JPS61274264A - 芳香族ジアルデヒドを用いて第一アミン類を検定する方法 - Google Patents
芳香族ジアルデヒドを用いて第一アミン類を検定する方法Info
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- JPS61274264A JPS61274264A JP61044314A JP4431486A JPS61274264A JP S61274264 A JPS61274264 A JP S61274264A JP 61044314 A JP61044314 A JP 61044314A JP 4431486 A JP4431486 A JP 4431486A JP S61274264 A JPS61274264 A JP S61274264A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
この発明は、興味ある非螢光性アミンを螢光的及び電気
化学的検出の両者に従う物質に化学的に転換することに
よる、低レベルの第一アミン、そしてさらに具体的には
生物性アミン及び内在性アミン、たとえばカテコラミン
、アミノ酸、及びペプチドの螢光的及び電気化学的検出
に関する。これは温和なアルカリ性条件下で、シアン化
物の存在において、芳香族ジアルデヒド環を有する螢光
性試薬と第一アミンとを反応せしめることによって達成
される。
化学的検出の両者に従う物質に化学的に転換することに
よる、低レベルの第一アミン、そしてさらに具体的には
生物性アミン及び内在性アミン、たとえばカテコラミン
、アミノ酸、及びペプチドの螢光的及び電気化学的検出
に関する。これは温和なアルカリ性条件下で、シアン化
物の存在において、芳香族ジアルデヒド環を有する螢光
性試薬と第一アミンとを反応せしめることによって達成
される。
螢光性試薬が基質と反応し、螢光性複合体を形成する検
定技法は今まで知られている。第一アミンの誘導体化の
ために特に用いられる１つの試薬は、次の式： で表わされる０−フタルアルデヒド（ＯＰＡ）であった
。温和なアルカリ性条件下で、チオール、すなわちＲＩ
ＳＨ及び第一アミンＲｚＮｔ（の存在において、ＯＰＡ
は、次の式： で表わされる高い螢光性の付加物である１−アルキルチ
オ−ルー２−アルキルイソインドールを形成する。
定技法は今まで知られている。第一アミンの誘導体化の
ために特に用いられる１つの試薬は、次の式： で表わされる０−フタルアルデヒド（ＯＰＡ）であった
。温和なアルカリ性条件下で、チオール、すなわちＲＩ
ＳＨ及び第一アミンＲｚＮｔ（の存在において、ＯＰＡ
は、次の式： で表わされる高い螢光性の付加物である１−アルキルチ
オ−ルー２−アルキルイソインドールを形成する。
第一アミンとＯＰＡとの反応によって生成される発けい
先回は、多くの第一アミン類に関して比較的高い螢光強
度を表わすが、α−アミノ基を含む第一アミンのイソイ
ンドール誘導体の螢光強度実質的に低いことが観察され
ている。従って、ＯＰＡ／チオール誘導系は、１Ｏ−１
Ｓモル量のペプチド及びタンパク質の検出のために有用
でない。そのような事が多くの生物システムを検定する
ためのＯｆ”Ａの有意な欠点を表わしている。
先回は、多くの第一アミン類に関して比較的高い螢光強
度を表わすが、α−アミノ基を含む第一アミンのイソイ
ンドール誘導体の螢光強度実質的に低いことが観察され
ている。従って、ＯＰＡ／チオール誘導系は、１Ｏ−１
Ｓモル量のペプチド及びタンパク質の検出のために有用
でない。そのような事が多くの生物システムを検定する
ためのＯｆ”Ａの有意な欠点を表わしている。
ＯＰＡを用いる螢光的検定技法におけるもう１つの問題
は、ある種のアミン類、たとえばグリシン、アミノ酪酸
（ＧＡＢＡ）、及びβ−アラニンの１，２−ジ置換され
たイソインドールが比較的不安定であることに関する。
は、ある種のアミン類、たとえばグリシン、アミノ酪酸
（ＧＡＢＡ）、及びβ−アラニンの１，２−ジ置換され
たイソインドールが比較的不安定であることに関する。
これらの付加物は、容易に非螢光性生成物に分解するこ
とが観察され、それによって上のアミノ酸の濃度プロフ
ィルが所望される場合、実施者に厳密な時を強制する。
とが観察され、それによって上のアミノ酸の濃度プロフ
ィルが所望される場合、実施者に厳密な時を強制する。
次の弐 以下余白で表わされる
ナフタレン−２，３−ジカルボキシアルデヒド（ＮＤＡ
）もまた、螢光性試薬として使用されて来た。しかしな
がら、その使用はアルギニン及びアルギニンメチルエス
テルの検出に限られ、そしてこの限られた場合において
さえも、螢光性反応生成物の構造は、特徴づけられてい
ない。
ナフタレン−２，３−ジカルボキシアルデヒド（ＮＤＡ
）もまた、螢光性試薬として使用されて来た。しかしな
がら、その使用はアルギニン及びアルギニンメチルエス
テルの検出に限られ、そしてこの限られた場合において
さえも、螢光性反応生成物の構造は、特徴づけられてい
ない。
従来技術の検定技法の前述の制限及び欠点に並びに特に
上に記載されていない他の欠点から、１種又はそれより
多くの第一アミノ基を含む痕跡濃度の分析対象の検定を
可能にする方法のための技術がさらに必要であることが
明らかであるにちがいない。従って、芳香族ジアルデヒ
ドが１．Ｑ−１ｓモルのような少量の第一アミンと溶液
中において反応し、螢光的又は電気化学的な検出技法を
用いて検出できる付加物を得る方法を提供することによ
って前記の必要性を満たーすことが第一の目的である。
上に記載されていない他の欠点から、１種又はそれより
多くの第一アミノ基を含む痕跡濃度の分析対象の検定を
可能にする方法のための技術がさらに必要であることが
明らかであるにちがいない。従って、芳香族ジアルデヒ
ドが１．Ｑ−１ｓモルのような少量の第一アミンと溶液
中において反応し、螢光的又は電気化学的な検出技法を
用いて検出できる付加物を得る方法を提供することによ
って前記の必要性を満たーすことが第一の目的である。
さらに具体的には、生物性アミン及び内在性アミン、た
とえばカテコールアミン、アミノ酸、及びペプチドを検
定するための方法を提供することがこの発明の目的であ
る。
とえばカテコールアミン、アミノ酸、及びペプチドを検
定するための方法を提供することがこの発明の目的であ
る。
形成される付加物がひじょうに安定している検定方法を
提供することがこの発明の他の目的である。
提供することがこの発明の他の目的である。
この発明のさらにもう１つの目的は、形成される付加物
が高度の螢光性を示し、そして従って、螢光的技法に従
う検定方法を提供することである。
が高度の螢光性を示し、そして従って、螢光的技法に従
う検定方法を提供することである。
この発明のさらにもう１つの目的は、形成される付加物
が中程度の電位で陽極酸化を受け、そして従って電気化
学的検出技法に従う検定方法を提供することである。
が中程度の電位で陽極酸化を受け、そして従って電気化
学的検出技法に従う検定方法を提供することである。
この発明のさらにもう１つの目的は、芳香族ジアルデヒ
ド及び第一アミンから螢光的及び電気化学的な検定技法
に従う付加物（上記の及び他の目的を満足する）を形成
するための方法を提供することである。
ド及び第一アミンから螢光的及び電気化学的な検定技法
に従う付加物（上記の及び他の目的を満足する）を形成
するための方法を提供することである。
要約すれば、この発明のこれらの及び他の目的は、ＩＱ
−１２モル／リッターと同じくらい低い、及び可能な場
合それよりもさらに低いアミン濃度を螢光的及び電気化
学的技法によって検出することができる螢光性付加物を
形成するために、第一アミン及びシアン化物イオンと反
応する、置換された又はＷ換されていない芳香族ジアル
デヒドを提供することによって達成される。
−１２モル／リッターと同じくらい低い、及び可能な場
合それよりもさらに低いアミン濃度を螢光的及び電気化
学的技法によって検出することができる螢光性付加物を
形成するために、第一アミン及びシアン化物イオンと反
応する、置換された又はＷ換されていない芳香族ジアル
デヒドを提供することによって達成される。
この後明らかになるであろう前述の及び他の目的、利点
、及び特徴により、この発明の本質が、この発明の次の
具体的記載、特許請求の範囲及び添付する図を参照する
ことによってより明確に理解され得る。
、及び特徴により、この発明の本質が、この発明の次の
具体的記載、特許請求の範囲及び添付する図を参照する
ことによってより明確に理解され得る。
１、− 族ジアルデヒドの調−１１法
この発明の方法によって、第一アミンと芳香族ジアルデ
ヒドとを、シアン化物イオンの存在において反応せしめ
る。置換された又は置換されていないナフタレン−２，
３−ジカルボキシアルデヒドのいずれか、そして特に、
次の式： 〔式中、 （Ａ）Ｒ１はＨ、Ｎ（ＣＨ３） ２．５Ｏ３Ｈ１、ＮＯ
□、又はＳＯ，θＮａ■であり；そしてＲｚ 、Ｒ５、
Ｒａ、Ｒ５、及びＲ６はＨであり、；あるいは（Ｂ）Ｒ
１、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６はＨであり、あるいは、 （Ｃ）Ｒ，及びＲ４はＮ（ＣＨ３）２であり、そしてＲ
２、Ｒ５、Ｒ５、及びＲ６はＨであり；あるいは、 （Ｄ）Ｒ＋ 、Ｒ２、Ｒ：ｌ 、及びＲ１はＨであり、
そしてＲ９及びＲ６は ＱＣ）１３．０ＣＣＩ＋５、Ｏ
５ｉ （（Ｊｈ） ｔｃＪｑ 、又はＮ（ＣＩ（３）！
であり；あるいは、（Ｅ）Ｒ１、Ｒ，、Ｒ５及びＲ６は
Ｈであり、そしてＲｚ及びＲ３はＣ１，０，５Ｏ３Ｈ，
又はＣ０２Ｈもしくはその塩であり；あるいは、 （Ｆ）Ｒ５、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６はＨであり、
そしてＲ２は（ＣＨ：ｌ） ＺＮである〕から芳香族ジ
アルデヒドを選択することができる。
ヒドとを、シアン化物イオンの存在において反応せしめ
る。置換された又は置換されていないナフタレン−２，
３−ジカルボキシアルデヒドのいずれか、そして特に、
次の式： 〔式中、 （Ａ）Ｒ１はＨ、Ｎ（ＣＨ３） ２．５Ｏ３Ｈ１、ＮＯ
□、又はＳＯ，θＮａ■であり；そしてＲｚ 、Ｒ５、
Ｒａ、Ｒ５、及びＲ６はＨであり、；あるいは（Ｂ）Ｒ
１、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６はＨであり、あるいは、 （Ｃ）Ｒ，及びＲ４はＮ（ＣＨ３）２であり、そしてＲ
２、Ｒ５、Ｒ５、及びＲ６はＨであり；あるいは、 （Ｄ）Ｒ＋ 、Ｒ２、Ｒ：ｌ 、及びＲ１はＨであり、
そしてＲ９及びＲ６は ＱＣ）１３．０ＣＣＩ＋５、Ｏ
５ｉ （（Ｊｈ） ｔｃＪｑ 、又はＮ（ＣＩ（３）！
であり；あるいは、（Ｅ）Ｒ１、Ｒ，、Ｒ５及びＲ６は
Ｈであり、そしてＲｚ及びＲ３はＣ１，０，５Ｏ３Ｈ，
又はＣ０２Ｈもしくはその塩であり；あるいは、 （Ｆ）Ｒ５、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６はＨであり、
そしてＲ２は（ＣＨ：ｌ） ＺＮである〕から芳香族ジ
アルデヒドを選択することができる。
次の式：
で表わされる置換されていないナフタレン−２゜３−ジ
カルボキシアルデヒドは既知の化合物であり、そして次
の二者のうちのいずれかの順序：すなわち （汀） によって調製された。
カルボキシアルデヒドは既知の化合物であり、そして次
の二者のうちのいずれかの順序：すなわち （汀） によって調製された。
後者の方法はＣｈｅｍ、 Ｂｅｒ、、 ８９巻、７０８
ベーじ（１９５６）中にＷ−Ｒｉｅｄ及びＨ，Ｂｏｄｅ
ｍによって報告されている。
ベーじ（１９５６）中にＷ−Ｒｉｅｄ及びＨ，Ｂｏｄｅ
ｍによって報告されている。
置換された２、３−ナフタレンジアルデヒドが、上の反
応（Ｉ）に使用のための、適切に置換された０−フタル
アルデヒドを形成することによって調製される。従って
、ＮＤＡのＲ＋ 、Ｒｚ 、Ｒ：＋、及びＲ４置換基は
、次の順序：すなわち以下余白 に従って０−フタルアルデヒドへの前駆体として同様に
置換された。−キシレン又は無水フタル酸を反応せしめ
ることによって選択され得る。
応（Ｉ）に使用のための、適切に置換された０−フタル
アルデヒドを形成することによって調製される。従って
、ＮＤＡのＲ＋ 、Ｒｚ 、Ｒ：＋、及びＲ４置換基は
、次の順序：すなわち以下余白 に従って０−フタルアルデヒドへの前駆体として同様に
置換された。−キシレン又は無水フタル酸を反応せしめ
ることによって選択され得る。
置換された又は置換されていない２，３−ナフタレンジ
アルデヒドの他に、出発試薬としていくつかの複素環式
ジアルデヒド類似体、たとえば次の式： 使用することがまた可能である。
アルデヒドの他に、出発試薬としていくつかの複素環式
ジアルデヒド類似体、たとえば次の式： 使用することがまた可能である。
最後に、環は、当業者によく知られている通常の環付加
技法によってＲ３及びＲ６位置で置換され得る。
技法によってＲ３及びＲ６位置で置換され得る。
温和なアルカリ性水性媒体において、シアン化物イオン
（ＣＮ−）の存在下で、芳香族ジアルデヒドと、第一ア
ミン分析対象、又はその前駆物質とを反応せしめ、ひじ
ょうに螢光性であり、そして中程度の電位で電気活性す
る、ひじょうに安定した付加物を得た。この強度の付加
物の使用がＩＱ−１ｓモル及びそれよりも微量の範囲の
、記載されたクラスの分析物の検出を可能にする。
（ＣＮ−）の存在下で、芳香族ジアルデヒドと、第一ア
ミン分析対象、又はその前駆物質とを反応せしめ、ひじ
ょうに螢光性であり、そして中程度の電位で電気活性す
る、ひじょうに安定した付加物を得た。この強度の付加
物の使用がＩＱ−１ｓモル及びそれよりも微量の範囲の
、記載されたクラスの分析物の検出を可能にする。
典型的には、芳香族ジカルボキシアルデヒドの反応を、
約９〜約１０のｐＨで、室温又は３０℃で実施した。一
般的に、１００〜２００マイクロモルのＮＤＡ溶液と１
００〜２００マイクロモルのＮａＣＮ溶液とを、１０〜
１００ ミリモルの硼酸塩緩衝液の存在において混合し
た。このＮＤＡ／ＣＮ系のための励起波長及び発光波長
は、それぞれ４２０ｎｍ及び４９０ｎｍであった。これ
らの条件は単に例示的であり、そして当業者゛は、付加
物形成に影舌を及ぼさないで条件を変化することができ
ることを認めるであろう。
約９〜約１０のｐＨで、室温又は３０℃で実施した。一
般的に、１００〜２００マイクロモルのＮＤＡ溶液と１
００〜２００マイクロモルのＮａＣＮ溶液とを、１０〜
１００ ミリモルの硼酸塩緩衝液の存在において混合し
た。このＮＤＡ／ＣＮ系のための励起波長及び発光波長
は、それぞれ４２０ｎｍ及び４９０ｎｍであった。これ
らの条件は単に例示的であり、そして当業者゛は、付加
物形成に影舌を及ぼさないで条件を変化することができ
ることを認めるであろう。
上の付加物を螢光的に分析する場合、５０ Ｘ １０す
Ｓモル程度の少量の分析物により検定を実施することが
できることが観察された。
Ｓモル程度の少量の分析物により検定を実施することが
できることが観察された。
この発明の付加物もまた、電気化学的分析技法に従う。
次の順序：すなわち
のように第一アミン及びシアン化物と芳香族ジアルデヒ
ドとを反応せしめることによって、この発明の高い螢光
性の付加物を形成する。
ドとを反応せしめることによって、この発明の高い螢光
性の付加物を形成する。
分離段階、たとえばＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラ
フィー）の前に、ＮＤＣ／ＣＮ付加物を第一アミンの混
合物と共に形成する場合、下記：すなわち入 によって示されるように、異性体の形成により２つのピ
ークをおのおのの第一アミン分析物のために観察される
可能性がある。
フィー）の前に、ＮＤＣ／ＣＮ付加物を第一アミンの混
合物と共に形成する場合、下記：すなわち入 によって示されるように、異性体の形成により２つのピ
ークをおのおのの第一アミン分析物のために観察される
可能性がある。
クロマトグラフィーシステムにおいては、おのおのの分
析対象について２つのピークを得ることは好ましくない
ので、Ｒ，とＲ４、ＲｚとＲ５、及びＲ３とＲ６が同一
であるジ−又はテトラ置換により螢光性試薬の対称性を
維持することが好ましい。
析対象について２つのピークを得ることは好ましくない
ので、Ｒ，とＲ４、ＲｚとＲ５、及びＲ３とＲ６が同一
であるジ−又はテトラ置換により螢光性試薬の対称性を
維持することが好ましい。
この発明は、次の例によってさらに明確にされるが、こ
れらの例は、この発明の使用のただ例に過ぎない。
れらの例は、この発明の使用のただ例に過ぎない。
アミノ酸
低い化学線の１０ｃｍメスフラスコ中に、０．１モルの
硼酸ナトリウム溶液９．６ｍＡ、次に、次の１６個のア
ミノ酸：すなわちグリシン、アラニン、チロシン、バリ
ン、フェニルアラニン、アスパラジン酸、セゾン、グル
タミン酸、ヒスチジン、トレオニン、イソロイシン、メ
チオニン、トリプトファン、アルギニン、アスパラジン
、及びグルタミンの１０−’Ｍ溶液１００マイクロリッ
ターを添加した。次に、０．０５ＭのＮａＣＮ １００
マイクロリツター及びメタノール中０．０１ＭのＮＤＡ
２００マイクロリツターを添加した。この溶液を十分
に混合し、そして２５℃の水浴中に置いた。
硼酸ナトリウム溶液９．６ｍＡ、次に、次の１６個のア
ミノ酸：すなわちグリシン、アラニン、チロシン、バリ
ン、フェニルアラニン、アスパラジン酸、セゾン、グル
タミン酸、ヒスチジン、トレオニン、イソロイシン、メ
チオニン、トリプトファン、アルギニン、アスパラジン
、及びグルタミンの１０−’Ｍ溶液１００マイクロリッ
ターを添加した。次に、０．０５ＭのＮａＣＮ １００
マイクロリツター及びメタノール中０．０１ＭのＮＤＡ
２００マイクロリツターを添加した。この溶液を十分
に混合し、そして２５℃の水浴中に置いた。
５ｃｈｏｅｆｆｅｌ検出器を用いて、螢光を測定した。
励起波長は４２０ｎｍであり、そして発光波長は４７０
ｎｍであった。５μの充填剤粒子のＯＤＳカラムをまた
、使用した。グラジェントはリン酸緩衝液中ＣＨ３ＣＨ
１５〜５５％であった。溶媒Ａ（移動相）は、６．８の
ｐＨでＣＨ３ＣＮ １５％及び０．０５ＭのＰＯ４８
５％であった。溶媒Ｂは、６．８のｐＨでＣＨ，ＣＮ
５５％及び０．０５ＭのＰｏ、４５％であった。
ｎｍであった。５μの充填剤粒子のＯＤＳカラムをまた
、使用した。グラジェントはリン酸緩衝液中ＣＨ３ＣＨ
１５〜５５％であった。溶媒Ａ（移動相）は、６．８の
ｐＨでＣＨ３ＣＮ １５％及び０．０５ＭのＰＯ４８
５％であった。溶媒Ｂは、６．８のｐＨでＣＨ，ＣＮ
５５％及び０．０５ＭのＰｏ、４５％であった。
この混合物のクロマトグラムを２６５分及び３６０分後
に調べ、そして第１図に示す。これらの時間後の分布は
、この発明の付加物の安定性を示す。
に調べ、そして第１図に示す。これらの時間後の分布は
、この発明の付加物の安定性を示す。
チーム
ｐＨ９゜５の硼酸緩衝液巾約１ ｍｇ／ｍｌのＮＤＡ−
ＣＮ−アスパルテームを含む溶液を、１０μの充填剤粒
子のＷａ ｔｅｒカラム、２０マイクロリツターの注入
体積、及び水中ＣＨ，ＣＮ ３０％から成る移動相を用
いて、ＨＰＬＣ−ｕｖ （２４５ｎｍ）によって分析し
た。２つのピークが観察された（第２図を参照のこと）
。この１つは時間がたつにつれて増大し、そして他は時
間がたつにつれて減少した。第２ピーク（はとんど疎水
性）は時間がたつにつれて減少するピークであるので、
ジペプチドのメチルエステルの加水分解が生じると思わ
れるがこの理論によって制限されない。
ＣＮ−アスパルテームを含む溶液を、１０μの充填剤粒
子のＷａ ｔｅｒカラム、２０マイクロリツターの注入
体積、及び水中ＣＨ，ＣＮ ３０％から成る移動相を用
いて、ＨＰＬＣ−ｕｖ （２４５ｎｍ）によって分析し
た。２つのピークが観察された（第２図を参照のこと）
。この１つは時間がたつにつれて増大し、そして他は時
間がたつにつれて減少した。第２ピーク（はとんど疎水
性）は時間がたつにつれて減少するピークであるので、
ジペプチドのメチルエステルの加水分解が生じると思わ
れるがこの理論によって制限されない。
づく依存性
２．０Ｘ１０−’ＭのＮＤＡ溶液と２．ＯＸｌｏ−６Ｍ
のアラニン溶液とを、種々の濃度のシアン化物イオンの
存在下で混合した。この混合物のｐＨは、２５℃で且つ
０．１のイオン強度で硼酸緩衝液中において９．５であ
った。この関係のグラフを第３図に示す。同じＫｏｂｓ
の測定を、Ｎ Ｄ Ａ ｔ７４度に関して行なった。再
び、そのｐＩ＋は、２５℃の反応温度、及び０．１のイ
オン強度で９．５であった。しかしながら、シアン化物
及びアラニンの濃度は、それぞれ１．０×１０弓Ｍ及び
２．ＯＸ Ｉ ０−６Ｍであった。この関係を第４図に
示す。
のアラニン溶液とを、種々の濃度のシアン化物イオンの
存在下で混合した。この混合物のｐＨは、２５℃で且つ
０．１のイオン強度で硼酸緩衝液中において９．５であ
った。この関係のグラフを第３図に示す。同じＫｏｂｓ
の測定を、Ｎ Ｄ Ａ ｔ７４度に関して行なった。再
び、そのｐＩ＋は、２５℃の反応温度、及び０．１のイ
オン強度で９．５であった。しかしながら、シアン化物
及びアラニンの濃度は、それぞれ１．０×１０弓Ｍ及び
２．ＯＸ Ｉ ０−６Ｍであった。この関係を第４図に
示す。
石英キュベツト中に、０．００００６Ｍアラニン溶液１
００マイクロリツタ一次に水中０．０１ ＭのＮＤ八へ
００マイクロリッター及び０．１ ＭのＮａＣＨ１００
マイクロリツターを添加した。励起スペクトル及び発光
スペクトルの相対的螢光度を、それぞれ第５図及び第６
図に示す。
００マイクロリツタ一次に水中０．０１ ＭのＮＤ八へ
００マイクロリッター及び０．１ ＭのＮａＣＨ１００
マイクロリツターを添加した。励起スペクトル及び発光
スペクトルの相対的螢光度を、それぞれ第５図及び第６
図に示す。
第１表は、ＮＤＡ／ＣＮ−アラニン付加物の形成につい
ての一次速度定数、すなわちＫｏｂｓをｐｉ＋の関数と
して挙げる。ｐＨに対するＫｏｂｓのプロットは、ｐＨ
９，５で最大の反応速度を示しく第７図）、そしてこれ
は、０−フタルアルデヒド／２−メルカプトエタノール
系に類似する。この反応を３０℃で実施した。ＮＤＡ、
ＣＮ−、及びアラニンの濃度は、それぞれ２． ＯＸ
１０−’Ｍ、 ２． ＯＸ １０−’Ｍ、及び１．０
×１０”’Ｍであった。
ての一次速度定数、すなわちＫｏｂｓをｐｉ＋の関数と
して挙げる。ｐＨに対するＫｏｂｓのプロットは、ｐＨ
９，５で最大の反応速度を示しく第７図）、そしてこれ
は、０−フタルアルデヒド／２−メルカプトエタノール
系に類似する。この反応を３０℃で実施した。ＮＤＡ、
ＣＮ−、及びアラニンの濃度は、それぞれ２． ＯＸ
１０−’Ｍ、 ２． ＯＸ １０−’Ｍ、及び１．０
×１０”’Ｍであった。
第 １ 表
Ｈ１０ｊＫｏｂｓ、 秒−１
８，０４，９，３，５
８，５１１，２、１０，６
９，０２２，５、２１，４
９，５２４，４、２２，４
１０，０８，９、１０，４
１０，５５，５，３，６
１１，０２，０，１，１
グリシン、β−アラニン、ＧＡＢＡ、及びＮ−アセチル
リジンの１０〜４Ｍの混合溶液と、ＮＤＡの０．０１Ｍ
溶液及び０．０５Ｍのｐｒとを反応せしめ、ｐＨ９，３
で、０．１Ｍ硼酸緩衝液中において１０−６Ｍの発けい
元口を得た。次に、その５０ピコリツターをＲ−〇、５
μＡでのＨＰＬＣ装置中に注入した。ｐｌ＋＝６．８の
０．０５Ｍのｐｏ、中ＣＨＩＣＮ １５％〜Ｃ１１３
ＣＮ ５５％の直線グラジェントを用いて、３０分間
にわたって分離を行なった。１５分後及び３時間後の溶
離プロフィールを、第８図に示す。第８図に見られるよ
うに、ＮＤＡ／ＣＮによる４個のアミノ酸の反応生成物
の分解がほとんど又はまったく起こらなかったことを、
９．３のｐＨで３時間後観察した。
リジンの１０〜４Ｍの混合溶液と、ＮＤＡの０．０１Ｍ
溶液及び０．０５Ｍのｐｒとを反応せしめ、ｐＨ９，３
で、０．１Ｍ硼酸緩衝液中において１０−６Ｍの発けい
元口を得た。次に、その５０ピコリツターをＲ−〇、５
μＡでのＨＰＬＣ装置中に注入した。ｐｌ＋＝６．８の
０．０５Ｍのｐｏ、中ＣＨＩＣＮ １５％〜Ｃ１１３
ＣＮ ５５％の直線グラジェントを用いて、３０分間
にわたって分離を行なった。１５分後及び３時間後の溶
離プロフィールを、第８図に示す。第８図に見られるよ
うに、ＮＤＡ／ＣＮによる４個のアミノ酸の反応生成物
の分解がほとんど又はまったく起こらなかったことを、
９．３のｐＨで３時間後観察した。
１６個のアミノ酸の１０−’Ｍ混合物溶液５０マイクロ
リッターを、０．０５ＭのＮａＣＮ ５０マイクロリツ
ター及び０．ＯＩＭのＮＤＡ １００μｌと前記アミノ
酸溶液とを２分間反応せしめることによって誘導体した
。次に、この溶液混合物を希釈し、アミノ酸の１０−”
Ｍ溶液を得た。次に、この溶液の５０マイクロリツター
のアリコート、すなわち５００×１０−５モルをＨＰＬ
Ｃ中に注入した。カラムは５ミクロンの充填剤粒子及び
４．６ Ｘ １５０ｍｍのＯＤＳ、ｈｙｐｅｒｓｉｌで
あった。ガードカラムは４．６ Ｘ １５０ｍｍであっ
た。
リッターを、０．０５ＭのＮａＣＮ ５０マイクロリツ
ター及び０．ＯＩＭのＮＤＡ １００μｌと前記アミノ
酸溶液とを２分間反応せしめることによって誘導体した
。次に、この溶液混合物を希釈し、アミノ酸の１０−”
Ｍ溶液を得た。次に、この溶液の５０マイクロリツター
のアリコート、すなわち５００×１０−５モルをＨＰＬ
Ｃ中に注入した。カラムは５ミクロンの充填剤粒子及び
４．６ Ｘ １５０ｍｍのＯＤＳ、ｈｙｐｅｒｓｉｌで
あった。ガードカラムは４．６ Ｘ １５０ｍｍであっ
た。
移動相は、（Ａ） ＣＨ３ＣＮ １５％／ＰＯ４８５
％（０，０５Ｍ 、 ｐＨ６，８）及び（Ｂ） ＣＨ３
ＣＮ ５５％／ＰＯ４４５％（０，０５Ｍ 、 ｐＨ６
，８）であった。このグラジェントは、６０分にわたっ
て（Ａ） １００％から（Ｂ） １００％に直線的
に変化した。この流速は１、Ｏｍｊ！／分であった。５
ｃｈｏｅｆｆｅｌの検出器ＦＳ９７０を用いた。その励
起波長は２４６ｎｍであり、そして発光波長は４７０ｎ
ｍであった。時定数は６秒であり、そしてその範囲は０
．２μＡであった。このクロマトグラフを第９図に示す
。
％（０，０５Ｍ 、 ｐＨ６，８）及び（Ｂ） ＣＨ３
ＣＮ ５５％／ＰＯ４４５％（０，０５Ｍ 、 ｐＨ６
，８）であった。このグラジェントは、６０分にわたっ
て（Ａ） １００％から（Ｂ） １００％に直線的
に変化した。この流速は１、Ｏｍｊ！／分であった。５
ｃｈｏｅｆｆｅｌの検出器ＦＳ９７０を用いた。その励
起波長は２４６ｎｍであり、そして発光波長は４７０ｎ
ｍであった。時定数は６秒であり、そしてその範囲は０
．２μＡであった。このクロマトグラフを第９図に示す
。
比較例１：
０−フタルアルデヒド／メルカプトエタノール及び例７
において分析されたのと同じ１６個のアミノ酸の付加物
５００Ｘ １０−”モルを、同一のＨＰ Ｌ Ｃ分離法
に同様にしてかけた。ＯＰＡの濃度は１．８Ｘ１０−６
Ｍであり、そしてメルカプトエタノールの濃度はｌ０Ｘ
ＩＯ−’Ｍであった。この反応を００１Ｍ硼酸ナトリウ
ム溶液中において実施し、そしてその付加物を、２３０
ｎｍの励起波長及び４１８ｎｍより大きな発光波長で螢
光的に分析した。このクロマトグラムを第１０表に示す
。この発明の付加物に比較すると、ＯＰＡ／２ＭＥ （
メルカプトエタノール）−アミノ酸付加物の分離能力は
ひじょうに小さいことがわかるであろう。
において分析されたのと同じ１６個のアミノ酸の付加物
５００Ｘ １０−”モルを、同一のＨＰ Ｌ Ｃ分離法
に同様にしてかけた。ＯＰＡの濃度は１．８Ｘ１０−６
Ｍであり、そしてメルカプトエタノールの濃度はｌ０Ｘ
ＩＯ−’Ｍであった。この反応を００１Ｍ硼酸ナトリウ
ム溶液中において実施し、そしてその付加物を、２３０
ｎｍの励起波長及び４１８ｎｍより大きな発光波長で螢
光的に分析した。このクロマトグラムを第１０表に示す
。この発明の付加物に比較すると、ＯＰＡ／２ＭＥ （
メルカプトエタノール）−アミノ酸付加物の分離能力は
ひじょうに小さいことがわかるであろう。
比較例２：
（Ａ）■−シアノ２−グリシルベンゾイソインドール及
び（Ｂ）１−メルカプトエタノール２−グリシルイソイ
ンドールの分解プロフィールを比較した。この付加物を
、メタノール２０％及び硼酸緩衝液（μ＝０．１Ｍ、ｐ
Ｈ９，５） ８０％からなる、光から保護された混合溶
媒中において分析した。
び（Ｂ）１−メルカプトエタノール２−グリシルイソイ
ンドールの分解プロフィールを比較した。この付加物を
、メタノール２０％及び硼酸緩衝液（μ＝０．１Ｍ、ｐ
Ｈ９，５） ８０％からなる、光から保護された混合溶
媒中において分析した。
この混合物を２５℃で保持し、そしてＨＰＬＣによって
モニターした。第１１図に示されるように、この発明の
付加物は、ＯＰＡにより得られた付加物よりもはるかに
より安定している。
モニターした。第１１図に示されるように、この発明の
付加物は、ＯＰＡにより得られた付加物よりもはるかに
より安定している。
止較大慧ユニ
ＮＤＡ−ＣＮ対ＯＰＡ−ＭＥの検出限界を再び比較した
。波長を変えることができるＬ Ｋ Ｂ ２’１５１モ
ニター（絶対波長がＯＰＡのためには３３５ｎｍで、そ
してＮＤＡのためには４２０ｎｍである） 、Ｆａｒｒ
ａｎｄの光学的分光型光度計（３３５ｎｍのＯＰＡ励起
波長及び４３０ｎｍのＯＰＡ発光波長及び４２０ｎｍの
ＮＤＡ励起波長及び４８０ｎｍのＮＤＡ発光波長）及び
Ｒｈｅｏｄｙｎｅ注大器（２０マイクロリツターのルー
プ）を使用した。ＬＫＢ ２１５２ ＨＰＬＣ制御器、
ＬＫＢ ２１５０ ＨＰＬＣポンプ及びＬＫＢ ２２１
０ＨＰ Ｌ Ｃ記録計もまた、使用した。ＯＰＡ／ＭＥ
付加物についての移動相はＣ１ｈＣＮ １８％／ＰＯ
４８２％（０，０５Ｍ、ｐＨ＝６．８）であった。ＮＤ
八へＣＮ付加物についての移動相は、ＣＨ，ＣＮ ２５
％／Ｐ０．７５％（０，０５Ｍ。
。波長を変えることができるＬ Ｋ Ｂ ２’１５１モ
ニター（絶対波長がＯＰＡのためには３３５ｎｍで、そ
してＮＤＡのためには４２０ｎｍである） 、Ｆａｒｒ
ａｎｄの光学的分光型光度計（３３５ｎｍのＯＰＡ励起
波長及び４３０ｎｍのＯＰＡ発光波長及び４２０ｎｍの
ＮＤＡ励起波長及び４８０ｎｍのＮＤＡ発光波長）及び
Ｒｈｅｏｄｙｎｅ注大器（２０マイクロリツターのルー
プ）を使用した。ＬＫＢ ２１５２ ＨＰＬＣ制御器、
ＬＫＢ ２１５０ ＨＰＬＣポンプ及びＬＫＢ ２２１
０ＨＰ Ｌ Ｃ記録計もまた、使用した。ＯＰＡ／ＭＥ
付加物についての移動相はＣ１ｈＣＮ １８％／ＰＯ
４８２％（０，０５Ｍ、ｐＨ＝６．８）であった。ＮＤ
八へＣＮ付加物についての移動相は、ＣＨ，ＣＮ ２５
％／Ｐ０．７５％（０，０５Ｍ。
ｐＨ６，８）であった。この結果を第１２図及び第１３
図に示す。ここで、３３５ｎｍの励起波長、４３０ｎｍ
の発光波長及びＲ値＝０．０１に装置を合わせ、ｐＨ＝
９．５のＯＰＡ／ＭＥと共に混合されたグリシン、アラ
ニン、及びアラニン−アラニンの混合溶液の２０ピコモ
ルの注入物と、４２０ｎｍの励起波長、４８０ｎｍの発
光波長及びＲ値＝０．０１に装置を合わせ、ｐＨ＝９．
５でのＮＤＡ／ＣＮと共に混合された前記の同じアミノ
酸の４ピコモルの注入物とを比較する。
図に示す。ここで、３３５ｎｍの励起波長、４３０ｎｍ
の発光波長及びＲ値＝０．０１に装置を合わせ、ｐＨ＝
９．５のＯＰＡ／ＭＥと共に混合されたグリシン、アラ
ニン、及びアラニン−アラニンの混合溶液の２０ピコモ
ルの注入物と、４２０ｎｍの励起波長、４８０ｎｍの発
光波長及びＲ値＝０．０１に装置を合わせ、ｐＨ＝９．
５でのＮＤＡ／ＣＮと共に混合された前記の同じアミノ
酸の４ピコモルの注入物とを比較する。
従って、検出性及び安定性に関しては、この発明ＤＮＡ
／ＣＮ複合体が従来技術のＯＰＡ／チオール系よりもは
るかにすぐれている。
／ＣＮ複合体が従来技術のＯＰＡ／チオール系よりもは
るかにすぐれている。
”好ましい態様のみをこの明細書に特別に例示し、そし
て記載したが、この発明の多くの変化及び変更が上の教
示において及び特許請求の範囲内で可能であり、そして
これによってこの発明の範囲を限定するものではない。
て記載したが、この発明の多くの変化及び変更が上の教
示において及び特許請求の範囲内で可能であり、そして
これによってこの発明の範囲を限定するものではない。
第１図は２６５分後及び３００分後に調べられた１６個
のアミノ酸混合物のクロマトグラムを示す。 第２図は、ｐＨ＝９．５での硼酸緩衝液中におけるＮＤ
Ａ−ＣＮ−アスパルテームのＨＰＬＣ−ｕｖ （２４５
ｎｍ）による分析を示す。 第３図は、２５℃で且つ０．１のイオン強度での硼酸緩
衝液（ｐＨ＝ ９．５ ）中における有効濃度のシアン
化物に対する１−シアノ−２−アラニルベンゾ−イソイ
ンドールの形成についての擬−次速度定数の依存関係を
示す。 第４図は、２５℃で且つ０．１のイオン強度での硼酸緩
衝液（ｐＨ＝９．５）中におけるＮＤＡの濃度に対する
１−シアノ−２−アラニルヘンシーイソインドールの形
成についての擬−次速度定数の依存関係を示す。 第５図は励起スペクトルに対する相対的螢光強度を示す
。 第６図は発光スペクトルに対する相対的螢光強度を示す
。 第７図は３０℃で且つ０．１のイオン強度でのｐｌ（−
Ｓｔａｔによって維持されている、１−シアノ２−アラ
ニルベンゾ−イソインドールの形成のためのｐｕ−速度
プロフィールを示す。 第８図は１５分及び３時間後でのグリシン、β−アラニ
ン、ＧＡＢＡ、及びＮ−アセチルライシンの混合溶液の
分離プロフィールを示す。 第９図はＮＡＤ／ＣＮと１６個のアミノ酸混合物５００
ｘ ｌ Ｑ−１５モルとの混合物のクロマトグラムを示
す。 第１０図はＯＰＡ／ＭＥと１６個のアミノ酸混合物５０
０Ｘ １０−”モルとのン昆合物のクロマトグラムを示
す。 第１１図は、２５℃でメタノール２０％及び硼酸緩衝液
（μ＝０．１Ｍ、ｐＨ＝９．５）８０％からなる、光か
ら保護された混合溶媒中における（Ａ）１−シアノ２−
グリシルベンシー−イソインドール及び（Ｂ）１−メル
カプトエタノール２−グリシルイソインドールの分解プ
ロフィールを示す。 第１２図は、ＯＰＡ／ＭＥと共にグリシン、アラニン、
及びアラニン−アラニンを含む混合溶液２０ピコモルの
クロマトグラムを示す。 第１３図は、ＮＤＡ／ＣＮと共にグリシン、アラニン、
及びアラニン−アラニンを含む混合’１８８４ビコモｚ
ｔｚ（７）？Ｏ？）ｌ”ｅ″′’ｃ’ｉｔ・ しり
、下余白Ｇｊ、、−、浄ξ（内容に変更ない ｐ≠Ｊ ［ＣＮ−コｘｌＯＭ ［ＮＤＡ］ ｘ １０２ 螢光度 螢光度 １ ／ ｊ’ Ｉ（
Ｉ ｕ ｌｌＩ〃 ＦＴヲｄ 時間−１５分 時間−３時間ｆｉミラ ＦＦＥＦ、１１ 時間 ω） と７目」Ｌ
のアミノ酸混合物のクロマトグラムを示す。 第２図は、ｐＨ＝９．５での硼酸緩衝液中におけるＮＤ
Ａ−ＣＮ−アスパルテームのＨＰＬＣ−ｕｖ （２４５
ｎｍ）による分析を示す。 第３図は、２５℃で且つ０．１のイオン強度での硼酸緩
衝液（ｐＨ＝ ９．５ ）中における有効濃度のシアン
化物に対する１−シアノ−２−アラニルベンゾ−イソイ
ンドールの形成についての擬−次速度定数の依存関係を
示す。 第４図は、２５℃で且つ０．１のイオン強度での硼酸緩
衝液（ｐＨ＝９．５）中におけるＮＤＡの濃度に対する
１−シアノ−２−アラニルヘンシーイソインドールの形
成についての擬−次速度定数の依存関係を示す。 第５図は励起スペクトルに対する相対的螢光強度を示す
。 第６図は発光スペクトルに対する相対的螢光強度を示す
。 第７図は３０℃で且つ０．１のイオン強度でのｐｌ（−
Ｓｔａｔによって維持されている、１−シアノ２−アラ
ニルベンゾ−イソインドールの形成のためのｐｕ−速度
プロフィールを示す。 第８図は１５分及び３時間後でのグリシン、β−アラニ
ン、ＧＡＢＡ、及びＮ−アセチルライシンの混合溶液の
分離プロフィールを示す。 第９図はＮＡＤ／ＣＮと１６個のアミノ酸混合物５００
ｘ ｌ Ｑ−１５モルとの混合物のクロマトグラムを示
す。 第１０図はＯＰＡ／ＭＥと１６個のアミノ酸混合物５０
０Ｘ １０−”モルとのン昆合物のクロマトグラムを示
す。 第１１図は、２５℃でメタノール２０％及び硼酸緩衝液
（μ＝０．１Ｍ、ｐＨ＝９．５）８０％からなる、光か
ら保護された混合溶媒中における（Ａ）１−シアノ２−
グリシルベンシー−イソインドール及び（Ｂ）１−メル
カプトエタノール２−グリシルイソインドールの分解プ
ロフィールを示す。 第１２図は、ＯＰＡ／ＭＥと共にグリシン、アラニン、
及びアラニン−アラニンを含む混合溶液２０ピコモルの
クロマトグラムを示す。 第１３図は、ＮＤＡ／ＣＮと共にグリシン、アラニン、
及びアラニン−アラニンを含む混合’１８８４ビコモｚ
ｔｚ（７）？Ｏ？）ｌ”ｅ″′’ｃ’ｉｔ・ しり
、下余白Ｇｊ、、−、浄ξ（内容に変更ない ｐ≠Ｊ ［ＣＮ−コｘｌＯＭ ［ＮＤＡ］ ｘ １０２ 螢光度 螢光度 １ ／ ｊ’ Ｉ（
Ｉ ｕ ｌｌＩ〃 ＦＴヲｄ 時間−１５分 時間−３時間ｆｉミラ ＦＦＥＦ、１１ 時間 ω） と７目」Ｌ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、第一アミンの検定方法であって、次の段階：（ｉ）
第一アミンと反応性の置換された又は置換されていない
ナフタレン−２，３−ジカルボキシアルデヒドを用意し
； （ｉｉ）前記の置換された又は置換されていないナフタ
レン−２，３−ジカルボキシアルデヒドと少なくとも１
つの第一アミン分析対象及びシアン化物イオンとを反応
せしめることにより螢光的検定技法又は電気化学的検定
技法に従う付加物を形成せしめ； （ｉｉｉ）前記付加物を螢光的又は電気化学的に分析す
ることを含んで成る方法。 ２、前記付加物が発けい先回である特許請求の範囲第１
項記載の方法。 ３、前記の置換された又は置換されていないナフタレン
−２，３−ジカルボキシアルデヒドが次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 （Ａ）Ｒ＿１はＨ、Ｎ（ＣＨ＿３）＿２、ＳＯ＿３Ｈ、
ＮＯ＿２、又はＳＯ＿３＾■Ｎａ＾■であり；そしてＲ
＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及びＲ＿６はＨであり
、；あるいは（Ｂ）Ｒ＿１、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及びＲ＿
６はＨであり、そして▲数式、化学式、表等があります
▼は▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化
学式、表等があります▼あり； あるいは （Ｃ）Ｒ＿１及びＲ＿４はＮ（ＣＨ＿３）＿２であり、
そしてＲ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿５、及びＲ＿６はＨであり
；あるいは （Ｄ）Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３、及びＲ＿４はＨであり
、そしてＲ＿５及びＲ＿６はＯＣＨ＿３、▲数式、化学
式、表等があります▼、ＯＳｉ（ＣＨ＿３）＿２Ｃ＿４
Ｈ＿９、又はＮ（ＣＨ＿３）＿２であり；あるいは（Ｅ
）Ｒ＿１、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及びＲ＿６はＨであり、そ
してＲ＿２及びＲ＿３はＣＨ＿３Ｏ、ＳＯ＿３Ｈ、又は
ＣＯ＿２Ｈもしくはその塩であり；あるいは、 （Ｆ）Ｒ＿１、Ｒ＿４、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及びＲ＿６は
Ｈであり、そしてＲ＿２は（ＣＨ＿３）＿２Ｎである〕
で表わされる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、前記の置換された又は置換されていないナフタレン
−２，３−ジカルボキシアルデヒドが次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿１はＨ、Ｎ（ＣＨ＿３）＿２、ＳＯ＿３Ｈ
、ＮＯ＿２、又はＳＯ＿３Ｎａである〕で表わされる特
許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、前記の置換された又は置換されていないナフタレン
−２，３−ジカルボキシアルデヒドが次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、１００〜２００マイクロモルの前記の置換された又
は置換されていないナフタレン−２，３−ジカルボキシ
アルデヒド溶液と１００〜２００マイクロモルのシアン
化物イオン溶液とを反応せしめる特許請求の範囲第１項
記載の方法。 ７、前記反応段階を９〜１０の間のｐＨで実施する特許
請求の範囲第１項記載の方法。 ８、多数の第一アミン類が存在する特許請求の範囲第１
項記載の方法。 ９、前記の多数の第一アミン類を個々のアミン類に分離
する段階をさらに含んで成る特許請求の範囲第８項記載
の方法。 １０、前記の分離段階を高性能液体クロマトグラフィー
によって実施する特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１、前記分離段階を前記の反応段階の前に実施する特
許請求の範囲第９項記載の方法。 １２、前記分離段階を前記の反応段階の後に実施する特
許請求の範囲第９項記載の方法。 １３、前記のナフタレン−２，３−ジカルボキシアルデ
ヒドをジ−置換するか又はテトラ置換する特許請求の範
囲第１２項記載の方法。 １４、次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここで、Ｘは式Ｘ−ＮＨ＿２の第一アミンに由来する
基であり、そして（Ａ）Ｒ＿１はＨ、Ｎ（ＣＨ＿３）＿
２、ＳＯ＿３Ｈ、ＮＯ＿２、又はＳＯ＿３＾■Ｎａ＾■
であり、そしてＲ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５及びＲ
＿６はＨであり；あるいは、（Ｂ）Ｒ＿１、Ｒ＿４、Ｒ
＿５、及びＲ＿６はＨであり、▲数式、化学式、表等が
あります▼は▲数式、化学式、表等があります▼又は▲
数式、化学式、表等があります▼であり；あるいは、（
Ｃ）Ｒ＿１及びＲ＿４はＮ（ＣＨ＿３）＿２であり、そ
してＲ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿５、及びＲ＿６はＨであり；
あるいは、 （Ｄ）Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３、及びＲ＿４はＨであり
、そしてＲ＿５及びＲ＿６はＯＣＨ＿３、ＯＣＣＨ＿３
、ＯＳｉ（ＣＨ＿３）＿２Ｃ＿４Ｈ＿９、又はＮ（ＣＨ
＿３）＿２であり；あるいは、（Ｅ）Ｒ＿１、Ｒ＿４、
Ｒ＿５、及びＲ＿６はＨであり、そしてＲ＿２及びＲ＿
３はＣＨ＿３Ｏ、ＳＯ＿３Ｈ又はＣＯ＿２Ｈもしくはそ
の塩であり；あるいは （Ｆ）Ｒ＿１、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及びＲ＿６は
Ｈであり、そしてＲ＿２は（ＣＨ＿３）＿２Ｎである〕
で表わされる付加物。 １５、Ｒ＿１がＨ、Ｎ（ＣＨ＿３）＿２、ＳＯ＿３Ｈ、
ＮＯ＿２、又はＳＯ＿３＾■Ｎａ＾■であり、そしてＲ
＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及びＲ＿６がＨである
特許請求の範囲第１４項記載の付加物。 １６、Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５、及び
Ｒ＿６がＨである特許請求の範囲第１４項記載の付加物
。 １７、前記の式ＸＮＨ＿２の第一アミンがペプチド、ア
ミノ酸、又はカテコールアミンである特許請求の範囲第
１４項記載の付加物。 １８、前記の式ＸＮＨ＿２の第一アミンがグリシン、ア
ラニン、チロシン、バリン、フェニルアラニン、アスパ
ラギン酸、セリン、グルタミン酸、ヒスチジン、トレオ
ニン、イソロイシン、メチオニン、トリプトファン、ア
ルギニル、アスパラジン、β−アラニン、ＧＡＢＡ（ギ
ャバ）、Ｎ−アセチル−リシン、グリシン−グリシン、
アラニン−アラニン、又はアスパルテームである特許請
求の範囲第１４項記載の付加物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US70767685A | 1985-03-04 | 1985-03-04 | |
| US707676 | 1985-03-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61274264A true JPS61274264A (ja) | 1986-12-04 |
Family
ID=24842686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61044314A Pending JPS61274264A (ja) | 1985-03-04 | 1986-03-03 | 芳香族ジアルデヒドを用いて第一アミン類を検定する方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0199432B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61274264A (ja) |
| AT (1) | ATE64012T1 (ja) |
| AU (1) | AU583598B2 (ja) |
| CA (1) | CA1293590C (ja) |
| DE (2) | DE3679441D1 (ja) |
| ES (1) | ES8705974A1 (ja) |
| NZ (1) | NZ215336A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004100936A1 (ja) * | 2003-05-19 | 2004-11-25 | Takara Bio Inc. | 治療剤 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4723022A (en) * | 1986-03-10 | 1988-02-02 | Oread Laboratories, Inc. | Substituted 2,3-naphthalenedicarboxaldehydes |
| US4758520A (en) * | 1986-03-10 | 1988-07-19 | Oread Laboratories, Inc. | Chemiluminescence method for assaying compounds containing primary amino groups using 1-cyano-2-substituted benz(f)- or naphth(f)-isoindole fluorescers |
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