JPS61267582A - 微生物の新規な駆虫性発酵生産物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の新規な化合物は、米国特許 第４，３１０，５１９号に開示されたアベルメクチン化
合物及び米国特許第３．９５０．３６０号に開示された
ミルベマイシン化合物に関する。しかしながら、本化合
物は重大な構造的差異を持ち、−先行技術の化合物から
容易に識別することができる。

本発明は新規な化学的化合物に関する。特に、それはス
トレプトマイセス・アベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉａ　ｌ　　及びストレ
プトマイセス・ヒグロスコピクス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ　）　　の菌株のプロトプラスト融合により得られ
た微生物ストレプトマイセスＭＡ−５９２０の菌株を栄
養培地中で発酵させることにより、生産される新規の巨
大ラクトン環に関する。それ故、本発明の目的はそのよ
うな新規の化合物及び微生物学的にそのような生産物を
製造する方法を提供することである。本発明の他の目的
は、発酵培地からそのような化合物の回収及び精製を提
供することである。これらの化合物は抗寄生虫及び殺虫
活性、特に駆虫、殺ダニ及び殺線虫活性を持ち、このた
め開示した化合物を含む新規な抗寄生虫性及び殺虫性組
成物を提供することが本発明の第三の目的である。本発
明のさらに他の目的は本発明の以下の記述から明らかに
なるであろう。

本発明に従って以前に記載されたことのない微生物の菌
株ストレプトミセスＭＡ−５９２０を管理された条件下
で増殖させることにより製造される新規の化合物が記載
されている。本化合物はこの中で記載するように発酵に
よって得られ、実質的に純粋な形で回収される。

分類学的研究に基づいて、これらの化合物を生産する能
力のある微生物は、微生物ストレプトマイセスの新菌株
である。培養物はメルク・アンド・コンパニー、インコ
ーホレーテッド（Ｍｅｒｃｋ　＆　Ｃｏ、、Ｉｎｃ、　
、　）、　ローウェー（Ｒａｈｗａｙ　）、ニューシャ
ーシー（Ｎ。

Ｊ、　）　　の培養コレクション中でＭ　Ａ　−５９２
０と表示されている。ここで記載した化合物を生産する
能力のあるこの培養の試料は、利用について制限を付す
ることなくメリーランド（Ｍａ、　）　２０．８５２　
、ロックビル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、）、パークローン
・ドライブ（Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、）１２３
０１のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏｌ
ｌｅｃｔｉｏｎ　）　　の永久培養コレクションに寄託
されている（登録番号ＡＴＣＣ５３１１０）。

ストレプトマイセスＭＡ−５９２０の形態学的及び培養
的特徴は以下の通りである。

Ｖニクリームないし褐色 Ａ：なし ＳＰ：なし メラニン：陰性 Ｖ：暗灰色ないし褐色 Ａ：なし ＳＰ：淡褐色の培地 メラニン：陰性 炭素原の利用 ブリダム−ゴツトリーブ（Ｐｒｉｄｈａｍ　−Ｇｏｔｔ
ｌｉｅｄ　）　　基礎培地＋１係炭素原；＋＝発育；±
＝貧弱、または不確かな発育ニー＝ネガチブ対照（炭素
原無添加）と比較して発育せず。

グルコース　　＋ アラビノース　＋ セルロース　　− フラクトース　＋ イノシトール　＋ ラクトース　　＋ マルトース　　＋ マンニトール　＋ マンノース　　＋ ラフィノース　＋ ラムノース　　＋ シュクロース　＋ キシロース　　土 類寒天） ２８℃−良好な発育と胞子形状 ３７℃−緩慢で貧弱な発育 ４２℃−発育せず ５０℃−発育せず 好気性 すべての読取りは別記せぬ限シ、２８℃で３週間後に行
った。すべての培地のｐｕは砥ぼ中性であった（６．８
〜７．２）。

色番号表示はカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏ１
ｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）　第４版−１
９５８年、コンテナー・コーポレーションーオブ・アメ
リカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐａｒａｔｉｏｎｏ
ｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　）　、シカゴ（Ｃｈｉｃａｇｏ　
）、イリノイ（ｌ１ｌｉｎｏｉｓ　）から採用した。

培養所見： （Ｖ＝栄養増殖；Ａ＝気菌糸；ｓｐ＝可溶性色素；Ｒｅ
ｖ＝裏面） 形態 胞子体はコンパクトならせん状で堅い球とナル・胞子は
吸湿性であシ、培養時間と共に胞子は癒合し、その特長
ある外観を失い、無定形の湿潤な部分となる。

色 Ａ：暗灰色、胞子形成良好 ＳＰ：黄褐色 Ｖ：裏面−クリーム色 Ａ：希小、灰白色 ＳＰ：無し Ｖ：裏面−黄褐色 Ａ：培地の色ないし暗灰色、胞子形成良好 ＳＰ：淡黄褐色 Ｖ：裏面−暗灰色 Ａ：暗灰色 ＳＰ：無し Ｖ：裏面−暗褐色 Ａ：暗灰色、濃密な胞子形成 ＳＰ：淡黄ないし褐色 前述のデータをバージエース・マニュアル・オブ・デタ
ーミネーテイブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　　第９版：ワックスマン
（Ｗａｋｓｍａｎ　）著、ザ・アクチノマイセテス（Ｔ
ｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　）第２巻（１９６
１年）：インターナショナル・ジャーナル・オブ・シス
テマテイツク・バクテリオロシー （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ″Ｊａｕｒｎａｌ°ｏｆ
　＠ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　
）　　１８巻、６８〜１８９ページ、２７９〜３９２ペ
ージ（１９６８年）：１９巻、３９１〜５１２ページ（
１９６９年）：２２巻、２６５〜３９４ページ（１９７
２年）を含む公表された記載と注意深く比較するとスト
レプトマイセス・ヒグロスコピクスと同定された細菌の
記載並びにＭＡ−５９２０の形態的及び培養的特長の間
に相関が認められる。ＭＡ−５９２０株はストレプトマ
イセス・ヒグロスコピクスの標準の記載と一致するので
ＭＡ−５９２０は既知の種ストレプトマイセス・ヒグロ
スコピクスの一菌株であると決定され、培養物にその名
前が与えられた。

しかしながら、ＭＡ−５９２０及びその二つの親株の間
には重大な相異がある。ＭＡ−５９２０はストレプトマ
イセス・ヒグロスコピクスよシよく発育し、且つ胞子を
形成する。

ＭＡ−５９２０はそれが異なる胞子休め形態及び胞子表
面の性質を持ち、暗褐色の可溶性色素を欠く点でストレ
プトマイセス・アベルミチリスと異なる。更にＭＡ−５
９２０の二次代謝産物は二つの親株によシ生産されるそ
れと異なる。最後に最も重要なことは、ＭＡ−５９２０
によって生産される生産物はいづれの親株とも異なるこ
とである。それ故、ＭＡ−５９２０はストレプトマイセ
ス・ヒグロスコピクスの新菌株であると結論される。

上の記述は本化合物の生産に使用することのできるスト
レプトマイセスＭＡ−５９２０の一菌株の例称である。

しかしながら、本発明はまた、上に記載した微生物の変
異株をも含む。例えば、自然選別によシ得られた変異株
または紫外線照射のような電離線照射若しくはニトロソ
グアニジンのような化学変異剤若しくはその他の処理を
含む変異剤によシ生産されたそれもまた、本発明の範囲
内に含まれる。

本化合物は、ストレプトマイセスＭＡ−５９２０の生産
株を用いて以下に記述する条件下で適当な水性栄養培地
による好気発酵の過程で生産される。多くの抗生物質の
生産に使用されるような水性培地は、この巨大化合物の
生産の方法に使用するのに適している。

そのような栄養培地は微生物によって同化可能な炭素原
及び窒素原並びに一般に少量の無機塩を含む。その上、
発酵培地は微生物の発育及び所望の化合物の生産に必要
な痕跡量の金属を含むことができる。これらは通常炭素
原及び窒素原の複合物中に十分な濃度で存在し、栄養原
として使用することができるが、所望なら培地に別に添
加することも勿論可能である。

一般に、糖のような炭水化物例えばブドー糖、蔗糖、マ
ルトース、乳糖、デキストラン、奮 セレロース（ｃｅｒｅｌｏｓｅ　）、　コーンミール、
オートフラワー（ｏａｔ　ｆｌｏｕｒ　）など及び殿粉
は栄養培地における適当な同化可能炭素原である。培地
中で利用される炭素原の正−確な量は部分的には培地中
の他の成分に依存するが、通常は培地の重量として０．
５〜５％の炭水化物の量が満足すべきものであることが
認められている。これらの炭素原は単独または幾つかの
炭素原を同一培地の中で組み合せて使用することができ
る。

酵母加水分解物、酵母自己消化物、酵母細胞、トマトペ
ースト、コーンミール、オートフラワー、大豆粕、カゼ
イン加水分解物、酵母エキス、コーンステイープリカー
、デイステイラーズソリスブル、綿実粕、肉エキス等の
ような種々の窒素原は本化合物の生産において、ストレ
プトマイセスＭＡ−５９２０によシ容易に同化される。

種々な窒素原は単独または組み合せで培地中重量として
０．２〜６チの範囲で使用することができる。

培地に添加することのできる栄養分中無機塩は、ナトリ
ウム、カリウム、マグ・ネシウム、アルモニウム、カル
シウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩などのよう
なイオンをもたらすことのできる通常の塩である。また
コバルト、マンガンなどのようなトレースメタルも含ま
れる。

以下において、また実施例中で記述される培地は、使用
することのできる広範囲の培地を単に例示しただけであ
シ、限定しようとするものではない。

以下の記載はストレプトマイセスＭＡ−５９２０の発育
する菌株に適した培地の実施例である。

ストレプトマイセスＭＡ−５９２０を使用する発酵は約
り０℃〜約４０℃の範囲の温度で実施することができる
。最適な結果を得るためには、これらの発酵は約２４℃
〜・約３０℃の範囲の温度で実施するのが最も便利であ
る。約２７℃〜２８℃の温度が最も好ましい。

本化合物の生産に適した栄養培地のｐｎは約５．０〜８
．５の間とすることができ、好ましくは約６．０〜７．
５の範囲である。

小規模の発酵は好ましくは、適当量の栄養培地をフラス
コに入れ、既知の滅菌方法を用い、ストレプトマイセス
ＭＡ−５９２０の胞子または栄養細胞発育物をフラスコ
に接種し綿栓をして、約２８℃の一定の室温で回転振盪
機上で９５〜３００ｒｐｍ、約２〜１０日間発酵させる
ことによシ好便に実施される。大規模で実施する場合は
、発酵培地の攪拌機及び通気装置を備えた適轟なタンク
で発酵を行うのが好ましい。栄養培地はタンクの中で調
整し、滅菌後ストレプトマイセスＭＡ−５９２０の栄養
細胞発育物を接種する。栄養培地を約２４〜３７℃の範
囲の温度で攪拌及び／または通気しながら、１〜８日間
発酵を継続する。通気の程度は発酵槽の大きさ、攪拌速
度などのような種々な要因に依存する。

一般により大規模の発酵は約９５〜５ｏ。

ｒｐｍの攪拌速度及び約２〜２０立方フイート／分（Ｃ
ＦＭ）の通気で行われる。

本発明の新規の化合物はストレプトマイセスＭＡ−５９
２０の発酵の末期において主として菌体中に含まれ、以
下に記載する方法によシそれから除かれ分離されること
ができる。

全発酵液からの新規化合物の分離及び前記化合物の回収
は、溶媒抽出並びに種々なりロマトグラフ技術及び溶媒
系を使うクロマトグラフ分画の応用によシ実施される。

本化合物は水に殆んど溶解せず、有機溶媒に可溶である
。この性質は発酵液から化合物を回収するために好便に
使用することができる。それ故、一つの回収法において
は、全発酵液をほぼ同量の有機溶媒と混合する。如何な
る有機溶媒も使用できるが酢酸エチル、塩化メチレン、
クロロホルムなどのような水に混和しない溶媒を使用す
るのが好ましい。一般に最大の回収を得るために数回の
抽出が望ましい。溶媒は本化合物と本化合物の寄生虫活
性を欠く他の物質を除去する。溶媒が水に混和しない場
合は、層を分離し有機溶媒を減圧下で蒸発する。溶媒が
水に混和する場合は、包含する水を分離するために水に
混和−しない溶媒で抽出することができる。次いでこの
溶媒を減圧下で濃縮する。残留物を好ましくはシリカゲ
ルを含むクロマトグラムカラム上に置く。カラムは所望
の化合物及び幾らかの不純物を保持し、多くの不純物、
特に非極性不純物を通過させる。カラムは塩化メチレン
またはクロロホルムのような適度な極性の有機溶媒で洗
浄して更に不純物を除き、次いで塩化メチレンまたはク
ロロホルム及び好ましくはアセトン、酢酸エチル、メタ
ノール、及びエタノールなどのような有機溶媒との混合
物で洗浄する。溶媒を蒸発し、シリカゲル、酸化アルミ
ニウム、デキストランゲルなどをり゛ロマトグラフ媒質
（ｍｅｄｉｕｍ　）　　として使用し、種々な溶媒及び
溶媒の組成物を溶離剤として使用するカラムクロマトグ
ラフ、薄層クロマトグラフ、調製用クロマトグラフ、高
圧液体クロマトグラフなどを用いて更にクロマトグラフ
を行う。薄層、高圧液体及び調製用クロマトグラフは本
化合物の存在の検出及び単離に使用することができる。

前述の技術及び当業者が知っている他の技術の使用によ
り、本化合物を含む精製された組成物が得られる。

所望の化合物の存在は種々なりロマト分画について選択
された寄生虫に対する生物活性または物理化学的特性を
分析することにより測定される。本化合物の構造は化合
物の種々なスペクトル特性、特にその核磁気共鳴、質量
、紫外部及び赤外部スペクトルを詳細に分析することに
より決定される。

これらの実験データに基づき本化合物は直前で述べた分
析データに基づいて次の構造式を持つと信じられる。

４５８．２３０４４５８．２３０５　　ｃｕＨ８４ｏ？
ＴＭＳ　　８０２．４５０８８０２．４５０８　Ｃ１１
？Ｈ５４０１０１’　（ＣｓＨｓＳｔ）ｔ６６０３８７
０６６０３８７８　Ｃ５ｏＨ４４０ｒ＋（ＣｓＨａＳｉ
）ｔ６０３３１７４６０３．３１７３　ＣわＨ３５０？
＋（ＣｓＨｓＳｉ）。

５５８．３１９７５５８．３１９７　Ｃｔ５Ｈ３ａ０５
”（ＣｓＨａＳｉ）２５３０．２６９６　５３０，２７
００　　Ｃ，、Ｈ，Ｏ，（うＨｔＳｉ化合物はジーＴＭ
Ｓ誘導体を形成する。臨界フラグメントイオン：１５１
．典型的なＣ６〜＋２Ａ　系列イオン；５７、Ｃ２５，
ニス、チル置換基からの側鎖フラグメント（ミルベマイ
シンＡｔにおける８５と比較）：５３８、分子イオンか
ら水及び全Ｃｐｓ置換基Ｃ酸として）の喪失：４５８　
（ＴＭＳ、５３０　）ＣＨ〜、。

の中性的喪失によシラクトンが得られる特徴的なＣ１！
−酸化フラグメントイオン；５１６（ＴＭＳ、６６０）
典型的な分子イオンから１４２（Ｃ１〜５）の喪失；３
９６．５３８イオンからＣ１〜５の喪失。この化合物は
ミルベマイシンＡ、の同族体であシ、Ｃ２Ｍ脂肪酸部分
に二つ少ないＣＨ，ユニットを含ｔｒ。

０ＣＨ。

ＨＲ−ＭＳ　　実測値　計算値　分子式　指　定５５８
．３１９４５５８．３１９３　ＣｓｔＨ４６０８Ｍ＋３
９８．２４５９３９８．２４５７　Ｃｔｓ　ＨＭＯ４２
６６，１８８１２６６，１８８２Ｃｓａ　Ｈヨ０゜２４
８．１４１５２４８．１４１２　Ｃ１ｓ　Ｈ艷０３１９
７．１１７６　１９７．１１７８　　Ｃ，、Ｈ電、０゜
化合物はジーＴＭＳ誘導体を形成する。臨界フラグメン
トイオン：１５１（ＴＭＳ。

２２３）及び２４８　（ＴＭＳ、３２０　）、Ｃｔｓ１
Ｃ６エポキシドを持つミルベマイシンＡ系列を示す：１
９７．１６９．２６６（ＴＭＳ、それぞれ２６９．２４
１、及び３３８）、ＣＩ？Ｍｌ＋領域に水領域の存在を
示す：４５８　（ＴＭＳ、５３０　）、Ｍ　　よりＣａ
１１〜，５の喪失に相当し、Ｃ０Ｈ□０の中性的喪失と
ラクトンの生成を指向し、Ｃ１，における酸素原子の存
在を示す特徴的な喪失である：３９８（ＴＭＳ、４７０
　）、Ｍ＋よシ水及びｃｔ〜ｓの喪失に相当し、Ｃ５に
メトキシル基の存在を示す。

５７２３３５４５７２．３３４９　Ｃｓ５ＨａｓＯａ　
　　”化合物はジーＴＭＳ誘導体を形成する。臨界イオ
ン：１５１　（ＴＭＳ、２２３）、標準のＣ６〜、２フ
ラグメント：１８３．２１１（ＴＭＳ、２５５及び２８
３）、ミルベマイシンＢ、（１５３，１８１：ＴＭＳ、
変化せず）よＪ）　３０　ａｍｕ高いＣｌ７−ｍ領域を
示し、一つの水酸基及び一つのメチレンの付加を示唆す
る：２８０（ＴＭＳ、３５２）、Ｂ、における２５０（
ＴＭＳ、変化せず）同様に３０ａｍｕ高いＣｌ３−１１
５領域：　４１２　（ＴＭＳ、　４８４）、分子イオン
からＣ，〜、及び水の喪失、同族体の化合物Ｈに対する
相似から水酸基はＣ２２に位置しておシ、これはＣ□−
酸化構造に基づく強いスペクトル及び明白に表れる特徴
的イオンを与えることに注意すべきである。

０ＣＲ８ ５−０−デメチル−２８−デオキシ−６，２８化合物は
トリーＴＭＳ誘導体を形成する。

臨界フラグメントイオン：６７０Ｍ”：４４４（ＴＭＳ
、５８８）、典型的なラクトンフラグメント（Ｍ　よ’
）”ｚｔ〜２．の喪失）；このイオンは化合物１１化合
物Ｖ及びミルベマイシンＡ２より１４　ａｍｕ少なく更
に一つのＴＭＳ基を含み、Ｃ６がメトキシル基ではなく
遊離の水酸基を持つことを示唆していることに注意すべ
きである。

６８４３８７４　６８４３８７４　Ｃ３ＱＨ５６０１０
Ｍ”５３８．２９２６　５３８．２９３０　　Ｃ５ｔＨ
ｎＯ，ｒ化合物はジーＴＭＳ誘導体を形成する。臨界フ
ラグメントイオン：５３８、Ｍ　　より水及びＣｔＳ−
アシルオキシ置換基の喪失；４５８（ＴＭＳ、５３０　
）Ｍ＋よりＣ２２〜２．の特徴的喪失（Ｃｆｉ−ヒドロ
キシミルベマイシンにおいて典型的’Ｉ　：４１４　（
ＴＭＳ、５５８　）、分子イオンよりｃ＋〜、及びＣｔ
Ｓ置換基（酸として）の喪失：３９６　（ＴＭＳ、４６
Ｂ　）、４１４よりＨ，Ｏの喪失、Ｃ２，置換基がモノ
不飽和Ｃ７脂肪酸であるミルベマイシンＡ２の同族体で
ある。

本発明の新規の化合物は、人間及び動物の健康及び農業
において駆虫剤、殺虫剤及び殺ダニ剤として重要な抗寄
生虫活性を持つ。

一般に寄生虫症として記述される疾患または疾患群は、
動物宿主に寄生虫が感染することにより起る。寄生虫症
はブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、イヌ、ネコ及び家
禽のような家畜における優勢且つ重大な経済的問題であ
る。寄生虫症の中で、線虫として記述される虫の群は種
々な種類の動物に対して広範囲且つしばしば重大な感染
を起す。上に挙げた動物に感染する線虫の最も普通の属
はへモンクス（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ　）、　トリコス
トロンギルス（Ｔｒｔｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　）
、オステルタギア（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａ　）、　ネマ
トジルス（Ｎｅｍａｔｏｄｉｒｕｓ）、り０ペリア（Ｃ
ｏｏｐｅｒｉａ　）、アスカリス（Ａｓａａｒｉａ　）
　、ブノストマム（Ｂｕｎｏｓｔｏｍｕｍ）、エーソフ
ァゴストマム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍ　）、
チャペルチア（Ｃｈａｂｅｒｔｉａ　）、トリクリス（
Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ　）　、ストロンギルス（Ｓｔｒｏ
ｎｇ）ｒｌｕｓ　）、トリコネマ（Ｔｒｉｃｈｏｎｅｍ
ａ　）％ジクチオカウルス（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓ
　）　、カピラリア（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ）、ヘテラ
キス（Ｈｅｔｅｒａｋｉｓ　）、トキソカラ（Ｔｏｘｏ
ｃａｒａ　）　、アスカリジア（Ａｓｃａｒｉｄｉａ）
、オキシラリス（０ｘｙｕｒｉｓ　）　、アシシロスト
マ（Ａｎｃｙｌｏｇｔｍａ　）　、ランシナリア（Ｕｎ
ｃｉｎａｒｉａ　）、トキサスカリス（Ｔｏｘａｓｃａ
ｒｔｓ　）　、及びバラスカリス（Ｐａｒａｓｃａｒｉ
ｓ　）である。これらのうちネマトジルス、クーペリア
及びエーソファゴストマムのような属は主に消化管を冒
し、一方へモンクス及びオステルタギアのような属は胃
の中でより優勢であシ、またジクチオカウルスのような
属は肺の中に見出される。更に他の寄生虫は心臓及び血
管、皮下及びリンパ組織などの体の他の組織及び器官に
存在することができる。寄生虫症として知られる寄生虫
感染は貧血、栄養不良、衰弱、体重減少、消化管壁並び
に他の組織及び器官に対する重大な損傷に導びき、若し
治療しないで置くと感染宿主の死に致ることもあり得る
。本発明の化合物は予期しなかったことであるが、これ
らの寄生虫に高い活性を示し、更にまたイヌにおけるジ
ロフイラリア（Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ）、饗歯類にお
けるネマトスピロイデス （Ｎｅｍａｔｏｓｐｉｒｏｔｄｅｓ　）　、シフアジア
（５ｙｐｈａｃｉａ）、アスピクルリス（Ａｓｐｉｃｕ
ｌｕｒｉｓ　）　、ダニ（ｔｉｃｋｓ　）　、ダニ（ｍ
１ｔｅｓ　）　、シラミ、ノミ、アオバエ、ヒツジにお
けるルシリア・ニス・ピー（Ｌｕｃｉｌｉａ　ｓｐ、　
）　、咬避昆虫及びウシにおけるヒポデルマ・ニス・ピ
ー（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａｓｐ、　　）、ウマにおけるガ
ストロフィルス（Ｇａ５ｔｒｏｐｈｉｌｕｓ　）　　、
及び１歯類におけるクテレブラ・ニス・ピー（Ｃｕｔｅ
ｒｅｂｒａ　ｓｐ、　）のような移動性双翅類幼虫のよ
うな動物及び鳥類の節足動物外部寄生虫に対しても活性
である。

本化合物はまた人間に感染する寄生虫に対しても有用で
ある。人間の消化管の寄生虫の最も一般的な属はアンシ
ロストマ、ネカトーＪＬ　（Ｎｅｃａｔｏｒ　）　ｓア
スカリス、ストロンギロイデス（Ｓｔｒｏｇｙｌｏｉｄ
ｅｓ　）、トリチネラ（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ　）　
、カピラリア、トリクリス及びエンテロビウス（Ｅｎｔ
ｅｒｏｂｉｕｓ　）である。

消化管以外の血液または他の組織及び器官に見出される
他の医学的に重要な寄生虫の属はブケレリア（Ｗｕｃｈ
ｅｒｅｒｉａ　）　、プルギア（Ｂｒｕｇｉａ　）−オ
ンコセル力（０ｎｃｈｏｃｅｒｃａ　）、及びロア（Ｌ
ｏａ　）　、ドラカンクルス（Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ
　）のような糸状虫及び消化管寄生虫ストロンギロイデ
ス及びトリチネラの消化管外段階である。化合物はまた
、人間に寄生する節足動物、咬避昆虫及び人間を悩ませ
る双翅類害虫に対しても有用である。

化合物はまた、ゴキブリ、ブラテラ・ニス・ピー（Ｂｌ
ａｔｅｌｌａ　）　、イガ、チネオラ・ニス・ピー（Ｔ
ｉｎｅｏｌａ　ｓｐ、　　）　、マル力ツブシムシ、ア
ツタゲナス・ニス・ピー（Ａｔｔａｇｅｎｕｓ　ｔｐ、
　）、及びイエバエ、ムスカ・ドメスチカ（Ｍｕｓｃａ
ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　）のような家庭害虫に対しても活
性がある。

化合物はまたトリポリウム・ニス・ピー（Ｔｒｉｂｏｌ
ｉｕｍ　ｓｐ、　’）　、テネブリオ・ニス・ピー　（
Ｔｅｎｅｂｒｉｏ　ｓｐ、　　）のような貯蔵穀物の昆
虫害虫及びスピデルミテス（５ｐｉｄｅｒ　ｍ１ｔｅｓ
　）・（テトラニクス・ニス・ピー（Ｔｅ　ｔ　ｒ　ａ
ｎｙｃｈｕｓ　ｓｐ、）　）　＋１アブラムシ、（アシ
ルチオシフオン （Ａｃｙｒｔｈｉｏｓｉｐｈｏｎ　）　）　、バッタの
ような移動性直列類及び植物組織に住む昆虫の幼生期に
対しても有用である。化合物は農業において重要であり
得るメロイドジン・ニス・ピー・ピー（Ｍｅｌｏｉｄｏ
ｇｙｎｅ　ｓｐｐ、　）のような土壌線虫及び植物寄生
虫の抑制のための殺線虫剤として有用である。

これらの化合物は動物の駆虫剤として使用する場合、カ
プセル、丸薬または錠剤のような単位投与形体、または
液体飲薬として経口的に投与することができる。飲薬は
、通常ベントナイトのような懸濁剤及び湿潤剤などの賦
形剤と共に水中での活性成分の溶液、懸濁液または分散
液である。一般に飲薬は消泡剤を含むこともできる。飲
薬の処方は一般にｏ、ｏｏｉ〜０．５重量％の活性化合
物を含む。

好ましい飲薬の処方は０．０１〜０．１重量％を含むこ
とができる。カプセル及び丸薬は殿粉、タルク、ステア
リン酸マグネシウムまたはリン酸二カルシウムのような
担体賦形剤と混合した活性化合物から成る。

本化合物を乾燥した固形の単位投与形体で投与すること
が望ましい時は活性化合物の所望の景を含むカプセル、
丸薬または錠剤が通常使用される。これらの投与形体は
活性化合物を適当に微粉砕した殿粉、乳糖、タルク、ス
テアリン酸マグネシウム、植物ゴムなどのような希釈剤
、充填剤、崩壊剤及び／または結合剤と共に緊密且つ均
一に混合して製造される。そのような単位投与形体は治
療される宿主動物の種類、感染の型温度及び種類並びに
宿主の体重のような要因により、その全重量及び抗寄生
虫剤の含有量の点で広範囲に変動させることができる。

活性化合物を動物飼料を通して投与する時は、飼料中に
緊密に分散するかまたはトップドレッシングとして使用
するかまたハヘレットの形態とし、それを最終飼料に添
加するかまたは随時側に給飼することができる。代りに
本発明の抗寄生虫化合物は非経口的、例えば前胃内、筋
肉内、気管内または皮下注射により動物に投与すること
ができ、この場合活性成分は液体担体賦形剤に溶解する
かまたは分散する。非経口投与のためには、活性物質は
受容し得る賦形剤、好ましくは落花生油、綿実油等の種
々な植物油と適当に混合される。

ツルケタール、グリセリン、ホルマールを使用する有機
調製物のような他の非経口用賦形剤及び水性の非経口用
処方もまた使用される。

活性化合物またはその複数化合物は投与のための非経口
用処方に溶解しまたは懸濁され、そのような処方は一般
に、活性化合物の０．００５〜５重量％を含む。

本発明の抗寄生虫剤は寄生虫症の治療及び／または予防
にその主な用途を見出すが、それらはまた他の寄生虫、
例えば家畜及び家禽におけるダニ（ｔｉｃｋｓ　）　、
シラミ、ノミ、ダニ（ｍ１ｔｅｓ　）及び他の咬齋昆虫
のような節足動物寄生虫により起る疾患の予防及び治療
に有用である。それらはまた、人間を含む他の動物に起
る寄生虫疾患の治療に有効である。

勿論、最良の結果を得るために使用される適量は、使用
する個別の化合物、治療される動物の種類及び寄生虫感
染または侵入の重篤度に依存する。一般に、我々の新規
な化合物について、動物体重Ｋｇ当り約０．００１〜１
０ｑを経口投与で与えると良い結果が得られ、その場合
、全投与量は１〜５日のような比較的短い期間内に一度
にまたは分割投与で与えられる。本発明の好ましい化合
物について体重Ｋｇ当シ約０．０２５〜０．５〜を単一
投与で投与することにより、動物においてそのような寄
生虫の優れた抑制が得られる。再感染と争わせるために
必要に応じて反復治療がなされ、それは寄生虫の種類及
び使用する農業技術に依存する。これらの物質を動物に
投与する技術は、獣医学分野で熟練した者にとって公知
である。

ここに記述する化合物を動物の飼料の成分として、また
は飲水に溶解または懸濁して投与する場合、活性化合物
またはその複数化合物は不活性の担体または希釈剤に緊
密に分散されている組成物が提供される。

不活性担体とは抗寄生虫剤と反応せず、動物に安全に投
与することができるそれを意味する。好ましくは飼料投
与のための担体は動物食料の成分であるかまたはなり得
るものである。

適当な組成物は活性成分が比較的多量存在し、動物に対
する直接の給餌または直接もしくは中間の希釈もしくは
混合工程の後に飼料に添加するのに適した飼料プレミッ
クスまたは添加剤を含む。そのような組成物て適した典
型的な担体または希釈剤は、例えばディステイラース・
ドライド・グレーンス （ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ’ｄｒｉｅｄ　ｇｒａｉｎｓ　
）　、コーンミール、シトラスミール（ｃｉｔｒｕｓ　
ｍｅａｌ　）　、発酵残渣、粉砕カキ殻、小麦廃物、モ
ラセス・ソリュブルス（ｍａｌａｓｓｅｓ　５ｏｌｕｂ
ｌｅｓ　）、コーンのコブ・ミール（ｃｏｒｎ　ｃｏｂ
　ｍｅａｌ　）　ｓエディプル・ビーン・ミル・フィー
ド（ｅｄｉｂｌｅｂｅａｍ　ｍ１ｌｌ　ｆｅｅｄ　）　
、ひき割り大豆、粉砕石灰石などを含む。活性化合物は
粉砕、攪拌、ミリング（ｍｉｌｌｉｎｇ　）又はタブリ
ング（ｔｕｍｂｌｉｎｇ　）　　のような方法で担体中
に緊密に分散される。活性化合物の約０．００５〜２．
０重量幅を含む組成物は飼料プレミックスとして特に適
している。動物に直接給飼される飼料添加剤は活性化合
物の約０．０００２〜０．３重ｉ％を含む。そのような
添加剤は寄生虫疾患の治療及び抑制のために望まれる活
性化合物の濃度の最終飼料を与える量を動物飼料に添加
する。活性化合物の所望の濃度は前述の要因並びに使用
する個別化合物により変動するが、本発明の化合物は通
常、望ましい抗寄生虫の結果を得るために０．００００
１〜０．００２％の濃度で飼料に添加される。本発明の
化合物を使用する場合、個々の化合物を単離し精製して
その形で使用することができる。代りに個々の化合物の
混合物を使用することができる。発酵液の精製によ）得
られる種々の化合物を完全に分離する必要はない。

一般に二つまたはそれ以上の化合物管含む混合物が得ら
れるが、無関係な化合物はそれから除かれており、その
ような混合物はとこで記述するように寄生虫疾患の予防
及び治療に使用することができる。そのような混合物は
一般に、等しくない比率の化合物を含むが、すべての化
合物は実質的な活性を持ち、混合物の抗寄生虫活性は正
確に測定することができる。

その上、本化合物を動物飼料に添加する場合、発酵液か
らの乾燥菌体を利用することが可能である。菌体は優勢
な活性を含み、菌体の活性の水準は測定できるから、そ
れを直接動物飼料に添加することができる。

本発明の化合物は、多くの内部寄生虫に対して低投与水
準で多くの動物に対して広範囲の活性スペクトルを持つ
。動物体重にｇ当シ約　　。

２．５りの水準で、本化合物の濃縮した混合物は、ヒツ
ジにおけるヘモンクス・コントルクス（Ｈｅａｍｏｎｃ
ｈｕｓ　ｃｏｎｔｏｒｔｕｓ　）　　ｓオスチルギア・
サーカムシンクタ（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａｃｉｒｃｕｍ
ｃｉｎｃｔａ　）　　、トリコストロンギルス・アグゼ
ー（Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　ａｘｅｉ　）
、トリコストロンギルス・フルプリホルミス （Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　ｃｏｌｕｂｒｉ
ｆｏｒｍｉｓ　）　ｓクーペリテ・ニス・ピー・ピー（
Ｃｏｏｐｅｒｉａｓｐｐ、　）及びエーソファゴストマ
ム・コロンビアヌム（Ｏｅａｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｎ
　ｃｏｌｕｍｂｉａｎｕｍ　）に対して十分な活性を持
つ。同様に、ウシのオスチルギア・オステルターゲ（Ｏ
ｓｔｅｒｔａｇｉａｏｓｔｅｒｔａｇｅ　）、トリコス
トロンギルス・アグゼー、トリコストロンギルス・フン
プリホルミス、二一ソファゴストマム・ラジアツム（Ｏ
ａｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍ　ｒａｄｉａｔｕｍ　）
　　及びジクチオカウルス・ビビパルス（Ｄｉｃｔｙｏ
ｃａｕｌｕｓｖｉｖｉｐａｒｕｓ　）に対して本化合物
の０．０４３■／Ｉ’９の低い投与量で十分に活性であ
る。その上、ウマバエの幼虫（ガストロフィルス・イン
テスチナリス（Ｇａ５ｔｒｏｐｈｉｌｕｓｉｎｔｅｓｔ
ｉｎａｌｉｓ　）　　及びガストロフィルス・ヘモロイ
ダリス（Ｇａｓ　ｔｒｏｐｈ　ｉ　ｌｕｓ　ｈａｅｍｏ
ｒｒｈｏｉｄａｌｉｓ　）　）、大きい及び小さいスト
ロンギルス及びオキシラリスに感染したウマは、本化合
物の混合濃縮物の１０■／ＫｇＣ約１重量係の活性化合
物）で治療に成功し、心臓糸状虫（ジロフィラリア・イ
ンミチス（Ｄｉｏｆｉｌａｒｉａ　１ｍｍ１ｔｉｓ　）
　）のミクロフィラリ７段階に感染したイヌは、本化合
物の混合濃縮物の１０■／に９（活性化合物の約１重量
％）の単一経口投与で治療に成功した。マウスのような
１歯類のシフアジア、ネマトスピロイデス及びアスピク
ルリスの感染は本化合物または菌体の抽出で得られる濃
縮物の経口投与によシ治療に成功した。

本発明の化合物はまた、発育または貯蔵中の農作物に被
害を与える農業害虫と争わせるのに有−用である。化合
物は噴霧剤、粉剤、エマルジョンなどのような公知の技
術を用いて発育または貯蔵中の農作物に対して、そのよ
うな農業害虫から保護するために適用される。

本発明化合物の抗寄生虫活性は、飼料、個々の化合物の
試料、化合物の混合物、濃縮抽出物などを通して予めネ
マトスピロイデス・デウビウスを３日前に感染させたマ
ウスに経口投与することによシ測定することができる。

医薬投与開始後、１１．１２及び１３日０にマウスのふ
んについてネマトスピロイデス・デウビウスの卵を試験
し、次の日マウスを犠牲に供し小腸の隣接部に存在する
虫の数を測定する。感染し医薬無投与の対照区に比較し
て顕著な卵及び虫の数の減少が活性化合物について認め
られる。

次の実施例は本発明がより十分に理解され得るために提
供される。そのような実施例は本発明を制限するものと
解釈すべきではない。

実施例１ 生産培養物の単離 生産培養物ＭＡ−５９２０はニス・アベルミチリスＭＡ
−４９９０及びニス・ヒグロスコピクスＭＡ−４８３０
のプロトプラスト融合により得られた単離法である。

ＭＡ−４９９０及びＭＡ−４８３０の凍結乾燥物を、５
４ゴの培地１を含む２５０ｒＩｔじゃま板付きエルレン
マイヤー（Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ）フラスコに無菌的に
移植し、２８℃、２２０ｒｐｍで３日間培養した。得・
られた発育物の０．５ｄを培地２の寒天斜面に移植した
。２８℃で１０日間培善後培地３の５−をＭＡ−４９９
０の斜面に無菌的に添加し、表面発育物を液体中にかき
落とした。フィッシャー・ボルテツクスージエニ−（Ｆ
ｉｓｈｅｒ　Ｖｏｒｔｅｘ　−Ｇｅｎｉｅ　）の中程度
の速度で３分間攪拌後懸濁液の２．５−を５０ゴの培地
３Ａを含む２５０ゴエルレンマイヤーフラスコに移植し
た。

ＭＡ−４８３０の種菌を同様な方法で調製し、培地３−
！たは３Ｂの５０−を含む２５０−エルレンマイヤーフ
ラスコに移植した。

２８℃、２２０　ｒｐｍで２日間培養後、各フラスコの
内容物を１５０００ｒｐｍ、４℃で１５分間の遠心分離
により回収し、培地４で２回洗浄した。各フラスコから
の洗浄細胞を１０ｒｎｌの培地４に再懸濁し、ポルテツ
クスージエニー中で中程度の速度で３分間混合した。

各々の５　ｃｃ　　の試料に５ｒＩｔの卵白リゾチーム
懸濁液（シグマ（Ｓｉｇｍａ　）　、培地４中２ｍ９／
−１０，２μフィルターを通して無菌濾過）を添加し、
転置によシ混合した。各混合物を周辺温度で６０分間培
養し、プロトプラストへの変換が完全であるかを顕微鏡
により調べた。

懸濁液をベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ　）　Ｔ　Ｊ　−
６臨床用遠心分離機で室温３０００　ｒｐｍ　５分間遠
心分離し、プロトプラストのペレットを培地４の５ｄで
１回洗浄した。各々の洗浄したペレットを５ゴの培地４
に再懸濁し、ＭＡ−４９９０及びＭＡ−４８３０のプロ
トプラスト懸濁液のそれぞれ１ゴを混合し、３０００ｒ
ｐｍｓｌＯ分間遠心分離することにより再びペレット化
した。各々のペレットを０．２ｄの培地４に懸濁し、培
地４中４０係ポリエチレングリコール６０００　（シグ
マｗ　／　ｖ　）の１．８コを添加し、転置によシ混合
した。室温で６０秒後、混合物を培地４中で５〜５０倍
に希釈し、そのｏ、　ｉ　ｒｎｔを培地５の寒天平板に
塗シつけた。２８℃で１４日間培養後、単離法を無作為
に培地２の寒天平板に移植し、２８℃で１０日間培養し
た。得られた単離法の一つをＭＡ−５９２０と指定し、
それはＭＡ−４８３０に類似するがこの単離法はよシ豊
富に胞子を形成し、より大きな黄色色素生産があるため
、更に研究のために選別を行った。

代謝物の生産発酵 ＭＡ−５９２０の一つのコロニーの一部分を５４−の培
地１を含むじゃま板のついた２５０ゴエルレンマイヤー
フラスコに移植し、２２０ｒｐｍ、２８℃で３日間振盪
した。次いでその１ゴを４４ｄの培地６または７を含む
じゃま板の無い２５０−エルレンマイヤーフラスコに移
植した。フラスコを２２Ｏｒｐｍ。

２８℃で振盪し、４日目及び８日目に各フラスコから１
０−を採取し、ベックマンＴＪ−６臨床用遠心分離機で
３００Ｏｒｐｍ、１０分間遠心分離した。各ペレットに
１０Ｉ１１ｔのメタノールを添加し、チューブで混合し
、室温で２時間後、抽出液を３００Ｏｒｐｍ、１０．分
間遠心分離することによシ透明にした。抽出液はＨＰＬ
Ｃで分析した。

実施例２ ＭＡ−５９２０の凍結乾燥物を５４−ｄの培地１を含む
２５０ゴのじゃま板のついたエルレンマイヤーフラスコ
に移植した。フラスコを２２Ｏｒｐｍ、２８℃、振幅２
インチの回転振盪機で２日間振盪した。得られる発育物
の２−を４４ｆｎｌの培地８を含むじゃま板の無い２５
０ゴエルレンマイヤーフラスコに移植した。２８℃、２
２　Ｏｒｐｍで５日間培養後、１０ｍ１を採取し、細胞
を３００　Ｏｒｐｍで遠心分離することによりペレット
化し、メタノールで抽出してＨＰＬＣで分析した。

培地１ デキストロース　　　　　　　　　　１．０２デキスト
リン（フィッシャー （Ｆｉｓｈａｒ）　）　　　　　　　　　　　１０．Ｏ
？牛肉エキス（ディフコ（］］ｆｃｏ）　）　　　３．
０５’酵母自己消化物（アルブミン（Ａｒｄａｍｉｎｅ
）ｐＨｓイースト・プロト（Ｙｅａｓｔ　Ｐｒｏｄ、）
　）　　５．ＯｔＮＺアミン（Ａｍ１ｎｅ　ｌタイプＥ
Ｃシェフイールド（５ｈａｆｆ　１ｅｌｄ）　）　　　
　　　５．０　ｆＡ４Ｓ０４−７　Ｉ（２００，０５Ｆ リン酸緩衝液　　　　　　　　　　　２ゴＣａＣ０，０
，５ｆ ｄＢ、０　　　　　　　　　　　　１０００ｄｐ■７．
０−７．２ リン酸緩衝液：　Ｋ）Ｔ２ＰＯ４９１，ＯｆＮａ　２Ｈ
ＰＯ４９５，Ｏｆ ｄＨ，０１０００ｍｇ ｐＨ７，０ 培地２ 酵母エキス（ディフコ）　　　　　４．Ｏｆ麦芽二キス
（ディフコ）　　　　１０．Ｏｆデキストロース　　　
　　　　　４・０２ｄＨ２０ＺｏｏＯｄ 寒天　　　　　　　　　　　　２０ｆ ｐ）ｌ　７．２ 培地３ トリブチイックソイブロス（ＴｒｙｐｔｉｃＳｏｙ　Ｂ
ｒｏｔｈ　）　（ディフコ）　　３０．０ｆｄＨ，０１
０００ｒｎｌ ｐ）ｌ　７．３ 培地３Ａ ０．８係のグリシンを添加した培地３ （０，２μフイルターを通して除菌した２０係溶液（ｗ
／ｖ　ｄ）（２０）としてグリシンを添加）培地３Ｂ ０．２％のグリシンを添加した培地３ （０，２μフイルターを通して除菌した２０係溶液（ｗ
／ｖ　ｄＨ，Ｏ）としてグリシンを添加）培地４ 基礎培地 蔗糖　　　　　　　　　　　１０３１ に２ＳＯ４０，２５９ 微量元素混合物Ａ　　　　　　　　２ｄ吟α２・６Ｈ２
０２，０３ｆ ｄＨ２０ｔｏ　７００ｄ 滅菌後添加、基礎培地７００−当り ＣａＣ／、溶液（３６，８Ｆ／１０００ｄ　ｄＨ２０）
１００ｍＺＩＱ（、Ｐ０４溶液ｒＯ，５Ｆ／１０００ｍ
７！ｄＢ２０）　　１００ｄＴｅ１１溶液（０，３ｆ　
）リス（Ｔｒｉｓ）Ｔ（ｃｔ＋０１グＥＤＴＡ十０．１
４ｆＮａα／１０００ｄ　ｄ）Ｔ、０、ｐＨ８，０に調
節）　　　　　　　１００ａｇ培地５ 基礎培地 蔗糖　　　　　　　　　　　　　１０３．ｔＫ２Ｓｏ、
　　　　　　　　　　　　　　　０．２５　ｔグルコー
ス　　　　　　　　　　１０２Ｌ−アスパラギン　　　
　　　　　　１．８ｆカザミノ酸（ディフコ）　　　　
　　　０．１タＭｇα２・６Ｈ２０１０，１２ｆ 微量元素混合物Ａ　　　　　　　　　２ｄｄＨ，Ｏｔｏ
　　７００ｍ１ 寒天　　　　　　　　　　　　　　２２．Ｏｆ殺菌後添
加、基礎培地７０〇−当り ＣａＣ１２溶液（２９，５７／１０００７！ｄＨ，Ｏ）
　　１００ｄＩＧ（、ＰＯ，溶液（０，５ｆ／１０００
ｄ　ｄｌ（２０）　　１００ｄＴ’ｅｓ溶液（０，３ｆ
　トリス（Ｔｒｆｓ）Ｈα＋０．１？ＥＤＴＡ　＋　０
．１４　ｆ　Ｎａα／１０００ｄ　ｄＨ，０１ｐＨ８，
０に調節）　　　　　　　　　　ｉｏｏｍ微量元微量元
素混合物酸 Ｆｅ（８０４）３　・７Ｈ２０２５０ｑＭｎαｔ’４Ｈ
ｔｏ　　　　　　　　　　　５ｏｏｒｒＩＩｉＣｕα、
、２Ｈ，０２５ｍ９ Ｃａ（１ｔ２　＠　２Ｈ，Ｏ１ｏｏｏｑ）Ｔ、ＢＯ３５
０キ （ＮＨ４）６Ｍｏ７０．４　・４Ｈ２０２０ＱＺｎＳＯ
，”　７　Ｈｔｏ　　　　　　　　　　　１００　ＱＣ
ｏ（ＮＯｓ）２　＠　６　Ｈ，０２０’？Ｏ，ＩＮ）（
Ｃｔｌｏｏｏｒｎｔ 培地６ デキストリン（フイ・ラシャ−）　　４０１デイステイ
ラース・ソルユブルス （Ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ　５ｏｌｕｂｌｅｓ　）　（グ
レイン・プロセシング・コーポレーション （Ｇｒａｉｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｃｏｒｐ、　）
　　　　７　を酵母エキス（オキソイド）５２ ｐＨ７，３ 培地７ デキストロース　　　　　　　　　　４５ｆヘフトン化
ミルク（シェフイールド （Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ）　）　　　　　　　　　　２４
’アルダミンｐＨＣイースト・プロダクツ・インコーホ
レーテッド）２．５タ ポリグリコール２０００（ダウ（Ｄｏｗ）　）２．５ｄ ｄＨｌＯ１０００ｒｎｔ ｐｔ＋　７．０ 培地８ デキストロース　　　　　　　　　７５２ペプトン化ミ
ルク（シェフイールド） １７、！Ｍ アルブミンｐＲ（イースト・プロダクツ・インコーホレ
ーテッド）　　　　　　　２．７５ｆｄＨｔｏ　　　　
　　　　　　　　　１０００Ｉｎｔｐｕ　７．２ 培地９ デキストロース　　　　　　　　２．０蚤酵母エキス（
ディフコ）２．０ カザミノ酸（ディフコ）２．０ ＫＮＯ８０，２ Ｍｇ５０４・７）（２００，０５ Ｎａ　Ｃ６Ｏ，０５ ＦｅＳＯ，・７Ｈ２００，００２５ Ｃａα２−２　Ｈ，ＯＯ，００２ ＺｎＳＯａ　’７　Ｈ２Ｏ０，００ｌ ＭｎＳＯ４６Ｈ，ＯＯ，０００５ ｐｉ　７．０　（ＮａＯＨ） 培地１０ デキストロース　　　　　　　　０．１チ可溶性殿粉（
フィッシャー）１，０ 牛肉二キス（ディフコ）０．３ アルブミンｐＨ（酵母自己消化物）０，５ＮＺ７ミンタ
イプＥＣシエフイールド）０．５ 均ｓｏ、・７　Ｈ，ＯＯ，ρθダ ＫＨｚ　ＰＯ４０，０７Ｆ２ ＮａｔＨＰ０．　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　０．（）／ヲρＣａＣＯ３簀　　　　　　　　　　
　θ黍θダｐＨ７゜０〜７、’ｌ　（ＮａＯＨ） 簀ｐ）！調節後添加 培地１１ デキストロース　　　　　θ、／≠ 可溶性殿粉Ｃフィッシャー）／、θ 牛肉エキス（ディフコ＞　　　０．１３酵母自己消化物
（アルダミンｐ■イースト・プロダクツ）　　　　　　
　θ・Ｓ ＮＺアミンタイプＥＣ：／ｘ）イールド）０．５ Ｍｇ５０．７Ｈ，Ｏｏ、ρ／！： 聞、Ｐ０４　　　　　　　　　　　　Ωρｔｇ、Ｚ＋　
ｐＨ調節後添加 実施例３ 培地調製 培地９はゝ培地組成：培地９〃で表示した成分により調
製した。ｐＨ調節後、ｉ５０＋ｄの培　　□地を各々３
本の２５０−のじゃま板のついたフラスコに分注した。

フラスコは綿栓をし、１２１℃、１６　ｐｓｉで２０分
間高圧滅菌した。

滅菌後、フラスコをオートクレーブから出し、室温まで
冷却した。

培地１０はＮ培地組成：培地１０〃で表示した成分によ
り調製した。ｐＨ調節後、５０ｍの培地を各々２５０−
のじゃま板のついていないフラスコまたは３本のじゃま
板のついたフラスコに分注した。フラスコに綿栓をし、
１２１℃、１６　ｐｓｉで２０分間高圧滅菌した。

滅菌後フラスコをオートクレーブから出し、室温まで冷
却した。フラスコは使用するまで室温に保存した。

培地１１は１培地組成：培地１１”で表示した成分によ
り調製した。ｐｍ調節及び、炭酸カルシウム添加後、５
０ｒｎｔのよく懸濁した培地を各２５０−の３本のじゃ
ま板のついた振盪フラスコに分注した。フラスコは綿栓
をし、前に記載したように高圧滅菌した。滅菌後フラス
コを室温まで冷却したＯ ＭＡ−４９９０を凍結乾燥状態で保存した。

系列Ｓ　Ｃ／／凍結乾燥チューブをこの実験に使用した
。ＭＡ−５９２０は酵母エキス０．４係、麦芽二キスｉ
、ｏｓ、デキストロース０．４％、寒天２．０係、ｐＨ
７，０の培地の斜面培養として保存した。培養の斜面は
斜面に栄養細胞を接種し斜面を十分に胞子が着生するま
で２８℃で培養することにより調製し、使用するまでこ
の培養の凍結乾燥チューブを無菌的に開放し、内容物を
培地９のフラスコに接種した。

フラスコは２８℃の恒温室におかれた振幅２インチ、２
２０ｒｐｍの往復振盪機Ｃニュー・ブランズウィック・
サイエンティフィック（Ｎｅｗ　Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ　
５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　）、モデルＧ５３）の上に乗せ
た。

培地９中で２日間培養後、この１種菌“培養物の２ｍｌ
を各Ｎ生産〃フラスコ（培地１０）に移植した。生産フ
ラスコを２８℃恒温室中の２２０　ｒｐｍ振盪機の上に
乗せた。二つのじゃま板のついたフラスコ及び二つのじ
ゃま板のついていないフラスコを４．６及び８日目に回
収し、フラスコについてこの章の後で述べる方法を用い
てミルベマイシン生産を分析した。

３、　　ＭＡ−５９２０ この培養物を含む斜面の一部を取シ、無菌的に培地１１
のフラスコへ移植した。−前述の培養と同様に、フラス
コを２８℃、恒温室中の、２２０　ｒｐｍ往復振盪機に
ニュー・ブランズウィック・サイエンティフィック、モ
デノトＧ５３）の上に乗せた。

培坤１１中で２日間培養後、この１種菌〃善後物の２−
を各１生産“フラスコ（培地１０）に移植した。生産フ
ラスコを２８℃恒温室中の２２　Ｏｒｐｍ振盪機の上に
乗せた。二つのじゃま板のついたフラスコ及び二つのじ
ゃま板のないフラスコを４．６及び８８目に回収し、フ
ラスコについてこの章の後で述べる方法を用いてミルベ
マイシン生産を分析した。

抽出方法 次の方法によりＨＰＬＣ分析用の分析液試料を調製した
。

１、二つの繰シ返しの振盪フラスコを合併したＣ例えば
、２日培養、じゃま板つきフラスコ、ＭＡ−４９９０）
。

２、発酵液の６０−をツルパルζ５ｏｒｖａｌｌ　）Ｒ
Ｃ−５遠心分離機中で９０００ｒｐｍ、２℃で、２０分
間遠心分離した。

３、上澄液を傾瀉し、０．４５μミリボア・フィルター
を通して濾過し、）ＴＰＬＣ分析に充当した。

４、細胞ペレットを３０ｍＡアセトンに再懸濁し激しく
混合した。この工程で２倍の濃縮液が得られた。

５、抽出した細胞を非冷凍ツルパル遠心分離機、モデル
ＧＬＣ−４中で３０００　ｒｐｍで、２０分間再遠心分
離した。

６．７七トン分画を傾瀉し、ＨＰＬＣ分析に充当した。

実施例４ この実験はよシ多くの物質を生産するために計画された
スケールアップ試験であった。

この発酵の条件は実施例３の振盪フラスコのデータから
外挿された。

培地組成 実施例３と同様であるが培地１０及び１１のみを使用し
た。

培地調製 培地１０を二つの部分に分けて調製した。

セＬ／　ｏ　−ス（ｃｅｒｅｌｏｓｅ　）　　を１．５
ｔの蒸留水に溶解し、三つの２ｔフラスコに分注し、綿
栓をし、１２１℃、１６　ｐｓｉで３０分間高圧滅菌し
た。滅菌したセレロースは接種時無菌的に発酵槽に添加
した。ペプトン化したミルク及びアルブミンｐ■を、８
ｔの蒸留水に懸濁し、ｐＨを７．０に調節し、１４ｔの
攪拌しているジャー・ミクロファーム（Ｍｉｃｒｏｆｅ
ｒｍ　）発酵槽Ｃニ二一・ブランズウィック・サイエン
ティフィック・モデルＭＦ−１１４）に添加し、１２１
℃、１６　ｐｓｉで９０分間高圧滅菌した。

培地１１を前に示したように調製した。更に３００−の
培地１１を各２ｔの三枚のしゃま板のあるフラスコに分
注した。２ｔのフラスコを綿栓をし、綿を金属箔でおお
い、次いで１２１℃、１６　ｐｓｉで２０分間滅菌した
。

培養物の形成 ＭＡ−５９２０の斜面の一部を取シ、無菌的に培地１１
の入った２５０ｄ、三枚のじゃま板のフラスコに移植し
た。このフラスコを実施例１で前述したように培養した
。２日間培養後この種菌培養物の１５ｍｇを２本の２ｔ
。

三枚のじゃま板のある種菌フラスコに入った培地１１に
移植した。これらのフラスコを２８℃恒温室に置いた振
幅２インチ、２２０ｒｐｍの往復振盪機【ニュー・ブラ
ンズウィック・サイエンティフィック、モデルＧ５３）
の上で２４時間培養した。この培養に続いてフラスコの
全量を培地１０を含む１４を発酵槽に無菌的に移植した
。接種に先立ちまた発酵中、発酵槽の条件は４００ｒｐ
ｍ、通気量０．３　ｖｖｍ、　２５℃に定めた。泡立ち
を抑制するために、必要に応じてポリグリコールＰ−２
０００を添加したが、添加の総量は ０．０００１％（ｖ／ｖ　）を超えなかった。

試料を１２時間間隔で発酵槽から抜き取り、ｐＢ１沈降
細胞容量、アンモニア、リン酸塩、グルコース及びミル
ベマイシン生産を試験した。発酵は３２９時間継続し、
その後回収して単離に回した。

ミルベマイシン生産物の分析は、前の実施例で述べた方
法によシ調製した試料につきＨＰＬＣにより行ったが、
例外として細胞ペレットのみを分析した。何となれば第
一の実験において細胞ペレット中に大部分の活性が認め
られたからである。また細胞ペレットに添加するアセト
ンの量を変えることによシ抽出液は必要に応じて濃縮す
ることができた。

実施例５ 培養ＭＡ−５９２０の４０＋ｄの発酵液４本から遠心分
離した細胞ペレットのアセトン抽出液を合併し、水を添
加しなから４ゴに濃縮した。次いで濃縮液を３×４−の
塩化メチレンで抽出した。抽出液を合併し、濃縮乾燥し
た。残留物１２．５ｑを１００　ｍａｌの塩化メチレン
に取り、あらかじめ塩化メチレンで平衡化したイー・メ
ルク・ローバー（Ｅ、　Ｍａｒｋ　。

Ｌｏｂａｒ　）サイズＡシリカゲル６０カラムでクロマ
トグラフを行った。クロマトグラフは１ゴ／分で段階的
グラジェントにより実施した。

グラジェントは各６０ｄの塩化メチレン；９０　：　１
０　ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸エチル　：８５　：　１
５　Ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸エチルニア　５　：　２
５　ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸エチルから成る。溶離液
の３０ｍをボイド・ボリウムとして集めた後、１３５の
１ゴ分画を集めた。

分画は次のように合併した。

分画５３〜５９を濃縮乾燥して１と表示。

分画６９〜７８を濃縮乾燥して２と表示。

分画８９〜９３を濃縮乾燥して３と表示。

分画１０４〜１１６を濃縮乾燥して４と表示。

分画１１７〜１３５を濃縮乾燥して５と表示。

試料３から化合ウニ、２８−デオキシ−６９２８−エポ
キシ−２２−ヒドロキシ−２５−メチル−２３−（１−
オキソペンチルオキシ）ミルベマイシンＢが得られた。

実施例６ 実施例５の試料４を１００　ｍＣ１のメタノールに取り
、６０℃に維持したデュポン・ゾルパックス（Ｄｕｐｏ
ｎｔ　Ｚｏｒｂａｘ　）　ＯＤ　Ｓ逆相Ｃ’１８カラム
０６ｔ６Ｘ２５ｃＩｎ上で、８５　／　１５　（ｖ／Ｉ
）メタノール／水の溶媒系を使用し、１−７分の流速で
クロマトグラフを行った。溶離液をＬＤＣスペクトロモ
ニター（Ｓｐｅｃｔｒｏｍｏｎｉｔｏｒ）■を使用し、
２４３　ｎｍで１１）ＡＵＦＳで監視した。観察された
紫外吸収に基づいて１１０分画を集めた。

分画番号３６．３分〜７．３分： 分画番号４７．９分〜９．２分； 分画番号５９．３分〜１０．３分： 分画番号７１１．３分〜１３．３分；及び分画番号８１
４．５分〜１５．８分、全ての分画を濃縮蒸発した。

分画３から化合物■（２８−デオキシ−６゜２８−エポ
キシ−２２−ヒドロキシ−２５−メチルミルベマイシン
Ｂ）が得られた。

実施例７ ＭＡ−５９２０の培養の発酵で得られた７ｔの発酵液を
、スーパーセル（５ｕｐｅｒ　−ｃｅｊ）を濾過混和剤
及びプレコート剤として使用して濾過した。６ｔのＦ液
は排棄した。しめった濾過ケーキを４ｔのアセトンでス
ラリーとし、−夜攪拌した。アセトンスラリーを濾過し
、濾過ケーキを排棄した。透明なＦ液を水を添加しなか
ら５００ｄに濃縮した。次いで、水性濃縮液を３Ｘ５０
０−の塩化メチレンで抽出した。抽出液を合併し、硫酸
ナトリウムで乾燥し、１００ｄに濃縮した。シリカゲル
フラッシュクロマトグラフ用カラムを、０．０４〜０．
０６＋ｍｎの粒径のイー・メルク・シリカゲル６０の３
２５ｔを乾燥状態で詰め、５ｐｓｉの空気圧で塩化メチ
レンで平衡化した。１０〇−の濃縮液の内５０Ｉｎｌを
シリカゲルにかけ、各段階で１．３ｔを使用する段階的
グラジェントによりクロマトグラフを実施した。

段階１、塩化メチレン 段階２．９０　：　１０　’Ｉ／Ｖ塩化メチレン：酢酸
エチル 段階３．８　ｏ　：　２　ｏ　ｖ／ｖ塩化メチレン：酢
酸エチル 段階４．７０　：　３０　Ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸エ
チル 段階５．６０　：　４０　ｖ／ｖ塩化メチレン：酢酸子
チル 段階６．５０　：　４０　：　１０　　ｖ／ｖ／ｖ塩化
メチレン：酢酸エチル：メタノール 各々約２５０ｄの３２分画を集めた。

実施例８ 実施例７の分画１６〜１９を合併し、濃縮乾燥して５０
８．６〜を収得した。残留物を２−のメタノールに取り
、３０℃に維持したデュポン・ゾルパックスＯＤＳ逆相
Ｃ１８カラム２．ｌＸ２５ｃｒｎ上で、８５　／　１５
　（ｖ／ｙ　）メタノール／水の溶媒系を用い１０ｍ６
／分の流速でクロマトグラフを行った。溶離液の流れヲ
、１ｍ＋の流路長のセルのＬＤＣ’スペクトロモニター
■を用い、０．３２ＡＵＰＳにセットして２４３　ｎｍ
　　で監視した。紫外部吸収追跡の結果に基づいて２３
分画を集めた。分画Ｎ０．５を濃縮乾燥して７０　ｒｎ
ｃｌの化合物■（２８−デオキシ−６，２８−エポキシ
−２５−エチル−２２−ヒドロキシミルベマイシンＢ）
を収得した。

実施例９ 実施例８の分画６及び７を合併し、濃縮乾燥した。残留
物を１００　ｍａｌのメタノールに取シ、６０℃に維持
したデュポン、ゾルパックスＯＤＳ逆相Ｃ１８カラム０
．９４Ｘ２５ｃｒｎ上で、８０　／　２０　（ｖ／ｙ　
）メタノール／水の各課系を用い、２ｍ／分の流速でク
ロマトグラフを行った。溶離液の流れを、０．３２　　
。

ＡＵＦＳＩＣ−６！ツトしたスペクトロモニター■を用
い２４０　ｎｍ　で監視した。紫外部吸収追跡結果に基
づいて６分画を集めた。分画Ｎｆ１４を濃縮乾燥して９
６　ｍｃｇの化合物ＩＶ（５−０−デメチル−２８−デ
オキシ−６，２８−エポキシ−２２−ヒドロキシ−２５
−メチル−２８−（１−オキソヘプテニルオキシ）ミル
ベマイシンＢ）を収得した。

実施例１０ 実施例７の分画１３〜１５を合併し、濃縮乾燥して３８
５．７’Ｖを収得した。試料を２−のメタノールに取シ
、３０℃に維持したデュポン、ゾルパックスｏＤｓ逆相
Ｃ１８カラム２、ｌＸ２５ｃ１ｎ上で、８５／１５（ｖ
／ｖ）メタノール／水の溶媒系を用い、１０ｄ／分の流
速でクロマトグラフを行った。溶離液の流れを１ｆｉＯ
流路長のセルのＬＤＣスペクトロモニタニ■を用い、０
．３２ＡＵＦＳにセットして２４０　ｎｍで監視した。

紫外部吸収追跡結果に基づいて、１１分画を集めた。分
画随５を濃縮乾燥して２３７　ｍｃｇの化合物Ｖ、２８
−デオキシ−６，２８−エポキシ−２２−ヒドロキシ−
２５−メチル−２３−（１−オキソヘプテニルオキシ）
ミルベマイシンＢを収得した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ２、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ３、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ４、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ５、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。 ６、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を 発酵させ、発酵培地から特許請求の範囲第 １項の化合物を単離することから成る該化 合物の製造法。 ７、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を 発酵させ、発酵培地から特許請求の範囲第 ２項の化合物を単離することから成る該化 合物の製造法。 ８、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を 発酵させ、発酵培地から特許請求の範囲第 ３項の化合物を単離することから成る該化 合物の製造法。 ９、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５９
   ２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を 発酵させ、発酵培地から特許請求の範囲第 ４項の化合物を単離することから成る該化 合物の製造法。 １０、炭素原、窒素原及び無機塩の中で微生物ＭＡ−５
   ９２０（ＡＴＣＣ５３１１０）を 発酵させ、発酵培地から特許請求の範囲第 ５項の化合物を単離することから成る該化 合物の製造法。 １１、特許請求の範囲第１項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １２、特許請求の範囲第２項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １３、特許請求の範囲第３項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １４、特許請求の範囲第４項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １５、特許請求の範囲第５項に記載の化合物の有効量を
   、寄生虫に感染した動物に投与す ることから成る動物における寄生虫疾患を 治療する方法。 １６、不活性担体及び特許請求の範囲第１項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療に 有用な組成物。 １７、不活性担体及び特許請求の範囲第２項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療 に有用な組成物。 １８、不活性担体及び特許請求の範囲第３項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療 に有用な組成物。 １９、不活性担体及び特許請求の範囲第４項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療 に有用な組成物。 ２０、不活性担体及び特許請求の範囲第５項に記載の化
   合物から成る寄生虫疾患の治療 に有用な組成物。 ２１、ストレプトマイセスＭＡ−５９２０ （ＡＴＣＣ５３１１０）である新規培養物。 ２２、ストレプトマイセス・アベルミチリスＭＡ−４９
   ９０及びストレプトマイセス・ ヒグロスコピクスＭＡ−４８３０のプロト プラスト融合及びそれにより得られる培養 物から所望の培養物を選択することから成 る特許請求の範囲第２１項に記載の培養物 ストレプトマイセスＭＡ−５９２０ （ＡＴＣＣ５３１１０）の調整法。