JPS61277055A - 液体クロマトグラフ装置 - Google Patents
液体クロマトグラフ装置Info
- Publication number
- JPS61277055A JPS61277055A JP11961785A JP11961785A JPS61277055A JP S61277055 A JPS61277055 A JP S61277055A JP 11961785 A JP11961785 A JP 11961785A JP 11961785 A JP11961785 A JP 11961785A JP S61277055 A JPS61277055 A JP S61277055A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ultrafiltration
- pressure
- tube
- flow passage
- concn
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/84—Preparation of the fraction to be distributed
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（イ）産業上の利用分野
この発明は、液体り０マドグラフ装置に関する。
さらに詳しくは、水溶性高分子ことに蛋白質成分の分離
精製に有用な液体クロマトグラフ装置に関する。
精製に有用な液体クロマトグラフ装置に関する。
（ロ）従来技術
蛋白質等で代表される水溶性高分子を分離する手法とし
て高速液体クロマトグラフィが行なわれている。そして
、かかる手法においては、各水溶性高分子は各種塩類を
含む水系の移動相（溶離液）で希釈された状態で分離さ
れている。
て高速液体クロマトグラフィが行なわれている。そして
、かかる手法においては、各水溶性高分子は各種塩類を
含む水系の移動相（溶離液）で希釈された状態で分離さ
れている。
（ハ）発明が解決しようとする問題点
しかしながら、水溶性高分子の分離分析ではなく分離精
製を意図する際には、分離カラムから溶出する各水溶性
高分子成分が移動相によって希釈されているため、フラ
クションコレクター等で目的画分を分取した後、濃縮操
作を行なわねばならないという問題点があった。
製を意図する際には、分離カラムから溶出する各水溶性
高分子成分が移動相によって希釈されているため、フラ
クションコレクター等で目的画分を分取した後、濃縮操
作を行なわねばならないという問題点があった。
この発明はかかる状況に鑑みなされたものであり、こと
に水溶性高分子の分離と濃縮を一括して行なえる液体ク
ロマトグラフ装置を提供しようとするものである。
に水溶性高分子の分離と濃縮を一括して行なえる液体ク
ロマトグラフ装置を提供しようとするものである。
（ニ）問題点を解決するための手段及び作用かくしてこ
の発明によれば、溶離液加圧供給部、試料注入部及び分
離用カラムをこの順で管路接続すると共に分離用カラム
に流出液の流路を接続設定してなり、この流出液流路に
、限外濾過管及びこの限外濾過管に所定の背圧を与え得
る圧力調整弁を管路接続してなる濃縮流路とドレイン流
路とを切替可能に接続構成したことを特徴とする液体ク
ロマトグラフ装置が提供される。
の発明によれば、溶離液加圧供給部、試料注入部及び分
離用カラムをこの順で管路接続すると共に分離用カラム
に流出液の流路を接続設定してなり、この流出液流路に
、限外濾過管及びこの限外濾過管に所定の背圧を与え得
る圧力調整弁を管路接続してなる濃縮流路とドレイン流
路とを切替可能に接続構成したことを特徴とする液体ク
ロマトグラフ装置が提供される。
この発明の最も特徴とする点は、液体クロマトグラフ部
からの流出液流路に限外濾過管を直接接続させそれによ
り分離流出する水溶性高分子成分の濃縮を流路系内で連
続して行なえるよう構成した点にある。また、他の特徴
とする点は、かかる限外濾過管への不要な流出液、例え
ば水溶性高分子以外の画分や分離中の移動相のみの導入
をできるだけ防止して濃縮効率を上昇させるために、限
外濾過管による濃縮流路以外にドレイン流路を三方弁や
四方弁により切換可能に流出液流路に接続した点にある
。さらに他の特徴とする点は、限外濾過管に背圧をかけ
ることにより溶離液加圧供給部からの圧力に基づいて適
度な限外濾過圧が負荷されるよう構成し、さらにこの背
圧負荷手段として圧力調整弁を用い、濃縮後に背圧を低
下させることにより上記限外濾過圧外に圧力を低下させ
て限外濾過モードに付すことなく濾過管内に滞留し濃縮
された水溶性高分子成分をこの限外濾過管を通じてその
まま濃縮流路から系外に排出分取しうるよう構成した点
にある。
からの流出液流路に限外濾過管を直接接続させそれによ
り分離流出する水溶性高分子成分の濃縮を流路系内で連
続して行なえるよう構成した点にある。また、他の特徴
とする点は、かかる限外濾過管への不要な流出液、例え
ば水溶性高分子以外の画分や分離中の移動相のみの導入
をできるだけ防止して濃縮効率を上昇させるために、限
外濾過管による濃縮流路以外にドレイン流路を三方弁や
四方弁により切換可能に流出液流路に接続した点にある
。さらに他の特徴とする点は、限外濾過管に背圧をかけ
ることにより溶離液加圧供給部からの圧力に基づいて適
度な限外濾過圧が負荷されるよう構成し、さらにこの背
圧負荷手段として圧力調整弁を用い、濃縮後に背圧を低
下させることにより上記限外濾過圧外に圧力を低下させ
て限外濾過モードに付すことなく濾過管内に滞留し濃縮
された水溶性高分子成分をこの限外濾過管を通じてその
まま濃縮流路から系外に排出分取しうるよう構成した点
にある。
この発明における溶離液加圧供給部、試料注入部及び分
離カラムとしては、通常の高速液体クロマトグラフ装置
で用いられるものが種々適用できる。また、高速液体ク
ロマトグラフィの分離モードはゲル濾過、イオン交換、
逆相等の種々のモードを適用することができる。溶離液
としては例えばゲル濾過モードの場合弱酸性〜弱塩基性
のリン酸緩衝液等が挙げられる。溶離液の加圧は高圧ポ
ンプにより行なわれ、通常１０〜１００ｋＧ／ｃｊ程度
が好ましい。
離カラムとしては、通常の高速液体クロマトグラフ装置
で用いられるものが種々適用できる。また、高速液体ク
ロマトグラフィの分離モードはゲル濾過、イオン交換、
逆相等の種々のモードを適用することができる。溶離液
としては例えばゲル濾過モードの場合弱酸性〜弱塩基性
のリン酸緩衝液等が挙げられる。溶離液の加圧は高圧ポ
ンプにより行なわれ、通常１０〜１００ｋＧ／ｃｊ程度
が好ましい。
この発明における限外濾過管としてはいわゆる限外濾過
膜で構成されるものが挙げられ、その材質としては、酢
酸セルロース、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、
芳香族ナイロン、ポリフッ化ごニリデン等が挙げられる
。これらのうち限外濾過容量や効率の点で、内部に流路
を設定しつる筒状やスパイラル状の限外濾過膜からなる
限外濾過管を用いるのが好ましく、また材質としては、
溶離液との適合性等の点で酢酸セルロース等が好ましい
。
膜で構成されるものが挙げられ、その材質としては、酢
酸セルロース、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、
芳香族ナイロン、ポリフッ化ごニリデン等が挙げられる
。これらのうち限外濾過容量や効率の点で、内部に流路
を設定しつる筒状やスパイラル状の限外濾過膜からなる
限外濾過管を用いるのが好ましく、また材質としては、
溶離液との適合性等の点で酢酸セルロース等が好ましい
。
上記限外濾過管に与える背圧は、まず濃縮時に限外濾過
膜に対して０．５〜１５ｋａ／ａｄの圧力が負荷される
ように設定され、これは溶離液加圧供給部での圧力に基
づいて適宜決定される。かかる限外濾過圧において溶出
液中の塩類のみが徐々に限外濾過膜を通じて流路系外に
排出されるため該管内において水溶性高分子成分の濃縮
が行なわれる。
膜に対して０．５〜１５ｋａ／ａｄの圧力が負荷される
ように設定され、これは溶離液加圧供給部での圧力に基
づいて適宜決定される。かかる限外濾過圧において溶出
液中の塩類のみが徐々に限外濾過膜を通じて流路系外に
排出されるため該管内において水溶性高分子成分の濃縮
が行なわれる。
一方、濃縮され滞留する高分子成分は、圧力調整弁の調
整により背圧を下げて限外濾過膜に対して０〜１０ｋａ
／ｃｄの圧力が負荷されるように設定することに限外濾
過されることなく限外濾過管内の流路を通じて迅速に分
取することができる。
整により背圧を下げて限外濾過膜に対して０〜１０ｋａ
／ｃｄの圧力が負荷されるように設定することに限外濾
過されることなく限外濾過管内の流路を通じて迅速に分
取することができる。
なお、この発明において、上記ドレイン流路と濃縮流路
の切換え、圧力調整弁による背圧の調整等は自動制御す
ることが好ましく、ことにクロマト分離カラムの直後に
検出器（例えばＵｖ検出器等）を付設し、この検出器か
らのフラクション信号の有無や大きさによってこれらを
自動制御しつるよう構成することが実用上好ましい。
の切換え、圧力調整弁による背圧の調整等は自動制御す
ることが好ましく、ことにクロマト分離カラムの直後に
検出器（例えばＵｖ検出器等）を付設し、この検出器か
らのフラクション信号の有無や大きさによってこれらを
自動制御しつるよう構成することが実用上好ましい。
（ホ）実施例
第１図に示す（１）はこの発明の液体クロマトグラフ装
置の一実施例である。図において液体クロマトグラフ装
置（１）は、溶離液槽（２１：ｐＨ７のリン酸緩衝液）
及び高圧ポンプ（支）とからなる溶離液加圧供給部（２
１と、試料注入口（３）と、分離カラム（４：３ｈｉｎ
＋−ｐａｃｋ ＤＩＯＬカラム；ゲル濾過カラム島津
製作所製）とを耐圧チューブで管路接続してなる。カラ
ム（４）の下流には、流出液流路（５）が延設されてお
り該流路（５）は、Ｕ■検出器（６）を介して四方電磁
バルブ（７に接続されている。四方電磁バルブ（７）の
一対のボートは、限外濾過管（９：筒型セルロースアセ
テート限外濾過膜）及び圧力調整弁００１をこの順に備
えた濃縮流路（８）と流路（５）を接続しく破線に対応
）、他の一対のボートは、ドレイン流路Ｇυと流路（５
）とを接続する（実線に対応）。濃縮流路（８）の下流
には分取ノズル（８１）が設けられており、これはフラ
クションコレクタ面上の所定の容器信）に目的の濃縮高
分子成分を分取する。なお、図中０３は制御部を示し、
ＵＶ検出器（６）からのフラクションビークの信号をモ
ニターし記録すると共に、その信号や保持時間に基づい
て四方電磁バルブ（力の切換、圧力調整弁（１０）の調
整、フラクションコレクタ面の制御等をプログラムに従
って制御する。
置の一実施例である。図において液体クロマトグラフ装
置（１）は、溶離液槽（２１：ｐＨ７のリン酸緩衝液）
及び高圧ポンプ（支）とからなる溶離液加圧供給部（２
１と、試料注入口（３）と、分離カラム（４：３ｈｉｎ
＋−ｐａｃｋ ＤＩＯＬカラム；ゲル濾過カラム島津
製作所製）とを耐圧チューブで管路接続してなる。カラ
ム（４）の下流には、流出液流路（５）が延設されてお
り該流路（５）は、Ｕ■検出器（６）を介して四方電磁
バルブ（７に接続されている。四方電磁バルブ（７）の
一対のボートは、限外濾過管（９：筒型セルロースアセ
テート限外濾過膜）及び圧力調整弁００１をこの順に備
えた濃縮流路（８）と流路（５）を接続しく破線に対応
）、他の一対のボートは、ドレイン流路Ｇυと流路（５
）とを接続する（実線に対応）。濃縮流路（８）の下流
には分取ノズル（８１）が設けられており、これはフラ
クションコレクタ面上の所定の容器信）に目的の濃縮高
分子成分を分取する。なお、図中０３は制御部を示し、
ＵＶ検出器（６）からのフラクションビークの信号をモ
ニターし記録すると共に、その信号や保持時間に基づい
て四方電磁バルブ（力の切換、圧力調整弁（１０）の調
整、フラクションコレクタ面の制御等をプログラムに従
って制御する。
上記液体クロマトグラフ装置（１）においてまず、四方
電磁バルブ（刀が実線側に設定され、加圧供給部（２Ｊ
から溶離液がカラム（４）及び検出器（６）を介してド
レイン流路０１）に移送され、この際の出力はバックグ
ラウンドとなる。この状態で、試料注入口（３）から蛋
白含有試料（例えば生体試料、天然物試料等）を注入す
ると、これらは溶離液で移送されてカラム（４）に達し
そこでゲル濾過モードにおけるクロマト分離が行なわれ
、流路（５）から所定時間後に目的の蛋白画分が希釈状
態で流出する。この両分がＵ■検出・器（６）で検知さ
れると制御部（１３］は四方電磁バルブを破線側に切換
えて該流出液を濃縮流路（８）に導入すると共に、圧力
調整弁のを駆動して所定の背圧を限外濾過管（９）に与
えて、限外濾過圧が０．５〜ｉ５１＜ｇ／ａｊとなるよ
うに制御する。かかる限外濾過圧下においては、高分子
成分は濾過されず低分子成分や塩類が効率よく濾過除去
されるため、限外濾過管（９）内に順次導入される蛋白
成分は滞留濃縮されることとなる。こうして流出液中の
蛋白成分の濃縮が行なわれた後、制御部（１３１は圧力
調整弁（財）を弛めて限外濾過膜への圧力を０〜１０ｋ
ｇ／ｃｄに低下させる。この低圧力下においては、蛋白
成分を含む濃縮液は限外濾過モードに付されることなく
、濾過管内を通じて、所定の容器（１４）内に分取され
ることとなる。
電磁バルブ（刀が実線側に設定され、加圧供給部（２Ｊ
から溶離液がカラム（４）及び検出器（６）を介してド
レイン流路０１）に移送され、この際の出力はバックグ
ラウンドとなる。この状態で、試料注入口（３）から蛋
白含有試料（例えば生体試料、天然物試料等）を注入す
ると、これらは溶離液で移送されてカラム（４）に達し
そこでゲル濾過モードにおけるクロマト分離が行なわれ
、流路（５）から所定時間後に目的の蛋白画分が希釈状
態で流出する。この両分がＵ■検出・器（６）で検知さ
れると制御部（１３］は四方電磁バルブを破線側に切換
えて該流出液を濃縮流路（８）に導入すると共に、圧力
調整弁のを駆動して所定の背圧を限外濾過管（９）に与
えて、限外濾過圧が０．５〜ｉ５１＜ｇ／ａｊとなるよ
うに制御する。かかる限外濾過圧下においては、高分子
成分は濾過されず低分子成分や塩類が効率よく濾過除去
されるため、限外濾過管（９）内に順次導入される蛋白
成分は滞留濃縮されることとなる。こうして流出液中の
蛋白成分の濃縮が行なわれた後、制御部（１３１は圧力
調整弁（財）を弛めて限外濾過膜への圧力を０〜１０ｋ
ｇ／ｃｄに低下させる。この低圧力下においては、蛋白
成分を含む濃縮液は限外濾過モードに付されることなく
、濾過管内を通じて、所定の容器（１４）内に分取され
ることとなる。
（へ）発明の効果
この発明の液体クロマトグラフ装置によれば、水溶性高
分子、ことに蛋白質のごとき分子量数千〜数百万の水溶
性高分子の分離と濃縮を一括して行なうことができる。
分子、ことに蛋白質のごとき分子量数千〜数百万の水溶
性高分子の分離と濃縮を一括して行なうことができる。
従って従来のごとき繁雑な濃縮操作を行なうことな（迅
速に分離濃縮を行なうことができ、例えば濃縮精製や分
離分析の前処理の用途に有用である。
速に分離濃縮を行なうことができ、例えば濃縮精製や分
離分析の前処理の用途に有用である。
第１図は、この発明の液体クロマトグラフ装置の一実施
例を示す構成説明図である。 （１）・・・・・・液体クロマトグラフ装置、（２）・
・・・・・溶離液加圧供給部、（３）・・・・・・試料
注入口、（４）・・・・・・分離カラム、 （５）
・・・・・・流出液流路、（６）・・・・・・ＵＶ検出
器、 （刀・・・・・・四方電磁バルブ、（８）・・
・・・・濃縮流路、 （９）・・・・・・限外濾過
管、（Ｋ））・・・・・・圧力調整弁、 ロυ・・・
・・・ドレイン流路。 第１図゛
例を示す構成説明図である。 （１）・・・・・・液体クロマトグラフ装置、（２）・
・・・・・溶離液加圧供給部、（３）・・・・・・試料
注入口、（４）・・・・・・分離カラム、 （５）
・・・・・・流出液流路、（６）・・・・・・ＵＶ検出
器、 （刀・・・・・・四方電磁バルブ、（８）・・
・・・・濃縮流路、 （９）・・・・・・限外濾過
管、（Ｋ））・・・・・・圧力調整弁、 ロυ・・・
・・・ドレイン流路。 第１図゛
Claims (1)
- １、溶離液加圧供給部、試料注入部及び分離用カラムを
この順で管路接続すると共に分離用カラムに流出液の流
路を接続設定してなり、この流出液流路に、限外濾過管
及びこの限外濾過管に所定の背圧を与え得る圧力調整弁
を管路接続してなる濃縮流路とドレイン流路とを切替可
能に接続構成したことを特徴とする液体クロマトグラフ
装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961785A JPS61277055A (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | 液体クロマトグラフ装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961785A JPS61277055A (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | 液体クロマトグラフ装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61277055A true JPS61277055A (ja) | 1986-12-08 |
Family
ID=14765858
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11961785A Pending JPS61277055A (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | 液体クロマトグラフ装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61277055A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7566395B2 (en) | 2003-12-12 | 2009-07-28 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Purification system |
-
1985
- 1985-05-31 JP JP11961785A patent/JPS61277055A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7566395B2 (en) | 2003-12-12 | 2009-07-28 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Purification system |
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