JPS61293917A - 新規インタ−ロイキン１活性物質、その製造法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞 - Google Patents
新規インタ−ロイキン１活性物質、その製造法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞Info
- Publication number
- JPS61293917A JPS61293917A JP60136247A JP13624785A JPS61293917A JP S61293917 A JPS61293917 A JP S61293917A JP 60136247 A JP60136247 A JP 60136247A JP 13624785 A JP13624785 A JP 13624785A JP S61293917 A JPS61293917 A JP S61293917A
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- interleukin
- cells
- stable
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、新規インターロイキン１活性物質、その製造
法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞に関する。本
発明方法によって生産されるインターロイキン１（以下
“ＩＬ−１”ともいう）活性物質は抗腫瘍剤としての用
途が期待されているので、医薬の産業分野で有用である
。
法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞に関する。本
発明方法によって生産されるインターロイキン１（以下
“ＩＬ−１”ともいう）活性物質は抗腫瘍剤としての用
途が期待されているので、医薬の産業分野で有用である
。
従来の技術
免疫反応の誘導には、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞
を中心とする多くの細胞が関与している。
を中心とする多くの細胞が関与している。
これらの細胞の機能は、これら細胞が生産する種々のリ
ンフ才力インに基づいている。これらリンフ才力インは
単離されて、免疫不全症および癌に対する治療に応用さ
れようとしている〔ミゼル（Ｍｉｚｅｌ、 Ｓ、’Ｂ、
）鳩、リンフォカインズ（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ）
第６巻、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ）。
ンフ才力インに基づいている。これらリンフ才力インは
単離されて、免疫不全症および癌に対する治療に応用さ
れようとしている〔ミゼル（Ｍｉｚｅｌ、 Ｓ、’Ｂ、
）鳩、リンフォカインズ（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ）
第６巻、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ）。
１９Ｂ２ ’］。
リンフ才力インのうち、たとえばインターロイキン２（
以下“ＩＬ−２”ともいう）は、これを大量に生産する
ことができる細胞（ジャーカット細胞）が確立されてい
る。しかし、ＩＬ−１については、これを大量に生産す
ることができる細胞株は確立されておらず、生成するＩ
Ｌ−１の理化学的、生物学的性質も十分に解析されてい
ない。
以下“ＩＬ−２”ともいう）は、これを大量に生産する
ことができる細胞（ジャーカット細胞）が確立されてい
る。しかし、ＩＬ−１については、これを大量に生産す
ることができる細胞株は確立されておらず、生成するＩ
Ｌ−１の理化学的、生物学的性質も十分に解析されてい
ない。
従来報告されているＩＬ−１のｐＩ値は６．８゜５．８
．５．２であることが、ジャーナル・オブ・クリニカル
・インベスティゲイション（Ｊ、（１０）１ｎ。
．５．２であることが、ジャーナル・オブ・クリニカル
・インベスティゲイション（Ｊ、（１０）１ｎ。
Ｉｎｖ、、） ７３．１４６２−１４７２（１９８４
）に記載されている。その他細胞培養によるＩＬ−１の
生産を示す文献としてはセルラー・イムノロシイ（Ｃｅ
ｌｌｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ） ８０．２２３
− ２２９（１９８３）、：ｌ−（１０）ピアン・ジャ
ーナル・オブ・イムノロシイ（Ｂｕｒ、Ｊ。
）に記載されている。その他細胞培養によるＩＬ−１の
生産を示す文献としてはセルラー・イムノロシイ（Ｃｅ
ｌｌｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ） ８０．２２３
− ２２９（１９８３）、：ｌ−（１０）ピアン・ジャ
ーナル・オブ・イムノロシイ（Ｂｕｒ、Ｊ。
Ｉｎｏｙ＋ｕｎｏｌ、 ）、ユ２ ．８９５−８９９
（１９８２）などがある。
（１９８２）などがある。
特開昭６０＝７８９１７にはヒト白血病細胞ラインによ
る［Ｌ；−１の製造方法が開示しであるが、ここで使う
細胞（ＳＰＩ−８０２＞はＮＫ様細胞であって本発明の
Ｂ細胞とは異なる。細胞の表面マーカーも違い、またＣ
ｏｎＡやホルボルミリステート酢酸エステルなどの刺、
激剤の添加なしにＩＬ−１を生産できる本発明細胞とは
明らかに異なる。
る［Ｌ；−１の製造方法が開示しであるが、ここで使う
細胞（ＳＰＩ−８０２＞はＮＫ様細胞であって本発明の
Ｂ細胞とは異なる。細胞の表面マーカーも違い、またＣ
ｏｎＡやホルボルミリステート酢酸エステルなどの刺、
激剤の添加なしにＩＬ−１を生産できる本発明細胞とは
明らかに異なる。
発明が解決しようとする問題点
リンフ才力インとして知られるＩＬ−１を大量に生産し
、かつ永代培養が可能な細胞株が得られれば、産業上極
めて有利である。
、かつ永代培養が可能な細胞株が得られれば、産業上極
めて有利である。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、白血病患者末梢血より得られる単核細胞
を形質転換させることにより、ＩＬ−ｉ活性物質生産性
を有する細胞株が確立できること、ならびに該ＩＬ−１
生産性株が従来知られているＩＬ−１生産性株と比較し
て、優れた性質を有することを見出し、本発明を完成し
た。
を形質転換させることにより、ＩＬ−ｉ活性物質生産性
を有する細胞株が確立できること、ならびに該ＩＬ−１
生産性株が従来知られているＩＬ−１生産性株と比較し
て、優れた性質を有することを見出し、本発明を完成し
た。
発明の構成
本発明は、新規ヒト白血病細胞株、該細胞株が生産する
新規ＩＬ−１活性物質、およびこれらの製造法を提供す
る。
新規ＩＬ−１活性物質、およびこれらの製造法を提供す
る。
本発明のヒト白血病細胞株の樹立方法は下記のとおりで
ある。
ある。
急性卓球性白血病患者末梢血より、リンパ球分離液を用
いて、比重遠心法により単核細胞を採取する。単核細胞
（１〜５Ｘ１０’個／ｍｌ ）を１〜１５％（好ましく
は１０％）の牛脂児血清（ＦＣ８）を含むＲＰＭ Ｉ
１６４０培養液中、１〜１０％（好ましくは５％）ＣＯ
２，９９〜９０％（好ましくは９５％）空気を通気し、
３０〜４０℃（好ましくは３７℃）で培養する。
いて、比重遠心法により単核細胞を採取する。単核細胞
（１〜５Ｘ１０’個／ｍｌ ）を１〜１５％（好ましく
は１０％）の牛脂児血清（ＦＣ８）を含むＲＰＭ Ｉ
１６４０培養液中、１〜１０％（好ましくは５％）ＣＯ
２，９９〜９０％（好ましくは９５％）空気を通気し、
３０〜４０℃（好ましくは３７℃）で培養する。
週１〜２回培養液を交換し、培養を続けると、培養開始
後、１〜２ケ月後に細胞が形質転換し、自発増殖（細胞
分裂）を行うようになる。この細胞を限界稀釈法または
コロニー形成法により単一細胞由来の株化細胞を得る。
後、１〜２ケ月後に細胞が形質転換し、自発増殖（細胞
分裂）を行うようになる。この細胞を限界稀釈法または
コロニー形成法により単一細胞由来の株化細胞を得る。
得られた細胞株は、ＩＬ−１活性物質生産性を有するＢ
細胞株であり、さらに下記性質を有している。
細胞株であり、さらに下記性質を有している。
１）染色体数７４６本
２）細胞分裂時間：約２４時間
３）細胞表面マーカー：
Ｅロゼツト陰性
（Ｅロゼツト陰性とは、ヒツジ赤血球を結合しないこと
をいう） Ｆｃリセプター陰性 （ＦｃｌＪセブター陰性とはＩ ｇ Ｇ、を結合したヒ
ツジ赤血球を結合しないことをいう）コールタ−のＢ１
抗原陽性 （コールクーの８１抗原陽性とは、コールクー社のＢ細
胞を検出するモノクローナル抗体と反応することをいう
） ＨＬＡ−ＤＲ抗原陽性 ＣＨＬＡ−ＤＲ抗原陽性とは、ヒトＩａ（ＨＬＡ−ＤＲ
）抗原を有することをいう〕表面免疫グロブリン（Ｉｇ
）陽性 ４）Ｔ細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。
をいう） Ｆｃリセプター陰性 （ＦｃｌＪセブター陰性とはＩ ｇ Ｇ、を結合したヒ
ツジ赤血球を結合しないことをいう）コールタ−のＢ１
抗原陽性 （コールクーの８１抗原陽性とは、コールクー社のＢ細
胞を検出するモノクローナル抗体と反応することをいう
） ＨＬＡ−ＤＲ抗原陽性 ＣＨＬＡ−ＤＲ抗原陽性とは、ヒトＩａ（ＨＬＡ−ＤＲ
）抗原を有することをいう〕表面免疫グロブリン（Ｉｇ
）陽性 ４）Ｔ細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。
５）ＨＳＢ−２ヒトＴ細胞株〔ジャーナル・オブ・イム
１０シイ（Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ） １３４
。
１０シイ（Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ） １３４
。
１６８２−１６８９ （１９８５） 〕のインターロイ
キン２生産を誘導する。
キン２生産を誘導する。
本発明のＩＬｉ活性物質の製造は以下のとおり行う。
本発明の細胞株（１〜８Ｘ１０６個／ｍ１）を動物細胞
の培養に通常用いられる培地に培養し、培養液にＩＬ−
１活性物質を蓄積させ、これを培養液から採取する。
の培養に通常用いられる培地に培養し、培養液にＩＬ−
１活性物質を蓄積させ、これを培養液から採取する。
培地としては、該細胞株が増殖でき、ＩＬ−１活性物質
を生成蓄積させることができる培地であれば、いかなる
培地も用いることができる。
を生成蓄積させることができる培地であれば、いかなる
培地も用いることができる。
具体的に好適な培地としては、ＲＰＭ１１６４０培地、
イーグルのＭＥＭ培地、ＥＨＡＡ培地などが用いられる
。これら培地の組成については「組織培養」 （中井準
之助ら編集、朝倉書店、９−１１頁、１９７６年）およ
びジャーナル・オブ・イムノロシイ （Ｊ、 Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、）、 １１９． １０４８〜１０５３（１
９７７）に記載がある。
イーグルのＭＥＭ培地、ＥＨＡＡ培地などが用いられる
。これら培地の組成については「組織培養」 （中井準
之助ら編集、朝倉書店、９−１１頁、１９７６年）およ
びジャーナル・オブ・イムノロシイ （Ｊ、 Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、）、 １１９． １０４８〜１０５３（１
９７７）に記載がある。
培地には、１〜１０％の牛脂児血清（ＦＣ３）または１
〜１１００Ａ／ｍｌのシリカを添加することにより、細
胞の増殖およびＩＬ−１活性物質の生成を高めることが
できる。
〜１１００Ａ／ｍｌのシリカを添加することにより、細
胞の増殖およびＩＬ−１活性物質の生成を高めることが
できる。
また培地には、ＩＬ−１活性物質産生刺激物質としてリ
ポポリサッカライド（ＬＰＳ）、ポックウィードマイト
ーゲン（ＰＷＭ）、スフフィロコツカス・アウレウス菌
体成分またはフォルボールミリステート・アセテート（
ＰＭＡ）を添加することによりＩＬ−１活性物質の生産
性を向上させることができる。これらｔｉｌ＋激物質は
、通常培養液１ｍｌ当りｌｎｇ〜１００■の範囲で用い
る。
ポポリサッカライド（ＬＰＳ）、ポックウィードマイト
ーゲン（ＰＷＭ）、スフフィロコツカス・アウレウス菌
体成分またはフォルボールミリステート・アセテート（
ＰＭＡ）を添加することによりＩＬ−１活性物質の生産
性を向上させることができる。これらｔｉｌ＋激物質は
、通常培養液１ｍｌ当りｌｎｇ〜１００■の範囲で用い
る。
培養は、通常の動物細胞の培養条件に従って、通気培養
を行う。通気は１〜１０％（好ましくは５％）Ｃｏ、、
９０〜９９％（好ましくは９５％）空気を用いる。培養
温度は３０〜４０℃、好ましくは３７℃、ｐＨは７．０
〜８．０、好ましくは７．２〜７．４である。培養は、
８時間〜４日間行う。
を行う。通気は１〜１０％（好ましくは５％）Ｃｏ、、
９０〜９９％（好ましくは９５％）空気を用いる。培養
温度は３０〜４０℃、好ましくは３７℃、ｐＨは７．０
〜８．０、好ましくは７．２〜７．４である。培養は、
８時間〜４日間行う。
培養物からのＩＬＩ活性物質の採取は、動物細胞の培養
物から蛋白質を採取する常法に従って行う。すなわち、
培養物を傾瀉するか、遠心分離して細胞を除いて得られ
る上清を、塩析、ゲルｐ過、クロマトフオーカシング、
減圧濃縮などの手法により処理してＩＬ−１活性物質を
分離、精製する。
物から蛋白質を採取する常法に従って行う。すなわち、
培養物を傾瀉するか、遠心分離して細胞を除いて得られ
る上清を、塩析、ゲルｐ過、クロマトフオーカシング、
減圧濃縮などの手法により処理してＩＬ−１活性物質を
分離、精製する。
培養物中および精製行程中のＩＬ−１活性物質の活性は
、実施例に示した方法によって行う。
、実施例に示した方法によって行う。
たとえば、培養液を遠心分離にかけ、上清を得る。
これを限外ｐ過器を用いて濃縮し、濃縮液をセファクリ
ールＳ−２００などのセファデックスを用いるカラムク
ロマトグラフィーにかけ、各両分のＩＬ−１活性を測定
する。活性画分を集め、クロＢｉｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ
、 ）製〕を用いる比重遠心法〔ジャーナル・オブ・ク
リニカル・アンド・ラボラトリイ・インベスティゲイシ
ョン（Ｊ、 （１０）１ｎ、Ｌａｂ。
ールＳ−２００などのセファデックスを用いるカラムク
ロマトグラフィーにかけ、各両分のＩＬ−１活性を測定
する。活性画分を集め、クロＢｉｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ
、 ）製〕を用いる比重遠心法〔ジャーナル・オブ・ク
リニカル・アンド・ラボラトリイ・インベスティゲイシ
ョン（Ｊ、 （１０）１ｎ、Ｌａｂ。
Ｉｎｖｅｓｔ、 ） ２１ 、７７−８９（１９６８
）］で処理した。比重１．０７７ の位置の単核細胞
を遠心分離（１，５０Ｏｒ、Ｉ）、ｍ、 １０分間）し
て採取した。単核細胞（２×１０６細胞／ｍｌ ）を１
０％牛脂児血／Ｉｖ（Ｆｅ２）〔グランド・アイランド
・バイオロジカル社（Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｃｌ Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏ、、）製〕を含むＲＰＭ１１
６４０培養液（田水製薬社製）中でＦａｌｃｏｎ ３３
０１３培養瓶〔ファルコン・プラスチック社 （Ｆａｌ
ｃｏｎ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｃｏ、）製〕を用い、５％炭
酸ガス、９５％空気を通気し、３７℃で培養した。
）］で処理した。比重１．０７７ の位置の単核細胞
を遠心分離（１，５０Ｏｒ、Ｉ）、ｍ、 １０分間）し
て採取した。単核細胞（２×１０６細胞／ｍｌ ）を１
０％牛脂児血／Ｉｖ（Ｆｅ２）〔グランド・アイランド
・バイオロジカル社（Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｃｌ Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏ、、）製〕を含むＲＰＭ１１
６４０培養液（田水製薬社製）中でＦａｌｃｏｎ ３３
０１３培養瓶〔ファルコン・プラスチック社 （Ｆａｌ
ｃｏｎ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｃｏ、）製〕を用い、５％炭
酸ガス、９５％空気を通気し、３７℃で培養した。
週２回培養液を交換し、培養を続けると、培養開始後１
ケ月目に細胞が形質転換し、自発増殖（細胞分裂）を行
うようになった。この細胞を限界稀釈法により単一細胞
由来の細胞株にし、ＳＳＹ−１と命名した。
ケ月目に細胞が形質転換し、自発増殖（細胞分裂）を行
うようになった。この細胞を限界稀釈法により単一細胞
由来の細胞株にし、ＳＳＹ−１と命名した。
ＳＳＹ−１は、１９８５年６月１９日付で英国ナンヨナ
ル・コレクション・オブ・アニマル・セル１カルチ＋
−（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ）にＮ ＣＡ
ＣＣＮｏ、８５０６１９０１として寄託しである。
ル・コレクション・オブ・アニマル・セル１カルチ＋
−（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ）にＮ ＣＡ
ＣＣＮｏ、８５０６１９０１として寄託しである。
得られた細胞株はＩＬ、−１活性物質生産性を有するＢ
細胞株であり、さらに下記性質を有していた。
細胞株であり、さらに下記性質を有していた。
（１〕染色体数；４６本
（２）細胞分裂時間：約２４時間
（３） 細胞表面マーカー：
Ｅロゼツト陰性
Ｆｃリセプター陰性
コールタ−の８１抗原陽性
）（ＬＡ−ＤＲ抗原陽性
表面免疫グロブリン（Ｉｇ）陽性
（４）Ｔ細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。
（試験方法）
正常人末梢血より採取したヒト単核細胞１０８細胞を１
０％ＦＣ３を含むＲＰＭ１１６４０培養液２ｍｌに培養
液２ｍ回波で平衡化したナイロンカラム（和光純薬工業
社製）Ｌｇに通塔し、カラムを通過した細胞を精製ヒト
Ｔ細胞として用いる。
０％ＦＣ３を含むＲＰＭ１１６４０培養液２ｍｌに培養
液２ｍ回波で平衡化したナイロンカラム（和光純薬工業
社製）Ｌｇに通塔し、カラムを通過した細胞を精製ヒト
Ｔ細胞として用いる。
別に、ＳＳＹ−１細胞（１０６個）を１０％ＲＰＭ １
１６４０培養液４ｍｌに懸濁させ、この懸濁液にマイト
マイシンＣ（協和醗酵工業社製）５０μｇ／ｍｌを加え
３７℃で６０分間インキュベートする。
１６４０培養液４ｍｌに懸濁させ、この懸濁液にマイト
マイシンＣ（協和醗酵工業社製）５０μｇ／ｍｌを加え
３７℃で６０分間インキュベートする。
精製ヒトＴＩＢ胞（１０５個）をマイトマイシンＣ処理
ＳＳＹｉ細胞（１０４個）の存在下または非存在下、お
よび抗ＨＬ八−ＤＲ抗体〔ベクトン・デイキインソン社
（Ｂｅｃｈｔｏｎ ＤｉｃｋｉｎｓｏｎＣｏ、 ）製〕
の存在下または非存在下で、３７℃、６日間５％Ｃｏ２
．９５％空気の通気下に培養する。
ＳＳＹｉ細胞（１０４個）の存在下または非存在下、お
よび抗ＨＬ八−ＤＲ抗体〔ベクトン・デイキインソン社
（Ｂｅｃｈｔｏｎ ＤｉｃｋｉｎｓｏｎＣｏ、 ）製〕
の存在下または非存在下で、３７℃、６日間５％Ｃｏ２
．９５％空気の通気下に培養する。
培地は、１０％ＦＣ３を含むＲＰＭ１１６４０培地（日
永製薬社製）を用いる。Ｔ細胞の活性化を〔３Ｈ〕−チ
ミジンの取り込みによる方法〔ジャーナル・オブ・イム
ノロジカル・メソブヅ（Ｊ。
永製薬社製）を用いる。Ｔ細胞の活性化を〔３Ｈ〕−チ
ミジンの取り込みによる方法〔ジャーナル・オブ・イム
ノロジカル・メソブヅ（Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ）４ 、１１−
２０ （１９７４））により測定する。結果を第２表に
示す。
２０ （１９７４））により測定する。結果を第２表に
示す。
第 ２ 表
Ｔ細胞 ４．３６９±１，３
５５Ｔ１ｉｌ汀包 Ｓ Ｓ Ｙ−１−６８，
９１８± ７００Ｔ細胞 Ｓ Ｓ Ｙ−１抗ＨＬＡ−
ＯＲ７，５９９±７９６− ＳＳＹ−１−４６７±１９
７ 第２表の結果から明らかなように、ＳＳＹ−１細胞はＴ
細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。
５５Ｔ１ｉｌ汀包 Ｓ Ｓ Ｙ−１−６８，
９１８± ７００Ｔ細胞 Ｓ Ｓ Ｙ−１抗ＨＬＡ−
ＯＲ７，５９９±７９６− ＳＳＹ−１−４６７±１９
７ 第２表の結果から明らかなように、ＳＳＹ−１細胞はＴ
細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。
また、このような活性は、ＨＬＡ−ＤＲに対する抗体で
抑制される。
抑制される。
（５） ＨＳ Ｂ −２細胞のＩＬ−２産生誘導：（
試験方法） Ｈ９Ｂ−２細胞〔カサハラ・ティー（Ｋａｓａｈａｒａ
。
試験方法） Ｈ９Ｂ−２細胞〔カサハラ・ティー（Ｋａｓａｈａｒａ
。
Ｔ、）ｅｔ ａｌ ： ジャーナルφオブ９イム
ノロシイ （Ｊ、 Ｉｎ＋ｍｕｎｏｌ、 ） １
３４．１６８２−１６８９（１９８５））１０６（１５
０■／ｍ１のフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）Ｃイー・
ワイ・ラボラトリーズ社（ε−Ｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ、 Ｉｎｃ、 ）製〕を含有し１％ＦＣ８を含む
ＲＰＭ１１６４０培地中で、３７℃、２４時間、５％Ｃ
Ｏ□、９５％空気の通気下に培養する。培地には、ＳＳ
Ｙ−１細胞（１０Ｓ個）あるいは本発明で得られたＩＬ
−１活性物質の５倍稀釈液を、それぞれ加えて培養する
。
ノロシイ （Ｊ、 Ｉｎ＋ｍｕｎｏｌ、 ） １
３４．１６８２−１６８９（１９８５））１０６（１５
０■／ｍ１のフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）Ｃイー・
ワイ・ラボラトリーズ社（ε−Ｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ、 Ｉｎｃ、 ）製〕を含有し１％ＦＣ８を含む
ＲＰＭ１１６４０培地中で、３７℃、２４時間、５％Ｃ
Ｏ□、９５％空気の通気下に培養する。培地には、ＳＳ
Ｙ−１細胞（１０Ｓ個）あるいは本発明で得られたＩＬ
−１活性物質の５倍稀釈液を、それぞれ加えて培養する
。
培養上清中のＩＬ−２活性をＩＬ−２依存性キラ−Ｔ細
胞株を用いる方法〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、 １３４ 、 １６８２−
１６８９（１９８５） ）で測定する。結果を第３表に
示す。
胞株を用いる方法〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、 １３４ 、 １６８２−
１６８９（１９８５） ）で測定する。結果を第３表に
示す。
第 ３ 表
反応性細胞 刺激物 補助作用物 生産されたＩ
Ｌ−２（ｕ ／ｍｌ ） ＨＳＢ−２ＰＨＡ Ｏ，３ＨＳ
Ｂ−２ＰＨＡ ＳＳＹ−１５０ＨＳＢ−２ＰＩ−Ｉ
Ａ ＩＬ−１２０第３表の結果から、ＳＳＹ−１細
胞は、ＨＳＢ−２細胞のＩＬ−２産生を促進する活性を
有することが明らかである。
Ｌ−２（ｕ ／ｍｌ ） ＨＳＢ−２ＰＨＡ Ｏ，３ＨＳ
Ｂ−２ＰＨＡ ＳＳＹ−１５０ＨＳＢ−２ＰＩ−Ｉ
Ａ ＩＬ−１２０第３表の結果から、ＳＳＹ−１細
胞は、ＨＳＢ−２細胞のＩＬ−２産生を促進する活性を
有することが明らかである。
実施例２
ＳＳＹ−１細胞株によるＩＬ−１活性物質の生産：
ＳＳＹ−１細胞（５Ｘ１０６）をＲＰＭ１１６４０培地
１ｍｌ中、３７℃、４８時間、５％ＣＯ２，９５％空気
の通気下で培養した。培地には、さらにＦＣ３１０％を
添加した。
１ｍｌ中、３７℃、４８時間、５％ＣＯ２，９５％空気
の通気下で培養した。培地には、さらにＦＣ３１０％を
添加した。
ＩＬ−１活性の測定は下記のとおり行った。
Ｃ３Ｈ／Ｈｅマウス（日本タレア社製）の胸腺細胞（１
，５Ｘ１０’／ウエル）を１０％ＦＣ３を含むＥＨΔＡ
培養液〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ、 Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、）、￥１９ 、 １０４８−１０５３（
１９７７））０．２５ｍ１で培養する。培養液に試料、
たとえばＳＳＹ−１細胞の培養上清を５〜１０倍稀釈で
加える。培養はＦａｌ’ｃｏｎ ＃３０７２ マイク
ロタイター培養プレート（Ｆ、ａｌｃｏｎ Ｐｌａｓｔ
ｉｃｓ Ｃｏ、、） を用いて、５％ＣＯ２，９５％空
気を通気して３７℃、２日間行った。２日間培養後０．
５μ Ｃ１の［：３Ｈ：］ −チミジン（第一化学薬品
社製）を添加し、さらに１日培養し、自動細胞採取装置
（アベ科学社製）を用いて細胞を採取し細胞内に取り込
まれた〔３日〕−チミジンを液体シンチレーションカウ
ンターで計測する〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、 １２０．１４９７−１５
０３（１９７８））。
，５Ｘ１０’／ウエル）を１０％ＦＣ３を含むＥＨΔＡ
培養液〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ、 Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、）、￥１９ 、 １０４８−１０５３（
１９７７））０．２５ｍ１で培養する。培養液に試料、
たとえばＳＳＹ−１細胞の培養上清を５〜１０倍稀釈で
加える。培養はＦａｌ’ｃｏｎ ＃３０７２ マイク
ロタイター培養プレート（Ｆ、ａｌｃｏｎ Ｐｌａｓｔ
ｉｃｓ Ｃｏ、、） を用いて、５％ＣＯ２，９５％空
気を通気して３７℃、２日間行った。２日間培養後０．
５μ Ｃ１の［：３Ｈ：］ −チミジン（第一化学薬品
社製）を添加し、さらに１日培養し、自動細胞採取装置
（アベ科学社製）を用いて細胞を採取し細胞内に取り込
まれた〔３日〕−チミジンを液体シンチレーションカウ
ンターで計測する〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、 １２０．１４９７−１５
０３（１９７８））。
ＳＳＹ−１の培養上清は、マウス胸腺細胞のＤＮＡ合成
を２−３倍増強した。
を２−３倍増強した。
培養上清からのＩＬ−１活性物質の精製は次のとおり行
った。
った。
培養液２５ Ｑｍｌを遠心分離（１，５００ｒｐｍ 。
１０分間）にかけ、上清２５ Ｑｍｌを得た。
これをアミコン社の限外濾過器を用いてＹＭ５フィルタ
ー膜を通して濃縮した。濃縮液１０ｍ１をリン酸緩衝化
生理食塩水（ｐＨ７，２）（ＰＢＳ）液で平衡化したセ
ファクリール５−２０’Ｏ（ファルマシア・ファイン・
ケミカルス（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＦｉｎｅＣｈｅｍｉ
ｃａｌｓ）社製）５００ｇのカラムクロマトグラフィー
にかけた。ＰＢＳ液５０ Ｑｍｌを用いて溶出を行い、
５ｍｌずつ分画し、各画分を５倍稀釈してＩＬ−１活性
を測定した。第１図に各両分の〔３Ｈ〕−チミシンノ取
す込ミ値（ｃｐｍｘｌｏ’）を示す。
ー膜を通して濃縮した。濃縮液１０ｍ１をリン酸緩衝化
生理食塩水（ｐＨ７，２）（ＰＢＳ）液で平衡化したセ
ファクリール５−２０’Ｏ（ファルマシア・ファイン・
ケミカルス（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＦｉｎｅＣｈｅｍｉ
ｃａｌｓ）社製）５００ｇのカラムクロマトグラフィー
にかけた。ＰＢＳ液５０ Ｑｍｌを用いて溶出を行い、
５ｍｌずつ分画し、各画分を５倍稀釈してＩＬ−１活性
を測定した。第１図に各両分の〔３Ｈ〕−チミシンノ取
す込ミ値（ｃｐｍｘｌｏ’）を示す。
第１図中、上部の矢印は、分子量マーカーであり、左よ
り、ブルーデキストランくボイド・ボリウム）、ＩｇＣ
，（，１５万ダルトン）、牛血清アルブミンクロ、７万
ダルトン）、卵白アルブミン（４，５万ダルトン）、ト
リプシンインヒビター（２，２万ダルトン）およびチト
クロームＣ（１，３万ダルトン）を示す。
り、ブルーデキストランくボイド・ボリウム）、ＩｇＣ
，（，１５万ダルトン）、牛血清アルブミンクロ、７万
ダルトン）、卵白アルブミン（４，５万ダルトン）、ト
リプシンインヒビター（２，２万ダルトン）およびチト
クロームＣ（１，３万ダルトン）を示す。
ＩＬ−１活性は、分子量約１３．０ＱＱダルトンの付近
（分画番号５８〜６２）に溶出され、その画分は、マウ
ス胸腺細胞のＤＮＡ合成を１０〜２０倍増強する活性を
有していた。分子量約５０、０００ダルトンの両分およ
び小分子量画分にも活性は認められたが弱いものであっ
た。なお、いずれの両分にもＩＬ−２活性は認められな
かった。分子量約１３．０００ダルトンの両分（分画番
号５８〜６２）をクロマトフオーカシング〔ジャーナル
−オブ・クロマトグラフィー （Ｊ、 Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒ、 ）１５０ 、１７−３０（１９７８））
で分画し、そのＩＬ−１活性を上記と同様に測定した
。結果を第２図に示す。
（分画番号５８〜６２）に溶出され、その画分は、マウ
ス胸腺細胞のＤＮＡ合成を１０〜２０倍増強する活性を
有していた。分子量約５０、０００ダルトンの両分およ
び小分子量画分にも活性は認められたが弱いものであっ
た。なお、いずれの両分にもＩＬ−２活性は認められな
かった。分子量約１３．０００ダルトンの両分（分画番
号５８〜６２）をクロマトフオーカシング〔ジャーナル
−オブ・クロマトグラフィー （Ｊ、 Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒ、 ）１５０ 、１７−３０（１９７８））
で分画し、そのＩＬ−１活性を上記と同様に測定した
。結果を第２図に示す。
活性は、ｐＩ値６．９±０．１．６．６±０．１．５．
２±０．１および４．７±０．１の両分（分画番号は、
それぞれ７．９．１７および２１）に認められた。
２±０．１および４．７±０．１の両分（分画番号は、
それぞれ７．９．１７および２１）に認められた。
ｐ Ｘ ５．２の両分が最も強い活性を示した。
実施例３
ＩＬ−１活性物質産生に対するＦＣ３添加および細胞数
の影響： ＦＣ３添加および細胞数の影響を調べるために、ＦＣ３
無添加、２％添加、細胞数４Ｘ１０’個／ｍｌ。
の影響： ＦＣ３添加および細胞数の影響を調べるために、ＦＣ３
無添加、２％添加、細胞数４Ｘ１０’個／ｍｌ。
６Ｘ１０’個／ｍｌの組合せで、実施例１と同様に培養
し、セファクリールＳ−２００によるカラムクマドグラ
フィーを行い、ＴＬ−１活性を測定した。その結果を第
３図に示す。図中Ａ−Ｄは下記の組合せを示す。
し、セファクリールＳ−２００によるカラムクマドグラ
フィーを行い、ＴＬ−１活性を測定した。その結果を第
３図に示す。図中Ａ−Ｄは下記の組合せを示す。
ＦＣ３％ 細胞数（個／ｍｌ ）
Ａ： ２ ６Ｘ１０”Ｂ： ０
６Ｘ１０６Ｃ： ２ ４
Ｘ１０’Ｄ： ０ ４ｘ１０６実施例
４ ＩＬ−１活性物質産生に対するシリカ、添加の影響； ５ｓｙ−ｉ細胞４ Ｘ １０６／ｍｌ、ＦＣ３５％を用
い、シリカ〔シグマ・ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｃｏ、）製〕１００Ａｇ／ｍｌを添加する以
外は実施例１と同様に培養し、セファクリールＳ−２０
０によるカラムクロマトグラフィーを行い、ＩＬ−１活
性を測定した。
６Ｘ１０６Ｃ： ２ ４
Ｘ１０’Ｄ： ０ ４ｘ１０６実施例
４ ＩＬ−１活性物質産生に対するシリカ、添加の影響； ５ｓｙ−ｉ細胞４ Ｘ １０６／ｍｌ、ＦＣ３５％を用
い、シリカ〔シグマ・ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｃｏ、）製〕１００Ａｇ／ｍｌを添加する以
外は実施例１と同様に培養し、セファクリールＳ−２０
０によるカラムクロマトグラフィーを行い、ＩＬ−１活
性を測定した。
その結果を第４図に示す。図中Ｅはシリカ添加、Ｆは同
無添加を示す。
無添加を示す。
実施例５
ＩＬ−１活性物質のキラーＴ細胞誘導能：ナイロンカラ
ムで精製したＣ３Ｈ／ＨｅマウスＴ細胞（日本タレア社
製＞５Ｘ１０’個を、刺激細胞としてＴＮＰ−Ｘ５５６
３骨髄腫細胞〔プロシーディング・オブ・ザ・ソサイエ
ティ・フォー・イクスベリメンタル・バイオロジカル・
アンド・メディｘ ン（１’ｒｏｃ、 Ｓｏｃ、［Ｅｘ
ｐ、Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ、 ９４ 。
ムで精製したＣ３Ｈ／ＨｅマウスＴ細胞（日本タレア社
製＞５Ｘ１０’個を、刺激細胞としてＴＮＰ−Ｘ５５６
３骨髄腫細胞〔プロシーディング・オブ・ザ・ソサイエ
ティ・フォー・イクスベリメンタル・バイオロジカル・
アンド・メディｘ ン（１’ｒｏｃ、 Ｓｏｃ、［Ｅｘ
ｐ、Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ、 ９４ 。
３２２−３３０．１９５７）） ２ ｘ １０’個およ
びＩＬ−１性物質として本発明ＩＬ−１活性画分または
活性物質およびマウスマクロファージを用いて３７℃、
５日間培養した。培地は１０％ＦＣ３含有ＥＨＡＡ培地
を用いた。
びＩＬ−１性物質として本発明ＩＬ−１活性画分または
活性物質およびマウスマクロファージを用いて３７℃、
５日間培養した。培地は１０％ＦＣ３含有ＥＨＡＡ培地
を用いた。
誘導されたキラーＴ細胞活性（％傷害率）を山王の方法
〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ。
〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、 １２３ 、２６３７−２６
４３（１９７９））に従って測定した。結果を第４表に
示す。
４３（１９７９））に従って測定した。結果を第４表に
示す。
第 ４ 表
ＶウスＴ細胞 ＴＮＰ−Ｘ５５６３ −
−４．Ｑ ±２．８骨髄腫細胞 ／／ 、／ ｐｒ６．９の両分 １６
．８±０．４／／ ／７ １１１５．２の
画分 ２０．０ ±２．０／／ ／／
ｐＪ４，７の両分 １２．０±４．０／／
／／ マクロファージ ４３．６±５．２実施
例６ Ｔ細胞のＩＬ−２リセブタ一発現に及ぼすＳＳＹ−１細
胞およびＩＬ−１活性物質の影響：正常人末梢血より採
取したヒ）Ｔ細胞１０８個を、刺激物としてコンカナバ
リンＡ （Ｃｏｎ Ａ）〔イー・シイ・ラボラトリーズ
社（Ｅ−Ｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。
−４．Ｑ ±２．８骨髄腫細胞 ／／ 、／ ｐｒ６．９の両分 １６
．８±０．４／／ ／７ １１１５．２の
画分 ２０．０ ±２．０／／ ／／
ｐＪ４，７の両分 １２．０±４．０／／
／／ マクロファージ ４３．６±５．２実施
例６ Ｔ細胞のＩＬ−２リセブタ一発現に及ぼすＳＳＹ−１細
胞およびＩＬ−１活性物質の影響：正常人末梢血より採
取したヒ）Ｔ細胞１０８個を、刺激物としてコンカナバ
リンＡ （Ｃｏｎ Ａ）〔イー・シイ・ラボラトリーズ
社（Ｅ−Ｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。
Ｉｎｃ、 ）製〕 １０■／ｍｌを用い、補助物質とし
てＳＳＹ−１細胞１０５個またはＩＬ−１活性物質（分
子量約１３．０００ ）の５倍稀釈液を用い、３７℃で
１日間培養した。培地は１０％ＦＣ３含有ＲＰＭ Ｉ
１６４０培地を用いた。さらにＩＬ−２（３０ＬＪ／ウ
エル）を加え２日間培養し、Ｔ細胞の〔″Ｈ〕−チミジ
ンの取り組み能を測定し、ＩＬ−２に対する反応性（Ｉ
Ｌ−２！］セブターの出現）を材用（Ｍｕｒａｋａｗａ
）らの方法〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、 ） １３４ ．１８７−１９５（１
９８５））に従って測定した。結果を第５表に示す。
てＳＳＹ−１細胞１０５個またはＩＬ−１活性物質（分
子量約１３．０００ ）の５倍稀釈液を用い、３７℃で
１日間培養した。培地は１０％ＦＣ３含有ＲＰＭ Ｉ
１６４０培地を用いた。さらにＩＬ−２（３０ＬＪ／ウ
エル）を加え２日間培養し、Ｔ細胞の〔″Ｈ〕−チミジ
ンの取り組み能を測定し、ＩＬ−２に対する反応性（Ｉ
Ｌ−２！］セブターの出現）を材用（Ｍｕｒａｋａｗａ
）らの方法〔ジャーナル・オブ・イムノロシイ（Ｊ、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、 ） １３４ ．１８７−１９５（１
９８５））に従って測定した。結果を第５表に示す。
第 ５ 表
ヒトＴ細胞 Ｃｏｎ Ａ ４，０５３
±１５３〃〃ＳＳＹ−１４５，３３４±１，６３９本発
明によれば、ヒト白血病細胞株を用いＩＬ−１活性物質
を大量に製造することができる。
±１５３〃〃ＳＳＹ−１４５，３３４±１，６３９本発
明によれば、ヒト白血病細胞株を用いＩＬ−１活性物質
を大量に製造することができる。
本発明のヒト白血病細胞株は、従来知られている細胞株
が刺激剤の添加を必要とするのに比べ、刺激剤の添加な
しでもＩＬ−１活性物質を生成できる点で優れているが
、刺激剤の添加がさらにその生成を向上させることは言
うまでもない。
が刺激剤の添加を必要とするのに比べ、刺激剤の添加な
しでもＩＬ−１活性物質を生成できる点で優れているが
、刺激剤の添加がさらにその生成を向上させることは言
うまでもない。
本発明のＩＬ−１活性物質は、種々の生物学的性質によ
り抗腫瘍剤としての用途が期待される。
り抗腫瘍剤としての用途が期待される。
第１図は、ＩＬ−１活性物質精製工程におけるセファク
リールＳ−２００カラムクロマトグラフイーを示す。 第２図は、ＩＬ−１活性物質Ｍ製工程におけるクロマト
フオーカシングを示す。 第３図は、ＩＬ−１活性物質産土に対するＦＣ８添加お
よび細胞数の影響（実施例３）を示す。 第４図は、ＩＬ−１活性物質産生に対するシリカの影響
（実施例４）を示す。 分画め＠号 第３図 第４図 ｐｍ ×１０３ ４ｒ画Ｉ７）＠号
リールＳ−２００カラムクロマトグラフイーを示す。 第２図は、ＩＬ−１活性物質Ｍ製工程におけるクロマト
フオーカシングを示す。 第３図は、ＩＬ−１活性物質産土に対するＦＣ８添加お
よび細胞数の影響（実施例３）を示す。 第４図は、ＩＬ−１活性物質産生に対するシリカの影響
（実施例４）を示す。 分画め＠号 第３図 第４図 ｐｍ ×１０３ ４ｒ画Ｉ７）＠号
Claims (12)
- （１）下記理化学的性質を有するインターロイキン１活
性物質 ｉ）分子量：約１３．０００ダルトン ｉｉ）ｐＩ値：６．９±０．１、６．６±０．１、５．
２±０．１または４．７±０．１ ｉｉｉ）ｐＨ安定性：ｐＨ２．３および９．０で安定ｉ
ｖ）温度安定性：６０℃、１５分間の処理で安定凍結・
融解３回の繰返し処理 に安定 ｖ）トリプシン処理：安定 - （２）ｐＩ値６．９である特許請求の範囲第１項記載の
インターロイキン１活性物質。 - （３）ｐＩ値６．６である特許請求の範囲第１項記載の
インターロイキン１活性物質。 - （４）ｐＩ値５．２である特許請求の範囲第１項記載の
インターロイキン１活性物質。 - （５）ｐＩ値４．７である特許請求の範囲第１項記載の
インターロイキン１活性物質。 - （６）下記理化学的性質のインターロイキン１活性物質
生産性を有し、かつ下記生物学的性質を有するヒト白血
病細胞株。 理化学的性質 ｉ）分子量：約１３．０００ダルトン ｉｉ）ｐＩ値：６．９±０．１．６．６±０．１、５．
２±０．１または４．７±０．１ ｉｉｉ）ｐＨ安定性：ｐＨ２．３および９．０で安定ｉ
ｖ）温度安定性：６０℃、１５分間の処理で安定凍結・
融解３回の繰返し処理 に安定 ｖ）トリプシン処理：安定 生物学的性質 １）染色体数：４６本 ２）細胞分裂時間：約２４時間 ３）細胞表面マーカー： Ｅロゼット陰性 Ｆｃリセプター陰性 コールターのＢ１抗原陽性 ＨＬＡ−ＤＲ抗原陽性 表面免疫グロブリン（Ｉｇ）陽性 ４）Ｔ細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。 ５）ＨＳＢ−２細胞のインターロイキン２生産を誘導す
る。 - （７）ＳＳＹ−１（ＮＣＡＣＣ Ｎｏ．８５０６１９０
１）である特許請求の範囲第６項記載のヒト白血病細胞
株。 - （８）下記理化学的性質を有するインターロイキン１活
性物質生産性を有し、かつ下記生物学的性質を有するヒ
ト白血病細胞株を培地に培養し、培養物中に該インター
ロイキン１活性物質を蓄積させ、該培養物から該インタ
ーロイキン１活性物質を採取することを特徴とするイン
ターロイキン１活性物質の製造法。 理化学的性質 ｉ）分子量：約１３．０００ダルトン ｉｉ）ｐＩ値：６．９±０．１、６．６±０．１０５．
２±０．１または４．７±０．１ ｉｉｉ）ｐＨ安定性：ｐＨ２．３および９．０で安定ｉ
ｖ）温度安定性：６０℃、１５分間の処理で安定凍結・
融解３回の繰返し処理 に安定 ｖ）トリプシン処理：安定 生物学的性質 １）染色体数：４６本 ２）細胞分裂時間：約２４時間 ３）細胞表面マーカー： Ｅロゼット陰性 Ｆｃリセプター陰性 コールターのＢ１抗原陽性 ＨＬＡ−ＤＲ抗原陽性 表面免疫グロブリン（Ｉｇ）陽性 ４）Ｔ細胞を活性化し、ＤＮＡ合成を誘導する。 ５）ＨＳＢ−２細胞のインターロイキン２生産を誘導す
る。 - （９）細胞株がＳＳＹ−１（ＮＣＡＣＣ Ｎｏ．８５０
６１９０１）である特許請求の範囲第８項記載の製造法
。 - （１０）培地が、１０％未満の牛胎児血清を含むことを
特徴とする特許請求の範囲第８項記載の製造法。 - （１１）インターロイキン１産生刺激物質として、リポ
ポリサッカライド（ＬＰＳ）、ポックウィードマイトー
ゲン（ＰＷＭ）、シリカ、スタフィロコッカス・アウレ
ウス菌体成分またはフォルボールミリステート・アセテ
ート（ＰＭＡ）を培地に存在させることを特徴とする特
許請求の範囲第８項記載の製造法。 - （１２）ヒト白血病細胞株ＳＳＹ−１の細胞培養物、そ
の処理物またはそれらから採取したＩＬ−１活性物質を
用いて、ＨＳＢ−２細胞によるＩＬ−２の生産を増強さ
せる方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60136247A JPS61293917A (ja) | 1985-06-21 | 1985-06-21 | 新規インタ−ロイキン１活性物質、その製造法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60136247A JPS61293917A (ja) | 1985-06-21 | 1985-06-21 | 新規インタ−ロイキン１活性物質、その製造法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61293917A true JPS61293917A (ja) | 1986-12-24 |
Family
ID=15170726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60136247A Pending JPS61293917A (ja) | 1985-06-21 | 1985-06-21 | 新規インタ−ロイキン１活性物質、その製造法および該活性物質生産性ヒト白血病細胞 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61293917A (ja) |
-
1985
- 1985-06-21 JP JP60136247A patent/JPS61293917A/ja active Pending
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