JPH0664038B2 - Analytical method for tetracyclines - Google Patents
Analytical method for tetracyclinesInfo
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- JPH0664038B2 JPH0664038B2 JP11961985A JP11961985A JPH0664038B2 JP H0664038 B2 JPH0664038 B2 JP H0664038B2 JP 11961985 A JP11961985 A JP 11961985A JP 11961985 A JP11961985 A JP 11961985A JP H0664038 B2 JPH0664038 B2 JP H0664038B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は、高速液体クロマトグラフイーによる分離分
析技術に関する。さらに詳しくは、逆相液体クロマトグ
ラフイーによるテトラサイクリン類の分析法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a separation analysis technique by high performance liquid chromatography. More specifically, it relates to a method for analyzing tetracyclines by reverse phase liquid chromatography.
（ロ）従来の技術 高速液体クロマトグラフイーは近年著しい発展を示し、
高分子化学、有機化学をはじめ薬学、生化学、臨床化学
に到るまであらゆる分野において分離分析技術の柱とな
つている。(B) Conventional technology High-performance liquid chromatography has shown remarkable development in recent years.
It is a pillar of separation and analysis technology in all fields including polymer chemistry, organic chemistry, pharmacy, biochemistry, and clinical chemistry.
薬学の分野において、抗菌力を有するテトラサイクリン
類の分離分析の必要があり、これは通常、高速液体クロ
マトグラフイーを用いて行なわれる。In the field of pharmacy, there is a need for separation analysis of tetracyclines having antibacterial activity, which is usually performed using high performance liquid chromatography.
しかしながら、テトラサイクリン類は周知のように錯体
を形成しやすく、そのため固定相であるカラムの充填剤
に含まれる金属または流路壁の金属とキレートを形成し
て吸着され易いものである。従つて、通常の逆相クロマ
トグラフイー用の移動相を用いてクロマト分離を行なツ
た場合には、カラムからの溶出が困難になつたり、ピー
クにテーリング現象が現われたりして実用上の分離分析
を行なうことは困難である。However, as is well known, tetracyclines are likely to form a complex and, therefore, form a chelate with the metal contained in the packing material of the column, which is the stationary phase, or the metal of the channel wall, and thus are easily adsorbed. Therefore, when chromatographic separation is carried out using a normal mobile phase for reverse phase chromatography, elution from the column becomes difficult and tailing phenomenon appears at the peak, which is not practical. It is difficult to perform separation analysis.
これらの問題点を解決するための対策として従来技術で
は、強酸性の移動相を用いてキレート形成を抑制した
り、またはテトラサイクリン類と同様に金属とキレート
を形成しやすい化合物、例えば、エチレンジアミン四酢
酸などを移動相に添加して、キレート形成においてエチ
レンジアミン四酢酸とテトラサイクリン類とを競合させ
て後者のキレート形成を抑制することが行なわれてい
る。As a measure for solving these problems, in the conventional technique, a chelate formation is suppressed by using a strongly acidic mobile phase, or a compound which easily forms a chelate with a metal like tetracyclines, for example, ethylenediaminetetraacetic acid. And the like are added to the mobile phase to cause ethylenediaminetetraacetic acid and tetracyclines to compete with each other in chelate formation to suppress the latter chelate formation.
（ハ）発明が解決しようとする問題点 しかしながら、テトラサイクリン類のキレート形成を抑
制して問題点を解決しようとするかかる従来技術の方法
は、テトラサイクリン類のキレート形成自体を積極的に
防止しようとする方法ではなくて、抑制しようとする方
法であるから十分な効果は得られていない。すなわちピ
ークのテーリング現象を解消するという問題点が十分に
は解消されていない。(C) Problems to be Solved by the Invention However, such a conventional method for suppressing the chelate formation of tetracyclines to solve the problems positively prevents the chelate formation of tetracyclines. Since it is not a method but a method of suppressing it, a sufficient effect has not been obtained. That is, the problem of eliminating the peak tailing phenomenon has not been fully resolved.
この発明はかかる問題点を解決すべくなされたものであ
り、テトラサイクリン類のテーリングのないピークを得
る分析法を提供しようとするものである。The present invention has been made to solve such problems, and it is an object of the present invention to provide an analytical method for obtaining a tailing-free peak of tetracyclines.
（ニ）問題点を解決するための手段及び作用 かくしてこの発明によれば、テトラサイクリン類を含み
得る試料を高速液体クロマトグラフイーに付すことから
なり、該クロマトグラフイーにおける移動相として、ア
ルカリ土類金属イオンを含みかつ水と混合しうる有機溶
媒を任意に含むpH4以上の緩衝液を用いることを特徴と
するテトラサイクリン類の分析法が提供される。(D) Means and Actions for Solving the Problems Thus, according to the present invention, a sample that may contain tetracyclines is subjected to high performance liquid chromatography, and the alkaline earth is used as the mobile phase in the chromatography. There is provided a method for analyzing tetracyclines, which comprises using a buffer solution having a pH of 4 or more and optionally containing an organic solvent containing metal ions and miscible with water.
この発明の方法を用いて分析されるテトラサイクリン類
とは、例えばテトラサイクリン、クロルテトラサイクリ
ン、オキシテトラサイクリン、ジメチルクロルテトラサ
イクリン、メタサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサ
イクリンまたはロリテトラサイクリンなどである。The tetracyclines analyzed using the method of the present invention are, for example, tetracycline, chlortetracycline, oxytetracycline, dimethylchlortetracycline, metacycline, doxycycline, minocycline or lolitetracycline.
この発明に使用するカラムとしては、通常の逆相液体ク
ロマトグラフイー用のカラムが使用でき、例えばいわゆ
るODSカラム、Ｃ８カラムまたはTMSカラムなどが使用可
能である。As the column used in the present invention, an ordinary column for reversed phase liquid chromatography can be used, and for example, a so-called ODS column, C 8 column or TMS column can be used.
この発明に用いる移動相のベースとしては、pH4以上の
緩衝液が使用できる。移動相がpH4以下であれば移動相
に添加したアルカリ土類金属とのキレート形成が起りに
くい点で不適切である。特にpH5〜８が好ましい。緩衝
液としては、例えば酢酸緩衝液またはイミダゾール緩衝
液が使用可能である。As the base of the mobile phase used in the present invention, a buffer solution having a pH of 4 or more can be used. If the pH of the mobile phase is 4 or less, chelate formation with the alkaline earth metal added to the mobile phase hardly occurs, which is inappropriate. Particularly, pH 5 to 8 is preferable. As the buffer solution, for example, an acetate buffer solution or an imidazole buffer solution can be used.
この発明で移動相ベースに含ませるアルカリ土類金属イ
オンは、ベリリウムイオン、マグネシウムイオン、カル
シウムイオン、ストロンチウムイオンまたはバリウムイ
オンであり、マグネシウムイオンが好ましい。これらの
アルカリ土類金属イオンは、可溶性塩や水酸化物の形態
で上記移動相に添加される。通常は、酢酸塩や硫酸塩の
形態で添加するのが適している。The alkaline earth metal ions included in the mobile phase base in the present invention are beryllium ions, magnesium ions, calcium ions, strontium ions or barium ions, with magnesium ions being preferred. These alkaline earth metal ions are added to the mobile phase in the form of soluble salts or hydroxides. Usually, it is suitable to add it in the form of acetate or sulfate.
これらの移動相ベースへの添加量は意図する分析濃度範
囲に応じて設定してよいが、一般に10mM〜500mMであ
る。この添加量が少なすぎると効果が不充分で不都合で
あるし、多すぎると塩の析出やカラムの劣化の点で不都
合である。The amount added to these mobile phase bases may be set according to the intended analytical concentration range, but is generally 10 mM to 500 mM. If the amount added is too small, the effect will be insufficient and it will be inconvenient. If the amount added is too large, salt will be precipitated and the column will be deteriorated.
一方、上記移動相にはさらに水と混合しうる有機溶媒を
添加するのが好ましい。すなわち水と混合しうる有機溶
媒を添加しなくてもテーリングの防止は可能であるが、
しかしながらこの有機溶媒の添加は各種分離成分の保持
時間の短縮化に役立つものであるから、実用分析の点で
不可欠なものである。なお、この添加量は移動相に対し
て０〜50％が適切である。On the other hand, it is preferable to add an organic solvent that can be mixed with water to the mobile phase. That is, although tailing can be prevented without adding an organic solvent that can be mixed with water,
However, the addition of this organic solvent is useful for shortening the retention time of various separated components, and is therefore essential for practical analysis. In addition, it is appropriate that the addition amount is 0 to 50% with respect to the mobile phase.
移動相の流量は0.5〜1.5ml／分が適当であり、カラム温
度は20〜50℃が適当である。A suitable flow rate of the mobile phase is 0.5 to 1.5 ml / min, and a suitable column temperature is 20 to 50 ° C.
検出は吸光度検出器を用いて通常268nmで行なわれる。Detection is usually done at 268 nm using an absorbance detector.
この発明は、要するに従来行なわれていたようにキレー
ト形成の抑制や防止を意図するものではなくて、逆にア
ルカリ土類金属イオンに加えて、このイオンとテトラサ
イクリン類との間に積極的にキレートを生成させ、これ
によりテトラサイクリン類をキレートの形態で分離分析
するものである。すなわち分析対象成分はすでにキレー
トとなつているので、流出壁やカラムの充填剤に含まれ
る金属とキレートを形成して吸着されるということはな
く溶出し、シヤープなテーリングのないピークを与える
のである。The present invention is not intended to suppress or prevent chelate formation as in the past, but conversely, in addition to the alkaline earth metal ion, a chelate is positively added between this ion and the tetracyclines. Is produced, whereby tetracyclines are separated and analyzed in the form of a chelate. That is, since the component to be analyzed is already a chelate, it does not form a chelate with the metal contained in the packing material of the outflow wall or column and is not adsorbed and elutes, giving a peak without sharp tailing. .
（ホ）実施例 この発明を実施例を用いて説明する。(E) Embodiments The present invention will be described with reference to embodiments.
実施条件を以下に示す。The implementation conditions are shown below.
カラム:Shim−pack CLC−ODS （6.0mmI.D×150mmL.,島津製作所製）、 カラム温度;40℃、 流量;1ml／分、 検出器；紫外吸光光度計、 検出波長;268nm、 移動相;50mM Mg（CH３COO）２（70容量％）とメタノー
ル（30容量％）との混合溶媒（pH6.2）。Column: Shim-pack CLC-ODS (6.0mmI.D × 150mmL., Manufactured by Shimadzu Corporation), column temperature; 40 ° C, flow rate; 1ml / min, detector; ultraviolet absorptiometer, detection wavelength; 268nm, mobile phase; Mixed solvent (pH 6.2) of 50 mM Mg (CH 3 COO) 2 (70% by volume) and methanol (30% by volume).
上記この発明の方法において得られたクロマトグラムを
第１図に示した。図中（１）はオキシテトラサイクリ
ン、（２）はテトラサイクリン、（３）はクロルテトラ
サイクリンのピークを表わす。このようにこの発明の方
法によれば、ピークのテーリング現象なくテトラサイク
リン類の適正なピークが得られることがわかる。The chromatogram obtained by the method of the present invention is shown in FIG. In the figure, (1) shows peaks of oxytetracycline, (2) shows peaks of tetracycline, and (3) shows peaks of chlortetracycline. As described above, according to the method of the present invention, it is found that an appropriate peak of tetracyclines can be obtained without a tailing phenomenon of the peak.
第２図はマグネシウムイオンを加えなかつた場合の参考
例であり、この時移動相は10mM KH２PO４（70容量％）
とメタノール（30容量％）の混合溶媒であり他は前記条
件と同一である。図中（１）はオキシテトラサイクリ
ン、（２）はテトラサイクリンのピークと思われるが確
かではなく、またクロルテトラサイクリンは溶出しなか
つた。このようにまつたく実用性のないものである。Figure 2 is a reference example when magnesium ions were not added, and the mobile phase was 10 mM KH 2 PO 4 (70% by volume).
Is a mixed solvent of methanol and methanol (30% by volume), and is otherwise the same as the above conditions. In the figure, (1) seems to be the peak of oxytetracycline and (2) seems to be the peak of tetracycline, but it is not certain, and chlorotetracycline did not elute. In this way, it is not practical.
（ヘ）発明の効果 この発明の方法によれば、テトラサイクリン類の分析に
おいてテーリングのないシヤープなピークを得ることが
できて、従来にはない定量性の高い分析を行なうことが
できる。またこれにあわせて保持時間の短縮化の効果も
得られる。さらにこの発明の特徴となるアルカリ土類金
属イオンの添加もアルカリ土類金属イオンは紫外部の光
を吸収しないのでノイズレベルの低い検出を可能にす
る。(F) Effect of the Invention According to the method of the present invention, it is possible to obtain a sharp peak without tailing in the analysis of tetracyclines, and it is possible to perform a highly quantitative analysis which has never been obtained. In addition to this, the effect of shortening the holding time can be obtained. Further, the addition of alkaline earth metal ions, which is a feature of the present invention, enables detection with a low noise level because alkaline earth metal ions do not absorb ultraviolet light.
第１図はこの発明の方法の実施例で得られるクロマトグ
ラム図、および第２図は参考例のクロマトグラム図であ
る。FIG. 1 is a chromatogram diagram obtained by an embodiment of the method of the present invention, and FIG. 2 is a chromatogram diagram of a reference example.
Claims (3)
液体クロマトグラフイーに付すことからなり、 該クロマトグラフイーにおける移動相として、アルカリ
土類金属イオンを含みかつ水と混合しうる有機溶媒を任
意に含むpH4以上の緩衝液を用いることを特徴とするテ
トラサイクリン類の分析法。1. A sample which may contain tetracyclines is subjected to high performance liquid chromatography, and an organic solvent containing an alkaline earth metal ion and miscible with water is optionally used as a mobile phase in the chromatography. A method for analyzing tetracyclines, which comprises using a buffer solution containing pH 4 or more.
である特許請求の範囲第１項記載の方法。2. The amount of alkaline earth metal ions is 10 to 500 mM.
The method of claim 1 wherein:
オンである特許請求の範囲第１項記載の方法。3. The method according to claim 1, wherein the alkaline earth metal ion is magnesium ion.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961985A JPH0664038B2 (en) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | Analytical method for tetracyclines |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961985A JPH0664038B2 (en) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | Analytical method for tetracyclines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61277057A JPS61277057A (en) | 1986-12-08 |
| JPH0664038B2 true JPH0664038B2 (en) | 1994-08-22 |
Family
ID=14765912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11961985A Expired - Lifetime JPH0664038B2 (en) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | Analytical method for tetracyclines |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0664038B2 (en) |
Families Citing this family (8)
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| CN102998405A (en) * | 2011-09-09 | 2013-03-27 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | Method for determining sulfanilamide and tetracycline antibiotics in soil, sludge and animal wastes |
| CN103091435B (en) * | 2012-10-31 | 2015-06-03 | 轻工业环境保护研究所 | Method for detecting chemical residues in organic fertilizer |
| CN103439419B (en) * | 2013-07-12 | 2014-10-15 | 南开大学 | Experimental method of determining extracting agent for oxytetracycline residue in earthworm |
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| CN110763798B (en) * | 2019-11-16 | 2022-02-15 | 江西国药有限责任公司 | Method for detecting content of oxytetracycline hydrochloride |
| CN113702525A (en) * | 2021-08-23 | 2021-11-26 | 瑞普（天津）生物药业有限公司 | Method for measuring content of oxytetracycline in oxytetracycline injection by using HPLC (high performance liquid chromatography) |
-
1985
- 1985-05-31 JP JP11961985A patent/JPH0664038B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61277057A (en) | 1986-12-08 |
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