JPS6087791A - 海苔の細胞融合方法 - Google Patents
海苔の細胞融合方法Info
- Publication number
- JPS6087791A JPS6087791A JP58194726A JP19472683A JPS6087791A JP S6087791 A JPS6087791 A JP S6087791A JP 58194726 A JP58194726 A JP 58194726A JP 19472683 A JP19472683 A JP 19472683A JP S6087791 A JPS6087791 A JP S6087791A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fusion
- laver
- seaweed
- cell
- cell fusion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/14—Plant cells
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は海苔の細胞融合方法、更に詳しくは、海苔の糸
状体より放出される殻胞子を細胞膜融合させる方法に関
する。
状体より放出される殻胞子を細胞膜融合させる方法に関
する。
近年、遺伝子工学的手法としての細胞融合に関する研究
開発が盛んに行われるようになり、陸上植物においては
既に実用化の段階にまで成功した例もみられている。
開発が盛んに行われるようになり、陸上植物においては
既に実用化の段階にまで成功した例もみられている。
しかし、一方海藻類（アマノリ類も含む）においては現
在までのところ細胞融合についての成功例は未だ報告さ
れていない。
在までのところ細胞融合についての成功例は未だ報告さ
れていない。
このような事情は、陸上植物においては市販の酵素剤（
例えばセルラーゼ・オノヅヵ、ペクトリアーゼ、マセロ
チーム）を用いて節単にプロトプラストをＪｉｄ製でき
るが海藻類、勅にアマノリ類ではそれの組織を構成して
いる・同格成分である多糖類が上述したような酵素剤で
処理しても健全な状態でプロトプラスト化されないこと
にへ因している。
例えばセルラーゼ・オノヅヵ、ペクトリアーゼ、マセロ
チーム）を用いて節単にプロトプラストをＪｉｄ製でき
るが海藻類、勅にアマノリ類ではそれの組織を構成して
いる・同格成分である多糖類が上述したような酵素剤で
処理しても健全な状態でプロトプラスト化されないこと
にへ因している。
すなわぢ、アマノリ類の組織を構成している多糖類はキ
シラン、マンナン及びボルフイランがら成っており、特
にに、■胞壁は弛固な繊維状に６形成されたキシランか
ら成っているので上記酵素剤によっては加水分解されな
いからである。因に、現在のところ上記３種の多糖類に
対して加水分解能を合わせ持つ酵素剤についても報告ば
みられない。
シラン、マンナン及びボルフイランがら成っており、特
にに、■胞壁は弛固な繊維状に６形成されたキシランか
ら成っているので上記酵素剤によっては加水分解されな
いからである。因に、現在のところ上記３種の多糖類に
対して加水分解能を合わせ持つ酵素剤についても報告ば
みられない。
上述したように、海苔の組織を酵素で処理することによ
り健全なプロトプラストを調製することが非富に困難で
ある現状に鑑み、本発明者は海苔の生活史において糸状
体から放出されてまもない、直径ｌＯ〜１３ミクロン程
度のグニャグニャしたアメーバ−状の細胞である殻胞子
に着目し、研究した結果、この殻胞子を融合誘導物質で
処理すると細胞膜融合が行われることの知見を得て本発
明をなすに至った。
り健全なプロトプラストを調製することが非富に困難で
ある現状に鑑み、本発明者は海苔の生活史において糸状
体から放出されてまもない、直径ｌＯ〜１３ミクロン程
度のグニャグニャしたアメーバ−状の細胞である殻胞子
に着目し、研究した結果、この殻胞子を融合誘導物質で
処理すると細胞膜融合が行われることの知見を得て本発
明をなすに至った。
したがって、本発明は上記殻胞子を用いて海苔の細胞融
合を行うだめの手法を提供することを目的とする。
合を行うだめの手法を提供することを目的とする。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明は、海苔の糸状体より放出される殻胞子を融合誘
導物質で処理して細胞膜融合させることを特徴とする。
導物質で処理して細胞膜融合させることを特徴とする。
本発明で細胞融合に用いる殻胞子は、海苔の生活史にお
いてノリ網に４１着して発芽して仮相を生じ、細胞膜を
形成し、分裂増殖して海苔葉体になるものであって、細
胞壁を形成する前の段階である殻胞子は、海苔葉体から
細胞壁を除去したプロトプラストと同様な形態にあるも
のと考えられる。
いてノリ網に４１着して発芽して仮相を生じ、細胞膜を
形成し、分裂増殖して海苔葉体になるものであって、細
胞壁を形成する前の段階である殻胞子は、海苔葉体から
細胞壁を除去したプロトプラストと同様な形態にあるも
のと考えられる。
一般に、陸上植物における細胞融合に関する報告による
と、セルラーゼのような酵素で処理して得られるプロト
プラストは高張溶液中で処理しないと破裂してしまうこ
とから、０．４〜０．７Ｍのマンニトールもしくはソル
ビトールを添加した高張溶液で処理することが必要とさ
れている。
と、セルラーゼのような酵素で処理して得られるプロト
プラストは高張溶液中で処理しないと破裂してしまうこ
とから、０．４〜０．７Ｍのマンニトールもしくはソル
ビトールを添加した高張溶液で処理することが必要とさ
れている。
しかし、このことは細胞融合させたものを再生させる場
合、培養液を高張にして培養することになるのでその際
プロトプラストの外液の浸透圧が高くなってプロトプラ
スト表面の細胞膜が何らかの障害を受けて止宿な状態で
の生育を不可能にする要因ともなる。
合、培養液を高張にして培養することになるのでその際
プロトプラストの外液の浸透圧が高くなってプロトプラ
スト表面の細胞膜が何らかの障害を受けて止宿な状態で
の生育を不可能にする要因ともなる。
ところが、本発明で細胞融合に用いる殻胞子は、自然状
態では糸状体から放出された後海水中で浮遊し°（ノリ
網に付着することから理解されるように、マンニトール
やソルビトールを添加し、ない培養液でもそれ自体破裂
することがないので、上述したような生育上の支障がみ
られない特性を有する。
態では糸状体から放出された後海水中で浮遊し°（ノリ
網に付着することから理解されるように、マンニトール
やソルビトールを添加し、ない培養液でもそれ自体破裂
することがないので、上述したような生育上の支障がみ
られない特性を有する。
海苔の糸状体から放出される殻胞子を人工的に得るには
、成熟した糸状体を人工海水中で通気攪拌下に培養して
殻胞子を放出させ（３〜４日で放出する）、ついで殻胞
子を含有する培養液を遠心分離して残渣を採取し、この
残渣を適量の滅菌人工海水を加えて殻胞子の懸濁液を開
裂するとよい。
、成熟した糸状体を人工海水中で通気攪拌下に培養して
殻胞子を放出させ（３〜４日で放出する）、ついで殻胞
子を含有する培養液を遠心分離して残渣を採取し、この
残渣を適量の滅菌人工海水を加えて殻胞子の懸濁液を開
裂するとよい。
次に、このようにして得られた殻胞子の懸濁液を用いて
細胞融合を行うには、該懸濁液をホールスライドグラス
上に滴下し、これに融合誘導物質、例えばポリエチレン
グリコールの溶液（１５〜２０％ｗ ｔ ／ ｖｔ ｔ
） 、高分子デキストラン硫酸、高濃度も「ｊ酸ナト
リウムもしくはｌ１１ｇ１＋ ｐＨ−ｌｌｉｇｈ Ｃａ
溶液（５０ｓ＋Ｍ ＣａＣ１，、ｐＨ１０，５）等を室
温下に４０〜５０分程度放置するとよく、このポリエチ
レングリコールのような融合誘導物質の処理により細胞
膜融合が起った状態が顕微鏡下での観察で確認される。
細胞融合を行うには、該懸濁液をホールスライドグラス
上に滴下し、これに融合誘導物質、例えばポリエチレン
グリコールの溶液（１５〜２０％ｗ ｔ ／ ｖｔ ｔ
） 、高分子デキストラン硫酸、高濃度も「ｊ酸ナト
リウムもしくはｌ１１ｇ１＋ ｐＨ−ｌｌｉｇｈ Ｃａ
溶液（５０ｓ＋Ｍ ＣａＣ１，、ｐＨ１０，５）等を室
温下に４０〜５０分程度放置するとよく、このポリエチ
レングリコールのような融合誘導物質の処理により細胞
膜融合が起った状態が顕微鏡下での観察で確認される。
なお、細胞膜融合の確認は、干出等にょる１植物におけ
る細胞融合、“細胞”１２ （８） １９８０Ｊに掲載
されている細胞融合の過程を示した模式図に基づいて行
った。因に、ポリエチレングリコールのような融合誘導
物質で処理しない場合には細胞膜融合は実質上確認され
ない。
る細胞融合、“細胞”１２ （８） １９８０Ｊに掲載
されている細胞融合の過程を示した模式図に基づいて行
った。因に、ポリエチレングリコールのような融合誘導
物質で処理しない場合には細胞膜融合は実質上確認され
ない。
上述のようにして細胞膜融合させた殻胞子を人工海水中
で培養するとその９０％以上が仮相を生じ、細胞壁を形
成して分裂増殖を行って生長し、葉体を形成するに至る
。
で培養するとその９０％以上が仮相を生じ、細胞壁を形
成して分裂増殖を行って生長し、葉体を形成するに至る
。
したがって、本発明に従って、海苔の糸状体から放出さ
れる殻胞子を用いると、プロＩ・プラストと同様にして
細胞融合することが可能となる。
れる殻胞子を用いると、プロＩ・プラストと同様にして
細胞融合することが可能となる。
以下に実施例を示して本発明を更に其体的に説明する。
実施例
古Ｊｔ′】−麿°・−の−１１
海苔の成熟した糸状体を、藻類の研究に一般的に使用さ
れる下記組成の人工海水（Ａｓｐ ｌ：２）中で１７〜
１８℃の温度及び４０００ルクスの照度（明期８時間、
暗期１６時間）において通気攪拌下に培養した。
れる下記組成の人工海水（Ａｓｐ ｌ：２）中で１７〜
１８℃の温度及び４０００ルクスの照度（明期８時間、
暗期１６時間）において通気攪拌下に培養した。
上記培養ｔ１３〜４日で殻胞子の放出がみられたので培
養液を遠心分Ｐｌｉ （１０００ｒ、ｐ、ｍ、で５分間
）にイリして得られる残渣を採取し、これに滅菌した上
記人工海水の適量を加えて殻胞子懸濁液とした。
養液を遠心分Ｐｌｉ （１０００ｒ、ｐ、ｍ、で５分間
）にイリして得られる残渣を採取し、これに滅菌した上
記人工海水の適量を加えて殻胞子懸濁液とした。
人工海水（Ａｓｐ １２）の組成：
ＮａＣ１２Ｂ ｇ
ＭｇＳＯ，＋ｔｏ□０ ７ｇ
ＭｇＣｌ２６１１２０ ４ ｇ
にＣ１４００Ｂ
ＣａＣ１２・２１１２０ １．４（ｉｇＮａＮＯｑ １
００ ＩＩＩｇ Ｋ、１ｌｒｌｏ吟 １０ ｍｇ グリセロ燐酸ナトリウムム １０ ｍｇビタミンＢ１２
０．０２８ｇ ビオチン ０．１ ８ｇ チアミン ｌＯμｇ Ｐ ＩＩ ＭｅＬａｌ １０ ｌｌｌ ５ ＩＩ Ｍｅｔａｌ １０ ＋ｍｌ トリスアミノメタン Ｉｇ 蒸溜水 １０００ ｍ１ ｐｉ Ｂ、０ 〜８．１ ヱ」−肚Ｕ環以匪戊 支」−肪遵辻匁制工戊ＥＤＴＡ
１ ＋ｎｇ Ｎａ１ｌｒ １．２ｍｇトＩＪＯｉ １
ｍｇ ＡｌＣｌヨ ６１１２０ １．２ｍｇＭｎＣ１２
４１１２００，１４ｍｇ ５ｒＣ１２・６１１２０ ０
．６ｍｇＦｅＣｌ２−６１１２０ ０．０５ ｍｇ Ｎ
ａＭｏ０Ｉ＋・２１１２００．１２ｍｇＺｎＣｌ２０．
０１ ｍｇ ＰｂＣ１Ｏ，０３ｍｇＣｏＣｌ２６１１２
０ ４ ／Ｊ ｇ Ｋｌ １．５μｇＣｕＳＯＩ＋・５
１１２０ ０．５μｇ 蒸溜水 １ ｍｌ蒸溜水 １ｍ
１ 個１［Ｌの相１合 上述のようにして調製した殻胞子訂濁液の１５０μｌを
ホールスライドグラス上に滴下し、それに下記組成のポ
リエチレングリコール溶液の４５０μｌを融合誘専物質
として徐々に加えて室温下に４０〜５０分放置した。
００ ＩＩＩｇ Ｋ、１ｌｒｌｏ吟 １０ ｍｇ グリセロ燐酸ナトリウムム １０ ｍｇビタミンＢ１２
０．０２８ｇ ビオチン ０．１ ８ｇ チアミン ｌＯμｇ Ｐ ＩＩ ＭｅＬａｌ １０ ｌｌｌ ５ ＩＩ Ｍｅｔａｌ １０ ＋ｍｌ トリスアミノメタン Ｉｇ 蒸溜水 １０００ ｍ１ ｐｉ Ｂ、０ 〜８．１ ヱ」−肚Ｕ環以匪戊 支」−肪遵辻匁制工戊ＥＤＴＡ
１ ＋ｎｇ Ｎａ１ｌｒ １．２ｍｇトＩＪＯｉ １
ｍｇ ＡｌＣｌヨ ６１１２０ １．２ｍｇＭｎＣ１２
４１１２００，１４ｍｇ ５ｒＣ１２・６１１２０ ０
．６ｍｇＦｅＣｌ２−６１１２０ ０．０５ ｍｇ Ｎ
ａＭｏ０Ｉ＋・２１１２００．１２ｍｇＺｎＣｌ２０．
０１ ｍｇ ＰｂＣ１Ｏ，０３ｍｇＣｏＣｌ２６１１２
０ ４ ／Ｊ ｇ Ｋｌ １．５μｇＣｕＳＯＩ＋・５
１１２０ ０．５μｇ 蒸溜水 １ ｍｌ蒸溜水 １ｍ
１ 個１［Ｌの相１合 上述のようにして調製した殻胞子訂濁液の１５０μｌを
ホールスライドグラス上に滴下し、それに下記組成のポ
リエチレングリコール溶液の４５０μｌを融合誘専物質
として徐々に加えて室温下に４０〜５０分放置した。
ポリエチレングリコール溶液の組成：
ポリエチレングリコール ４５ｇ
ＣａＣ１２２Ｈ２０７３５ＩＩ１ｇ
蒸溜水 １００ ｍｌ
上述のようにしてポリエチレングリコールで処理したも
のに滅菌した上記人工海水５００μｌを徐々に加え室温
下に１０分放置し、ついで滅菌した人工海水を用いて緩
徐に洗浄した後、上記ホールスライドグラスを内径９ｃ
＋ｉのシャーレに収容し、これに滅菌した人工海水２０
ｎ＋１を緩徐に注入し、１８℃の温度及び７０００ルク
スの照度（明期８時間、暗期１６時間）において培養を
行った。なお、培養液の換水は２日毎に行った。
のに滅菌した上記人工海水５００μｌを徐々に加え室温
下に１０分放置し、ついで滅菌した人工海水を用いて緩
徐に洗浄した後、上記ホールスライドグラスを内径９ｃ
＋ｉのシャーレに収容し、これに滅菌した人工海水２０
ｎ＋１を緩徐に注入し、１８℃の温度及び７０００ルク
スの照度（明期８時間、暗期１６時間）において培養を
行った。なお、培養液の換水は２日毎に行った。
培養１０日後には葉長１００μ程度に生長し、培養２０
日後には葉長ｌ〜１．５ｍｍ程度に生長したことが確認
された。
日後には葉長ｌ〜１．５ｍｍ程度に生長したことが確認
された。
出願人 小漫商事株式会社
代理人 宮 １） 広 豊
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、海苔の糸状体より放出される殻胞子を融合誘導物質
で処理して細胞膜融合させることを特徴とする海苔の細
胞融合方法。 ２、融合誘導物質がポリエチレングリコールである特許
請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58194726A JPS6087791A (ja) | 1983-10-18 | 1983-10-18 | 海苔の細胞融合方法 |
| AT84112071T ATE40568T1 (de) | 1983-10-18 | 1984-10-09 | Verfahren zur zellverschmelzung von see-lattich. |
| EP84112071A EP0141304B1 (en) | 1983-10-18 | 1984-10-09 | Method for the cell fusion of laver |
| DE8484112071T DE3476558D1 (en) | 1983-10-18 | 1984-10-09 | Method for the cell fusion of laver |
| NZ209829A NZ209829A (en) | 1983-10-18 | 1984-10-09 | Method for the cell fusion of seaweed |
| AU34135/84A AU585486B2 (en) | 1983-10-18 | 1984-10-11 | Method for the cell fusion of laver |
| CA000465577A CA1225607A (en) | 1983-10-18 | 1984-10-16 | Method for the cell fusion of laver |
| ES536826A ES536826A0 (es) | 1983-10-18 | 1984-10-17 | Procedimiento para la fusion celular de ovas o algas comestibles |
| KR1019840006432A KR920007397B1 (ko) | 1983-10-18 | 1984-10-17 | 해태의 세포 융합 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58194726A JPS6087791A (ja) | 1983-10-18 | 1983-10-18 | 海苔の細胞融合方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6087791A true JPS6087791A (ja) | 1985-05-17 |
| JPS6260076B2 JPS6260076B2 (ja) | 1987-12-14 |
Family
ID=16329217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58194726A Granted JPS6087791A (ja) | 1983-10-18 | 1983-10-18 | 海苔の細胞融合方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6087791A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021036778A (ja) * | 2019-08-30 | 2021-03-11 | 松田産業株式会社 | 紅藻類アマノリ属の陸上養殖方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL127569A0 (en) | 1998-09-16 | 1999-10-28 | Comsense Technologies Ltd | Interactive toys |
| US6607136B1 (en) | 1998-09-16 | 2003-08-19 | Beepcard Inc. | Physical presence digital authentication system |
-
1983
- 1983-10-18 JP JP58194726A patent/JPS6087791A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021036778A (ja) * | 2019-08-30 | 2021-03-11 | 松田産業株式会社 | 紅藻類アマノリ属の陸上養殖方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6260076B2 (ja) | 1987-12-14 |
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