ及びＨ，Ｕ又はｄ）Ｔ、Ｕの必要量を医薬的に調製した組成物の みならず、５−ＣＩ−２°−ハロー２’−ｄＣ又は５−ハロー２゛−ハロー２’ −ｄＵの必要量を含有する医薬組成物についても述べる。

他の態様において、患者に５−り０口、５−ブロモ若しくは５−ヨード−２゛− ハロー２°−デオキシウリジン化合物、好ましくはハロ＝フルオロ、クロロ又は ヨードで、特にハロ＝クロロである５−ブロモ又は５−ヨード化合物が投与され る。この場合はデオキシウリジン基はアミ７基を含んでいないので、脱アミ７基 を防止する必要はない（これについては後で詳しく述べる）。従ってデオキシウ リジン化合物と共にＨ４Ｕ及び／又はｄＨ，Ｕを投与する必要はない。

デオキシウリジンの５−ハロゲン化類はその急速な異化及び全般的な毒性のため に腫瘍の増感剤としての用途は限定されていた。この問題に対する一つのアプロ ーチとして、デオキシシチジン（ｄＣ）又は２゛−ノ１０−２゛−デオキシシチ ジンの５−ノ１０デン化類が用（１られ、これらは脱アミノ化されなければ異化 されなし１゜人体の血清中で非常に活性なシチジンデアミナーゼ（ＣＤ　）によ る脱アミノ化を防止するために、本発明においてはこの酵素の有効なインヒビタ ーであるテトラハイドロウリジン（Ｈ４Ｕ）を、デオキシシチジン化合物と共に 又はほぼ同時に投与することが好ましし１゜我々の以前の酵素動力学の研究によ れば、５−ブロモ−２゛−デオキシシチジン（ＢｒｄＣ）及び５−ヨード−２゛ −デオキシシチジン（ＩｄＣ）は異化を避けるアプローチにおいて適当でなかっ た。その理由はこれらの化合物はデオキシシチジンキナーゼに対して不活性な基 質であるから。ＢｒｄＣとは異なり、クロロデオキシシチジン（Ｃｌｄｃ　）は その同化にヌクレオシドレベルで脱アミ／化を必要としない。この化合物は嘩乳 動物のデオキシシチジンキナーゼに関して適当なＫ　Ｉｎ値（５６μＭ）、Ｂｒ ｄＣは４６０μＭ、ｄＣは２μＭ＋　を有してνするからである。ＨＥｐ−２細 胞を用いた研究によれば、ＣＩｄＣ（十Ｈ、Ｕ　）は次のように代謝する。

ＣＩｄＣ→　ＣＩｄＣＭ　Ｐ　→　ＣＩｄＵ　Ｍ　Ｐ　ＩｄＣＩｄＵ　Ｔ　Ｐ　 人ＤＮＡ　（１＝デオキシシチジンキナーゼ、２−デオキシシチジレートデアミ ナーゼ（ｄＣＭＰＤ）、３＝チミジレートキナーゼ、４＝ＤＮＡポリメラーゼ） これらｆ′）４種の酵素は多くの人間の腫瘍中におし１て付活される。例えば人 間の悪性腫瘍中のｄＣＭＰＤの活性は正常、ＩＩＩＩＩＩＬ中の活性に比べて２ ０〜８０倍も高１１゜ＨＥｐ−２細胞を用いたＸ線照射研究においては３．４〜 ３．７倍の線量増大効果が見られた。細胞は新規なピリミジン合成のインヒビタ ー、Ｎ−（ホスホンアセチル）−Ｌ−アスパルテート（’Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　）及 び５−フルオロデオキシウリジン（Ｆ　ｄＵ　）と共にそれぞれ２０時間及び５ 時間、前培養され、次いで０．１又は０．２ｍＭのＣ１ｄＣ及びＨ、Ｕ　（１０ ０μＭ）の存在下で６４時間培養された。

この条件ではＤＮＡ中のチミジンに代ってＣ４ｄＵの置換が４０〜５０％発生し た。薬物を投与した未照射の細胞に対して１０±４〜１２±５％の生存率が得ら れた。ＦｄＵよりＤＮＡ及び腫瘍選択性の大きいチミジレートシンセターゼのイ ンヒビターも本発明の範囲に含まれる。

ＣｊｄＣ及びその代謝産物は脱アミ／化が起こらなり１限す毒性ではない。Ｃｌ ｄｃはノＡイレベルのｄＣＭＰＤを有する腫瘍中で優先的にＣｌＪＵ　Ｍ　Ｐに 変換され、次り１で更にＣｌｄＵ　Ｔ　Ｐに同化され、放射線増感化のみならず 選択的腫瘍毒性化される。これは恐ら（Ｃ１ｄＵＴＰによりリボヌクレオシドジ ホス７エートレグクターゼが抑制されたからと考えられる。

ＣＤ及びｄＣＭ　Ｐ　Ｄを抑制するｄＨ，Ｕの添加により、−’／　− ＤＮＡ中にＣｌｄｃだけを加えることによる放射線増感体の場合には、これらは 脱アミノ化の問題を有しないので、ｄＨ、Ｕ　（又はＨｌＵ）を使用する必要は ない。

本発明を実施するにおいて好適に使用される化合物は、その略号及び構造式と共 に第１表に示した。５−クロロデオキシシチジン（ＣＩｄＣ）はＣａｌｂｉｏｃ ｈｅｍ　−Ｂ　ｅｈｒｉｎｇから得られ、文献中に抗ウィルス剤（抗ヘルペス剤 ）として記載されている。Ｆ　ＯＸｔ　Ｍ　ｅｋｒａｓ。

Ｂａｇｗｅｌｌ及びＧ　ｒｅｅｒら、「抗ヘルペス活性の失活を伴うことなくデ オキシシチジンの５−ハロゲン化類の細胞毒性を選択的に拮抗するデオキシシチ ジンの能力」、抗菌剤化学療法、２２巻、Ｎｏ、３．４３１〜４４１頁（１９８ ２年９月）を参照。［）ｅＣＩｅｒｃｑらは細胞培養研究においてＣＩｄＣを用 いた（ガンの治療における使用は示されていない）。Ｃｌｄｃを示すデータは用 いられた系では顕著ではなかった。「５−　置換−２゛−デオキシシチジン及び シトシンアラビノシトの腫瘍細胞成長の抑制活性におけるデオキシシチジンキナ ーゼの役割」、Ｊ。

Ｂ　ａｌｚａｒｉｎｉ及びＤｅ　Ｃ１ｅｒｃｑ、　Ｅｒ１ｋ、　Ｍｏ１ｅｃｕｌ ａｒＰ　ｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、第２３巻、１７５−１８１頁（１９８２年） を参照。

５−クロロ、５−ブロモ若しくは５−ヨード−２゛−ハロー２°−デオキシウリ ジン誘導体のみならず、５−クロロ−２′−ハロー２°−デオキシシチジン類は 、竹表昭６＋−５ｏｏ２２４（４） Ｃｏｄｉｎｇｔｏｎ、　Ｄ　ｏｅｒｒ及びＦｏｘによる、Ｊ、Ｏｒｇ、　−Ｃｈ ｅｍ、、　２９．５５８　（１９６４）の［ヌクレオシド、ｘｖｍ。

２′−フルオロチミジン、２’−フルオロデオキシウリジン及び他の２゛−ハロ ゲノ−２゛−デオキシヌクレオシド類の合成」に記載された方法により製造でき る。

テトラハイドロウリジン（Ｈ４Ｕ）はメリ］ランド州、ベセスダにある国立ガン 研究所の医薬開発部から入手でき、その合成法はＨａｎｚｅによる、Ｊ　、Ａ　 ｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ。

シト類の接触的還元」に記載されている。２゛−デオキシテトラハイドロウリジ ン（ｄＨ，Ｕ）はシチジンデアミナーゼを抑制し、加リン酸反応を受けた場合に はデオキシシチジレートデアミナーゼをも抑制する。Ｈｌり及びｄＨ，Ｕの合成 は米国特許第４，０１７，６０６（Ｈａｎｚｅら）に開示されている。我々の知 る限りでは、ｄＨ，Ｕは腫瘍の治療において、デオキシシチジン類と共に使用さ れたことはない。

５−フルオロデオキシウリジン（ＦｄＵ）はシグマケミカル社から入手できる公 知の抗腫瘍剤であり、５−フルオロデオキシシチジン（ＦｄＣ）も有用であり、 腫瘍に対してより大きな選択性を有している。ＦｄＣはこれ迄腫瘍の放射線増感 には使用されたことがなく、Ｆ　ＯＸｔ　Ｊ　、　Ｊ　、、　Ｗｅｍｐｅｎ、　 Ｉ　＋’及びＤ　ｕｓｃｈｉｎｓｋｙｙ　Ｒ＋による、第４回生化学国際会議の 議事針山６頁（１９５８）の［５−フルオロシトシンのヌクレオシド類」に従っ て合成できる。本発明の実施においては、それはテトラハイドロウリジンと共に 投与される。

Ｎ−（ホスホンアセチル）−Ｌ−アスパルテートは単独で又は５−フルオロウラ シル（５−ＦＵｒａ）と共に、抗腫瘍剤として使用されているが、放射線と共に 腫瘍細胞を予め処理するために用いられたことはない。

ＰＡＬＡはメリーランド州、ベセスグの国立〃ン研究所の医薬開発部から入手で きる。

抑制することにある。

ヘルペス又はヘルペス様のウィルスの治療における５−）　ＩＪ　フルオロメチ ル−２゛−デオキシシチジン（Ｆ３＋ｏｅｔｈｙｌ　ｄＣ）とテトラハイドロウ リジン（Ｈ、Ｕ　）の使用は米国特許第４．２１０，６３８　（Ｓ　ｈｅｌｄｏ ｎ　Ｇ　ｒｅｅｒ）に記載されている。

第　１　表 テトラハイドロウリジン（Ｈ４Ｕ） ２′−デオキシテトラハイドロウリジン（ｄＨ，Ｕ）５−クロロ−２′−デオキ シシチジン（５−Ｃ１ｄＣ）５−フルオロ−２゛−デオキシウリジン（ＦｄＵ） 。

５−フルオロ−２′−デオキシシチジン（ＦｄＣ）Ｎ−（ホスホンアセチル）− Ｌ−アスパルテート　（ＰＡＬＡ）使用された略号を以下に示す。

ＣＤ、　シチジン−デオキシシチジンデアミナーゼ； ＣＨＯ，チャイニーズハムスター卵巣細胞；Ｃ１ｄＣ，５−クロロ−２′−デオ キシシチジン；ＣＩｄＣＭＰ、５−クロロ−２゛−デ′オキシシチジンー５゛− モノホス７エート； ＣｌＪＵＭＰ、５−クロロ−２゛−デオキシウリジンー５′ｄＣ，デオキシシチ ジン： ｄＣＫ、　デオキシシチジンキナーゼ；ｄＣＭＰＤ、デオキシシチジレートデア ミナーゼ；ｄＨ４Ｕ、　２’−デオキシテトラハイドロウリジン；ｄＴ、　チミ ジン； ｄＵ、　２’−デオキシウリジン； ＪＵ　Ｍ　Ｐ　、　２’−デオキシウリジン−５゛−モノボス７エ　−　ト　； ＦｄＣ，５−フルオロ−２゛−デオキシシチジン；ＦｄＵ、　５　＝フルオロー ２“−デオキシウリジン；ＦｄＵＭＰ、５−フルオロ−２′−デオキシウリジン −５゛−モノホスフェート；。

）’　３　ｍｅｔｈｙｌ　ｄＣ２５）リフルオロメチル−２゛−デオキシシチジ ン； ＦＵｒａ、−５フルオロウラシル； ＨＥ　ｐ−２，人間の類表皮腫の喉頭カルシノーマ細胞； Ｈ４Ｕ、　テトラハイドロウリジン； ＴＫ、　チミジンキナーゼ； ＴＳ、　チミジレートシンセターゼ； ＴＴＰ、　チミジン−５゛−トリホスフェート。

特に何らかの理論に拘束されたくないが、ｄＨ４Ｕ。

Ｈ，Ｕと共に投与した場合のＣＩｄＣの放射線増感剤としての考えられる作用機 構について次の様に考える。

ヌクレオシド類の全身的異化作用から防ぐため低濃度のテトラハイドロウリジン により、ＣＩｄＣのみならずＢｒｄＣ及びＩｄＣも高レベルのシチジンデアミナ ーゼを有する腫瘍に対して選択的な放射線増感剤として作用すると推定される。

高濃度のＨ，Ｕでは、Ｃｌｄｃは腫瘍部位において、高レベルのデオキシシチジ ンキナーゼ及びｄＣＭ　Ｐデアミナーゼを有するＣ　ＩＪＵ　Ｍ　Ｐに優先的に 変換される。ＣｌｄＵ　Ｔ　Ｐに同化される場合は、ＣｌｄＵ　Ｔ　Ｐによるリ ボヌクレオシドレダクターゼの抑制作用による選択的腫瘍毒性のみならず、更に ＤＮＡ中にＣＩｄＵの合体により腫瘍の放射線増感作用が生ずる。選択性の原因 は加速されたＤＮＡ合成のみならず、この方法に必須の腫瘍中のキー酵素の付活 にもある。

更に腫瘍の上に重なった放射線の集束を用いた通例の選択性も発生する。このア プローチは照射の直後にデオキシシチジン及びチミジンを与えることにより、救 済を受けやすい。マウスを用いた代表的な照射実験は例えば８〜１０時間毎に、 ３０〜３６期間、Ｃ１ｄＣ＋Ｈ，Ｕを腹腔内に注射することを含む。最終目的は ＤＮＡの測鎖にＣＩｄＣを実質的に合体させることにある。ｄＨ。

Ｕを使用することにより、細胞のＤＮＡ中にＣＩｄＣ全合体できる。しかしこの 場合は、腫瘍中のｄＣキナーゼの付活を促進しようとのみしている腫瘍に対する 選択性はやや小さくなる。

実施例 ５−クロロデオキシシチジン（Ｃｌｄｃ　）及びテトラハイドロウリジン（Ｈ４ Ｕ）の組合せが放射線増感に有効か否かを調べる目的で、これらの試薬をＨＥ　 ｐ−２細胞を用いて試験した。これらの細胞は我々のモデルシステムから選ばれ 、高レベルのデオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）、シチジンデアミナーゼ（Ｃ Ｄ　）及びデオキシシチジレートデアミナーゼ（ｄＣＭＰＤ）活性並びにＣｌｄ ｃの確立された放射線増感剤であるＣ　ＩｄＵ　Ｔ　Ｐへの代謝変換に必要な酵 素的プロフィールを有している。

ＴＭＰキナーゼ及びＤＮＡポリメラーゼも腫瘍中で高められ、この高位は更に優 先的にＣｌｄＵを腫瘍ＤＮＡ中へ合体を確実にする。

以下に述べる実験の多くは一投与量の照射（通常は５００又は６００　ｒａｄｓ ）のみにより行われた。かかる限定されたデータから正確に投与増加効果を計算 することはできないが、同一実験において代謝産物と代謝拮抗物質の多くの異な る組合せをテストする目的でこのような実験を行った。当然、低投与量でのみ見 られる重要な特徴は不明である。しかし、このアプローチにより最適な範囲を見 い出すことがで鯵だ。増感効果は５００又は６００　ｒａｄｓでより顕著である ことを見い出した。以下に増感効果の数例を示す予備的実験を示す。

メ））レキセードと共に投与されたＣ１ｄＣ（及びＨ４Ｕ）、保存品並びにＤＮ Ａ−及びターゲット指向７オームのＣｌｄＵは２．０倍の増大（強化）比率を示 す。これは第１図より明らかである。この効果は６６％の生存能力で得られた。

次のシリーズの実験において、Ｃｌｄｃ　＋Ｈ、Ｕの投与の前に、細胞を新規な ピリミジン生合成のインヒビター、Ｎ−（ホスホンアセチル）−Ｌ−アスパルテ ート（Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　）により予め処理する。ＰＡＬＡはアスパルテートトラ ンスカルバミラーゼの優れたインヒビターであり、細胞内ピリミジンブールの減 少を引き起こす。

ＬｉａｎｇらはＰＡＬＡをフルオロウラシル（Ｆ　Ｕ　ｒａ）の前に投与すると 、両者は相乗効果を発揮することを発見した。これらの研究者はこの相乗的な相 互作用はＰＡＬＡを培養された細胞においてはＪＵＭＰブールが着しく減少する ことに基づくものと推測した。ＪＵ　Ｍ　Ｐプールの減少により、ＴＴＰの低下 したレベルを導くチミジレートシンセクーゼのＦｄＵＭＰの抑制作用が高められ る。これによりＣＩｄＵのＤＮＡへの合体への競争が少なくなり、ｄＣＭＰＤの 活性がより大きくなる。これが放射線療法においてＰＡＬＡ及びＦｄＵの組合せ を使用する原理である。更に細胞内ピリミジン生合成を減らすことにより、ＰＡ ＬＡはＣｌｄｃをＣ１ｄＵ、Ｔ　Ｐへ活性化する競合物質を減らす。

最近の実験において、６時間に亘るＦｄＵの前処理に先立って、ＰＡＬＡを１２ 〜２０時間投与した。Ｅ　ｖａｎｓらはＦｄＵＭＰプールがＦｄＵ又はＦＵｒａ の投与した後も持続することを示した。ＦｄＵの６時間の前処理に比較して、Ｈ Ｅ　ｐ−２細胞をＣＩｄＣ＋　Ｈ４Ｕ及びＦｄＵに４８時間照射した場合、何ら Ｃ１ｄＣ＋Ｈ，Ｕによる放射線増感作用により大きな増大効果は見られず、単に 細胞毒性がより大きくなったのみであった。上述の前処理スケジュールに鑑み、 ＣＩｄＣの濃度を低下（０，６ｍＭから０，２ｎ＋Ｍへ）させ、より優れたＸ線 増感効果を得ることができた。この結果を第２図に示す。ＣＩｄＣは０．２ｍＭ で、１２．４％±５．１％（±Ｓ、Ｅ、）の生存能力と、３．６の投与増強効果 を示したが、０．６ｍＭの濃度では３．０倍の投与増加しか見られなかった。第 ３図に示す実験において、更にＣＩｄＣの濃度を低くする努力をしたが、０．０ ５ｍＭの濃度で増感効果は認められなくなった。操作工程数を最小にするため、 細胞を単一前処理としてＰＡＬＡ及びＦｄＵに２１時間照射したが、生存能力が 着しく失なわれ（生存能力１．６％）、放射線増感効果にも好結果は得られなか った（１．９投与増大）。以前の９．８％±４．０％（±Ｓ、Ｅ、）の生存能力 の実験条件と同様の条件により、３．８倍の投与増強効果が得られた。

ＰＡＬＡ及びＦ−ｄＵの前処理を用いる原理は、Ｃ１ｄｃ　十Ｈ、Ｕにより、大 きな放射線増感効果を得ることにある。しかし我々のアプローチはＰＡＬＡ及び フッ素化ピリミジン類は化学療法との組合せにおいて有効な物質であるという事 実により強化された。ｄＣＭ　Ｐデアミナーゼの高レベルに基づく腫瘍部位での ＣｌｄｃＭＰのＣＩｄＵ　Ｍ　Ｐへの変換は、ＦｄＣの場合のような腫瘍指向毒 性の一例である。ＣＩｄＣ療法におけるターデッド酵素はＣＩｄＵ　Ｔ’Ｐによ り抑制されると思われるヌクレオシドシフオス７エートレダクターゼであると推 測される。ＦｄＵよりもＦｄＣによる前処理は現在、ＣＩｄＣ，Ｈ，Ｕ及びＰＡ ＬＡによる動物系の放射線増感作用を失うことなく、腫瘍及びＤＮＡ指向の毒性 のより大きな達成手段と考えられている。

第４図に要約された実験はＣｌｄｃを用いた我々の第２のアプローチを示す。即 ちＤＮＡにおけるＣ　ＩｄＣだけの（ＣＩｄＵへ予め脱アミ／化することなく） 合体による照射効果を調べた。これはｄＨ，Ｕにより行われた。

丁度ｄＨ、Ｕ　Ｍ　Ｐがデオキシシチジン及びデオキシシチジレートデアミナー ゼの両方を抑制するように。もし脱アミノ化の両部位がブロックされたら、唯一 のＣｌｄＣＭＰへの同化ルートはＣｌｄｃ　Ｔ　Ｐヘリン酸化されることである 。この最初の実験で、Ｃｌｄｃ及びｄＨ，Ｕを用いて１．８倍の投与増強効果が 得られた。

引き続く実験において、３−デアザウリジンを用いて競合するｄＣＴ　Ｐプール を低下させる方法を調べた。

デアザウリジンはＣＴＰシンセターゼの優れたインヒビターであり、本実験にお いては増感作用を高めるものとは思われなかった。第５図の棒グラフより、Ｃ１ ｄＣ，ｄＨ，Ｕ及びデアザウリジンにより、２１％の生存能力と共に２．０倍の 投与増強効果が得られた。

注目すべきことに、最も顕著な効果はＣ１ｄＣ＋ｄＨ４Ｕよりも、Ｃ１ｄＣ及び Ｈ，Ｕを使用することにより得られた。即ちＣ１ｄＣ＋Ｈ４Ｕの組合せは適当な 前処理（Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ及びＦ−ピリミジン類）により、３．４〜３．８投与増 大効果を示した。

第６図はＣＩｄＣ及びＨ，Ｕの投与の前の前処理においてＦｄＵの代りにＦｄＣ 十Ｈ，Ｕを用いた場合に３．４投与増大効果が得られた実験を示す。５−フルオ ロデオキシシチジン＋テトラハイドロウリジンは腫瘍指向毒性を示し、ＦｄＵよ りもより腫瘍特異性である。従ってＦｄＣ＋Ｈ４Ｕは放射線増感効果を失うこと なく、極めて効率良く使用される。

第７図はＰＡＬＡ及びＣｌｄｃの両方の濃度を下げると、実質的な毒性低下なし に、顕著に放射線増感効果が低下する実験を示す。ＦｄＵ及びＦｄＣ十Ｈ４Ｕ前 処理は、好ましい低毒性のＦｄＣ＋Ｈ，Ｕに比べて、有効Ｃｌｄｃ放射線増感作 用に関して同効果を示す。最高の３．４〜３．６投与増大効果はこの実験におい て示された。

ＢｒｄＵは最適の細胞培養条件下で、Ｘ線及び紫外線を用いて、３．５〜４．０ 投与増大効果を示した。我々はＢｒｄＵでは容易に達成−されない二つの特徴− 異化の回避及び腫瘍選択性を導く物質の組合せを用いた比較結果を得た。最も重 要なことには、この方法により下部組織に損傷を与えることなく１／４の投与量 で腫瘍を照射することができ、また正常組織に対する損傷を増１１へ１」 本発明は有効成分として放射線増感に有効な量の５−Ｃｌｄｃ及びＨ，Ｕ及び／ 又はｄＨ４Ｕを、医薬的に許容される賦形剤又は希釈剤と共に含有する医薬組成 物を提供し、この組成物は腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内、経口又は局所投与さ れ得る。組成物の成分は別々に投与可能であるが、混合物として同時に投与する のが好ましい。有効成分の各々の濃度は投与ルート、投与頻度、条件の厳格性、 患者の年令、体重及び一般的体調並びに照射されるべき腫瘍の大きさ及び部位に よって変動するが、約０．０１〜約２５重量％の範囲である。

またより高濃度の溶液、例えば７５ｇ７１００ｍｌ或いは０．１〜２５％（又は これ以上）の濃度のゆっくりと注入する静脈注入剤も使用できる。組成物が例え ばクリニムのような局所投与形態の場合、５−　Ｃｌｄｃ及びＨ，Ｕ又はｄＨ， Ｕの合計濃度は一般に約５〜５０ｕ＋ｔ％、好ましくは約５〜２０ｍ　ｔ％、よ り好ましくは約５〜１０ｔｕｔ％の範囲である。組・成物が例えばＣ，ｌｄＣ及 びＨ１Ｕ又４よｄ）ｌ、Ｕの水溶液のような腹腔内投与に適した形態である場合 、その温度は一４＆１に約０，５〜５ＬＩＩ／ｖ％、より好ましくけ１ましくけ 約１〜２ｗｔ％の範囲である。

静脈内注射用に使用するとき、有効成分の濃度は約０．０５−約５　ｗ／ｖ％、 好ましくは約０．１〜約０，５ｕ＋／ｖ％の範囲である。筋肉内注射の場合は、 上記腹腔内投与で述べたと同様の濃度が用いられる。

他の投与方法も使用可能である。持続的に投与する目的では坐剤が用いられる。

徐放性の外科移植も行うことができる。

本発明の組成物に用いられる医薬的に許容されるキ任意の無毒性の物質を使用で きる。組成物が例えば筋肉内又は静脈内投与される非経口用剤に適した形態の場 合は、好ましいキャリヤーである水性の賦形剤は他の通常の添加剤、例えばメチ ルセルロース又はポリビニルピロリドン（ｐ　ｖ　ｐ　）のような懸濁剤、及び 通常の界面活性剤などを加えることができる。経口投与の場合には組成物は、例 えばラクトース、デンプン及び／又はマグネシウムステアレートのような一般に 用いられる付香剤、シロップ、甘味剤、着色剤のような適当なキャリヤー又は希 釈剤を必要により含有する水溶液、懸濁液、カプセル又は錠剤等に成形すること ができる。

医薬組成物は好適には患者に、例えば静脈内設−与の場合、７０ｋｇの体重に対 して投与単位当り３〜５＋ｎ１（ｃｃ’）投与するのが好ましい。

ｔ″７ｒ口）コール １よ徐放性の形態で薬剤が投与された。Ｃｌｄｃ及びテｉトフハイドＵウリジン の徐放性投与は特に有利である。

１つのプロトコールにおいて個々の医薬に対して異なるルートを用いることがで きる。

ＰＡＬＡ二ナトリウム（１，０ｇ）、エデト酸二ナトリウム（１ｍｇ）及びｐＨ を６．５−７．５に調節する量のＮａＯＨを含有する１０ｍ１のアンプルを、固 型腫瘍の癌患者に投与単位当り２〜３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５〜２０ｍｇ ／ｋｇ、より好ましくは１０１ｇ／ｋＨの範囲で投与した。１２〜３６時間後、 好ましくは１８〜２６時間、最適には２４時間後に、ＦｄＵを１０−７５ｍｇ／ ｋｇ、好ましくは２５−６０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５０Ｂ／ｋｇの濃度で 投与した。別にＦｄＵと同様の濃度範囲でＦｄＣを投与し、この場合はテトラノ ）イトロウリシンを１０−２００ｍｇ／ｋｇ１好ましくは１５−１００ｍｇ／ｋ ｇ、より好ましくは２５ｎ＋ｇ／ｋＨの濃度で同時に投与しましくけ１，５：　 １〜０，７５：　１、より好ましくは１：１である。

３〜１２時間後、好ましくは４〜８時間、より好ましくは６時間後に、一連の５ −　Ｃｌｄｃ及びＨ４Ｕの投与を始める。

５−Ｃ１ｄＣの投与量は投与単位当りＺＯＯ−２５０Ｏｎ＋ｇＱｇ。

好ましくは５００〜２０００ｍ５／ｋｇ、より好ましくは１５００ｍｇ／ｋｇで ある。

Ｈ４Ｕの投与量は上記ＦｄＣの場合におけると同様の範囲である。しかしＣｌｄ ｃに対するＨ、Ｕの比率は相異し、に３０〜１：５、好ましくは１：３０〜１： １０、より好ましくは１：１５である。

これは６〜１８時間、好ましくは８〜１２時間、より好ましくは１０時−間の間 隔で繰り返される。ＣＩｄＣ＋　Ｈ４Ｕの繰り返し投与の期間は２０〜６０時間 、好ましくは３０〜５０時間、より好ましくは３４〜４８時間である。通常はＣ ！ｄＣ＋　Ｈ、Ｕは３〜４回に分けて、８〜１２時間の間隔で投与される。

Ｃ１ｄＣ＋Ｈ，Ｕの最後の投与の後、照射までに４〜１８時間の間隔を置く。こ の間隔は好ましくは６〜１４時間であり、より好ましくは８〜１０時間である。

投与頻度のみならずＰＡＬＡ／ＦｄＵ又はＦｄＣ抗腫瘍治療及びＣｌｄｃ　／　 Ｈ４Ｕ増感治療の間隔は、この治療法を用いたこれまでの実験及び観察の専門的 評価により決められる。同様に医薬治療及び照射治療の間隔も適宜状められる。

Ｘ線やγ線のような放射線の線量は、増感処置を受けていない患者に対する重量 と同等であっても或いは１７４〜３／４であっても良い。これにより、（ａ）４ ／４の線量が用いられる場合は、下部組織に大きな損傷を与えることな（、より 攻撃的に腫瘍を殺すことができるか、又は（ｂ）１／４〜３／４の線量が用いら れるときは、下部組織に対しては逼かに少ない損傷で、増感処置のない患者と同 程度に腫瘍を殺すことができる。

もし医薬治療スケジュールにより毒性が発現した場合は、放射線治療の直後にチ ミジンを５０〜７５０ｍｇ／ｋｇ１好ましくは１００−５００ｍｇ／ｋｇ、より 好ましくは２００　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ投与するのが良い。これは８〜１２時間 の間隔で２〜３回繰り返される。この治療方法は選択的な腫瘍殺りくに悪影響を 与えることなく、毒性を中和する。チミジンと同様の濃度で、デオキシシチジン をチミジンと共に又はその代りに投与できる。デオキシシチジンを投与する時、 デオキシシチジンに対するテトラハイドロウリジンの比率が１　：０．０５〜１ ：５となるように投与される。

上記治療法は１〜２週間後に繰り返すことができ、患者が合計で３０００〜７０ ００　ｒａｄｓの＃ｉ量を受けるまで再度繰り返すことができる。この方法によ り、患者は有効に腫瘍を治療するのに、より少ない放射線の照射で良い。これは この方法の有利な点の１つである。従来、部分的な軽快（緩解）をもたらす照射 線量で長期間の治癒が可能である。これがこの方法の第１の有利性である。

投与量及び範囲を下記の表にまとめて示す。

投与量” 栗−−１１通　常　好　適　米−一」Ｌ前処理ＰＡＬＡ　２〜３００５〜２０１ ０ＦｄＵ　１．０〜７５２５〜６０　５０増　感　ＣＩｄＣ２００〜２５００　 ５００〜２０００　１５００Ｈ４Ｕ　１０〜２００　１５〜１００　２５−−一 一−−−且旦ヨＵ−−−−月しニー圀すし一一写壮−−Ｕす＝−一」則−一＊ｍ ｇ／ｋｇ体重／投与で示害。

”　ＦｄＣが用いられた時 Ｈ，Ｕ又はｄＨ，Ｕと共にデオキシシチジンは照射前の各Ｃｌｄｃ処理の２〜６ 時間後に投与することもできる。

上記の投与量及び範囲は５−クロロ、５−ブロモ及ｔｙ５−Ｅ？−Ｆ−ｚ゛−ノ ）ロー２゛−デオキシウリジン誘導体のみならず、５−クロロ−２゛−ノ１０− ２゛−デオキシシチジン化合物に関しても適用される。

需ｉ　ｉ友碧一 本方法を用いた場合の毒性につ０て調べたところ、毒性による死亡はなく、多く ても５％の体重減少力ず見られた。これは放射線療法における抗腫瘍剤の投与１ こよる結果からみれば、小さな許容可能な体重減少と見ることができる。

用いたプロトコールは次の通りである。

３匹の動物にＰＡＬＡを２００ｍｇ／ｋｇの投与量で腹腔内注射した。次いで２ ４時間後に５−フルオロデオキシウリジン（ＦｄＵ）を５０　ｍ　ｇ　／　ｋ　 ｇの投与量で腹腔内注射した。

４時間後、更にＣＩｄＣ（５００ｍｇ／ｋｇ）とテトラハイドロウリジン１００ ｍｇ／ｋｇを同時に腹腔内注射した。上記濃度のＣｌｄｃ　＋Ｈ、Ｕの投与を１ ０時間の間隔で２回繰り返し録。４％体重減少が見られた。このプロトコールで （よ死芒動物は見られなかった。

このプロトコールは７００〜１４００ｍｇ／ｋｇのＣＩｄＣ及び６０ｔｎｇ／ｋ ｇのＦｄＵ濃度を用ν１て変形され、−°腫瘍組織のＤＮＡ中に多量の５−クロ ロデオキシウＩノジンの合体力ｆ見られた。

本発明の方法は腫瘍の速り・成長を利用する。腫瘍性及び正常組織の間における 酵素レベルの重大な定量的差異を利用するのである。Ｈ４Ｕの存在下に投与した Ｃ　ｌｄｃの代謝産物であるＣ　ｌｄＵ　Ｔ　Ｐは腫瘍中【こ優先的に形成され 、腫瘍指向毒性及び放射線増感作用を示す。

ピリミジン類の放射線増感作用の様式（よ高熱及び低酸素細胞増感剤のそれとは 相異するため、本方法（よ放１を線治療における物理療法と共ｌこ用ν・られる 。

第１図 第３図　・ＨＥＭ 特表昭６１−５００２２４　（９） 第５図 ６００ラド ラ　ド ・ＭＥＮ 第　７　表 ・ＭＥＮ 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下記一般式の化合物の治療的に有効な、放射線増感量を、腫瘍性組織を有す る患者に投与することを含む、腫瘍性組織を放射線に対して増感させる方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）式中、Ａは−ＮＨ２又は＝Ｏ、Ｘはク ロロ、ブロモ、ヨ−ド又はフルオロ、Ｙは水素、クロロ、ブロモ、ヨ−ド又はフ ルオロ、■は単結合又は２重結合であり、ＡがＮＨ２のとき２重結合であり、Ａ が＝Ｏのときは単結合である。 ２．ＡがＮＨ２、Ｘがクロロ、Ｙが請求の範囲第１項の通りである請求の範囲第 １項記載の方法。 ３．脱アミノ化抑制剤の脱アミノ化抑制有効量を更に投与することを含む請求の 範囲第２項記載の方法。 ４．テトラハイドロウリジン（Ｈ４Ｕ）及び／又は２′−デオキシハイドロウリ ジン（ｄＨ４Ｕ）の脱アミノ化抑制有効量を更に投与することを含む請求の範囲 第２項記載の方法。 ５．増感処置の前に患者に前処理剤を投与する請求の範囲第１項記載の方法。 ６．前処理剤がピリミジン生合成の新たなルートのインヒビターである請求の範 囲第５項記載の方法。 ７．前処理剤が５−フルオロ−２′−デオキシウリジン、５−フルオロ−２′− デオキシシチジン＋テトラハイドロウリジン、Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ− アスパルテート又はこれらの組合せである請求の範囲第６項記載の方法。 ８．化合物の量が約２０〜約２５００ｍｇ／ｋｇ体重である請求の範囲第１項記 載の方法。 ９．Ｈ４Ｕ及び／又はｄＨ４Ｕの量が約１〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重である請求 の範囲第４項記載の方法。 １０．デオキシシチジン化合物に対するＨ４Ｕ及び／又はｄＨ４Ｕの比率が約１ ：３０〜１：５の範囲にある請求の範囲第４項記載の方法。 １１．（１）患者に少なくとも１つの前処理剤の治療的有効量を投与し （２）（ａ）５−クロロ−２′−デオキシシチジン又は５−クロロ−２′−ハロ −２′−デオキシシチジン（ハロはフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードである ）の放射線増感量を （ｂ）テトラハイドロウリジン及び／又は２′−デオキシテトラハイドロウリジ ンの脱アミノ化抑制有効量と共に投与し （３）腫瘍性組織に、周囲の正常な組織を損傷することなく実質的に腫瘍組織部 位を殺すに十分な量の放射線を照射する 以上の工程を含む腫瘍性組織を有する患者の治療方法。 １２．前処理剤が５−フルオロ−２′−デオキシウリジン、５−フルオロ−２′ −デオキシシチジン＋テトラハイドロウリジン、Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ −アスパルテート又はこれらの組合せである請求の範囲第１１項記載の方法。 １３．（ａ）の量が約２０〜約２５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、（ｂ）の量が１ 〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重である請求の範囲第１１項記載の方法。 １４．（ｂ）／（ａ）の比率が約１：３０〜１：５の範囲にある請求の範囲第１ １項記載の方法。 １５．（ａ）が５−クロロ−２′−クロロ−２′−デオキシシチジンである請求 の範囲第１１項記載の方法。 １６．Ｘ線又はγ線が用いられる請求の範囲第１１項記載の方法。 １７．照射後、正常細胞を救うために、脱アミノ化抑制剤及び／又はチミジンと 共に又はこれとは別にデオキシシチジンを投与する工程を含む請求の範囲第１１ 項記載の方法。 １８．請求の範囲第１項の一般式（Ｉ）の化合物の放射線増感有効量と、医薬的 に許容される賦形剤又は希釈剤を含有する腫瘍性組織を放射線に対して増感する 医薬組成物。 １９．５−クロロ−２′−デオキシシチジン及び５−クロロ−２′−ハロ−２′ −デオキシシチジン（ハロはフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨ−ドである）から 選ばれるデオキシシチジン化合物の放射線増感有効量と、脱アミノ化抑制剤の脱 アミノ化抑制有効量を含有する腫瘍性組織を放射線に対して増感する医薬組成物 。 ２０．脱アミノ化抑制剤がテトラハイドロウリジン及び／又は２′−デオキシテ トラハイドロウリジンである請求の範囲第１９項記載の組成物。 ２１．デオキシシチジン化合物が５−クロロ−２′−クロロ−２′−デオキシシ チジンである請求の範囲第１９項記載の組成物。 ２２．デオキシシチジン化合物に対するテトラハイドロウリジン及び２′−デオ キシテトラハイドロウリジンの重量比が約１：３０〜１：５である請求の範囲第 ２０項記載の組成物。 ２３．下記一般式の化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、ＡはＮＨ２又は＝Ｏ、Ｘはクロロ、ブロモ又はヨ−ド、Ｙはクロロ、ブロ モ又はヨ−ド、■はＡが＝Ｏのとき単結合であり、ＡがＮＨ２のときは２重結合 である。