JPS6073461A - 非蛋白物質の分析方法 - Google Patents
非蛋白物質の分析方法Info
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- JPS6073461A JPS6073461A JP18326483A JP18326483A JPS6073461A JP S6073461 A JPS6073461 A JP S6073461A JP 18326483 A JP18326483 A JP 18326483A JP 18326483 A JP18326483 A JP 18326483A JP S6073461 A JPS6073461 A JP S6073461A
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- column
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- albumin
- protein component
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野：
本発明は非蛋白物質の分析方法、さらに詳しくはφ欣Ｖ
４−／ 用いて、血清などに含有される非蛋白物別で、Ｉ、。
４−／ 用いて、血清などに含有される非蛋白物別で、Ｉ、。
在している蛋白＊ １３１２分の妨害をうけることなく
精度よく分析する方法に関する。
精度よく分析する方法に関する。
従来技術：
血清等に含まれるアルドステロン、アルドステロンコル
チゾール、プレグナンジオール、エストロゲンなと゛の
ステロイド系ホルモン、カテコールアミン、ポリアミン
などのアミン類、各種薬剤等の非蛋白質成分を、病理学
的な研究や診断に利用するために液体クロマトグラフ等
により分析することが広く行なわれている。血清等の生
体試料中には一般に蛋白質が含まれているためこの蛋白
ｊｐの影響により１分析精度や分析カラム機能が低下し
たり、該分析カラムの寿命が短かくなったりする。その
ため、非蛋白質成分の分析においては。
チゾール、プレグナンジオール、エストロゲンなと゛の
ステロイド系ホルモン、カテコールアミン、ポリアミン
などのアミン類、各種薬剤等の非蛋白質成分を、病理学
的な研究や診断に利用するために液体クロマトグラフ等
により分析することが広く行なわれている。血清等の生
体試料中には一般に蛋白質が含まれているためこの蛋白
ｊｐの影響により１分析精度や分析カラム機能が低下し
たり、該分析カラムの寿命が短かくなったりする。その
ため、非蛋白質成分の分析においては。
あらかじめ除蛋白操作により蛋白質を除いた試料を用い
るのが普通であるうしかし、従来の方法では除蛋白操作
に多大の時間、労力を要するため分析成分が多量に損失
したり、変性したりするという欠点がある。その対策と
して１例えば、蛋白質および非蛋白物質を含む試料液を
除蛋白刃ラムに通して非蛋白成分のみを吸着させ蛋白成
分を通過除去したのち、吸着した非蛋白成分を溶離させ
てこれを分析カラムに導く方法が考えられる。この方法
は非蛋白成分を効粟良＜分析することが可能であるが、
長期の使用に伴って除蛋白刃ラムが劣化し目的とする非
蛋白成分が充分に吸着されなくなる。その結果、非蛋白
成分の分析精度が極端に低下する。
るのが普通であるうしかし、従来の方法では除蛋白操作
に多大の時間、労力を要するため分析成分が多量に損失
したり、変性したりするという欠点がある。その対策と
して１例えば、蛋白質および非蛋白物質を含む試料液を
除蛋白刃ラムに通して非蛋白成分のみを吸着させ蛋白成
分を通過除去したのち、吸着した非蛋白成分を溶離させ
てこれを分析カラムに導く方法が考えられる。この方法
は非蛋白成分を効粟良＜分析することが可能であるが、
長期の使用に伴って除蛋白刃ラムが劣化し目的とする非
蛋白成分が充分に吸着されなくなる。その結果、非蛋白
成分の分析精度が極端に低下する。
発明の目的：
本発明の目的は、除蛋白刃ラムを長期にわたって使用し
ても非蛋白成分を一定条件下で確実にカラムに捕捉しこ
れを分析することのできる高精度の非蛋白成分の分析方
法を提供することにある。
ても非蛋白成分を一定条件下で確実にカラムに捕捉しこ
れを分析することのできる高精度の非蛋白成分の分析方
法を提供することにある。
発明の要旨：
本発明は、ある種の非蛋白物質は蛋白質であるアルブミ
ンと結合した状態で試料中に存在するため前記除蛋白刃
ラムを長期にわたり使用すると該非蛋白物質が吸着され
にくくなりカラムを通って系外へ排出されてしまう；そ
してこれを阻止するためには、該非蛋白物質よりもアル
ブミンとより親和性の高いある種のステロイド化合物を
加えこれにアルブミンを結合させることによりアルブミ
ンを非蛋白物質との結合から切りはなしその結果該非蛋
白成９分をカラム内に吸着させることができる。との発
明者の新しい知謀にもとづいて完成された。それゆえ９
本発明の非蛋白物質の分析方法は、（１）蛋白質および
非蛋白物質を含む試料溶液に該非蛋白物質の大禍剰のス
テロイド化合物を加える工程：）２）該混和試料溶液を
除滑白カラムにかけて該カラムに非蛋白物質を吸着させ
るとともに蛋白質を吸着させることなく該カラムを通堝
させることにより蛋白質を除く工程；ｔ３］ｉｆｆ除蛋
白カラムに溶離液を流し該カラムの充填剤に吸着されて
いる該非蛋白物質を離脱させる工程；そして（４）離脱
した該非蛋白物質を分析カラムに導いてこれを分析する
工程を包含し、そのことにより上記目的が達成される。
ンと結合した状態で試料中に存在するため前記除蛋白刃
ラムを長期にわたり使用すると該非蛋白物質が吸着され
にくくなりカラムを通って系外へ排出されてしまう；そ
してこれを阻止するためには、該非蛋白物質よりもアル
ブミンとより親和性の高いある種のステロイド化合物を
加えこれにアルブミンを結合させることによりアルブミ
ンを非蛋白物質との結合から切りはなしその結果該非蛋
白成９分をカラム内に吸着させることができる。との発
明者の新しい知謀にもとづいて完成された。それゆえ９
本発明の非蛋白物質の分析方法は、（１）蛋白質および
非蛋白物質を含む試料溶液に該非蛋白物質の大禍剰のス
テロイド化合物を加える工程：）２）該混和試料溶液を
除滑白カラムにかけて該カラムに非蛋白物質を吸着させ
るとともに蛋白質を吸着させることなく該カラムを通堝
させることにより蛋白質を除く工程；ｔ３］ｉｆｆ除蛋
白カラムに溶離液を流し該カラムの充填剤に吸着されて
いる該非蛋白物質を離脱させる工程；そして（４）離脱
した該非蛋白物質を分析カラムに導いてこれを分析する
工程を包含し、そのことにより上記目的が達成される。
以下に本発明を実施例について説明する。
第１図は本発明方法を実施するのに用いられる分析装置
の一例を示す接続図である。この装置は。
の一例を示す接続図である。この装置は。
接続端Ａ−Ｆを有する六方バルブ４に、除蛋白刃ラム５
が接続ＯｉＭ ” Ｅを介して接続されている。
が接続ＯｉＭ ” Ｅを介して接続されている。
水槽１中のイオン交換水もしくは緩衝液がポンプ２によ
って試料インジェクター３および接続端Ａ・Ｂを経て除
蛋白刃ラム５に送られ、そこから接続Ｏ７Ｍ Ｅｒ Ｆ
を１由り系外に排出される。カラム５に充填さ−れる充
填剤は、一定の条件９例えば水あるいはある特定のＰＨ
の緩衝液中では非蛋白質である分析目的物質を吸着し、
？Ｊｉ白質を吸着しない。そして（ＩＩ＋の条件・例
えば上記と異なったｐＨの緩衝液中では、カラムに吸着
した上記非蛋白分析目的物質を溶離する性質を有する。
って試料インジェクター３および接続端Ａ・Ｂを経て除
蛋白刃ラム５に送られ、そこから接続Ｏ７Ｍ Ｅｒ Ｆ
を１由り系外に排出される。カラム５に充填さ−れる充
填剤は、一定の条件９例えば水あるいはある特定のＰＨ
の緩衝液中では非蛋白質である分析目的物質を吸着し、
？Ｊｉ白質を吸着しない。そして（ＩＩ＋の条件・例
えば上記と異なったｐＨの緩衝液中では、カラムに吸着
した上記非蛋白分析目的物質を溶離する性質を有する。
充填剤としては１例えば血清試料中の非蛋白物質分析用
としてテトラメチロールメタントリアクリレートやｎ−
エチレングリコールジメタクリレート（ｎは２〜４）の
単独重合あるいはこれらのモノマーを含むモノマー混合
物の共重合体の粒状物が洋げられる。この共重合体は水
との親和性を有しており、とりわけ懸濁重合によって得
られる粒径１０〜２０μ〃Ｉ程度の微細粒子を用いるこ
とが好ましい。
としてテトラメチロールメタントリアクリレートやｎ−
エチレングリコールジメタクリレート（ｎは２〜４）の
単独重合あるいはこれらのモノマーを含むモノマー混合
物の共重合体の粒状物が洋げられる。この共重合体は水
との親和性を有しており、とりわけ懸濁重合によって得
られる粒径１０〜２０μ〃Ｉ程度の微細粒子を用いるこ
とが好ましい。
試料としては２例えば、除蛋白処理の行なわれていない
血清試料が用いられる。この試料溶液に例えばコレステ
ロールなどのステロイド類を添加し充分混和させる。検
出すべき非蛋白成分がステロイド類である場合もあるの
で添加するステロイドの種類は被検出物質の妨害になら
ないように選択される必要がある。添加されるべきステ
ロイドとしては除蛋白刃ラムからの溶離条件などにより
異なるが、一般に、紫外線吸収スペクトルが被検出物質
よりも低波長側にあるコレステロールが好んで用いられ
る。ステロイド類の添加ｈ１としては。
血清試料が用いられる。この試料溶液に例えばコレステ
ロールなどのステロイド類を添加し充分混和させる。検
出すべき非蛋白成分がステロイド類である場合もあるの
で添加するステロイドの種類は被検出物質の妨害になら
ないように選択される必要がある。添加されるべきステ
ロイドとしては除蛋白刃ラムからの溶離条件などにより
異なるが、一般に、紫外線吸収スペクトルが被検出物質
よりも低波長側にあるコレステロールが好んで用いられ
る。ステロイド類の添加ｈ１としては。
分析を目的とする非蛋白成分をこれに結合しているアル
ブミンから確実に遊離させるために該非蛋白成分に対し
て大過剰の量、好ましくは１０［ハ量焙り上が必要であ
る。
ブミンから確実に遊離させるために該非蛋白成分に対し
て大過剰の量、好ましくは１０［ハ量焙り上が必要であ
る。
このような前処理を行なった血清試料は前記試料インジ
ェクター３より系内へ注入される。
ェクター３より系内へ注入される。
該血清試料はポンプによりイオン変換水もしくは緩衝液
と共に移送されて除蛋白刃ラム５に達する。ここで１ｍ
ｍ試料中の非蛋白分析目的物質は該カラムの充填剤に吸
着される。アルブミンに結合していた非蛋日成１分も上
記の前処理を行なったことにより遊離状態にあるため、
該カラムの充填剤に確実に吸着される。イ１１方、該試
料中の蛋白質は吸着されないでカラム５を通過し、六方
バルブ４の接続端Ｅ −Ｆを経て系外に排出される。
と共に移送されて除蛋白刃ラム５に達する。ここで１ｍ
ｍ試料中の非蛋白分析目的物質は該カラムの充填剤に吸
着される。アルブミンに結合していた非蛋日成１分も上
記の前処理を行なったことにより遊離状態にあるため、
該カラムの充填剤に確実に吸着される。イ１１方、該試
料中の蛋白質は吸着されないでカラム５を通過し、六方
バルブ４の接続端Ｅ −Ｆを経て系外に排出される。
溶離液槽６中の溶離液はポンプ７により、接続ｉＤおよ
びＣを経由して液体クロマトグラフの分析カラム８へσ
られる。次いで第２図に示すように、六方バルブ４を切
換えて接続端りをＥに接続すると、ポンプ７により溶離
液槽６中の上記吸着物質の溶離条件を備えた溶離液が接
Ｍ ｉ４ ＤおよびＥを経て除蛋白刃ラム５に供給され
る。溶離液がカラム５を通過することにより、吸着され
た非蛋白物質が溶離され溶離液と共に接続端ＢおよびＣ
を経て分析カラム８に達する。分析目的物質は分析カラ
ム８で分離され１分析カラム８以隆に設けられた図外の
適宜な検出器により検出される。分析カラム８に充填さ
れる充填剤は除蛋白刃ラムに用いられる充填剤よりも吸
着性の高いものが使用される。このような吸着性の高い
充填剤を用いることにより除蛋白刃ラムに吸着されてい
た目的物質を溶離液によって完全に溶離させ、これをそ
のまま分析カラムに流しここで精度よく分離し分析する
ことができる。
びＣを経由して液体クロマトグラフの分析カラム８へσ
られる。次いで第２図に示すように、六方バルブ４を切
換えて接続端りをＥに接続すると、ポンプ７により溶離
液槽６中の上記吸着物質の溶離条件を備えた溶離液が接
Ｍ ｉ４ ＤおよびＥを経て除蛋白刃ラム５に供給され
る。溶離液がカラム５を通過することにより、吸着され
た非蛋白物質が溶離され溶離液と共に接続端ＢおよびＣ
を経て分析カラム８に達する。分析目的物質は分析カラ
ム８で分離され１分析カラム８以隆に設けられた図外の
適宜な検出器により検出される。分析カラム８に充填さ
れる充填剤は除蛋白刃ラムに用いられる充填剤よりも吸
着性の高いものが使用される。このような吸着性の高い
充填剤を用いることにより除蛋白刃ラムに吸着されてい
た目的物質を溶離液によって完全に溶離させ、これをそ
のまま分析カラムに流しここで精度よく分離し分析する
ことができる。
Ｊソ上に述べた実施例ではｒｔｉ（ｓカラムｊにおける
ポンプ２ ｊＣヨるイオン交換水の進行方向と、ポンプ
７による溶離液の進行方向とはそれぞれ反対方向になっ
ているが、これに限られる必要はない。
ポンプ２ ｊＣヨるイオン交換水の進行方向と、ポンプ
７による溶離液の進行方向とはそれぞれ反対方向になっ
ているが、これに限られる必要はない。
進行方向が同じ方向となるような接続方式が採用されて
もよい。第２図に示すような接続に切換えたのち９分析
目的物質が六方バルブ４の接続端ｃを通；尚して分析カ
ラム８に嬬した頃を見計らって。
もよい。第２図に示すような接続に切換えたのち９分析
目的物質が六方バルブ４の接続端ｃを通；尚して分析カ
ラム８に嬬した頃を見計らって。
六方バルブ４を第１図に示される接続にさらに切換える
こともできる。この様−こ切換えることにより７分析カ
ラム８で分析を行ないながら１次の試料を除蛋白刃ラム
５に通し次の分析のための除蛋白処理を行なうことがで
きる。
こともできる。この様−こ切換えることにより７分析カ
ラム８で分析を行ないながら１次の試料を除蛋白刃ラム
５に通し次の分析のための除蛋白処理を行なうことがで
きる。
以下に本発明を実験にもとづいて具体的に説明する。
実験例１
高子六方バルブ４に、除蛋白刃ラム５および液体クロマ
トグラフ（ウォーターズ、モデル６０００Ａ）に組み込
まれた分析カラム８などを第１図に示すように接続した
。除蛋白刃ラム５としては。
トグラフ（ウォーターズ、モデル６０００Ａ）に組み込
まれた分析カラム８などを第１図に示すように接続した
。除蛋白刃ラム５としては。
内径４順、長さ１．５ ａｍのステンレス爬ノアラムを
用いた。充Ｊ真剤としては４重量係ポリビニルアルコー
ル水溶１ｆＶ、 ４００ ｍａｌ中にテトラエチレング
リコールジメタクリレー）４０ｇ、テトラメチロールメ
タントリアクリレート１０ｇ、メタクリル酸５０ｇ。
用いた。充Ｊ真剤としては４重量係ポリビニルアルコー
ル水溶１ｆＶ、 ４００ ｍａｌ中にテトラエチレング
リコールジメタクリレー）４０ｇ、テトラメチロールメ
タントリアクリレート１０ｇ、メタクリル酸５０ｇ。
トルエン４０ｇ及びベンゾイルパーオキサイド１５ｇを
加え、これを４０ Ｏｒｐｍで攪拌しなが８ｏ℃で１０
時間反応させ１反応後熱水及びアセトンで洗浄して得た
粒子径５〜２０μｍの高分子球状多孔体を用いた。分析
試料として、除蛋白処理をしていない正常男子血清を進
備した。ポンプ２により水槽ｌ中のイオン交換水を１０
ｍ１７分の流速で六方バルブ４の接続端Ａ−８を経て除
蛋白刃ラム５に流しながら、試料インジェクター３から
上記試料血清１０μノを注入した。５分後に、六方バル
ブ４を切換え第２図に示すように接続した。ポンプ７に
より、溶離液槽６中からメタノール対水が７ｏ：３０の
溶離液を０．５ｗＪ、７分の流速で六方バルブ接続端Ｄ
−Ｅ、除蛋白刃ラム５そして六方バルブ接続端Ｂ−Ｃを
経て液体クロマトグラフの分析カラム８へ通した。上記
溶離液の流通により溶離した非蛋白物質の分析を行なっ
た。使用した分析力ラムハ５ＨＡＮＤＯＮ 社’ｇ Ｈ
ＹＰＥＲ８Ｉ Ｌ−ＯＤＳ （商品名、カラムサイズ内
径６謳５長さ１０ｃｍ）であり、検出は２４０雌の吸収
強度によって行なった。得られたクロマトグラムを第３
図（〜に示す。
加え、これを４０ Ｏｒｐｍで攪拌しなが８ｏ℃で１０
時間反応させ１反応後熱水及びアセトンで洗浄して得た
粒子径５〜２０μｍの高分子球状多孔体を用いた。分析
試料として、除蛋白処理をしていない正常男子血清を進
備した。ポンプ２により水槽ｌ中のイオン交換水を１０
ｍ１７分の流速で六方バルブ４の接続端Ａ−８を経て除
蛋白刃ラム５に流しながら、試料インジェクター３から
上記試料血清１０μノを注入した。５分後に、六方バル
ブ４を切換え第２図に示すように接続した。ポンプ７に
より、溶離液槽６中からメタノール対水が７ｏ：３０の
溶離液を０．５ｗＪ、７分の流速で六方バルブ接続端Ｄ
−Ｅ、除蛋白刃ラム５そして六方バルブ接続端Ｂ−Ｃを
経て液体クロマトグラフの分析カラム８へ通した。上記
溶離液の流通により溶離した非蛋白物質の分析を行なっ
た。使用した分析力ラムハ５ＨＡＮＤＯＮ 社’ｇ Ｈ
ＹＰＥＲ８Ｉ Ｌ−ＯＤＳ （商品名、カラムサイズ内
径６謳５長さ１０ｃｍ）であり、検出は２４０雌の吸収
強度によって行なった。得られたクロマトグラムを第３
図（〜に示す。
実験例２
分析試料として、副腎質ホルモンであるプレドニゾロン
をｌ Ｑ ｐｐｒｎを含む正常男子血清１ｍ）にコレス
テロールの０．１％エタノール溶液を添加したものを準
備した。この分析試料を用いて実叔例１と同様ｌこ分析
を行ない、第３図（Ｂ）に示されるクロマトグラムを傅
た。このクロマトグラムにおいては血清中の副腎質ホル
モンがピーク１１として明確に検出されている。別に濃
度既知のプレドニゾロンのエタノール溶液を調整し、こ
れを面接液体クロマトグラフのカラムに注入した。この
ようにして得られたクロマトグラムより検量線を作成し
。
をｌ Ｑ ｐｐｒｎを含む正常男子血清１ｍ）にコレス
テロールの０．１％エタノール溶液を添加したものを準
備した。この分析試料を用いて実叔例１と同様ｌこ分析
を行ない、第３図（Ｂ）に示されるクロマトグラムを傅
た。このクロマトグラムにおいては血清中の副腎質ホル
モンがピーク１１として明確に検出されている。別に濃
度既知のプレドニゾロンのエタノール溶液を調整し、こ
れを面接液体クロマトグラフのカラムに注入した。この
ようにして得られたクロマトグラムより検量線を作成し
。
ピーク１１に表われているプレドニゾロンの回収率をめ
た。回収率は１０１係であった。
た。回収率は１０１係であった。
比較例
コレステロールの０．１係エタノール溶液を含マない分
析試料を用いたこと以外はすべて実、！５１例２と同様
にして分析を行なった。得られたクロマトグラムは第３
図（喝のパターンと同様であった。プレドニゾロンの回
収車は９２係であった。
析試料を用いたこと以外はすべて実、！５１例２と同様
にして分析を行なった。得られたクロマトグラムは第３
図（喝のパターンと同様であった。プレドニゾロンの回
収車は９２係であった。
発明の効果：
本発明の非蛋白物質の分析方法によれば、ステロイド化
合物を試料中に添加することにより、アルブミンなどの
蛋白質に結合した目的の非蛋白物質はアルブミンから切
り離されてカラム充填剤に確実に捕獲され、そして蛋白
質は系外へ排出されるため該非蛋白物ｔｗの分析が正確
に行なわれうる。
合物を試料中に添加することにより、アルブミンなどの
蛋白質に結合した目的の非蛋白物質はアルブミンから切
り離されてカラム充填剤に確実に捕獲され、そして蛋白
質は系外へ排出されるため該非蛋白物ｔｗの分析が正確
に行なわれうる。
それゆえ、この方法は、血清などの蛋白質含有試料の非
蛋白物質を分析するのに極めて有効である。
蛋白物質を分析するのに極めて有効である。
第１図および第２図は本発明方法の実施に用いられる分
析装置の一例を示す接続図、第３図（〜および（Ｂ）は
本発明の実類例で得られたクロマトグラムである。 １・・・水槽、２．７・・・ポンプ、３・・・試料イン
ジェクター、４・・・六方バルブ、５・・・除蛋白刃ラ
ム、６・・・溶離液槽、８・・・分析カラム。 以 上 出願人 積水化学工朶株式会社 第１図 第２図 第３図
析装置の一例を示す接続図、第３図（〜および（Ｂ）は
本発明の実類例で得られたクロマトグラムである。 １・・・水槽、２．７・・・ポンプ、３・・・試料イン
ジェクター、４・・・六方バルブ、５・・・除蛋白刃ラ
ム、６・・・溶離液槽、８・・・分析カラム。 以 上 出願人 積水化学工朶株式会社 第１図 第２図 第３図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １（１）蛋白質および非蛋白物質を含む試料溶液に該非
蛋白物質の大過剰のステロイド化合物を加える工程。 （２１該混和試料溶液を除蛋白刃ラムにかけて該カラム
に非蛋白物質を吸着させるとともに蛋白質を吸着させる
ことなく該カラムを通過させることにより蛋白質を除く
工程。 （３）該除蛋白刃ラムに溶離液を流し該カラムの充填剤
に吸着されている該非蛋白物質を離脱させる工程、そし
て （４） 離脱した該非蛋白物質を分析カラムに導いてこ
れを分析する工程。 を包含する非蛋白物Ｊ６の分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18326483A JPS6073461A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | 非蛋白物質の分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18326483A JPS6073461A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | 非蛋白物質の分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6073461A true JPS6073461A (ja) | 1985-04-25 |
| JPH0336191B2 JPH0336191B2 (ja) | 1991-05-30 |
Family
ID=16132620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18326483A Granted JPS6073461A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | 非蛋白物質の分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6073461A (ja) |
-
1983
- 1983-09-30 JP JP18326483A patent/JPS6073461A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0336191B2 (ja) | 1991-05-30 |
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