JPS61126031A - コロニ−形成刺激因子の製造法 - Google Patents
コロニ−形成刺激因子の製造法Info
- Publication number
- JPS61126031A JPS61126031A JP59248204A JP24820484A JPS61126031A JP S61126031 A JPS61126031 A JP S61126031A JP 59248204 A JP59248204 A JP 59248204A JP 24820484 A JP24820484 A JP 24820484A JP S61126031 A JPS61126031 A JP S61126031A
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- Japan
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- stimulating factor
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、コロニー形成刺激因子（ｃｏｌｏｎｙｓｔｉ
ｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ：以下単に、Ｃ３Ｆ
）産生細胞を培養してＣ８Ｆを製造するに当って、培地
にプロテアーゼ阻害剤を添加してなるＣ８Ｆの製造法に
関する。さらに詳しくは、プロテアーゼ阻害剤添加Ｃ８
Ｆ生産用工業的生産培地製造への利用または、Ｃ８Ｆの
工業的量産法を確立し、それによって得られたＣ８Ｆを
医薬ならびに疾病の診断に応用することを目的とした有
用な技術分野に関するものである。
ｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ：以下単に、Ｃ３Ｆ
）産生細胞を培養してＣ８Ｆを製造するに当って、培地
にプロテアーゼ阻害剤を添加してなるＣ８Ｆの製造法に
関する。さらに詳しくは、プロテアーゼ阻害剤添加Ｃ８
Ｆ生産用工業的生産培地製造への利用または、Ｃ８Ｆの
工業的量産法を確立し、それによって得られたＣ８Ｆを
医薬ならびに疾病の診断に応用することを目的とした有
用な技術分野に関するものである。
従来の技術
Ｃ８Ｆは、骨髄系幹細胞に由来する白血球に分類される
顆粒球やマクロファージ系幹細胞に作用して成熟した白
血球に分化させる体液性因子として知られている（ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅ
ｔｈｏｄｓ、ユ２ 、２５３−２８４（１９８１）等〕
またＣ８Ｆは、骨髄系幹細胞を顆粒球やマクロファージ
等の白血球に分化誘導せしめる作用を有することから、
例えば癌患者等の白血球減少症に対する治療薬または種
々の感染症の予防薬として有用な生理迅性物質である。
顆粒球やマクロファージ系幹細胞に作用して成熟した白
血球に分化させる体液性因子として知られている（ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅ
ｔｈｏｄｓ、ユ２ 、２５３−２８４（１９８１）等〕
またＣ８Ｆは、骨髄系幹細胞を顆粒球やマクロファージ
等の白血球に分化誘導せしめる作用を有することから、
例えば癌患者等の白血球減少症に対する治療薬または種
々の感染症の予防薬として有用な生理迅性物質である。
さらにこのＣ８Ｆは、インビトロ生成量に起因するＣ８
Ｆ増大症または減少症の診断用試薬として有用である。
Ｆ増大症または減少症の診断用試薬として有用である。
従来より、Ｃ８Ｆの有用性が期待され細胞を用いて培養
系でＣ８Ｆを生産させようとするときその培地には動物
血清或は血清成分を添加しておくことが必要であるが、
血清を用いる場合には血清自体のロットの同一性を欠く
欠点があり、さらに血清を使用することなくＣ８Ｆ生産
細胞を培養せしめてもＣ８Ｆの生産は殆んど起らないか
、著しく低下するものであった。
系でＣ８Ｆを生産させようとするときその培地には動物
血清或は血清成分を添加しておくことが必要であるが、
血清を用いる場合には血清自体のロットの同一性を欠く
欠点があり、さらに血清を使用することなくＣ８Ｆ生産
細胞を培養せしめてもＣ８Ｆの生産は殆んど起らないか
、著しく低下するものであった。
発明が解決しようとする問題点
Ｃ８Ｆの生産を高めるために動物血清を培地に添加した
場合、血清中に含まれる物質と生産されたＣ８Ｆとを、
完全に分離することは極めて困難であると同時に培養時
添加する血清はロットによる製品のバラツキが多く、一
定した培養成績が得られないことなどの問題点があった
。
場合、血清中に含まれる物質と生産されたＣ８Ｆとを、
完全に分離することは極めて困難であると同時に培養時
添加する血清はロットによる製品のバラツキが多く、一
定した培養成績が得られないことなどの問題点があった
。
より純粋にＣ８Ｆを単離しようとするならば生産培地へ
の血清の添加による細胞培養法は好°ましくなく、しか
し血清無添加での細胞培養に、おいてはＣＳＦの産生が
少ないかまたは産生されなくなる欠点がある。
の血清の添加による細胞培養法は好°ましくなく、しか
し血清無添加での細胞培養に、おいてはＣＳＦの産生が
少ないかまたは産生されなくなる欠点がある。
問題点を解決するための手段
本発明者等は、培地への添加物の化学的性質が明らかで
あればＣ８Ｆを含む培養液から該添加物を分別除去する
ことはかなり容易になるの ゛で、血清又は血清成分
以外の組成の明確なＣ８Ｆ産生促進物質（プロテアーゼ
阻害剤）を見出し、これをＣ８Ｆ生産用培地に添加して
培養することにより解決した。
あればＣ８Ｆを含む培養液から該添加物を分別除去する
ことはかなり容易になるの ゛で、血清又は血清成分
以外の組成の明確なＣ８Ｆ産生促進物質（プロテアーゼ
阻害剤）を見出し、これをＣ８Ｆ生産用培地に添加して
培養することにより解決した。
すなわち、本発明は、Ｃ８Ｆ産生細胞の培養において、
その培地にプロテアーゼ阻害剤を添加することを特徴と
するＣ８Ｆの製造法に関するものである。
その培地にプロテアーゼ阻害剤を添加することを特徴と
するＣ８Ｆの製造法に関するものである。
作用
本発明方法によってプロテアーゼ阻害剤を無血清培地に
含有させればＣ８Ｆの産生は高まり培地に血清を用いた
場合と同等またはそれ以上にＣ８Ｆの産生が可能になっ
た。
含有させればＣ８Ｆの産生は高まり培地に血清を用いた
場合と同等またはそれ以上にＣ８Ｆの産生が可能になっ
た。
次に本発明方法で使用する諸態材料は次の如（である。
（ａ）Ｃ８Ｆ産生細胞株として、
１）ヒト肺癌細胞（ＴＬＣ−９Ａ）
２）ヒト腎癌細胞（ＴＲＣ−２９Ｒ）
３）その他のＣ８Ｆ産生株
などが使用できる。
ま−ｊＴＬｃ−９Ａは、下記性質を有するヒト肺癌組織
由来のヒト−Ｃ３Ｆ産生ヒト株化細胞である。
由来のヒト−Ｃ３Ｆ産生ヒト株化細胞である。
■形態：上皮？ＩｉＡ胞様
■染色体数：高４倍体域である染色体数１１７本のモー
ダル・ナンバーを示すことを特徴とする染色体数の分布
モード ■継代培養：無限な継代培養 ■機能的特徴：ヒトーＣ８Ｆ産生 ■細胞増殖性：単層シート状の増殖性を示し、特にＲＰ
ＭＩ−１６４０＋５〜２０％牛脂児血清含有堵地におい
て増殖性良く、ポピュレイション・ダブリング・タイム
（Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ＤｏｕｂｌｉｎｇＴｉｍｅ）
は３７±７時間である。
ダル・ナンバーを示すことを特徴とする染色体数の分布
モード ■継代培養：無限な継代培養 ■機能的特徴：ヒトーＣ８Ｆ産生 ■細胞増殖性：単層シート状の増殖性を示し、特にＲＰ
ＭＩ−１６４０＋５〜２０％牛脂児血清含有堵地におい
て増殖性良く、ポピュレイション・ダブリング・タイム
（Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ＤｏｕｂｌｉｎｇＴｉｍｅ）
は３７±７時間である。
またＴＲＣ−２９Ｒは、下記性質を有するヒト腎臓癌組
織由来のヒト−Ｃ３Ｆ産生ヒト株化細胞である。
織由来のヒト−Ｃ３Ｆ産生ヒト株化細胞である。
■形ｇ＝上皮細胞様
■染色体数：高３倍体域である染色体数７４本のモーダ
ル・ナンバ、−を示すことを特徴とする染色体数の分布
モード ■継代培養：無限な継代培養 ■機能的特徴：ヒトーＣ３Ｆ産生 ■細胞増殖性： 細胞の増殖が進み、飽和状態になると重層状に増殖する
傾向が見られる。特に、５〜２０多牛脂児血清を含むＲ
ＰＭＩ−１６４０培地において増殖性床く、ポピュレイ
ションダブリング・タイムは２９±６時間である。
ル・ナンバ、−を示すことを特徴とする染色体数の分布
モード ■継代培養：無限な継代培養 ■機能的特徴：ヒトーＣ３Ｆ産生 ■細胞増殖性： 細胞の増殖が進み、飽和状態になると重層状に増殖する
傾向が見られる。特に、５〜２０多牛脂児血清を含むＲ
ＰＭＩ−１６４０培地において増殖性床く、ポピュレイ
ションダブリング・タイムは２９±６時間である。
できる。
イーグル・ＭＥＭ（Ｅ−ＭＥＭ）、
アルファーＭＥＭ（α−ＭＥＭ）、
ダルベツコ・ＭＥＭ（ＤＭＥ ）、
イスコブ培地（ＩＭＤＭ）、
フィッシャー培地、
ブレース培地、
マツコイ・５Ａ培地、
１９９培地、
ハム・Ｆ−１０培地、
ハム・Ｆ−１２培地、
ＲＰＭＩ−１６４０培地。
ウェイマウス培地、
よい。
上記培地中Ｃ８Ｆ生産用培地としてＲＰＭＩ−１６４０
培地（第１表）およびＣ８Ｆの活性測定用培地としてα
−ＭＥＭ培地（第２表）が適当である。
培地（第１表）およびＣ８Ｆの活性測定用培地としてα
−ＭＥＭ培地（第２表）が適当である。
（ｃ） 血清としては、牛胎児血清（Ｆ’Ｃ３）（米
国ＧＩＢＣｏ社！！りおよび馬血清（米国ＧＥＢＣｏ紅
製）が用いられる。
国ＧＩＢＣｏ社！！りおよび馬血清（米国ＧＥＢＣｏ紅
製）が用いられる。
（ｄ） 塩ａ溶液としては、リン酸緩衝生理食塩水（
ＰＢＳ）（マグネシウムおよびカルシウムを含まない）
を使用した。
ＰＢＳ）（マグネシウムおよびカルシウムを含まない）
を使用した。
（ｅ） 培養条件
Ｃ３Ｆ生産用培地１ｒｎｔ当り、Ｃ８Ｆ産生細胞株の１
種を１０４〜ＩＯ６個の濃度に調製し、例えばこの１〜
ｌＯ−を３７℃の温度、５チＣＯ２混合気相、１００％
湿度の培養条件下、２〜１０日間培養すればよい。
種を１０４〜ＩＯ６個の濃度に調製し、例えばこの１〜
ｌＯ−を３７℃の温度、５チＣＯ２混合気相、１００％
湿度の培養条件下、２〜１０日間培養すればよい。
用される。
動物組織由来：
Ｃ１−プロティ、ナーゼ インヒビターα２−マイクロ
グロブリン オボインヒビター ウシ膵臓トリプシンインヒビター ダイズトリプシン インヒビター リママメ インヒビター ナンキンマメ インゲンマメ マングマメ フジマメ タチナタマメ フジマメ等 ポテトインヒビター 微生物由来： ストレプトミセスズブチリシン インヒビター（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ５ｕｂｔｉｌｉａｉｎ Ｉｎｈｉ
ｂｉｔｏｒ ＋ Ｓ−８Ｉ ）ブラスミノストレプチン
（Ｐｌａａｍｉｎｏｓｔｒｅｐｔｉｎ ）上記のうち特
に好ましいプロテアーゼ阻害剤として次の如きものが挙
けられる。
グロブリン オボインヒビター ウシ膵臓トリプシンインヒビター ダイズトリプシン インヒビター リママメ インヒビター ナンキンマメ インゲンマメ マングマメ フジマメ タチナタマメ フジマメ等 ポテトインヒビター 微生物由来： ストレプトミセスズブチリシン インヒビター（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ５ｕｂｔｉｌｉａｉｎ Ｉｎｈｉ
ｂｉｔｏｒ ＋ Ｓ−８Ｉ ）ブラスミノストレプチン
（Ｐｌａａｍｉｎｏｓｔｒｅｐｔｉｎ ）上記のうち特
に好ましいプロテアーゼ阻害剤として次の如きものが挙
けられる。
ダイズトリプシン インヒビター（’７−シングトン製
） リママメ インヒビター（ワーシングトン製） ストレプトミセスズブチリシン インヒビター ブラスミノストレプチン（和光紬薬！！りα１−ブロテ
イナーゼ インヒビター （ＳＩＧＭＡ展） これらのインヒビターは適当な濃度にＣ８Ｆ並生用培地
、例えばＲＰＭＩ−１６４０培地（第１表）に溶解した
後０．２２μｍのメンブランフィルタ−を通して滅菌し
て使用した。
） リママメ インヒビター（ワーシングトン製） ストレプトミセスズブチリシン インヒビター ブラスミノストレプチン（和光紬薬！！りα１−ブロテ
イナーゼ インヒビター （ＳＩＧＭＡ展） これらのインヒビターは適当な濃度にＣ８Ｆ並生用培地
、例えばＲＰＭＩ−１６４０培地（第１表）に溶解した
後０．２２μｍのメンブランフィルタ−を通して滅菌し
て使用した。
またこれらのインヒビターの添加量とじては、少なくと
もインヒビターの添加により生産性を改善させるもので
あり、好ましくは０．００１％以上添加すればよ（、こ
れ以上添加することは何んら限定されるものではないが
、通常５％程度まで添加すればよい。
もインヒビターの添加により生産性を改善させるもので
あり、好ましくは０．００１％以上添加すればよ（、こ
れ以上添加することは何んら限定されるものではないが
、通常５％程度まで添加すればよい。
さらに、このような条件下において培養した後、常法に
より目的物のＣ８Ｆを精製、回収すればよい。回収に当
っては、一般にゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィ
ー、吸着クロマトグラフィーなどの手段を用いて行なえ
ばよい。
より目的物のＣ８Ｆを精製、回収すればよい。回収に当
っては、一般にゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィ
ー、吸着クロマトグラフィーなどの手段を用いて行なえ
ばよい。
第１表
第 ２ 表
文献： Ｓ ｔａｎｎｅｒｓ、 Ｃ，Ｐ、 ｅｔ ａｌ
、＊ Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＋２
３０：５２（１９７１）。
、＊ Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＋２
３０：５２（１９７１）。
実施例
次に実施例を掲げて本発明を説明するが、これに限定さ
れるものではない。
れるものではない。
実施例１゜
（ａ） 培養方法
ヒトＣ３Ｆ産生細胞ＴＲＣ−２９Ｒ株の培養は、１０％
牛脂児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地を用い、Ｉ
Ｘ １ （Ｐ／ｙｄの細胞密度でコーニング社製組織培
養用フラスコ（◆２５１００ ’）に５ゴ播種し、３７
℃、５％Ｃｏ２混合気相、１００％湿度の培養条件でｌ
ｔ日間培養し、細胞を飽和増殖さチ湿度の培養条件で６
日間培養した。培養液を採取し、０．２２μｍのメンブ
ランフィルタ−（ミリボア社製）を通して細胞および細
胞破片を除去した後培養液のＣ８Ｆ活性を測定した。
牛脂児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地を用い、Ｉ
Ｘ １ （Ｐ／ｙｄの細胞密度でコーニング社製組織培
養用フラスコ（◆２５１００ ’）に５ゴ播種し、３７
℃、５％Ｃｏ２混合気相、１００％湿度の培養条件でｌ
ｔ日間培養し、細胞を飽和増殖さチ湿度の培養条件で６
日間培養した。培養液を採取し、０．２２μｍのメンブ
ランフィルタ−（ミリボア社製）を通して細胞および細
胞破片を除去した後培養液のＣ８Ｆ活性を測定した。
（ｂ）Ｃ３Ｆアツセイ方法
マウス骨髄細胞を用いたコロニー形成法仁保の方法に従
いメチルセルローズを用いる下記の方法で行った。
いメチルセルローズを用いる下記の方法で行った。
２．２チメチルセルローズ／α−ＭＥＭ １．６ｔｄ
ウマ血清 ０．８ｄマウス骨
髄細胞懸濁液／α−ＭＥＭ ０．８ｒｎｔ被験サン
プルまたはＣ８Ｆ標準液 ０．８ｍ７！ ’メチ
ルセルローズはダウ社製（Ｄｏｗχα−ＭＥＭは７０−
社Ｍ （Ｆ ｌｏｗ）、ウマ血清はギプコ社製（ＧＩＢ
ＣＯ）（＋２８に８０２４）Ｃ８Ｆ’標準液はギブコ社
製（ＧＩＢＣＯ）ＧＣＴ−ＣＭを使用した。またマウス
骨髄細胞は静岡実験動物農業協同組合より購入した雄性
７週令のＩＣＲを使用し、大腿骨骨髄の単核球を分離し
、α−ＭＥＭに懸濁して５×１０５２４−に調整した。
ウマ血清 ０．８ｄマウス骨
髄細胞懸濁液／α−ＭＥＭ ０．８ｒｎｔ被験サン
プルまたはＣ８Ｆ標準液 ０．８ｍ７！ ’メチ
ルセルローズはダウ社製（Ｄｏｗχα−ＭＥＭは７０−
社Ｍ （Ｆ ｌｏｗ）、ウマ血清はギプコ社製（ＧＩＢ
ＣＯ）（＋２８に８０２４）Ｃ８Ｆ’標準液はギブコ社
製（ＧＩＢＣＯ）ＧＣＴ−ＣＭを使用した。またマウス
骨髄細胞は静岡実験動物農業協同組合より購入した雄性
７週令のＩＣＲを使用し、大腿骨骨髄の単核球を分離し
、α−ＭＥＭに懸濁して５×１０５２４−に調整した。
上記混合液を３枚の３５＋ｏ＋径プラスチツクプツシユ
に１−ずつ分注し３７℃、５１ ＣＯ２混合気相、１０
０％湿度下で７日間培養した後、２０個以上の細胞から
なる細胞集団を１コロニーとみなして算定し、上記条件
で１コロニーを形成させるＣ８Ｆ活性を１単位（ロ）と
した。
に１−ずつ分注し３７℃、５１ ＣＯ２混合気相、１０
０％湿度下で７日間培養した後、２０個以上の細胞から
なる細胞集団を１コロニーとみなして算定し、上記条件
で１コロニーを形成させるＣ８Ｆ活性を１単位（ロ）と
した。
Ｃ３Ｆの活性はいずれも３枚のプッシュの平均値で算出
した。
した。
ＴＲＣ−２９Ｒ株のＣ３Ｆ生産性に対するリママメ イ
ンヒビターの添加効果を示す実験結果は第１図妊示す通
りで、無添加区に比べて０，１チ以上の添加において充
分なＣ３Ｆ生産性が改善されたものであった。
ンヒビターの添加効果を示す実験結果は第１図妊示す通
りで、無添加区に比べて０，１チ以上の添加において充
分なＣ３Ｆ生産性が改善されたものであった。
実施例２゜
ヒ）Ｃ８Ｆ産生細胞のＴＬＣ−９Ａ株を用い、培養培地
にリママメインヒビターを添加する代りにダイズ イン
ヒビクーを使用した他は実施例１と同様に実施した。
にリママメインヒビターを添加する代りにダイズ イン
ヒビクーを使用した他は実施例１と同様に実施した。
ＴＬＣ−９Ａ株のＣ８Ｆ生産性に対するダイズインヒビ
ターの添加効果を示す実験結果は第２図に示した。
ターの添加効果を示す実験結果は第２図に示した。
実施例３゜
各種プロテアーゼ阻害剤の種類およびその添加量とＣ３
Ｆ生産量との関係を第３表に示した。
Ｆ生産量との関係を第３表に示した。
発明の効果
本発明方法の実施によって得られる効果は次の如くであ
る。
る。
（１） ヒトＣ８Ｆを大量に製造するための方法のう
ちで、Ｃ８Ｆ産生細胞を大量に培養して培養液を原料に
する方法は最も有力な手段と考えられるが、培地に血清
を添加しなければならない問題があった。
ちで、Ｃ８Ｆ産生細胞を大量に培養して培養液を原料に
する方法は最も有力な手段と考えられるが、培地に血清
を添加しなければならない問題があった。
しかし、本発明により血清を添加しなくともＣ３Ｆの生
産が可能となるとともに、培養液からのＣ８Ｆの分離精
製が飛躍的に容易になり、より純度の高いＣ８Ｆ’の製
造が可能になった。
産が可能となるとともに、培養液からのＣ８Ｆの分離精
製が飛躍的に容易になり、より純度の高いＣ８Ｆ’の製
造が可能になった。
Claims (6)
- （１）コロニー形成刺激因子産生細胞の培養において、
その培地にプロテアーゼ阻害剤を添加することを特徴と
するコロニー形成刺激因子の製造法。 - （２）前記プロテアーゼ阻害剤が、動物組織由来、植物
組織由来または微生物由来のプロテアーゼ阻害剤である
特許請求の範囲第１項記載の製造法。 - （３）動物組織由来プロテアーゼ阻害剤が、α＿１−プ
ロテイナーゼインヒビター、α＿２−マクログロブリン
、オボインヒビターまたはウシ膵臓トリプシンインヒビ
ターである特許請求の範囲第２項記載の製造法。 - （４）植物組織由来プロテアーゼ阻害剤が、ダイズトリ
プシンインヒビター、リママメインヒビター、またはポ
テトインヒビターである特許請求の範囲第２項記載の製
造法。 - （５）微生物由来プロテアーゼ阻害剤が、ストレプトミ
セスズブチリシンインヒビターまたはブラスミノストレ
プチンである特許請求の範囲第２項記載の製造法。 - （６）前記のプロテアーゼ阻害剤を０．００１〜５重量
％含む前記第１項ないし第５項のいずれかに記載の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59248204A JPS61126031A (ja) | 1984-11-26 | 1984-11-26 | コロニ−形成刺激因子の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59248204A JPS61126031A (ja) | 1984-11-26 | 1984-11-26 | コロニ−形成刺激因子の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61126031A true JPS61126031A (ja) | 1986-06-13 |
| JPS6238325B2 JPS6238325B2 (ja) | 1987-08-17 |
Family
ID=17174738
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59248204A Granted JPS61126031A (ja) | 1984-11-26 | 1984-11-26 | コロニ−形成刺激因子の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61126031A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6360010U (ja) * | 1986-10-07 | 1988-04-21 | ||
| JP2002515454A (ja) * | 1998-05-20 | 2002-05-28 | エラスムス ユニフェルシテイト ロッテルダム | 炎症または掻痒の予防または治療方法および手段 |
-
1984
- 1984-11-26 JP JP59248204A patent/JPS61126031A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6360010U (ja) * | 1986-10-07 | 1988-04-21 | ||
| JPH0519546Y2 (ja) * | 1986-10-07 | 1993-05-24 | ||
| JP2002515454A (ja) * | 1998-05-20 | 2002-05-28 | エラスムス ユニフェルシテイト ロッテルダム | 炎症または掻痒の予防または治療方法および手段 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6238325B2 (ja) | 1987-08-17 |
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