JPS61277057A - Analysis of tetracyclines - Google Patents
Analysis of tetracyclinesInfo
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- JPS61277057A JPS61277057A JP11961985A JP11961985A JPS61277057A JP S61277057 A JPS61277057 A JP S61277057A JP 11961985 A JP11961985 A JP 11961985A JP 11961985 A JP11961985 A JP 11961985A JP S61277057 A JPS61277057 A JP S61277057A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
（イ）産業上の利用分野
この発明は、高速液体クロマトグラフィーによる分離分
析技術に関する。さらに詳しくは、逆相液体りＯマドグ
ラフィーによるテトラサイクリン類の分析法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (a) Field of Industrial Application This invention relates to separation and analysis technology using high performance liquid chromatography. More specifically, the present invention relates to a method for analyzing tetracyclines by reversed-phase liquid O mudography.
（ロ）従来の技術
高速液体クロマトグラフィーは近年著しい発展を示し、
高分子化学、有機化学をはじめ薬学、生化学、臨床化学
に到る黍であらゆる分野において分離分析技術の柱とな
っている。(b) Conventional technology High performance liquid chromatography has shown remarkable development in recent years.
Millet has become a pillar of separation and analysis technology in all fields, including polymer chemistry, organic chemistry, pharmaceutical science, biochemistry, and clinical chemistry.
薬学の分野において、抗菌力を有するテトラサイクリン
類の分離分析の必要があり、これは通常、高速液体クロ
マトグラフィーを用いて行なわれる。In the pharmaceutical field, there is a need to separate and analyze tetracyclines with antibacterial activity, and this is usually carried out using high performance liquid chromatography.
しかしながら、テトラサイクリン類は周知のように錯体
を形成しやすく、そのため固定相であるカラムの充填剤
に含まれる金属または流路壁の金属とキレートを形成し
て吸着され易いものである。However, as is well known, tetracyclines tend to form complexes, and therefore tend to be adsorbed by forming chelates with metals contained in the column packing material serving as the stationary phase or metals on the channel walls.
従って、通常の逆相クロマトグラフィー用の移動相を用
いてクロマト分離を行なツた場合には、カラムからの溶
出が困難になったり、ピークにテーリング現象が現われ
たりして実用上の分離分析を行なうことは困難である。Therefore, when chromatographic separation is performed using a mobile phase for ordinary reversed-phase chromatography, elution from the column becomes difficult and a tailing phenomenon appears in the peaks, making it difficult to perform practical separation analysis. It is difficult to do so.
これらの問題点を解決するための対策として従来技術で
は、強酸性の移動相を用いてキレート形成を抑制したり
、またはテトラサイクリン類と同様に金属とキレ・−ト
を形成しやすい化合物、、例えば、エチレンジアミン四
酢酸などを移動相に添加して、キレート形成においてエ
チレンジアミン四酢酸とテトラサイクリン類とを競合さ
せて後者のキレート形成を抑制することが行なわれてい
る。As a countermeasure to solve these problems, conventional techniques include suppressing chelate formation by using a strongly acidic mobile phase, or using compounds that easily form chelates with metals, such as tetracyclines. , ethylenediaminetetraacetic acid, etc. are added to the mobile phase to cause ethylenediaminetetraacetic acid and tetracyclines to compete with each other in chelate formation, thereby suppressing the latter's chelate formation.
（ハ）発明が解決しようとする問題点
しかしながら、テトラサイクリン類のキレート形成を抑
制して問題点を解決しようとするかかる従来技術の方法
は、テトラサイクリン類のキレート形成自体を積極的に
防止しようとする方法ではなくて、抑制しようとする方
法であるから十分な効果は得られていない。すなわちピ
ークのテーリング現象を解消するという問題点が十分に
は解消されていない。(c) Problems to be Solved by the Invention However, such prior art methods that attempt to solve the problems by suppressing the chelate formation of tetracyclines actively try to prevent the chelate formation itself of the tetracyclines. It is not a method but a method of suppression, so it has not been sufficiently effective. That is, the problem of eliminating the peak tailing phenomenon has not been sufficiently resolved.
この発明はかかる問題点を解決すべくなされたものであ
り、テトラサイクリン類のテーリングのないピークを得
る分析法を提供しようとするものである。The present invention was made to solve these problems, and aims to provide an analytical method for obtaining tailing-free peaks of tetracyclines.
（ニ）問題点を解決するための手段及び作用かくしてこ
の発明によれば、テトラサイクリン類を含み１ｑる試料
を高速液体クロントゲラフイーに付すことからなり、該
クロマトグラフィーにおける移動相として、アルカリ土
類金属イオンを含みかつ水と混合しうる有機溶媒を任意
に含むｐＨ４以上の緩衝液を用いることを特徴とするテ
トラサイクリン類の分析法が提供される。(d) Means and action for solving the problems Thus, according to the present invention, a sample containing 1 q of tetracyclines is subjected to high-performance liquid chromatography, and alkaline earth is used as the mobile phase in the chromatography. A method for analyzing tetracyclines is provided, which is characterized by using a buffer solution having a pH of 4 or higher, which contains similar metal ions and optionally contains an organic solvent that is miscible with water.
この発明の方法を用いて分析されるテトラサイクリン類
とは、例えばテトラサイクリン、クロルテトラサイクリ
ン、オキシテトラサイクリン、ジメチルクロルテトラサ
イクリン、メタサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサ
イクリンまたはロリテトラサイクリンなどである。Tetracyclines analyzed using the method of the present invention include, for example, tetracycline, chlortetracycline, oxytetracycline, dimethylchlortetracycline, methacycline, doxycycline, minocycline, or loritetracycline.
この発明に使用するカラムとしては、通常の逆相液体ク
ロマトグラフィー用のカラムが使用でき、例えばいわゆ
るＯＤＳカラム、０８カラムまたはＴＭＳカラムなどが
使用可能である。As the column used in this invention, a normal column for reversed phase liquid chromatography can be used, such as a so-called ODS column, 08 column, or TMS column.
この発明に用いる移動相のベースとしては、−４以上の
緩衝液が使用できる。移動相がｐＨ４以下であれば移動
相に添加したアルカリ土類金属とのキレート形成が起り
にくい点で不適切である。特にＰＨ５〜８が好ましい。As the base of the mobile phase used in this invention, a buffer solution of −4 or higher can be used. If the mobile phase has a pH of 4 or less, it is unsuitable because chelate formation with the alkaline earth metal added to the mobile phase is unlikely to occur. Particularly preferred is pH 5-8.
ＩＩ衝液としては、例えば酢酸緩衝液またはイミダゾー
ル緩衝液が使用可能である。As the II buffer, for example, an acetate buffer or an imidazole buffer can be used.
この発明で移動相ベースに含ませるアルカリ土類金属イ
オンは、ベリリウムイオン、マグネシウムイオン、カル
シウムイオン、ストロンチウムイオンまたはバリウムイ
オンであり、マグネシウムイオンが好ましい。これらの
アルカリ土類金属イオンは、可溶性塩や水酸化物の形態
で上記移動相に添加される。通常は、酢酸塩や硫酸塩の
形態で添加するのが適している。In the present invention, the alkaline earth metal ion contained in the mobile phase base is beryllium ion, magnesium ion, calcium ion, strontium ion or barium ion, and magnesium ion is preferable. These alkaline earth metal ions are added to the mobile phase in the form of soluble salts or hydroxides. Usually, it is suitable to add it in the form of acetate or sulfate.
これらの移動相ベースへの添加量は意図する分析濃度範
囲に応じて設定してよいが、一般に１０１Ｍ〜５００ｍ
Ｍである。この添加量が少なすぎると効果が不充分で不
都合であるし、多すぎると塩の析出やカラムの劣化の点
で不都合である。The amount added to the mobile phase base may be set depending on the intended analysis concentration range, but generally 101M to 500M
It is M. If the amount added is too small, the effect will be insufficient, which is disadvantageous, and if it is too large, it will be disadvantageous in terms of salt precipitation and column deterioration.
一方、上記移動相にはさらに水と混合しろる有機溶媒を
添加するのが好ましい。すなわち水と混合しろる有機溶
媒を添加しなくてもテーリングの防止は可能であるが、
しかしなが１らこの有機溶媒の添加は各種分離成分の保
持時間の短縮化に役立つものであるから、実用分析の点
で不可欠なものである。なお、この添加量は移動相に対
して０〜５０％が適切である。 −
移動相の流量は０．５〜１．５ν！／分が適当であり、
カラム温度は２０〜５０℃が適当である。On the other hand, it is preferable to further add an organic solvent that is miscible with water to the mobile phase. In other words, it is possible to prevent tailing without adding an organic solvent that is miscible with water.
However, since the addition of this organic solvent is useful for shortening the retention time of various separated components, it is indispensable from the point of view of practical analysis. Note that the appropriate amount of addition is 0 to 50% with respect to the mobile phase. - Mobile phase flow rate is 0.5~1.5ν! / minute is appropriate;
A suitable column temperature is 20 to 50°C.
検出は吸光度検出器を用いて通常２６８０１１１で行な
われる。Detection is typically performed at 2680111 using an absorbance detector.
この発明は、要するに従来行なわれていたようにキレー
ト形成の抑制や防止を意図するものではなくて、逆にア
ルカリ土類金属イオンを加えて、このイオンとテトラサ
イクリン類との間に積極的にキレートを生成させ、これ
によりテトラサイクリン類をキレートの形態で分離分析
するものである。すなわち分析対象成分はすでにキレー
トとな、っているので、流出壁やカラムの充填剤に含ま
れる金属とキレートを形成して吸着されるということは
なく溶出し、シャープなテーリングのないピークを与え
るのである。In short, this invention does not intend to suppress or prevent chelate formation as was conventionally done, but on the contrary, it adds alkaline earth metal ions and actively chelates between these ions and tetracyclines. This method allows the separation and analysis of tetracyclines in the form of chelates. In other words, the target component is already chelated, so it elutes without forming a chelate with metals contained in the outflow wall or column packing material and is adsorbed, giving a sharp peak without tailing. It is.
（ホ）実施例 この発明を実施例を用いて説明する。(e) Examples This invention will be explained using examples.
実施条件を以下に示す。The implementation conditions are shown below.
カラム： Ｓｈｉｍ −ｐａｃｋ ＣＬＣ−００８
（６，ＯｍｍＩ 、Ｄｘ１５０ｖｌ Ｌ 、 、島津製
作所製）、カラム温度；４０℃、
流量： １ｘＩ／分、
検出器； 紫外吸光光度計、
検出波長； ２６８ｎｍ。Column: Shim-pack CLC-008
(6, OmmI, Dx150vl L, manufactured by Shimadzu Corporation), Column temperature: 40°C, Flow rate: 1xI/min, Detector: Ultraviolet absorption photometer, Detection wavelength: 268 nm.
移動相； ５０ｎ＋Ｍ Ｍ（１（ＣＨ３Ｃｏｏ）２
（７０容最％）とメタノール（３０容看％）との混合溶
媒（ｐＨ６，，２）。Mobile phase; 50n+M M(1(CH3Coo)2
(70% by volume) and methanol (30% by volume) mixed solvent (pH 6.2).
上記この発明の方法において得られたクロマトグラムを
第１図に示した。図中（１）はオキシテトラサイクリン
、（２）はテトラサイクリン、（３）はクロルテトラサ
イクリンのピークを表わす。このようにこの発明の方法
によれば、ピークのテーリング現象なくテトラサイクリ
ン類の適正なピークが得られることがわかる。A chromatogram obtained in the above method of the present invention is shown in FIG. In the figure, (1) represents the peak of oxytetracycline, (2) represents the peak of tetracycline, and (3) represents the peak of chlortetracycline. As described above, it can be seen that according to the method of the present invention, appropriate peaks of tetracyclines can be obtained without the peak tailing phenomenon.
第２図はマグネシウムイオンを加えなかった場合の参考
例であり、この時移動相は１０１ｍＭＫＨ２ＰＯ４（７
０容ｆｆｉ％ ） トメ”！２ ／−ル（３０容Ｉｔ％
）の混合溶媒であり他は前記条件と同一である。Figure 2 is a reference example in which no magnesium ions were added, and the mobile phase was 101mM KH2PO4 (7
0 volumeffi%) Tome"!2/-ru (30 volumeIt%)
) and the other conditions were the same as above.
図中１１）はオキシテトラサイクリン、（ａはテトラサ
イクリンのピークと思われるが確かではなく、またクロ
ルテトラサイクリンは溶出しなかった。このようにまっ
たく実用性のないものである。11) in the figure is oxytetracycline, (a seems to be the peak of tetracycline, but it is not certain, and chlortetracycline did not elute. As such, it is completely impractical.
（へ）発明の効果
この発明の方法によれば、テトラサイクリン類の分析に
おいてテーリングのないシャープなピークを得ることが
できて、従来にはない定量性の高い分析を行なうことが
できる。またこれにあわせて保持時間の短縮化の効果も
得られる。さらにこの発明の特徴となるアルカリ土類金
属イオンの添加もアルカリ土類金属イオンは紫外部の光
を吸収しないのでノイズレベルの低い検出を可能にする
。(F) Effects of the Invention According to the method of the present invention, sharp peaks without tailing can be obtained in the analysis of tetracyclines, and analysis can be performed with a high degree of quantitativeness that has not been possible before. In addition, the effect of shortening the holding time can also be obtained. Furthermore, the addition of alkaline earth metal ions, which is a feature of the present invention, also enables detection with a low noise level, since alkaline earth metal ions do not absorb ultraviolet light.
Claims (1)
マトグラフィーに付すことからなり、該クロマトグラフ
ィーにおける移動相として、アルカリ土類金属イオンを
含みかつ水と混合しうる有機溶媒を任意に含むｐＨ４以
上の緩衝液を用いることを特徴とするテトラサイクリン
類の分析法。 ２、アルカリ土類金属イオンの量が１０〜５００ｍＭで
ある特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、アルカリ土類金属イオンがマグネシウムイオンであ
る特許請求の範囲第１項記載の方法。[Claims] 1. A sample that may contain tetracyclines is subjected to high performance liquid chromatography, and as a mobile phase in the chromatography, any organic solvent containing alkaline earth metal ions and miscible with water may be used. A method for analyzing tetracyclines, characterized by using a buffer solution containing pH 4 or higher. 2. The method according to claim 1, wherein the amount of alkaline earth metal ion is 10 to 500 mM. 3. The method according to claim 1, wherein the alkaline earth metal ion is a magnesium ion.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961985A JPH0664038B2 (en) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | Analytical method for tetracyclines |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961985A JPH0664038B2 (en) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | Analytical method for tetracyclines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61277057A true JPS61277057A (en) | 1986-12-08 |
| JPH0664038B2 JPH0664038B2 (en) | 1994-08-22 |
Family
ID=14765912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11961985A Expired - Lifetime JPH0664038B2 (en) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | Analytical method for tetracyclines |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0664038B2 (en) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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-
1985
- 1985-05-31 JP JP11961985A patent/JPH0664038B2/en not_active Expired - Lifetime
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0664038B2 (en) | 1994-08-22 |
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