JPS61134324A - ヒト抗体ｈ鎖遺伝子の発現方法 - Google Patents
ヒト抗体ｈ鎖遺伝子の発現方法Info
- Publication number
- JPS61134324A JPS61134324A JP25497984A JP25497984A JPS61134324A JP S61134324 A JPS61134324 A JP S61134324A JP 25497984 A JP25497984 A JP 25497984A JP 25497984 A JP25497984 A JP 25497984A JP S61134324 A JPS61134324 A JP S61134324A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human antibody
- gene
- chain gene
- myeloma cell
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ａ 産業上の利用分野
本発明は、シト抗体Ｈ鎖遺伝子の発現方法に関するもの
である。更に詳しくはヒト抗体Ｈ鎖遺伝子をミエー−マ
細胞に岨み込み、そのミエローマ細胞中でヒト抗体Ｈｌ
ｌ遺伝子を発現させる方法に関するものである。
である。更に詳しくはヒト抗体Ｈ鎖遺伝子をミエー−マ
細胞に岨み込み、そのミエローマ細胞中でヒト抗体Ｈｌ
ｌ遺伝子を発現させる方法に関するものである。
ｂ 従来従者
最近、抗体遺伝子の研究が進められ、鴫乳動物、殊にヒ
トの抗体遺伝子におけるＨｍの解明も行なわれつつある
。一般ＫＨＩｉｌは抗原との結合部位である可変領域（
Ｖ領域）と、補体との結合や特定の細胞との相互作用な
どの生理活性を有している定常領域（０領域）より形成
されていることよく知られている（培鳥館発行「現代化
学４１９８１年１１月号か２〜６８頁参１１＠）。
トの抗体遺伝子におけるＨｍの解明も行なわれつつある
。一般ＫＨＩｉｌは抗原との結合部位である可変領域（
Ｖ領域）と、補体との結合や特定の細胞との相互作用な
どの生理活性を有している定常領域（０領域）より形成
されていることよく知られている（培鳥館発行「現代化
学４１９８１年１１月号か２〜６８頁参１１＠）。
一方、抗体遺伝子の核酸塩基配列及びそれの機能の解明
は、マウスの遺伝子について可成り進められており、そ
の可変領域（Ｖ）には、Ｖ遺伝子、ｂ遺伝子法びＪ遺伝
子がこの順序で並んで存在し１さらＫＶ遺伝子の上流（
５側末端）Ｋプロモーター機能を有する核酸塩基配列が
存在すること、またＪ遺伝子と定常領域（０）との閾に
、転写効率を著しく増大させる機能を有する塩基配列、
つまりエンハンサ−の存在力Ｅ推測されている。
は、マウスの遺伝子について可成り進められており、そ
の可変領域（Ｖ）には、Ｖ遺伝子、ｂ遺伝子法びＪ遺伝
子がこの順序で並んで存在し１さらＫＶ遺伝子の上流（
５側末端）Ｋプロモーター機能を有する核酸塩基配列が
存在すること、またＪ遺伝子と定常領域（０）との閾に
、転写効率を著しく増大させる機能を有する塩基配列、
つまりエンハンサ−の存在力Ｅ推測されている。
このエンハンサ−はＪ遺伝子の下流に存在し、未分化型
ではブーモーターが遠く離れているため転写効率を上げ
られないが、Ｖ−Ｊ遺伝子及びＶ−Ｄ−Ｊ遺伝子の組み
換えを起した時に発現籠となりＶ遺伝子の上流のプロモ
ーターからの転写効率を上げる機能を有し℃いると言わ
れている。
ではブーモーターが遠く離れているため転写効率を上げ
られないが、Ｖ−Ｊ遺伝子及びＶ−Ｄ−Ｊ遺伝子の組み
換えを起した時に発現籠となりＶ遺伝子の上流のプロモ
ーターからの転写効率を上げる機能を有し℃いると言わ
れている。
そしてマウスのＨ鎖遺伝子におけるエンハンサニに関し
て、その塩基配列は、最近シャ７ ｆ−（ＷａＪｔｅｒ
８ｃｈａｆｆｎａｒ ）らが明らかにし発表してい
る（ Ｏｓ目、Ｖｏｌ、３３，７２９−７４０Ｊｕｌｙ
１９８３参照）。
て、その塩基配列は、最近シャ７ ｆ−（ＷａＪｔｅｒ
８ｃｈａｆｆｎａｒ ）らが明らかにし発表してい
る（ Ｏｓ目、Ｖｏｌ、３３，７２９−７４０Ｊｕｌｙ
１９８３参照）。
また、利根用進氏らも同様にマウスのＨ鎖遺伝子のエン
ハンサ−の存在並びにその塩基配列を明らかにしている
（ ０ａ１１ 、 Ｖｏｌ、 ３３−７１７−７２８
Ｊｕｌｙ１９８３参照）。
ハンサ−の存在並びにその塩基配列を明らかにしている
（ ０ａ１１ 、 Ｖｏｌ、 ３３−７１７−７２８
Ｊｕｌｙ１９８３参照）。
このように、マクスのＨ鎖およびＬ鎖の遺伝子に関して
は、可変領域（Ｖ）、定常領域（０）の両領域に含まれ
る種々の遺伝子単位をはじめ、プロモーター、エンハン
サ−などの種々の機能を有する単位の存在が明らかにさ
れ、また一部はそれらの核酸塩基配列が決められている
。、 一方、ヒト抗体遺伝子のＨ＃Ｉについては、七の構成遺
伝子及びその機能が次第に明らかにされつつあったが、
エンハンサ−の存在は推測されていたにすぎず、その全
核酸塩基配列及びその機能を発現させる核酸塩基配列単
位九ついては未だ知られてはいなかった。
は、可変領域（Ｖ）、定常領域（０）の両領域に含まれ
る種々の遺伝子単位をはじめ、プロモーター、エンハン
サ−などの種々の機能を有する単位の存在が明らかにさ
れ、また一部はそれらの核酸塩基配列が決められている
。、 一方、ヒト抗体遺伝子のＨ＃Ｉについては、七の構成遺
伝子及びその機能が次第に明らかにされつつあったが、
エンハンサ−の存在は推測されていたにすぎず、その全
核酸塩基配列及びその機能を発現させる核酸塩基配列単
位九ついては未だ知られてはいなかった。
しかしながら、と（最近になってラビットら（Ｔ、Ｈ，
Ｒａｂｂｉｔｔｓ ｃｔ、ａｌ、）および利根用道はそ
れぞれ独立にヒト抗体遺伝子のＨ鎖中のエンハンサ−の
核酸塩基配列を報告している（ Ｎａｔｕｒ＠、 ｖｏ
ｌ、 ３０６．８０６−８０９．２２／２、Ｄｅｃｅｍ
ｂｕ １９８３ ａｎｄ Ｎａｔｕｒ＠、 ｖｏｌ、３
０７ ｅ３３４−３４０ ２６ Ｊ息ｎｕａｒｙ １９
８４参照）。
Ｒａｂｂｉｔｔｓ ｃｔ、ａｌ、）および利根用道はそ
れぞれ独立にヒト抗体遺伝子のＨ鎖中のエンハンサ−の
核酸塩基配列を報告している（ Ｎａｔｕｒ＠、 ｖｏ
ｌ、 ３０６．８０６−８０９．２２／２、Ｄｅｃｅｍ
ｂｕ １９８３ ａｎｄ Ｎａｔｕｒ＠、 ｖｏｌ、３
０７ ｅ３３４−３４０ ２６ Ｊ息ｎｕａｒｙ １９
８４参照）。
前記の如くヒト抗体Ｈ１ｌ遺伝子及び機＃ｉについて、
解明が進められているが、その発現についてまだ報告が
なされていない。
解明が進められているが、その発現についてまだ報告が
なされていない。
そこで本発明者らは、ヒト抗体Ｈ績遺伝子の発現につい
て研究を進めた結果本発明に到達した。
て研究を進めた結果本発明に到達した。
Ｃ発明の構成
すなわち、本発明はヒト抗体Ｈ鎖遺伝子をミエー−マ細
胞に岨み込み、該ミエローマ細胞中でヒト抗体Ｈ＠遺伝
子を発現させることを特徴とするヒト抗体Ｈ鎖遺伝子の
発現方法である。
胞に岨み込み、該ミエローマ細胞中でヒト抗体Ｈ＠遺伝
子を発現させることを特徴とするヒト抗体Ｈ鎖遺伝子の
発現方法である。
か−る本発明によれば、宵月なヒト抗体Ｈ鋼遺伝子をミ
エー−マ細抱に組み込むことによりそのミエローマ細胞
中でヒト抗体遺伝子が発現されるので、目的とする抗体
な育利に得ることが可能となろ＠ 殊に本発明によれば、ｌＩ鎖が付与されたヒト抗体Ｈｗ
４遺伝子を容易に得ることかできるので、その価値は甚
大である。
エー−マ細抱に組み込むことによりそのミエローマ細胞
中でヒト抗体遺伝子が発現されるので、目的とする抗体
な育利に得ることが可能となろ＠ 殊に本発明によれば、ｌＩ鎖が付与されたヒト抗体Ｈｗ
４遺伝子を容易に得ることかできるので、その価値は甚
大である。
本発明くおいて、ヒト抗体Ｈ鎖遺伝子をミニラーマ細胞
中に組み込むには、種々の方法が採用できるが、例えば
ヒト抗体ＨＭ遺伝子を動物細胞発現型ベクターに挿入し
てプラスミドを得、これを例えば大腸菌などに形質転換
し、得られた形質転換体をミニシーマ細胞とプロトプラ
スト融合させることにより行うことができる。
中に組み込むには、種々の方法が採用できるが、例えば
ヒト抗体ＨＭ遺伝子を動物細胞発現型ベクターに挿入し
てプラスミドを得、これを例えば大腸菌などに形質転換
し、得られた形質転換体をミニシーマ細胞とプロトプラ
スト融合させることにより行うことができる。
ことができる。
実施例
ヒト免疫グロブリン全領域を含む遺伝子ＨＩＧＩ（約２
１Ｋｂ）を動物細胞発ＩＬ！！ベクターｐ８Ｖ２− ｇ
ｐｔ（Ｒ，Ｏ，Ｍａｉｌｌｇｓｎａｎｄ Ｐ、 Ｂｅｒ
ｇ＋ Ｐｒｏｃ、 Ｎａ１ｌ ｍ人ｃａｄ、 ８ｃ１
． ｅυ、Ｓ、ム、１９８１参照）の制限酵素ｉｃｏ
Ｒ（ナイトに挿入し、プラスミドル８１２−Ｈ工Ｇ１を
作成した。
１Ｋｂ）を動物細胞発ＩＬ！！ベクターｐ８Ｖ２− ｇ
ｐｔ（Ｒ，Ｏ，Ｍａｉｌｌｇｓｎａｎｄ Ｐ、 Ｂｅｒ
ｇ＋ Ｐｒｏｃ、 Ｎａ１ｌ ｍ人ｃａｄ、 ８ｃ１
． ｅυ、Ｓ、ム、１９８１参照）の制限酵素ｉｃｏ
Ｒ（ナイトに挿入し、プラスミドル８１２−Ｈ工Ｇ１を
作成した。
次にこのプラスミドｐ８Ｙ２−ＨＩＧＩを大腸菌ＭＯ１
００Ｏに形質転換して得られた形質転換体を、マウスミ
ニシーマ細胞Ｎ８−１とプートプラスト融合して、プラ
スミドｐ１９Ｖ２−ＨＩＧＩをミエローマ細胞中に岨み
込んだ。得られた細胞をミコフェノール酸を含む選択培
地で約２週間培養しヒト抗体Ｈ鎖遺伝子を発現している
細胞Ｎｉ９−１−ＨＩＧＩを得た。
００Ｏに形質転換して得られた形質転換体を、マウスミ
ニシーマ細胞Ｎ８−１とプートプラスト融合して、プラ
スミドｐ１９Ｖ２−ＨＩＧＩをミエローマ細胞中に岨み
込んだ。得られた細胞をミコフェノール酸を含む選択培
地で約２週間培養しヒト抗体Ｈ鎖遺伝子を発現している
細胞Ｎｉ９−１−ＨＩＧＩを得た。
この細胞Ｎ３−１７ＨＩＧ１の蛋白レベルでの解析を行
うため Ｓメチオニンを用いた内部標識化（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｌ ｌａｂ＠ｌ ）を行った。細、＠Ｎ８−１−
Ｉ（ＩＧＩを集めＰ Ｂ ａ （ｐｈｏ＠ｐｈａｔｅ
−ｂｕｆｆ＠ｒ −５ｍ１ｌｆｉｓ）で３回洗浄し、メ
チオニンを含まない合成培地（ギズコ社Ｊｆｉ’ ）
１ｍｌに播種し、５ Ｘ Ｉ Ｏ／ ｍｌ とした。こ
れに８メチオニン６０μＣＩ（７フ一シヤム社ａ）を加
え、さらにツニカマイシン（シグマ社製）を含むものと
、含まないものを作成した。
うため Ｓメチオニンを用いた内部標識化（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｌ ｌａｂ＠ｌ ）を行った。細、＠Ｎ８−１−
Ｉ（ＩＧＩを集めＰ Ｂ ａ （ｐｈｏ＠ｐｈａｔｅ
−ｂｕｆｆ＠ｒ −５ｍ１ｌｆｉｓ）で３回洗浄し、メ
チオニンを含まない合成培地（ギズコ社Ｊｆｉ’ ）
１ｍｌに播種し、５ Ｘ Ｉ Ｏ／ ｍｌ とした。こ
れに８メチオニン６０μＣＩ（７フ一シヤム社ａ）を加
え、さらにツニカマイシン（シグマ社製）を含むものと
、含まないものを作成した。
ツニカマイシンは５ｗｇ／ｍ１の濃度で加えた。
上記２植の培地で、それぞれ００．インキュベーター内
で一８時間培養した。培養後上清とペレットに分鴫し、
上清は七のま〜、ペレットはｄ＠ｔａｒｇ＠ｎｔ で
壊し、その上清をとったものに抗ヒ）ＩｇＧ抗体を加え
一夜４℃にて放置した。
で一８時間培養した。培養後上清とペレットに分鴫し、
上清は七のま〜、ペレットはｄ＠ｔａｒｇ＠ｎｔ で
壊し、その上清をとったものに抗ヒ）ＩｇＧ抗体を加え
一夜４℃にて放置した。
次にブーディン人セファシース４Ｂ（ファルマシア社製
）の粒子と上記上清とを穐合し、４℃で一夜ゆっくり撹
拌した。プロティン人セファ０−ス４Ｂを分離し、洗浄
後８Ｄ８（ラクリル硫酸ナトリウム）、２−メルカプト
エタノールを含む染色液で１００℃２分間処還し、プ２
ティン人セファロース４Ｂに吸着された抗体分子を分離
し、８ＤＢ−ＰＡＧＥ（アクリルアミドグル電気泳動）
Ｋかけ、そのオートラジオグラフで観察したところ、糖
鎖が付与したヒト抗体Ｈ１１１Ｉ遺伝子は５４０００ダ
ルトンに、また糖鎖のないヒト抗体Ｈ墳遺伝子は５０Ｋ
に検出された。
）の粒子と上記上清とを穐合し、４℃で一夜ゆっくり撹
拌した。プロティン人セファ０−ス４Ｂを分離し、洗浄
後８Ｄ８（ラクリル硫酸ナトリウム）、２−メルカプト
エタノールを含む染色液で１００℃２分間処還し、プ２
ティン人セファロース４Ｂに吸着された抗体分子を分離
し、８ＤＢ−ＰＡＧＥ（アクリルアミドグル電気泳動）
Ｋかけ、そのオートラジオグラフで観察したところ、糖
鎖が付与したヒト抗体Ｈ１１１Ｉ遺伝子は５４０００ダ
ルトンに、また糖鎖のないヒト抗体Ｈ墳遺伝子は５０Ｋ
に検出された。
Claims (1)
- ヒト抗体Ｈ鎖遺伝子をミエローマ細胞に組み込み、該ミ
エローマ細胞中でヒト抗体Ｈ鎖遺伝子を発現させること
を特徴とするヒト抗体Ｈ鎖遺伝子の発現方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25497984A JPS61134324A (ja) | 1984-12-04 | 1984-12-04 | ヒト抗体ｈ鎖遺伝子の発現方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25497984A JPS61134324A (ja) | 1984-12-04 | 1984-12-04 | ヒト抗体ｈ鎖遺伝子の発現方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61134324A true JPS61134324A (ja) | 1986-06-21 |
Family
ID=17272525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25497984A Pending JPS61134324A (ja) | 1984-12-04 | 1984-12-04 | ヒト抗体ｈ鎖遺伝子の発現方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61134324A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6344897A (ja) * | 1986-04-14 | 1988-02-25 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | ペプチド類の生産法 |
-
1984
- 1984-12-04 JP JP25497984A patent/JPS61134324A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6344897A (ja) * | 1986-04-14 | 1988-02-25 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | ペプチド類の生産法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bengten et al. | Immunoglobulin isotypes: structure, function, and genetics | |
| ES2601882T3 (es) | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional | |
| IL268675A (en) | Humanized rodents that express heavy chains that include VL complexes | |
| JP2021137030A5 (ja) | ||
| Turqueti-Neves et al. | The extracellular domains of IgG1 and T cell-derived IL-4/IL-13 are critical for the polyclonal memory IgE response in vivo | |
| EA200400345A1 (ru) | Человеческие моноклональные антитела к интерлейкину 15 (ил-15), способ их получения и их использование, гибридома, трансфектома, экспрессионный вектор (варианты) | |
| KR930700662A (ko) | 인간화된 단클론성 항체 및 혼성 단클론성 항체 | |
| BR0306979A (pt) | Polipeptìdeo isolado, proteìna de fusão, molécula isolada de polinucleotìdeo, vetor de expressão, célula cultivada, anticorpo ou fragmento de anticorpo, e, métodos para produzir uma proteìna, para produzir um anticorpo, para estimular uma resposta imune em um mamìfero, para expandir células hematopoiéticas e progenitores de células hematopoiéticas, para detectar a presença de rna zcytor17lig e de zcytor17lig em uma amostra biológica, para matar cérlulas cancerìgenas, para inibir a proliferação induzida por zcytor17lig ou diferenciação de células hematopoiéticas e progenitoras de células hematopoiéticas, para reduzir a inflamação induzida por zcytor17lig para suprimir uma resposta inflamatória em um mamìfero com inflamação, para tratar um mamìfero acometido por uma doença inflamatória e para detectar inflamação em um paciente | |
| Cheng et al. | Extensive diversification of IgH subclass-encoding genes and IgM subclass switching in crocodilians | |
| ES2124224T3 (es) | Metodo para escrutar genotecas recombinantes. | |
| DK0749444T3 (da) | Human/dyre-faktor VIII-hybrid | |
| Markovich et al. | Arabidopsis thaliana plants with different levels of aliphatic-and indolyl-glucosinolates affect host selection and performance of Bemisia tabaci | |
| Zhang et al. | The DNA methylation status of Wnt and Tgfβ signals is a key factor on functional regulation of skeletal muscle satellite cell development | |
| Edholm et al. | Identification of Igσ and Igλ in channel catfish, Ictalurus punctatus, and Igλ in Atlantic cod, Gadus morhua | |
| EA200600554A1 (ru) | Способ получения рекомбинантных белков | |
| Hu et al. | A molecular atlas reveals the tri-sectional spinning mechanism of spider dragline silk | |
| JPS61134324A (ja) | ヒト抗体ｈ鎖遺伝子の発現方法 | |
| Zienkiewicz et al. | Deletion of psbQ’gene in Cyanidioschyzon merolae reveals the function of extrinsic PsbQ’in PSII | |
| Palmer | Rubisco surprises in dinoflagellates. | |
| CN104558181A (zh) | 靶向b淋巴瘤细胞的人源单链抗体 | |
| Acosta-Iborra et al. | An exploration of vascular cell development in mouse embryoid bodies under hypoxia through single cell RNA-seq | |
| Shoeman et al. | Cytochrome P-420: tubular aggregates from hepatic microsomes | |
| Jensen et al. | Genetic polymorphism of component C3 of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) complement | |
| Robertson | Gene rearrangement and the generation of diversity | |
| Tanaka et al. | Overproduction and rapid purification of the Escherichia coli histone-like protein, H-NS |